A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

Base teórica: A obesidade, especialmente a de tronco, está associada com um aumento do risco de doenças cardiovasculares; embora seja controverso se esta associação se deva a outros fatores de risco. Conseqüências conhecidas do sobrepeso, como hipertensão, dislipidemia e diabete, explicam apenas de parte do risco decorrente da obesidade. Um número crescente de evidências sugere que a associação entre obesidade e fatores hemostáticos possa se constituir em um mecanismo adicional pelo qual obesidade confere risco cardiovascular. Nesta tese analisou-se a associação da obesidade, aferida pelo índice de massa corporal (IMC), distribuição de gordura, aferida pela razão cintura quadril (C/Q) com fatores hemostáticos. Métodos: Estudou-se 3230 indivíduos (55% mulheres) com média de 54 anos de idade sem história de doença cardiovascular arrolados no quinto ciclo do Estudo dos Descendentes de Framingham. Amostras de sangue emjejum foram coletadas entre 8 e 9 horas da manhã para a determinação de fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand (vW), fator ativador do plasminogêriio (tPA), inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-I) e viscosidade sangüínea, além de dos níveis de lipídeos e glicose. Resultados: Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA e PAI-l associaram-se com IMC tanto em homens quanto em mulheres (p=0,02 para fator de vW e p<O,OOOI para os demais). A viscosidade plasmática associou-se com IMC em mulheres (p<O,OOOI), mas não em homens (P=O,14). Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA, PAI-1 e viscosidade plasmática associaram-se com W/C tanto em homens quanto em mulheres (p=0,0005 em homens e p=0,01 em mulheres para a viscosidade plasmática e p<O,OOOI para os demais). Todas as associações verificadas para fibrinogênio, fator VII, tPA e PAI-I persistiram após regressão linear múltipl~ controlando-se para as covariáveis idade, tabagismo, uso de antihipertensivos, pressão arterial sistólica, colesterol total e HDL, triglicerídeos e glicose. As associações para o fator de vW permaneceram para o C/Q em homens e para IMC em mulheres. As associações para a viscosidade sangüínea tanto para IMC quanto C/Q persistiram em mulheres mas não em homens. Conclusão: O sobrepeso e o acúmulo de gordura abdominal estão fortemente associados com fatores hemostáticos. Estas associações são independentes de idade, tabagismo e fatores de risco decorrentes da obesidade. Como a associação entre obesidade e doenças vasculares não pode ser completamente explicada por fatores de risco tradicionais, alterações da hemostasia como aumento de fibrinogênio e fatores de coagulação, juntamente com redução do potencial fibrinolítico poderiam se constituir em mecanismos adicionais para explicar o excesso de eventos cardiovasculares em indivíduos obesos. / Background: Obesity, specially truncaI obesity, has been associated with an increased risk for cardiovascuIar disease, aIthough the mechanism ofthe risk has not been fully explained. The consequences of heavy weight, such as hypertension, hyperlipidimia and diabetes, account only for part of the risk attributed to obesity. Since thrombosis is a criticaI component of cardiovascular events, we determined the relationship between obesity, as assessed by body mass index (BMI), fat distribution as assessed by waist-to-hip ratio (W/H) and hemostatic factors. Methods: We studied 3230subjects (55% females) of average age of 54 years without history of cardiovascular disease enrolled in cycle 5 of the Framingham Offspring Study. Fasting bIood samples were obtained between 8-9 am for determination of fibrinogen, plasminogen activator inhibitor (PAI-I) antigen, tissue pIasminogen activator (tPA) antigen, von Willebrand (vW) factor, factor VII antigen and plasma viscosity, as well as lipid and glucose leveIs. Results: Fibrinogen, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with body mass index in both men and women.(p<O.OOOI for all except vWfactor in men, p=O.02). Plasma viscosity was associated with body mass index in women (p<O.OOOI) but not in men (p=O.I4). Fibrinogen, viscosity, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with waist-to-hip ratio in both men and women (p<O.OOOI for all, except for viscosity, p=O.OOS in men and p=O.OI in women). All the associations found for fibrinogen, PAI-I, tPA, and factor VII persisted afier multiple linear regression, controlling for the covariates of age, smoking, total and HDL cholesterol, triglycerides, blood pressure and glucose level. The associations ofwW fador persisted significant for BMI in women but not for men and for WIH in men but not in women. The association between viscosity and BMI or WIH persisted in women but not in men. Conclusion: Heavy weight and abdominal accumulation of fat are strongly associated with hemostatic factors. These associations are independent of age, smoking and cardiovascuIar risk factors linked to obesity. Since the link between vascular disease and obesity cannot be fully expIained by traditional risk factors, a hypercoaguIabIe state could be one of the mechanisms Ieading to an excess of cardiovascuIar events in obese individuals.

