Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Lucia Xavier Lopes / Banca: Maria Inês Genovese Rodriguez / Resumo: O Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais (NuBBE) condensa, em suas atividades de pesquisa, o estudo de micromoléculas bioativas provenientes de plantas do Cerrado e Mata Atlântica Paulistas. Nos últimos anos o NuBBE investe no desenvolvimento de metodologias analíticas de derreplicação, utilizando diversas técnicas acopladas, tais como, CLAE/DEQ-DAD, EMAR/CLAE-DAD e EM/CLAE-DAD, para acelerar a escolha de extratos vegetais brutos. Técnicas analíticas de detecção in silico vêm sendo incorporadas às metodologias cromatográficas de construção de perfis micromoleculares, auxiliando na seleção apenas dos metabólitos de interesse presentes em matrizes brutas. Nesta dissertação foi abordado o estudo dos extratos de Strychnos brasiliensis e S. pseudoquina (Loganiaceae) através de bioensaios de atividade antioxidante e de inibição de polimerização da hematina. Esses bioensaios revelaram a fração acetato de etila, dos galhos de S. brasiliensis, como matriz promissora em ambos os testes assim como os galhos de S. pseudoquina com potencial atividade antioxidante. A fração acetato de etila dos galhos de S. brasiliensis e o extrato bruto das folhas de S. pseudoquina foram avaliados fazendo uso da técnica hifenada EMAR/CLAE-DAD. Como resultado desta análise, quatro micromoléculas foram elucidadas: a 10- hidroxi-17-O-metilacagerina para as folhas de S. pseudoquina, estricnohirsutina, 14,15,16-trinor-11-labden-13,8-oleído e acagerina para a fração acetato de etila dos galhos de S. brasiliensis. Além disso, foi construída uma base de dados que reúne algumas informações físico-químicas e espectroscópicas valiosas, ajudando na detecção e isolamento das substâncias presentes nas duas espécies de Strychnos, objeto do nosso estudo. / Abstract: The Nuclei of Bioassays, Biosynthesis and Natural Products Ecophysiology (NuBBE) condenses in their research activities, the study of bioactive micromolecules from plants of the Cerrado and Atlantic Forest from São Paulo's State. In recent years, NuBBE has increased efforts in the development of analytical dereplication methods using various coupled techniques such as HPLC/DAD-ECD, EMAR/DAD and HPLC-MS/HPLC-DAD, to speed-up the selection of crude plant extracts. In silico analytical techniques have been incorporated into chromatographic methodologies aiming to build micromolecular profiles, assisting in the selection only of metabolites of interest in crude matrixes. This dissertation aims the study of extracts from Strychnos brasiliensis and Strychnos pseudoquina (Loganiaceae) throughout bioassays of antioxidant activity and inhibition of polymerization of heme, which showed the ethyl acetate fraction from branches of S. brasiliensis, as a promising matrix in both in vitro tests as well as the branches of S. pseudoquina that showed potential antioxidant properties. The ethyl acetate fraction from Strychnos brasiliensis branches and the crude extract from leaves of Strychnos pseudoquina were evaluated using HRMS/HPLC-DAD. From that analysis, four structures have been elucidated: 10-hydroxy-17-O-methylakagerine, from leaves of S. pseudoquina, strychnohirsutine, 14,15,16-trinor-11-labden-13,8-olide and akagerine from the ethyl acetate fraction of branches from S. brasiliensis. In addition, we have built up a database that gathers information about the structures detected in this study, such as molecular weight, structure, molecular formula, mass spectrum, aiming to facilitate the structural as well as the total elucidation of molecules of interest. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-04-13Bitstream added on 2014-06-13T18:46:26Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_cm_dr_araiq.pdf: 2519844 bytes, checksum: 035aaa12ecc407645fd4ebd88fc3a8cb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho trata da caracterização química de espécies de plantas brasileiras usadas no tratamento de disfunções gástricas. Nossa proposta envolve a investigação de extratos orgânicos polares e infusões por técnicas analíticas. Extração em fase sólida (SPE) e/ou extração líquido-líquido (LLE) foram utilizadas na etapa de clean-up para que açúcares livres e oligômeros de proantocianidinas fossem separados da matriz vegetal bruta. As amostras pré-tratadas foram então analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HLPC) acoplada com detector de arranjo de fotodiodos (PAD) ou por espectrometria de massas em tandem acoplado a um ion trap com interface de ionização por electrospray, usando o modo de inserção direta da amostra (FIA-ESI-IT-MS). Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários de plantas pertencentes às famílias Dilleniaceae (Davilla elliptica e D. nitida: flavonóides, catequinas, isoprenóides e ácidos fenólicos), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catequinas, ácidos fenólicos, procianidinas e oligômeros de procianidinas C-glucosiladas) e Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia e B. intermedia: flavonóides, biflavonóides, ácidos fenólicos, oligômeros de proantocianidinas e ácidos galoilquínicos). A determinação quantitativa dos principais metabólitos secundários também foi realizada, permitindo então a completa caracterização da composição química dos extratos de plantas. Assim, nossa proposta levou a uma caracterização química rápida e eficiente de espécies de plantas brasileiras usadas na medicina popular como antiúlcera. Estes resultados são úteis para um melhor entendimento das atividades farmacológicas das espécies de plantas acima mencionadas. / This work deals with the chemical characterization of Brazilian plant species used to treat gastric disfunctions. Our approach involved the investigation of organic polar extracts and infusions by using analytical techniques. Solid-phase extraction (SPE) and/or liquid-liquid extraction (LLE) were used in the clean-up step, so that free sugars and proanthocyanidin oligomers were separated from the bulk of the vegetable matrix. The pre-treated samples were then analyzed by using high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to photodiode array (PAD) detector or by direct flow analysis - electrospray ionization - ion trap - tandem mass spectrometry (FIA-ESI-IT-MS). This strategy allowed to recognize the secondary metabolites from plants belonging to the families Dilleniaceae (Davilla elliptica and D. nitida: flavonoids, catechins, isoprenoids and phenolic acids), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catechins, phenolic acids, procyanidins and C-glycosilated procyanidins oligomers) and Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia and B. intermedia: flavonoids, biflavonoids, phenolics acids, proanthocyanidins oligomers and galloylquinic acids). Quantitative determination of the main secondary metabolites was also performed, thus allowing to fully characterization of the chemical composition of plant extracts. Thus, our approach led to a fast and efficient chemical characterization of Brazilian plant species used in folk medicine as antiulcer. These results are useful to the better understanding of the pharmacological activities of the above mentioned plant species.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-20Bitstream added on 2014-06-13T20:59:17Z : No. of bitstreams: 1 carnevaleneto_f_me_araiq.pdf: 2909237 bytes, checksum: d5dbb04db98f4d6c5f87cfc6ae4bfcca (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação bioguiada para Qualea grandiflora e Q. cordata, duas espécies da família Vochysiaceae presentes no Cerrado Brasileiro com potencial etnofarmacológico, através dos bioensaios in vitro de inibição da polimerização da β-hematina bovina (compostos antimaláricos), redução do radical estável DPPH (antioxidante), bioautografia para avaliação da inibição da enzima acetilcolinesterase, avaliação citotóxica em linhagens celulares, avaliação de atividade antifúngica por microdiluição em placa e avaliação tripanocida frente à cepas Y de epimastigotas de Tripanosoma cruzi e, da detecção in silico dos constituintes moleculares majoritários a partir da técnica hifenada de HPLC-DAD-HRMS(ESI). As folhas e os ramos secos de Q.grandiflora e Q.cordata foram extraídos por maceração com etanol:água (8:2) e posteriormente fracionados em extração líquido-líquido com os solventes hexano, AcOEt e n-butanol. Entre os bioensaios realizados, a avaliação de inibição do radical DPPH apresentou valores significativos para as frações AcOEt dos ramos de Q.grandiflora e das folhas de Q. cordata. A partir disto, estas frações foram analisadas através da técnica hifenada