A imunodeficiência comum variável (CVID) é caracterizada por hipogamaglobulinemia e infecções recidivantes. Neste estudo verificamos o papel da via Unfolded Protein Response (UPR) na patogênese da doença. Uma paciente com CVID apresentou expressão aumentada do RNAm XBP-1 unspliced e co-localização de IgM e BiP no retículo endoplasmático (RE). Verificamos a ausência de mutações nos produtos obtidos por RT-PCR de XBP-1 e nos domínios quinase/endonuclease da IRE-1a. Análises por Q-PCR dos RNAm XBP-1 spliced, IRE-1a e BiP após tratamento com LPS ou brefeldina A mostrou que, ao contrário dos controles saudáveis que respondem a estes estressores com ondas de transcrição destes três genes, esta paciente apresenta baixos níveis de transcrição, não atingindo o mesmo nível de resposta apresentado pelos indivíduos saudáveis. Nossos achados associam o splicing diminuído do RNAm XBP-1 ao acúmulo de IgM no RE e baixas taxas de transcrição de chaperonas, fornecendo um mecanismo para explicar a hipogamaglobulinemia observada em uma paciente com CVID. / Common Variable Immunodeficiency (CVID) is characterized by hypogammaglobulinemia and recurrent infections. Herein we addressed the role of Unfolded Protein Response (UPR) in the pathogenesis of the disease. Augmented unspliced XBP-1 mRNA concurrent with co-localization of IgM and BiP was found in one CVID patient. Sequencing of RT-PCR amplicons did not reveal any mutation on XBP-1 neither on the kinase/endonuclease domains of IRE-1a. Q-PCR analysis of spliced XBP-1, IRE-1a and BiP after LPS or Brefeldin A treatment showed that, unlike healthy controls that respond to these ER stressors by presenting waves of transcription of these three genes, the cells presented lower rates of transcription, not reaching the same level of response of healthy subjects. Our findings associate diminished splicing of XBP-1 mRNA with accumulation of IgM within the ER and lower rates of chaperone transcription, therefore providing a mechanism to explain the observed hypogammaglobulinemia.

Há poucos dados na literatura sobre o transporte transplacentário de imunoglobulinas em gestações múltiplas. O objetivo deste estudo foi observar fatores que influenciam a concentração de imunoglobulina G (IgG) no cordão umbilical dos neonatos e a transferência transplacentária de IgG total e de IgG contra o Streptococcus grupo B (EGB), e lipopolissacarídeos (LPS) de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp.. Métodos: estudo prospectivo realizado no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo no período de 2012 a 2013. Foram coletadas amostras de sangue materno e de cordão umbilical no momento do parto. Os critérios de inclusão foram gestações gemelares com ausência de sinais de infecção por HIV, citomegalovírus, Hepatites B e C, toxoplasmose e rubéola e ausência de doenças autoimunes, malformação fetal e síndromes genéticas. A análise multivariada foi realizada para avaliar a associação entre os níveis de IgG em cordão umbilical e as taxas de transferência de anticorpos com a concentração materna de IgG, a corionicidade da gestação, a presença de insuficiência placentária, a restrição de crescimento intrauterino, a idade gestacional de nascimento, o peso de nascimento, o tabagismo, a doença materna e a via de parto. Resultados: a concentração de IgG total em cordão umbilical apresentou correlação positiva com os níveis maternos séricos de IgG total e a idade gestacional do parto. Os níveis de IgG total em cordão umbilical foram significativamente menores em gestações monocoriônicas quando comparadas às dicoriônicas. A taxa de transferência de IgG total apresentou correlação positiva com a idade gestacional do parto, mas negativa com as concentrações maternas de IgG total. As concentrações de IgG contra EGB e LPS de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. apresentaram associação com os níveis maternos de IgG específicos contra esses antígenos e com o diabetes. Os níveis de IgG contra LPS de Klebsiella spp. também foram associados com o peso de nascimento e com hipertensão materna. As taxas de transferência de IgG contra EGB e LPS de Pseudomonas spp. apresentaram correlação com os níveis maternos de IgG específicos contra os antígenos referidos. A taxa de transferência de IgG contra EGB também esteve associada com a idade gestacional do parto, enquanto a taxa de transferência de IgG contra LPS de Pseudomonas spp. apresentou correlação com diabetes. Não houve correlação entre a taxa de transferência de IgG contra a LPS de Klebsiella spp. com nenhum fator analisado. Conclusão: em gestações gemelares, a concentração total de IgG em cordão umbilical foi influenciada pela concentração materna de IgG total, pela idade gestacional do parto e pela corionicidade placentária. As concentrações de IgG total foram significativamente menores em gestações monocoriônicas que em dicoriônicas. As concentrações séricas de IgG contra EGB e