Objetivos: Determinar a reatividade dos soros e determinação dos isotipos IgG e IgE a proteínas de sementes da dieta de crianças com alergia ao leite de vaca IgE mediada. Métodos: Foram avaliados soros de três grupos de crianças: alérgicas ao leite de vaca IgE mediada, crianças tolerantes ao leite e um grupo controle com crianças não atópicas. Foram usados extratos protéicos de diferentes tipos de sementes utilizando o teste de ELISA para análise da reatividade dos isotipos IgG e IgE. Resultados: Comparando as concentrações séricas de IgG dos diferentes grupos, observou-se concentrações mais elevadas e estatisticamente significante no grupo alérgico em relação aos grupos tolerante e controle, exceto para as sementes de soja e feijão roxinho. Em relação ao isotipo IgE observou-se os mesmos padrões de reatividade mostradas nas analises para IgG, com diferença significante do grupo alérgico em relação ao controle, exceto para milho. Observou-se que para a soja houve grande dispersão das concentrações séricas tanto no grupo alérgico quanto no tolerante, em valores superiores ao do grupo controle. Conclusão: A comparação entre os diversos grupos avaliados mostra que pacientes alérgicos ao leite e os tolerantes apresentam concentrações mais elevadas de IgG e IgE a outros alimentos que as crianças do grupo controle, o que pode sugerir possível alteração de permeabilidade da mucosa intestinal nestes grupos, mesmo na ausência de sintomatologia gastrintestinal / Objective: To determine the reactivity of serum and determination of IgG and IgE isotypes to seed proteins included in the diet of children with cow\'s milk allergy IgE mediated. Methods: We evaluated sera from three groups of children: cow\'s milk allergic patients, tolerant children and a control group with non-atopic children. It was used protein extracts from different types of seeds using an ELISA assay to analyze the reactivity of IgG and IgE isotypes. Results: Comparing the IgG serum from different groups, it was observed higher concentrations and statistically significant in the allergic group compared to the tolerant and control groups, except for soybeans and kidney beans. To the IgE isotype it was observed the same patterns of reactivity shown in the analysis for IgG, with significant difference in the allergic group compared to control, except for corn. It was observed that for soybeans there were values of serum, both in the allergic and tolerant group higher than in the control group. Conclusion: Our study showed that the allergic and tolerant groups of CMA patients presented higher IgG and IgE concentrations to many seeds than the control group. These findings may suggest possible changes in permeability intestinal mucosa in these groups

Objetivos: Determinar a reatividade dos soros e determinação dos isotipos IgG e IgE a proteínas de sementes da dieta de crianças com alergia ao leite de vaca IgE mediada. Métodos: Foram avaliados soros de três grupos de crianças: alérgicas ao leite de vaca IgE mediada, crianças tolerantes ao leite e um grupo controle com crianças não atópicas. Foram usados extratos protéicos de diferentes tipos de sementes utilizando o teste de ELISA para análise da reatividade dos isotipos IgG e IgE. Resultados: Comparando as concentrações séricas de IgG dos diferentes grupos, observou-se concentrações mais elevadas e estatisticamente significante no grupo alérgico em relação aos grupos tolerante e controle, exceto para as sementes de soja e feijão roxinho. Em relação ao isotipo IgE observou-se os mesmos padrões de reatividade mostradas nas analises para IgG, com diferença significante do grupo alérgico em relação ao controle, exceto para milho. Observou-se que para a soja houve grande dispersão das concentrações séricas tanto no grupo alérgico quanto no tolerante, em valores superiores ao do grupo controle. Conclusão: A comparação entre os diversos grupos avaliados mostra que pacientes alérgicos ao leite e os tolerantes apresentam concentrações mais elevadas de IgG e IgE a outros alimentos que as crianças do grupo controle, o que pode sugerir possível alteração de permeabilidade da mucosa intestinal nestes grupos, mesmo na ausência de sintomatologia gastrintestinal / Objective: To determine the reactivity of serum and determination of IgG and IgE isotypes to seed proteins included in the diet of children with cow\'s milk allergy IgE mediated. Methods: We evaluated sera from three groups of children: cow\'s milk allergic patients, tolerant children and a control group with non-atopic children. It was used protein extracts from different types of seeds using an ELISA assay to analyze the reactivity of IgG and IgE isotypes. Results: Comparing the IgG serum from different groups, it was observed higher concentrations and statistically significant in the allergic group compared to the tolerant and control groups, except for soybeans and kidney beans. To the IgE isotype it was observed the same patterns of reactivity shown in the analysis for IgG, with significant difference in the allergic group compared to control, except for corn. It was observed that for soybeans there were values of serum, both in the allergic and tolerant group higher than in the control group. Conclusion: Our study showed that the allergic and tolerant groups of CMA patients presented higher IgG and IgE concentrations to many seeds than the control group. These findings may suggest possible changes in permeability intestinal mucosa in these groups

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2006. / Härtill 4 uppsatser.

