Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karina.pdf: 2597948 bytes, checksum: d65c6af5a956ec0d8f0afae614fe6d8a (MD5) Previous issue date: 2014-03-17 / The platelet rich plasma is a source of several growth factors and appears as a new biotechnology in tissue repair, with great therapeutic power. Patients with general health problems and the lack of volume of blood required for autologous production of concentrate, may be restricted to receive this innovative treatment. To overcome the limitation, this study evaluated the effects of heterologous platelet-rich plasma gel obtained from a healthy dog, in the healing of dermal wounds in rabbits by standard morphological, morphometric and histological analyzes. Two surgical incisions were made on the back of six rabbits using a punch of 8 mm diameter. Randomly one side was denominated as a Control (A), leaving the contralateral Treaty as (B). 0.9% saline solution and heterologous platelet-rich plasma gel were applied topically to the lesions (A) and (B) respectively, on days 0, 3, 7, 10 and 14 after surgery. Macroscopic observations recorded on the days mentioned above, including the 17th, which is also a biopsy for histological analysis was performed, demonstrated similarity between the lesions in relation to the study variables, pain sensitivity, color of wound edema, hyperemia, exudate, crust and granulation tissue. The process of contraction of the lesion area (A) and (B) similarly developed linearly, so that histologically complete reepithelialization was achieved in 90% of lesions (A) and 100% of the lesions (B), no differences statistically significant. Such differences were also not found between wounds in relation to other histological parameters analyzed: presence of crust, neovascularization, collagen, fibroblasts and macrophages, cell type and intensity of the inflammatory process. The results of this study suggest that the heterologous platelet-rich plasma gel was able to promote the healing of dermal wounds in rabbits, no harmful effects. / O plasma rico em plaquetas é fonte de diversos fatores de crescimento e surge como uma nova biotecnologia na reparação tecidual, com grande potencial terapêutico. Pacientes com problemas de saúde geral e ausência de volume de sangue necessário para produção autóloga deste concentrado, podem ficar limitados para receber este tratamento inovador. Para ultrapassar a limitação, o presente estudo avaliou os efeitos do gel de plasma rico em plaquetas obtido a partir de um cão saudável, na cicatrização de feridas dérmicas padronizadas em coelhos mediante análises morfológicas, morfométricas e histológicas. Foram produzidas duas incisões no dorso de seis coelhos utilizando punch de 8 mm de diâmetro. Aleatoriamente, um dos lados foi denominado Controle (A), permanecendo o contralateral Tratado (B). Solução fisiológica a 0.9% e gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foram aplicados topicamente nas lesões (A) e (B) respectivamente, nos dias 0, 3, 7, 10 e 14 de pós-operatório. Observações macroscópicas registradas nos dias mencionados acima, incluindo o 17o, no qual também foi realizada uma biópsia para análise histológica, demonstraram semelhança entre as lesões em relação às variáveis estudadas, sensibilidade dolorosa, cor da ferida, edema, hiperemia, exsudato, crosta e tecido de granulação. O processo de contração da área das lesões (A) e (B) evoluiu similarmente de forma linear, de modo que, histologicamente, reepitelização total foi alcançada em 90% das lesões (A) e 100% das lesões (B), sem diferenças estatisticamente significantes. Tais diferenças também não foram constatadas entre as feridas em relação aos demais parâmetros histológicos analisados: presença de crosta, neovascularização, colagenização, quantidade de fibroblastos e macrófagos, tipo celular e intensidade do processo inflamatório. Os resultados desta pesquisa sugerem que o gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foi capaz de promover a cicatrização de feridas dérmicas em coelhos, sem efeitos prejudiciais.