BEZERRA, Mariana Brayner Cavalcanti Freire, também é conhecida em citações bibliográficas por: CAVALCANTI, Mariana Brayner ou BRAYNER CAVALCANTI, Mariana / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-31T21:06:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lidia Lúcia Bezerra Leite.pdf: 1731707 bytes, checksum: 733f91cf814c18ea401ce3a87fc6863c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T21:40:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lidia Lúcia Bezerra Leite.pdf: 1731707 bytes, checksum: 733f91cf814c18ea401ce3a87fc6863c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T21:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lidia Lúcia Bezerra Leite.pdf: 1731707 bytes, checksum: 733f91cf814c18ea401ce3a87fc6863c (MD5) Previous issue date: 2017-06-21 / FACEPE / Pacientes submetidos à radioterapia (RT) podem apresentar sinais típicos de um quadro inflamatório decorrente da interação da radiação ionizante (RI) com o tecido sadio circunvizinho ao tumor. A instalação desse quadro inflamatório provém de uma exacerbação da resposta imunológica resultando em reações adversas, cuja intensidade varia para cada indivíduo de acordo com sua radiossensibilidade, além de constituir um dos fatores limitantes da RT. Embora fundamental para a eficácia deste tipo de tratamento, ainda não há indicador clínico com aplicabilidade prática na mensuração do grau de radiossensibilidade individual. A análise de moléculas endógenas intrinsicamente associadas ao processo inflamatório, a exemplo de citocinas, poderia ser utilizada na avaliação da radiossensibilidade individual, ao mesmo tempo em que essas moléculas poderiam ser alvos terapêuticos na minimização de efeitos adversos de origem inflamatória. Por outro lado, o GQ-16, uma tiazolidinediona (TZD) com atividade agonista parcial sob os receptores PPARγ, surge como possível alternativa terapêutica para modulação da resposta inflamatória radioinduzida. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar o uso potencial de citocinas como bioindicador de radiossensibilidade individual, bem como a atividade imunomoduladora do fármaco GQ-16. Para tanto, foram cultivadas células mononucleares do sangue periférico de indivíduos saudáveis, não irradiadas e irradiadas (raios-X e dose de 2 Gy) in vitro. O método MTT foi utilizado para os testes de citotoxicidade da dose de radiação e do GQ-16 nas concentrações de 50, 75 e 100 μM. O grupo controle e as amostras irradiadas apresentaram viabilidade de 100% tanto quando expostas à radiação, quanto ao GQ- 16 em todas as concentrações. Em seguida, procedeu-se novas culturas celulares com células não irradiadas e irradiadas, na presença e ausência do GQ-16 nas concentrações de 50 e 100 μM. Após a cultura, foram analisadas as concentrações das citocinas IL-17A, IFN-γ, TNF, IL-4 e IL-2, por citometria de fluxo. Observou-se uma elevada variabilidade interindividual nos níveis de citocinas e na resposta à irradiação. Por outro lado, os testes comparativos entre a eficácia radioprotetora do GQ-16 e da metilprednisolona indicam que ambos os fármacos inibem significativamente os níveis das citocinas IFN-γ, TNF, IL-17A e IL-2, porém não influenciaram os níveis de IL-4. Os resultados desta pesquisa motivam investigações futuras sobre a análise do perfil de citocinas como possível preditor de radiossensibilidade individual. A utilização, in vitro, do GQ-16, nas concentrações de 50 μM e 100 μM, apresentou ação imunomoduladora eficaz. No entanto, sugere-se testes adicionais comprobatórios de sua eficiência como mitigador de efeitos colaterais associados a tratamentos envolvendo radiações ionizantes. / Patients undergoing radiation therapy (RT) may present typical signs of an inflammatory process as a result of the interaction of ionizing radiation (RI) with the healthy tissue adjacent to the tumor. The installation of inflammatory process is a result of an exacerbation of the immune response aiming at to early adverse reactions with intensity varying in accordance to individual radiosensitivity, being a limiting factor of RT. Although is fundamental for the effectiveness of treatments with ionizing radiation, there are still no practical clinical indicators for measuring the degree of individual radiosensitivity. Endogenous molecules that mediate the inflammatory process, such as the group of proteins called cytokine, would be useful biomarkers in the prediction of individual radiosensitivity as well as potential therapeutic targets in minimizing adverse effects of an inflammatory nature. On the other hand, GQ-16, a thiazolidinedione (TZD) with partial agonist activity under the PPARγ receptors, appears as a possible therapeutic alternative for the modulation of the inflamed radio-induced response. In this context, this work was designed to evaluate the potential use of cytokines as bioindicator of individual radiosensitivity as well as the immunomodulating activity of GQ-16. For this purpose, peripheral blood mononuclear cells were cultured from healthy, non-irradiated and irradiated individuals (X-rays and dose of 2 Gy) in vitro. The MTT method was used for the cytotoxicity tests of the radiation dose and GQ-16 at concentrations of 50, 75 and 100 μM. Both, control and irradiated groups, showed 100% viability, proving that GQ-16 is non-toxic to the cell at all concentrations tested. Hence, new cell cultures were assayed for cytokine concentrations of IL-17A, IFN-γ, TNF, IL-4 and IL-2 by flow cytometry. There was high interindividual (n =7) variability in cytokine levels and response to irradiation. Comparative tests between the radioprotective efficacy of GQ-16 and methylprednisolone reveal that both drugs significantly inhibited the concentration of the cytokines IFN-γ, TNF, IL-17A and IL-2, but did not influence the IL-4 levels. The results of this study motivate further investigation about the evaluation of cytokines profile as a possible predictor of individual radiosensitivity. The use, in vitro, of GQ-16 at concentrations of 50 μM and 100 μM presented effective immunomodulatory action. However, additional tests supporting its effectiveness as a mitigator of side effects associated with treatments involving ionizing radiation are suggested.