HPLC-DAD-HRMS(ESI) e permitiram a detecção das flavanonas: 4',5,7-triidroxi-3'-metoxi-6,8-dimetilflavanona e 5,6,7-triidroxi-3',4'-dimetoxi-8-metilflavanona e dos diidroflavonóis: 4',7-diidroxi-5-metoxi-6-metildiidroflavonol e 3',4'-dimetoxi-5,7-diidroxi-6,8-dimetildiidroflavonol na fração AcOEt nas folhas de Q.cordata, e das flavanonas: 8-metilnaringenina e 4',5,7-triidroxi-3',6-dimetoxi-8-metilflavanona; benzofenona: Bis(2-hidroxi-4,6-dimetoxi-3-metilfenil)metanona e diidroflavonol: 3',4',5,6,7-pentaidroxi-8-metildiidroflavonol da fração AcOEt dos ramos de Q.grandiflora. Também realizou-se a análise in silico por RMN da fração... / In this work the bioguided phytochemical studies of Qualea grandiflora and Q. cordata, two species of Vochysiaceae greatly represented in the Brazilian Cerrado and with ethnopharmacology potential, were perfomed according to in vitro bioassays from antioxidant capacity and inhibition of ß-hematin polymerization (antimalarial compounds), scavenging activity of DPPH (antioxidant capacity), inhibition of acetyl cholinesterase (anti-Alzheimer), citotoxic activity against tumoral cell lines (anticancer), antifungal activity using a microdilution assay and tripanocidal activity performed with the Y-strain epimastigote forms of Tripanosoma cruzi, as well as in silico dereplication by means of HPLC-DAD-HRMS(ESI). The leaves and stem of Q.grandiflora and Q.cordata were extracted by maceration in etanol:water (8:2) and fractionated by liquid-liquid using hexane, AcOEt and n-butanol. The bioassays showed that AcOEt stem fraction of Q.grandiflora and AcOEt leaves fraction of Q. cordata are significantly activity in DPPH reduction. According to this results, the AcOEt fraction of the stem of Q.grandiflora and the leaves of Q.cordata were evaluated using HPLC-DAD-HRMS(ESI) and allowed the detection of two flavanones: 4',5,7-trihydroxy-3-methoxy-6,8-dimethylflavanone and 5,6,7-trihydroxy-3',4'-dimethoxy-8-methylflavanone, and the dihydroflavonols: 4',7-dihydroxy-5-methoxy-6-methyldihydroflavonol and 3',4'-dimethoxy-5,7-dihydroxy-6,8-dimethyldihydroflavonol from AcOEt leaves fraction of Q.cordata, and the flavanones: 8-methyl-naringenine and 4',5,7-trihydroxy-3',6-dimethoxy-8-methylflavanone, the benzophenone: bis (2-hydroxy-4,6-dimethoxy-3-methylphenyl) metanone, and the dihydroflavonol: 3',4',5,6,7-pentahydroxy-8-methyldihydroflavonol from AcOEt stem fraction of Q. grandiflora. The AcOEt stem fraction of Q. grandiflora was analyzed through in silico NMR, comparing virtual 1H NMR standards spectra... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:19:05Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_p_me_araiq.pdf: 3362047 bytes, checksum: fcc1f18d091d35b1b0091e28b5cadc70 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de Garcinia xanthochymus, foi cultivado em pequena escala nos meios líquidos, (400 mL) MDB, Extrato de Malte, YM, Czapek e em meio sólido (150 g) de milho tipo canjica, a 28ºC, em regime estático. Após triagem por ensaios biológicos, e análise por 1H RMN e HPLC-DAD, os meios de milho e extrato de malte foram selecionados para o estudo químico, sendo cultivados em larga escala. As matrizes brutas foram submetidas a estratégias de separação e de desreplicação utilizando as técnicas hifenadas: cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos e espectrometria de massas de alta resolução, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e também a ressonância magnética nuclear, sendo a detecção dos constituintes majoritários realizada in silico, através do uso de bases de dados públicas e pertencentes ao NuBBE. Os experimentos realizados permitiram a detecção de 14 substâncias: 6 por CG-MS (extrato DCM de milho) – dihexadecanoato de glicerila (1); trioctadec-9-enoato de glicerila (2); sn1`, 2` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (3); sn1`,3` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (4); ácido 6,11-hexadecanóico (5); geranilinalol (6); e 7 por HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerina (8); sambutoxina (9); micosporina-glicina (10); ciperina (11); micosporina serina (12); arginomicina (13) e aspergillomarasmina B (14). Os compostos 2, 3 e 4, majoritários na matriz bruta foram isolados. Os metabolitos detectados por HPLC-DAD-HRMS (7-10) foram também detectados por 1H RMN / Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic fungi isolated from Garcinia xanthochymus, was initially cultivated on the following liquid media (400 mL): MDB, YM, Czapek and static solid medium (150 g) using bleached corn at 28 C. After careful screening using bioassays, 1H NMR and HPLC-DAD, the corn and malt extract were selected for further studies and large-scale growth. The crude matrixes were submitted to several separation strategies using dereplication and hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD), high resolution mass spectrometry (HRMS), gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS) as well as nuclear magnetic resonance (NMR). Most of the detected molecules were achieved using an in silico approach towards the data mining of public and NuBBE’s databases. This approach lead us to detect 14 substances; 6 by means of CG-MS (dichloromethane extract from corn’s media): glyceril dihexadecanoate (1); glyceril trioctadec-9-enoate (2); sn1`, 2` glyceril octadec-9,12-dienoate (3); sn1`, 3` gliceryl octadec-9,12-dienoate (4); 6,11-hexadecanóic acid (5); geranyl linalool (6); and 7 by means of HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerin (8); sambutoxin (9); micosporin glycin (10); cyperin (11); micosporin serin (12); arginomicin (13) e aspergillomarasmin B (14). Compounds 2, 3 and 4, been the most abundant in the matrix, were isolated and individually characterized. Compounds 7-10 were also confirmed using 1H NMR by means of in situ elucidation

Resumo: Este trabalho trata da caracterização química de espécies de plantas brasileiras usadas no tratamento de disfunções gástricas. Nossa proposta envolve a investigação de extratos orgânicos polares e infusões por técnicas analíticas. Extração em fase sólida (SPE) e/ou extração líquido-líquido (LLE) foram utilizadas na etapa de clean-up para que açúcares livres e oligômeros de proantocianidinas fossem separados da matriz vegetal bruta. As amostras pré-tratadas foram então analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HLPC) acoplada com detector de arranjo de fotodiodos (PAD) ou por espectrometria de massas em tandem acoplado a um ion trap com interface de ionização por electrospray, usando o modo de inserção direta da amostra (FIA-ESI-IT-MS). Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários de plantas pertencentes às famílias Dilleniaceae (Davilla elliptica e D. nitida: flavonóides, catequinas, isoprenóides e ácidos fenólicos), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catequinas, ácidos fenólicos, procianidinas e oligômeros de procianidinas C-glucosiladas) e Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia e B. intermedia: flavonóides, biflavonóides, ácidos fenólicos, oligômeros de proantocianidinas e ácidos galoilquínicos). A determinação quantitativa dos principais metabólitos secundários também foi realizada, permitindo então a completa caracterização da composição química dos extratos de plantas. Assim, nossa proposta levou a uma caracterização química rápida e eficiente de espécies de plantas brasileiras usadas na medicina popular como antiúlcera. Estes resultados são úteis para um melhor entendimento das atividades farmacológicas das espécies de plantas acima mencionadas. / Abstract: This work deals with the chemical characterization of Brazilian plant species used to treat gastric disfunctions. Our approach involved the investigation of organic polar extracts and infusions by using analytical techniques. Solid-phase extraction (SPE) and/or liquid-liquid extraction (LLE) were used in the clean-up step, so that free sugars and proanthocyanidin oligomers were separated from the bulk of the vegetable matrix. The pre-treated samples were then analyzed by using high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to photodiode array (PAD) detector or by direct flow analysis - electrospray ionization - ion trap - tandem mass spectrometry (FIA-ESI-IT-MS). This strategy allowed to recognize the secondary metabolites from plants belonging to the families Dilleniaceae (Davilla elliptica and D. nitida: flavonoids, catechins, isoprenoids and phenolic acids), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catechins, phenolic acids, procyanidins and C-glycosilated procyanidins oligomers) and Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia and B. intermedia: flavonoids, biflavonoids, phenolics acids, proanthocyanidins oligomers and galloylquinic acids). Quantitative determination of the main secondary metabolites was also performed, thus allowing to fully characterization of the chemical composition of plant extracts. Thus, our approach led to a fast and efficient chemical characterization of Brazilian plant species used in folk medicine as antiulcer. These results are useful to the better understanding of the pharmacological activities of the above mentioned plant species. / Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Ian Castro-Gamboa / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Adriana Zerlotti Mercadante / Banca: Claudia Andréa Lima Cardoso / Doutor

O trabalho buscou investigar as variações sazonais de metabólitos secundários em Eremanthus glomerulatus Less (Asteraceae). Embora não ser utilizada para fins medicinais esta espécie contem substâncias biologicamente ativas. Para este estudo, foram selecionados dez indivíduos de uma mesma população localizada na região do município de Ibiraci - MG, que durante um período de aproximadamente dois anos (06/2000 a 04/2002) tiveram um de seus ramos coletados mensalmente. Visando a análise das folhas destes ramos uma metodologia para extração e análise de seus metabólitos secundários majoritários por CLAE-UV foi desenvolvida e utilizada para determinação de suas variações sazonais. A identificação destes metabólitos se deu principalmente pelas técnicas hifenadas CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM. Os metabólitos que não puderam ser identificados por estas ferramentas foram isolados do extrato etanólico foliar desta espécie e identificados por RMN de 1H e 13C e EM. Durante este estudo foi verificado que o envelhecimento das folhas resulta em uma significativa redução no conteúdo de todos os seus metabólitos secundários. Também foi possível identificar nove metabólitos secundários pertencentes as classes dos ácidos cafeoilquínicos, derivados fenólicos e flavonóides, dos quais foram isolados três, sendo dois ainda não relatados na literatura. Quanto a variação sazonal pode-se verificar que os indivíduos apresentam perfis metabólicos bem semelhante com diferenças quantitativas mas praticamente não apresentando variações qualitativas entre os indivíduos. Pode-se observar também que há um metabolismo bem diversificado no qual nem sempre todos os indivíduos apresentam aumento de produção de um mesmo metabólito em determinada estação do ano. Apesar das variáveis é possível definir o outono e a primavera como as estações que durante o estudo apresentaram os melhores índices de produção de praticamente todos os metabólitos analisados. Por fim pode-se concluir que as variações sazonais em E. glomerutalus são significativas e que são determinantes para definir a época de futuras coletas para posteriores estudos químicos ou farmacológicos. / This study was performed to investigate the seasonal intrapopulational variations of the secondary metabolites in Eremanthus glomerulatus Less (Asteraceae). Although this species is not used for medicinal purposes, it contains biologically active substances. For this study, ten individuals from the same population located in the region of Ibirici city, Minas Gerais state, had one of their lbranches collected monthly for about two years (from 06/2000 to 04/2002). Aiming the analysis of the leaves from the branches, a methodology on UV-HPLC was developed and used for the extraction and analysis of major secondary metabolites to determine the seasonal variations. The identification of the metabolites has occurred mainly by the HPLC-DAD-MS and HPLC-DAD-MS/MS hyphenated techniques. The metabolites that could not be identified by these methods were isolated from ethanolic extract of leaves of these species and identified by NMR 1H and 13C and MS. During this study it was noticed that the aging of the leaves results in a significant reduction on the rate of all the secondary metabolites. It was also possible to identify nine secondary metabolites belonging to caffeoylquinic acids, phenolical derivatives and flavonoids, from which, three compounds were isolated, however two compounds wasnt described in the literature. Relating to the seasonal variation, it was possible to verify that the individuals present similar