Submitted by Mery Piedad Zamudio Igami (mery@ipen.br) on 2017-03-10T15:01:44Z No. of bitstreams: 1 22058.pdf: 1629255 bytes, checksum: 26070b2e80c7a4ee0c8281ffabb5a414 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T15:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 22058.pdf: 1629255 bytes, checksum: 26070b2e80c7a4ee0c8281ffabb5a414 (MD5) / As raias são peixes peçonhentos e estão frequentemente associadas a acidentes em seres humanos, principalmente na região Norte do Brasil, favorecidos pelo hábito desses peixes de permanecerem no fundo de águas rasas e pela contínua utilização humana dos rios. Os ferrões das raias causam lesões dolorosas, edema, necrose, e o muco que recobre toda a extensão do corpo desses peixes pode aumentar a gravidade desses ferimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imunológica induzida pelo muco de Paratrygon aiereba nativo ou irradiado por raios gama de 60Co em modelos animais. Foram realizados ensaios imunoenzimáticos e Western blotting para verificar a resposta humoral e reatividade cruzada dos soros provenientes de camundongos Swiss e coelhos New Zealand previamente imunizados contra o veneno, muco nativo ou irradiado. A indução da produção de anticorpos in vitro, as subclasses de IgG e a quantificação de citocinas foram analisados. Além de realizados ensaios de soroneutralização da atividade edematogênica in vitro e in vivo e de viabilidade celular. Os dados foram analisados estatisticamente por meio de análise de variância. O protocolo de imunização possibilitou a obtenção de soros com títulos satisfatórios de anticorpos policlonais. O muco e veneno de P. aiereba são imunogênicos e apresentam reatividade antigênica. O muco nativo ou irradiado induziu a produção de anticorpos IgG e esses reconheceram antígenos presentes no muco de outras espécies de raias. Células esplênicas de animais imunizados contra o muco irradiado produziram IFN-γ, TNF- α e IL-10 e também foi observada a produção sérica de TNF-α (grupo imunizado contra o muco irradiado) e de IL-6 e IL-17 (grupo imunizado contra o muco nativo). O soro anti-muco irradiado reduziu a atividade edematogênica in vitro, ao contrária da in vivo que não foi neutralizada. Os resultados corroboram o uso da radiação ionizante, com produção de anticorpos altamente responsivos e melhor resposta imune, além de comprovar que o muco de Paratrygon aiereba foi capaz de estimular resposta imune adaptativa celular e humoral. / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear ) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

INTRODUÇÃO: As infecções causadas por bactérias ou vírus são frequentes em pacientes com imunodeficiência comum variável (ICV) devido à deficiência de anticorpos e associação com alteração da função das células T. OBJETIVOS: Avaliar o efeito da ativação de receptores Toll-like (TLR) utilizando ligantes de TLRs em células T monofuncionais ou polifuncionais em pacientes com ICV. MÉTODOS: Foram selecionados 16 pacientes com ICV do Ambulatório de Manifestações Dermatológicas das Imunodeficiências Primárias ADEE3003 HC-FMUSP e 16 controles saudáveis. Os métodos utilizados de citometria de fluxo foram: a) análise em sangue periférico de linfócitos B, linfócitos T quanto ao perfil de ativação/maturação, linfócitos T foliculares (Tfh) e células T reguladoras (Treg); b) dosagem de citocinas e quimiocinas em amostras de soro e em sobrenadante de culturas de células mononucleares do sangue periférico (CMNs) estimuladas com agonistas de TLRs; c) avaliação das células TCD4+ mono e polifuncionais secretoras de IL-17a, IL-22, TNF, IFN- e IL-10, e expressão de marcador de ativação crônica de CD38 estimuladas por agonistas de TLR2, TLR3 e TLR7/8 e estímulos policlonais como enterotoxina B de Staphylococcus aureus (SEB) e acetato miristato de forbol e ionomicina (PMA/IONO); d) células Th22 e Tc22 estimuladas com TLR e SEB. RESULTADOS: Na ICV, os linfócitos B do sangue periférico mostram diminuída frequência, sendo