O fígado é um órgão importante para se analisar como o animal reage a agressões químicas. Um dos métodos utlizado para estudar a regeneração hepática é a hepatectomia parcial (HP). Assim, nosso objetivo foi verificar a influência da hepatectomia de 30% e de 70% sobre a taxa de proliferação das células hepática medida pela incorporação de BrdU na região da incisão e no resto do fígado e a proliferação de ductos biliares e de células epiteliais pré-ductulares biliares (CEPDBs) com o uso de uma combinação de 2 anticorpos específicos para citoqueratinas humanas, AE1/AE3. O pico de proliferação nos animais que sofreram HP de 30% do parênquima hepático deu-se após 1 dia da cirurgia enquanto que os animais que sofreram a HP de 70% o pico ocorreu no terceiro dia após a cirurgia.O índice de proliferação foi semelhante para a região próxima ou distante do corte. Para ambas as HP não houve diferença na regeneração do tecido retirado próximo ou distante da área de incisão. Nas regiões distantes da HP havia maior número de ductos havendo o pico do número de ductos coincidindo com o pico de proliferação celular de ambas as HP. Depois da HP o número de CEPDBs cresce consideravelmente. Os pico de proliferação também ocorreram no primeiro e terceiro dia para a HP de 30% e de 70% respectivamente, sendo mais altos na região distante do corte. Assim, durante a regeneração do fígado de C. gariepinus ocorre hiperplasia compensatória por proliferação de hepatócitos, de ductos biliares e de CEPDBs. A hepatectomia de 30% gerou uma resposta regenerativa intensa e é menos traumática para o animal, a região distante do corte reage mais intensamente que a região próxima do corte no que se refere aos ductos biliares e as CEPDBs. / The liver is an important organ in studies aimed to the verification of animals reactions to chemical injuries. The partial hepatectomy (PH) is one of the methods that are usually employed in hepatic regeneration experiments. Our objectives in this work were to verify the influence of 30% and 70% PH on the hepatic cells proliferation index as it is measured by BrdU nuclear uptake in two regions: close to the hepatic surgery region and in a farther region. The biliary ducts and bile preductular epithelial cells (BPDECs) proliferation was quantified with a combination of two antibodies against the human cytokeratins AE1/AE3. The proliferation index peak in 30% hepatectomy animals occurred one day after the surgery, but in 70% hepatectomy animals the peak was only observed after three days from the surgery. Differences between the proliferation index of the close and the far region were not observed and likewise histological differences were absent. In the regions far from the PH site more biliary ducts were counted than in closer regions, but the peaks were coincident in both regions with the hepatocytes proliferation index. It was also observed that the quantity of BPDECs increased. The peaks occurred in the first and third days for the 30% and 70% PH respectively, and both peaks were higher in the region far from the PH site. We may conclude that C. gariepinus liver regeneration after 30% and 70% PH occurs by means of compensatory hyperplasia by hepatocytes, biliary ducts and BPDECs proliferation. The 30% HP stimulated a strong regenerative response and is less traumatic to the animals. The regions far from the PH site reacts more intensely that the close region concerning the stimulation of biliary ducts and BPDECs proliferation.

Embora seja bem estabelecido que a exposição a baixas temperaturas resulte em ativação simpática e hiperglicemia, os mecanismos moleculares envolvidos na regulação neural da produção hepática de glicose ainda não são bem conhecidos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar o papel da inervação simpática na regulação de genes e enzimas chaves da neoglicogênese hepática, em roedores expostos agudamente ao frio. Para isso, foram utilizados dois modelos experimentais de desnervação simpática: a simpatectomia química em camundongos induzida pelo tratamento com 6-hidroxidopamina (100 mg.kg-1.dia-1; 1º, 2º e 7º dia de vida pós-natal; i.p). e a desnervação local dos nervos hepáticos por fenol (95%) em ratos. A exposição de camundongos ao frio (4ºC), durante 1, 3 e/ou 6h, induziu hiperglicemia, hipotermia, depleção do conteúdo de glicogênio hepático e ativação da neoglicogênese, estimada pela elevada expressão gênica e atividade das enzimas glicose-6-fosfatase e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK). Em paralelo, verificou-se que a exposição ao frio induziu um drástico aumento na expressão do RNAm do Nr4a1 e do PGC1-?, dois genes-alvos de CREB que participam do complexo de ativação transcricional dos genes que codificam as enzimas neoglicogênicas estudadas. A simpatectomia não afetou a depleção dos estoques de glicogênio hepático induzida pelo frio, mas reduziu o aumento do conteúdo hepático de noradrenalina e AMPc e acentuou a hipotermia, bem como preveniu a hiperglicemia, sendo este efeito associado ao bloqueio da expressão gênica e atividade da glicose-6-fosfatase e da