Agentes estressores em piscicultura intensiva afetam a condição fisiológica e o sistema imune dos peixes aumentando a susceptibilidade a infecções e causando prejuízos econômicos. Para contornar este problema, o uso de nutrientes moduladores do sistema imunológico na dieta, como o tocoferol, se tornam estratégia profilática para as pisciculturas assegurarem uma maior sobrevivência e consequente produtividade. O presente estudo visou avaliar a exigência nutricional do dourado, Salminus brasiliensis, por meio de um ensaio dose-resposta e aferir seu efeito imunomodulador. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, com sete tratamentos/dietas semi purificadas elaboradas com doses crescentes de vitamina E (0; 50; 100; 150; 200, 250 e 3500 mg kg-1α-tocoferol acetato) (n=4). Quinze juvenis de dourado foram alojados em caixas de polipropileno, em sistema de recirculação fechado com filtragem mecânica e biológica, trocador de calor com termostato e aeração forçada através de sopradores e pedras difusoras. Após serem alimentados por 30 dias com a dieta basal para depleção de vitamina E nas reservas corporais de vitamina, os animais foram pesados (20,04 ± 0,09 g), redistribuídos em 28 tanques (500 L; 15 peixes por tanque) e alimentados durante 78 dias até saciedade aparente (duas refeições diárias: 08h00m e 17h00m). Os peixes apresentaram diferença no ganho de peso, porém não de maneira dependente do tratamento de vitamina E. Após o período de alimentação os peixes foram desafiados com a bactéria Aeromonas hydrophila. Os parâmetros imunológicos foram aferidos antes e após o desafio e não houveram diferenças significativas para: atividade respiratória dos leucócitos, atividade da lisozima sérica, proteína e albumina total no soro e sobrevivência. Houve aumento da concentração das globulinas totais no soro após infecção em função do nível de vitamina E na dieta, e a dose ótima foi definida por meio da regressão segmentada: 151,07 mg kg-1 de vitamina E na ração. A exigência de vitamina E para o dourado foi determinada em 58,90 mg kg-1 pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbiturico da fração mitocondrial do fígado por análise de regressão segmentada. / Stressors in intensive fish farming affect fish physiological conditions and immune system, promoting susceptibility to infections and causing economic losses. To overcome this issue, using immunomodulatory nutrients such as tocopherol on fish feeds may become a prophylactic strategy to fish farms to ensure a higher survival and productivity. The present study aimed at determining vitamin E requirement of dourado, Salminus brasiliensis, through a dose dependent trial and how the immune system responded to vitamin E crescent doses. The experiment design was randomly distributed in seven treatments (n=4) of semi purified diets (0; 50; 100; 150; 200; 250 and 3,500 mg kg-1). After exposing the fish during 30 days for tocopherol depletion, fifteen dourado juveniles (20.04 ± 0.09 g) were stocked in 500 L tanks in a closed loop system and fed twice a day until apparent satiation. Differences in weight gain were observed however not in a vitamin E dose dependent way. After feeding for 78 days fish were challenged with intraperitoneal bacterial infection (Aeromonas hydrophila). Immunological parameters were measured before and after infection and no significant differences were observed in: blood leukocyte burst respiratory activity, serum lysozyme activity, serum protein and albumin, and survival. However a higher total serum globulin was detected after infection and the best response determined through a broken-line regression was 151.07 mg kg-1 of vitamin E on fish feed. Dietary requirement of vitamin E was determined by broken-line regression from thiobarbituric reactive substances of liver mithocondrial fraction to be 58.90 mg/kg of α-tocopherol acetate.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-17T19:43:30Z No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-18T00:27:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-18T00:27:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlminoAfonsoDeOliveiraPaiva_TESE.pdf: 2456253 bytes, checksum: 8fb79cebdf6af9ae6e52d7c2b6873b85 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Macroalgas marinhas s?o importantes fontes de polissacar?deos neutros e negativos com importante potencial industrial e farmacol?gico. A macroalga marrom Lobophora variegata ? conhecida por apresentar polissacar?deos sulfatados (heterofucanas) e neutros (laminarinas). Neste trabalho, mostra-se a obten??o de 6 fra??es polissacar?dicas (F0.3; F0.5; F0.8; F1; F1.5 e F2). A partir dos dados de caracteriza??o f?sico-qu?mica das fra??es, escolheu-se a F1 para purifica??o de seus componentes polissacar?dicos. An?lises de cromatografia l?quida de exclus?o molecular levaram a observa??o que F1 apresenta polissacar?dicos de baixa (~ 5 kDa) at? alta (> 100 kDa) massa molecular. Estes componentes foram separados de acordo com sua massa molecular, utilizando-se dispositivos de separa??o por tamanho molecular. Com isso, obteve-se subfra??es polissacar?dicas com tamanhos m?dios de 5, 20, 40, 75 e acima 100 kDa, denominadas de F1-5, F1-20, F1-40. F1-75 