Um papel importante foi atribuído ao receptor toll-like 4 (TLR4) no desenvolvimento da placa aterosclerótica. O TLR4 foi primeiramente descrito como um receptor para bactérias gram-negativas; posteriormente foi demonstrado que sua expressão está aumentada em placas ateroscleróticas e que pacientes que possuem um polimorfismo disfuncional do TLR4 são menos suscetíveis ao desenvolvimento dessa doença. Portanto, o objetivo desse estudo foi o de investigar, em um modelo experimental de aterosclerose, a influência da deleção do TLR4 na formação e morfologia da placa aterosclerótica, no perfil lipídico e em marcadores inflamatórios. Camundongos duplo knockout (DKO), deficientes no receptor de LDL e TLR4, foram gerados cruzando-se camundongos deficientes para o receptor de LDL (LDLrKO) com camundongos deficientes para o TLR4 (TLR4KO). Todos os grupos receberam dieta rica em gordura e colesterol por 12 semanas. As concentrações plasmáticas de colesterol e triglicérides foram medidas por ensaio colorimétrico. Cortes seriados da raiz aórtica foram corados com Oil red O e as áreas de lesão quantificadas por analisador de imagens. O colágeno foi medido por coloração de picrossirius. A formação de nitrotirosina e expressão de CD40L, MMP9 e iNOS nas placas foram feitas por imunohistoquímica. As comparações foram feitas por ANOVA com pós teste de Student Newman-Keuls. Os dados foram expressos como média ± EPM. Camundongos DKO desenvolveram placas menores que camundongos LDLrKO (117.6 ±1.4 vs 198.8 ± 3.3 104m2). Camundongos TLR4KO não formaram placa. As placas dos camundongos DKO apresentaram menor núcleo lipídico que as dos LDLrKO (76.2± 13.2 vs 161.7 ± 2.9 104m2). O colágeno ao redor do núcleo lipídico é maior nos camundongos DKO do que nos LDLrKO (24.9 ± 1.8 vs 16.5 ± 2.5 % da placa). A distribuição do colágeno nos camundongos DKO ocorre principalmente ao redor da placa, de forma mais organizada, enquanto que nos LDLrKO onde sua distribuição é mais difusa. As placas dos camundongos DKO apresentaram menor expressão de CD40L e iNOS do que as dos LDLrKO (13.1 ± 0.7 vs 18.5 ± 2.5 AU e 7.7 ± 0.9 vs 10.2 ± 0.4 AU, respectivamente). A expressão de MMP9 foi menor nas placas dos camundongos DKO do que as dos LDLrKO (2.99 ± 0.3 vs 1.99 ± 0.2 AU). A marcação para nitrotirosina foi maior nos camundongos LDLrKO quando comparada com as dos grupos DKO e TLR4KO (142.89 ± 208.5, 77.16 ± 227.7 e 71.73 ± 95.9 10m2, respectivamente). Todos esses resultados sugerem que o processo inflamatório é menor na ausência do TLR4. As concentrações plasmáticas de colesterol não foram diferentes entre os grupos LDLrKO e DKO mas os camundongos LDLrKO apresentaram concentrações plasmáticas de triglicérides maiores do que os camundongos DKO após a dieta (265.2 ± 27.6 vs 150.5 ± 8.8 mg/dL). O receptor toll-like 4 influencia na estrutura e formação da placa aterosclerótica independentemente dos níveis séricos de colesterol / A crucial role has been suggested for toll-like receptor 4 (TLR4) in atherosclerotic plaque formation and development. TLR4 was described primarily, as a receptor for gram-negative bacteria lipopolisacharide; later it was showed that its expression is increased in atherosclerotic plaques and patients that carries a TLR4 dysfunctional polymorphism are less susceptible to development of this disease. Therefore, the aim of this study was to investigate, in an experimental model of atherosclerosis, the influence of TLR4 deletion in atherosclerotic plaque formation and morphology, cholesterol profile and inflammatory markers. Double knockout mice (DKO), deficient in LDL receptor and TLR4, were generated by breeding LDL receptor knockout mice (LDLrKO) with TLR4 knockout mice (TLR4KO). All three experimental groups, LDLrKO, TLR4KO and DKO were fed a high fat-cholesterol diet for 12 weeks. Plasma cholesterol and triacylglicerol concentrations were measured by colorimetric assay. Cross sections of aortic sinus were stained with Oil red O and lesion areas were quantified by an image analyzer. Collagen content was measured by picrossirius staining. We also measured nitrotyrosine formation, CD40L, MMP9 and iNOS expression by immunohistochemistry. Comparisons were made by ANOVA followed by Student-Newman-Keuls post- test. Data are mean ± SEM. DKO mice developed smaller plaques than LDLrKO mice (117.6 ±1.4 vs 198.8 ± 3.3 104m2). TLR4KO mice developed no plaque. Plaques from DKO mice have also a smaller lipid core than the ones from LDLrKO mice (76.2± 13.2 vs 161.7 ± 2.9 104m2). Collagen content around the lipid core is higher in DKO mice compared to LDLrKO mice (24.9 ± 1.8 vs 16.5 ± 2.5 % of the whole plaque). Interestingly, collagen distribution in DKO mice seems to occur mainly on the plaque periphery, in a more organized manner, while in LDLrKO mice it is fuzzier, being present also inside the plaque. Plaques from DKO present lower expression of CD40L and iNOS than LDLrKO mice (13.1 ± 0.7 vs 18.5 ± 2.5 AU and 7.7 ± 0.9 vs 10.2 ± 0.4 AU, respectively). MMP9 expression is lower in DKO mice as compared to LDLrKO mice (2.99 ± 0.3 vs 1.99 ± 0.2 AU). Nitrotyrosine staining was higher in LDLrKO mice as compared to DKO and TLR4KO groups (142. 89 ± 208.5, 77.16 ± 227.7 and 71.73 ± 95.9 10m2, respectively). All together, these findings suggest that inflammatory process is milder in the absence of TLR4. Serum cholesterol were not different between LDLrKO and DKO mice but LDLrKO presented higher triacylglicerol serum levels after 12 weeks on high fat high cholesterol diet as compared to DKO mice (265.2 ± 27.6 vs 150.5 ± 8.8). Toll like receptor 4 influences atherosclerotic plaque formation and structure independently from serum cholesterol levels