Introdução: O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) representa cerca de 90% dos tipos de diabetes e vem atingindo de forma cada vez mais intensa a população adulta e atualmente também jovens e até crianças. Uma dieta hipercalórica, aliada ao sedentarismo tem sido junto com a predisposição genética os principais desencadeantes das complicações crônicas associadas com o DM2. Infelizmente, são essas complicações que levam ao grande aumento da morbidade e mortalidade que pode chegar até 80% nesta doença, sendo que as principais são as de natureza micro e macrovascular. Complicações microvasculares compreendem a retinopatia diabética (RD), a nefropatia diabética (ND) e a neuropatia periférica (NP), enquanto que as complicações macrovasculares compreendem a doença cardiovascular (DCV), a doença arterial periférica (DAP) e o acidente vascular cerebral (AVC). Pacientes com DM2 em sua fase inicial já podem apresentar um quadro protrombótico que só tende a piorar com a progressão da doença. Esse quadro protrombótico é resultante principalmente do processo inflamatório e da disfunção endotelial. Polimorfismos genéticos relacionados com as diferentes fases da hemostasia podem contribuir para o aumento ou diminuição no risco de formação de trombos arteriais e venosos que podem afetar a micro e macrovasculatura destes indivíduos. Objetivos: Investigar a influência de polimorfismos envolvidos com a hemostasia como fatores de risco para o desenvolvimento de complicações crônicas micro e macrovasculares em pacientes com DM2. Metodologia: Foi realizado um estudo de caso controle aninhado em uma coorte de pacientes DM2 não relacionados provenientes de um estudo multicêntrico no sul do Brasil. Os pacientes DM2 foram divididos em 2 grupos de estudo. Para o grupo com complicação macrovascular estudou-se 404 pacientes DM2. Casos para a complicação macrovascular foram definidos como tendo cardiopatia isquêmica (CI), acidente vascular cerebral isquêmico (AVCI) ou DAP enquanto que controles foram definidos como pacientes com pelo menos 5 anos de DM2 e sem a respectiva complicação. Para o estudo das complicações microvasculares 393 pacientes com DM2 foram estudados. Os casos foram definidos como tendo RD, ND ou neuropatia sensório distal (NSD). Controles para a complicação microvascular foram pacientes com pelo menos 10 anos de DM2 e sem a respectiva complicação. Os polimorfismos estudados foram testados em duplicata utilizando-se a PCR seguida de RFLP quando necessário. Foram investigados nove polimorfismos assim distribuídos: Na fase da coagulação foram estudados cinco polimorfismos (FGB rs1800790, F2 rs1799963, FV rs6025 F7 rs5742910 e F13A rs5985); dois (PLAT rs4646972 e PAI-1 rs1799768) na fase da fibrinólise e um (ITGB3 rs5918) na fase plaquetária. O polimorfismo da MTHFR rs1801133 envolvido com a hiperhomocisteínemia é considerado um fator de risco para DCV e por isso foi incluído. Para a análise estatística foi utilizado o teste do χ2 para a comparação das frequências genotípicas e alélicas. Os polimorfismos com diferença significativa foram testados na regressão de Poisson com variância robusta ajustado pelas variáveis de confusão. Para as complicações microvasculares também foi utilizado o teste do χ2 com análise de resíduo ajustado. Resultados: O polimorfismo do receptor plaquetário ITGB3 rs5918 apresentou associação com os desfechos AVCI e DAP. Para o desfecho AVCI o genótipo 176TC mostrou associação significativa [(PR = 2.04(1.11-3.73); P = 0.021], enquanto que para a DAP a associação foi com o genótipo 176CC [PR = 1.90(1.29-2.81); P = 0.001]. Em relação às complicações microvasculares o único polimorfismo que mostrou associação foi o PAI-1 rs1799768. Neste caso, o polimorfismo demonstrou ter uma associação inesperada para o alelo 4G como um fator de proteção quando comparamos pacientes com e sem ND [PR = 0.71(0.57-0.89); P = 0.003]. Porém, quando foi estratificado o grupo de pacientes com ND de acordo com a severidade, foi possível demonstrar usando a análise de resíduo ajustado do teste do χ2 que havia uma diminuição significativa na frequência do alelo 4G somente no estágio mais avançado da doença renal (P = 0.009; AR = -2.95) o que sugere o seu envolvimento com uma maior taxa de mortalidade na ND. Também foi possível mostrar que o alelo de risco 4G está significativamente associado com a cardiopatia isquêmica nos indivíduos com ND (P = 0.03; AR = 2.5). Conclusões: Os pacientes com DM2 portadores do alelo de risco 176C do polimorfismo ITGB3 rs5918 apresentam um risco significativamente aumentado de desenvolver AVCI e DAP, enquanto que os portadores do alelo de risco 4G do polimorfismo PAI-1 rs1799768 provavelmente apresentem maior risco de desenvolver