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Adaptation des plantes à la salinité : caractérisation de variants écotypiques et de lignées invalidées pour des systèmes de transport de NA+ chez le riz / Plant adaptation to salinity stress : characterisation of ecotypic variants and knock-out lines for Na+ transport systems in rice

Al-Shiblawi, Fouad 15 November 2017 (has links)
La salinité de l'eau d'irrigation et des sols est l'une des principales contraintes abiotiques en agriculture. Parmi les 130 mha de riz cultivés dans le monde, 30% environ se trouvent dans des zones où la salinité est trop élevée pour permettre de bons rendements. Dans l'objectif de mieux comprendre le rôle des systèmes de transport de Na+ dans la compartimentation de Na+ dans la plante permettant de maintenir un rapport K+/Na+ élevé dans les tissus sensibles lors d’un stress salin, je me suis intéressé à deux transporteurs de la famille HKT, OsHKT1;1 et OsHKT1;3, chez le riz, la plante modèle des céréales. Mon principal projet a allié une stratégie "promoteur::GUS" pour préciser les patrons d'expression in planta des deux gènes, et une approche de génétique inverse en produisant des mutants pertes de fonction à l’aide de la technologie CRISPR-Cas9, qui s’est confirmée être un outil efficace pour générer des mutations indèles après cassure ciblée de l’ADN, transmissibles de façon stable chez le riz. Les tests histochimiques de l’activité GUS ont montré une expression prédominante d’OsHKT1;1 et d’OsHKT1;3 dans les tissus vasculaires (parenchyme xylémien et/ou phloème), essentiellement au niveau des parties aériennes. L’analyse phénotypique des plantes "CRISPR" a mis en évidence des modifications des profils d’accumulation de Na+ dans les feuilles chez les mutants: défaut d’accumulation de Na+ dans les gaines foliaires pour les plantes oshkt1;1 et répartition altérée de Na+ entre les vieilles et les jeunes feuilles chez les plantes oshkt1;3, conduisant à une augmentation de la teneur en Na+ dans les limbes des jeunes feuilles chez les 2 types de mutants. Dans l’ensemble, ces résultats suggèrent qu’OsHKT1;1 et OsHKT1;3 participent au dessalage des jeunes limbes foliaires lors d’un stress salin, via des mécanismes différents, contrôlant les transports xylémiques et phloémiens de Na+. En plus de cette étude, j’ai collaboré avec un groupe de généticiens, qui avait identifié une forte association entre des différences écotypiques de contenu racinaire en Na+ et de rapport K+/Na+, et une région du chromosome 4 du riz comprenant le gène OsHKT1;1. En comparant fonctionnellement par électrophysiologie les deux variants majeurs d’OsHKT1;1, des différences de capacités de transport de Na+ susceptibles d’expliquer le trait racinaire ont été observées. L’ensemble des données obtenues souligne l’intérêt d’analyser tous des gènes HKT de riz dans les mécanismes de tolérance de la plante à la salinité / The salinity of irrigation water and soils is one of the main abiotic constraints in agriculture. Among the 130 mha of rice grown around the world, about 30% are in areas where salinity is too high to allow for good yields. In order to better understand the role of Na+ transport systems in the compartmentalization of Na+ in the plant to maintain a high K+/Na+ ratio in sensitive tissues during salt stress, I focused on two transporters from the HKT family, OsHKT1;1 and OsHKT1;3, in rice, the model cereal species. My main project combined a “promoter::GUS” strategy to specify the expression pattern of both genes, and a reverse genetics approach by producing loss-of-function mutants using the CRISPR-CAS9 technology, which was confirmed to be an efficient tool for generating indel mutations after targeted DNA breaks, stably transmitted in rice. Histochemical tests of GUS activity showed predominant expression of OsHKT1;1 and OsHKT1;3 in vascular tissues (xylem parenchyma and/or phloem), mainly in the aerial parts. Phenotypic analysis of "CRISPR" plants revealed changes in leaf Na+ accumulation profiles in mutants: lack of Na+ accumulation in leaf sheaths for oshkt1;1 plants and altered distribution of Na+ between old and young leaves in oshkt1;3 plants, leading to an increase in the leaf blade Na+ content in both types of mutants. Overall, these results suggest that OsHKT1 and OsHKT1.3 contribute to the desalination of young leaf blades during salt stress, via different mechanisms, controlling transports of Na+ through the xylem and phloem. In addition to this study, I collaborated with a group of geneticists who identified a strong association between ecotypic differences in root Na+ and K+/Na+ ratio, and a region of chromosome 4 of rice including the OsHKT1;1 gene. By comparing electrophysiologically the two major variants of OsHKT1;1, differences in Na+ transport capacities that could explain the root trait were observed. All the data obtained underline the interest of analyzing all HKT genes of rice in the mechanisms of plant tolerance to salinity.
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Porovnání účinnosti přímé a nepřímé metody genetické transformace u bramboru (Solanum tuberosum L.) / A comparison of efficacy of direct and indirect methods of genetic transformation of potato (Solanum tuberosum L.)