O objetivo desse trabalho foi avaliar a concentração de imunoglobulina G (IgG), a sobrevivência e o ganho de peso de leitões com baixo peso ao nascimento durante a lactação, de acordo com a quantidade de colostro ingerida com ou sem um suplemento proteico-energético (SPE). Leitões com peso ao nascimento variando de 800 a 1200 g (média de 1025,2 ± 8,15 g) foram submetidos, nas primeiras 24 h, a diferentes tratamentos: CM (n=30) e CMS (n=30) compostos por leitões que ficaram com suas mães biológicas em baias convencionais, sem e com SPE, respectivamente; D120 (n=30) e D120S (n=30) compostos por leitões que receberam 120 mL (30 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente; D200 (n=29) e D200S (n=27) formados por leitões que receberam 200 mL (50 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente. Os leitões dos tratamentos CMS, D120S e D200S receberam 4 mL do SPE nas primeiras 24 horas. Os leitões foram selecionados de fêmeas de ordem de parto (OP) 2 a 7 (média de 3,9 ± 0,11), e o intervalo médio entre o nascimento e a ingestão ou fornecimento de colostro foi 100,3 ± 3,6 minutos. Os leitões dos tratamentos D120, D120S, D200 e D200S foram alimentados com colostro procedente de um pool de colostro. Os leitões foram colocados para mamar em mães adotivas de ordem de parto (OP) 2 a 5 (média de 3,0 ± 0,08), em leitegadas contendo dois leitões de cada tratamento, perfazendo um total de 12 leitões. Os leitões foram pesados individualmente ao nascimento, 24h após e, também, aos 7, 14 e 20 dias de vida. A duração média da lactação foi de 20,4 ± 0,06 dias. A concentração de IgG no soro dos leitões D200 e D200S foi superior à dos leitões CM, D120 e D120S (P<0,05), enquanto que os leitões CMS e D200 tiveram concentração de IgG similar (P>0,05). O maior ganho de peso nas primeiras 24 h foi observado no tratamento CMS, ao passo que os tratamentos D120 e D120S tiveram perda de peso neste período (P<0,05). O ganho de peso diário durante o período de lactação e o peso aos 7, 14 e 20 dias foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Os leitões D120 apresentaram maior taxa de mortalidade durante a lactação do que os leitões CMS, D120S, D200 e D200S (P<0,05). O fornecimento de 200 mL de colostro ou de suplemento proteico-energético são alternativas que garantem maior concentração de IgG sérica, ganho de peso nas primeiras 24 h de vida e maior sobrevivência. / The aim of this study was to evaluate the concentration of immunoglobulin G (IgG), survival and weight gain of low birth weight piglets according to the amount of colostrum intake and the supplementation of an oral protein and energy supplement (OPES). Piglets with an range birth weight of 800 to 1200 g (average of 1025.2 ± 8.15 g) were submitted during the first 24 h to one different treatments: WS (n=30) and WSS (n=30) consisted of piglets suckling in their mothers in conventional farrowing crates, with or without OPES, respectively; D120 (n=30) and D120S (n=30) consisted of piglets fed 120 mL (30 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively; D200 (n=29) and D200S (n=27) consisted of piglets fed 200 mL (50 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively. The piglets on WSS, D120S and D200S received 4 mL of OPES on the first 24 hours after birth. Piglets were selected from sows of parity 3.9 ± 0.11 (range of 2 to 7), and the average time lapse between birth and first colostrum intake or gavage was 100.3 ± 3.6 minutes. Piglets of treatments D120, D120S, D200 and D200S received colostrum from a colostrum pool. All animals were individually weighed at birth and after the first 24 h of life. They were cross-fostered for suckling in foster mothers parity order (OP) range of 2 to 5 (average OP 3.0 ± 0.08), and each litter remained with 12 piglets, two of each treatment. Piglets were weighed again at 7, 14 and 20 days of life, and lactation length was of 20.4 ± 0.06 days. Serum concentration