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karina.pdf: 2597948 bytes, checksum: d65c6af5a956ec0d8f0afae614fe6d8a (MD5) Previous issue date: 2014-03-17 / The platelet rich plasma is a source of several growth factors and appears as a new biotechnology in tissue repair, with great therapeutic power. Patients with general health problems and the lack of volume of blood required for autologous production of concentrate, may be restricted to receive this innovative treatment. To overcome the limitation, this study evaluated the effects of heterologous platelet-rich plasma gel obtained from a healthy dog, in the healing of dermal wounds in rabbits by standard morphological, morphometric and histological analyzes. Two surgical incisions were made on the back of six rabbits using a punch of 8 mm diameter. Randomly one side was denominated as a Control (A), leaving the contralateral Treaty as (B). 0.9% saline solution and heterologous platelet-rich plasma gel were applied topically to the lesions (A) and (B) respectively, on days 0, 3, 7, 10 and 14 after surgery. Macroscopic observations recorded on the days mentioned above, including the 17th, which is also a biopsy for histological analysis was performed, demonstrated similarity between the lesions in relation to the study variables, pain sensitivity, color of wound edema, hyperemia, exudate, crust and granulation tissue. The process of contraction of the lesion area (A) and (B) similarly developed linearly, so that histologically complete reepithelialization was achieved in 90% of lesions (A) and 100% of the lesions (B), no differences statistically significant. Such differences were also not found between wounds in relation to other histological parameters analyzed: presence of crust, neovascularization, collagen, fibroblasts and macrophages, cell type and intensity of the inflammatory process. The results of this study suggest that the heterologous platelet-rich plasma gel was able to promote the healing of dermal wounds in rabbits, no harmful effects. / O plasma rico em plaquetas é fonte de diversos fatores de crescimento e surge como uma nova biotecnologia na reparação tecidual, com grande potencial terapêutico. Pacientes com problemas de saúde geral e ausência de volume de sangue necessário para produção autóloga deste concentrado, podem ficar limitados para receber este tratamento inovador. Para ultrapassar a limitação, o presente estudo avaliou os efeitos do gel de plasma rico em plaquetas obtido a partir de um cão saudável, na cicatrização de feridas dérmicas padronizadas em coelhos mediante análises morfológicas, morfométricas e histológicas. Foram produzidas duas incisões no dorso de seis coelhos utilizando punch de 8 mm de diâmetro. Aleatoriamente, um dos lados foi denominado Controle (A), permanecendo o contralateral Tratado (B). Solução fisiológica a 0.9% e gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foram aplicados topicamente nas lesões (A) e (B) respectivamente, nos dias 0, 3, 7, 10 e 14 de pós-operatório. Observações macroscópicas registradas nos dias mencionados acima, incluindo o 17o, no qual também foi realizada uma biópsia para análise histológica, demonstraram semelhança entre as lesões em relação às variáveis estudadas, sensibilidade dolorosa, cor da ferida, edema, hiperemia, exsudato, crosta e tecido de granulação. O processo de contração da área das lesões (A) e (B) evoluiu similarmente de forma linear, de modo que, histologicamente, reepitelização total foi alcançada em 90% das lesões (A) e 100% das lesões (B), sem diferenças estatisticamente significantes. Tais diferenças também não foram constatadas entre as feridas em relação aos demais parâmetros histológicos analisados: presença de crosta, neovascularização, colagenização, quantidade de fibroblastos e macrófagos, tipo celular e intensidade do processo inflamatório. Os resultados desta pesquisa sugerem que o gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foi capaz de promover a cicatrização de feridas dérmicas em coelhos, sem efeitos prejudiciais.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maria elisa marin marques.pdf: 515384 bytes, checksum: ea781c03147655b978641ca0ac918799 (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Platelet-rich plasma (PRP) has been extensively studied as a biomaterial for wound treatment, and the heterologous PRP is useful in the event that obtaining the patient s own blood is impossible. This study aimed to evaluate and compare wound healing in rabbits and quantify the collagen in experimentally induced wounds in a control group and in a group treated with heterologous PRP gel. We hypothesize that this gel is capable of promoting proper healing with no adverse reactions, increased collagen content, and faster healing. The clinical aspects of coloring, edema, hyperemia, exudation, crust, granulation and retraction index of the wounds were measured on days 7, 14, and 17 after the injury. Collagen quantification by Picrosirius staining and evaluation under polarized light was performed on the 17th day. Crust was present in both groups at all evaluated time points, with the absence of other clinical signs. The wound contraction rate and collagen quantity did not differ between groups. In conclusion, the heterologous PRP gel was unable to increase the amount of collagen and accelerate the wound healing process, however, wound healing was efficient and similar in both groups and there was no local adverse reaction. Thus, despite the scarcity of studies in the literature, the heterologous PRP gel is an effective alternative treatment for wounds in the absence of other sources of PRP. / O plasma rico em plaquetas (PRP) tem sido amplamente estudado como um biomaterial para o tratamento de feridas, sendo o produto de fonte heteróloga indicado na impossibilidade de obtenção do sangue do próprio paciente. O presente estudo teve como objetivo, avaliar e comparar a cicatrização em coelhos e quantificar o colágeno de feridas experimentalmente induzidas, denominadas controle e tratadas, com PRP heterólogo gel. A hipótese é que este seja capaz de promover cicatrização adequada sem reações adversas, e promova aumento do colágeno e uma cicatrização mais rápida. Os aspectos clínicos cor, edema, hiperemia, exsudato, crosta, granulação e índice de retração das feridas foram avaliados nos dias 7, 14 e 17 após a lesão. A quantificação do colágeno, através da coloração com Picrosirius e avaliação sob luz polarizada, foi realizada no 17º dia. Houve presença de crosta nos dois grupos em todos os momentos avaliados, com ausência dos demais sinais clínicos. O percentual de contração da lesão e quantidade de colágeno não diferiu entre os grupos. Concluiu-se que o PRP heterólogo gel não foi capaz de aumentar a quantidade de colágeno e acelerar o processo de cicatrização tecidual, no entanto, a cicatrização foi eficiente e semelhante entre os dois grupos e não houve nenhum tipo de reação adversa local. Desta forma, apesar da escassez de estudos encontrados na literatura, o PRP heterólogo gel é uma alternativa de tratamento de feridas, na impossibilidade de uso de outras fontes de PRP.

A cárie dental é uma doença bacteriana infecciosa considerada como um dos principais problemas de saúde pública. O principal agente etiológico para o desenvolvimento da doença é o Streptococcus mutans. A proteína P1, também conhecida como antígeno I/II, do S. mutans é fundamental para a etapa inicial de adesão à superfície dental (sacarose-independente), sendo, portanto, considerada essencial para o processo de colonização deste patógeno. Algumas regiões dessa proteína vêm sendo empregadas como antígenos em estratégias vacinais contra a cárie, entre elas a região A, localizada na porção N-terminal, conhecida como região de ligação à saliva Saliva Binding Region (SBR). No entanto, apesar dos avanços, não existe vacina para a prevenção da cárie licenciada para uso em humanos. Diante disso, o presente trabalho tem como objetivo o desenvolvimento e caracterização de uma nova estratégia vacinal contra o S. mutans baseada em esquema de dose-reforço heterólogo, utilizando o fragmento P139-512, na forma de proteína purificada, expressa a partir de linhagens recombinantes de Bacillus subtilis. A proteína P139-512 compreende os aminoácidos 39-512 da proteína nativa, o que corresponde a toda região A e uma pequena porção da região variável da proteína P1. Utilizamos esporos de B. subtilis 1012, modificados para expressar o antígeno P139-512 (LDV702). A linhagem LDV704, além de expressar o antígeno, foi modificada para expressar uma invasina (InvA) com capacidade de se ligar a epitélios de mucosa. Camundongos da linhagem BALB/c foram imunizados por via sublingual com uma dose de esporos de B. subtilis (linhagens 1012, LDV702, LDV704 ou PBS) seguidos por dois reforços com a proteína P139-512, associada ou não com o adjuvante LTK63. Níveis significativos de anticorpos séricos foram induzidos pelas formulações em associação com o adjuvante após a terceira dose, e mostraram-se capazes de reconhecer os epítopos em diferentes linhagens de S. mutans. No entanto, nenhuma das formulações mostrou-se capaz de ativar respostas de mucosa (S-IgA). Porém, observamos que o adjuvante LTK63 empregado na estratégia dose-reforço heterólogo potencializou a resposta sérica de anticorpos IgG, sendo capaz de modular e melhorar qualitativamente as respostas induzidas. Assim, a administração das formulações na presença do adjuvante representa uma alternativa promissora para o controle do S. mutans. / Dental caries is an infectious bacterial disease considered as one of the main public health problems. The main etiological agent for the development of the disease is the Streptococcus mutans. The P1 protein, also known as S. mutans Ag I / II antigen, is essential for the initial stages of adhesion to the dental surface (sucrose-independent) and is, therefore, considered essential for the colonization process of this pathogen. Some regions of this protein have been used as antigens in vaccine strategies against caries, among them the A region, located at the amino terminal region also known as the Saliva Binding Region (SBR). However, despite the advances, there is no licensed anti-caries vaccine for human use. Therefore, the present work aims to develop and characterize a new vaccine strategy against S. mutans based on a heterologous priming/boost immunization regimen using the recombinant P139-512 fragment, expressed and purified from a Bacillus subtilis strain. The P139-512 protein comprises amino acids that encompasses the entire A region and a small portion of the variable region of the P1 protein. We used spores of B. subtilis 1012 (wild-strain) and recombinants that were modified to express the antigen P139-512 (LDV702). In addition to express the antigen, the LDV704 strain was modified to express a surface-exposed bacterial invasin (InvA) capable of binding to the mucosal epithelia. BALB/c mice were primed via the sublingual route with a dose of B. subtilis spores (1012, LDV702, or LDV704 strains) followed by two boosting doses with the purified protein P139-512, associated or not with the LTK63 adjuvant, by the same administration route. Significant serum antibody levels were induced by the formulations with the adjuvants after the third dose and the antibodies were shown to recognize epitopes exposed on the surface of different S. mutans strains. However, none of the formulations were capable to activate mucosal responses (S-IgA). Nevertheless, we observed that the LTK63 enhanced the serum IgG responses and qualitatively improved the induced antibody response. Thus, the administration of the formulations in the presence of the adjuvant represents a promising alternative for the control of S. mutans.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-23T20:26:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InfluenciasIdadeAmbiente.pdf: 35646132 bytes, checksum: 0e58f050b3a569f8927352c599ce214d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-24T14:19:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InfluenciasIdadeAmbiente.pdf: 35646132 bytes, checksum: 0e58f050b3a569f8927352c599ce214d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-24T14:19:56Z (GMT). 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Além disso, como os animais velhos apresentam menor declínio funcional em células T de imunidade adaptativa, testamos a hipótese de que camundongos AE velhos ao serem infectados pelo vírus da dengue apresentariam maior taxa de mortalidade do que animais AP pareados por idade, e isso estaria associado à maior hiperplasia dos linfócitos T. Para testar essas hipóteses implantamos regime de inoculações múltiplas em animais adultos de 9 e 18 meses de idade. Dois regimes de inoculação foram testados: inoculações múltiplas de homogeneizado cerebral infectado por um único sorotipo (IUS) ou inoculações alternadas daquele homogeneizado e de anticorpo heterólogo (ICAH). Em ambos os casos foram feitas inoculações múltiplas intraperitoneais encontrando-se diferenças significativas no curso temporal da doença nos animais submetidos a um ou outro regime de inoculação. Comparado ao grupo ICAH para o qual detectou-se diferenças significativas entre os grupos AE e AP (Kaplan-Meyer log-rank test, p = 0,0025), não foram detectadas diferenças significativas entre os grupos experimentais AP e AE submetidos ao regime IUS (Kaplan-Meyer log-rank test, p = 0,089). As curvas de sobrevivência dos grupos AE e AP sob o regime