O choque e ressuscitação predispoe os pacientes a uma maior susceptibilidade a uma lesão pulmonar aguda devido a uma exagerada resposta imune a um segundo estimulo inflamatório, conhecida como lesão das duas agressões, cujos mecanismos tem sido extensivamente pesquisados, mas ainda permanecem sem entendimento. Sendo assim, o principal objetivo deste estudo foi investigar a resposta inflamatória em modelo das duas agressões, no qual a primeira e representada pela I-R e a segunda pela instilação intratraqueal de bactérias vivas. O modelo de choque com animais acordados e hemorragia controlada, seguido de inoculação intratraqueal de bactérias vivas E. coli foi utilizado neste estudo. Todos os animais apresentaram variáveis hemodinâmicas similares, onde a PAM alcançou valores de aproximadamente 40 mmHg depois do sangramento. Solução hipertônica (HS, NaCl - 7,5%) ou isotônica (SS,NaCl - 0,9%) foram usadas como soluções de reperfusão, com resultados hemodinâmicos semelhantes. A inflamação pulmonar foi mais evidente nos animais submetidos a I-R e ressuscitados com solução isotônica (grupo SS) antes da inoculação da bactéria (grupo SEC). Animais que receberam solução hipertônica (grupo HS) apresentaram menos inflamação comparados com os animais do grupo SEC. RNAm para TLR2/4 e CD40/CD40L tiveram sua expressões aumentadas depois da instilação com a bactéria. Quando esses animais foram submetidos somente a lesão de I-R o mesmo não acorreu. Animais do grupo HEC apresentaram maior expressão desses receptors que o grupo SEC. Nos concluímos que a lesão de I-R aumenta a resposta a uma segunda agressão e que a HS pode modular favoravelmente esta resposta / Shock and resuscitation renders patients more susceptible to acute lung injury due to an exaggerated immune response to late inflammatory stimuli, the so-called two-hit model, whose mechanisms have been extensively researched, but are still not completely understood. Therefore, the main objective of this study was to investigate the inflammatory response in a two-hit model, in which the first injury is represented by ischemia and reperfusion (I-R), and the second challenge by live bacteria injection. A shock model, with conscious rats and controlled hemorrhage, followed by intratracheal innoculation of live E.coli bacteria was used in this study. All animals showed similar hemodynamic variables, with the mean arterial pressure decreasing to about 40 mmHg after bleeding. Hypertonic saline (HS, NaCl 7,5%) or isotonic saline (SS, NaCl 0,9%) were used as resuscitation fluids, with equal hemodynamic results. Lung inflammation and damage was more evident in the animals submitted to I-R and resuscitated with SS before bacteria innoculation (SEC group). Animals receiving HS displayed less inflammation compared to SEC. TLR2 and TLR4 mRNA expression increased markedly after E.coli injection. When submitted to I-R, these proteins were not up-regulated (except TLR2) when challenged with bacteria. Animals in the HEC group showed higher expression of these modulators than animals in the SEC group. We conclude that I-R blunts inflammatory response, rendering animals more susceptible to damage by a second challenge. Resuscitation with hypertonic saline may favorably modulate this response

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Shmidt / Banca: Vamilton Alvares Santarém / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Resumo: Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a resistência natural aos endoparasitas e ectoparasitas em bovinos da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. Foram utilizados 10 machos castrados em cada grupo, desmamados (6-8 meses), mantidos juntos em pastagens cultivadas no município de Monte Castelo - SC. A cada 28 dias, fêmeas de carrapatos com tamanho acima de 4 mm foram quantificadas nos lados direito e esquerdo do corpo de cada animal. O mesmo foi feito para nódulos de Dermatobia hominis. A espessura da capa do pelame foi também avaliada a cada coleta e os animais foram classificados quanto à coloração do pelame. Foram coletadas amostras de fezes para realização de exames coproparasitológicos e de sangue para quantificação de anticorpos, bem como realizada a pesagem dos animais nessas mesmas ocasiões. Os