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Estudo de bactérias recombinantes e análise de fluxos metabólicos para biossíntese do copolímero biodegrádavel poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato) [P(3HB-co-3HHx). / Study of recombinant bacteria and metabolic flux analysis to biosynthesize the biodegradable copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) [P(3HB-co-3HHx)].

Mendonça, Thatiane Teixeira 05 November 2014 (has links)
O copolímero biodegradável poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato) P(3HB-co-3HHx) é um polihidroxialcanoato (PHA) que apresenta várias aplicações. A bactéria Burkholderia sacchari acumula P(3HB-co-2mol%3HHx), a partir de glicose e ácido hexanoico. Com o objetivo de obter P(3HB-co-3HHx) com diferentes teores de 3HHx por B. sacchari, foram construídas linhagens recombinantes, contendo genes do operon phaPCJ de Aeromonas spp. Os recombinantes produziram P(3HB-co-3HHx), a partir de ácidos hexanoico, láurico e linoleico, com teores de 3HHx entre 1,88-18 mol%. Experimentos em biorreator com o recombinante, alimentada na fase de acúmulo por glicose 140 g/L e ácido hexanoico entre 0-45 g/L, resultaram copolímeros com composições variando de 0 a 20 mol% de 3HHx. Os copolímeros assim produzidos foram extraídos e analisados quanto às propriedades físicas. A análise de fluxos metabólicos indicou que a produção de PHA pode ser aumentada com mudanças no metabolismo central e deleção/superexpressão de genes. / The biodegradable copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) P(3HB-co-3HHx) is a polyhydroxyalkanoate (PHA) presenting various applications. The bacterium Burkholderia sacchari accumulated P(3HB-co-2mol%3HHx) from glucose and hexanoic acid. In order to obtain P(3HB-co-3HHx) with different 3HHx amounts by B. sacchari, recombinant strains containing phaPCJ operon genes from Aeromonas spp were constructed. Recombinant strains produced P(3HB-co-3HHx) from hexanoic, lauric and linoleic acids, with contents of 3HHx ranging from 1.88 to 18 mol%. Experiments with the recombinant in bioreactor, fed in the accumulation phase by glucose 140 g.l-1and hexanoic acid 0-45 g.l-1, resulted in copolymers with compositions ranging from 0 to 20 mol% of 3HHx. The copolymers produced were extracted and analyzed for physical properties. The metabolic flux analysis indicated that PHA production can be increased by modifying the central metabolism and deleting/ overexpressing genes.
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Perfil metabólico energético em dois grupos genéticos de Vacas holandês x Gir de segunda ordem de parição, em dois períodos da lactação, na época da seca, nos trópicos

Penna Júnior, César Otaviano 30 August 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cesar Otaviano Penna Junior.pdf: 505984 bytes, checksum: cd67e240dbaac144ea465c0209566a1b (MD5) Previous issue date: 2010-08-30 / The cross-breeding derived from specialized milk producing European breeds with zebu breeds that are adapted to tropical conditions form the basis of the majority of Brazil s milk producing systems. However, researches regarding the metabolic profile (MP) for bovine dairy cows focus on pure breeds coming mostly from temperate to subtropical regions. Therefore, the behaviour of the hematobiochemical components indicators on the energy metabolism in second calving rate order ½ and ¾ Holstein x Gir (HG) dairy cows, in two stages of lactation, became the object of the evaluation, as well as to determine its relationship with body condition (BCS) and milk production during the dry season in tropical environment. The experiment was conducted at Santa Luzia Farm, located in Minas Gerais - Brazil. This study used data collected in the months of May and August 2009 from 37 ½ HG cows and 35 ¾ HG cows. By our definition studies were focused on two lactation periods, the first being from 28 to 60 days (P1 lactation) and the second from 110 to130 days (P2 of lactation). The cows received complete feed in the trough. The biochemical indicators of the metabolic energy profile were analyzed through the beta-hydroxybutyrate (βHB), cholesterol and the enzyme Aspartate transaminase (AST) quantifications. The metabolite average values, with their standard errors, analyzed by Student test, were established for both blood degrees, in their respective lactation periods. Given the scarcity of information on reference values for the genetic group investigated in this study, reference values were methodically sought from studies using larger number of variables equal to the present study. There were statistical differences between the periods for βHB, milk production and BCS, whereas the other parameters did not differ for cows ½ and ¾ HG. There were statistical differences between the periods in βHB, milk production and BCS, whereas the other parameters did not differ for ½ and ¾ HG cows. Between blood degrees, the statistical differences occurred within each period concerning the βHB and milk production parameters and no other differences occurred in relation to the remaining parameters. Having obtained the results and taking the conditions to which the animals were exposed in this study into consideration, we have concluded that the genetic groups were effective in sustaining their respective levels of milk production without experiencing complications of metabolic order. We suggest such studies to be continuated as to equate Reference Values / Os cruzamentos derivados de raças européias especializadas para produção de leite com raças zebuínas adaptadas às condições tropicais formam a base da maioria dos sistemas de produção de leite no Brasil. Porém, verifica-se que os estudos a respeito de perfil metabólico (PM) para vacas bovinas leiteiras se concentram em raças puras, em sua grande maioria em regiões de clima temperado ou subtropical. Assim, com a revisão objetivou-se destacar a importância do uso do Perfil Metabólico energético na avaliação do desempenho produtivo de vacas leiteiras, seja no quesito nutricional, seja nas questões relacionadas ao diagnóstico e prevenção de transtornos de ordem metabólica nutricional e com a pesquisa aferir os valores e avaliar o comportamento dos marcadores bioquímicos energéticos entre dois períodos da lactação e entre diferentes graus genéticos de vacas HG de 2ª OP, no período da seca, em região tropical. O experimento foi realizado na Fazenda Santa Luzia, localizada no Estado de Minas Gerais Brasil. Foram utilizados dados coletados nos meses de maio e agosto de 2009, provenientes de 37 vacas ½ HG e 35 vacas ¾ HG. Definiu-se concentrar os estudos em dois períodos da lactação, sendo o primeiro de 28 a 60 dias (P1 da lactação) e o segundo de 110 a 130 dias (P2 da lactação). As vacas receberam ração total. Foram analisados os indicadores bioquímicos do perfil metabólico energético por meio da quantificação do Beta-hidroxibutirato (βHB), do colesterol e da enzima Aspartato transaminase (AST). Os valores médios dos metabólitos, com seus erros-padrão, analisados pelo teste t de Student, foram estabelecidos para ambos os graus de sangue, nos respectivos períodos da lactação. Dada a escassez de informações sobre valores referenciais para o grupo genético investigado nesse estudo, metodologicamente buscaram-se valores referenciais de estudos que utilizaram o maior número de variáveis iguais ao do presente trabalho. Ocorreram diferenças estatísticas (p<0,05) entre períodos para βHB, produção de leite e ECC, enquanto que os demais parâmetros não apresentaram diferenças (p>0,05) para vacas ½ e ¾ HG. Entre graus de sangue, as diferenças estatísticas (p<0,05) ocorreram dentro de cada período para os parâmetros βHB e produção de leite, não tendo ocorrido diferenças (p>0,05) para os demais parâmetros. Aferidos os valores, conclui-se que para as condições a que foram submetidos os animais no presente estudo, os grupos genéticos foram eficientes para sustentarem seus respectivos níveis de produção de leite, sem apresentarem complicações de ordem metabólica. Sugere-se a continuidade de estudos dessa natureza para equacionar Valores de Referência
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Arcabouços 3D (Scaffolds) à base de poli (hidroxibutirato), quitosana e fibroína da seda para engenharia tecidual / 3D scaffolds based on poly (hydroxibutirate), chitosan and silk fibroin for tissue engineering

