Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-20T17:46:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Paulo Biblioteca.pdf: 5289982 bytes, checksum: 296199c66ec4fbabe54d4a6992960ca7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T17:46:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Paulo Biblioteca.pdf: 5289982 bytes, checksum: 296199c66ec4fbabe54d4a6992960ca7 (MD5) Previous issue date: 2014-08-28 / O imiquimode é uma droga imunomoduladora que tem sido empregada no tratamento de neoplasias cutâneas. Sua ação em carcinoma oral não está bem definida. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do imiquimode, associado ou não ao LASER de baixa intensidade λ(808nm), em carcinomas orais induzidos quimicamente em camundongos. Vinte animais foram induzidos a carcinogênese através do N-óxido de 4-nitroquinoleína (4NQO) na água de beber. Após 16 semanas, foram divididos aleatoriamente em quatro grupos, com cinco camundongos cada. Os animais do grupo 1 (controle positivo) não receberam intervenção. No grupo 2 (Laser) os amimais foram irradiados com LASER de baixa intensidade (λ808nm), 12 aplicações em dias alternados. No grupo 3 (imiquimode) os animais receberam 12 aplicações de imiquimode creme em dias alternados. Já os animais do grupo 4 receberam as 12 aplicações do imiquimode seguidas da irradiação com o LASER. Ao final do tratamento os animais foram submetidos a eutanásia e as amostras encaminhadas para estudo histológico através de microscopia. Os resultados demonstraram a presença de tumores malignos em todos os grupos, tendo o G3 os maiores índices 100% e o G1, G2 e G4 60%. Além disso, segundo o grau histológico, o G3 apresentou diferença estatisticamente significante superior ao G1 (p=0,022). Neste trabalho, o tratamento com imiquimode potencializou o desenvolvimento dos carcinomas e o LASER estimulou a proliferação de células malignas. A associação do imiquimode com o LASER necessita de maiores investigações futuras. / Imiquimod is a drug used in cutaneous neoplasics treatment. Its mechanism of action in oral carcinoma is not well defined. The aims of this study were to evaluate the potential of 4- nitroquinoline 1-oxide (4NQO) to induce cancer, as well as, to investigate the effects of imiquimod and laser treatments applied to such lesions. 20 mice were randomly divided into four groups (n=5) and cancerous lesions induced with a 4NQO in drink water solution. In Group 1mice (control) lesions were not subjected to any form of treatment. In Group 2, the laser group, lesions were irradiated with a low density laser beam ((λ808nm) following the same protocol used for group 2. In Group 3, they were treated with 12 applications of imiquimod cream, administered locally on alternate days.In Group 4 mice, lesions were initially treated with imiquimod (12 applications) followed by laser irradiation. 2 days post-treatment, the mice were euthanized, dissected and tissue samples subjected to histological analysis by optical microscopy. The presence of malignant lesions was observed in all groups with a higher prevalence in Group 3 (100%) followed by Groups 1, 3 and 4 (60%). The 4NQO was effectiv in induce experimental oral carcinogenesis. Also, when compared to those of Group 1, Group 3 lesions were also of a higher histological grade (p=0.022) . These results suggest both that imiquimod does not reduce the occurence of SCCs and that laser treatment increased malignant cell proliferation. Additional atudies are needed for further clarification of the effects of combined imiquimode /laser treatment.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-07-31T19:06:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / PAPES/CNPq, CAPES / O melanoma é um tipo de tumor de pele com altas taxas de incidências por todo mundo. Buscando formas de terapia auxiliar, destaca-se o Imiquimode (IMIQ), um creme de uso tópico que atua no receptor tipo toll-7 (TLR-7) estimulando o sistema imune inato a promover atividades tumoricidas. No presente estudo o tumor de linhagem B16F0 foi inoculado na orelha dos camundongos, seguidos do tratamento com o creme IMIQ. A mortalidade e o desenvolvimento tumoral foram acompanhados, nos diferentes grupos experimentais. Após 12 dias de tratamento, baços e linfonodos