em maior frequência de linfócitos B naïve (CD19+IgD+CD27-), e ausência de células B de memória. Além disto, um aumento na expressão do marcador de exaustão PD-1 foi observado nas células TCD4+ de memória efetora (CD45RA-CCR7-) e na expressão de CD38, em células TCD8+ terminalmente diferenciadas (CD45RA + CCR7-). Em contraste, houve diminuição na frequência de células T reguladoras naïve nos pacientes com ICV. Nos indivíduos com ICV foi observado aumento na frequência de células TCD4+ TNF+ sob estímulo TLR2 e TLR7/8 comparado ao grupo controle, enquanto que sob estímulo com PMA/IONO houve menor frequência de células TCD4+ e TCD8+ secretoras de IFN-y IL-17a, IL-22 ou TNF. Já em células TCD8+ houve importante redução na ativação via TLR3 na resposta de IL-22, IFN-y e IL-17a. Contudo, os estímulos com TLR7/8 e SEB foram capazes de aumentar a frequência de células Th22 e Tc22 nos pacientes com ICV. Em geral, as células TCD4+, que secretam simultaneamente 4 a 5 citocinas induzidas por TLR foram preservadas em ICV. Embora as células TCD4+ polifuncionais secretoras de 3 citocinas, foram capazes de responder a estímulos via TLR2 e TLR7/8, as células TCD8+ não responderam para qualquer estímulo via TLRs. Além disso, as células T que expressam CD38 mostraram menor polifuncionalidade aos estímulos via TLRs e PMA/IONO. O perfil inflamatório nos pacientes com ICV foi observado pela elevação sérica de IL-6, CCL-2, CCL-5, CXCL8, CXCL-9, CXCL-10. Alteração na resposta aos agonistas de TLRs em ICV pode ser observada com a ativação dos agonistas de TLRs em CMNs, que mostrou maior produção de TNF e diminuição de CCL2 e CXCL8 após ativação via TLR4. Em contraste, o agonista de TLR7/8, teve ação oposta induzindo CXCL10 e reduzindo os níveis de CXCL9. Chama atenção no ICV, à reduzida secreção de IFN-alfa induzida por TLR7/8, que não foi observada com a ativação via TLR9. CONCLUSÕES: Até o momento, os achados em ICV mostram alterações nas células T, seja quanto à baixa frequência de células T reguladoras naïve e a reduzida resposta efetora, em especial das células TCD8+. Contudo, enfatiza o potencial de adjuvante dos agonistas de TLR7/8 na ativação das células T / INTRODUCTION: Infections caused by bacteria or viruses are common in patients with Common Variable Immunodeficiency (CVID), due to antibody deficiency and association with altered function of T cells. OBJECTIVES: To evaluate the effect of Toll-like receptors (TLR) activation using TLR agonists on the monofunctional or polyfunctional T cells in patients with CVID. METHODS: We selected 16 patients with ICV from the Dermatologic Manifestations of Primary Immunodeficiencies Clinic ADEE3003 HC-FMUSP and 16 healthy controls. The methods used for flow cytometry were: a) analysis of peripheral blood B lymphocytes, T lymphocytes were assessed by the activation/maturation profile, follicular T cells (Tfh) and regulatory T cells (Treg); b)evaluation of cytokines and chemokines serum levels and in supernatants of mononuclear cell cultures from peripheral blood (PBMC) stimulated with TLR agonists; c) evaluation of mono and polyfunctional CD4+ T cells secreting IL-17a, IL-22, TNF, IFN-y and IL-10, and expression chronic activation marker of CD38 stimulated by agonists of TLR2, TLR3 and TLR7/8 and polyclonal stimuli such as Staphylococcus aureus enterotoxin B (SEB) and phorbol myristate acetate and ionomycin (PMA / IONO); d) analysis of Tc22 and Th22 cells stimulated with TLR and SEB. RESULTS: In the CVID, the peripheral blood B cells show decreased frequency, being higher frequency of naïve B cells (IgD+ CD19+ CD27-) and lack of memory B cells. Moreover, an increased expression of PD-1, an exhaustion marker, was detected in the CD4+ T cell effector memory (CD45RA- CCR7-) and expression of CD38 on CD8+ T terminally differentiated cells (CD45RA+ CCR7-). In contrast, a decreased frequency of naïve regulatory T cells was detected in the patients with CVID. In CVID patients it was observed