PŘIBYLOVÁ, Marie January 2008 (has links)
Potato is one of the main targets for genetic improvement by gene transfer. The aim of this study was to compare the efficacy of genetic transformation of potato, cultivar Bintje, using two methods: Agrobacterium tumefaciens mediated transformation and microprojectile bombardment. The same plasmid p35SGUSint, which cosists of 35S CaMV promoter, gus and nptII genes, was used for both transformations of internodal potato explants. Kamamycin selection, transient and stable expressions of {$\beta$}-glucuronidase and PCR amplification of gus and nptII transgenes were used for transgenic plant selection, identification and analysis.
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Expressão do gene uidA dirigido por promotores preferencialmente ativados no floema de plantas transgênicas de laranja doce inoculadas com Candidatus Liberibacter asiaticus / Expression of the uidA gene driven by promoters preferentially activated in the phloem of transgenic sweet orange inoculated with Candidatus Liberibacter asiaticus

Luzia Yuriko Miyata 15 May 2014 (has links)
O Brasil é o maior produtor de laranja doce do mundo, mas a história da citricultura brasileira é marcada por sucessivas perdas devido a pragas e doenças que atacam os pomares. Entre as doenças que afetam os pomares de citros, o huanglongbing (HLB) tem merecido destaque nos últimos anos. O HLB já é conhecido desde 1900 na China, mas no Brasil essa doença está presente desde 2004 e tem causado perdas significativas a citricultura. Essa doença é associada a três espécies de \"Candidatus Liberibacter\", mas no Brasil a espécie Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) é a mais comum. Devido à ausência de plantas de laranja doce resistentes a essa doença, a busca por plantas transgênicas que apresentem resistência a essa doença têm se intensificado nos últimos anos. Uma estratégia para projetar uma construção gênica visando a CLas é a utilização de promotores floema-específico, pois a CLas coloniza o floema das plantas de citros infectadas. Entretanto, para provar que uma sequência promotora funciona é preciso desafiar a construção gênica na presnça da CLas. Portanto, conduziu-se este trabalho com o objetivo de multiplicar plantas de Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' transgênicas contendo o gene uidA sob controle dos promotores floema-específicos Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) e Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inocular com CLas por Diaphorina citri, avaliar a interdependência entre a expressão do transgene (gene uidA) e a concentração de CLas, para poder inferir sobre o controle da expressão dos promotores quando as plantas são inculadas com CLas. Para isso, cinco eventos de transformação de cada construção gênica, contendo apenas uma cópia do transgene foram selecionados, multiplicados e inoculados com CLas por Diaphorina citri, dezoito meses após a inoculação, o DNA e o RNA das plantas foram coletados. Foi realizada análise para verificar a concentração de CLas em todas as plantas inoculadas e a expressão do gene uidA foi realizada em uma linhagem transgênica de cada construção gênica. Com o auxílio da análise de coeficiente de correlação de Person, foi possível classificar qualitativamente a interdependência entre a concentração bacteriana e a expressão gênica. A frequência média de inoculação de CLas por