cervicais foram removidos em grupos de animais tratados e não tratados. As células foram colocadas em cultivo, plaqueadas e marcadas para análise em citômetro de fluxo. Grupos tratados com IMIQ apresentaram considerável eficácia no aumento da sobrevida e na contenção do tumor. Além disso, foi demonstrado que a atividade antitumoral é dependente da molécula de CD1, comprovando a importância das células NKT no combate ao melanoma. Ademais, nos grupos tratados, houve maior produção de IFN-γ por linfócitos TCD8 esplênicos, e TNF-α por células TCD4 e TCD8 de linfonodos drenantes. Pôde-se ainda notar o aumento de granzima B (GZB) produzida por células dendríticas (DCs) no baço de animais com melanoma. Já na estimulação de esplenócitos com o mitógeno Concanavalina A, foi evidenciada inibição na produção de GZB por células dendríticas. Conclui-se que NKT pode ser a principal responsável pela migração dessa população celular e que a produção de GZB por DCs pode ser inibida mediante a presença de antígenos tumorais. / Melanoma is a type of skin tumor with high incidence rates worldwide. Aiming for forms of auxiliary therapy, Imiquimode (IMIQ), a topical cream that acts on the toll-7 receptor (TLR-7), stimulates the innate immune system to promote tumoricidal activities. In the present study the B16F0 lineage tumor was inoculated into the ears of the mice, followed by treatment with the IMIQ cream. Mortality and tumor development were monitored in the different experimental groups. After 12 days of treatment, spleens and cervical lymph nodes were removed in groups of treated and untreated animals. Cells were plated, plated and labeled for flow cytometer analysis. Groups treated with IMIQ showed considerable efficacy in increasing survival and tumor containment. In addition, it has been demonstrated that the antitumor activity is dependent on the CD1 molecule, proving the importance of NKT cells in the fight against melanoma. In addition, in the treated groups, there was a greater production of IFN-γ by splenic TCD8 lymphocytes, and TNF-α by TCD4 and TCD8 cells from draining lymph nodes. It was also possible to note the increase of granzyme B (GZB) produced by dendritic cells (DCs) in the spleen of animals with melanoma. Already in the stimulation of splenocytes with the mitogen Concanavalin A, inhibition was demonstrated in the production of GZB by dendritic cells. It is concluded that NKT may be the main responsible for the migration of this cell population and that the production of GZB by DCs can be inhibited by the presence of tumor antigens.

Esta tese se fundamenta na necessidade de novos tratamentos para o câncer do colo de útero visando o aumento da adesão dos pacientes aos tratamentos, assim como à qualidade de vida dos mesmos. Nesse sentido, formulações nanotecnológicas foram desenvolvidas com o objetivo de carrear o fármaco imiquimode para um local específico – a mucosa vaginal – esperando gerar melhores desempenhos nesse tratamento quando comparados com a formulação comercial. Três nanoestruturas com morfologias distintas foram propostas visando potencializar o efeito do fármaco em células de câncer cervical (SiHa). As formulações desenvolvidas compreenderam: nanoemulsões (NEimiq), nanocápsulas poliméricas (NCimiq) e nanocápsulas poliméricas revestidas com quitosana (NCimiq-chit). Observou-se que nanocápsulas poliméricas produzidas com poli(ε-caprolactona) apresentaram efeito mais pronunciado frente às células SiHa. Para tanto, essas formulações (NCimiq e NCimiq-chit) foram incorporadas em hidrogéis de quitosana e de hidroxietilcelulose a fim de possibilitar uma melhor futura aplicação para o paciente. Estudos envolvendo mucosa vaginal suína demonstraram que ambas as formulações são mucoadesivas e permeiam a mucosa vaginal. Porém, a formulação produzida com hidrogel de quitosana (NCimiq) apresentou maior desempenho. Esta foi a formulação escolhida para dar continuidade aos estudos deste trabalho, sendo objeto de estudo posterior em cultura de células SiHa a fim de elucidar o mecanismo de ação da mesma. Esses estudos demonstraram que há uma ocorrência de processos combinados de diminuição da viabilidade celular de maneira tempo-dependente e que mecanismos como apoptose, autofagia e parada de ciclo celular