metabolic profiles with quantitative differences but practically without qualitative difference. It was also possible to observe that there is a diversified metabolism in which not all individuals present an increase in the production of the same metabolite on a specific season. Despite these variations, it is possible to define autumn and spring as the seasons that presented the best rates of production on practically all the analyzed metabolites. Finally, it is possible to conclude that the seasonal variation of E. glomerutalus is significant and decisive to define the right time for future collection for further chemical and pharmacological studies.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:59:21Z : No. of bitstreams: 1 matos_ats_me_araiq.pdf: 1375011 bytes, checksum: 3b7c5c285726c09c787ab36e233d7573 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais (NuBBE) condensa, em suas atividades de pesquisa, o estudo de micromoléculas bioativas provenientes de plantas do Cerrado e Mata Atlântica Paulistas. Nos últimos anos o NuBBE investe no desenvolvimento de metodologias analíticas de derreplicação, utilizando diversas técnicas acopladas, tais como, CLAE/DEQ-DAD, EMAR/CLAE-DAD e EM/CLAE-DAD, para acelerar a escolha de extratos vegetais brutos. Técnicas analíticas de detecção in silico vêm sendo incorporadas às metodologias cromatográficas de construção de perfis micromoleculares, auxiliando na seleção apenas dos metabólitos de interesse presentes em matrizes brutas. Nesta dissertação foi abordado o estudo dos extratos de Strychnos brasiliensis e S. pseudoquina (Loganiaceae) através de bioensaios de atividade antioxidante e de inibição de polimerização da hematina. Esses bioensaios revelaram a fração acetato de etila, dos galhos de S. brasiliensis, como matriz promissora em ambos os testes assim como os galhos de S. pseudoquina com potencial atividade antioxidante. A fração acetato de etila dos galhos de S. brasiliensis e o extrato bruto das folhas de S. pseudoquina foram avaliados fazendo uso da técnica hifenada EMAR/CLAE-DAD. Como resultado desta análise, quatro micromoléculas foram elucidadas: a 10- hidroxi-17-O-metilacagerina para as folhas de S. pseudoquina, estricnohirsutina, 14,15,16-trinor-11-labden-13,8-oleído e acagerina para a fração acetato de etila dos galhos de S. brasiliensis. Além disso, foi construída uma base de dados que reúne algumas informações físico-químicas e espectroscópicas valiosas, ajudando na detecção e isolamento das substâncias presentes nas duas espécies de Strychnos, objeto do nosso estudo. / The Nuclei of Bioassays, Biosynthesis and Natural Products Ecophysiology (NuBBE) condenses in their research activities, the study of bioactive micromolecules from plants of the Cerrado and Atlantic Forest from São Paulo’s State. In recent years, NuBBE has increased efforts in the development of analytical dereplication methods using various coupled techniques such as HPLC/DAD-ECD, EMAR/DAD and HPLC-MS/HPLC-DAD, to speed-up the selection of crude plant extracts. In silico analytical techniques have been incorporated into chromatographic methodologies aiming to build micromolecular profiles, assisting in the selection only of metabolites of interest in crude matrixes. This dissertation aims the study of extracts from Strychnos brasiliensis and Strychnos pseudoquina (Loganiaceae) throughout bioassays of antioxidant activity and inhibition of polymerization of heme, which showed the ethyl acetate fraction from branches of S. brasiliensis, as a promising matrix in both in vitro tests as well as the branches of S. pseudoquina that showed potential antioxidant properties. The ethyl acetate fraction from Strychnos brasiliensis branches and the crude extract from leaves of Strychnos pseudoquina were evaluated using HRMS/HPLC-DAD. From that analysis, four structures have been elucidated: 10-hydroxy-17-O-methylakagerine, from leaves of S. pseudoquina, strychnohirsutine, 14,15,16-trinor-11-labden-13,8-olide and akagerine from the ethyl acetate fraction of branches from S. brasiliensis. In addition, we have built up a database that gathers information about the structures detected in this study, such as molecular weight, structure, molecular formula, mass spectrum, aiming to facilitate the structural as well as the total elucidation of molecules of interest.