Diaphorina citri foi de 30 %, demostrando que é possível incular CLas via Diaphorina citri. A análise de coeficiente de correlação de Person mostrou que nas construções com promotores AtPP2 e CsPP2 há baixa interdependência entre o controle da expressão gênica e a concentração de CLas. A construção sob controle do promotor AtSUC2 apresentou correlação forte e positiva, mostrando que quanto maior a concentração de CLas maior a expressão do transgene. / Brazil is the largest producer of sweet oranges in the world, however the Brazilian citrus history is marked by successive losses due to pests and diseases attacking orchards. Among the diseases affecting citrus groves, the huanglongbing (HLB) has been highlighted in recent years. The HLB is known in China since 1900, although in Brazil this disease has been present since 2004 and has caused significant losses to citrus industry. This disease is associated with three species of \"Candidatus Liberibacter\", however, in Brazil Candidatus Liberibacter asiaticus species (CLas) is the most common. Due to the absence of sweet orange plants resistant to this disease, the search for transgenic plants with resistance to this disease have intensified in recent years. One strategy to design a genetic construct targeting the CLas includes the use of phloem-specific promoters, because the CLas colonizes the phloem of infected citrus plants. On the other hand, to prove that a promoter sequence works it is necessary to challenge the genetic construct in the presence of CLas. Therefore, we conducted this study with the objectives of multiplying transgenic Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' bearing the uidA gene under the control of the phloem-specific promoters Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) and Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inoculate CLas with Diaphorina citri, and evaluate the interdependence between the expression of the transgene (uidA gene) and the concentration of CLas, to infer the promoter expression when the plants are inoculated with CLas. Five events processing of each gene construct, containing only one copy of the transgene, and inoculated with CLas by Diaphorina citri. The DNA and RNA of plants were collected after eighteen months of inoculation. The concentration of CLas in the inoculated plants and the expression of the uidA gene were performed in each transgenic line of each gene construct, with the aid of the analysis of Person correlation coefficient. Thus it was possible to classify qualitatively the interdependence between bacterial concentration and gene expression. The average frequency of CLas inoculation by Diaphorina citri was 30%, demonstrating that it was possible to inoculate CLas via Diaphorina citri. Person correlation coefficient values suggested low interdependence between the control of gene expression and the concentration of CLas in constructions with promoters AtPP2 and CsPP2. The construction under AtSUC2 promoter control showed strong positive correlation, indicating that the higher the concentration of CLas the greater is the transgene expression.
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Marches des corps, [dé]marches des images. Image et mouvement a l'aune du regard contemplatif et du corps en acte / Walking bodies and the [un]thinking of images. An Essay on Visual Mobility from the Double Perspective of the Ocular and the Corporeal