estão presentes. Essa formulação (NCimiq) apresentou porcentagens de morte celular significativas, mesmo utilizando baixas concentrações do fármaco. Portanto, os achados desta tese constataram que nanoestruturas modulam efetivamente a interação do fármaco com as células. / This thesis deals with the need of new treatments for cervical cancer in order to increase the adherence of patients to the treatment as well as to improve their quality of life. In this sense, nanotechnological formulations were developed to carry imiquimod to a specific site – the vaginal mucosa – expecting to obtain better performance than the commercial drug in the cervical cancer treatment. Three nanostructures with different morphologies were proposed to potentilize the drug effect on cervical cancer cells (SiHa). The developed formulations are: nanoemulsions (NEimiq), polymeric nanocapsules (NCimiq) and polymeric nanocapsules coated with chitosan (NCimiq-chit). It was observed that polymeric nanocapsules produced with poly(ε-caprolactone) presented a stronger effect against SiHa cells. Therefore, formulations NCimiq and NCimiq-chit were incorporated into hydrogels of chitosan and hydroxyethylcellulose to enable a better future application on patients. The studies of this thesis involving porcine vaginal mucosa demonstrated that both formulations are mucoadhesive and that they provided a good drug permeation. However, the formulation produced with chitosan hydrogel (NCimiq) showed a better performance. This formulation was therefore chosen to follow the next steps of this work, conducted in SiHa cell culture to elucidate its action mechanism. This study demonstrated that there is an occurrence of combined processes of decreasing cell viability in a time-dependent type. The study also showed that mechanisms such as apoptosis, autophagy and cell cycle arrest are simultaneously present. The formulation NCimiq presented a significantly percentage of cellular death, even when low concentrations of the drug were used. Consequently, the findings of this thesis indicate that nanostructures effectively modulate the interaction of the drug with the cancer cells.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-16T19:03:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Juliana Monteiro.pdf: 1193928 bytes, checksum: abe374149b8889e5c4b3f85c39e422b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-17T17:02:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Juliana Monteiro.pdf: 1193928 bytes, checksum: abe374149b8889e5c4b3f85c39e422b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-17T17:02:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Juliana Monteiro.pdf: 1193928 bytes, checksum: abe374149b8889e5c4b3f85c39e422b8 (MD5) / CNPQ / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do imiquimode e do laser (ʎ660nm) no câncer quimicamente induzido em mucosa oral de hamsters sírios dourados. Foram utilizados 25 hamsters nos quais as lesões de câncer foram quimicamente induzidas na mucosa jugal direita através de aplicações do carcinógeno DMBA (9,10-Dimetil-1,2-Benzantraceno) três vezes por semana, durante oito semanas. A distribuição dos animais foi feita aleatoriamente em cinco grupos de estudo, com cinco animais em cada (1) Controle I (sacrifício 48h após a carcinogênese química), (2) Controle II (sacrifício quatro semanas após a carcinogênese química), (3) Laser, (4) Imiquimode, (5) Imiquimode e laser. A terapia com imiquimode foi realizada três vezes semanais durante o período de quatro semanas e a fototerapia laser, a cada 48 horas pelo mesmo período, utilizando um Laser diodo (Bio Wave, Kondortech, São Paulo, SP, Brasil, λ660nm, 50mW, CW, 95 J/cm2, 6,65J, 714,2mW/cm2, 133s, ϕ 3mm, 0,07cm2). As amostras foram processadas usando coloração de rotina e imunoistoquímica para proteína S-100 visando à detecção de células dendríticas. Os resultados histológicos e imunoistoquímicos dos grupos controle e o grupo com laser resultaram em 100% de tumores malignos e ausência de células dendríticas S-100+ no estroma tumoral. O grupo tratado com imiquimode demonstrou 60% de animais sem malignidade, e presença de células dendríticas S-100+ tanto no estroma dos tumores, quanto nas displasias. E o grupo tratado com imiquimode e laser apresentou 40% de tumores malignos e células dendríticas S-100+ pouquíssimas ou ausentes. O tratamento com Imiquimode demonstrou a presença de lesões displásicas discretas, bem como um aumento do número de células dendríticas S-100+ nas áreas de lesão, e isto poderia significar uma maior ação do sistema imune no combate ao tumor, no entanto sua associação com o laser precisa ser melhor investigada. / Salvador