PEPCK e do RNAm do Nr4a1, em todos os tempos estudados. Resultados bastante semelhantes foram observados em ratos submetidos à lesão dos nervos hepáticos com fenol e expostos ao frio durante 24h. Tanto a adrenalectomia como a adrenodemedulação (remoção da medula da adrenal) não alteraram o efeito estimulatório do frio na atividade e expressão gênica das enzimas neoglicogênicas de camundongos. Porém, em ratos expostos ao frio, a adrenodemedulação bloqueou aIII hiperglicemia e reduziu parcialmente a hiperexpressão dos genes da glicose-6-fosfatase e PEPCK. Estes resultados mostram a importância fisiológica da inervação simpática do fígado de roedores na estimulação do programa gênico da neoglicogênese, durante o estresse térmico agudo. / Although it is well established that exposure to low temperatures leads to sympathetic activation and hyperglycemia, the molecular mechanisms related to the neural regulation of hepatic glucose production remain elusive. Therefore, the goal of the present study was to investigate the role of sympathetic innervation in the regulation of genes and key enzymes of hepatic gluconeogenesis in liver of rodents exposed to acute cold. For this, two experimental models of sympathetic denervation were used: the chemical sympathectomy in mice induced by 6-hydroxydopamine treatment (100 mg.kg-1.day-1; 1º, 2º and 7ºdays of neonatal life; i.p.) and local denervation of hepatic nerves by phenol (95%) in rats. Exposure of mice to cold (4° C) for 1, 3 and / or 6 h induced hyperglycemia, hypothermia, depletion of hepatic glycogen content and activation of gluconeogenesis, estimated by high gene expression and activity of the enzymes glucose-6-phosphatase and phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK). In parallel, it was found that exposure to cold induced a dramatic increase in Nr4a1 and PGC1-? mRNA expression, two CREB target genes that participate in the transcriptional activation complex of the genes encoding the gluconeogenesis enzymes studied. The sympathectomy did not affect the depletion of cold-induced hepatic glycogen stores but reduced the hepatic content of noradrenaline and cAMP and increased hypothermia, as well as prevented hyperglycemia, and this effect was associated with the blockade of gene expression and enzymatic activity of glucose-6-phosphatase and PEPCK and Nr4a1 mRNA levels, at all time intervals investigated. Similar results were observed in rats submitted to hepatic nerve damage with phenol and exposed to cold for 24h. Either adrenalectomy or adrenodemedullation (surgical removal of the adrenal medulla) did not alter the stimulatory effect of cold on the activity and gene expression of the gluconeogenesis enzymes of mice. However, in cold-exposed rats, adrenodemedullation blocked hyperglycemia and partially reduced overexpression of the glucose-6-phosphatase and PEPCK mRNA.V These results show the physiological role of the hepatic sympathetic innervation in the transcriptional program associated with gluconeogenesis, during acute thermal stress.

Fatores hepatotróficos (FH) possuem a capacidade de promover aumento de massa hepática em ratos e diminuição da fibrose em animais cirróticos. Os FH podem ser importantes nos casos de ressecção e transplantes hepáticos no qual o fígado remanescente necessita de um volume considerável para exercer suas funções após a cirurgia. Objetivou-se neste trabalho avaliar a cinética de uma solução de FH em fígados de animais sadios. Utilizou-se 105 ratos Wistar fêmeas divididos em 7 grupos de 15 animais cada. 6 grupos receberam solução de FH na dose 40 ml/kg/dia, i.p. e 1 grupo controle (CT) recebeu apenas solução salina 0,9%. Os animais foram eutanasiados com 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias (grupos 2, 4, 6, 8, 10 e 12) após o início do tratamento. Avaliou-se os parâmetros biométricos, a proliferação dos hepatócitos pela análise imuno-histoquímica (PCNA), morfometria do colágeno, função hepática e a expressão gênica de colágeno αI, TGFβ1, MMP 2 e PLAU. O aumento de massa hepática foi maior nos grupos 8, 10 e 12. A marcação de hepatócitos PCNA+ obteve seu pico no grupo 2. A morfometria do colágeno (mensurado pelo picrossírius) revelou redução nos grupos 6, 10 e 12 (o Grupo 8 não foi avaliado). A imunofluorescência para colágeno tipo III evidenciou redução do colágeno no grupo 12. Os resultados das enzimas de função hepática permaneceram normais. A expressão gênica do colágeno I obteve alta expressão diminuindo com o decorrer do tratamento; a ação do gene TGFβ1 indicou inibição da proliferação celular no grupo 12. MMP 2 e PLAU não demonstraram participar de forma efetiva no mecanismo de ação dos FHs. Os resultados demonstraram que a solução de FH promove a hipertrofia hepatocitária, sem alteração da função hepática e diminuindo o colágeno volumétrico do fígado. Os FH representam uma opção relevante ao tratamento de hepatopatias ou quando é necessário aumento de massa hepática antes de hepatectomias e/ou ressecções. / Hepatotrophic factors (HF) have the ability to the liver mass in rats and decrease fibrosis in