LPS de Klebsiella spp. e Pseudomonas spp. em cordão umbilical apresentaram associação com os níveis maternos de IgG específicos contra esses antígenos e com a presença de diabetes. Todos os outros parâmetros estudados apresentaram diferentes associações com as concentrações de IgG e com as taxas de transferências de IgG específicas contra cada antígeno investigado / There is a lack of data in the literature regarding the placental transport of immunoglobulins in twin pregnancies. The objective of this study was to examine factors that influence the concentration of immunoglobulin G (IgG) in cord serum and the placental transfer of total IgG and of IgGs against Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS, and Group B Streptococcus (GBS). Methods: A prospective study was conducted at the Hospital das Clinicas in the São Paulo University Medical School between 2012 and 2013. Maternal and umbilical cord samples were collected at birth. The inclusion criteria were twin pregnancies with no evidence of infection with HIV, cytomegalovirus, hepatitis B or C, toxoplasmosis, or rubella. Twin pregnancies with evidence of autoimmune disease, fetal malformations or genetic syndromes were also excluded. Stepwise multivariate regression analysis was used to evaluate the association between cord serum concentrations of IgG and IgG transfer ratios as well as the associations between cord serum concentrations of IgG and maternal serum concentrations of IgG, pregnancy chorionicity, the presence of an abnormal umbilical artery pulsatility index, intrauterine growth restriction, gestational age at delivery (GAD), birth weight, placental weight, smoking during pregnancy, maternal disease, and mode of delivery. Results: Total IgG concentrations in cord sera were positively correlated with total IgG concentrations in maternal sera. Cord serum concentrations of IgG were also positively correlated with GAD. Cord serum concentrations of total IgG were significantly lower in monochorionic versus dichorionic pregnancies. The total IgG transfer ratio was positively correlated with GAD but was inversely correlated with total IgG concentration in maternal serum. Cord serum concentrations of IgGs against GBS, Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS were significantly associated with maternal concentrations of specific IgGs and the presence of maternal diabetes. Cord serum concentrations of anti-Klebsiella spp. LPS IgG were also correlated with birth weight and the presence of maternal hypertension. The transfer ratios of IgGs against GBS and Pseudomonas spp. LPS were related to maternal concentrations of specific IgGs. The transfer ratios of IgGs against GBS and Pseudomonas spp. LPS were also associated with GAD and the presence of diabetes, respectively. None of the examined parameters were found to be correlated with the transfer ratio of IgG against Klebsiella spp. LPS. Conclusions: In twin pregnancies, in addition to the influences of maternal serum concentrations of total IgG and of GAD, chorionicity was also found to influence cord serum concentrations of total IgG. Compared with dichorionic twins, monochorionic twins were found to have lower concentrations of total IgG in cord sera. Umbilical cord serum concentrations of IgGs against GBS, Klebsiella spp. LPS and Pseudomonas spp. LPS were associated with maternal serum concentrations of specific IgGs and with maternal diabetes. All of the remaining parameters that were investigated had varying associations with concentrations of specific IgGs in cord serum and with placental transfer and were dependent on the antigen being studied

Objetivos: Descrever retrospectivamente uma série de casos de pacientes com miopatia necrosante imunomediada (MNIM), avaliando os efeitos de uma terapia de indução com metilprednisolona (MP) associada ou não à imunoglobulina humana intravenosa (IGIV) sobre a condição muscular tardia, vista por ressonância magnética muscular, e sobre parâmetros de atividade de doença. A seguir, avaliar prospectivamente os efeitos de um programa de treinamento físico combinado assistido nesta amostra sobre a segurança, condição clínica, capacidade aeróbia, força e função muscular. Métodos: Foram inicialmente avaliados em uma análise longitudinal 13 pacientes com MNIM (4 com autoanticorpos anti-hidroxi-metilglutaril coenzima A redutase e 9 com anti-partícula reconhecedora de sinal), no período de 2012 a 2018. Por protocolo institucional, estes pacientes foram tratados ao diagnóstico com um esquema de indução com pulsoterapias de MP associadas ou não à IGIV. Foram analisados os dados clínicos e laboratoriais para cálculo dos critérios de resposta do International Myositis Assessment & Clinical Study Group (IMACS) antes do tratamento e no final do segmento, bem como a ressonância magnética de coxa ao final do segmento, pela qual se quantificaram os níveis de atrofia, edema e lipossubstituição. Adicionalmente, em