of IgG in the piglets was greater in D200 and D200S than in CM, D120 and D120S treatments (P<0.05), whereas CMS and D200 piglets had similar (P>0.05) IgG concentration. The greatest weight gain during the first 24 h was observed in CMS piglets, whereas D120 and D120S piglets lost weight (P<0.05). The average daily gain during lactation, as well as body weight at 7, 14 and 20 days were similar (P>0.05) among treatments. Piglets from the D120 treatment showed higher mortality rate during lactation than CMS, D120S, D200 and D200S piglets (P<0.05). Hence, the supply of 200 mL of colostrum or an energy and protein supplement are options which assure greater IgG concentration, weight gain in the first 24 h of life, and higher survival.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:51:05Z : No. of bitstreams: 1 rocha_tg_me_jabo.pdf: 837046 bytes, checksum: f72346486eb135d1df17c2bfd41fd6ee (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do estudo foi avaliar a transferência de imunidade passiva (TIP) de vacas Canchim aos seus bezerros. Um grupo experimental foi constituído por 13 vacas primíparas e seus bezerros, e o outro por 13 vacas pluríparas e seus bezerros. Foram coletadas amostras de sangue venoso dos bezerros e secreções lácteas das vacas até 1 hora e 1, 2, 7, 15 e 30 dias após o nascimento/parto. No hemograma, notaram-se alterações características do período neonatal, como redução na contagem de hemácias, teor de hemoglobina e volume globular após a ingestão do colostro, além de aumento na contagem de linfócitos e redução da contagem de neutrófilos segmentados. Os exames bioquímicos séricos revelaram aumento nas atividades de GGT (até 3.746 U/L) e ALP (até 1.030 U/L) e nos teores de proteína total (até 7,77 g/dL), globulinas (até 6,01 g/dL), IgA (até 322 mg/dL) e IgG (até 2.918 mg/dL) após a ingestão do colostro, seguidos por redução gradual nestes parâmetros até os 30 dias de idade. As avaliações bioquímicas das secreções lácteas revelaram alta concentração de todos os componentes colostrais analisados, com redução gradual nos seus teores no decorrer do período experimental, à exceção dos minerais, cujas concentrações oscilaram pouco entre os momentos. A TIP foi eficiente em ambos os grupos de bezerros, e a qualidade das secreções lácteas, embora diferentes entre vacas primíparas e pluríparas, não interferiu na passagem de imunoglobulinas da vaca para o bezerro. / The aim of this study was to evaluate the passive immunity transfer from Canchim cows to its calves. One experimental group comprised 13 primiparous cows and its calves and the other group, 13 multiparous cows and its calves. Samples of calves’ venous blood and cow`s lacteal secretions were collected until 1 hour and 1, 2, 7, 15 and 30 days after birth/parturition. In the hemogram, characteristic alterations of this period, such as reduction in the erytocyte count, hemoglobin concentration and corpuscular volume after colostrum intake and rise in the lymphocyte count and reduction in the neutrophil count were noticed. The serum biochemistry revealed augmentation in the GGT (up to 3,746 U/L) and ALP (up to 1,030 U/L) activities and in the total protein (up to 7.77 g/dL), globulin (up to 6.01 g/dL), IgA (up to 322 mg/dL) and IgG (up to 2,918 mg/dL) concentrations after colostrum intake, followed by a gradual reduction in these parameters until 30 days of age. The biochemical evaluation of the lacteal secretions revealed high concentrations of all the colostral components analysed, with gradual reduction in their concentrations along the experimental period, except for the minerals, which showed little oscillation between the moments. The passive immunity transfer was efficient in both groups of calves, and the quality of the lacteal secretions, although different between primiparous and multiparous cows, did not interfere in the transference of immunoglobulins from the cows to the calves.