Esta tese se fundamenta na necessidade de novos tratamentos para o câncer do colo de útero visando o aumento da adesão dos pacientes aos tratamentos, assim como à qualidade de vida dos mesmos. Nesse sentido, formulações nanotecnológicas foram desenvolvidas com o objetivo de carrear o fármaco imiquimode para um local específico – a mucosa vaginal – esperando gerar melhores desempenhos nesse tratamento quando comparados com a formulação comercial. Três nanoestruturas com morfologias distintas foram propostas visando potencializar o efeito do fármaco em células de câncer cervical (SiHa). As formulações desenvolvidas compreenderam: nanoemulsões (NEimiq), nanocápsulas poliméricas (NCimiq) e nanocápsulas poliméricas revestidas com quitosana (NCimiq-chit). Observou-se que nanocápsulas poliméricas produzidas com poli(ε-caprolactona) apresentaram efeito mais pronunciado frente às células SiHa. Para tanto, essas formulações (NCimiq e NCimiq-chit) foram incorporadas em hidrogéis de quitosana e de hidroxietilcelulose a fim de possibilitar uma melhor futura aplicação para o paciente. Estudos envolvendo mucosa vaginal suína demonstraram que ambas as formulações são mucoadesivas e permeiam a mucosa vaginal. Porém, a formulação produzida com hidrogel de quitosana (NCimiq) apresentou maior desempenho. Esta foi a formulação escolhida para dar continuidade aos estudos deste trabalho, sendo objeto de estudo posterior em cultura de células SiHa a fim de elucidar o mecanismo de ação da mesma. Esses estudos demonstraram que há uma ocorrência de processos combinados de diminuição da viabilidade celular de maneira tempo-dependente e que mecanismos como apoptose, autofagia e parada de ciclo celular estão presentes. Essa formulação (NCimiq) apresentou porcentagens de morte celular significativas, mesmo utilizando baixas concentrações do fármaco. Portanto, os achados desta tese constataram que nanoestruturas modulam efetivamente a interação do fármaco com as células. / This thesis deals with the need of new treatments for cervical cancer in order to increase the adherence of patients to the treatment as well as to improve their quality of life. In this sense, nanotechnological formulations were developed to carry imiquimod to a specific site – the vaginal mucosa – expecting to obtain better performance than the commercial drug in the cervical cancer treatment. Three nanostructures with different morphologies were proposed to potentilize the drug effect on cervical cancer cells (SiHa). The developed formulations are: nanoemulsions (NEimiq), polymeric nanocapsules (NCimiq) and polymeric nanocapsules coated with chitosan (NCimiq-chit). It was observed that polymeric nanocapsules produced with poly(ε-caprolactone) presented a stronger effect against SiHa cells. Therefore, formulations NCimiq and NCimiq-chit were incorporated into hydrogels of chitosan and hydroxyethylcellulose to enable a better future application on patients. The studies of this thesis involving porcine vaginal mucosa demonstrated that both formulations are mucoadhesive and that they provided a good drug permeation. However, the formulation produced with chitosan hydrogel (NCimiq) showed a better performance. This formulation was therefore chosen to follow the next steps of this work, conducted in SiHa cell culture to elucidate its action mechanism. This study demonstrated that there is an occurrence of combined processes of decreasing cell viability in a time-dependent type. The study also showed that mechanisms such as apoptosis, autophagy and cell cycle arrest are simultaneously present. The formulation NCimiq presented a significantly percentage of cellular death, even when low concentrations of the drug were used. Consequently, the findings of this thesis indicate that nanostructures effectively modulate the interaction of the drug with the cancer cells.