Macedo, Maria Erisfagna Ribeiro de 02 March 2017 (has links)
Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Materials based on polyhydroxybutyrate (PHB), chitosan (CHI) and fibroin (SF) are biocompatible and attractive for applications in bone tissue engineering. In this work, 3D scaffolds of PHB/CHI and PHB/CHI/SF in different proportions was prepared, characterized and evaluated the in vitro behavior: group I: PHB/CHI (50:50 wt.%), group II: PHB/CHI/SF (50:45:5 wt.%) and group III: PHB/CHI/SF (50:35:15 wt.%). The scaffolds were produced by the lyophilization method of the components mixtures. The physical-chemical characterization of the scaffolds was performed by X-ray diffraction, infrared spectroscopy, scanning electron microscopy and thermogravimetric analysis. A highly porous nature was revealed by SEM analysis of the scaffolds. The FTIR analysis revealed that the constituents used in the preparation of the scaffolds interacted chemically with each other. Thermal analysis showed that fibroin increases the thermal stability of the scaffolds. The viability and cell proliferation were assessed by the MTT method and the cytotoxicity results showed that all scaffolds are non- cytotoxic. In addition, the scaffolds stimulated cell proliferation and are promising for tissue engineering applications. / Materiais à base de polihidroxibutirato (PHB), quitosana (QUI) e fibroína (SF) são biocompatíveis e atrativos para aplicações na engenharia tecidual óssea. Neste trabalho foi preparado, caracterizado e avaliado o comportamento in vitro de arcabouços 3D de PHB/QUI/SF em diferentes proporções: grupo I: PHB/QUI (50:50 % em massa), grupo II-PHB/QUI/SF (50:45:5 % em massa) e grupo III- PHB/QUI/SF (50: 35:15 % em massa). Os arcabouços foram produzidos pelo método da liofilização das misturas dos componentes dos três grupos. A caracterização físico-química dos arcabouços foi realizada por difração de raios X, espectroscopia no infravermelho, microscopia eletrônica de varredura e análise termogravimétrica. A análise de MEV mostrou que os arcabouços 3D apresentam uma boa porosidade. Por FTIR observou- se que os componentes utilizados na preparação dos arcabouços interagiram quimicamente entre si. As análises térmicas indicam que a fibroína aumenta a estabilidade térmica dos arcabouços. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas pelo método do MTT e os resultados de citotoxicidade mostraram que ambos os arcabouços não são citotóxicos. Além disso, os arcabouços estimularam a proliferação celular, sendo promissores para aplicações em engenharia tecidual.
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Estudo de bactérias recombinantes e análise de fluxos metabólicos para biossíntese do copolímero biodegrádavel poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato) [P(3HB-co-3HHx). / Study of recombinant bacteria and metabolic flux analysis to biosynthesize the biodegradable copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) [P(3HB-co-3HHx)].

Thatiane Teixeira Mendonça 05 November 2014 (has links)
O copolímero biodegradável poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato) P(3HB-co-3HHx) é um polihidroxialcanoato (PHA) que apresenta várias aplicações. A bactéria Burkholderia sacchari acumula P(3HB-co-2mol%3HHx), a partir de glicose e ácido hexanoico. Com o objetivo de obter P(3HB-co-3HHx) com diferentes teores de 3HHx por B. sacchari, foram construídas linhagens recombinantes, contendo genes do operon phaPCJ de Aeromonas spp. Os recombinantes produziram P(3HB-co-3HHx), a partir de ácidos hexanoico, láurico e linoleico, com teores de 3HHx entre 1,88-18 mol%. Experimentos em biorreator com o recombinante, alimentada na fase de acúmulo por glicose 140 g/L e ácido hexanoico entre 0-45 g/L, resultaram copolímeros com composições variando de 0 a 20 mol% de 3HHx. Os copolímeros assim produzidos foram extraídos e analisados quanto às propriedades físicas. A análise de fluxos metabólicos indicou que a produção de PHA pode ser aumentada com mudanças no metabolismo central e deleção/superexpressão de genes. / The biodegradable copolymer poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) P(3HB-co-3HHx) is a polyhydroxyalkanoate (PHA) presenting various applications. The bacterium Burkholderia sacchari accumulated P(3HB-co-2mol%3HHx) from glucose and hexanoic acid. In order to obtain P(3HB-co-3HHx) with different 3HHx amounts by B. sacchari, recombinant strains containing phaPCJ operon genes from Aeromonas spp were constructed. Recombinant strains produced P(3HB-co-3HHx) from hexanoic, lauric and linoleic acids, with contents of 3HHx ranging from 1.88 to 18 mol%. Experiments with the recombinant in bioreactor, fed in the accumulation phase by glucose 140 g.l-1and hexanoic acid 0-45 g.l-1, resulted in copolymers with compositions ranging from 0 to 20 mol% of 3HHx. The copolymers produced were extracted and analyzed for physical properties. The metabolic flux analysis indicated that PHA production can be increased by modifying the central metabolism and deleting/ overexpressing genes.

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