O objetivo desse trabalho foi avaliar a concentração de imunoglobulina G (IgG), a sobrevivência e o ganho de peso de leitões com baixo peso ao nascimento durante a lactação, de acordo com a quantidade de colostro ingerida com ou sem um suplemento proteico-energético (SPE). Leitões com peso ao nascimento variando de 800 a 1200 g (média de 1025,2 ± 8,15 g) foram submetidos, nas primeiras 24 h, a diferentes tratamentos: CM (n=30) e CMS (n=30) compostos por leitões que ficaram com suas mães biológicas em baias convencionais, sem e com SPE, respectivamente; D120 (n=30) e D120S (n=30) compostos por leitões que receberam 120 mL (30 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente; D200 (n=29) e D200S (n=27) formados por leitões que receberam 200 mL (50 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente. Os leitões dos tratamentos CMS, D120S e D200S receberam 4 mL do SPE nas primeiras 24 horas. Os leitões foram selecionados de fêmeas de ordem de parto (OP) 2 a 7 (média de 3,9 ± 0,11), e o intervalo médio entre o nascimento e a ingestão ou fornecimento de colostro foi 100,3 ± 3,6 minutos. Os leitões dos tratamentos D120, D120S, D200 e D200S foram alimentados com colostro procedente de um pool de colostro. Os leitões foram colocados para mamar em mães adotivas de ordem de parto (OP) 2 a 5 (média de 3,0 ± 0,08), em leitegadas contendo dois leitões de cada tratamento, perfazendo um total de 12 leitões. Os leitões foram pesados individualmente ao nascimento, 24h após e, também, aos 7, 14 e 20 dias de vida. A duração média da lactação foi de 20,4 ± 0,06 dias. A concentração de IgG no soro dos leitões D200 e D200S foi superior à dos leitões CM, D120 e D120S (P<0,05), enquanto que os leitões CMS e D200 tiveram concentração de IgG similar (P>0,05). O maior ganho de peso nas primeiras 24 h foi observado no tratamento CMS, ao passo que os tratamentos D120 e D120S tiveram perda de peso neste período (P<0,05). O ganho de peso diário durante o período de lactação e o peso aos 7, 14 e 20 dias foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Os leitões D120 apresentaram maior taxa de mortalidade durante a lactação do que os leitões CMS, D120S, D200 e D200S (P<0,05). O fornecimento de 200 mL de colostro ou de suplemento proteico-energético são alternativas que garantem maior concentração de IgG sérica, ganho de peso nas primeiras 24 h de vida e maior sobrevivência. / The aim of this study was to evaluate the concentration of immunoglobulin G (IgG), survival and weight gain of low birth weight piglets according to the amount of colostrum intake and the supplementation of an oral protein and energy supplement (OPES). Piglets with an range birth weight of 800 to 1200 g (average of 1025.2 ± 8.15 g) were submitted during the first 24 h to one different treatments: WS (n=30) and WSS (n=30) consisted of piglets suckling in their mothers in conventional farrowing crates, with or without OPES, respectively; D120 (n=30) and D120S (n=30) consisted of piglets fed 120 mL (30 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively; D200 (n=29) and D200S (n=27) consisted of piglets fed 200 mL (50 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively. The piglets on WSS, D120S and D200S received 4 mL of OPES on the first 24 hours after birth. Piglets were selected from sows of parity 3.9 ± 0.11 (range of 2 to 7), and the average time lapse between birth and first colostrum intake or gavage was 100.3 ± 3.6 minutes. Piglets of treatments D120, D120S, D200 and D200S received colostrum from a colostrum pool. All animals were individually weighed at birth and after the first 24 h of life. They were cross-fostered for suckling in foster mothers parity order (OP) range of 2 to 5 (average OP 3.0 ± 0.08), and each litter remained with 12 piglets, two of each treatment. Piglets were weighed again at 7, 14 and 20 days of life, and lactation length was of 20.4 ± 0.06 