Esta tese se fundamenta na necessidade de novos tratamentos para o câncer do colo de útero visando o aumento da adesão dos pacientes aos tratamentos, assim como à qualidade de vida dos mesmos. Nesse sentido, formulações nanotecnológicas foram desenvolvidas com o objetivo de carrear o fármaco imiquimode para um local específico – a mucosa vaginal – esperando gerar melhores desempenhos nesse tratamento quando comparados com a formulação comercial. Três nanoestruturas com morfologias distintas foram propostas visando potencializar o efeito do fármaco em células de câncer cervical (SiHa). As formulações desenvolvidas compreenderam: nanoemulsões (NEimiq), nanocápsulas poliméricas (NCimiq) e nanocápsulas poliméricas revestidas com quitosana (NCimiq-chit). Observou-se que nanocápsulas poliméricas produzidas com poli(ε-caprolactona) apresentaram efeito mais pronunciado frente às células SiHa. Para tanto, essas formulações (NCimiq e NCimiq-chit) foram incorporadas em hidrogéis de quitosana e de hidroxietilcelulose a fim de possibilitar uma melhor futura aplicação para o paciente. Estudos envolvendo mucosa vaginal suína demonstraram que ambas as formulações são mucoadesivas e permeiam a mucosa vaginal. Porém, a formulação produzida com hidrogel de quitosana (NCimiq) apresentou maior desempenho. Esta foi a formulação escolhida para dar continuidade aos estudos deste trabalho, sendo objeto de estudo posterior em cultura de células SiHa a fim de elucidar o mecanismo de ação da mesma. Esses estudos demonstraram que há uma ocorrência de processos combinados de diminuição da viabilidade celular de maneira tempo-dependente e que mecanismos como apoptose, autofagia e parada de ciclo celular estão presentes. Essa formulação (NCimiq) apresentou porcentagens de morte celular significativas, mesmo utilizando baixas concentrações do fármaco. Portanto, os achados desta tese constataram que nanoestruturas modulam efetivamente a interação do fármaco com as células. / This thesis deals with the need of new treatments for cervical cancer in order to increase the adherence of patients to the treatment as well as to improve their quality of life. In this sense, nanotechnological formulations were developed to carry imiquimod to a specific site – the vaginal mucosa – expecting to obtain better performance than the commercial drug in the cervical cancer treatment. Three nanostructures with different morphologies were proposed to potentilize the drug effect on cervical cancer cells (SiHa). The developed formulations are: nanoemulsions (NEimiq), polymeric nanocapsules (NCimiq) and polymeric nanocapsules coated with chitosan (NCimiq-chit). It was observed that polymeric nanocapsules produced with poly(ε-caprolactone) presented a stronger effect against SiHa cells. Therefore, formulations NCimiq and NCimiq-chit were incorporated into hydrogels of chitosan and hydroxyethylcellulose to enable a better future application on patients. The studies of this thesis involving porcine vaginal mucosa demonstrated that both formulations are mucoadhesive and that they provided a good drug permeation. However, the formulation produced with chitosan hydrogel (NCimiq) showed a better performance. This formulation was therefore chosen to follow the next steps of this work, conducted in SiHa cell culture to elucidate its action mechanism. This study demonstrated that there is an occurrence of combined processes of decreasing cell viability in a time-dependent type. The study also showed that mechanisms such as apoptosis, autophagy and cell cycle arrest are simultaneously present. The formulation NCimiq presented a significantly percentage of cellular death, even when low concentrations of the drug were used. Consequently, the findings of this thesis indicate that nanostructures effectively modulate the interaction of the drug with the cancer cells.