uma análise quasiexperimental, 8 pacientes da primeira amostra foram também submetidos a um programa de treinamento físico supervisionado combinando exercícios aeróbicos e resistidos, duas vezes por semanas, por 12 semanas. Finalmente, foram comparados, antes e após o programa de treinamento, os dados de: capacidade aeróbia, através do teste cardiopulmonar de esforço; força, através do teste de 1 repetição máxima (RM) no supino e no leg press; e função muscular, através do teste sit-to-stand (STS) e do teste timed up-and-go (TUG). Resultados: Na primeira amostra, composta por 9 mulheres e 4 homens, a idade média dos pacientes ao diagnóstico foi de 53,5 anos e o tempo médio de sintomas até o diagnóstico foi de 4 meses. Todos os pacientes receberam terapia com MP e/ou IGIV. Após uma média de 39 meses de seguimento, todos os parâmetros do IMACS melhoraram de uma forma significativa em relação aos parâmetros basais. Nove pacientes obtiveram resposta clínica completa e, entre eles, dois tiveram remissão completa. Onze pacientes interromperam o uso de glicocorticoides no final desta fase. Apenas 2 pacientes tiveram atrofia muscular ou lipossubstituição classificada como moderada à ressonância magnética, com o restante apresentando achados normais ou leves. Oito pacientes da amostra inicial continuaram o estudo e terminaram o protocolo de treinamento. Nenhuma ativação de doença, agravamento dos escores do IMACS ou eventos adversos foram observados durante todo o período de treinamento. Os pacientes também aumentaram a capacidade aeróbia (tempo para atingir o limiar anaeróbico e tempo para atingir a exaustão), força muscular (1 RM do supino) e função muscular (STS). Conclusão: Nesta série de casos, o tratamento precoce com pulsoterapias de MP e/ou IGIV com o objetivo de resposta clínica completa pode ter sido uma estratégia eficaz de tratamento para a MNIM, atuando sobre os parâmetros de atividade de doença e possivelmente sobre o dano muscular acumulado visto pela ressonância magnética. Ademais, o treinamento físico combinado supervisionado em pacientes MNIM se mostrou seguro e eficaz, promovendo aumento de capacidade aeróbia, força e função muscular / Objectives: To describe retrospectively a case series of patients with immunemediated necrotizing myopathy (IMNM), evaluating the effects of an induction therapy with methylprednisolone (MP) associated or not with intravenous human immunoglobulin (IVIG) on late muscle condition, as seen by muscle magnetic resonance imaging, and on parameters of disease activity. Next, to evaluate prospectively the effects of an assisted and combined physical training program in this sample regarding safety, clinical status, aerobic capacity, muscle strength and function. Methods: Thirteen patients with IMNM (4 patients with anti-hydroxymethyl- glutaryl coenzyme A reductase autoantibodies and 9 patients with antisignal- recognition particle) were initially evaluated in a longitudinal analysis, from 2012 to 2018. By institutional protocol, these patients were treated at diagnosis with an induction scheme with MP pulse therapies associated or not with IVIG. The clinical and laboratory data to calculate the response criteria of the International Myositis Assessment & Clinical Study Group (IMACS) before treatment and at the end of the segment, as well as the magnetic resonance imaging of the thigh at the end of the segment, in order to assess atrophy, edema and fat replacement, were quantified. Additionally, in a quasi-experimental analysis, eight patients of the first sample were also submitted to a supervised physical training program combining aerobic and resisted exercises, twice a week, for 12 weeks. Finally, before and after the training program, the following data were compared: aerobic capacity, through cardiopulmonary exercise test; strength, through the maximal repetition test (RM) in the bench press and in the leg press; and muscular function, through the sit-tostand test (STS) and the timed up-and-go (TUG) test. Results: In the first sample, composed of 9 women and 4 men, the mean age of the patients at diagnosis was 53.5 years and the mean duration of symptoms until the diagnosis was 4 months. All patients received MP and/or IVIG therapy. After an average of 39 months of follow-up, all IMACS parameters improved significantly over baseline parameters. Nine patients had complete clinical response and, among them, two had complete remission. Eleven patients discontinued the use of glucocorticoids at the end of this phase. Only 2 patients had muscle atrophy or fat replacement classified as moderate in magnetic resonance, with the remainder presenting normal or mild findings. Eight patients in the initial sample continued the study and completed the training protocol. No disease activation, worsening of IMACS scores or adverse events were observed throughout the training period. Patients also increased aerobic capacity (time to reach the anaerobic threshold and time to achieve exhaustion), muscle strength (1 RM of the bench press) and muscle function (STS). Conclusion: In this case series, early treatment with MP and/or IVIG pulse therapy with the objective of complete clinical response may have been an effective treatment strategy for IMNM, acting on the parameters of disease activity and possibly on the accumulated muscle damage seen by magnetic resonance imaging. In addition, the supervised combined physical training in IMNM patients was shown to be safe and effective, increasing aerobic capacity, strength and muscle function