Giannouri, Evgenia 13 December 2010 (has links)
Cette étude a des assises autant dans l’histoire de l’art que dans l’esthétique du cinéma. Son point de départ est une aporie : « Qu’est-ce que le mouvement en image dès lors il s’agit de le chercher en dehors des représentations et de leurs techniques ? ». La substance mobile des images dont nous souhaitons faire ici le cas se situe à l’intérieur même du point de vue et non pas à l’enchaînement entre points de vue. Il s’agit de penser sa construction en termes d’un clivage interne, d’une bifurcation. Il s’agit surtout de placer la construction du point de vue au croisement de deux apprentissages [mathésis] : d’un côté celle de la contemplation du monde à partir d’un point fixe, unique ou changeant, de l’autre celle de la mobilité inhérente qui régit tout aspect de la vie. Dans ce contexte, le mouvement des images ne serait pas seulement le résultat d’une révolution du regard ou l’aboutissement d’une aventure technique, mais également et au même titre qu’eux, le résultat d’un événement conflictuel entre deux configurations du [sa]voir différentes bien que totalement pondérées. « Qu’est-ce qui ne marche pas ? » est la question qui nous guide à travers l’écriture. Les images témoignent d’une forme de [dé]marche transversale, d’un accident de la « marche » tant au niveau structurel du film qu’au niveau diégétique. Elles renvoient à quelque chose comme un trouble, un dissentiment. Chaque partie de ce travail constitue, enfin, une étude de cas. Chaque cas dénonce une aporie de point de vue : pittoresque, elliptique, théorique. Les films analysés, très différents les uns des autres, proviennent du cinéma et de ses pratiques élargies. Mais chacune des trois parties est également conçue autour d’un « metteur-en-scène » au sens large : Robert Smithson, Gus van Sant, Victor Burgin. Issus de la grande famille des artistes et non seulement de celle des cinéastes confirmés, ils nous guident à travers la construction de récits ancrés autant dans l’histoire des arts [peinture, sculpture, architecture] que dans les péripéties du cinéma contemporain. / Both art history and cinema aesthetics lie at the foundations of this study. Our starting point is a perplexing difficulty [an aporia]: “What is an image motion when we think about movement beyond its representations and the techniques that accompany them?”. In this dissertation, we examine the mobile substance of images from within the standpoint itself and what resembles to an internal cleavage. We argue that a particular kind of viewpoint can emerge at the crossroads of two different understandings [mathesis]: on the one hand, the contemplation of the world from a single or interchangeable fixed point; on the other hand, the corporeal mobility inherent to every aspect of life. Within this context, image motion is more than just the consequence of a major change in our “ways of looking”, or the outcome of a technical adventure. We argue that image motion is equally the result of a conflict between two different configurations of knowledge - seeing. The images attest to a way of thinking and unthinking motion, illustrated by a disruption in “the walk of the images” which takes place both in the film’s narrative and in the film’s structure revealing something like a trouble, or a dissent. Each section in this work constitutes an autonomous case study. Each case relates to a particular bifurcation of the standpoint: picturesque; elliptical; theoretical. The films in question, very different from one another, stem from cinema and its expanded practices. These three sections are also articulated around three “metteurs-en-scène”: Robert Smithson, Gus Van Sant, Victor Burgin. Belonging to the larger family of artists [and not only to that of confirmed filmmakers], they guide us through the unfolding of a narrative, whose roots are to be found as much in the history of the arts [painting, sculpture, architecture], as in the vicissitudes of contemporary cinema.
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Gus Napier: Reflections on the Field of Family Therapy

Disque, J. Graham, Morrow, Brent 01 January 2002 (has links)
Excerpt: Dr. Augustus Napier, a respected pioneerin the field of family therapy, received his doctral degree in clinical psychology from the University of North Carolina.
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Comparaison des impacts environnementaux des herbicides à large spectre et des herbicides sélectifs: Caractérisation de leur devenir dans le sol et modélisation.