e F1>100 kDa, respectivamente. Estas subfra??es foram analisadas f?sico-qu?micamente por eletroforese em gel de agarose, cromatografia l?quida de alta efici?ncia, assim como, por an?lises de suas propriedades antioxidantes, imunoestimulantes e citot?xicas/antiproliferativas. Como resultados, detectou-se um teor de a??cares totais acima de 55% em todas as subfra??es, j? prote?nas e compostos fen?licos n?o foram observados. As fra??es F1-5, F1-20 e F1-40 apresentaram somente glucose (glucanas), j? F1-75 e F1>100 apresentam glucose, galactose e fucose (heterofucanas). Todas as subfra??es apresentaram atividade quelante de metais, mas somente F1-75 e F1>100 foram mais efetivas em sequestrar radicais. A produ??o/libera??o de ?xido n?trico (NO) por c?lulas RAW 264.7 ficou aumentada apenas na presen?a F1-5 (10 ?M, p<0,05), F1-75 (10 ?M, p<0,001) e, com destaque, F1>100 (10 ?M, p<0,001) cuja presen?a aumentou em cerca de 12 vezes a quantidade de NO. Entretanto, quando estas c?lulas foram ativadas com LPS, somente F1-20 e F1>100 (10 ?M) (p<0,001) proporcionaram produ??o/libera??o de ON. As demais fra??es n?o interferiram na a??o do LPS. Somente F1-5 e F1>100 estimularam a produ??o/libera??o de citocinas. Somente F1>100 (10 ?M) foi citot?xica para a linhagem 3T3 (fibroblastos) (p<0,01). Nenhuma das subfra??es apresentaram efeito citot?xico para linhagem de c?lulas RAW 264.7 (macr?fagos) ou para linhagem de c?lulas tumorais Hep-G2 (carcinoma hep?tico). J? com a linhagen de c?lulas 786-0 (adenocarcinoma renal) somente a glucana F1-40 n?o apresentou atividade citot?xica (p>0,05). Os maiores valores de citotoxidade foram obtidos com a subfra??o F1-20, no caso contra c?lulas B16F10 (melanoma). Dados de citometria de fluxo indicaram que esta subfra??o promove uma parada das c?lulas na fase G1 do ciclo celular (10 ?M, p<0,01). An?lises de resson?ncia magn?tica nuclear levaram a proposta de que F1-20 ? uma ?-glucana formada por ?-(1?3) glucoses com ramifica??es, compostas por um res?duo de glicose, na posi??o 6. A propor??o ? de nove res?duos de glucose 1?3 ligados para cada ponto de ramifica??o. Os dados apontam F1-20, por ser antioxidante, imunomoduladora e citot?xico, como um composto pluripotente cujo potencial deva ser melhor investigado. / Seaweeds are important sources of neutral and negative polysaccharides with important industrial and pharmacological potential. The brown macroalgae Lobophora variegata is known for presenting sulfated polysaccharides (heterofucans) and neutral (laminarins). In this work, it is shown getting 6 polysaccharide fractions (F0.3, F0.5, F0.8, F1, F1.5 and F2). From the data of physicochemical characterization of fractions, F1 was chosen for next purification steps. Liquid chromatography of molecular exclusion analysis showed that F1 contain polysaccharide from low (~ 5 kDa) to high (> 100 kDa) molecular weight. These components were separated according to their molecular weight using separation by molecular size devices. Thus, it was obtained subfractions with an average polysaccharide size of 5, 20, 40, 75 and above 100 kDa, named F1-5, F1-20, F1-40. F1-75 and F1>100 kDa, respectively. These subfractions were analyzed physico-chemically by agarose gel electrophoresis, high-performance liquid chromatography, as by analysis of their antioxidant, immunomodulatory and cytotoxic/antiproliferative properties. As result, total sugar content in all subfractions was above 55%, since proteins and phenolic compounds were not observed. The fractions F1-5, F1-20 and F1-40 showed only glucose (glucans), as F1-75 and F1> 100 exhibit glucose, galactose and fucose (heterofucans). All subfractions showed chelating activity of metals, but only F1-75 and F1>100 were more effective as radical scavenger. The production/release of nitric oxide (NO) by RAW cells was increased only in the presence F1-5 (10 ?M, p <0.05), F1-75 (10 ?M, p<0.001) and, especially, F1>100 (10 ?M, p <0.001) whose its presence increased about 12 times the amount of NO. However, when these cells were activated with LPS only F1-20 and F1>100 (10 ?M) (p<0.001) yielded production/release of NO. The other fractions did not interfere in the LPS action. Only F1-5 and F1>100 stimulated the production/release of cytokines. Only F1>100 (10 ?M) was cytotoxic to line 3T3 (fibroblast) (p<0.01). None of subfractions showed cytotoxicity effect to cell line RAW 264.7 (macrophages) or tumor cell line Hep-G2 (hepatocellular carcinoma). On the other hand, only F1-40 did not showed cytotoxic activity (p>0.05) against 786-0 renal carcinoma cells. The highest cytotoxicity values were obtained with the subfraction F1-20, in the case against B16F10 cells (melanoma). Flow cytometry data indicate that this subfraction stopped of cells in the G1 phase of the cell cycle (10 ?M, p<0.01). Nuclear magnetic resonance analysis led to the proposal that F1-20 is a ?-glucan formed by ?-(1?3) glucosides with branches, comprising a glucose residue at position 6. The ratio is nine glucose residues 1,3 connected to each branching point. The data point F1-20, being an antioxidant, immunomodulating and cytotoxic as a compound pluripotent whose potential should be further investigated.