A psoríase é uma doença inflamatória crônica, de alta incidência mundial, caracterizada por lesões de pele e prurido. Achados prévios do grupo mostraram que a administração i.p. do doador lento de sulfeto de hidrogênio (H2S), GYY4137, inibiu significativamente a inflamação cutânea e coceira em animais com psoríase. Assim, neste estudo avaliou-se o efeito terapêutico de uma nanodispersão tópica contendo GYY4137 sobre a psoríase induzida por imiquimode em camundongos e, comparou-se farmacologicamente o efeito do GYY4137 versus dexametasona. Animais controle ou psoríase foram tratados (1 e 2x/dia) com a nanodispersão (65 mg) contendo GYY4137, dexametasona ou apenas veículo. A aplicação tópica da nanodispersão com o GYY4137 (4%) 2x/dia, foi mais efetiva e reduziu de forma significativa o rubor, espessura, células sanguíneas totais, MPO e níveis de IL-6 e IL-1β. Os efeitos farmacológicos promovidos pelo H2S foram semelhantes aos da dexametasona, porém, a nanodispersão contendo GYY4137 demonstrou efeitos sistêmicos menos pronunciados quando comparada ao glicocorticóide. / Psoriasis is a chronic inflammatory disease, with high incidence worldwide and, characterized by skin lesions and intense itching. Previous findings of this group showed that systemic administration of the slow donor release of hydrogen sulfide (H2S), GYY4137, significantly inhibited skin inflammation and itching in mice with psoriasis. Thus, this study evaluated the therapeutic effect of a topical nanodispersion containing GYY4137 on the Imiquimod-induced psoriasis mice model and compared pharmacologically the effect of GYY4137 versus dexamethasone. Control or psoriasis animals were treated (1 and 2x/day) with nanodispersion (65 mg) containing GYY4137, dexamethasone, or just vehicle. Topical application of the nanodispersion with GYY4137 (4%) 2x/day was more effective and significantly reduced redness, thickness, total blood cells, MPO, and IL-6 and IL-1β levels. The pharmacological effects caused by H2S were similar to those of dexamethasone, however, the nanodispersion containing GYY4137 demonstrated less systemic effects when compared to glucocorticoid.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-06-22T19:23:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Marina França Dias - 2018.pdf: 4770115 bytes, checksum: 86e73a57e2ce0a02cb1666dfe5988ce3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-06-27T11:09:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Marina França Dias - 2018.pdf: 4770115 bytes, checksum: 86e73a57e2ce0a02cb1666dfe5988ce3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-27T11:09:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Marina França Dias - 2018.pdf: 4770115 bytes, checksum: 86e73a57e2ce0a02cb1666dfe5988ce3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-04-11 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Skin cancer has the highest incidence among all types of neoplasms and the tendency is the increasing number of new cases in next decades, wich makes necessary new modalities and treatment options. Chemotherapeutic agent imiquimod is used in treatment of disease, but the high occurrence of local and systemic adverse effects associated with its use as well as its low skin permeation impair adherence and therapeutical effectiveness, respectively. The aim of the present work was evaluate the antitumor activity of nanocapsules imiquimod-loaded compared to its commercial product in murine model of skin cancer. Polymeric nanocapsules containing imiquimod, in the absence and presence of chitosan coating, were obtained by the precipitation of preformed polymer technique and characterized by encapsulation efficiency, size, zeta potential, pH, morphology (transmission electron microscopy and scanning), optical scanning spectrophotometry and in vitro release through dialysis membrane in pH 5.6 buffer. Presence of chemical interactions between formulation components was evaluated by thermogravimetric analysis and infrared spectroscopy. Detection of crystalline structures was performed by X-ray diffractometry. The nanocapsules and commercial imiquimod formulation antiagiogenic activity was determined in a chicken embryo chorioallantoic membrane model. Cutaneous permeation of nanocapsules imiquimod-loaded and commercial imiquimod was determined in Swiss albino mice. The chemopreventive activity of colloidal dispersions and the commercial imiquimod was evaluated through the tumoral inhibition promoted by these treatments in a multi- stage model of chemical carcinogenesis in Swiss mice. Encapsulation efficiency, mean diameter, zeta potential and pH of uncoated nanocapsules imiquimod-loaded were 92.5% ± 0.4; 249 ± 22.4 nm; -40.1 mV ± 3.7 and 5.4 ± 0.01 respectively, whereas for nanocapsules with cationic coating the parameters found were: 88.6 ± 2.3%; 287.0 ± 12.6 nm; + 11.3 ± 0.5 mV and 3.7 ± 0.0, respectively. The formulations morphology obtained by scanning and transmission electron microscopy images confirmed the presence of nanocapsules. In the stability analysis by optical scanning spectrophotometry (Turbiscan), all dispersions obtained a backscattering variation less than 2% over 5 weeks and were considered stable. In the in vitro release assay, imiquimod-loaded nanoparticles