Mamy, Laure 10 1900 (has links) (PDF)
L'objectif de ce travail est d'évaluer et de comparer le comportement environnemental du glyphosate, utilisé dans un contexte d'introduction de plantes génétiquement modifiées (GM), par rapport aux comportements d'autres herbicides classiquement utilisés pour le désherbage des mêmes cultures non résistantes au glyphosate: trifluraline et métazachlore pour le colza, métamitrone pour la betterave, sulcotrione pour le maïs. En effet, les conséquences sur l'environnement de ces modifications des pratiques de désherbage ont été jusqu'à présent peu étudiées. Trois sites représentatifs des principales situations où sont cultivées ces plantes, aux points de vue climatique et pédologique, ont été choisis pour cette étude (localisés près de Châlons-en-Champagne, Dijon et Toulouse). Dans la première partie de ce travail, les comportements des herbicides dans les trois sols ont été comparés au laboratoire dans les mêmes conditions (sol, température, humidité, dose). Leur rétention, dégradation dans les sols après application directe ou après absorption dans les tissus végétaux dans les cas particuliers du glyphosate et de la sulcotrione (herbicides foliaires) ont été déterminées. Dans la seconde partie, les résultats obtenus au laboratoire ont été utilisés pour estimer les impacts environnementaux des herbicides à partir de trois méthodes de précision croissante: indice de lixiviation GUS (risque de contamination des eaux souterraines), indicateur I-Phy (risque de contamination de l'air, de l'eau de surface et de l'eau souterraine), et modèle numérique de devenir des pesticides, PRZM. Les stocks et flux des herbicides et de leurs métabolites obtenus par modélisation ont ensuite été agrégés avec le modèle USES (analyse de cycle de vie et d'impacts) pour estimer les impacts finaux des différents systèmes de culture existants sur les trois sites (rotations avec colza et betterave GM ou non-GM, monoculture de maïs GM ou non-GM) sur plusieurs cibles de l'environnement (eau, sédiments, écosystèmes, population humaine). Le glyphosate est généralement l'herbicide pour lequel les risques de dispersion dans l'environnement sont les plus faibles (rétention élevée, dégradation rapide), mais ils dépendent cependant du type de sol. Les vitesses et taux de minéralisation des herbicides diminuent fortement avec la température, de même que la formation de résidus non extractibles, avec une préservation des molécules sous forme extractible donc potentiellement disponible. La formation d'un métabolite majeur plus persistant a été observée dans les cas du glyphosate (acide aminométhylphosphonique, AMPA), du métazachlore (non identifié) et de la sulcotrione (acide 2-chloro-4-méthylsulfonylbenzoïque, CMBA). En conséquence, ces métabolites présentent des risques pour l'environnement plus importants que les molécules herbicides. Enfin, l'absorption du glyphosate dans les tissus végétaux diminue sa dégradation. L'accumulation de glyphosate non dégradé dans les tissus végétaux pourrait augmenter les quantités de glyphosate dans le sol après restitution des résidus de récolte ou lors de la chute des feuilles traitées. Ce résultat a été pris en compte dans la modélisation. Le calcul de l'indice GUS a montré que les herbicides présentent peu de risque de contamination des eaux souterraines, le calcul de l'indicateur I-Phy a conduit à des résultats similaires pour les eaux souterraines, ainsi que pour les eaux de surface et l'air. Le modèle PRZM a été préalablement testé à partir d'une expérimentation en conditions de plein champ: il permet des simulations correctes du devenir des herbicides à partir des données obtenues au laboratoire, mais a néanmoins été calé dans les cas du glyphosate et de la trifluraline. Les résultats des simulations des différentes pratiques de désherbage ont montré que plus la fréquence de retour des cultures GM est élevée et plus l'impact sur l'environnement du glyphosate pourrait être important comparé aux herbicides sélectifs. En particulier, les stocks d'AMPA dans le sol après douze ans d'application annuelle de glyphosate dans une monoculture de maïs pourraient être particulièrement élevés. Du point de vue de la contamination de l'environnement par les herbicides, les bénéfices des cultures GM dépendent donc des types de sol, des cultures et des herbicides remplacés. La persistance de l'AMPA dans les sols soulève néanmoins un problème général de durabilité de cette innovation, et impose d'étudier plus en détail le comportement de cette molécule à long terme.
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Rechtspolitische und rechtliche Probleme der Zuwanderung - dargestellt anhand der Zuwanderer aus den GUS-Staaten / Legal-political and juridical problems of the immigration to Germany - shown on the example of the Russian-speaking immigrants from the CIS-countries