Agentes estressores em piscicultura intensiva afetam a condição fisiológica e o sistema imune dos peixes aumentando a susceptibilidade a infecções e causando prejuízos econômicos. Para contornar este problema, o uso de nutrientes moduladores do sistema imunológico na dieta, como o tocoferol, se tornam estratégia profilática para as pisciculturas assegurarem uma maior sobrevivência e consequente produtividade. O presente estudo visou avaliar a exigência nutricional do dourado, Salminus brasiliensis, por meio de um ensaio dose-resposta e aferir seu efeito imunomodulador. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, com sete tratamentos/dietas semi purificadas elaboradas com doses crescentes de vitamina E (0; 50; 100; 150; 200, 250 e 3500 mg kg-1&alpha;-tocoferol acetato) (n=4). Quinze juvenis de dourado foram alojados em caixas de polipropileno, em sistema de recirculação fechado com filtragem mecânica e biológica, trocador de calor com termostato e aeração forçada através de sopradores e pedras difusoras. Após serem alimentados por 30 dias com a dieta basal para depleção de vitamina E nas reservas corporais de vitamina, os animais foram pesados (20,04 ± 0,09 g), redistribuídos em 28 tanques (500 L; 15 peixes por tanque) e alimentados durante 78 dias até saciedade aparente (duas refeições diárias: 08h00m e 17h00m). Os peixes apresentaram diferença no ganho de peso, porém não de maneira dependente do tratamento de vitamina E. Após o período de alimentação os peixes foram desafiados com a bactéria Aeromonas hydrophila. Os parâmetros imunológicos foram aferidos antes e após o desafio e não houveram diferenças significativas para: atividade respiratória dos leucócitos, atividade da lisozima sérica, proteína e albumina total no soro e sobrevivência. Houve aumento da concentração das globulinas totais no soro após infecção em função do nível de vitamina E na dieta, e a dose ótima foi definida por meio da regressão segmentada: 151,07 mg kg-1 de vitamina E na ração. A exigência de vitamina E para o dourado foi determinada em 58,90 mg kg-1 pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbiturico da fração mitocondrial do fígado por análise de regressão segmentada. / Stressors in intensive fish farming affect fish physiological conditions and immune system, promoting susceptibility to infections and causing economic losses. To overcome this issue, using immunomodulatory nutrients such as tocopherol on fish feeds may become a prophylactic strategy to fish farms to ensure a higher survival and productivity. The present study aimed at determining vitamin E requirement of dourado, Salminus brasiliensis, through a dose dependent trial and how the immune system responded to vitamin E crescent doses. The experiment design was randomly distributed in seven treatments (n=4) of semi purified diets (0; 50; 100; 150; 200; 250 and 3,500 mg kg-1). After exposing the fish during 30 days for tocopherol depletion, fifteen dourado juveniles (20.04 ± 0.09 g) were stocked in 500 L tanks in a closed loop system and fed twice a day until apparent satiation. Differences in weight gain were observed however not in a vitamin E dose dependent way. After feeding for 78 days fish were challenged with intraperitoneal bacterial infection (Aeromonas hydrophila). Immunological parameters were measured before and after infection and no significant differences were observed in: blood leukocyte burst respiratory activity, serum lysozyme activity, serum protein and albumin, and survival. However a higher total serum globulin was detected after infection and the best response determined through a broken-line regression was 151.07 mg kg-1 of vitamin E on fish feed. Dietary requirement of vitamin E was determined by broken-line regression from thiobarbituric reactive substances of liver mithocondrial fraction to be 58.90 mg/kg of &alpha;-tocopherol acetate.

Orientador: Alexandrina Sartori / Resumo: A rapamicina, também conhecida como sirolimus, é um imunossupressor isolado da bactéria Streptomyces hygroscopicus. Este fármaco tem sido empregado clínicamente para o controle de rejeição de transplantes de órgãos sólidos, diabetes, esclerose tuberosa, doenças neurode-generativas e inclusive, no controle da esclerose múltipla (EM). O entendimento do mecanis-mo de ação da rapamicina requer o conhecimento da via de sinalização intracelular envolvendo os complexos mTOR (mammalian target of rapamycin). Evidências indicam que o mTOR está envolvido na ativação pró-inflamatória de leucócitos. Nesse contexto, o objetivo geral desta dissertação foi investigar o efeito in vitro da rapamicina em células envolvidas na imu-nopatogênese da encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo murino de EM. Células do sisterma nervoso central (SNC) e do baço de camundongos com EAE foram trata-das com rapamicina e simultaneamente estimuladas com glicoproteína da mielina de oligo-dendrócitos. A rapamicina reduziu a produção de IL-17 em culturas de células do SNC e do baço. Adicionalmente, diminuiu a produção de IFN-γ, TNF-α e IL-10 e a expressão gênica de RORc em culturas de células do SNC. A microglia, que é uma célula fagocítica residente no SNC e envolvida na neuroinflamação, também foi testada. Em células da microglia (linhagem BV-2) estimuladas com LPS, a rapamicina diminuiu a produção de TNF-α e IL-6 e também reduziu a mediana da intensidade da fluorescência referente às moléculas MH... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rapamycin, also known as sirolimus, is an immunosuppressant produced by the bacterium Streptomyces hygroscopicus. Rapamycin has been clinically used for the control of rejection of solid organ transplants, diabetes, tuberous sclerosis, neurodegenerative diseases, including multiple sclerosis (MS). To better understand the mechanism of action of rapamycin, is necessary the knowledge of intracellular signaling of the mTOR (mammalian target of rapamycin) complex. Evidence indicates that mTOR is involved in the proinflammatory activation of leukocytes. In this scenario, the main objective of this investigation was to evaluate the in vitro effect of rapamycin in cells derived from mice with experimental autoimmune encephalomielits (EAE) and in a microglia cell line. CNS and spleen cells from EAE mice were treated with rapamycin and simultaneosly stimulated with a myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide. Rapamycin reduced IL-17 production in both, CNS and spleen cell cultures. Additionally, rapamycin decreased IFN-γ, TNF-α and IL-10 production and RORc mRNA expression in CNS cell cultures. Microglia, that is a phagocytic immune cell in the CNS involved in neuroinflammation, was also tested. Microglia (BV-2 lineage) treated simultaneously with rapamycin and LPS showed a decreased production of TNF-α and IL-6 and also reduced expression of MHC II, CD40 and CD86. This downmodulatory effect was associated to upregulated TREM2 mRNA and downregulated iNOS mRNA expression. These resul... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Samira Prince (prince@ufpa.br) on 2012-10-16T13:54:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AcaoMetabolitoSecundario.pdf: 2939051 bytes, checksum: 51621d2319315de98ef8a633e19ecb42 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-10-16T14:21:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AcaoMetabolitoSecundario.pdf: 2939051 bytes, checksum: 51621d2319315de98ef8a633e19ecb42 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-16T14:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AcaoMetabolitoSecundario.pdf: 2939051 bytes, checksum: 51621d2319315de98ef8a633e19ecb42 (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O 5-hidroxi-2-hidroximetil-gama-pirona (HMP) é um metabólito secundário sintetizado por algumas espécies de fungos dos gêneros Aspergillus, Penicillium Acetobac-ter. O HMP tem várias aplicações, sendo utilizado como antioxidante, inibidor da tirosinase, agente protetor contra a radiação e antitumoral. Recentemente, foi também demonstrado que esse metabólito atua como ativador de macrófagos. No entanto, o efeito do HMP em mo-nócitos humanos é desconhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de HMP sobre a viabilidade e diferenciação celular de monócitos do sangue humano in vi-tro. Leucócitos humanos do sangue periférico foram obtidos a partir de bolsas de san-gue doadas pela Fundação Centro de Hemoterapia e Hematologia do Pará (HEMOPA). O isolamento das células foi realizado por meio de gradiente de densidade com Histopaque ®1077. Os monócitos foram tratados durante 24, 48 e 72 horas com 50 e 100 μg / mL de HMP. A análise ultraestrutural dos monócitos tratados revelou que essas células apresen-tam maior espraiamento, elevado número de projeções citoplasmáticas e vacúolos, caracterís-ticas que são frequentemente observadas em células ativadas. A análise da expressão da proteína de superfície específica para macrófago (F4/80) por imunofluorescência, de-monstrou que os monócitos humanos tratados com 50 e 100 μg / mL de HMP por 48 e 72 horas, mostrou um padrão de expressão semelhante ao verificado em macrófagos humanos originados de monócitos tratados com o M-CFS. Os testes de viabilidade utilizados (Método thiazolyl blue, Potencial de membrana mitocondrial, Vermelho Neutro e Azul de Tripan) mostraram que o HMP não tem nenhum efeito citotóxico em monócitos humanos quando tra-tados com 50 e 100 μg/ mL do bioproduto. Estes resultados demonstram um novo papel pa-ra HMP como um agente imunomodulador, induzindo a diferenciação de monócitos em macrófagos. / The 5-hydroxy-2- hydroxymethyl-gamma-pyrone (HMP) is a secondary metabolite synthe-sized by some species of fungi from Aspergillus, Penicillium and Acetobacter genera. The HMP has several applications, being used as antioxidant, tyrosinase inhibitor, protective agent against radiation and antitumor. Recently, it was also shown that this metabolite acts as a macrophage activator. However, the effect of HMP in human monocytes is unknown. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of HMP on the cell viability and differentia-tion of human blood monocytes in vitro. Human peripheral leucocytes were obtained from blood bag donated from Fundation Hemocenter of Para State. Cell isolation was performed using HISTOPAQUE® 1077-density-gradient. Monocytes were treated for 24, 48 and 72 hours with 50 and 100 μg/mL of HMP. The ultrastructural analysis of treated monocytes showed spreading ability, high number of cytoplasmatic projections and vacuoles, features that are often observed in activating cells. Immunofluorescence analysis of the expression of surface protein specific for the macrophage (F4/80), demonstrated that human monocytes treated with 50 and 100 μg/mL for 48 and 72 h showed the similar pattern of expression of proteins to that of human monocytes differentiated by macrophage colony-stimulating factor (M-CFS). The viability test used showed that HMP has no citotoxicity effect on human mon-ocytes when treated with 50 and 100 μg/mL of HMP. These results demonstrate a new role for HMP as an immunomodulator agent, inducing the differentiation of monocytes into macrophages.