increased frequency of T CD4+ TNF+ cells upon TLR2 and TLR7/8 agonists compared to the control group, while under stimulation with PMA /IONO there was a lower frequency of CD4+ and CD8+T cells secreting IFN-y, IL-17a, IL-22 or TNF. The CD8+T cells showed a significant reduction of in the IL-22 response, IFN-? and IL-17a induced by TLR3 activation. However, stimulation with TLR7/8 and SEB were able to increase the frequency of Th22 and TC22 cells in the patients with CVID. In CVID patients it was observed increased frequency of T CD4+ TNF+ cells upon TLR2 and TLR7/8 agonists compared to the control group, while under stimulation with PMA /IONO there was a lower frequency of CD4+ and CD8+ T cells secreting IFN-y, IL-17a, IL-22 or TNF. The CD8+ T cells showed a significant reduction of in the IL-22 response, IFN-y and IL-17a induced by TLR3 activation. However, stimulation with TLR7/8 and SEB were able to increase the frequency of Th22 and TC22 cells in the patients with CVID. In general, CD4+ T cells that secrete simultaneously 4 to 5 cytokines induced by TLR were preserved in CVID. Although polyfunctional CD4+ T cells secreting 3 cytokines were able to respond to TLR2 and TLR7/8 agonists, the CD8+ T cells did not respond to any stimuli. In addition, T cells expressing CD38, showed lower polyfunctionality to the stimuli via TLRs and PMA/IONO. Furthermore, the inflammatory status in the patients with CVID was observed by the increased serum levels of IL-6, CCL-2, CCL-5, CXCL8, CXCL-9, CXCL-10. In contrast, the agonist of TLR7/8 had opposite action inducing CXCL10 and reducing the CXCL9 levels. Noteworthy in CVID, that the reduced secretion of IFN-alfa induced by TLR7/8 was not observed with TLR9 activation. CONCLUSIONS: To date, the CVID findings shows alterations in the T cells, as the low frequency of naïve regulatory T cells and reduced effector response, mainly of CD8+ T cells. However, it emphasizes the adjuvant potential of the TLR7/8 agonist in the T cells activation

Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à periodontite agressiva e produz CDT. Visando contribuir no entendimento do papel da CDT na regulação da resposta imune, foi determinada sua atividade sobre macrófagos e a resposta humoral contra a toxina. CDT inibiu a proliferação de células epiteliais OBA-9 e macrófagos Raw 264.7 e também a produção de NO por células Raw 264.7 e macrófagos peritoneais de camundongos C3H/HePas e C3H/HeJ, mas estimulou a produção de IL-12. Na imunidade humoral, 75% dos soros de indivíduos com PAgL e 81,8% dos PAgG foram reativos para A. actinomycetemcomitans. Não houve diferença na resposta contra CDTA e CDTB entre o soro de pacientes com diferentes condições periodontais. Todos os pacientes PAgG foram soropositivos para a CDTC, porém apenas 8,3% dos indivíduos com PAgL, nenhum dos PC e 25% dos saudáveis foram positivos. CDT tem atividade imunomodulatória e a resposta humoral difere entre indivíduos infectados pela bactéria. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is associated with aggressive periodontitis and produces CDT. Aiming to contribute in the understanding the CDT activity in the immune response regulation, its action on macrophages was determined and the response against the toxin analyzed. CDT inhibited the proliferation of OBA-9 epithelial cells and Raw 264.7 macrophages and also inhibited the NO production by Raw 264.7 cells and peritoneal macrophages of C3H/HePas and C3H/HeJ mice, however, stimulated the IL-12 production. In the humoral immunity, 75% of sera from LAgP subjects and 81.8% were reactive to A. actinomycetemcomitans. There was not difference in the response against CDTA and CDTB among sera of patients with different periodontal conditions. All GAgP subjects were sera-reactivity to CDTC, however only 8.3% LAgP subjects, none in CP and 25% of healthy subjects were positive. CDT has immunomodulatory activity and the humoral response differ among bacteria infected subjects.