ND. Além disso, os portadores do alelo 4G e que tem ND apresentaram um risco significativamente aumentado de desenvolverem CI. / Introduction: Type 2 diabetes mellitus (T2DM) represents approximately 90% of the diabetes types, increasingly affecting the adult population and nowadays also occurring in young adults and children. Hypercaloric diets, sedentarism and genetic predisposition are the main triggering factors of chronic complications associated to T2DM. Unfortunately, these are the complications that lead to a considerable increase in morbidity and mortality, which may reach 80%, with the main complications being of micro- and macrovascular nature. The microvascular complications are diabetic retinopathy (DR), diabetic nephropathy (DN) and peripheral neuropathy (PN). The macrovascular complications include cardiovascular disease (CVD), peripheral arterial disease (PAD) and stroke. In the initial T2DM stage, patients may present a prothrombotic state that tends to worsen as the disease evolves. This prothrombotic state results mainly from the inflammatory process and from the endothelial dysfunction. Genetic polymorphisms related to the different stages of hemostasis may play a role in the increase or decrease of the risk of arterial and venous thrombus, which may affect the micro- and the macrovasculature of these individuals. Objectives: To investigate the influence of the polymorphisms related to hemostasis as risk factors for the development of micro- and macrovascular complications in T2DM patients. Methods: A nested case-control study was conducted with a cohort of unrelated T2DM patients from a multicenter study made in southern Brazil. T2DM patients were divided in two groups. The macrovascular complication group included 404 T2DM patients. Macrovascular complications were defined according to the presence of the following criteria: ischemic heart disease (IHD), ischemic stroke (IS) or PAD. The control group was formed by patients who had had T2DM for at least five years but without the respective complications. The microvascular complication group included 393 T2DM patients. Microvascular complications were defined based on the presence of the following criteria: DR, DN, or distal sensory neuropathy (DSN). The controls used in the investigation of the microvascular complications were patients who had T2DM for at least 10 years, without the respective complications. The polymorphisms investigated were analyzed by PCR with RFLP, when necessary. In total, nine polymorphisms were studied. Five polymorphisms (FGB rs1800790, F2 rs1799963, FV rs6025, F7 rs5742910 and F13A1 rs5985) were investigated for the coagulation stage, two (PLAT rs4646972 and PAI-1 rs1799768) for the fibrinolysis stage, and one (ITGB3 rs5918) for the platelet stage. The polymorphism MTHFR rs1801133, associated to hyperhomocysteinemia, which is considered a risk factor for IHD, was also investigated. The statistical analysis used the χ² test to compare genotypic and allelic frequencies. The polymorphisms presenting significant differences were tested using the Poisson regression with robust variance adjusted for the confounding variables. The χ² test with the analysis of adjusted residues was also used for microvascular complications. Results: The polymorphism of the platelet receptor ITGB3 rs5918 was associated with the outcomes IS and PAD. Considering IS, the genotype 176TC exhibited significant association [(PR = 2.04(1.11-3.73); P = 0.021], while considering PAD the association was with genotype 176CC [PR = 1.90(1.29-2.81); P = 0.001]. Regarding the microvascular complications, the only polymorphism that presented association was PAI-1 rs1799768. In this case, the polymorphism demonstrated an unexpected association with allele 4G as a protection factor when patients with and without DN [PR = 0.71(0.57-0.89); P = 0.003]. However, when the group of patients with DN was stratified in terms of severity, it was possible to demonstrate a significant decrease in 4G allele frequency only n the more advanced stage of the renal disease, using the adjusted residue of the χ2 test (P = 0.009; AR = -2.95), which suggests its involvement with a higher mortality rate in DN. It was also possible to show that the risk allele 4G is significantly associated with ischemic cardiopathy in individuals with DN (P = 0.03; AR = 2.5). Conclusions: The T2DM patients carriers of the risk allele 176C of the polymorphism ITGB3 rs5918 present a significantly increased risk of developing IS and PAD, while carriers of the risk allele 4G of the polymorphism PAI-1 rs1799768 probably present higher risk of developing DN. Apart from this, this group of subjects also presented a significant risk of developing IHD.