obtained slower release of the drug compared to free and commercial imiquimod. There were chemical interactions between chitosan and other formulation components evaluated by thermogravimetric and infrared studies. No crystalline structure was detected by the X-ray diffraction technique for the coated and uncoated imiquimod formulation. The dispersion of nanocapsules containing imiquimod presented antiangiogenic activity superior than commercial formulation in chicken embryo chorioallantoic membrane model. Nanocapsules containing imiquimod both uncoated and coated with chitosan presented cutaneous permeation in deep layers of the skin and inhibition in the chemically induced carcinogenicity process superior than tumor control group and groups treated with placebo nanoparticles while the commercial formulation presented retention of the drug in superficial layers of the skin and did not obtain a statistically significant reduction in the number of papillomas formed compared to the carcinogenic control. These results allow to conclude, therefore, that stable nanocarreadores were obtained and the chemopreventive activity and the antiangiogenic effect of these systems represent a promising alternative for the treatment of cutaneous neoplasias. / O câncer de pele é o de maior incidência dentre todos os tipos de neoplasias e a tendência é o aumento crescente do número de novos casos nas próximas décadas, tornando necessárias novas modalidades e opções de tratamento. O agente quimio-terápico imiquimode é utilizado no tratamento da doença, mas a elevada ocorrência de efeitos adversos locais e sistêmicos associados ao seu uso bem como sua baixa permeação cutânea prejudicam a adesão e a efetividade terapêutica, respectiva-mente. O objetivo do presente trabalho foi comparar a atividade quimiopreventiva do imiquimode veiculado em nanocápsulas com a da sua forma comercial, em modelo murino de câncer de pele. Nanocápsulas poliméricas contendo o imiquimode, na ausência e presença de revestimento de quitosana, foram obtidas pela técnica de precipitação do polímero pré-formado e caracterizadas quanto à eficiência de encap-sulação, ao tamanho, ao potencial zeta, ao pH, à morfologia (microscopia eletrônica de transição e varredura), à espectrofotometria de varredura óptica e à liberação in vitro através de membrana de diálise em tampão pH 5,6. A presença de interações entre componentes da formulação foi avaliada por meio de análises termogravimé- tricas e por espectroscopia na região do infravermelho. A detecção de estruturas cristalinas nas formulações foi realizada por difratometria de raios X. A atividade antiangiogênica das nanocápsulas obtidas, bem como da formulação comercial do imiquimode, foi determinada em modelo de membrana corioalantoica de embrião de galinha. A permeação cutânea das nanopartículas e do imiquimode comercial foi determinada em camundongos Swiss. A atividade quimiopreventiva das nanocápsulas obtidas e a do imiquimode comercial foi avaliada por meio da inibição tumoral promovida por esses tratamentos em modelo de carcinogênese química em camundongos Swiss. A eficiência de encapsulação, o diâmetro médio, o potencial zeta e o pH das nanocápsulas não revestidas contendo imiquimode foram respectivamente de 92,5% ± 0,4; 249 ± 22,4 nm; -40,1 mV ± 3,7 e 5,4 ± 0,01. Enquanto que, para as nanocápsulas com recobrimento catiônico os parâmetros encontrados foram 88,6 ± 2,3%; 287,0 ± 12,6 nm; +11,3 ± 0,5 mV e 3,7 ± 0,0, respectivamente. A morfologia das formulações, obtida pelas imagens de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão, confirmou a presença de nanocápsulas. Nas análises de estabilidade por espectrofotometria de varredura óptica (Turbiscan), todas as dispersões obtiveram variação de retroespalhamento inferior a 2%, no período de cinco semanas, sendo consideradas estáveis. No ensaio de liberação in vitro, as nanopartículas contendo imiquimode obtiveram liberação mais lenta do fármaco comparativamente ao imiquimode livre (em solução) e ao imiquimode comercial. Foram verificadas interações entre a quitosana e os demais componentes das formulações nos estudos termogravimétricos e na espectroscopia na região do infravermelho. Não foi detectada presença de estrutura cristalina com emprego da técnica de difratometria de raios X para a formulações contendo imiquimode com e sem revestimento. A dispersão de nanocápsulas contendo imiquimode apresentou atividade antiangiogênica superior à da formulação comercial em modelo de membrana corioalantoica de embrião de galinha. As nanocápsulas contendo imi-quimode com e sem revestimento apresentaram permeação cutânea em camadas profundas da pele e inibição no processo de carcinogênese quimicamente induzido superior à do grupo-controle tumoral e à dos grupos tratados com nanopartículas placebo, enquanto a formulação comercial apresentou retenção do fármaco em camadas mais superficiais da pele e não obteve redução estatisticamente significativa no número de papilomas formados em relação ao controle cancerígeno. Esses resultados permitem concluir, portanto, que nanocarreadores estáveis foram obtidos e que a atividade quimiopreventiva e o efeito antiangiogênico desses sistemas representam uma alternativa promissora para o tratamento de neoplasias cutâneas.