O trabalho buscou investigar as variações sazonais de metabólitos secundários em Eremanthus glomerulatus Less (Asteraceae). Embora não ser utilizada para fins medicinais esta espécie contem substâncias biologicamente ativas. Para este estudo, foram selecionados dez indivíduos de uma mesma população localizada na região do município de Ibiraci - MG, que durante um período de aproximadamente dois anos (06/2000 a 04/2002) tiveram um de seus ramos coletados mensalmente. Visando a análise das folhas destes ramos uma metodologia para extração e análise de seus metabólitos secundários majoritários por CLAE-UV foi desenvolvida e utilizada para determinação de suas variações sazonais. A identificação destes metabólitos se deu principalmente pelas técnicas hifenadas CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM. Os metabólitos que não puderam ser identificados por estas ferramentas foram isolados do extrato etanólico foliar desta espécie e identificados por RMN de 1H e 13C e EM. Durante este estudo foi verificado que o envelhecimento das folhas resulta em uma significativa redução no conteúdo de todos os seus metabólitos secundários. Também foi possível identificar nove metabólitos secundários pertencentes as classes dos ácidos cafeoilquínicos, derivados fenólicos e flavonóides, dos quais foram isolados três, sendo dois ainda não relatados na literatura. Quanto a variação sazonal pode-se verificar que os indivíduos apresentam perfis metabólicos bem semelhante com diferenças quantitativas mas praticamente não apresentando variações qualitativas entre os indivíduos. Pode-se observar também que há um metabolismo bem diversificado no qual nem sempre todos os indivíduos apresentam aumento de produção de um mesmo metabólito em determinada estação do ano. Apesar das variáveis é possível definir o outono e a primavera como as estações que durante o estudo apresentaram os melhores índices de produção de praticamente todos os metabólitos analisados. Por fim pode-se concluir que as variações sazonais em E. glomerutalus são significativas e que são determinantes para definir a época de futuras coletas para posteriores estudos químicos ou farmacológicos. / This study was performed to investigate the seasonal intrapopulational variations of the secondary metabolites in Eremanthus glomerulatus Less (Asteraceae). Although this species is not used for medicinal purposes, it contains biologically active substances. For this study, ten individuals from the same population located in the region of Ibirici city, Minas Gerais state, had one of their lbranches collected monthly for about two years (from 06/2000 to 04/2002). Aiming the analysis of the leaves from the branches, a methodology on UV-HPLC was developed and used for the extraction and analysis of major secondary metabolites to determine the seasonal variations. The identification of the metabolites has occurred mainly by the HPLC-DAD-MS and HPLC-DAD-MS/MS hyphenated techniques. The metabolites that could not be identified by these methods were isolated from ethanolic extract of leaves of these species and identified by NMR 1H and 13C and MS. During this study it was noticed that the aging of the leaves results in a significant reduction on the rate of all the secondary metabolites. It was also possible to identify nine secondary metabolites belonging to caffeoylquinic acids, phenolical derivatives and flavonoids, from which, three compounds were isolated, however two compounds wasnt described in the literature. Relating to the seasonal variation, it was possible to verify that the individuals present similar metabolic profiles with quantitative differences but practically without qualitative difference. It was also possible to observe that there is a diversified metabolism in which not all individuals present an increase in the production of the same metabolite on a specific season. Despite these variations, it is possible to define autumn and spring as the seasons that presented the best rates of production on practically all the analyzed metabolites. Finally, it is possible to conclude that the seasonal variation of E. glomerutalus is significant and decisive to define the right time for future collection for further chemical and pharmacological studies.

Uma das principais características da família Asteraceae é sua capacidade de produzir uma grande diversidade de metabólitos secundários que podem possuir efeitos terapêuticos ou tóxicos. Para verificar a existência de variações inter e intrapopulacionais na sua composição metabólica secundária de Lychnophora granmongolense (Duarte) Semir & Leitão Filho e caracterização desses metabólitos foi desenvolvida uma metodologia analítica em CLAE DAD. Essa metodologia permitiu a identificação de três compostos, vicenina-2, quercetina e pinocembrina, através da coinjeção de padrões, ou seja, pela comparação do tempo de retenção com padrões previamente isolados associados com os dados do espectro no UV. Com a utilização da técnica de espectrometria de massas, CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM, foram identificadas quatro lactonas sesquiterpênicas (LST), centraterina, 4,5-di-idrocentraterina, lychnofolido e 15-desoxigoyazensolido. No estudo de variação populacional, os resultados indicaram grandes variações quantitativas e qualitativas tanto inter quanto intrapopulacionais para os metabólitos de alta e média polaridade. A análise dos metabólitos mais apolares presentes nas folhas permitiu a identificação de 8 triterpenos e 8 triterpenos acetilados. Contudo, esses metabólitos apresentam somente pequena variação que não é significativa. Assim, esse estudo contribuiu para o aumento do conhecimento sobre o ritmo metabólico dessa espécie. / One of the main characteristics of plants of the Asteraceae family is their capacity to produce a huge diversity of secondary metabolites having therapeutic and toxic effects. An analytical method was developed based on HPLCDAD which was used to verify the existence of variations in Lychnophora granmongolense (Duarte) Semir & Leitão Filho secondary metabolite levels among species within populations and between distinct populations and to characterize the major secondary metabolites. Through this method three compounds, namely vicenin-2, quercetin and pinocembrin were identified by co-injection of standards. This identification was based on the comparison of retention time with isolated standards and the UV spectrum. Four sesquiterpenes lactones centratherin, 4,5-dihydrocentratherin, lycnopholide and 15-deoxygoyazensolide were identified by mass spectrometry techniques coupled with HPLC (HPLC-DAD-MS e HPLC-DAD-MS/MS). In the populational variation study, the results show large qualitative and quantitative differences among species within populations and between populations for high and medium polarity secondary metabolites. Eight triterpenes and eight acetyl triterpenes were identified by apolar compound analysis. However, small, insignificant variation was observed for these particular metabolites. Thus, this study contributed to an increase in the knowledge of the metabolic rhythm of this specie.