Various methods for extraction and analysis of high value minor proteins (lactoferrin, lactoperoxidase and immunoglobulins) directly from raw milk were explored. Extraction, purification and analysis of high-value minor proteins directly from milk without pre-treatment are major challenges for dairy industry, largely due to the complexity of milk and the presence of colloidal solids (casein micelles and milk fat globules). To overcome some of these challenges, this work focused on three main objectives: 1) characterization of cryogel monolith chromatography for purification of lactoferrin (LF) and lactoperoxidase (LP) directly from raw milk in single step, 2) identification and characterization of Protein A Mimetic affinity ligands for purification of immunoglobulins (Igs) from milk and 3) development and validation of a surface plasmon resonance method for simultaneous quantification of five whey proteins in multiple samples. Results portrayed the possibility of 40–50 column volumes of various milk samples (whole milk, skim milk and acid whey) to pass through a 5 mL cryogel monolith chromatography column at 525 cm hr⁻¹ without exceeding its pressure limits if the processing temperature is maintained around 35–37°C. Ideally, this should be the milk secretion temperature. The dynamic binding capacity obtained for the cryogel matrix (2.1 mg mL⁻¹) was similar to that of the binding capacity (2.01 mg mL⁻¹) at equilibrium with 0.1 mg mL⁻¹ of lactoferrin in the feed samples. Lactoferrin and lactoperoxidase was selectively bound to the cryogel column with trivial leakage in flowthrough fractions. Lactoferrin was recovered from elution fractions with a yield of 85% and a purity of 90%. These results, together with the ease of manufacture, low cost and versatile surface chemistry of cryogels suggest that they may be a good alternative to packed-bed chromatography for direct capture of proteins from milk, provided that the binding capacity can be increased. A Protein A Mimetic (PAM) hexapeptide (HWRGWV) peptide ligand that binds to the Fc portion of antibody molecules was explored for affinity purification of immunoglobulins from milk. The peptide has the ability to purify IgG from various milk and whey samples with a purity of greater than 85% in single step. More than 90% bound IgG was recovered with 0.2 M acetate buffer at pH 4.0 and total column regeneration was successfully achieved by 2.0 M guanidine-HCl. At 9.0 mg mL⁻¹ of IgG feed concentration, an equilibrium binding capacity of 21.7 mg mL⁻¹ and dynamic binding capacity of approximately 12.0 mg mL⁻¹ of resin was obtained. Recoveries and yields of IgG were significantly influenced by the feed IgG concentration. PAM hexamer ligand also contributed a significant amount of cross-reactivity with casein, glycomacropeptides and β-lactoglobulin proteins, however majority of these proteins were recovered in the regeneration step, except β-lactoglobulin, which co-eluted with IgG. Higher IgG concentration in feed vastly reduced the amount of cross-reactivity whilst increasing the recoveries and purities in the final product. PAM affinity ligands also showed interactions towards other classes of bovine immunoglobulins. These findings established the possibility of using PAM hexamer peptide as an alternative to conventional Protein A/G affinity chromatography for the isolation of Igs from milk in single step process. A surface plasmon resonance (SPR) method was developed for simultaneous, quantitative determination of commercially important whey proteins in raw and processed milk samples, whey fractions and various milk-derived products, with six samples per assay. Immobilized antibody stability and reproducibility of analyses were studied over time for 25 independent runs (n=300), giving a relative standard deviation (RSD) of <4%. Immobilized antibodies showed negligible non-specific interactions (<2–4 SPR response units (RU)) and no cross-reactivity towards other milk components (<1 RU). Regeneration of immobilised antibodies with glycine at pH 1.75 was determined to be optimal for maintaining the SPR response between samples. This method compared and validated well with reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and standard enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA).