days. Serum concentration of IgG in the piglets was greater in D200 and D200S than in CM, D120 and D120S treatments (P<0.05), whereas CMS and D200 piglets had similar (P>0.05) IgG concentration. The greatest weight gain during the first 24 h was observed in CMS piglets, whereas D120 and D120S piglets lost weight (P<0.05). The average daily gain during lactation, as well as body weight at 7, 14 and 20 days were similar (P>0.05) among treatments. Piglets from the D120 treatment showed higher mortality rate during lactation than CMS, D120S, D200 and D200S piglets (P<0.05). Hence, the supply of 200 mL of colostrum or an energy and protein supplement are options which assure greater IgG concentration, weight gain in the first 24 h of life, and higher survival.

O objetivo desse trabalho foi avaliar a concentração de imunoglobulina G (IgG), a sobrevivência e o ganho de peso de leitões com baixo peso ao nascimento durante a lactação, de acordo com a quantidade de colostro ingerida com ou sem um suplemento proteico-energético (SPE). Leitões com peso ao nascimento variando de 800 a 1200 g (média de 1025,2 ± 8,15 g) foram submetidos, nas primeiras 24 h, a diferentes tratamentos: CM (n=30) e CMS (n=30) compostos por leitões que ficaram com suas mães biológicas em baias convencionais, sem e com SPE, respectivamente; D120 (n=30) e D120S (n=30) compostos por leitões que receberam 120 mL (30 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente; D200 (n=29) e D200S (n=27) formados por leitões que receberam 200 mL (50 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente. Os leitões dos tratamentos CMS, D120S e D200S receberam 4 mL do SPE nas primeiras 24 horas. Os leitões foram selecionados de fêmeas de ordem de parto (OP) 2 a 7 (média de 3,9 ± 0,11), e o intervalo médio entre o nascimento e a ingestão ou fornecimento de colostro foi 100,3 ± 3,6 minutos. Os leitões dos tratamentos D120, D120S, D200 e D200S foram alimentados com colostro procedente de um pool de colostro. Os leitões foram colocados para mamar em mães adotivas de ordem de parto (OP) 2 a 5 (média de 3,0 ± 0,08), em leitegadas contendo dois leitões de cada tratamento, perfazendo um total de 12 leitões. Os leitões foram pesados individualmente ao nascimento, 24h após e, também, aos 7, 14 e 20 dias de vida. A duração média da lactação foi de 20,4 ± 0,06 dias. A concentração de IgG no soro dos leitões D200 e D200S foi superior à dos leitões CM, D120 e D120S (P<0,05), enquanto que os leitões CMS e D200 tiveram concentração de IgG similar (P>0,05). O maior ganho de peso nas primeiras 24 h foi observado no tratamento CMS, ao passo que os tratamentos D120 e D120S tiveram perda de peso neste período (P<0,05). O ganho de peso diário durante o período de lactação e o peso aos 7, 14 e 20 dias foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Os leitões D120 apresentaram maior taxa de mortalidade durante a lactação do que os leitões CMS, D120S, D200 e D200S (P<0,05). O fornecimento de 200 mL de colostro ou de suplemento proteico-energético são alternativas que garantem maior concentração de IgG sérica, ganho de peso nas primeiras 24 h de vida e maior sobrevivência. / The aim of this study was to evaluate the concentration of immunoglobulin G (IgG), survival and weight gain of low birth weight piglets according to the amount of colostrum intake and the supplementation of an oral protein and energy supplement (OPES). Piglets with an range birth weight of 800 to 1200 g (average of 1025.2 ± 8.15 g) were submitted during the first 24 h to one different treatments: WS (n=30) and WSS (n=30) consisted of piglets suckling in their mothers in conventional farrowing crates, with or without OPES, respectively; D120 (n=30) and D120S (n=30) consisted of piglets fed 120 mL (30 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively; D200 (n=29) and D200S (n=27) consisted of piglets fed 200 mL (50 