A imunodeficiência comum variável (CVID) é caracterizada por hipogamaglobulinemia e infecções recidivantes. Neste estudo verificamos o papel da via Unfolded Protein Response (UPR) na patogênese da doença. Uma paciente com CVID apresentou expressão aumentada do RNAm XBP-1 unspliced e co-localização de IgM e BiP no retículo endoplasmático (RE). Verificamos a ausência de mutações nos produtos obtidos por RT-PCR de XBP-1 e nos domínios quinase/endonuclease da IRE-1a. Análises por Q-PCR dos RNAm XBP-1 spliced, IRE-1a e BiP após tratamento com LPS ou brefeldina A mostrou que, ao contrário dos controles saudáveis que respondem a estes estressores com ondas de transcrição destes três genes, esta paciente apresenta baixos níveis de transcrição, não atingindo o mesmo nível de resposta apresentado pelos indivíduos saudáveis. Nossos achados associam o splicing diminuído do RNAm XBP-1 ao acúmulo de IgM no RE e baixas taxas de transcrição de chaperonas, fornecendo um mecanismo para explicar a hipogamaglobulinemia observada em uma paciente com CVID. / Common Variable Immunodeficiency (CVID) is characterized by hypogammaglobulinemia and recurrent infections. Herein we addressed the role of Unfolded Protein Response (UPR) in the pathogenesis of the disease. Augmented unspliced XBP-1 mRNA concurrent with co-localization of IgM and BiP was found in one CVID patient. Sequencing of RT-PCR amplicons did not reveal any mutation on XBP-1 neither on the kinase/endonuclease domains of IRE-1a. Q-PCR analysis of spliced XBP-1, IRE-1a and BiP after LPS or Brefeldin A treatment showed that, unlike healthy controls that respond to these ER stressors by presenting waves of transcription of these three genes, the cells presented lower rates of transcription, not reaching the same level of response of healthy subjects. Our findings associate diminished splicing of XBP-1 mRNA with accumulation of IgM within the ER and lower rates of chaperone transcription, therefore providing a mechanism to explain the observed hypogammaglobulinemia.

O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos de diferentes manejos de fornecimento de colostro sobre a aquisição sérica de imunoglobulina G (IgG) e do fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), bem como as modificações morfológicas e morfométricas do epitélio intestinal em bezerros recém-nascidos. Foi utilizado o fornecimento prolongado de colostros de diferentes concentrações, incluindo colostro enriquecido com colostro liofilizado e acompanhada a flutuação dos níveis séricos de IgG e proteína total (PT) nas primeiras 72 horas de vida, com diferentes condições iniciais de aquisição de imunidade passiva. Também foi estudada a relação da massa de IGF-I ingerida com possíveis alterações na morfologia entérica e nos enterócitos. Oitenta e dois bezerros da raça Holandesa receberam, ao nascimento, colostro com concentrações variáveis de IgG. Com base na avaliação sérica das imunoglobulinas realizada na décima hora de vida, os animais foram distribuídos em dois grupos, IgG sérica abaixo ou acima de 12 mg mL-1. Cada grupo foi submetido à três tratamentos de acordo com a refeição fornecida às 12 horas de vida, colostro baixo (concentração de IgG inferior à 30 mg mL-1), colostro alto (superior à 100 mg mL-1) ou colostro enriquecido de colostro liofilizado (superior à 120 mg mL-1). Às 0, 10-12, 24, 36, 48 e 72 horas de vida foi coletado sangue dos bezerros para análise de IgG, PT e IGF-I, e amostras do duodeno; jejuno proximal, médio e distal; e íleo para análise histomorfológica. Para análise das variáveis séricas, considerou-se um delineamento experimental inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo. Para análise das variáveis morfométricas dos segmentos intestinais foi considerado um arranjo fatorial 3X3+1, correspondendo à massa total de IGF-I fornecida via colostro, às idades de abate (10, 24-36 e 72 horas de vida) e o grupo controle (nascimento). O fornecimento prolongado de colostro enriquecido em bezerros com alta aquisição inicial não apresentou efeito significativo sobre a flutuação sérica de IgG. A ingestão de sólidos totais acima de 150 g determinou menores valores de IgG sérica. Os animais com baixa aquisição inicial mostraram uma maior eficiência de absorção de anticorpos comparados aos com alta aquisição inicial. A massa de IGF-I consumida não influenciou os níveis séricos desta variável, porém influenciou o comportamento da densidade dos vilos ileais e a altura dos microvilos do duodeno, jejuno proximal e médio. Os valores do