Submitted by DANIELA MOURA DOS SANTOS (danielamouravet@yahoo.com.br) on 2018-06-19T19:03:42Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO MESTRADO DANIELA SANTOS.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-06-20T16:33:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_dm_me_jabo.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-20T16:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_dm_me_jabo.pdf: 2591566 bytes, checksum: a364ce81cfb4254048a30be1ce071232 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alterações na organização estrutural da cromatina estão sendo associadas ao desenvolvimento e à fisiopatologia de diversas afecções oftálmicas. Com o advento da epigenética, emergiu o conceito de que parte dessas alterações pode ser revertida por fármacos. Visando-se avaliar a organização estrutural da cromatina em células da conjuntiva palpebral de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS), antes e após tratamento com pomada de ciclosporina A (CsA) 0,2%, a presente pesquisa foi dividida em duas fases. Na fase I estudaram-se núcleos de células epiteliais e de linfócitos colhidos da conjuntiva palpebral de cães com e sem CCS. Foram incluídos na pesquisa 64 olhos de 32 cães domésticos, distribuídos em dois grupos: grupo controle, composto por 16 cães saudáveis (32 olhos, valores de Schirmer ≥ 15 mm/min); grupo CCS, abrangendo 16 cães (32 olhos, valores de Schirmer ≤ 10 mm/min) com CCS bilateral nunca antes tratados com imunomoduladores, sem oftalmopatias concorrentes e livres de alterações sistêmicas. As células foram colhidas por citologia esfoliativa e coradas pela reação de Feulgen. Os seguintes parâmetros foram estudados por vídeo-análise de imagens: área nuclear, perímetro nuclear, fator de circularidade relativa do núcleo (RNRF), densidade óptica integrada (IOD = conteúdo de DNA), densidade óptica (OD = compactação de cromatina); e desvio padrão de valores densitométricos (SDtd = textura de cromatina). Os resultados mostraram que a CCS enseja alterações nos parâmetros nucleares das células epiteliais e dos linfócitos da conjuntiva palpebral. Comparativamente aos controles, as células epiteliais foram mais afetadas pela CCS (alterações em área, perímetro, RNRF, IOD, e OD) do que os linfócitos (alterações em OD, apenas). Tanto as células epiteliais quanto os linfócitos do grupo CCS apresentaram cromatina mais descompactada do que as células do grupo controle. Padrões aberrantes de cromatina, como a "snake-like-chromatin", comumente vistos em pacientes humanos, não foram detectados. Na fase II estudou-se se as alterações nucleares detectadas na fase I regrediriam após tratamento local com pomada de CsA 0,2% a intervalos regulares de 12 horas e lacrimomimético a base de ácido poliacrílico 0,2%, instilado localmente a cada 4 horas. O mesmo grupo controle composto por cães hígidos foi adotado e as células também foram colhidas por citologia esfoliativa aos 30 e 60 dias de tratamento. As preparações citológicas foram coradas pela reação de Feulgen ou submetidas ao bandamento AgNOR. Estudaram-se parâmetros de video-análise de imagens relacionados com a funcionalidade da cromatina, notadamente a fração de área nuclear coberta pela cromatina mais condensada (Sc%), a taxa média de absorbância (AAR), e a entropia. Após bandamento AgNOR, estudaram-se os tamanhos das regiões organizadores de nucléolo e as frações de áreas nucleares ocupadas por elas. Os resultados mostraram que o tratamento com CsA e lacrimomimético (30/60 dias) enseja remodelação cromatínica e desfaz parcialmente as alterações associadas à CCS. / Changes in the structural organization of chromatin are being associated with the development and pathophysiology of various ophthalmic conditions. With the advent of epigenetics, the concept emerged that part of these alterations can be reversed by drugs. To evaluate the structural organization of chromatin in palpebral conjunctival cells of dogs with keratoconjunctivitis sicca (KCS), before and after treatment with 0.2% cyclosporine A (CsA) ophthalmic ointment, the present research was divided into two phases. In stage I, epithelial cells and lymphocyte from the palpebral conjunctiva of dogs with and without KCS were studied. The study included 64 eyes of 32 domestic dogs, distributed into two groups: control group, composed of 16 healthy dogs (32 eyes, Schirmer values ≥ 15 mm / min); KCS group, formed of 16 dogs (32 eyes, Schirmer values ≤ 10 mm / min) with bilateral CCS never previously treated with immunomodulatory drugs, and without concurrent ophthalmic or systemic disorders. Cells were collected by brush cytology and stained by the Feulgen reaction. The following parameters were studied by video image analysis: nuclear area, nuclear perimeter, relative nuclear roundness factor (RNRF), integrated optical density (IOD = DNA content), optical density (OD = chromatin compaction). The results showed that KCS causes alterations in the nuclear parameters of the epithelial cells and the lymphocytes from the palpebral conjunctiva. Compared with the control, the epithelial cells were more affected by the disease (alterations in area, perimeter, RNRF, IOD, and OD) than lymphocytes (changes in OD only.) Both epithelial cells and lymphocytes from the KCS group showed more decompressed chromatin than cells from the control group. "Snakelike-chromatin" commonly seen in human patients was not detected. In phase II it was studied whether the nuclear detected in stage I, regress after treatment with 0.2% CsA at regular intervals of 12 h and 0.2% polyacrylic acid-based artificial tears at regular intervals of 4h. The same control group composed of healthy dogs was adopted and cells were collected by brush cytology after 30 and 60 days of treatment. Cytological preparations were stained by the Feulgen reaction or submitted to the AgNOR banding. We studied video image analysis parameters related to the functionality of chromatin, notably the fraction of nuclear area covered by more condensed chromatin (Sc %), the average absorption ratio (AAR), and entropy. After AgNOR banding, the samples were studied for the sizes of the nucleolar organizer regions and the fractions of nuclear areas occupied by them. Results show that treatment with CsA and lacrimomimetic (30/60 days) leads to chromatin remodeling and partially reverses the chromatin changes elicited by KCS.