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively. The piglets on WSS, D120S and D200S received 4 mL of OPES on the first 24 hours after birth. Piglets were selected from sows of parity 3.9 ± 0.11 (range of 2 to 7), and the average time lapse between birth and first colostrum intake or gavage was 100.3 ± 3.6 minutes. Piglets of treatments D120, D120S, D200 and D200S received colostrum from a colostrum pool. All animals were individually weighed at birth and after the first 24 h of life. They were cross-fostered for suckling in foster mothers parity order (OP) range of 2 to 5 (average OP 3.0 ± 0.08), and each litter remained with 12 piglets, two of each treatment. Piglets were weighed again at 7, 14 and 20 days of life, and lactation length was of 20.4 ± 0.06 days. Serum concentration of IgG in the piglets was greater in D200 and D200S than in CM, D120 and D120S treatments (P<0.05), whereas CMS and D200 piglets had similar (P>0.05) IgG concentration. The greatest weight gain during the first 24 h was observed in CMS piglets, whereas D120 and D120S piglets lost weight (P<0.05). The average daily gain during lactation, as well as body weight at 7, 14 and 20 days were similar (P>0.05) among treatments. Piglets from the D120 treatment showed higher mortality rate during lactation than CMS, D120S, D200 and D200S piglets (P<0.05). Hence, the supply of 200 mL of colostrum or an energy and protein supplement are options which assure greater IgG concentration, weight gain in the first 24 h of life, and higher survival.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-08-11T18:54:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Beatriz Coutinho - PPGIT - 2016.pdf: 2557511 bytes, checksum: cec4295c75245942ea5b334cef899eba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T18:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Beatriz Coutinho - PPGIT - 2016.pdf: 2557511 bytes, checksum: cec4295c75245942ea5b334cef899eba (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Capes / O tratamento da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) apresenta limitações por ser tóxico, podendo causar efeitos adversos nos pacientes, e também, por não existir um critério de cura efetivo, que atualmente é realizado apenas clinicamente, visualizando a completa cicatrização da lesão. Além dos desafios socioeconômicos que agravam a doença, o seu diagnóstico apresenta dificuldades, pois além de haver a necessidade de realizar associações entre os aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais dos pacientes para se chegar a um resultado definitivo, os testes laboratoriais convencionais apresentam limitações. O objetivo do trabalho foi avaliar a aplicabilidade dos isotipos de imunoglobulinas (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) por citometria de fluxo para o diagnóstico e critério de cura na leishmaniose tegumentar americana, e fazer um comparativo da citometria de fluxo em relação às técnicas convencionais: ELISA e Imunofluorescência Indireta. Foram utilizadas amostras de 14 pacientes, sobre as quais foram feitos os ensaios. Com relação aos resultados da comparação da citometria de fluxo, utilizando o anticorpo IgG, com a Imunofluorescência, foi visto que houve uma melhor acurácia do primeiro em relação ao segundo. Em comparação ao ELISA, a citometria também demonstrou ser um teste com melhor desempenho. Para a padronização dos isotipos IgG1, IgG2 e IgG3, foi observado que a melhor diluição do isotipo IgG1 para ser utilizada foi a diluição 1:400, para o isotipo IgG2, 1:100 e para o isotipo IgG3 1:200. Devido a baixa quantidade sérica circulante de IgG4 e pelo fato de ser mais encontrado em amostras de pacientes com a forma cutânea difusa (ausente em nosso Estado), não foi possível padronizar este isotipo. Na avaliação da aplicabilidade do isotipo IgG1, foi observado que antes do tratamento, 36,8% dos pacientes foram negativos; nos