Diss. (sammanfattning) Linköping : Univ., 2003. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Linköping : Linköpings universitet, 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--University of Alabama at Birmingham, 2008. / Title from first page of PDF file (viewed June 6, 2008). Includes bibliographical references.

Submitted by IVANA REGINA GONÇALVES null (nanaenf82@hotmail.com) on 2016-12-13T18:58:31Z No. of bitstreams: 1 Tese Ivana Goncalves.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-15T14:52:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 goncalves_ir_dr_bot.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T14:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 goncalves_ir_dr_bot.pdf: 2035441 bytes, checksum: e2a1f49f031767147cf4e472de95ceea (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / O programa de uso da imunoglobulina palivizumabe teve início em 2007 no Estado de São Paulo e em 2013 estendeu-se nacionalmente, sendo destinado a crianças com maior risco para a infecção pelo Virus Sincicial Respiratório (VSR). Desde seu início, o programa permanece sem avaliação sistemática. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar o programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo. Foram avaliados os 16 locais de aplicação: cinco Centros de Referência para Imunobiológicos Especiais (CRIE) e 11 postos de aplicação existentes no Estado de São Paulo, seguindo o referencial de avaliação proposto por Donabedian. Dados de estrutura e processo foram obtidos por entrevista com os responsáveis pela aplicação da imunoglobulina; para avaliação de resultado foram entrevistadas as mães das crianças do programa, visando identificar a associação entre falha na tomada do palivizumabe e a necessidade de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença ou sintomatologia respiratória no período de sazonalidade do VSR. Participaram desta pesquisa 693 crianças/responsáveis (85,1% da população elegível), que ingressaram no programa entre março e agosto de 2014, sendo a coleta de dados realizada entre março e setembro do mesmo ano. Para análise de resultado foi utilizado o odds ratio pontual e intervalar com intervalo de confiança de 95%, considerando-se associações estatisticamente significativas se p < 0,05. Para avaliação de estrutura foram consideradas 30 variáveis relacionadas a condições preconizadas pelas políticas públicas de saúde e para o processo elencaram-se 10 variáveis relativas aos cuidados com a aplicação e conservação da imunoglobulina e sala de aplicação, sendo em ambos os casos o serviço classificado de acordo com o percentual de desconformidade em: adequado (até 10%), parcialmente adequado (de 10 a 20%) e inadequado (superior a 20%). Apenas dois locais de aplicação (P7 e P9), tiveram estrutura e processo considerados adequados. Apesar de terem estrutura classificada como adequada, nove locais tiveram processo parcialmente adequado (C2, C3, C4, P3 e P10) ou inadequado (C1, P2, P5 e P8). As principais falhas de estrutura foram relativas à climatização, disponibilidade de medicamentos e materiais para uso em caso de choque anafilático, sala exclusiva para aplicação de imunobiológicos e protocolo de uso da palivizumabe disponível e, no caso do processo, a não aplicação da imunoglobulina em crianças hospitalizadas, falta de supervisão do médico durante a aplicação, falha na temperatura de conservação do produto e não aplicação no mês anterior à sazonalidade. De acordo com os resultados, pode-se verificar que o risco de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença/sintomatologia respiratória foi diretamente proporcional ao número de falhas (p=0,007; OR=1,29, IC=1,07-1,56). Conclui-se que a avaliação da estrutura do programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo é, em geral, mais favorável que o processo. Os resultados evidenciaram aumento médio da chance de internação por doença/sintomatologia respiratória de 29% a cada falha no recebimento das doses. / The palivizumab immunoglobulin health program was introduced in 2007 in São Paulo State and it was initiated nationally in 2013, aiming at being administered to highly risk children for respiratory syncytial virus infections. Since its beginning, such a program has remained with no systematic evaluation. The objetive of the present research was evaluate the palivizumab immunoglobulin health program in São Paulo State. For doing so, 16 places of palivizumab application in São Paulo State were considered: five of which are reference centers for special immunobiologicals and other 11 places of application. The theoretical framework adopted for the evaluation was the one proposed by Donabedian. Structural and processual data on the program was obtained by interviewing each worker responsible for the immunoglobulin in each application