Orientador: Francisco Benedito Teixeira Pessine / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:10:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guedes_LucianadeSouza_M.pdf: 5716470 bytes, checksum: 363ce3e7be504393ef2dcd6d349ed421 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O Imiquimod é um fármaco com propriedades imunomodulatórias, disponível na forma de creme para tratamento tópico de certas patologias da pele como carcinoma basocelular e ceratose actínica. O contato direto do medicamento com a pele pode causar desconforto durante o tratamento. Uma das alternativas para minimizar os efeitos adversos é a utilização de sistemas carreadores que evitam o contato direto do agente com a pele. A ?-ciclodextrina foi empregada como agente carreador neste estudo e o complexo de inclusão obtido foi caracterizado em solução e no estado sólido. As técnicas espectroscópicas de absorção UV/Vis e ressonância magnética nuclear foram utilizadas para caracterizar o complexo de inclusão em solução. Essas técnicas permitiram obter a constante de equilíbrio de associação (Kc), a estequiometria do complexo formado e evidências de sua geometria. A caracterização do complexo no estado sólido foi realizada por calorimetria diferencial de varredura, termogravimetria, difração de raios X e microscopia eletrônica de varredura. Os resultados indicaram a presença de estrutura amorfa que pode ser atribuída a amorfização dos componentes devido à liofilização do complexo e também à formação do complexo de inclusão. A estrutura tridimensional do complexo obtida por modelagem molecular apresentou concordância com os resultados experimentais observados pela técnica de RMN 1H ROESY 1D. Os valores baixos de Kc e da eficiência de complexação indicam fraca interação entre o Imiquimod e a ?-ciclodextrina. Os resultados demonstram que a ?-ciclodextrina não é o sistema carreador mais adequado para aumentar a solubilidade aquosa do Imiquimod / Abstract: Imiquimod, an immune response modifier, is used for topical treatment of basal cell carcinoma and actinic keratosis. Local skin reactions can occur in the treatment area. An alternative to minimize adverse events is to use drug delivery systems which avoid drug skin contact. ?-cyclodextrin was used as drug delivery system in this study and the inclusion complex was characterized in solution and in solid state. UV/Vis absorption spectroscopy and nuclear magnetic resonance were employed to study the inclusion complex in solution. Those techniques allowed to obtain the equilibrium constant (Kc), the complex stoichiometry and insight on the geometry. The inclusion complex characterization in solid state was performed by differential scanning calorimetry, thermogravimetry, X-ray diffraction and scanning electron microscopy. The results suggest the presence of amorphous structure which can be attributed not only to components amorphization due to lyophilization but also to complex formation. The complex tridimensional geometry was obtained by molecular modeling and agrees with the experimental results observed by NMR 1H ROESY 1D experiments. The low values of Kc and complex efficiency suggest weak interaction between Imiquimod and ?-cyclodextrin. In addition to those, the results showed that ?-cyclodextrin is not the most suitable drug delivery system to improve Imiquimod aqueous solubility / Mestrado / Físico-Química / Mestra em Química