pacientes um ano após o tratamento, 82,3%; dois anos após o tratamento, 27,2% e nos pacientes cinco anos após tratamento, 87,5%. Portanto, a análise global dos resultados obtidos sugere que a citometria de fluxo aplica-se ao rastreamento da LTA e que a utilização do isotipo IgG1 tem grandes possibilidades para contribuir como um método de diagnóstico mais específico do que os convencionais. / The treatment for the American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) has limitations due to its toxicity, which can cause adverse effects on the patients; and also for not presenting an effective cure criterion, being currently performed by visualizing the complete healing of the lesion. Besides socio economical challenges which worsen the disease, the diagnosis shows difficulties because beyond the need to associate clinical, epidemiological and laboratorial aspects to achieve the definitive result, the conventional laboratorial tests are limited. Thereby, the objective of the study was to evaluate the applicability of immunoglobulin isotypes (IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4) by flow cytometry for the diagnosis and cure criterion of the American tegumentary leishmaniasis, comparing this tool with the conventional tests of ELISA and Indirect Immunofluorescence. 14 samples of patients were used for the assays. Regarding the results of the comparison between flow cytometry using anti-IgG antibodies with the indirect immunofluorescence, it was observed that the accuracy of the first test was higher than the second's. The same was observed when compared flow cytometry with ELISA. Regarding the standardization of the IgG isotypes 1, 2 and 3, it was seen that the best dilutions to work with were respectively 1:400, 1:100 and 1:200. Due to the low quantities of the IgG4 isotype in the sera and for the fact that it is found in samples of patients with the diffuse form (absent in the Northeastern Brazil), it was not possible to standardize. Evaluating the applicability of IgG1, we observed that before treatment 36,8% of the patients were negative, one year after treatment, 82,3%; two years after treatment, 27,2% and in patients five years after treatment, 87,5%. The global analysis of the obtained results suggests that flow cytometry can be used to screen ATL and that the use of IgG1 isotype has great chances of contributing as a more specific method than the conventional ones. More studies with IgG2 and IgG3 isotypes are necessary, raising the number of samples. However, this area still has good perspectives on the diagnosis and cure criterion of the disease.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T12:31:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T12:32:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T12:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / (Sem resumo em outra língua) / Este trabalho teve por objetivo estudar a interação entre moléculas orgânicas e anticorpos visando seu uso em sistemas de entrega de fármacos e diagnóstico fluorescente. Foram investigadas moléculas orgânicas de porfirinas e anticorpos reativos a Herpesvírus bovino, micro-organismo amplamente disseminado em rebanhos de corte e leite. Para o desenvolvimento deste projeto foram empregadas técnicas espectroscópicas de absorção UV/Vis, emissão fluorescente e espalhamento ressonante. Os resultados obtidos apresentaram indícios de que a ligação entre as porfirinas e os anticorpos ocorre. As constantes de ligação associadas à essa interação sugeriram alta afinidade das porfirinas pelos anticorpos. As investigações da conformação dos anticorpos indicaram que a sua estrutura enovelada não é significativamente afetada pelas porfirinas e os estudos de Transferência de Energia Ressonante de Förster sugeriram que esse mecanismo pode ser o principal responsável pela supressão da fluorescência dos anticorpos pelas porfirinas.