volume parcial da mucosa absortiva do nascimento às 10 horas de vida apresentaram diferenças significativas. O fornecimento prolongado de colostro de alta concentração de imunoglobulinas e IGF-I influenciou a morfologia da mucosa entérica. / The objective of this study was to evaluate the effects of different colostrum supply on the serum immunoglobulin G (IgG) acquisition and the insulin-like growth factor-I (IGF-I), as well as the morphologic and morphometric modifications of the intestinal epithelium in the newborn calves. The prolonged supply of colostrum with different concentrations was used, including colostrum enriched with lyophilized colostrum, and was accompanied the fluctuation of serum IgG and total protein (TP) of calves in the first 72 hours of life, according to initial passive immunity acquisition. It was also studied the relation of IGF-I mass ingested with possible alterations in the intestinal morphology and enterocytes. Eighty two Holstein calves received at birth colostrum with different concentrations of IgG. Based on serum immunoglobulins evaluation at ten hour of life, the animals were distributed in two groups, serum IgG below or above 12 mg mL-1. Each group received three treatments in agreement with the meal supplied at 12 hours of life, low colostrum (IgG inferior to 30 mg mL-1), high colostrum (superior to 100 mg mL-1) or enriched with lyophilized colostrum (superior to 120 mg mL-1). At 0, 10-12, 24, 36, 48 and 72 hours of life blood was collected from calves for IgG, TP and IGF-I analysis, and samples from duodenum; proximal, middle and distal jejunum, and ileum for histomorphologic analysis. A completely randomized design was used with the serum variables analyzed as repeated measures on time. The morphometric variables of the intestinal segments were considered a factorial arrangement 3X3+1, corresponding to the total mass of IGF-I supplied in colostrum and the slaughter ages (10, 24-36 and 72 hours of life) plus the control group (birth). The prolonged supply of enriched colostrum in calves with high initial acquisition did not present significant effects on the serum IgG fluctuation. The ingestion of total solids above 150 g determined lower values of serum IgG. The animals with low initial acquisition showed better absorption efficiency of antibodies compared to high initial acquisition. The mass of IGF-I consumed did not influence the serum levels of this variable; however it influenced the behavior of the density of the ileum villi and the height of the microvillus from duodenum, proximal and middle jejunum. The values of the partial volume of the absorptive mucous membrane from birth to 10 hours of life presented significant differences. The prolonged supply of colostrum with high immunoglobulins and IGF-I concentrations influenced the morphology of the intestinal mucosa.

Les nouveaux immunosuppresseurs utilisés en transplantation rénale depuis le début des années 2000 :mycophenolate mofetil (MMF), tacrolimus, Neoral (nouvelle formulation de la cyclosporine-Sandimmun) et les inhibiteurs du mTOR ont amélioré le contrôle du risque de rejet, ainsi que la survie du greffon. Ces progrès sont contrebalancés par un risque accru d’infections. Nous avons évalué l'impact des nouveaux immunosuppresseurs sur les défenses humorales anti-infectieuses en 2 parties. Pour la première partie, nous avons étudié les réponses humorales primaires contre des antigènes protéiques. La 1ère étude montre que les réponses après l’administration d’un anticorps monoclonal anti-CD3 (OKT3) en induction sont profondément et additionnellement inhibées par le MMF comparé à l'AZA, et par le Neoral comparé au Sandimmun, ce qui empêche la neutralisation de ce puissant immunosuppresseur. La 2ème étude analyse les réponses au vaccin adjuvanté contre l’influenza H1N1 pandémique de 2009. Seuls 44% des transplantés rénaux ont développé une séroconversion, contre 57% de patients hémodialysés et 90% de contrôles sains. Nous observons aussi que le MMF limite l’augmentation des titres d’anticorps après vaccination par rapport à l’AZA. <p>Pour la seconde partie, nous observons l’évolution de composants de l’immunité humorale et innée au cours de la 1ère année de greffe. La 3ème étude montre que l’incidence de l’hypogammaglobulinémie atteint 45% à 3 mois de greffe, et est encore de 30% à 1 an. Les taux de MBP diminuent progressivement ce qui augmente le risque de sepsis et d’infection virale (CMV), tandis que l’hypogammaglobulinémie combinée :IgG + [IgA ou IgM] est corrélée avec une