animais foram abatidos e deles coletadas alíquotas dos conteúdos gastrintestinais para contagem e identificação dos parasitas. Os animais da raça Crioula Lageana apresentaram menores infestações por larvas de D. hominis e Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Não houve diferença entre a disposição de carrapatos e bernes conforme os lados do corpo. Os animais de pelagem escura foram mais susceptíveis aos ectoparasitas. Não houve diferença significativa na carga parasitária entre animais da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. A partir dos 18 meses de idade os animais de ambas as raças mantiveram baixos valores de OPG, dados que sugerem a aquisição de imunidade contra as infecções por nematódeos devido aos constantes desafios / Abstract: This study was carried out to evaluate the natural breed resistance against nematode infections and ectoparasites infestations in Crioulo Lageano and crossbred Angus male calves. Ten weaned calves (6-8 months) were used in each group and were kept together in winter and summer pastures in Monte Castelo, Santa Catarina State. Every 28 days, female ticks more then 4 mm long were counted on the right and left side of the body of each animal, as well as the Dermatobia hominis nodules. Coat thickness also was measured at each sampling and all animals were classified according coat color. Fecal and blood samples were collected for parasitological and immunological tests. Body weight was recorded in the same occasion. All animals were slaughtered and gastrointestinal contents were collected from each individual for quantification and identification of parasites. Crioulo Lageano group was less infested by D. hominis and by Rhipicephalus (Boophilus) microplus. There were no differences in the distribution of the ticks and grubs between animal body sides. Dark-haired animal in both groups were the most susceptible. There were no significant differences in worm burden between the Crioula and crossbred Angus groups. From 18 months of age, Crioula Lageana and crossbred Angus animals kept low fecal egg counts. These data suggest that the animals acquired immunity resistance against nematode infections, due to constant challenges / Doutor

A imunidade inata na interface materno-fetal é um dos mecanismos de proteção essenciais na resposta antiviral, sobretudo, na infecção por HIV-1. Neste trabalho, avaliamos a influência da infecção materna por HIV-1 na expressão de fatores antivirais, nas moléculas do complexo inflamassoma e de retrovírus endógenos (HERV), em células mononucleares (CMN) maternas, células do cordão umbilical (recém-natos, RN), colostro e no tecido placentário. Os resultados mostraram que no vilo das placentas de mães infectadas há um aumento na expressão de mRNA dos fatores antivirais, como IFN tipo I e III, DAMPs damage-associated molecular patterns e HERVs. Entretanto, na análise proteica, essas diferenças não se confirmam, indicando que o sistema imune inato é capaz de reconhecer o vírus, ou ainda, o dano causado pela infecção, mas controla a produção exacerbada da proteína. Sob estímulo de agonista de TLRs Toll-like receptor, em CMNs a expressão de HERVs não se altera entre RNs. Além disto, avaliando os níveis de &#223-quimiocinas, CCL5 e CCL3, e de IFN-&#967 nos sobrenadantes das culturas de CMNs, a ativação por LPS foi capaz de diminuir a produção de CCL3 e CCL5 nas CMNs de mães infectadas por HIV em relação às mães controles, contudo o CL097 promoveu níveis similares às mães do grupo controle. Nos RNs, enquanto os níveis de CCL5 são inferiores aos de adultos, os níveis de CCL3 são semelhantes. Já o ligante TLR7/8 foi capaz de restaurar a secreção de IFN-&#945 no grupo infectado por HIV-1. Além disso, no vilo das placentas das mães infectadas por HIV, há intensa modificação na expressão de mRNA dos fatores analisados, sejam antivirais, como IFN tipo I (IFN-&#945), tipo III (IFN-&#955), fatores relacionados ao dano celular (DAMPs e seus receptores). Entre os DAMPs, um aumento da expressão de S100A9 e HMGB1 e seus receptores RAGE, TLR4 e TLR9 foi observado nos vilos de placentas de mães infectadas por HIV-1, contudo, os níveis séricos de HMGB1 estão diminuídos em mães infectadas e RN expostos. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foram observados níveis reduzidos de HMGB1, IL-6 e IL-1&#223 nos RNs expostos, o que evidencia um controle do estado inflamatório na exposição ao HIV-1. Também observamos presença de níveis séricos de HERV-W, livre ou em exossomas, em ambos os grupos analisados. Já no colostro, não encontramos diferenças nas análises de fatores inflamatórios e HERVs indicando que, nesse compartimento, a infecção não altera os padrões de expressão desses alvos. A vigência do estado antiviral e a supressão do ambiente inflamatório podem equilibrar a resposta imune placentária, promovendo a homeostase para o desenvolvimento do feto e de proteção à infecção por HIV-1 nos neonatos. / Innate immunity at the