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T09:14:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mourao_CeciliaAlves_M.pdf: 2559584 bytes, checksum: efe6b17b9b7e5ceb16ade74a6ae30629 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As imunoglobulinas G (IgG) e seus fragmentos Fab, F(ab)¿2 e Fv apresentam aplicações proeminentes nas áreas terapêuticas e de diagnósticos. Em determinadas situações em que a região Fc é dispensável e/ou deletéria, emprega-se preferencialmente fragmentos em relação à IgG não clivada. Tais aplicações requerem um elevado grau de pureza dessas biomoléculas. O elevado custo de obtenção de fragmentos pelas técnicas convencionais justifica a investigação de outras que possam proporcionar a obtenção dessas proteínas, combinando um menor custo com um elevado grau de pureza. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar a eficácia dos adsorventes agarose-CM-Asp-Ni(II), agarose-CM-Asp-Co(II), agarose-CM-Asp-Cu(II) e agarose-CM-Asp-Zn(II) na purificação dos fragmentos Fab de IgG humana policlonal, a partir de uma solução de IgG clivada pela enzima papaína. O efeito do sistema tamponante, do íon metálico e do cloreto de sódio foram avaliados. A seletividade das condições cromatográficas foi avaliada por eletroforese SDS-PAGE, Western Blotting e imunodifusão radial. Os resultados indicaram que nas cromatografias conduzidas com o quelato CM-Asp-Co(II) com Hepes e Tris-HCl, na ausência de sal, os fragmentos Fab foram obtidos separados do Fc nas frações de eluição. Nas cromatografias em CM-Asp-Ni(II) com Hepes e fosfato de sódio na presença de NaCl e em CM-Asp-Cu(II) com Tris-HCl e fosfato de sódio na presença de NaCl, a biomolécula alvo foi obtida seletivamente nas frações não retidas (cromatografia negativa). Nas cromatografias em CM-Asp-Zn(II) não houve a recuperação seletiva dos fragmentos Fab. Os resultados das curvas de ruptura com os quelatos CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II) revelaram a recuperação de 3,4 mg, 17,1 mg e 8,6 mg de Fab, respectivamente. Os fragmentos Fab foram obtidos com pureza superior a 90%, sendo que para o ligante CM-Asp-Cu(II), segundo o western blot, os fragmentos Fab foram separados da IgG não clivada. Os resultados obtidos nas condições cromatográficas estudadas evidenciam a potencialidade do emprego dos quelatos CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II), imobilizados em agarose, para purificação de fragmentos Fab obtidos da clivagem enzimática da IgG humana policlonal / Abstract: Immunoglobulins G (IgG) and their fragments Fab, F(ab)¿2 and Fv are prominently applied as therapeutic and diagnostic tool. Fragments are preferably used rather than the uncleaved IgG, specially when the Fc portion is dispensable or prejudicial. For the mentioned applications, high purity preparations are required. The high costs associated with the conventional downstream processing of these biomolecules is the driving force to investigate purification techniques that can combine lower cost with high purification factor. Therefore, the goal of this work is to evaluate and compare the efficiency of CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II), CM-Asp-Cu(II) and CM-Asp-Zn(II) adsorbents in the purification of Fab fragments from papain-digested human IgG. The effects of buffers, metal-ion and NaCl addition were also studied. The adsorbent/buffer selectivity towards the targeted molecule was evaluated by SDS-PAGE, Western Blotting and radial immunodiffusion assays. Chromatography with CM-Asp-Co(II) as chelated using Hepes and Tris-HCl buffers resulted in Fab recovery in the elution fractions. Whereas the chromatography with CM-Asp-Ni(II) and CM-Asp-Cu(II) both as chelated using Hepes sodium phosphate buffers with NaCl addition resulted in Fab selective recovery in non-retained fractions (negative chromatography). The adsorbent CM-Asp-Zn(II) did not show Fab selective recovery. Breakthrough curves experiments with CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II) showed recovery of 3.4 mg, 17.1 mg and 8.6 mg of Fab, respectively. Fab fragments were recovered with purity higher than 90%. When chelated CM-Asp-Cu(II) was use as ligand, Fab fragments were recovery separated from intact IgG as shown in western blot. Results obtained in the chromatographic conditions studied showed the potential use of CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) and CM-Asp-Cu(II) immobilized in agarose for the purification of Fab fragments from cleaved human polyclonal IgG / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestra em Engenharia Química