cirrhotic rats. HFs can be important in cases of resection and liver transplantation in which the remnant liver needs to restore a considerable mass volume before surgery. Thus, this study evaluates the kinetics of HF solution in the livers of healthy animals. Were used 105 female Wistar rats divided into 7 groups of 15 animals each. 6 groups received HF solution at a dose 40 ml/kg/day, i.p. and 1 control group (CT) only received 0.9% saline solution. The animals were euthanized at 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days (groups 2, 4, 6, 8, 10 and 12) after starting treatment. The biometric parameters, proliferation of hepatocytes by immunohistochemical analysis (PCNA), collagen morphometry, liver biochemical function and gene expression of collagen αI, TGFβ1, MMP 2 and PLAU. The increase in liver mass was greater in groups 8, 10 and 12. The index of hepatocytes PCNA+ peak obtained in group 2. Morphometry of collagen (measured by picrosirius red) revealed reduction in groups 6, 10 and 12 (Group 8 was not evaluated). Immunofluorescence for collagen type III showed reduction of collagen in group 12. The results of the enzymes of liver function remained normal. Gene expression of collagen I expression was higher decreasing over the course of treatment; the action of TGFβ1 gene showed inhibition of cell proliferation in group 12. MMP 2 and PLAU not shown to effectively participate in the mechanism of action of HFs. The results showed that the solution of HF promotes hepatocyte hypertrophy with no change in liver function and decreasing the volume of liver collagen. Therefore, HFs represents an important option for treatment of chronic liver diseases or when it is necessary to increase liver mass before hepatectomy and/or resections.

Orientadores: Gabriel Hessel, Antônio Azevedo Barros Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gobato_AmandaOliva_M.pdf: 1670320 bytes, checksum: 56fdc5f99e019be77ae96f2a44e8ebef (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: A prevalência da obesidade tem aumentado rapidamente nas ultimas décadas. A preocupação com a obesidade na infância e adolescência relaciona-se ao desenvolvimento das comorbidades e das complicações geradas pelo excesso de peso. A prevenção e vista como a melhor estratégia para reter o continua aumento da prevalência da obesidade. Objetivos: 1. Verificar a prevalência da síndrome metabólica (SM) e da resistência a insulina (RI) em adolescentes obesos e correlacioná-los aos diferentes indicadores bioquímicos, antropométricos e de composição corporal. 2. Descrever a prevalência da esteatose hepática (EH) diagnosticada por ultrassonografia abdominal (US) e avaliar o desempenho de indicadores bioquímicos, antropométricos e de composição corporal para identificar a esteatose hepática em adolescentes obesos. Métodos: Estudo transversal com 79 adolescentes obesos de 10 a 18 anos. A EH foi diagnosticada por US quando o contraste hepatorenal apresentava-se moderado ou intenso e/ou diferença no histograma >8 em relação ao córtex do rim direito. A SM foi diagnosticada segundo os critérios de Cook et al (2003) e a RI pelo índice de HOMA-IR para valores >3,16. Os indicadores antropométricos e de composição corporal avaliados foram: índice de massa corporal (IMC), % gordura corporal circunferência abdominal (CA) e gordura subcutânea. Foram dosadas as enzimas hepaticas: aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), gama-glutamiltransferase (GGT) e fosfatase alcalina (FALC), glicemia e insulina de jejum e perfil lipidico. A analise de Curvas ROC foi utilizada para avaliar o desempenho dos indicadores antropométricos, bioquímicos e a % gordura corporal em identificar adolescentes com EH, o IMC e a CA em identificar a RI e a SM. Resultados: A SM foi diagnosticada em 45,5% dos pacientes e a RI em 29,1%. A RI apresentou associação com o HDL-colesterol e com a SM e se correlacionou com todos os indicadores antropométricos e de composição corporal avaliados. Na avaliação dos pontos de corte, os valores de 23,5 e 36,3% acima do valor de referencia do IMC mostraram-se capazes em identificar a RI e a SM. O melhor ponto de corte da CA para identificar a RI foi de 40%. A EH esteve presente em 16 pacientes (20,3%). A GGT e o HOMA-IR mostraram ser bons indicadores na predição da EH, com ponto de corte de 1,06 vezes acima do valor de referencia para a GGT e 3,28 para o HOMA-IR. Os indicadores antropométricos, % gordura corporal, perfil lipidico, glicemia e AST não apresentaram resultados significantes. Conclusão: A prevalência de EH em adolescentes obesos foi de 20,3%. Todos os indicadores antropométricos e de composição corporal avaliados apresentaram correlação com a RI e apenas o IMC se correlacionou com a SM. O IMC mostrou-se o indicador antropométrico mais efetivo na identificação da RI. Pacientes com elevação de GGT e/ou com HOMA-IR devem ser submetidos ao exame de US com grande probabilidade de se obter como resultado a EH / Abstract: Background: Obesity prevalence has increased rapidly in recent decades. The concern with obesity in childhood and adolescence is related to the development of comorbidities and complications generated by excess weight. Prevention is seen as the best strategy for retaining the continuous increase in obesity prevalence. Objectives: 1. to verify metabolic syndrome (MS) and insulin resistance (IR) prevalence in obese adolescents and correlate them with different biochemical, anthropometric and body composition indicators. 