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-08-15T19:12:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Bianca.pdf: 748434 bytes, checksum: 25858a86b136011052140d31f626de30 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-15T19:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Bianca.pdf: 748434 bytes, checksum: 25858a86b136011052140d31f626de30 (MD5) Previous issue date: 2016-11-29 / The purpose of this study was to evaluate the effect of supplementation with L-arginine, in different doses, on body weight, hemogram, production of IgA, IgG and IgM immunoglobulins and in the small bowel inflammatory process of Wistar rats subjected to chemotherapy. A total of 32 Rattus novergicus Wistar rats were randomly distributed in 4 groups (8 rats / group) with similar body weight: control group (CG), the rats were given ration and water; G5-FU was given ration, water and a dose of 5-FU; Garg295 + 5-FU and Garg458 + 5-FU were given, respectively, 295 mg and 458 mg of L-arginine, which was added to the water and a dose of 5-FU. 5-FU was applied after the adaptation period (day 7) in a single dose of 200 mg of 5-FU / kg body weight, intraperitoneally. The rats were weighed individually, always in the morning and without previous fasting, to determine the weight gain before and after the application of 5-FU. Four days after application of 5-FU, the rats were anesthetized with thionembutal, blood and small intestine samples were collected. Supplementation with 295 mg of L-arginine was shown to be beneficial in reducing body weight loss during treatment with the 5-FU chemotherapeutic. The concentration of platelets was lower (P <0.05) in the G5-FU and GArg458 + 5-FU groups, but similar between the GC and GArg295 + 5-FU groups. The total leukocyte concentration showed a significant reduction in the G5-FU, GArg295 + 5-FU and GArg458 + 5-FU groups when compared to the GC group, however, there was a significant reduction of neutrophils only in the G5-FU group. There was an increase (P <0.05) in fibrinogen concentration in the groups treated with L-arginine (GArg295 + 5-FU and GArg458 + 5-FU). In the GArg295 + 5-FU and GArg458 + 5FU groups, the serum IgA concentration increased significantly in relation to the G5-FU group. Rats supplemented with L-arginine had a minor inflammatory process in the small intestine. It was concluded that supplementation with 295 mg of L-arginine / day attenuated the immediate body weight loss of Wistar rats subjected to 5-FU chemotherapy and that daily supplementation with both 295 mg and 458 mg of L-arginine may ease some side effects of 5-FU such as thrombocytopenia, neutropenia and immunomodular production of IgA, in addition to reducing intestinal inflammatory processes. / Este estudo teve o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com L-arginina, em diferentes doses, no peso corporal, no hemograma, na produção das imunoglobulinas IgA, IgG e IgM e no processo inflamatório do intestino delgado de ratos Wistar submetidos à quimioterapia. Foram utilizados 32 Rattus novergicus da linhagem Wistar, distribuídos aleatoriamente em 4 grupos (8 ratos/grupo) com peso corporal semelhante: grupo controle (GC), os ratos receberam ração e água; G5-FU receberam ração, água e uma dose de 5-FU; Garg295+5-FU e Garg458+5-FU que receberam ração, 295 mg e 458 mg de L-arginina, respectivamente, adicionada na água e uma dose de 5-FU. A 5-FU foi aplicada após o período de adaptação (dia 7) na dose única de 200 mg de 5-FU/Kg de peso corporal, por via intraperitoneal. Os ratos foram pesados individualmente, sempre no período da manhã e sem jejum prévio, para determinação do ganho de peso antes e depois da aplicação da 5-FU. Quatro dias após da aplicação da 5-FU, os ratos foram anestesiados com tionembutal e colheu-se amostras de sangue e do intestino delgado. A suplementação com 295 mg de L-arginina mostrou-se benéfica na redução de perda de peso corporal durante o tratamento com o quimioterápico 5-FU. A concentração de plaquetas foi menor (P < 0,05) nos grupos G5-FU e GArg458+5-FU, porém, semelhantes entre os grupos GC e GArg295+5-FU. A concentração de leucócitos totais apresentou redução significativa nos grupos G5-FU, GArg295+5-FU e GArg458+5-FU quando comparados ao grupo GC, entretanto, houve redução significativa de neutrófilos somente no grupo G5-FU. Ocorreu um aumento (P < 0,05) na concentração de fibrinogênio nos grupos tratados com L-arginina (GArg295+5-FU e GArg458+5-FU). Nos grupos GArg295+5-FU e GArg458+5FU, a concentração sérica de IgA aumentou significativamente em relação ao grupo G5-FU. Os ratos suplementados com L-arginina apresentaram menor processo inflamatório no intestino delgado. Conclui-se que a suplementação com 295 mg de L-arginina/dia atenuou a perda de peso corporal imediata dos ratos Wistar submetidos à quimioterapia com 5-FU e que a suplementação diária tanto com 295 mg como 458 mg de L-arginina pode amenizar alguns efeitos colaterais da 5-FU como a plaquetopenia, a neutropenia e imunomodular a produção de IgA, além de reduzir processos inflamatórios intestinais.