Gulina, Olga R. January 2010 (has links)
Die Zuwanderung und der Integration von Zuwanderern aus den GUS-Staaten in Deutschland ist eine bedeutsame politische und rechtliche Thematik. Diese Thematik ist in Deutschland bisher noch wenig untersucht und nur in Teilbereichen bearbeitet. Deshalb untersucht das vorgestellte Werk folgende Fragen und Aspekte: Analyse der Zuwanderung aus den GUS-Staaten; Darstellung von Zuwanderungsgruppen aus den GUS-Staaten und ihres rechtlichen Status; die Wellen der Zuwanderung anhand der Zuwanderer aus den GUS-Staaten, einschließlich (Spät)Aussiedlern und jüdische Zuwanderern, tschetschenischen Asylsuchenden, Familienangehörige, Studierende, qualifizierte Arbeitskrafte usw., Analyse der Integrationsprogramme und Integrationsmaßnahmen für die Zuwanderer aus den GUS-Staaten; Darstellung der Integrationschancen und Integrationshemmnisse am Beispiel der Zuwanderer aus den GUS-Staaten, einschließlich das Recht auf Annerkennung der akademischen und beruflichen Qualifikation, das Recht auf Arbeit u.a., die russischen Rückkehr- und (Reintegrations-) Programme für die im Bundesgebiet lebenden Zuwanderer aus den GUS-Staaten – ihre Analyse und Bewertung. Eine weitere Besonderheit der Veröffentlichung besteht darin, dass die Autorin Ihre wissenschaftlichen Ausführungen zur rechtlichen Stellung der GUS-Zuwanderer und zu den Erfolgen bei ihrer Integration, aber auch zu den Integrationshemmnissen und Integrationsproblemen auf eine soziologische Befragung von Zuwanderern aus den GUS-Staaten in den Ländern Brandenburg und Berlin stützt. Die empirische Untersuchung bezieht sich auf den Zeitraum 1991 bis 2009. / The present edition is given the complex analysis of the legal-political and juridical problems connected Russian-speaking immigrants from the CIS-countries. The flows of migration from the post-soviet territories to Germany, classification of these flows, characterised as emigrants, Jewish immigrants, family members, students, and qualified specialists, etc., their legal status - the rights, freedoms and duties, the cultural and linguistic integration, incl. the recognition of the professional and academic qualification, unemployment, the infringement of their other rights are in a case study. The given paper lean results of the empirical research of 2009 in Berlin and Brandenburg.
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The Flow of the Water: Contemporary American Realisms

Horton, Justin 07 January 2011 (has links)
"Realism" is one of the enduring theoretical problems of the cinema. This study aims to broaden the parameters of the term by focusing on an often overlooked strain of thought that flows throughout the work of a number of prominent and seemingly incongruous thinkers such as Bazin, Kracauer, Benjamin, Barthes, Buñuel, and others. Realism, I contend, is undergirded by something far more elusive and irrational than verisimilitude or social commentary. To demonstrate, I will examine a body of contemporary American films that I will cast—perhaps provocatively—as realist. I rely heavily upon Deleuze to discuss how free indirect discourse and the disjunction of sound and image open realism to an oneiric and/or intersubjective realm.
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Strategische Standortplanung unter Unsicherheit : robuste Distributionsstruktur für einen Automobilzulieferer in GUS /

Rausch, Alexander. January 2006 (has links)
Universiẗat, Diss.--Karlsruhe, 2006.
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Optimization Of Regeneration And Agrobacterium Mediated Transformation Of Wheat (triticum Aestivum L.cv. Yuregir 89)

Demirbas, Didem 01 October 2004 (has links) (PDF)
The objective of this study was to optimize regeneration parameters of immature inflorescence culture of Triticum aestivum cv. Y&uuml / regir-89. The effects of dark incubation period and explant region on regeneration success were tested. Immature inflorescences were cut into 3 pieces as tip, mid, base and put onto 2mg /L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid containing callus induction medium. These explants were taken to regeneration after 6, 9, 13 weeks of dark incubation period. The regeneration capacities of calli were determined as rooting and shooting percentages. Shooting percentages were found to be 72.0 % for 6 weeks of dark incubation and 64.1 % for 9 weeks of dark incubation while it decreases to 26.1 % in 13 weeks of dark incubation period. This showed that prolonged dark incubation period decreased regeneration capacity of the callus. There was no significant difference in regeneration capacities of tip, mid and base regions of immature inflorescences, which reveals the potential of every region of inflorescence to be used as explant source in further transformation studies. Besides regeneration studies, optimization of transformation parameters for Turkish wheat cultivar Y&uuml / regir by using Agrobacterium tumefaciens AGLI containing binary vector pALl56 was performed. Transformation efficiencies were determined by monitoring the transient expression of uidA gene via histochemical GUS assay. Three to four weeks old calli were found to be more responsive to Agrobacterium-mediated transformation. Different media were tested for utilization during co-cultivation period. It was found that including phenolic compound acetosyringone along with ascorbic acid as an antioxidant was essential for succesful transformation.

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