ICAH foram estendidas após a injeção de glicocorticoides reduzindo-se os sintomas e o número de mortes e esse efeito foi maior no grupo AE do que no AP (Kaplan-Meyer log-rank test, p = 0,0162). No regime ICAH, o grupo AE mostrou sinais clínicos mais intensos do que o AP e isso incluiu dispneia, tremor, postura encurvada, imobilidade, paralisia pré-terminal, choque e eventual morte. Comparado ao grupo AP, o grupo AE independentemente da idade apresentou maior mortalidade e sinais clínicos mais intensos. Esses sinais clínicos mais intensos nos animais do ambiente enriquecido submetidos ao regime ICAH foram associados à maior hiperplasia de linfócitos T no baço e maior infiltração dessas células no fígado, pulmões e rins. Embora a hiperplasia linfocítica e a infiltração tenham se mostrado mais intensas nos animais velhos do que nos jovens, a imunomarcação para os antígenos virais nos mesmos órgãos foi maior nos jovens do que nos velhos. A presença do vírus nos diferentes órgãos alvo foi confirmada por PCR em tempo real. Tomados em conjunto os resultados sugerem que o ambiente enriquecido exacerba a resposta inflamatória subsequente à infecção por dengue acentuada por anticorpo heterólogo, e isso está associado à sintomas clínicos mais intensos, maior taxa de mortalidade e ao aumento da expansão de células T. Os ensaios comportamentais e histopatológicos do presente trabalho permitiram testar e validar novo modelo murino imunocompetente para estudos em dengue permitindo testar numerosas hipóteses oriundas de estudos epidemiológicos e in vitro. / Because the enriched environment (EE) increases the activity of T cells, contribute to the immunopathogenesis of dengue virus infections (VDEN) we hypothesized that animals maintained in an enriched environment (AE) compared with animals from impoverished environment of standard laboratory cages (IE), would develop more severe forms of the disease. Because older animals have less functional decline in adaptive immunity T cells, we tested the hypothesis that AE old mice would show higher number of deaths and more intense clinical signs than age-matched IE animals, and this would be associated with greater expansion of T lymphocytes. To test these hypotheses we established scheme of multiple inoculations in adult animals of 9 and 18 months of age. Two regimens of inoculation were tested: multiple injections of single serotype (VDEN3 genotype III) infected brain homogenate (SS) or alternatively multiple injections with that infected brain homogenate followed 24h later by inoculation of heterologous antibody (SSHA). In both cases multiple i.p. inoculations were done. It was found significant differences in the temporal progression of the disease in the animals submitted to one or another scheme of inoculation: SSHA group (Kaplan -Meier log-rank test, p = 0.0025); IUS (Kaplan -Meier log-rank test, p = 0.089). The survival curves of AE and AP under SSHA regime were extended after a single injection of glucocorticoids, reducing the symptoms and the number of deaths, and these effects were greater in the EE group than in the IE (Kaplan-Meier log-rank test, p = 0.0162). In SSHA scheme, EE group showed clinical signs more intense than the AP and those included dyspnea, tremor, hunched posture, immobility, pre-terminal paralysis, shock and eventual death. Compared to the IE group, the AE group regardless of age showed higher mortality and more severe clinical signs. These more severe clinical signs in EE animals under SSHA regime were associated with increased hyperplasia of T lymphocytes in the spleen and increased infiltration of these cells in the liver, lungs and kidneys. Although lymphocytic hyperplasia and infiltration have been more intense in older than in younger animals, immunostaining for viral antigens in target organs was higher in young than in the aged mice. The presence of the virus in various infected organs were confirmed by real time PCR. Taken together the results suggest that the enriched environment life style exacerbates the subsequent inflammatory response to infection, and that is associated with more severe clinical symptoms, higher mortality and increased T cell expansion. Behavioral and histopathological data validate a new immunocompetent murine model for studies on dengue disease allowing in vivo tests of a number of hypothesis raised by epidemiological and in vitro studies.