incidence élevée d’infections précoces (86%, RR :2, P=0.048), surtout d’origine respiratoire. La 4ème étude, indique que les immunosuppresseurs diminuent intensément les titres en Ac spécifiques induits avant la greffe :les Ac anti-pneumococciques, de nature polysaccharidique (Ac T-indépendants) et surtout les Ac anti-Anatoxine tétanique, de nature protéique (Ac T-dépendants). L’ensemble de notre observation conclut que les immunosuppresseurs actuels, et plus particulièrement le Mycophenolate diminuent fortement la production et le maintien des immunoglobulines, et ont un impact infectieux important. Il en découle que les stratégies de vaccination recommandées méritent d'être appliquées et que la vigilance à l'égard des pathogènes doit être implémentée. <p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Rangelia vitalii is the etiologic agent of rangeliosis, a hemorrhagic disease that was described in dogs from South and Southeast Brazil, Uruguay and Argentina. The immunological aspects involved in this disease have not been fully elucidated. This study aimed to investigate the immunological parameters in rangeliosis by the determination of serum cytokines, nitric oxide, electrophoretic profile, acute phase proteins and immunoglobulins of dogs experimentally infected with R. vitalii. Twelve dogs were divided into two groups: Group A (control) composed by uninfected animals (n=5) and Group B consisting of animals inoculated with R. vitalii (n=7). After inoculation, animals were monitored by blood smear. Blood samples were collected through the jugular vein on days 0, 10 and 20 post-inoculation (PI) to determine the serum levels of interferon-gamma (IFN-γ), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interleukin 1 (IL-1), interleukin 6 (IL-6), oxidation products of nitric oxide (NOx), electrophoretic profile, acute phase proteins (C-reactive protein and alpha 1 acid glycoprotein) and immunoglobulins (IgG, IgM, IgA and IgE). The parasite was found within erythrocytes, neutrophils and monocytes on day 5 PI in infected group. This study showed an increase (P<0.01) of cytokines levels in the infected group when compared to control group. Serum levels of NOx increased on days 10 (P<0.01) and 20 PI (P<0.05) in infected animals. Total protein decrease on days 10 (P<0.01) and 20 (P<0.05) PI. There was a reduction (P<0.01) in albumin in infected group when compared with control group. Alpha-1 globulin and gamma globulin fractions increased (P<0.01) on day 20 PI in infected animals. Alpha-2 globulin (days 10 and 20 PI) and beta-2 globulin (day 10 PI) were decreased (P<0.05) in infected animals when compared to control group. Beta-1 globulin fraction did not differ statistically. Serum C-reactive and alpha 1 acid glycoprotein concentrations increased (P<0.05) on days 10 and 20 PI in infected animals. IgG was increased on days 10 (P<0.05) and 20 PI (P<0.01) in infected animals. It was observed an increase (P<0.01) in the levels of IgM, IgA, and IgE in infected animals compared to control group. From these results, we can conclude that rangeliosis causes alterations in serum cytokines, nitric oxide metabolites, serum proteins and stimulates the synthesis of acute phase proteins and immunoglobulins. These alterations may be associated with the host immune protection against the piroplasms, similar to what occurs in other hemoparasite infections. / Rangelia vitalii é o agente etiológico da rangeliose, uma doença de curso hemorrágico que foi descrita em cães no Sul e Sudeste do Brasil, Uruguai e Argentina. Os aspectos imunológicos envolvidos nessa doença não foram totalmente elucidados. Nesse estudo objetivou-se investigar os parâmetros imunológicos na rangeliose, através da determinação sérica de citocinas, óxido nítrico, perfil eletroforético, proteínas de fase aguda e imunoglobulinas de cães experimentalmente infectados por Rangelia vitalii. Foram utilizados 12 cães divididos em dois grupos: Grupo A (controle) composto por animais não infectados (n=5) e Grupo B composto por animais inoculados com R. vitalii (n=7). Após inoculação, os animais foram monitorados por esfregaço sanguíneo. Foi coletado sangue da veia jugular nos dias 0, 10 e 20 pós-inoculação (PI) para a dosagem sérica das citocinas interferon gama (IFN-γ), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina 1 (IL-1) e interleucina 6 (IL-6), dosagem de produtos de oxidação do óxido nítrico (NOx), perfil eletroforético, dosagem de proteínas de fase aguda (proteína C-reativa e alfa 1 glicoproteína ácida) e