place. As for the evaluation of the program outcomes, the childrens mothers/responsible were also interviewed with the aim of identifying the association between palivizumab dose failure and respiratory-related hospitalizations in the seasonality period of respiratory syncytial virus. A total of 693 children/responsibles (85.1% of the eligible individuals) composed the research, all of which made part of the program in the period March-August of 2014, being the data collection performed between March and September of the same year. The data was analysed by the punctual and intervalar odds ratio, with a confidence interval of 95% and a statistical significance fixed at 5%. To the evaluation of program structure, 30 variables preconized by the public health policies were considerated; regarding the program process, 10 variables related to the immunoglobulin care of application and conservation and room of application were considered. Structure and process were both classificated as its nonconformity rate in: adequate (less than 10%), partially adequate (from 10% to 20%) and inadequate (greater than 20%). Only in two of the application places (P7 and P9) structure and process were found to be inadequate. Despite having an adequate structure, in nine places the process was found to be either partially adequate (C2, C3, C4, P3 and P10) or inadequate (C1, P2, P5 and P8). The main structural failures were the ones related to: climate control, availability of materials and medicines used in anaphylactic shock, exclusive room for immunobiological application and palivizumab usage protocol availability and, regarding the process, the absence of application in hospitalized children, absence of medical care during the immunoglobulin administration, inappropriate temperature for immunoglobulin conservation and absence of application prior to the respiratory syncytial virus seasonality. According to the results, the hospitalization risk in intensive care unit due to respiratory disease and related-symptoms was directly proportional to the number of dose failures (p=0.007; OR=1.29, IC=1.07-1.56). As a conclusion for the evalution, the structure of the São Paulo State palivizumab immunoglobulin health program is in general more favorable than the process. As for the results, they an average increasing of 29% in respiratory-related hospitalizations in intensive unit to each dose failure in palivizumab adminstration.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA12MA103.pdf: 1158484 bytes, checksum: 7070ec0f4d7fc1aba2534da8c5d18609 (MD5) Previous issue date: 2012-02-16 / The crossbreed with the Jersey breed has been used mainly as an alternative to increasing the concentration of milk solids in Holstein herds, and the production capacity of these animals the focus of several studies. However, there are still limited information on many relevant factors to making decision and management of crossbreed herds, such as disease resistance and calving easy, and this is the motivation of this work, which aimed to evaluate the health, immunity and calving difficulty in Holstein x Jersey crossbred cows compared to pure Holstein cows. Data were obtained from a farm located in Carambeí-PR, which has purebred Holstein and crossbred Holstein x Jersey in different proportions of each breed. Data of calving difficulty, retained placenta, gestation length, blood indicators for postpartum metabolic diseases (ketosis and hypocalcemic puerperal paresis) and immunity were collected from July 2010 to June 2011 and data from Somatic Cell Count (SCC) obtained from the official milk recording in the period 2005 to 2010. For calving easy was adopted a scale ranging from 1 (unassisted births) to 5 (extreme difficulty, cesarean or death) and retained placenta when 24 hours elapsed the calving without of the fetal membranes detachment. Concentration of &#946;-hydroxybutyrate (BHBA) in blood as an indicator of ketosis, total and ionic calcium in blood serum as an indicator of hypocalcemic puerperal paresis, and indicators of immunity immunoglobulin G (IgG) and total protein in serum were determined from blood samples collected at calving, being repeated in the ninth week after calving for BHBA. The variables calving easy and retained placenta were evaluated using a generalized linear model with binomial distribution (logistic regression). Variables BHBA, gestation length, total and ionized calcium, total protein and IgG were evaluated using a randomized experimental design, and data subjected to analysis of variance. The CCS data were transformed to somatic cell score (ECS) and subjected to analysis of variance with repeated measures in time. The genetic groups did not affect the calving easy (P = 0.4376), retained placenta (P = 0.7074) and gestation length (P=0.2812). Crossbred cows had higher concentrations of IgG (1.776 versus 1.456 mg / dL) and total protein (7.019 versus 6.525 mg / dL). For the concentration of BHBA, differences occurred only at calving, with higher values for crossbred cows (0.580 versus 0.427 mmol / L). Difference was observed between genetic groups for concentration of ionized calcium (P = 0.082), with crossbred cows presented lower concentration (4.3 versus 3.92 mg / dL). Adult crossbred cows (from 3 years of age at calving), had lower ECS (P <0.0001). It is concluded that crossbred cows have superior performance compared to Holstein cows for somatic cells in milk and immunity indicators and lower for hypocalcemic puerperal paresis and ketosis indicators on the day of calving. Crossbred cows do not have an increased risk of dystocia in relation to pure Holstein cows when mated with pure Holstein bulls / O cruzamento com a raça Jersey vem sendo utilizado principalmente como alternativa para o aumento da concentração de sólidos do leite em rebanhos da raça Holandesa, sendo a capacidade de produção destes animais fruto de diversos estudos. Entretanto, ainda existem limitadas informações sobre diversos fatores relevantes para a tomada de decisão e para o manejo de rebanhos cruzados, tais como resistência a doenças e facilidade de parto, sendo esta a motivação do presente trabalho, o qual objetivou avaliar a sanidade, imunidade e dificuldade de parto de vacas mestiças Holandês x Jersey em relação a vacas puras da raça Holandesa. Os dados foram obtidos de uma propriedade localizada no município de Carambeí PR, a qual possui vacas puras da raça Holandesa e mestiças Holandês x Jersey em diferentes proporções de cada raça. Dados de dificuldade de parto, duração da gestação, retenção de placenta, indicadores sanguíneos para doenças metabólicas pós-parto (cetose e paresia puerperal hipocalcêmica) e de imunidade foram coletados no período de julho de 2010 a junho de 2011 e os dados de Contagem de Células Somáticas (CCS) obtidos do controle leiteiro oficial, no período de 2005 a 2010. Para facilidade de parto adotou-se uma escala de variando de 1 (partos sem auxílio) a 5 (extrema dificuldade, cesariana ou morte) e a retenção de placenta quando transcorridos 24 horas do parto sem desprendimento dos envoltórios fetais. Concentração de &#946;-hidroxibutirato (BHBA) no sangue, como indicador de cetose, cálcio total e iônico no soro sanguíneo, como indicador de paresia puerperal hipocalcêmica, e os indicadores de imunidade Imunoglobulina G (IgG) e proteína total no soro, foram determinados a partir de amostras de sangue coletadas no dia do parto, sendo repetido na nona semana após o parto para BHBA. As variáveis facilidade de parto e retenção de placenta foram avaliadas através de um modelo linear generalizado, com distribuição binomial (regressão logística) As variáveis duração da gestação, BHBA, cálcio total e iônico, IgG e proteína total foram avaliadas através de delineamento experimental inteiramente casualizado, sendo os dados submetidos à análise de variância. Os dados de CCS foram transformados para Escore de Células Somáticas (ECS) e submetidos à análise de variância através de medidas repetidas no tempo. O grupamento genético não afetou a facilidade de parto (P=0,4376), a retenção de placenta (P=0,7074) e a duração da gestação (P=0,2812). Vacas mestiças apresentaram maiores concentrações de IgG (1,776 contra1,456 mg/dL) e de proteína total (7,019 contra 6,525 mg/dL). Quanto à concentração de BHBA, ocorreu diferença somente no dia do parto, com valores mais altos para as vacas mestiças (0,580 contra 0,427 mmol/L). Observou-se diferença entre grupamentos genéticos para concentração de cálcio iônico (P=0,082), com vacas mestiças apresentando concentração mais baixa (4,3 contra 3,92 mg/dL). Vacas mestiças adultas (a partir de 3 anos de idade no momento do parto), apresentaram menor ECS (P<0,0001). Conclui-se que vacas mestiças apresentam desempenho superior em relação às vacas da raça Holandesa para células somáticas no leite e indicadores de imunidade e inferior para os indicadores de paresia puerperal hipocalcêmica e cetose no dia do parto. Vacas mestiças não apresentam risco maior de distocia em relação às puras quando acasaladas com touros da raça Holandesa

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_Mara_Saalfeld.pdf: 1507358 bytes, checksum: 268615e5bd86cf1b94f0f708eebbb5fe (MD5) Previous issue date: 2013-05-22 / Colostrum is considered essential for newborns as a nutritional source and transfer for passive immunity. The production of colostrum above the calf intake capacity enables using the surplus as a milk replacer. One way of using it is through the anaerobic fermentation commonly called as colostrum silage. This food provides adequate weight gain to the animals; however, there is no data concerning the result of anaerobic fermentation on its elements. The aim of this study was to assess the physic-chemical, microbiological and immunological characteristics of the colostrum silage and its usage as nutritional supplement in animal feeding and its usage in the production of food for human usage. The centesimal assessment demonstrated that colostrum has nutrients in bigger amounts than the ones found in milk and that the colostrum silage kept the nutrients found in colostrum in natura, mainly the proteins (14,24%), dry matter (17,54%) and fat (5,55%), with the exception of lactose which, 30 days after fermentation was not detected anymore. It was noticed that the pH values decreased while there was an increase of lactic acid concentrations. Animals fed with colostrum silage had a weight gain at weaning of 0.7 above (p<0.05) the control animals (food with milk) which presented weight gains of 0.6 kg/day. The microbiological assessment showed that 21 days after fermentation the pathogenic bacteriae tested were not detected anymore, while there were still lactic acid bacteriae identified through sequencing the 16S rDNA as Lactobacillus (75%) and Enterococcus (25%). Identified as Lactobacillus (75%) (L. casei, L. brevis, L. rennanqily, L. crustorum) and Enterococcus (25%) (E. durans, E. faecium E. faecalis and E. mundyii). The immunoglobulins assessment in colostrum silage was carried out through the Immuno enzymatic method (ELISA), in which it was proved that after 12 months of storage, the colostrums silage kept feasible immunoglobulins and these were transmitted to newborns in the same proportion as the colostrum in natura. It was possible to elaborate foods such as dairy beverage and butter from the colostrum silage keeping the nutritional characteristics and microbiota containing lactic acid bacteria. The carrying out of sensory analysis reached an acceptance of 85% and purchasing intention from the assessors. Thus, it can be concluded that colostrums silage is a food of high nutritional value, microbiologically innocuous food, with immunological capability, and that it can be used in animal feeding with the need of proper legislation to enable its usability as human food. / O colostro é considerado essencial para bovinos recém-nascidos como fonte nutricional e transferência de imunidade passiva. A produção de colostro acima da capacidade de ingestão da bezerra permite utilizar o excedente como sucedâneo lácteo. Uma das formas de utilização é através da fermentação anaeróbica popularmente chamada de silagem de colostro. Este alimento garante ao animal ganho de peso adequado, entretanto, não existem dados sobre o resultado da fermentação anaeróbica sobre seus constituintes. Objetivou-se neste estudo avaliar as características físico-químicas, microbiológicas e imunológicas da silagem de colostro e a sua utilização como suplemento nutricional em alimentação animal e o seu uso no desenvolvimento de produtos para consumo humano. A avaliação centesimal demonstrou que o colostro possui nutrientes em quantidades superiores ao leite e que a silagem de colostro manteve os nutrientes presentes no colostro in natura, principalmente proteínas (14,24%), matéria seca (17,54%) e gordura (5,55%), com exceção da lactose que, após 30 dias de fermentação, não foi mais detectada. Observou-se que os valores de pH diminuíram ao mesmo tempo que houve aumento das concentrações de ácido láctico. Animais alimentados com a silagem de colostro obtiveram ganho de peso ao desmame de 0,7Kg/dia, superiores (p<0.05) aos animais controle (alimentados com leite) que apresentaram ganhos de peso de 0,6kg/dia. A avaliação microbiológica demonstrou que após 21 dias de fermentação, as bactérias patogênicas testadas não foram mais detectadas, restando viáveis bactérias ácido lácticas que por sequenciamento da região 16S rDNA foram identificadas como Lactobacillus (75%) (L. casei, L. brevis, L. rennanqily, L. crustorum) e Enterococcus (25%) (E. durans, E. faecium, E. faecalis e E. mundyii). A avaliação das imunoglobulinas na silagem de colostro foi realizada por ELISA, ficando comprovado que após 12 meses de armazenamento a silagem de colostro manteve imunoglobulinas viáveis e estas foram transmitidas aos recém-nascidos na mesma proporção que o colostro in natura. Foi possível elaborar alimentos como, bebida láctea e manteiga, a partir da silagem de colostro, com manutenção das características nutricionais e microbiota constituída de bactérias ácido lácticas. A realização da análise sensorial obteve 85% de aprovação, com intenção de compra pelos avaliadores. Assim, pode-se concluir que a silagem de colostro é um alimento de elevado valor nutricional, microbiologicamente inócuo, com potencial imunológico, e que pode ser utilizado na alimentação animal após 21 dias de fermentação, necessitando adequações à legislação para o seu uso na alimentação humana.