2. To describe hepatic steatosis (HS) prevalence diagnosed by abdominal ultrasound (AU) and evaluates the performance of biochemical, anthropometric and body composition indicators to identify hepatic steatosis in obese adolescents. Methods: A transversal study comprising 79 obese adolescents aged 10-18 years. HS was diagnosed by AU when hepatorenal contrast presented moderated or intense and/or there was a difference greater than 8 in relation to the right kidney cortex in histogram. MS was diagnosed according to the criteria by Cook et al (2003) and IR, by using the homeostatic model assessment (HOMA) index for values greater than 3.16. The following anthropometric and body composition indicators were evaluated: body mass index (BMI), body fat percentage, abdominal circumference (AC) and subcutaneous fat (SF). Hepatic enzymes - aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma-glutamyltransferase (GGT) and alkaline phosphatase (FALC) -, glycemia, fasting insulin and lipid profile were measured. ROC Curve analysis was used for accessing the performance of biochemical, anthropometric and body composition indicators, which identified adolescents with HS; BMI and AC identified IR and MS. Results: MS was diagnosed in 45.5% of patients, and IR, in 29.1%. IR showed association with HDL-cholesterol and MS, correlating with all evaluated anthropometric and body composition indicators. In the evaluation of cutoff points, values of 23.5 and 36.3% above the BMI reference value showed capable of identifying IR and MS. The best cutoff point of AC to identify IR was of 40%. Sixteen patients (20.3%) were diagnosed with HS. GGT and HOMA-IR showed to be good indicators in predicting HS, with cutoff point of 1.06 times above the reference values for GGT and 3.28 for HOMA-IR. Anthropometric, body fat percentage, lipid profile, glycemia xi and AST did not present significant results. Conclusion: The HS prevalence in obese adolescents was of 20.3%. All evaluated anthropometric and body composition indicators presented correlation with IR, and only BMI showed correlation with MS. BMI showed to be the most effective anthropometric indicator in identifying IR. Patients with elevation of GGT and/or HOMA-IR should be submitted to US examination with great probability of obtaining HS as a result / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestra em Ciências

Estudou-se o sistema porta hepático do bagre africano Clarias gariepinus Burchell, 1822, sob o ponto de vista da anatomia macroscópica e microscópica, utilizando-se várias técnicas anatômicas, que envolveram anestesia, injeção de substâncias recomendadas ao estudo do sistema vascular (látex, nanquim, cloreto de polivinil e substância radiopaca), dissecação, corrosão ou radiografia, conforme a exigência de cada técnica, como meio de compreensão da anatomia vascular do fígado deste peixe. Foram utilizados 16 exemplares do sexo feminino, com comprimento total entre 45 e 53,5 centímetros e massa corpórea entre 575 e 1068 gramas. Para a execução dessas técnicas, os peixes foram devidamente anestesiados com benzocaína, garantindo a narcose profunda e evitando qualquer tipo de sofrimento a eles. Os resultados obtidos com essas técnicas mostram que o fígado de Clarias gariepinus ocupa a cavidade abdominal cranial e apresenta uma lobação bem definida, sendo constituído por dois grandes lobos, denominados direito e esquerdo, conectados cranialmente por uma ponte dorsal à transição entre o esôfago e o estômago. O lobo esquerdo apresenta-se ligeiramente maior que o contralateral. Em suas extremidades caudais, os lobos esquerdo e direito formam um ápice pontiagudo, de formato triangular, que continua tenuemente através de um istmo eminentemente vascular que liga esses ápices a dois outros lobos, chamados acessórios direito e esquerdo, bem menores que os demais, e que ficam seqüestrados em um recesso peritoneal, lateral à cavidade abdominal. Os resultados indicam ainda que o sistema porta hepático de Clarias gariepinus está representado por duas veias portas principais denominadas direita e esquerda, levemente assimétricas em diâmetro, que drenam o sangue das vísceras abdominais (baço, estômago, vesícula biliar, intestino e gônadas) através dos tributários viscerais desse sistema. Ainda, devido a uma situação peculiar dos lobos acessórios, definem-se mais duas veias portas secundárias ligadas às principais e designadas igualmente por acessórias, uma esquerda e outra direita. Ambas as vv. portas principais se ramificam, atingindo o hilo da face visceral, enquanto que as vv. acessórias penetram por uma região restrita do lobo. Através de ramos interlobares, ambas as vv. portas principais