imunoglobulinas (IgG, IgM, IgA e IgE). No grupo infectado o parasita foi encontrado no interior de eritrócitos, neutrófilos e monócitos no dia 5 PI. Esse estudo demonstrou aumento (P<0,01) dos níveis de citocinas séricas no grupo infectado em relação ao grupo controle. Os níveis séricos de NOx aumentaram nos dias 10 (P<0,01) e 20 PI (P<0,05) nos animais infectados. A proteína total reduziu nos dias 10 (P<0,01) e 20 PI (P<0,05). Ocorreu redução (P<0,01) de albumina no grupo infectado em relação ao grupo controle. As frações alfa-1 globulina e gama globulina aumentaram (P<0,01) nos animais infectados no dia 20 PI. Alfa-2 globulina (dias 10 e 20 PI) e beta-2 globulina (dia 10 PI) decresceram (P<0,05) nos animais infectados em comparação ao grupo controle. A fração beta-1 globulina não diferiu estatisticamente. As concentrações séricas de proteína C- reativa e alfa-1 glicoproteína ácida aumentaram (P<0,05) nos dias 10 e 20 PI nos animais infectados. Ocorreu aumento de IgG nos dias 10 PI (P<0,05) e 20 PI (P<0,01) no soro dos animais infectados. Foi observado aumento (P<0,01) de IgM, IgA e IgE nos animais infectados em relação ao grupo controle. A partir dos resultados pode-se concluir que a rangeliose causa alteração na concentração de citocinas séricas, nos metabólitos do óxido nítrico, nas proteínas séricas e estimula a síntese de proteínas de fase aguda e imunoglobulinas. Estas alterações podem ser associadas à resposta imune do hospedeiro contra o piroplasma.

Avaliou-se o efeito de diferentes fontes de colostro, caprino e bovino in natura, e bovino liofilizado em 25 cabritas distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos: CCA - colostro caprino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CCB - colostro caprino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG); CBA - colostro bovino adequado (45 a 55 mg/mL de IgG); CBB - colostro bovino baixo (15 a 25 mg/mL de IgG) e CBL - colostro bovino liofilizado (45 a 55 mg/mL de IgG). Os animais receberam 5% do peso vivo de colostro às 0,12 e 24 horas após o nascimento e, em seguida, leite de vaca duas vezes ao dia e concentrado ad libitum até 60 dias de idade. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 de idade. O sangue foi analisado quanto ao valor de hematócrito e a concentração de proteína total (PT). As frações protéicas separadas por eletroforese e a condição de diarréia foi avaliada através de cor, consistência, presença de sangue/muco. As variáveis sanguíneas foram analisadas como medidas repetidas no tempo. Com relação ao valor de hematócrito efeito de período foi observado, o valor no primeiro dia de idade, 28,76±1,76, foi maior que nos 10, 30, 35 e 60 dias de idade, com valores médios de 23,88±0,98, 24,18±0,70, 23,73±0,74 e 24,53±0,79%, respectivamente. Interação entre tratamento e período foi verificado para PT sérica, os tratamentos CCB, CBA, CBB e CBL apresentaram aumento gradativo nas concentrações séricas até os 60 dias de idade, enquanto CCA apresentou valores nos dias 10,15, 40, 50 e 60 dias de idade maiores que o valor ao nascimento. Os valores de albumina sérica foram afetados pelo tratamento e período, sendo o valor em CBL, 2,39±0,12 g/dL, significamente inferior ao dos tratamentos CCA, CCB, CBA e CBB, com 3,20±0,12, 2,94±0,12, 3,25±0,12, 3,08±0,12 g/dL, respectivamente. Um aumento gradativo nas concentrações desta variável foi observado até os 60 dias de idade. Ao 0 e ½ dia de idade os valores de globulina sérica foram menores que os observados na última data experimental, 60 dias de idade. A relação albumina/globulinas sérica foi afetada pelo efeito de tratamento e período, com os valores em CBL significativamente superiores do que em CCA, CCB, CBA e CBB. A relação foi maior ao nascimento diminuindo nas datas subseqüentes, ½ e 1 dia de idade. A variável gamaglobulina apresentou efeito de tratamento e período, com valores em CBL significativamente superiores do que em CCB e CBB, não diferindo dos encontrados em CCA e CBA. Os valores ao 0 e ½ dia de idade foram menores que aos 60 dias de idade. Observando a condição de diarréia nos tratamentos verificou-se que os animais CCB e CBB apresentaram maior frequência de diarréia que os animais dos demais tratamentos, indicando uma relação inversa entre anticorpos no colostro e condição de diarréia. Os resultados indicam que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado para caprinos recém-nascidos como fonte alternativa para a aquisição de proteção inicial. / It was to evaluated the effect of different sources of colostrum, goat