A análise pelas técnicas hifenadas CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM de extratos foliares de Lychnophora ericoides Mart. levou à identificação de 34 metabólitos secundários diretamente a partir dos extratos vegetais. Destes, 19 foram relatados pela primeira vez na subtribo Lychnophorinae. Uma metodologia para extração e análise destes metabólitos por CLAE-DAD foi desenvolvida, validada e utilizada para determinação de suas variações populacionais e temporais. Perfis metabólicos bem semelhantes, com diferenças quantitativas, mas não qualitativas, foram observados entre os indivíduos de uma mesma população. Entre as cinco populações analisadas, foi observado um metabolismo secundário bem mais diversificado, caracterizado pela presença de lactonas sesquiterpênicas, nas plantas da população de Ibiraci-MG. As concentrações mais elevadas de ácidos cafeoilquínicos foram encontradas no período da seca no cerrado (inverno) e as menores quando a planta se encontrava florida. Os teores de flavonóides foram maiores durante o período de chuvas (verão) e os de C-glicosilflavonas e lactonas sesquiterpênicas se mantiveram estáveis. Variações circadianas significativas de flavonóides e ácidos cafeoilquínicos também foram observadas nas duas populações nas quais estes fatores foram estudados. Foi verificado que o envelhecimento das folhas resulta em uma pronunciada redução no conteúdo de todos os metabólitos secundários e concentrações menores dos metabólitos foram observadas nas folhas dos ramos floridos em relação aos ramos sem flores de um mesmo indivíduo. Finalmente, conclui-se que as variações temporais e populacionais observadas em L. ericoides podem ser determinantes para a intensidade da atividade antiinflamatória e/ou analgésica desta planta, utilizada popularmente para estes propósitos. / The analyses of Lychnophora ericoides Mart. leaves extracts by HPLC-DAD-MS and HPLC-DAD-MS/MS resulted in the identification of 34 secondary metabolites directly from the plant extracts. Nineteen of these metabolites are being reported for the first time in the Lychnophorinae subtribe. A method for the extraction and analyses of these metabolites by CLAE-DAD was developed, validated and employed for the determination of their populational and temporal variations. Very similar metabolic profiles, exhibiting quantitative but not qualitative differences, were found among each population individuals. Among the five studied populations, a more diversified secondary metabolism, characterized by sesquiterpene lactones presence, was observed for the plants collected at Ibiraci-MG. The highest concentrations of caffeoylquinic acids were found in the cerrado dry season (winter), and the lowest when the plants were blooming. The flavoinoid contents were higher during the rainy season (summer), while C-glucosylflavones and sesquiterpene lactones levels remained stable. Significant circadian variations were also detected regarding flavonoids and caffeoylquinic acids in the two populations analyzed on this respect. It was also found a pronounced reduction in the contents of all the secondary metabolites as the leaves get old. Lower levels of all the metabolites were also found for the flowery branches when compared to the non flowery ones in the same individual. Finally, it can be concluded that the temporal and populational variations detected in L. ericoides leaves could highly influence the intensity of the anti-inflammatory and/or analgesic activities of this plant, used in popular medicines for these purposes.