Lectinas são proteínas cuja principal característica é a de se ligar específica e reversivelmente a carboidratos. BanLec é a lectina presente na polpa de bananas, que se liga especificamente a manose e glicose, e é capaz de induzir a proliferação de células T, podendo estimular a resposta imune. Existem indícios de que o teor de BanLec pode variar dependendo do estádio de amadurecimento e do tipo de cultivar, o que pode afetar a quantidade de BanLec existente na fruta quando consumida in natura e a possível resposta imune frente ao consumo de banana. Por este motivo, um dos objetivos desse trabalho foi determinar os teores e a atividade hemaglutinante de BanLec em extratos de farinha de banana verde, além de bananas das cultivares Pacovan, Figo, Terra, Mysore e Nanicão, nos estádios de maturação verde e maduro, e submetidas a tratamento com 1-MCP e baixa temperatura (para cv. Nanicão). Com vista a atender ao objetivo de avaliar seus efeitos imunomoduladores in vivo, a BanLec foi purificada da cultivar Nanicão e administrada por via oral a camundongos BALB/c. Os ensaios de atividade hemaglutinante dos extratos de banana apontaram para maior quantidade de BanLec no fruto maduro, quando comparado ao verde, e ausência dessa proteína na cultivar Figo. Os parâmetros imunológicos analisados após administração de BanLec aos camundongos demonstram que a resposta imune gerada após ingestão de BanLec é dose dependente, além disso, a administração de 50 &#181;g de BanLec aos animais foi capaz de modular citocinas importantes na resposta imunológica, provavelmente causando um efeito que pode ser interpretado como mais protetor do que patogênico. Com base nos resultados obtidos, podemos concluir que existem diferenças nos teores de BanLec dependendo da cultivar e estádio de maturação analisado, sendo que essa proteína não está presente na polpa de todas as variedades de banana e finalmente, que ela tem grande potencial imunomodulador in vivo, uma vez que ativou citocinas de resposta anti-inflamatória. / Lectins are proteins which bind specifically and reversibly to carbohydrates. BanLec is the lectin present in banana pulp, and it binds to mannose and glucose, being capable of inducing T-cell proliferation, and to stimulate the immune response. There are some evidence that the amount of BanLec may vary depending on the maturation stage of the fruit and the cultivar (cv.), which may affect the amount of BanLec and the possible immune response after consumption of banana. Thus, this study aimed to evaluate the amount of BanLec and its hemagglutinating activity in crude extracts of bananas from cultivars Pacovan, Figo, Terra, Mysore and Nanicão, in both unripe and ripe maturation stage, and also fruits which were treated with 1-MCP and low temperature. In addition, in order to access their immunomodulatory effects in vivo, BanLec was purified by affinity chromatography and administered orally to BALB/c mice. The hemagglutinating activity assays indicate higher amount of BanLec in ripe fruit. Moreover, the possible was undetectable in the pulp of banana Figo. The immunological parameters of mice orally fed with BanLec showed that the immunological response is dependent on the amount of protein administrated, in agreement to previous in vitro studies. Besides, 50 &#181;g of BanLec, were able to modulate some cytokines in immune response, causing an effect that seems to be more protective than pathogenic. We conclude that there are important differences in amount of BanLec depending on the cultivar and the maturation stage, and BanLec has a dose-dependent immunomodulatory effect in vivo.

Lectinas são proteínas cuja principal característica é a de se ligar específica e reversivelmente a carboidratos. BanLec é a lectina presente na polpa de bananas, que se liga especificamente a manose e glicose, e é capaz de induzir a proliferação de células T, podendo estimular a resposta imune. Existem indícios de que o teor de BanLec pode variar dependendo do estádio de amadurecimento e do tipo de cultivar, o que pode afetar a quantidade de BanLec existente na fruta quando consumida in natura e a possível resposta imune frente ao consumo de banana. Por este motivo, um dos objetivos desse trabalho foi determinar os teores e a atividade hemaglutinante de BanLec em extratos de farinha de banana verde, além de bananas das cultivares Pacovan, Figo, Terra, Mysore e Nanicão, nos estádios de maturação verde e maduro, e submetidas a tratamento com 1-MCP e baixa temperatura (para cv. Nanicão). Com vista a atender ao objetivo de avaliar seus efeitos imunomoduladores in vivo, a BanLec foi purificada da cultivar Nanicão e administrada por via oral a camundongos BALB/c. Os ensaios de atividade hemaglutinante dos extratos de banana apontaram para maior quantidade de BanLec no fruto maduro, quando comparado ao verde, e ausência dessa proteína na cultivar Figo. Os parâmetros imunológicos analisados após administração de BanLec aos camundongos demonstram que a resposta imune gerada após ingestão de BanLec é dose dependente, além disso, a administração de 50 &#181;g de BanLec aos animais foi capaz de modular citocinas importantes na resposta imunológica, provavelmente causando um efeito que pode ser interpretado como mais protetor do que patogênico. Com base nos resultados obtidos, podemos concluir que existem diferenças nos teores de BanLec dependendo da cultivar e estádio de maturação analisado, sendo que essa proteína não está presente na polpa de todas as variedades de banana e finalmente, que ela tem grande potencial imunomodulador in vivo, uma vez que ativou citocinas de resposta anti-inflamatória. / Lectins are proteins which bind specifically and reversibly to carbohydrates. BanLec is the lectin present in banana pulp, and it binds to mannose and glucose, being capable of inducing T-cell proliferation, and to stimulate the immune response. There are some evidence that the amount of BanLec may vary depending on the maturation stage of the fruit and the cultivar (cv.), which may affect the amount of BanLec and the possible immune response after consumption of banana. Thus, this study aimed to evaluate the amount of BanLec and its hemagglutinating activity in crude extracts of bananas from cultivars Pacovan, Figo, Terra, Mysore and Nanicão, in both unripe and ripe maturation stage, and also fruits which were treated with 1-MCP and low temperature. In addition, in order to access their immunomodulatory effects in vivo, BanLec was purified by affinity chromatography and administered orally to BALB/c mice. The hemagglutinating activity assays indicate higher amount of BanLec in ripe fruit. Moreover, the possible was undetectable in the pulp of banana Figo. The immunological parameters of mice orally fed with BanLec showed that the immunological response is dependent on the amount of protein administrated, in agreement to previous in vitro studies. Besides, 50 &#181;g of BanLec, were able to modulate some cytokines in immune response, causing an effect that seems to be more protective than pathogenic. We conclude that there are important differences in amount of BanLec depending on the cultivar and the maturation stage, and BanLec has a dose-dependent immunomodulatory effect in vivo.