and bovine in natura, and lyophilized bovine in 25 newborn female goat kids were randomly allocated to five treatments: GCA - goat colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), GCL - goat colostrum low (15 to 25 mg/mL of IgG), BCA - bovine colostrum adequate (45 to 55 mg/mL of IgG), LBC - bovine colostrum low (15 to 25 mg / mL of IgG) and of treatment CBL, lyophilized bovine colostrum (45 to 55 mg / mL of IgG). The animals received 5% of body weight of colostrum at 0, 12, 24 hr after birth and then, bovine milk twice a day and concentrate ad libitum until 60 days of life. Blood samples were collected in 0, ½, 1, 2 , 5, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 e 60 days of age. Blood was analyzed for hematocrit value and total protein (TP). Protein fractions were separated by electrophoresis and the condition of diarrhea was evaluated by color, consistency, blood/mucus presence. Blood variables analyzed as repeated measures on time.Related to hematocrit values effect of period was observed, the value at one day of age, 28.76±1.76, was higher than at 10, 30, 35 and 60 days of age, with average at 23.88±0.98, 24.18±0.70, 23.73±0.74 and 24.53 ± 0.79%, respectively. Interaction between treatment and period was observed for serum TP, treatments GCL, BCA, BCL, and LBC showed a gradual increase in serum concentrations up to 60 days of age, while GCA showed values on days 10, 15, 40, 50 and 60 days of age, greater than the value at birth. The values of serum albumin were affected by treatment and period, being the value in LBC, 2.39±0.12 g/dL, significantly lower than the GCA treatment, GCL, BCA and BCL, with 3.20±0.12 , 2.94±0.12, 3.25±0.12 and 3.08± 0.12 g/dL, respectively. A gradual increase in the concentrations of this variable was observed until 60 days of age. To 0 and ½ day of age values of serum globulin were significantly lower than the observed at last experimental date, 60 days of age. Serum albumin/globulin relation was affected by the treatment and period with the values in CBL significantly higher than observed in GCA, GCL, BCA and BCL. The relation was higher at birth decreasing in the following dates, ½ and 1 day of age. The variable gamma globulin was affected by treatment and period, with values in LBC significantly higher than in GCL and BCL, not differing from the found in GCA and BCA. The values at 0 and ½ day of age were lower than 60 days of age. Observing the diarrhea condition, in the treatments, it was verified that the GCL and BCL animal had showed higher diarrhea incidence than the animals from the other treatments, indicating an inverse relationship between antibodies in the colostrum and condition of diarrhea. The results indicate that lyophilized bovine colostrum can be used to newborns goat kids as an alternative source for the acquisition of initial protection.

Department of Animal Science / MSCAGR (Animal Science)

Orientador: Cristina Maria Garcia de Lima Parada Parada / Resumo: O programa de uso da imunoglobulina palivizumabe teve início em 2007 no Estado de São Paulo e em 2013 estendeu-se nacionalmente, sendo destinado a crianças com maior risco para a infecção pelo Virus Sincicial Respiratório (VSR). Desde seu início, o programa permanece sem avaliação sistemática. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar o programa de uso da imunoglobulina palivizumabe no Estado de São Paulo. Foram avaliados os 16 locais de aplicação: cinco Centros de Referência para Imunobiológicos Especiais (CRIE) e 11 postos de aplicação existentes no Estado de São Paulo, seguindo o referencial de avaliação proposto por Donabedian. Dados de estrutura e processo foram obtidos por entrevista com os responsáveis pela aplicação da imunoglobulina; para avaliação de resultado foram entrevistadas as mães das crianças do programa, visando identificar a associação entre falha na tomada do palivizumabe e a necessidade de hospitalização em Unidade de Terapia Intensiva por doença ou sintomatologia respiratória no período de sazonalidade do VSR. Participaram desta pesquisa 693 crianças/responsáveis (85,1% da população elegível), que ingressaram no programa entre março e agosto de 2014, sendo a coleta de dados realizada entre março e setembro do mesmo ano. Para análise de resultado foi utilizado o odds ratio pontual e intervalar com intervalo de confiança de 95%, considerando-se associações estatisticamente significativas se p < 0,05. Para avaliação de estrutura foram consideradas 30 variáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor