Chronic immune insult and immunosuppressant-related toxicities have remained an enduring challenge in organ transplantation. Long-term survival of transplant patients has improved marginally in recent decades due to these challenges. To circumvent these issues, transplant investigators have researched immune tolerance mechanisms that demonstrate potential to induce immunosuppression and rejection-free survival in the clinic. One mechanism in particular, the liver tolerance effect, has already demonstrated this experimentally and clinically. Liver transplants in experimental models and human patients have exhibited the ability to become spontaneously accepted without being rejected by the recipient’s immune system. Research in recent decades has revealed that the liver parenchymal and non-parenchymal cell populations harbor potent immunomodulatory properties. In the context of liver transplantation, it has been found that two cell populations in particular, the mesenchyme-derived liver sinusoidal endothelial cells and hepatic stellate cells, mediate the induction of liver transplant tolerance through a mechanism known as mesenchyme-mediated immune control.

Introduction: Hepatic stellate cells (HSC) and myofibroblasts may be relevant stromal drivers of human hepatocellular carcinoma (HCC). It was hypothesised that targeted inhibition of αv integrin-mediated TGF-β activation, by HSC or hepatocytes, may result in reduced peri-tumoural and intra-tumoural extracellular matrix formation, and reduced hepatic carcinogenesis. The role of HSC in acute liver injury is less well characterised. It was anticipated that integrin signalling on HSC and hepatocytes might also be relevant in the acute setting. The emerging technique of intravital microscopy (IVM) allows detailed, real-time investigation of the cellular processes involved in hepatocyte injury, cell death and repair. It was hypothesised that this could be coupled with mouse models of HCC and acute liver injury, to perform sequential imaging under anaesthesia. Aims: (i) To determine the effect of targeted inhibition of αv integrins on HSC and hepatocytes, during hepatocarcinogenesis, in a mouse model of HCC. (ii) To investigate the effect of targeted inhibition of αv and other integrins on HSC, hepatocytes, and liver sinusoidal endothelial cells (LSEC), during acute liver injury, in the mouse model of paracetamol-induced liver injury. (iii) To develop IVM of the liver, via an abdominal imaging window, with optimisation of surgical and imaging techniques, to allow sequential imaging of the same animal. Methods: The diethylnitrosamine (DEN)-induced mouse model of hepatocarcinogenesis was used, and PDGFRβ-Cre;αvfl/fl and Alb-Cre;αvfl/fl mice were employed to deplete αv integrins on HSC and hepatocytes respectively. Tumours were harvested at 40 weeks post-DEN. Tumour size and number was evaluated in all animals. PDGFRβ-Cre;αvfl/fl and Alb-Cre;αvfl/fl mice were used in the paracetamol model, to investigate the role of αv integrins in acute liver injury. PDGFRβ-Cre;β8fl/fl and Alb-Cre;β 8fl/fl animals were also tested in this model. The role of integrins in liver sinusoidal endothelial cells (LSEC) during paracetamol-induced liver injury was evaluated using Cdh5-Cre mice. IVM of the liver was performed by surgical implantation of an abdominal imaging window, consisting of a titanium ring and coverslip, secured in place with a purse string suture. Fluorescent reporter mice were used to identify hepatic and vascular architecture, and other label-free microscope technologies were utilised to image collagen, lipid distribution, necrotic areas and blood flow within tissues. Results: In large cohorts of PDGFRβ-Cre;αvfl/fl, Alb-Cre;αvfl/fl, and control animals, there was no difference in mean tumour size or number, at 40 weeks. Targeted inhibition of α v integrins and β 8 integrin on hepatocytes, HSC or LSEC was not protective in paracetamol-induced liver injury. IVM of the liver can be performed on animals with HCC and throughout paracetamol-induced liver injury, to obtain high quality, real-time images of multiple cell lineages and the hepatic microenvironment. Conclusions: The role of TGF-β in HCC pathogenesis is complex and context-dependent. Targeted loss of αv integrin did not result in reduction in tumour burden in this non-cirrhotic model of HCC. IVM of the liver is a powerful tool to quantify inflammatory infiltrates and assessment of vascular remodelling throughout the course of acute liver injury and regeneration, providing insights into the biological processes determining recovery.