se anastomosam no parênquima hepático. A v. porta esquerda, com discreto aumento de diâmetro, forma-se pela terminação da v. intestinal, concomitante à desembocadura da v. gastrointestinal e da v. porta acessória esquerda. A v. porta direita se define pela terminação da v. intestinal cranial, simultaneamente à chegada da v. porta acessória ipsilateral, drenando sangue do intestino médio, estômago e vesícula biliar. Nessa espécie, também estão caracterizados dois sítios de comunicação entre o sistema porta hepático e o sistema porta renal através de anastomoses em cada v. porta. Sob as condições em que o trabalho foi desenvolvido e considerando-se a metodologia proposta e a análise dos resultados, conclui-se que todos os métodos foram adequados ao estudo do aparelho circulatório de Clarias gariepinus, sendo recomendados para experimentos futuros sobre o mesmo assunto em outras espécies piscícolas; porém, dentre as três metodologias utilizadas para análises macroscópicas, a injeção de cloreto de polivinil seguida de corrosão das peças e subseqüente obtenção de moldes vasculares mostrou-se mais eficiente na marcação e identificação dos vasos que compõem o sistema porta hepático deste peixe. Conclui-se também que, devido à presença dos lobos acessórios, a lobação hepática é peculiar nesta espécie, em virtude da posição ocupada por estes lobos, assim como a circulação porta, em função das duas veias porta acessórias, e ainda a anastomose entre as duas veias porta principais, característica que deve ser considerada em trabalhos que envolvam cirurgia hepática no bagre africano / The hepatic portal system of the African catfish Clarias gariepinus Burchell, 1822, was studied considering the macroscopic and microscopic anatomy, by means of several anatomic techniques, including anesthesia, injection of substances recommended to the study of the vascular system (latex, Indian ink, polyvinyl chloride and radiopaque substance), dissection, corrosion or radiography, according to the requirement of each technique, as a way of understanding the hepatic circulatory pathway in the African catfish. Sixteen female specimen were used, being the entire length between 45 and 53.5 centimeters and the corporal mass between 575 and 1068 grams. To perform these techniques, the fishes were adequately anesthetized with benzocaine, assuring the deep narcosis and preventing them from any suffering. The results obtained through such techniques show that the liver of Clarias gariepinus occupies the cranial abdominal cavity and shows a clear lobation, the liver consisting of two large lobes, called right and left, cranially connected by a bridge dorsal to the transition between the esophagus and the stomach. The left lobe is slightly larger than the contralateral lobe. At their caudal ends, the left and the right lobes form a sharp triangle-like apex that tenuously passes through a strip eminently vascular that links these apexes with two other lobes, called right and left accessories, much smaller than the others, these lobes being wrapped in a peritoneal recess, situated at the side of the abdominal cavity. The results still show that the hepatic portal system of Clarias gariepinus is represented by two main portal veins named right and left, slightly asymmetric in diameter, that empty the blood out of the abdominal viscera (spleen, stomach, gall bladder, intestine and gonads) through the visceral tributaries of this system. Furthermore, due to a peculiar situation of the accessory lobes, two other secondary portal veins were defined; they are connected to the main veins and are equally called right and left accessories. Both the main portal veins branch, reaching the hilum of the visceral face, whereas the accessory veins go into a restricted region of the lobe. Through interlobar branches, both the main portal veins anastomose in the hepatic parenchyma. The left portal vein, with a slight increase in diameter, is formed by the terminatio of the intestinal vein, accompanying the discharge of the gastrointestinal vein and the accessory left portal vein. The right portal vein is defined by the terminatio of the cranial intestinal vein, simultaneously with the accessory ipsilateral portal vein, emptying the blood out of the medial intestine, stomach and gall bladder. In this species it is also possible to distinguish two connecting sites between the hepatic portal system and the renal portal system by means of anastomoses in each portal vein. Under the conditions in which the experiment was carried out and considering the methodology suggested and the analysis of the results, it is concluded that all the methods were suitable for the study of the circulatory system of Clarias gariepinus, being recommended for future tests on the same subject in other fish species; however, among the three methodologies used in the macroscopic analyses, the injection of polyvinyl chloride followed by the corrosion of pieces and subsequent getting of vascular moulds was believed to be more efficient at the marking and identification of the vessels that compose the hepatic portal system of this fish. It was also concluded that, due to the presence of the accessory lobes, the hepatic lobation is peculiar in this species because of the position occupied by these lobes, as well as the portal circulation, caused by the two accessory portal veins, in addition to the anastomose between the two main portal veins, a characteristic that must be thought of in studies of hepatic surgery in the African catfish

As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

O fato da acupuntura ser atualmente considerada eficaz no tratamento de muitos processos patológicos e do fígado ser um órgão alvo de muitas enfermidades tanto em animais como em seres humanos, motivou a realização deste estudo que tem por objetivo verificar o efeito da eletroacupuntura durante a progressão de lesões hepáticas e o seu relacionamento com o funcionamento do órgão através da análise concomitante de marcadores sanguíneos de lesões hepáticas (MSLH). O trabalho foi realizado em ratos albinos (Wistar), machos, com um peso aproximado de 250g, identificados e distribuídos em 7 lotes (CP, CT, CI, E36, E36s, BP6, BP6s), N= 10. Os animais dos lotes: CP, CT e CI foram usados como controle; CP na determinação dos MSLH: alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), - glutamil transferase (GGT), fosfatase alcalina (ALPK), albumina (ALB), proteína total (TP) e bilirrubina total; CT cujos animais receberam apenas o agente hepatotóxico tioacetamida (25 mg/100g) por via intraperitoneal três vezes por semana, durante 7 semanas e o lote CI, no qual os animais, além dos mesmos procedimentos de CT, também foram submetidos ao anestésico usado no experimento (isoflurano) pelo tempo de 20 minutos, objetivando analisar se esse anestésico teve alguma influência nos resultados do trabalho. Quanto aos demais grupos, E36 recebeu os mesmos procedimentos de CI e seus componentes foram tratados com eletroacupuntura no ponto Zusanli (E-36). E36s recebeu procedimentos similares aos de E36, porém a eletroestimulação foi aplicada em um não-ponto de acupuntura (E36 Sham) localizado próximo ao E36 verdadeiro. Os animais de BP6 tiveram os mesmos procedimentos de E36 diferindo somente na eletroacupuntura, que foi aplicada no ponto Sanyinjiao (BP-6). No lote BP6s os procedimentos foram os mesmos realizados em BP6, porém a eletroestimulação foi realizada em um nãoponto de acupuntura (BP6 Sham) localizado próximo ao ponto BP6 verdadeiro. Numa etapa seguinte, os animais dos nove grupos, tiveram seus fígados coletados para estudo histológico, tendo sido comparado os parâmetros bioquímicos obtidos, com objetivo de analisar se as alterações morfológicas e funcionais dos fígados tiveram influência da eletroacupuntura. Resultados: Os MSLH apresentaram como resultados: marcador ALB nos lotes: CP (2,97±0,3529) com CI(2,46±0,3134) e marcador TP nos lotes CP (6,53±0,2452) com CI(5,73±0,4057) provando haver interferência do isoflurano; marcador ALB nos lotes CI com BP6 (2,84±0,2675) e BP6 com E36s (2,4±0,2828), marcador ALT nos lotes CI com BP6 e BP6 com E36s e marcador AST nos lotes BP6 com E36s, todos provando e eficácia do ponto de acupuntura BP6. Os resultados histológicos confirmaram a atuação da tioacetamida (TAA) nos animais (exceto os do lote CP), através das seguintes lesões: inflamação focal, apoptose, necrose em saca-bocado (Piecemeal-necrosis), necrose e inflamação portal, para as análises em Hematoxilina-Eosina e expansão fibrosa e pontes de colágeno para as colorações em Picrossirius. Essas lesões foram achadas nos lotes: CT, CI, E36s, BP6s, E36 e BP6, porém, nos dois últimos ocorreram em menor grau indicando a atuação de eletroacupuntura sobre a morfologia hepática. / The fact o acupuncture have being considered an efficient method to treat lots of diseases and, being the liver, in men and animals, a common susceptible organ, this research was inspired to verify the electroacupuncture effect in hepatic lesion progression and its relationship with the liver performance at the same time that sanguinenous hepatic lesions markers (MSLH) was analysed. Each one identified, male wistar rats arround 250g was ditribucted in 7 (seven) groups, N=10: CP, CT, CI, ST36, ST36s, SP6 and SP6s. The first three was control-groups: CP to be these MSLH reference: alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyl transpeptidase (GGT), alkaline phosphatase (ALKP), albumin.(ALB), total protein (TP) and total bilirubin (TB); CT had the animals receiving only the hepatotoxic agent thioacetamide (25mg/100g) interperitoneal pathway, 3 (three) a week, for 7 (seven) weeks and CI had the same last proceedment increased for 20 minutes in isoflurane anesthetic to verify if interferences occures or not. About the others groups, we had ST36 receiving the same CI proceedments and treated by Zusanli (St-36) electroacupuncture point; ST36s again, but in a false-point (Sham ST36) next the real one. Groups SP6 and SP6s had the analogous treatment to points Sanyinjiao (SP-6) and its no-point. The next step was collect the nine groups livers and study them histologically. They was compared with CP references to mesuere some probable electroacupuncture influence in morphological and functional hepatic processes. MSLH results was: ALB in groups CP (2,97±0,3529) with CI (2,46±0,3134) and sanguinenous marker TP in groups CP (6,53±0,2452) with CI (5,73±0,4057), proving isoflurane interference; ALB in gropus CI with SP6 (2,84±0,2675) and in gropus SP6 with ST36s (2,4±0,2828), sanguinenous marker ALT in groups CI with SP6 and in groups SP6 with ST36 and sanguinenous marker AST in groups SP6 with ST36s, all of them proving the SP6 electroacupuncture point efficacy. The histological results conffirmed thioacetamide (TAA) actuation in animals (except group CP), through these lesions: focalized inflammation, apoptosis, piecemeal-necrosis, necrosis and portal-inflammation to hematoxylin and eosin analysis and fibrosis expansion and collagen bridges to Picrosirius colorations. These lesions was discovered in groups CT, CI, ST36s, SP6s, ST36 and SP6s. However, in the last two group was discovered less then the others, indicating electroacupuncture efficience in hepatic morphology.

La prévalence de l’obésité et du diabète de type 2 est en constante augmentation dans les pays industrialisés. Ces pathologies sont associées à des troubles de l’équilibre énergétique de l’organisme, ce qui se traduit au niveau hépatique par le développement de NAFLD (Non‐alcoholic Fatty Liver Disease). La NAFLD est engendrée par l’accumulation excessive de lipides dans les hépatocytes ou stéatose et est associée à la résistance à l’insuline. L’insulinorésistance hépatique est dite sélective car l’insuline n’est plus capable d’inhiber la production hépatique de glucose, contribuant à l’hyperglycémie, alors que la synthèse lipidique est exacerbée, induisant une stéatose hépatique. La stéatose peut évoluer en pathologies plus graves, telles que la fibrose, la cirrhose ou le cancer hépatocellulaire (CHC). L’objectif de ma thèse a été d’étudier les mécanismes moléculaires pouvant contribuer à la sélectivité de la résistance à l’insuline hépatique et à l’évolution de la stéatose simple vers le CHC. Dans un premier temps, nous avons étudié le rôle de l’adaptateur moléculaire Grb14, un inhibiteur de l’activité kinase du récepteur de l’insuline, dans la régulation du métabolisme hépatique chez la souris. L’invalidation de Grb14 dans le foie conduit d’une part à une activation de la signalisation de l’insuline et une amélioration de tolérance au glucose, et d’autre part à une diminution de la lipogenèse consécutive à l’inhibition du facteur lipogénique LXR via la voie Nrf2. L’invalidation de Grb14 dans le foie de souris obèses et diabétiques permet de ramener la glycémie et la stéatose hépatique à des valeurs similaires aux témoins. Ces données suggèrent que Grb14 est un nouvel acteur impliqué dans la sélectivité de la résistance à l’insuline du foie. La seconde étude a permis de montrer l’implication de la stéatose hépatique induite par un régime hypercalorique sur le développement de CHC. En effet, sur un fond génétique favorisant la carcinogenèse, un régime riche en graisse et en sucre contribuant à l’insulinorésistance hépatique accélère la cinétique d’apparition des tumeurs et augmente leur nombre. / The prevalence of metabolic diseases, including obesity and type 2 diabetes, are expanding in a worldwide epidemic way. These diseases are associated with metabolic disorders, resulting in the development of NAFLD (Non‐alcoholic Fatty Liver Disease) in the liver. NAFLD is generated by excessive accumulation of lipids in hepatocytes, and is associated with insulin resistance. In liver, insulin resistance leads to a blunted inhibitory action on hepatic glucose production, inducing hyperglycemia, whereas de novo lipogenesis, which is positively regulated by insulin, is paradoxically exacerbated, contributing to hepatic steatosis. Steatosis may also evolve into more serious diseases such as fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). The aim of my thesis was to study the molecular mechanisms that may contribute to the selectivity of hepatic insulin resistance and the development of HCC. Initially, we studied the role of the molecular adapter Grb14, an inhibitor of the insulin receptor kinase activity, in the regulation of hepatic metabolism in mice. Invalidation of Grb14 in the liver leads on the one hand to an activation of the insulin signaling and improved glucose tolerance, and on the other hand to a decrease of LXR activity resulting in lipogenesis inhibition. Invalidation of Grb14 in the liver of obese and diabetic mice restores blood glucose levels and hepatic steatosis similar to control values. These data suggest that Grb14 is a new player involved in the selectivity of the insulin resistance in the liver. The second study demonstrated the involvement of hepatic steatosis induced by a high‐calorie diet on the development of HCC. Indeed, on a genetic background favoring carcinogenesis, a diet rich in fat and sugar contributing to hepatic insulin resistance accelerates appearance of tumors and increases their number.

Contemporary hepatobiliary surgery practice must accurately assess operative risk in increasingly elderly populations with greater co-morbidity. Current methods fail to identify patients at high risk of postoperative complications. Cardiopulmonary exercise testing (CPET) derived anaerobic threshold (AT) and ventilatory equivalence of carbon dioxide (VE/VCO2) are validated predictors of postoperative outcome in major intra-abdominal surgery and outperform contemporary tools of risk evaluation. Despite evidence of improved in-hospital postoperative survival in large centres offering complex curative hepatobiliary surgery, morbidity remains high and long-term survival in the high-risk subset remains poor. This thesis investigated the role of validated CPET-derived markers in predicting perioperative outcomes for a high-risk hepatobiliary surgery population. It was also utilised to study the impact of malignant obstructive jaundice on peripheral oxygen extraction. In a prospective cohort of high-risk patients undergoing liver resection, an AT of 9.9 ml O2/kg/min predicted in-hospital mortality and long-term survival. Below this threshold, AT was 100% sensitive and 75.9% specific for in-hospital mortality (PPV 19%, NPV 100%). Long-term survival below the threshold of 9.9 was significantly worse when compared to those above (mortality HR 1.81). The VE/VCO2 was the most significant predictor of postoperative complications and a threshold of 34.5 provided 84% specificity and 47% sensitivity (PPV 76%, NPV 60%). Amongst the high-risk pancreaticoduodenectomy patients, VE/VCO2 was the single most predictive marker of in-hospital postoperative mortality with an AUC of 0.850 (p=0.020); a threshold value 41 was 75% sensitive and 94.6% specific (PPV 50%, NPV 98.1%). The VE/VCO2 41 was also the only predictor of poor long-term survival (HR 1.90). Notably, AT, Revised Cardiac Risk Index and Glasgow Prognostic Score did not predict outcome after pancreaticoduodenectomy. Patients with malignant obstructive jaundice, evaluated for peripheral oxygen extraction using CPET, showed lower mean peak oxygen consumption (peak VO2) at 63±17.4% of the predicted value. This was noted in absence of any significant pre-existing cardiopulmonary disease and normal respiratory reserve. Normal patterns of oxygen extraction were seen at rest, during incremental work rate and peak exercise levels. Levels of oxygen partial pressure and saturation exceeded baseline values after exercise signifying normal microcirculatory responses. Thus, aerobic capacity was limited by dysfunction in delivery (cardiac output) rather than oxygen extraction. CPET provides useful prognostic adjuncts for early and long-term outcomes in the high-risk patients undergoing major hepatobiliary surgery. These findings provide useful tools for perioperative optimisation of the high-risk patient and plan appropriate level of postoperative care to address mortality and morbidity after surgery.

This thesis investigates the ability of rainbow trout to modulate hepatic glucose production (Ra) and disposal (Rd). My goals were to determine: (1) if resting trout can modulate fluxes to cope with exogenous glucose; (2) how fluxes change during graded swimming; (3) how exogenous glucose affects swimming kinetics; and (4) if exogenous glucose affects cost of transport or performance. Results show that resting trout suppress Ra completely and stimulate Rd from 10.6 to 27.6 μmol kg-1 min-1. During swimming, fluxes increase from 15.6 to 21.9 μmol kg-1 min-1, but only at speeds >2.4 BL s-1. When given glucose, trout suppress Ra from 16.4 to 4.1 μmol kg-1 min-1 and stimulate Rd from 16.4 to 40.1 μmol kg-1 min-1. Glucose lowers metabolic rate but does not affect critical swimming speed. Therefore, this research shows that rainbow trout have a much better capacity for glucoregulation than generally suggested by current literature.