A uremia é uma desordem sistêmica que pode estar associada à disfunção plaquetária adquirida, levando a alterações na hemostasia primária. Vários modelos de interferência entre a uremia e a falha na hemostasia já foram propostos, porém o mecanismo exato é desconhecido, e a tendência ao sangramento parece ser de origem multifatorial. O teste do tempo de sangramento da mucosa oral (TSMO) pode ser utilizado na avaliação da hemostasia primária em animais. O fator de von Willebrand (FvW:Ag) normal ou aumentado, observado na maioria dos cães urêmicos, contribui para o diagnóstico de uma alteração plaquetária adquirida. A contagem de plaquetas e os testes de coagulação normais associados a um aumento no TSMO dão suporte à suspeita de um defeito qualitativo. O objetivo deste trabalho foi investigar possíveis anormalidades na hemostasia, buscando estabelecer uma relação entre os resultados de exames laboratoriais e alterações no tempo de sangramento. A hemostasia foi avaliada em quarenta cães azotêmicos, urêmicos ou não. O aumento no TSMO foi observado em 35% dos cães azotêmicos. O teste de Spearman demonstrou haver correlação entre o TSMO e os valores de creatinina, uréia e hematócrito, porém, o ajuste pela Regressão Linear Múltipla evidenciou o hematócrito como única variável associada com o TSMO. Valores de hematócrito abaixo do intervalo de referência para a espécie foram observados em 92,86% dos pacientes que apresentaram aumento no TSMO. Esses valores reduzidos parecem contribuir para a tendência ao sangramento, embora não possam ser considerados como fator determinante preditivo, uma vez que sua ocorrência nem sempre se associou com interferências no TSMO. / Uremia is a systemic disorder that may be associated with acquired platelet dysfunction, leading to changes in primary hemostasis. Several interference models between uremia and hemostasis failure have been proposed, but the exact mechanism is unknown, and bleeding tendencies seem to have a multifactorial origin. The buccal mucosal bleeding time (BMBT) test can be used in the assessment of primary hemostasis in animals. Normal or increased von Willebrand factor (vWF:Ag), observed in most uremic dogs, contributes to the diagnosis of an acquired platelet alteration. Normal platelet counts and coagulation tests associated with BMBT raises support the suspicion of a qualitative defect. The aim of this study was to investigate possible hemostasis abnormalities, trying to establish a relation between the results of laboratory tests and changes in bleeding times. Hemostasis was evaluated in forty azotemic dogs, uremic or not. Increase in BMBTs was observed in 35% of the azotemic dogs. Spearman’s test showed a correlation between BMBT and the values of creatinine, urea and hematocrit; however, adjusting for Multiple Linear Regression showed hematocrit as the only variable associated with BMBT. Hematocrit values below reference range for the species was observed in 92,86% of the patients showed an increase in BMBT. These low values appear to contribute to the tendency to bleed, although they cannot be considered as a preditive determining factor, since their occurrence is not always associated with interference in BMBT.

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA13MA119.pdf: 243424 bytes, checksum: 0b630548fe7f6b8f2081e1a779e8edd2 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The blood sampling should not be influenced by factors that interfere in the results, but this is not always possible, especially in cats. The use of sedation protocols can assist in obtaining samples, but it is not known whether there are changes in haematological values and hemostasis. The aim of this study was to evaluate the parameters of the CBC, primary and secondary hemostasis of domestic cats under physical restraint and under different protocols of sedation. 50 cats were used from private owners, aged between one and seven years and with 3.32 Kg weight. The animals were randomly divided into two groups according to the association of drugs used: DB Group (25) dexmedetomidine (5 &#956;g/kg) and butorphanol (0.3 mg/kg); DBC Group (25) dexmedetomidine (5 &#956;g/kg), butorphanol (0.3 mg/kg) and ketamine (3 mg/kg), and all applications made by intramuscular injection. Blood samples were collected by jugular vein puncture in two moments, animals under physical restraint, and after applying one of the protocols of sedation. Scales were used to assess acute stress (zero to three) and evaluation of sedation (one to four). The parameters evaluated in two moments were the red cell count, hemoglobin, hematocrit, dosage globular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin concentration (CHGM), measurement of total plasma protein, platelet count, total and differential leukocyte count, clotting time, prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (Aptt), Thrombin time (TT). The bleeding time of the oral mucosa (TSMO) was carried out only after the use of sedation. The latent period was also measured. The results were evaluated by Sigma Plot computer program for Windows (2009), by applying the test of analysis of variance (ANOVA), and the observed differences were analyzed by Tukey test (p < 0.05). The values found for erythrocytes, hemoglobin, hematocrit, MCV, CHGM, platelets and leukocytes showed no statistical difference between the physical restraint and after the use of the sedation protocol or between sedation protocols. The coagulation time values showed no difference between moments and groups. The oral mucosal bleeding time showed no difference between the groups. Already the TP, APTT and TT values were different between groups, without difference between times. The stress evaluation showed that there was a predominance of animals with no stress or discreet stress during physical restraint. Sedation evaluation showed that the protocol used in DBC was more effective in relation to the DB group. As there were no clinically relevant changes in the values obtained under physical restraint and after the use of protocols, it is suggested that the use of these protocols of sedation does not interfere in the values of primary and secondary hemostasis and blood in healthy cats / A colheita de amostras de sangue não deve ter influência de fatores que interfiram nos resultados, porém essa situação nem sempre é possível, sobretudo nos felídeos. O uso de protocolos de sedação pode auxiliar na obtenção de amostras, porém não se sabe se há alteração nos valores hematológicos e de hemostasia. O objetivo deste trabalho foi avaliar os parâmetros do hemograma, hemostasia primária e secundária de felinos domésticos sob contenção física e sob diferentes protocolos de sedação. Foram utilizados 50 gatos provenientes de proprietários particulares, com idade entre um e sete anos e com peso de 3,32 Kg. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos de acordo com a associação de drogas utilizadas: Grupo DB (25 animais) dexmedetomidina (5&#956;g/kg) e butorfanol (0,3 mg/kg); Grupo DBC (25 animais) dexmedetomidina (5&#956;g/kg), butorfanol (0,3 mg/kg) e cetamina (3mg/kg), sendo todas as aplicações realizadas pela via intramuscular. As amostras de sangue foram colhidas por punção da veia jugular em dois momentos, animais sob contenção física, e após a aplicação de um dos protocolos de sedação. Foram utilizadas escalas para avaliação do estresse agudo (zero a três) e para avaliação da sedação (um a quatro). Os parâmetros avaliados nos dois momentos foram contagem de eritrócitos, dosagem de hemoglobina, hematócrito, volume globular médio (VGM), concentração de hemoglobina globular média (CHGM), mensuração da proteína plasmática total, contagem de plaquetas, contagem total e diferencial de leucócitos, além do tempo de coagulação, tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) e tempo de trombina (TT). O tempo de sangramento da mucosa oral (TSMO) foi realizado somente após o uso de sedação. O período de latência também foi mensurado. Os resultados foram avaliados por programa computacional Sigma Plot for Windows (2009), aplicando-se o teste de análise de variância (ANOVA), sendo que as diferenças observadas foram analisadas pelo teste de Tukey (p<0,05). Os valores encontrados para eritrócitos, hemoglobina, hematócrito, VGM, CHGM, plaquetas e leucócitos, não apresentaram diferença estatística entre o momento contenção física e após o uso do protocolo de sedação, ou entre os protocolos de sedação. Os valores de tempo de coagulação não demonstraram diferença entre momentos e grupos. O tempo de sangramento da mucosa oral não apresentou diferença entre os grupos. Já o TP, TTPa e TT se mostraram diferentes entre grupos, sem diferenças entre momentos. A avaliação do estresse demonstrou que houve predomínio de animais com ausência de estresse ou estresse discreto durante a contenção física. A avaliação da sedação demonstrou que o protocolo utilizado no grupo DBC foi mais efetivo em relação ao grupo DB. Como não foram observadas alterações relevantes clinicamente nos valores obtidos sob contenção física e após a utilização dos protocolos, sugere-se que a utilização desses protocolos de sedação não interfere nos valores de hemograma e hemostasia primária e secundária em gatos saudáveis

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CelinaMPGD_TESE.pdf: 1816885 bytes, checksum: 1e39ca48cae61af571d696fef8f71be4 (MD5) Previous issue date: 2012-10-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The present study examines the chemical composition and their effects on free radicals, inflammation, angiogenesis, coagulation, VEGF effects and cellular proliferation of a polysaccharides from alga Sargassum vulgare. The sulfated polysaccharide was extracted from brown seaweed by proteolysis with enzymes maxataze. The presence of proteins and sugars were observed in crude polysaccharides. Fractionation of this crude extract was made with growing concentration of acetone (0.3-1.5 v) and produced four groups of polysaccharides. Anionic polysaccharides from brown seaweed Sargassum vulgare, SV1and PSV1 were fractionated (SV1) and purified (PSV1), and displayed with high total sugars and sulfate content and very low level of protein. This fucan SV1 contains low levels of protein and high carbohydrate and sulfate content. This polysaccharides prolonged activated partial thromboplastin time (aPTT) at 50 &#956;g (>240 s). SV1 was found to have no effect on prothrombin time (PT), corresponding to the extrinsic pathway of coagulation. SV1 exhibits high antithrombotic action in vivo, with a concentration ten times higher than heparin. Polysaccharides from S. vulgare promoted direct inhibition enzymatic activity of thrombin and stimulated enzymatic activity of FXa. SV1 showed optimal inhibitory activity of thrombin (50.2?0.28%) at a concentration of 25 &#956;g/mL. Its antioxidant action on scavenging radicals by DPPH was (22%), indicating the polymer has no cytotoxic action (hemolytic) on ABO and Rh blood types in different erythrocyte groups and displays strong anti-inflammatory action on all concentrations tested in the carrageenan-induced paw edema model, demonstrated by reduced edema and cellular infiltration. Angiogenesis is a dynamic process of proliferation and differentiation. It requires endothelial proliferation, migration, and tube formation. In this context, endothelial cells are a preferred target for several studies and therapies. The antiangiogenic efficacy of polysaccharides was examined in vivo in the chick chorioallantoic membrane (CAM) model by using fertilized eggs. Decreases in the density of the capillaries were assessed and scored. The results showed that SV1 and PSV1 have an inhibitory effect on angiogenesis. These results were also confirmed by inhibition tubulogenesis in rabbit aorta endothelial cell (RAEC) in matrigel. These compounds were assessed in Apoptosis assay (Annexin V - FITC / PI) and cell viability by MTT assay of RAEC. These polysaccharides do not affect the viability and do not have apoptotic or necrotic action. RAEC cell when incubated with SV1 and PSV1showed inhibition of VEGF secretion, observed when compounds were incubated at 25, 50 and 100 &#956;g/&#956;L. The VEGF secretion with the RAEC cell line for 24 h, was more effective for PSV1 at 50 &#956;g/&#956;L(71.4%) than SV1 100 &#956;g/&#956;L (75.9%). SV1 and PSV1 had an antiproliferative action (47%) against tumor cell line HeLa. Our results indicate that these sulfated polysaccharides have antiangiogenic and antitumoral actions / O presente estudo analisa a composi??o qu?mica e seus efeitos sobre os radicais livres, inflama??o, angiog?nese, coagula??o, VEGF e prolifera??o celular dos polissacar?deos de uma alga Sargassum vulgare. O polissac?rido sulfatado foi extra?do a partir de algas marrons por prote?lise com a enzima maxataze. A presen?a de prote?nas e a??cares foram observados no cru de polissacarideos. Fracionamento do o extrato bruto foi feito com concentra??es crescente de acetona (0,3-1,5 v), produzindo quatro grupos de polissacarideos. Estes compostos ani?nicos da alga S. vulgare, foram fracionados (SV1) e purificados (PSV1) exibindo com alta a??cares totais e sulfatecontent e n?vel muito baixo de prote?nas.A fucana SV1 cont?m baixos n?veis de prote?na e de hidratos de carbono e alto teor de sulfato. Este polissacar?deos prolongou o tempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) a 50 ug (>240 s). n?o foi observado qualquer efeito de SV1 sobre o tempo de protrombina (PT), que corresponde a via extr?nseca da coagula??o. SV1 exibiu alta a??o antitromb?tica in vivo, com uma concentra??o 10 vezes maior do que a heparina. SV1 promoveu a actividade de inibi??o enzim?tica direta da trombina e estimulou a atividade enzim?tica do FXa. Mostrou tamb?m, atividade inibidora optima de trombina (50,2 ? 0,28%) a uma concentra??o de 25 ug / mL. A sua ac??o anti-oxidante de radicais scavenging por DPPH foi de (22%), indicando que o pol?mero n?o tem qualquer a??o citot?xica (hemol?tica) em tipos de sangue ABO e Rh, em diferentes grupos de eritr?citos e exibindo alta a??o anti-inflamat?ria em edema de pata de ratos Wistar em todas as concentra??es testadas induzida por carragenina. Tal processo foi demonstrado por edema e infiltra??o celular. A angiogenese ? um processo din?mico de prolifera??o e diferencia??o. Ele requer prolifera??o endotelial, migra??o, e a forma??o do tubo. Neste contexto, as c?lulas endoteliais s?o um alvo preferido para muitos estudos e terapias. A efic?cia antiangiogenico de polissacar?deos foi examinada in vivo na membrana corioalant?ica pinto (CAM) usando-se ovos fertilizados. Diminui??es na densidade dos capilares foram avaliados e pontuados. Os resultados mostraram que SV1 e PSV1 tem um efeito inibidor da angiogenese. Estes resultados foram tamb?m confirmados por tubulogenesis inibi??o na c?lula endotelial da aorta de coelho (RAEC) em matrigel. C?lulas RAEC quando foram incubadas com SV1and PSV1 demonstraram inibi??o da secre??o de VEGF, a 25, 50 e 100 ug/mL. A secre??o de VEGF com a linha de c?lulas RAEC durante 24 h, foi mais eficaz para PSV1 a 50 ug / mL (71,4%) do que SV1 100 ug / mL (75,9%). SV1 e PSV1 posuiram uma ac??o antiproliferativa (47%) contra as c?lulas tumorais tipo HeLa. Estes compostos foram avaliados tamb?m, no ensaio de apoptose (anexina V - FITC / PI) e a viabilidade celular pelo ensaio de MTT de RAEC. Estes polissacar?deos n?o afetaram a viabilidade e n?o tiveram a??o apopt?tica ou necr?tica. Nossos resultados indicam que estes polissacar?deos sulfatados t?m a??es antiangiog?nica e antitumoral e constituem um importante alvo biol?gico e farmacol?gico

Orientador: Izolete Aparecida Thomazini Santos / Banca: Regina K. Takahira / Banca: Michele Janegitz Acorse Valerio / Resumo: A doença de von Willebrand (DvW) é decorrente da deficiência qualitativa ou quantitativa do Fator de von Willebrand (FvW) e é considerada a coagulopatia hereditária mais comum na população com uma prevalência de 1,1% na população geral. Para o seu diagnóstico são utilizados diversos métodos como o teste do cofator da ristocetina, que é amplamente utilizado na rotina laboratorial por ser considerado padrão-ouro na avaliação da função do fator de von Willebrand e por estar diminuído em todos os casos da doença. O kit comercial de plaquetas liofilizadas é importado, de elevado custo e possui uma validade de 30 dias após sua reconstituição se conservado de 2C a 8C. Devido à baixa prevalência da DvW na população, muitas vezes não há uma grande quantidade de exames a serem realizados, fazendo com que os plasmas desses pacientes sejam congelados e armazenados até o momento onde apareça um número mínimo de pacientes. O estudo teve como objetivo padronizar uma técnica como alternativa na utilização de plaquetas fixadas em formalina e o seu teste em indivíduos saudáveis e com a suspeita da doença, onde foram avaliados a porcentagem de atividade expressa considerando o montante de aglutinação induzida pela ristocetina, que se relaciona proporcionalmente com a concentração do FvW e o percentual de atividade normal medido através do agregômetro. O estudo possui um caráter preliminar e apresentou-se viável à rotina laboratorial, e se faz necessário não só a coleta de um número amostral maior, mas também da análise de diversas variáveis (grupo sanguíneo, idade, hormônios, estresse, uso de medicamentos) para se estabelecer nessa população um valor de referência para essa técnica / Abstract: The von Willebrand disease (VWD) is caused by a qualitative or quantitative deficiency of von Willebrand Factor (vWF) and is considered the most common hereditary bleeding disorder in the population with a prevalence of 1.1% in the general population. For its diagnosis, several methods are used to test the ristocetin cofactor, which is widely used in laboratories because it is considered the gold standard in assessing the function of von Willebrand factor and to be decreased in all cases of the disease. The imported commercial kit of lyophilized platelets is costly and expires 30 days after reconstitution if stored from 2C to 8C. Due to the low prevalence of v WD in the population, usually there are not enough tests to be done, making it necessary to freeze and store the plasma of these patients until there is a minimum number of patients for testing. This study aimed to standardize a technique as an alternative to the use of formalin-fixed platelets and to test it in healthy subjects with suspected disease. Thus, the percentage of expressed activity was evaluated considering the amount of agglutination induced by ristocetin proportionally related to the concentration of vWF and the percentage of normal activity measured by an aggregometer. The study has a preliminary character and showed to be feasible for laboratory routine, and it is necessary not only to collect a larger sample size, but also to analyze several variables (blood group, age, hormones, stress, use of drugs) to establish a reference value for this technique in the population / Mestre

A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

Base teórica: A obesidade, especialmente a de tronco, está associada com um aumento do risco de doenças cardiovasculares; embora seja controverso se esta associação se deva a outros fatores de risco. Conseqüências conhecidas do sobrepeso, como hipertensão, dislipidemia e diabete, explicam apenas de parte do risco decorrente da obesidade. Um número crescente de evidências sugere que a associação entre obesidade e fatores hemostáticos possa se constituir em um mecanismo adicional pelo qual obesidade confere risco cardiovascular. Nesta tese analisou-se a associação da obesidade, aferida pelo índice de massa corporal (IMC), distribuição de gordura, aferida pela razão cintura quadril (C/Q) com fatores hemostáticos. Métodos: Estudou-se 3230 indivíduos (55% mulheres) com média de 54 anos de idade sem história de doença cardiovascular arrolados no quinto ciclo do Estudo dos Descendentes de Framingham. Amostras de sangue emjejum foram coletadas entre 8 e 9 horas da manhã para a determinação de fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand (vW), fator ativador do plasminogêriio (tPA), inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-I) e viscosidade sangüínea, além de dos níveis de lipídeos e glicose. Resultados: Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA e PAI-l associaram-se com IMC tanto em homens quanto em mulheres (p=0,02 para fator de vW e p<O,OOOI para os demais). A viscosidade plasmática associou-se com IMC em mulheres (p<O,OOOI), mas não em homens (P=O,14). Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA, PAI-1 e viscosidade plasmática associaram-se com W/C tanto em homens quanto em mulheres (p=0,0005 em homens e p=0,01 em mulheres para a viscosidade plasmática e p<O,OOOI para os demais). Todas as associações verificadas para fibrinogênio, fator VII, tPA e PAI-I persistiram após regressão linear múltipl~ controlando-se para as covariáveis idade, tabagismo, uso de antihipertensivos, pressão arterial sistólica, colesterol total e HDL, triglicerídeos e glicose. As associações para o fator de vW permaneceram para o C/Q em homens e para IMC em mulheres. As associações para a viscosidade sangüínea tanto para IMC quanto C/Q persistiram em mulheres mas não em homens. Conclusão: O sobrepeso e o acúmulo de gordura abdominal estão fortemente associados com fatores hemostáticos. Estas associações são independentes de idade, tabagismo e fatores de risco decorrentes da obesidade. Como a associação entre obesidade e doenças vasculares não pode ser completamente explicada por fatores de risco tradicionais, alterações da hemostasia como aumento de fibrinogênio e fatores de coagulação, juntamente com redução do potencial fibrinolítico poderiam se constituir em mecanismos adicionais para explicar o excesso de eventos cardiovasculares em indivíduos obesos. / Background: Obesity, specially truncaI obesity, has been associated with an increased risk for cardiovascuIar disease, aIthough the mechanism ofthe risk has not been fully explained. The consequences of heavy weight, such as hypertension, hyperlipidimia and diabetes, account only for part of the risk attributed to obesity. Since thrombosis is a criticaI component of cardiovascular events, we determined the relationship between obesity, as assessed by body mass index (BMI), fat distribution as assessed by waist-to-hip ratio (W/H) and hemostatic factors. Methods: We studied 3230subjects (55% females) of average age of 54 years without history of cardiovascular disease enrolled in cycle 5 of the Framingham Offspring Study. Fasting bIood samples were obtained between 8-9 am for determination of fibrinogen, plasminogen activator inhibitor (PAI-I) antigen, tissue pIasminogen activator (tPA) antigen, von Willebrand (vW) factor, factor VII antigen and plasma viscosity, as well as lipid and glucose leveIs. Results: Fibrinogen, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with body mass index in both men and women.(p<O.OOOI for all except vWfactor in men, p=O.02). Plasma viscosity was associated with body mass index in women (p<O.OOOI) but not in men (p=O.I4). Fibrinogen, viscosity, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with waist-to-hip ratio in both men and women (p<O.OOOI for all, except for viscosity, p=O.OOS in men and p=O.OI in women). All the associations found for fibrinogen, PAI-I, tPA, and factor VII persisted afier multiple linear regression, controlling for the covariates of age, smoking, total and HDL cholesterol, triglycerides, blood pressure and glucose level. The associations ofwW fador persisted significant for BMI in women but not for men and for WIH in men but not in women. The association between viscosity and BMI or WIH persisted in women but not in men. Conclusion: Heavy weight and abdominal accumulation of fat are strongly associated with hemostatic factors. These associations are independent of age, smoking and cardiovascuIar risk factors linked to obesity. Since the link between vascular disease and obesity cannot be fully expIained by traditional risk factors, a hypercoaguIabIe state could be one of the mechanisms Ieading to an excess of cardiovascuIar events in obese individuals.