O urucum (Bixa Orellana L.), planta arbustiva da família Bixaceae, é uma cultura que vem conquistando cada vez mais importância econômica, uma vez que do pericarpo da semente se extrai um corante natural, constituído por carotenóides, com predominância da bixina. A presença na dieta de compostos como os carotenóides podem contribuir para minimizar os efeitos dos radicais livres produzidos no organismo. Alguns quimioterápicos como a cisplatina, produzem efeitos colaterais indesejáveis aos pacientes em tratamento, proporcionando queda nos níveis de antioxidantes séricos e aumento na atividade dos radicais livres que podem refletir na falência renal e hepática. A presença na dieta de compostos como os carotenóides podem contribuir para minimizar tais efeitos. Neste sentido, torna-se de grande importância à investigação dos efeitos benéficos de tais pigmentos frente ao estresse oxidativo, sendo o estudo com animais de laboratório uma opção viável. O presente trabalho avaliou a composição centesimal, a quantidade de bixina presente e ação terapêutica da semente de urucum e dos cristais de bixina na redução da toxidade da cisplatina sobre as desordens renais e hepáticas em ratos adultos, da linhagem wistar, machos. Os animais receberam o pré-tratamento com bixina (0,065 mg/kg de peso) e urucum (0,500mg/kg de peso) durante 28 dias, com controle de peso a cada dois dias, para ajustar as doses dos carotenóides utilizados. A cisplatina foi administrada intraperitonealmente (5mg/kg de peso) 48 horas antes do término do experimento. Após abate, o sangue foi coletado na artéria aorta ascendente e foram retirados o fígado para a extração da gordura, dosagens enzimáticas e índice de peroxidação lipídica e os rins para análise histológica. O resultado da composição centesimal mostrou que as sementes de urucum apresentaram características nutricionais desejáveis, com alto teor de proteínas e fibras. Os resultados das análises hepáticas mostraram que a aspartato aminotrasferase (AST), alanina aminotrasferase (ALT), uréia e creatinina apresentaram reduções significativas nos grupos que receberam o pré-tratamento com bixina e urucum. A cisplatina causou aumento da deposição de gordura hepática e da peroxidação lipídica. Na análise histológica observou-se que os animais do grupo cisplatina sem a presença de urucum ou bixina apresentaram alterações inflamatórias, caracterizadas por modificações glomerulares e aumento no número de polimorfonucleares (PMN). Os resultados deste estudo mostraram que houve proteção hepática e renal contra a injuria causada pela cisplatina, quando administrado o urucum ou a bixina na dieta dos animais, antes da injeção deste fármaco. / The annatto (Bixa orellana L.) is a Bixaceae family bushy plant, being a cultivation with a growing economic relevancy since that from seed's pericarp can be extracted a natural colorant with carotenoid constitution and bixin predominance. The presence of compounds like the carotenoids can cooperate to minimize the free radicals effects produced at the organism. Some chemotherapeutic agents as cisplatin can produce unwanted side effects to the patients under treatment, providing serum antioxidants levels decrease and free radicals activity increase, that may imply in hepatic and renal collapse. The presence of compounds like the carotenoids, in diet, can minimize such effects. For such reasons, the investigation of the benefits of these pigments takes great relevancy against the oxidant stress, while the analysis through laboratory animals was a viable option. This study evaluated the centesimal composition, the bixin quantity presence and the therapeutic action of annatto's seed and bixin crystals at cisplatin toxicity decrease on renal and hepatic disorders in wistar male rats. The animals received the pretreatment with bixin (0,065 mg/kg) and annatto (0,500 mg/kg) along twenty eight days, with weight control every two days to order of carotenoid dosage adjust. The cisplatin was intraperitoneally injected (5 mg/kg) forty four hours before the experiment ending. After animal euthanasia , the blood was collected in ascending aorta and the liver was removed to order of fat extraction, enzymatic dosages and lipid peroxidation tax. Also, the kidnyes was remover to to histological analysis. The centesimal composition results showed that annatto's seeds featured wanted nutritional traces with high protein and fiber content. The hepatic analysis results demonstrated that aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), urea and creatinine levels decreased significantly in the groups receiving pretreatment with bixin and annatto. The cisplatin caused increased deposition of hepatic fat and lipid peroxidation. In the histological analysis was noticed that the animals which was given the cisplatin without annatto or bixin presence were found inflammatory alterations, characterized by glomerular changes and increased number of polymorphonuclear (PMN). The results of this study show a hepatic and renal protection against the injury caused by cisplatin, when applying annatto and bixin in the animals’ diet before injecting this drug.