maternal-fetal interface is one of the main protection mechanisms in the antiviral response, especially in HIV-1 infection. In this work, we present the influence of maternal HIV-1 infection on the expression of antiviral factors, inflammasome molecular complex and human endogenous retroviruses (HERV), in maternal mononuclear cells (MNCs), umbilical cord cells (newborns, NB), colostrum and placental tissue. The results show that in infected mothers cells has an increase in mRNA expression of antiviral factors, such as IFN type I and III, DAMPs (damage-associated molecular patterns) and HERVs. However, in protein analysis, these differences are not confirmed, indicating that the immune system is able to detect the virus, or even the damage caused by the infection, but controls the exacerbated protein production. Under stimulation of the TLR (Toll-like receptor) agonist, CMNs do not change among the RNs. In addition, by evaluating the levels of &#223-chemokines, CCL5 and CCL3, and of IFN-&#945 in the supernatants of CMNs cultures, LPS activation was able to decrease the production of CCL3 and CCL5 in CMNs of HIV-infected mothers compared to control mothers, nevertheless CL097 promoted similar levels between HIV-infected mothers and control group. In RNs, while CCL5 levels are lower than in adults, CCL3 levels are similar. TLR7/8 agonist was able to restore IFN- secretion in the HIV-infected group. In contrast, the TLR7/8 agonist was able to restore IFN- secretion in HIV-infected group. In addition, in placental villi, there is intense modification in the mRNA expression of the analyzed factors, whether they are antiviral, such as IFN type I (IFN-&#945), type III (IFN-&#955), related to cell damage (DAMPs and their receptors). Among DAMPs, increased expression of S100A9 and HMGB1 and their receptors RAGE, TLR4 and TLR9 was observed in placental villi of HIV-infected mothers, however, serum HMGB1 levels are decreased in infected-mothers and exposed-newborns. About the cytokines serum levels, reduced levels of HMGB1, IL-6 and IL-1&#223 were observed in the exposed-NBs, which evidences an inflammatory status control in HIV-1 exposure. We also observed the presence of free HERV-W or exosomes levels in serum in both groups analyzed. In colostrum, we did not find differences in inflammatory factors and HERVs analysis indicating that, in this compartment, the infection does not alter the expression patterns of these targets. The effectiveness of antiviral status and suppression of the inflammatory environment can balance the placental immune response, promoting homeostasis for fetal development and protection of HIV-1 infection in neonates.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-25Bitstream added on 2014-06-13T19:20:32Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_cp_dr_botfmvz.pdf: 1128230 bytes, checksum: beda813ceba29775170e003ab9fee808 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a resistência natural aos endoparasitas e ectoparasitas em bovinos da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. Foram utilizados 10 machos castrados em cada grupo, desmamados (6-8 meses), mantidos juntos em pastagens cultivadas no município de Monte Castelo – SC. A cada 28 dias, fêmeas de carrapatos com tamanho acima de 4 mm foram quantificadas nos lados direito e esquerdo do corpo de cada animal. O mesmo foi feito para nódulos de Dermatobia hominis. A espessura da capa do pelame foi também avaliada a cada coleta e os animais foram classificados quanto à coloração do pelame. Foram coletadas amostras de fezes para realização de exames coproparasitológicos e de sangue para quantificação de anticorpos, bem como realizada a pesagem dos animais nessas mesmas ocasiões. Os animais foram abatidos e deles coletadas alíquotas dos conteúdos gastrintestinais para contagem e identificação dos parasitas. Os animais da raça Crioula Lageana apresentaram menores infestações por larvas de D. hominis e Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Não houve diferença entre a disposição de carrapatos e bernes conforme os lados do corpo. Os animais de pelagem escura foram mais susceptíveis aos ectoparasitas. Não houve diferença significativa na carga parasitária entre animais da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. A partir dos 18 meses de idade os animais de ambas as raças mantiveram baixos valores de OPG, dados que sugerem a aquisição de imunidade contra as infecções por nematódeos devido aos constantes desafios / This study was carried out to evaluate the natural breed resistance against nematode infections and ectoparasites infestations in Crioulo Lageano and crossbred Angus male calves. Ten weaned calves (6-8 months) were used in each group and were kept together in winter and summer pastures in Monte Castelo, Santa Catarina State. Every 28 days, female ticks more then 4 mm long were counted on the right and left side of the body of each animal, as well as the Dermatobia hominis nodules. Coat thickness also was measured at each sampling and all animals were classified according coat color. Fecal and blood samples were collected for parasitological and immunological tests. Body weight was recorded in the same occasion. All animals were slaughtered and gastrointestinal contents were collected from each individual for quantification and identification of parasites. Crioulo Lageano group was less infested by D. hominis and by Rhipicephalus (Boophilus) microplus. There were no differences in the distribution of the ticks and grubs between animal body sides. Dark-haired animal in both groups were the most susceptible. There were no significant differences in worm burden between the Crioula and crossbred Angus groups. From 18 months of age, Crioula Lageana and crossbred Angus animals kept low fecal egg counts. These data suggest that the animals acquired immunity resistance against nematode infections, due to constant challenges

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:24:04Z : No. of bitstreams: 1 cezar_ma_dr_botfca.pdf: 754518 bytes, checksum: e31873b7b4bb1f58be8a3ae8ec5baed7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Amostras de plantas sintomáticas provenientes de produções comerciais de pimentão e pimenta das regiões de Lins, Salto, Sorocaba, Itapetininga, Joanópolis no Estado de São Paulo foram obtidos durante os anos de 2000 a 2005 e analisadas quanto à espécie de tobamovírus presente. Visando ampliar o conhecimento da variabilidade biológica, bem como genética destes isolados, após a purificação por monolesões, estes isolados foram inoculados na série diferenciadora de Capsicum spp. contendo os genes L1, L2, L3 e L4 que permitiram a separação dos mesmos em patótipos. Foram observadas as espécies Tobacco mosaic virus (TMV), Tomato mosaic virus (ToMV) pertencentes ao patótipo P0 e Pepper mild mottle virus (PMMoV) pertencente ao patótipo P1-2, respectivamente. A maioria dos isolados de tobamovírus foram encontrados sob cultivo de estufa e com predominância do ToMV, porém com baixa incidência. A identidade das espécies de tobamovírus nas amostras de pimentão e pimenta foi confirmada por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos universais para o gênero Tobamovirus seguido de sequenciamento e específicos para cada uma das espécies. O sequenciamento do fragmento amplificado correspondente à parte da porção codificadora para a capa protéica dos isolados identificados como ToMV revelou identidade de aminoácidos entre 90% a 100% quando comparados com outras seqüências de To MV. Três isolados de ToMV não detectados pelos oligonucleotídeos específicos tiveram sua identidade confirmada após sequenciamento como pertencentes a esta espécie. Os isolados caracterizados como patótipo P1-2 de PMMoV apresentaram identidade de aminoácidos entre 96% a 100% quando comparados com outras seqüências de PMMoV. Nas principais regiões produtoras do Estado de São Paulo ainda não ocorre o patótipo P1-2-3 de PMMoV, bem como a incidência de tobamovírus em pimentão e pimenta é baixa. / Isolates from commercial hot and sweet peppers fields surrounding the cities of Lins, Salto, Sorocaba, Itapetininga, Bragança Paulista in São Paulo State were collected during the years 2000 to 2005 and analyzed for the presence of tobamovirus species. The biological and genetic variability of these isolates, purification by local lesions , was analysed using the differencial genotypes of Capsicum spp. with the L1, L2, L3 e L4 genes that permit the classification of the isolates in pathotypes. The occurrence of Tobacco mosaic virus (TMV) and Tomato mosaic virus (ToMV) belonging to the P0 pathotype and Pepper mild mottle virus (PMMoV) belonging to the P1-2, respectively, was observed. The most part of tobamovirus isolates were found in indoor conditions and with predominance of the ToMV specie, however with low incidence. The identification of the tobamovirus species was confirmed by RTPCR using degenerated primers for the Tobamovirus genus and specific primers for TMV, ToMV and PMMoV. The analysis of part of the coat protein sequence gene of the isolates of ToMV characterizated as P0 showed amino acids identity ranging between 90 to 100% when compared with others ToMV sequences. The identity of three ToMV isolates that could not be detected by the ToMV specific primers was confirmed only after the sequence analysis. The isolates characterized as P1-2 PMMoV showed amino acids identity ranging between 96 to 100% when compared with others PMMoV sequences. The pathotype P1-2-3 PMMoV still does not occurs in the main producing areas of São Paulo State, as well as the tobamovirus incidence in sweet and hot pepper is low. There is no possible geographic correlation origin for the ToMV Brazilian isolates, whereas the PMMoV isolates could be separated in two phylogenetics branches, one including isolates from Japan, Germany and Taiwan and the second including isolates from Italy, China and Korea.

Resumo: Amostras de plantas sintomáticas provenientes de produções comerciais de pimentão e pimenta das regiões de Lins, Salto, Sorocaba, Itapetininga, Joanópolis no Estado de São Paulo foram obtidos durante os anos de 2000 a 2005 e analisadas quanto à espécie de tobamovírus presente. Visando ampliar o conhecimento da variabilidade biológica, bem como genética destes isolados, após a purificação por monolesões, estes isolados foram inoculados na série diferenciadora de Capsicum spp. contendo os genes L1, L2, L3 e L4 que permitiram a separação dos mesmos em patótipos. Foram observadas as espécies Tobacco mosaic virus (TMV), Tomato mosaic virus (ToMV) pertencentes ao patótipo P0 e Pepper mild mottle virus (PMMoV) pertencente ao patótipo P1-2, respectivamente. A maioria dos isolados de tobamovírus foram encontrados sob cultivo de estufa e com predominância do ToMV, porém com baixa incidência. A identidade das espécies de tobamovírus nas amostras de pimentão e pimenta foi confirmada por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos universais para o gênero Tobamovirus seguido de sequenciamento e específicos para cada uma das espécies. O sequenciamento do fragmento amplificado correspondente à parte da porção codificadora para a capa protéica dos isolados identificados como ToMV revelou identidade de aminoácidos entre 90% a 100% quando comparados com outras seqüências de To MV. Três isolados de ToMV não detectados pelos oligonucleotídeos específicos tiveram sua identidade confirmada após sequenciamento como pertencentes a esta espécie. Os isolados caracterizados como patótipo P1-2 de PMMoV apresentaram identidade de aminoácidos entre 96% a 100% quando comparados com outras seqüências de PMMoV. Nas principais regiões produtoras do Estado de São Paulo ainda não ocorre o patótipo P1-2-3 de PMMoV, bem como a incidência de tobamovírus em pimentão e pimenta é baixa. / Abstract: Isolates from commercial hot and sweet peppers fields surrounding the cities of Lins, Salto, Sorocaba, Itapetininga, Bragança Paulista in São Paulo State were collected during the years 2000 to 2005 and analyzed for the presence of tobamovirus species. The biological and genetic variability of these isolates, purification by local lesions , was analysed using the differencial genotypes of Capsicum spp. with the L1, L2, L3 e L4 genes that permit the classification of the isolates in pathotypes. The occurrence of Tobacco mosaic virus (TMV) and Tomato mosaic virus (ToMV) belonging to the P0 pathotype and Pepper mild mottle virus (PMMoV) belonging to the P1-2, respectively, was observed. The most part of tobamovirus isolates were found in indoor conditions and with predominance of the ToMV specie, however with low incidence. The identification of the tobamovirus species was confirmed by RTPCR using degenerated primers for the Tobamovirus genus and specific primers for TMV, ToMV and PMMoV. The analysis of part of the coat protein sequence gene of the isolates of ToMV characterizated as P0 showed amino acids identity ranging between 90 to 100% when compared with others ToMV sequences. The identity of three ToMV isolates that could not be detected by the ToMV specific primers was confirmed only after the sequence analysis. The isolates characterized as P1-2 PMMoV showed amino acids identity ranging between 96 to 100% when compared with others PMMoV sequences. The pathotype P1-2-3 PMMoV still does not occurs in the main producing areas of São Paulo State, as well as the tobamovirus incidence in sweet and hot pepper is low. There is no possible geographic correlation origin for the ToMV Brazilian isolates, whereas the PMMoV isolates could be separated in two phylogenetics branches, one including isolates from Japan, Germany and Taiwan and the second including isolates from Italy, China and Korea. / Orientador: Renate Krause Sakate / Coorientador: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Antonio Carlos Maringoni / Banca: Cyro Paulino da Costa / Banca: Rômulo Fujito Kobori / Banca: Valdir Atsushi Yuki / Doutor

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Coorientador: Fábio Sabbadin Zanuzzo / Banca: Marco Antonio de Andrade belo / Banca: Janessa Sampaio de Abreu / Resumo: Manejos inerentes da piscicultura intensiva, como o transporte, desencadeiam resposta de estresse nos animais, podendo causar perdas na produtividade. Como alternativa, o β-glucano, um polissacarídeo derivado da parede celular de cereais, bactérias e fungos, vem sendo muito utilizado na aquicultura pelo seu efeito imunoestimulante. Há evidências de que o β-glucano minimiza os efeitos negativos do estresse por atuar no sistema imune, porém é pouco investigado o seu efeito direto sobre a resposta clássica de estresse. Neste contexto, o presente estudo avaliou, em juvenis de pacu, o uso oral de 0.1% de duas gerações de β-glucano, de diferentes graus de pureza e processamentos, na resposta de estresse e no sistema imune inato, após transporte e inoculação com Aeromonas hydrophila. Avaliamos a concentração de cortisol e glicose plasmáticos como indicadores da resposta de estresse, a atividade respiratória de leucócitos, a atividade hemolítica do sistema complemento, a atividade de lisozima e contagem total e diferencial de leucócitos, como indicadores do sistema imune inato, e o hematócrito, número de eritrócitos, concentração de hemoglobina e volume corpuscular médio de eritrócitos como indicadores hematológicos. As duas gerações de β-glucano utilizadas modularam os níveis de cortisol circulantes, mantendo os níveis elevados até 24 horas após o transporte, sem alteração após o desafio bacteriano. O β-glucano aumentou a atividade hemolítica do sistema complemento e de lisozima apó... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inherent handling in intensive fish farming, such as transport, trigger stress response in animals, and may cause losses in productivity. As an alternative, the β-glucan, a polysaccharide derived from the cell walls of cereals, bacteria and fungi, has been widely used in aquaculture due their immunostimulatory effect. The β-glucan minimizes the negative effects of stress by acting on the immune system, but it is little investigated its direct effect on the classical stress response. In this context, the present study evaluated in pacu, the oral administration of 0.1% of two generations of β-glucan, with different degrees of purity and processing methods, on the stress and innate immune system responses, after transport and inoculation with Aeromonas hydrophila. We evaluated the plasma concentration of cortisol and glucose, as stress response indicators, the respiratory activity of leukocytes, the hemolytic activity of the complement system, lysozyme activity and total and differential counts of leukocytes as innate immune system indicators, and hematocrit, number of erythrocytes, hemoglobin concentration, and mean corpuscular volume of erythrocytes as hematological indicators. The two generations of β-glucan modulated the circulating levels of cortisol, keeping the high levels 24 hours after transportation, without changes after the bacterial challenge. The β-glucan increased the hemolytic activity of the complement system and lysozyme after handling and after bacterial inoculation, and kept the population of circulating leukocytes after recovery of leukopenia, demonstrating the immunostimulatory effect. The general results of this study suggest the strengthening of the immune response of pacu juveniles fed for 15 with feed containing 0,1% β-glucan derived from yeast cell wall (Sacaromyces cerevisiae) days before stressful ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Shannon Margaret Wallet / Banca: Karina Gonzales Silvério Ruiz / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Paulo Sérgio Cerri / Resumo: Inflammasomes are multi-protein complexes that can amplify the inflammatory signal in situations involving host-microbial interactions and host tissue destruction, such as chronic periodontal disease. There is a relative scarcity of information on the role of NLRC4 and NLRP3 inflammasomes in periodontal disease. In this study, we used a model of bacteria-initiated periodontal disease in WT, Ipaf-knockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) and NLRP3-knockout (NLRP3-KO) mice to describe the effect of those inflammasomes on inflammation and alveolar bone resorption. Heat-killed Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) were injected in the gingival tissues on the palatal aspect adjacent to first molars of wild-type (WT), Ipaf-KO, Casp1-KO and NLRP3-KO mice, and control animals received the suspension vehicle (PBS). Severity of bone resorption was quantitated by μCT analysis. Inflammation was assessed by immunofluorescence, verifying the presence and intensity of a pan-leukocyte (CD45) and a neutrophil (Ly6G) markers. Osteoclast number was determined by TRAP and gene expression of RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 and IL-10 in the gingival tissues was evaluated by RT-qPCR. In the first publication, μCT analysis showed a significantly greater inflammatory bone resorption in Ipaf-KO mice; however there was no difference between WT and Ipaf-KO on osteoclast numbers of inflammatory infiltrate. Expression of candidate genes was also similarly increased by the induction of experimental... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflamassomos são complexos multi protéicos capazes de amplificar o sinal inflamatório em condições de interações microbiota-hospedeiro e destruição tecidual, como a doença periodontal crônica. Devido à escassez de informações sobre o papel dos inflamassomos NLRC4 e NLRP3 na doença periodontal, utilizamos neste estudo um modelo de doença periodontal induzida por bactérias em camundongos WT, Ipafknockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) e NLRP3-knockout (NLRP3-KO) para descrever o efeito destes na inflamação e reabsorção óssea alveolar. Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) inativadas pelo calor foram injetadas nos tecidos gengivais palatais adjacentes aos primeiros molares dos camundongos normais e knockout, e os grupos controle receberam o mesmo volume do veículo de suspensão (PBS). A severidade da reabsorção óssea foi quantificada por análise de μCT. A inflamação foi avaliada por imunofluorescência, verificando-se presença e intensidade da coloração por marcadores de leucócitos (CD45) e neutrófilos (Ly6G). O número de osteoclastos foi determinado por TRAP e a expressão gênica de RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 e IL-10 nos tecidos gengivais avaliada por RT-qPCR. A publicação 1 mostra uma reabsorção óssea inflamatória significativamente maior nos camundongos Ipaf-KO, sem diferenças, porém, no número de osteoclastos entre WT e Ipaf-KO. A expressão dos genes-alvo aumentou com a indução da doença periodontal, exceto de TNFa e IL-10, que foram altas n... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-12Bitstream added on 2014-06-13T20:20:45Z : No. of bitstreams: 1 rocha_cd_me_botfca.pdf: 830969 bytes, checksum: 21c7d0889cf28e59388bd1c31c7c5072 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A madeira de Eucalyptus grandis Hill ex Maiden submetida ao tratamento de vaporização apresenta maior qualidade na indústria de serrados e otimização durante o processo de secagem. O objetivo desta pesquisa foi verificar o efeito da vaporização em toras e em madeira serrada nas propriedades químicas e na resistência natural a fungo e cupins da madeira de Eucalyptus grandis. Para isso, foram empregados quatro tratamentos: material controle, madeira vaporizada em toras (vapor saturado, 20 horas à 90°C), madeira pré-vaporizada em tábuas (1 hora de aquecimento inicial seguida de 3 horas de vapor saturado a 90ºC) e material submetido às duas vaporizações, ou seja, tábuas pré-vaporizadas obtidas de toras vaporizadas. Para caracterização química foram utilizadas as normas TAPPI (1999); para determinar a resistência natural a fungo foram utilizados os procedimentos das normas ASTM D-1413 (1994) e ASTM D-2017 (1994) e, para cupim, a metodologia desenvolvida pelo Instituto de Pesquisas Tecnológicas (1980). Os resultados mostraram que: (1) a vaporização promoveu algumas modificações não estatisticamente significativas na composição química da madeira, como: acréscimos de até 5,07% do teor de solubilidade em NaOH 1%, decréscimos de até 21,80% no teor de solubilidade em água quente, acréscimos no teor de extrativos totais para madeira vaporizada em tora e aquela pré-vaporizada em tábuas na ordem de 4,80% e 9,50%, respectivamente, enquanto a madeira submetida à vaporização conjunta (vaporizada/pré-vaporizada) apresentou decréscimo de 7,10%; aumento de até 6,77% no teor de lignina Klason, e redução de até 4,75% no teor de hemiceluloses. Outras modificações, no entanto, foram significativas, como: redução de 3,10% no teor de holocelulose e de 5,06% no teor de celulose... / The steamed wood of Eucalyptus grandis Hill ex Maiden has a better quality to the sawn industry and optimizes the drying process The aim objective of this work was evaluate the effect of vaporization in logs and lumber on chemical properties and Eucalyptus grandis´s natural resistance to dry wood termites (Cryptotermes brevis) and to the fungus Pycnoporus sanguineus. For this, four treatments were used: control material, steamed wood logs (saturated steam, 20 hours at 90 ° C), pre-steamed wood on tables (1 hour initial warm-up followed by 3 hours of saturated steam at 90 º C) and materials that were submitted to two sprays, i.e., pre-steamed boards obtained from vaporized logs. For the chemical characterization was used TAPPI (1999), to determine the natural resistance to fungus were used procedures of ASTM D-1413 (1994) and ASTM D-2017 (1994) standards and, for termites, the methodology developed by the Instituto de Pesquisas Tecnológicas (1980). Results showed that: (1) vaporization promoted no significant modifications in the chemical composition of wood, such as additions of 5.07% in the level of solubility in NaOH 1%, solubility decrease of 21.80% in the level of solubility in hot water, increases in the total extractive content for the log wood and pre-vaporized boards in the order of 4.80% and 9.50% respectively, while the vaporized wood/pre-vaporized on boards showed a decrease of 7.10%; increase of 6.77% in Klason lignin content and reduction of 4.75% in the content of hemicelluloses. Other modifications, however, were significant, as reduction of 3.10% in the holocellulose content and 5.06% in cellulose content, (2) there was also no significant effect on the susceptibility of wood when vaporized and exposed to the white-rot fungus, Pycnoporus sanguineus. The steamed wood... (Complete abstract click electronic access below)