Introdução: A atresia biliar (AB) inclui obstrução completas das vias biliares extra-hepáticas e uma colangiopatia intra-hepática progressiva, cirrogênica. A natureza da colangiopatia destes processos permanece obscura. Uma arteriopatia levando a colangiopatia isquêmica explicaria a natureza progressiva da lesão biliar. A imunolocalização do fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA) em ramos arteriais e ductos biliares intra-hepáticos e do porta hepatis dos pacientes com AB sugere isquemia nestas estruturas. A ocorrência de hipóxia hepatobiliar na AB necessita ser esclarecida. Objetivo: Determinar a presença de hipóxia nos fígados de pacientes com AB, analisando a expressão gênica dos fatores induzidos por hipóxia (HIF) -1α e -2α. Métodos: Estudo de amostras de biópsias em cunha coletadas na laparotomia exploradora de pacientes com AB isolada sem IgM+ para citomegalovírus (n= 32) comparando com lactentes com colestase intra-hepática (CIH, n= 09), pareados por idade. Uma amostra foi ultracongelada (análise molecular) e outra, parafinizada (análises histológica e imunoistoquímica). Por PCRq, usando sondas TaqMan®, avaliaram-se as expressões gênicas de: HIF1-α, HIF2-α, proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP1) (marcador de fibrose biliar), citoqueratina 19 (CK19) (marcador de colangiócitos). O gene normalizador foi 18S ribossômico. Por morfometria, foram quantificadas as extensões de fibrose e reação ductular. Dados clínico-laboratoriais foram prospectivamente coletados. Resultados: O grupo AB, comparado à CIH, apresentou maior expressão de HIF1-α e HIF2-α. No grupo AB, a expressão do HIF1-α correlacionou-se positivamente com a bilirrubina total (BT) sérica. Dois subgrupos de AB foram detectados quanto à expressão dos HIFs: alta (hiHIF, expressão 3x maior que a mediana da CIH) e baixa (loHIF). Pacientes hiHIF-1α eram mais velhos e com maiores níveis de BT e bilirrubina direta (BD) que loHIF-1α. O subgrupo hiHIF-2α apresentou expressão de CK19 inferior a do loHIF-2α. As demais variáveis foram semelhantes nos subgrupos HIFs. Conclusão: Na AB ocorre hipóxia tecidual hepática. Os dados sugerem a existência de hipóxia tecidual progressiva nos fígados afetados pela AB, associada ao desaparecimento de ductos biliares e à piora do quadro obstrutivo biliar. / Background: Biliary atresia (BA) includes a complete obstruction of the extrahepatic biliary tract and progressive intrahepatic cholangiopathy, and the nature of these processes remains unclear. An arteriopthy, leading to an ischemic cholangiopathy, can be involved. The immunolocalization of vascular endothelial growth factor A (VEGFA) in arterial branches and bile ducts both within the liver and at porta hepatis from patients with BA suggests ischemia in these structures. The occurrence of hypoxia in the hepatobiliary system in BA needs to be elucidated. Aim: To determinate the presence of hypoxia in the livers from patients with BA, by analyzing the gene expression of hypoxia-inducible factor (HIF) -1α and -2α. Methods: Liver biopsy specimens collected at exploratory laparotomy of age-matched patients with isolated, cytomegalovirus IgM-negative BA (n=32) and intrahepatic cholestasis (IHC, n=9) were evaluated. A sample was ultrafrozen (molecular analysis) and the other was paraffin-embedded (for histological and morphometric analyzes). Gene expression of: HIF-1α, HIF-2α, monocyte chemoattractant protein 1 (MCP1) (biliary fibrosis marker) and cytokeratin 19 (CK19) (cholangiocyte marker) were evaluated by PCRq using TaqMan® probes. The normalizing gene was 18S ribosomal. The extents of fibrosis and ductular reaction were assessed by morphometry. Clinical and laboratory data were prospectively collected. Results: There was higher HIF-1α and HIF-2α expression in BA in comparison with IHC. In BA, the HIF-1α expression was positively correlated with total serum bilirubin (TB). Two groups were observable in BA regarding HIFs: higher (hiHIF, considering as cutoff point a value higher than 3x the median of expression in IHC) and lower (loHIF). Patients with hiHIF-1α were older and presented increased levels of TB and direct-reacting serum bilirubin (DB) than loHIF-1α. Patients with hiHIF-2α presented CK19 expression lower than in loHIF-2α. The other variables were similar in subgroups HIFs. Conclusion: In BA there is hypoxia in the liver tissue, which seems to be progressive and associated with the disappearance of bile ducts and worsening biliary obstruction.

Orientador: Vânia Maria de Vasconcelos Machado / Resumo: A técnica ultrassonográfica permite a avaliação de quase todas as estruturas abdominais, inclusive do fluxo sanguíneo. A análise do fluxo portal, e de outros grandes vasos abdominais, como a veia cava caudal (VCC) e artéria aorta (AA) abdominal, auxilia o diagnóstico de doenças intra e extra-hepáticas. Devido à escassez literária sobre o assunto em equinos, a pesquisa teve como objetivo estudar a técnica ultrassonográfica dos grandes vasos abdominais, determinar referências do diâmetro vascular e velocidade de fluxo sanguíneo da veia porta (VP), a partir do uso da ultrassonografia em modo bidimensional, e pela técnica Triplex Doppler. Foram selecionados 18 animais adultos, com os valores dos exames laboratoriais dentro da normalidade para a espécie, e clinicamente sadios. A partir da obtenção das imagens ultrassonográficas pelo modo-B, mediu-se o diâmetro dos vasos. O método Triplex doppler foi acionado, permitindo a análise da velocidade, pelo corte longitudinal do vaso. A média do diâmetro vascular foi de 2,74±0,25 cm para VP, 2,68±0,36 cm para VCC, e 2,78±0,23 para AA. A velocidade do fluxo venoso portal foi 0,35±0,05 m/s, e a relação porta aorta caval foi aproximadamente 1:1. Não se observou diferenças significativas ao comparar os valores obtidos para as variáveis entre os grupos de machos e fêmeas, ou forte correlação com a idade e peso. O fluxo portal demonstrou um aspecto morfológico contínuo, hepatopetal, e com discreta variação de velocidade. Pelas imagens realizada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The ultrasound technique allows the assessment of almost all abdominal structures, including blood flow. The portal flow analysis, and of other large abdominal vessels, such as the caudal vena cava (VCC) and abdominal aorta arterie (AA), helps to diagnose intra and extrahepatic diseases. Due to the lack of literature on the subject in equines, this research aimed to study the ultrasonographic technique on great abdominal vessels, determine references of vascular diameter and the flow velocity of portal vein (VP), by using ultrasonography in B-mode, and Triplex Doppler technique. Eighteen adult animals were selected, with laboratory tests values within the normal range for the species, and clinically healthy. From the B-mode ultrasonographic imaging, vessels diameters were measured. The Triplex Doppler was used, allowing the analysis of velocity, through longitudinal section of the vessel. The mean vascular diameter was 2.74 ± 0.25 cm for PV, 2.68 ± 0.36 cm for VCC, and 2.78 ± 0.23 for AA. The portal blood flow velocity was 0.35 ± 0.05 m / s, and the porta aorta caval ratio was approximately 1:1. No significant differences were observed, when comparing the values obtained for the variables between the groups of males and females, nor strong correlation with age and weight. The portal flow presented/exhibited a continuous morphological aspect, hepatopetal, and with little velocity variation. Through B-mode images, regions of interest were selected to determine echotexture and e... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-19T18:49:36Z No. of bitstreams: 1 Elisangela Trindade Santos. Schistosoma mansoni....pdf: 19009500 bytes, checksum: 95969f49b90dc351f686bd6dde25898c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:49:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elisangela Trindade Santos. Schistosoma mansoni....pdf: 19009500 bytes, checksum: 95969f49b90dc351f686bd6dde25898c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A esquistossomose mansônica é uma doença parasitária tropical. Causadas por helmintos do gênero Schistosoma. Com a intenção de conter a doença, diversos institutos e organizações vêm desenvolvendo medidas de controle para tratar indivíduos infectados e evitar a ocorrência de novas infecções. Estratégias de administração de medicamentos em massa são eficazes na cura da doença, entretanto o tratamento com drogas anti-helmínticas não previnem a possibilidade da ocorrência de reinfecções. Diante desta questão, neste trabalho propusemo-nos a analisar a cinética da fibrose hepática em camundongos esquistossomóticos tratados e submetidos à reinfecção. Para alcançar este objetivo, 70 camundongos Swiss foram infectados com 50 cercárias de S.mansoni, posteriormente tratados com Oxamniquine ou Praziquantel e reinfectados quatro meses após tratamento. Os fígados destes animais foram submetidos a técnicas de imunohistoquímica e imunofluorescência e microscopia eletrônica de transmissão para avaliação da expressão e participação de componentes envolvidos no processo fibrogênico. Para verificar os índices de colágeno entre os grupos utilizou-se a análise morfométrica. A análise histológica revelou que camundongos esquistossomóticos submetidos à quimioterapia específica desenvolveram altos índices de fibrose durante a reinfecção. A imunomarcação para alfa actina de músculo liso (α-SMA) revelou que grande parte do parênquima hepático dos animais tratados e reinfectados exibiam células com perfil miofibloblástico. A imunofluorescência demonstrou que o padrão de marcação para laminina estava alterado em animais com esquistossomose. A análise morfométrica revelou que reinfecção destes animais ocasionou uma intensa deposição de fibras colágenas no parênquima hepático. Os dados obtidos demonstraram que a reinfecção em animais previamente tratados, foi capaz de induzir uma resposta fibrótica semelhante a encontrada nos animais com infecção primária. / Schistosomiasismansoni is a tropical parasitic disease. Caused by helminths of the genus Schistosoma. In an attempt to contain the disease, various institutes and organizations are developing control measures to treat infected individuals and prevent new infections. Strategies of mass drug administration are effective in curing the disease, whereas treatment with anthelmintic drugs do not prevent the possibility of the occurrence of reinfection. Faced with this question, in this work we decided to analyze the kinetics of hepatic fibrosis in schistosomiasis treated mice and subjected to reinfection. To achieve this goal, 70 Swiss mice were infected with 50 cercariaeS.mansoni subsequently treated with oxamniquine or praziquantel and reinfected four months after treatment. The livers of these animals were subjected to immunohistochemistry and immunofluorescence techniques and transmission electron microscopy to evaluate the expression and participation of constituents involved in the fibrogenic process. To check the rates of collagen between the groups used the morphometric analysis. Histological analysis revealed that mice submitted to specific chemotherapy schistosomiasis developed fibrosis during high rates of reinfection. Immunostaining for alpha smooth muscle actin (α-SMA) revealed that much of the liver parenchyma of animals treated and reinfected cells exhibited myofibloblastic profile. Immunofluorescence showed that the labeling pattern for laminin was abnormal in animals with schistosomiasis. Morphometric analysis revealed that reinfection of animals caused an intense collagen deposition in the liver parenchyma. The data obtained showed that reinfection in animals previously treated, was able to induce a fibrotic response similar to that found in animals with primary infection

Introdução: A doença hepática alcóolica (DHA) e a doença hepática gordurosa não alcóolica (DHGNA) estão entre as principais causas de morte por doenças hepáticas no mundo. Apesar das etiologias distintas, sendo a DHA causada pelo consumo excessivo de álcool e a DHGNA por dieta inadequada e sedentarismo, apresentam curso de doença semelhante, que pode evoluir de esteatose, para esteato-hepatite, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular. Tanto a DHA quanto a DHGNA estão relacionadas à disbiose, aumento de permeabilidade intestinal, inflamação e dano hepático. Entretanto, ainda não está claro se a doença hepática precede as alterações no epitélio intestinal ou se é o aumento da permeabilidade que promove o dano hepático. Objetivo: Avaliar a expressão gênica de Tight Junctions em modelo de DHA e DHGNA em zebrafish (Danio rerio). Métodos: No modelo de DHA, os peixes foram divididos em dois grupos: Etanol (n=30), expostos a 0,5% de etanol por 28 dias e controle (n=30). No modelo de DHGNA, os peixes foram divididos também em dois grupos: Frutose (n=24), expostos à frutose 6% durante 2 horas por 14 dias e controle (n=24). Ao término dos experimentos os animais foram eutanasiados e coletados fígados, para avaliação histológica por coloração hematoxilina-eosina (HE) e de esteatose por Oil Red, e intestinos para avaliação da expressão gênica dos marcadores de permeabilidade intestinal cldnC, cldn15a, cldn15b e f11r por Real Time qPcr. Resultados: Tanto os animais expostos ao álcool quanto à frutose apresentaram esteatose hepática por coloração HE e Oil Red quando comparados aos seus respectivos controles, sem sinais de infiltrados inflamatórios e de fibrose hepática à microscopia óptica. Não houve diferença significativa na expressão gênica das tight junctions intestinais, tanto para a DHA quanto DHGNA (p  0,05). Conclusão: Os resultados sugerem que em estágios iniciais de DHA e DHGNA não ocorre alteração da permeabilidade intestinal, e que possivelmente o dano hepático precede o dano intestinal. / Introduction: Alcoholic liver disease (ALD) and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) are among the leading causes of death from liver disease worldwide. Despite the different etiologies, ALD is caused by excessive alcohol consumption and NAFLD is due to inadequate diet and sedentary lifestyle, they have a similar disease course, which can progress from steatosis to steatohepatitis, fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Both ALD and NAFLD are related to dysbiosis, increased gut permeability, inflammation, and liver damage. However, it is not yet clear whether liver disease precedes changes in the intestinal epithelium or whether it is the increased permeability that promotes liver damage. Objective: To evaluate the gene expression of tight junctions in ALD and NAFLD models in zebrafish (Danio rerio). Methods: In the ALD model, fish were divided into two groups: Ethanol (n=30), exposed to 0.5% ethanol for 28 days and control (n=30). In the NAFLD model, fish were also divided into two groups: Fructose (n=24), exposed to 6% fructose for 2 hours for 14 days and control (n=24). At the end of the experiments the animals were euthanized and livers were collected for histological evaluation by hematoxylin-eosin (HE) staining and steatosis by oil red staining and intestines for evaluation of the gene expression of gut permeability markers cldnC, cldn15a, cldn15b and f11r by Real Time qPcr. Results: Both animals exposed to alcohol and fructose presented hepatic steatosis by HE and Oil Red staining when compared to their respective controls, without signs of inflammatory infiltrates under optical microscopy. There was no significant difference in the gene expression of the tight junctions for both ALD and NAFLD (p0.05) Conclusion: The results suggest that in the early stages of ALD and NAFLD there are no changes in intestinal tight junctions, and that possibly liver damage precedes intestinal damage.

Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-10Bitstream added on 2014-06-13T19:03:13Z : No. of bitstreams: 1 bonesi_gl_dr_botfmvz.pdf: 1156685 bytes, checksum: f42f53f7fd696f95fd38a7597ea8d766 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de lesões hepáticas provocadas por larvas de helmintos em eqüídeos abatidos em matadouro-frigorífico no Paraná, diagnosticado durante o exame post mortem e estudo macro e microscópico das lesões hepáticas. Foram pesquisados nos meses de abril de 2003 a dezembro de 2004, 38.363 animais, procedentes de diversos estados da federação. A freqüência de ocorrência de granulomas no fígado foi revelada em 14.443 (37,64%), com aderências e manchas 6.645 (17,32%) e sem lesões macroscópicas 17.275 (45.03%). Macroscopicamente, foram verificados fígados com nódulos calcificados, presença de manchas esbranquiçadas, aderências e pontas soltas em forma de linhas sobre a cápsula hepática. Não foram encontradas larvas nos fígados. Histologicamente, os fragmentos hepáticos revelaram na microscopia óptica, células inflamatórias com o predomínio de eosinófilos ao redor dos granulomas, com moderada quantidade de macrófagos e presença de fibroblastos. / The aim of this study was investigate the hepatic lesions caused by migratory larvae of the helminths. The diagnostic of the lesions were done at post mortem during the slaughter of the horses in Paraná State. The survey was developed during the april 2003 to april 2004. The horses came from diferent regions or states of Brazil. The frequency of occurrence reveled 14.443 (37,64%) hepatic lesions with parasitic granuloma, 6.645 (17,32%) with spot on the hepatic capsule and 17.275 (45.03%) without lesions. Macroscopic analysis reveled presence of calcifications nodules, adhesions, fibrous tags over widely distributed areas on the hepatic capsule. The most evidence observed on the tissue were widespread nodules many of which were coalesced. No larvae were found in the liver. Fragments hepatic were processed for histologic and reveled extensively infiltrated with eosinophils and fibrosis in tissue sections.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-16Bitstream added on 2014-06-13T19:23:22Z : No. of bitstreams: 1 santos_ag_dr_botfm_prot.pdf: 1292610 bytes, checksum: 023b1ade3c67039310cf3b6cd129631a (MD5) / A colestase crônica por ligadura e ressecção do ducto biliar em ratos jovens é freqüentemente utilizada como modelo experimental de atresia biliar. Na colestase ocorre má absorção de vitamina E com resultante estresse oxidativo. Objetivos: Sendo a vitamina E-TPGS hidromiscível, e portanto absorvível mesmo na colestase, testamos os seus efeitos sobre as conseqüências nutricionais, sobre as alterações do metabolismo lipídico e sobre a lesão hepática da colestase obstrutiva crônica no modelo experimental acima. Métodos: Quarenta ratos machos da raça Wister com 21 dias de vida (P21) foram divididos em 4 grupos de 10 animais e submetidos a um dos seguintes tratamentos: 1) LA-ligadura e ressecção do ducto biliar comum e administração diária de água, por gavagem, num volume de 0,02ml por grama de peso do animal; 2) LELigadura e ressecção do ducto biliar comum e administração diária, por gavagem, de 25UI/kg num volume de 0,02ml de vitamina E-TPGS por grama de peso do animal de uma solução a 20% de vitamina E-TPGS; 3) SA-operação simulada e administração diária de água, por gavagem, num volume de 0,02ml por grama de peso do animal; 4) SE-operação simulada e administração diária, por gavagem, de 25Ul/kg num volume de 0,02ml de vitamina E-TPGS por grama de peso do animal de uma solução a 20% de vitamina E-TPGS. Durante o experimento foi determinado o ganho de peso, a quantidade de ração ingerida, o aproveitamento nutricional (P21 a P49) e balanço nitrogenado (P42 aoP49). No P48, foram submetidos ao teste do tempo de sono após pentobarbital. No P49, foram sacrificados e colhido sangue e órgãos para seguintes determinações: peso fresco, conteúdo de água e gordura da carcaça, fígado e baço, concentrações séricas de colesterol-T, triacilglicerol, LOL-colesterol, VLDL-colesterol, HDL-colesterol, albumina, globulinas totais, vitamina A e E, atividade sérica das aminotransferases (ALT e AST). / Chronic cholestasis by bile duct ligature and resection in young rats is a commonly used experimental model of biliary atresia. Vitamin E absorption is poor in cholestasis causing oxidative stress. Objectives: As Vitamin E-TPGS dissolves in water, and is therefore absorbable even in cholestasis, we tested its effects on nutritional outcome, Iipid metabolism alterations, and hepatic lesion from chronic obstructive cholestasis in the above mode!. Methods: Forty 21-day-old male Wistar rats (P21) were divided into four groups of 10 and submitted to the following treatments: 1) LA - ligature and common bile duct resection with daily administration of water by gavage (0.02ml/g animal weight); 2) LE- ligature and common bile duct resection with daily administration of 251U/Kg Vitamin E-TPGS in water by gavage (0.02mLlg wt of 20% Vitamin E-TPGS solution); 3) SA - sham operation and daily administration of water by gavage (0.02ml/g wt); and 4) SE - sham operation and daily administration of 251U/Kg Vitamin E-TPGS in water by gavage (0.02ml/g wt of 20% Vitamin E-TPGS solution). During the experiment we measured weight gain, ingested food, diet utilization (P21 to P49), and nitrogen balance (P42 to P49). On P48, pentobarbital sleeping time was measured. On P49, eutanasia was carried out and blood and organs were collected to determine: body,liver, and spleen fresh weight, and water and fat content, serum levels of total cholesterol, triacylg Iycerols, LDL-cholesterol, VLDL -cholesterol, HOL-cholesterol, albumin, total globulins, Vitamin A & E, and ALT & AST activity. Also liver histological sections were analyzed for fibrosis intensity, duct proliferation, necrosis, steatosis, hydropic degeneration, inflammation, and mitosis frequency. The effects of cholestasis, Vitamin E-TPGS, and their interactions were tested by ANOVA with two factors, and multiple paired comparisons... (Complete abstract click electronic access below)