Mycobacterium tuberculosis é responsável por dois milhões de mortes e oito milhões de indivíduos infectados por ano. Com o aumento da incidência da tuberculose (TB) em todo o mundo, um grande número de pacientes está sob alto risco de desenvolver efeitos adversos graves quando tratados com fármacos anti-TB. Isoniazida (INH) é um dos fármacos anti-TB mais antigos e mais efetivos, entretanto é o principal indutor de hepatotoxicidade. INH é metabolizada no fígado principalmente pela enzima N-acetiltransferease 2 (NAT2). Diferenças na toxicidade da INH foram atribuídas à variabilidade genética no gene que codifica NAT2. Os polimorfismos de NAT2 são muito comuns na população humana, e, os indivíduos podem ser classificados com fenótipos de acetilação rápida e lenta. Acetiladores lentos apresentam uma incidência maior de hepatotoxicidade que os acetiladores rápidos. Acetiladores rápidos são mais suscetíveis a desenvolver falência terapêutica. Desta forma, os objetivos principais deste estudo foram: (a) verificar a freqüência de polimorfismos de NAT2, (b) determinar o perfil de acetilação de NAT2 e sua relação com a incidência de reações adversas gastrointestinais e hepatotoxicidade induzida por fármacos anti-TB e (c) determinar os fatores de risco clínicos para hepatotoxicidade em uma população do Sul do Brasil. Um estudo de coorte prospectivo foi realizado incluindo 254 pacientes com TB provenientes do ambulatório do Hospital Sanatório Partenon (Porto Alegre, Rio Grande do Sul) usando rifampicina (RMP), isoniazida (INH) e pirazinamida (PZA). Uma entrevista, termo de consentimento livre e esclarecido e a revisão dos prontuários médicos foram obtidos para cada paciente incluído no estudo. A genotipagem de NAT2 foi realizada através da técnica de seqüenciamento direto. Os resultados obtidos foram analisados através de análises univariadas e regressão logística múltipla. Dos 254 pacientes analisados, 69 (27,2%) eram acetiladores lentos e 185 (72,8%) acetiladores rápidos. Sessenta e cinco (25,6%) pacientes eram HIV positivos. Trinta e três (13%) e 14 (5,5%) pacientes desenvolveram efeitos adversos gastrointestinais e hepatotoxicidade, respectivamente. Dos 14 pacientes com hepatotoxicidade, 9 (64,3%) eram acetiladores lentos e 5 (35,7%) acetiladores rápidos. Sexo, idade, infecção por HCV, abuso de álcool e os níveis de aminotransferases antes do início do tratamento não foram encontrados como fatores de risco para hepatotoxicidade. Entretanto, a análise da regressão logística múltipla mostrou que o perfil de acetilação lenta e infecção por HIV (p<0.05) foram fatores de risco independentes para hepatotoxicidade. Nossos achados demonstraram que pacientes com HIV positivo e perfil de acetilação lenta estão significativamente associados com um risco maior de desenvolvimento de hepatotoxicidade. A genotipagem de polimorfismos de NAT2 pode ser uma ferramenta útil para predizer hepatotoxicidade aos fármacos anti-TB nesta população. / Mycobacterium tuberculosis is responsible for two million deaths and eight million newly infected patients per year. As its incidence increases world-wide, a greater number of patients may be at risk for severe adverse drug reactions when treated with antituberculosis chemotherapy. Isoniazid (INH) is one of the oldest, but still one of the most effective antituberculosis agents and it is also the main drug to induce hepatotoxicity. INH is metabolized in the liver mainly by N-acetyltransferase 2 (NAT2), and the differences in its toxicity were attributed to genetic variability in NAT2 gene. The NAT2 polymorphism is very common in the human population, and individuals can be classified into fast and slow acetylator phenotypes. Slow acetylators have a higher incidence of anti-TB drug-induced hepatitis than fast acetylators. Fast acetylators are more susceptible to develop therapeutic failure. In this way, the main objectives of this study were: (1) to verify the frequency of NAT2 polymorphisms, (2) to determine the NAT2 acetylation profile, the relation to the incidence of gastrointestinal adverse drug reactions and antituberculosis drug induced hepatotoxicity, and (3) to determine the clinical risk factors for hepatotoxicity in a population from southern Brazil. A prospective cohort study including a total of 254 TB outpatients from Hospital Sanatorio Partenon (Porto Alegre, Rio Grande do Sul) using isoniazid (INH), rifampicin (RMP) and pirazinamide (PZA) was done. An interview, a written informed consent and a review of medical records were obtained from each patient included in this study. NAT2 genotyping was performed by direct PCR sequencing. The results obtained were analyzed through the univariate analysis and multiple logistic regression. From 254 patients analyzed, 69 (27.2%) were slow and 185 (72.8%) fast acetylators. Sixty-five (25.6%) patients were HIV positive. Thirty-three (13%) and 14 (5.5%) patients developed gastrointestinal ADR and hepatotoxicity, respectively. From 14 hepatotoxicity patients, 9 (64.3%) were slow and 5 (35.7%) were fast acetylators. Sex, age, HCV infection, alcohol abuse, baseline aminotransferases were not found as risk factors for hepatotoxicity. However, logistic regression analysis showed that slow acetylator status and the presence of immunodeficiency virus (HIV) (p<0.05) were independent risk factors for hepatotoxicity. Our findings showed that HIV positive patients and bearing slow acetylation profile are significantly associated with a higher risk of developing hepatotoxicity. The genotyping of NAT2 polymorphisms may be a useful tool in this setting for predicting hepatotoxicity by antituberculosis agents.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2146_1.pdf: 1819936 bytes, checksum: b3b32c97fb421e4f5a6f28fadfcd344b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A tuberculose faz parte do grupo de doenças negligenciadas, e é uma das doenças infecciosas que mais mortes têm causado em todo o mundo, havendo aproximadamente um terço da população global, o equivalente a dois bilhões de pessoas, infectada pelo M. tuberculosis. Formulações em dose fixa combinada (DFC) envolvem a combinação de duas ou mais drogas numa só formulação, sob fixas proporções e assumem importância como estratégia potencial para o tratamento da tuberculose, embora ao longo dos anos tenham sido detectados problemas em sua qualidade, como a falha na biodisponibilidade de rifampicina, instabilidade nas formulações, desenvolvimento de resistência e efeitos tóxico-alérgicos, a isoniazida e rifampicina, as duas principais drogas de primeira linha desse tratamento, podem ser encontradas em DFC. O controle de qualidade é uma ferramenta importante para as indústrias farmacêuticas afirmarem a qualidade do medicamento produzido, de modo a garantir a segurança e eficácia do mesmo. É também essencial a monitoração da qualidade dos insumos utilizados nas preparações farmacêuticas, sobretudo dos princípios ativos. Os estudos de estabilidade transcendem a etapa inicial de controle de qualidade e são planejados para garantir o uso pretendido do medicamento durante sua vida útil. Este estudo é uma parceria entre o Núcleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos e o Laboratório Farmacêutico do Estado de Pernambuco e apresenta o desenvolvimento e validação de método indicativo de estabilidade por cromatografia líquida de alta eficiência para fármacos e produtos farmacêuticos em dose fixa combinada de isoniazida e rifampicina, além de estudo de avaliação de degradação em meio ácido dos insumos e de cápsulas de isoniazida + rifampicina (200 + 300 mg) e avaliação de diversos fabricantes de rifampicina, fármaco mais crítico dessa associação, buscando-se sua caracterização

[pt] Diante das limitações e dos efeitos colaterais indesejáveis observados na terapia do câncer com os derivados de platina, muitos esforços têm sido feitos com o objetivo de obter novas drogas mais eficazes e menos tóxicas, capazes de promover a clivagem oxidativa ou hidrolítica da cadeia do DNA e de outras estruturas subcelulares fundamentais. Até o presente momento, alguns complexos de cobre já foram desenvolvidos, e mostraram excelente atividade in vitro contra uma variedade de tumores. Assim, o conhecimento sobre a citotoxidade e seletividade dos complexos de cobre(II) contendo ponte de hidróxido é, portanto, de importância na busca por novos fármacos para o tratamento do câncer. Além disso, por se tratar de um metal fisiológico, os compostos de cobre costumam ser menos tóxicos que os derivados de platina, diminuindo assim efeitos colaterais indesejados e com isso possibilitando o aumento do arsenal quimioterápico disponível para o tratamento da doença. Neste contexto, foram desenvolvidos no presente trabalho dois ligantes binucleantes derivados da isoniazida (INH). Um desses ligantes, o não-simétrico N-isonicotinoil-2-hidroxi-3-{[(2-hidroxibenzil)(2-piridilmetil)amino]-metil}-5-metilbenzaldeído hidrazona, é inédito. Já o outro, o ligante simétrico N,N’-diisonicotinoil-2-hidroxi-5-metilisoftaldeído diidrazona, foi originalmente sintetizado por uma equipe liderada por Chen, em 1992. A partir destes ligantes, quatro novos complexos binucleares de Cu(II) contendo pontes exógenas hidroxo e acetato, todos eles contendo uma ponte do tipo -hidroxo entre os metais, foram sintetizados e caracterizados por diversas técnicas instrumentais de análise. Além disso, foram feitos cálculos teóricos com o objetivo de auxiliar as propostas quanto à estrutura dos compostos. Trabalhos futuros serão realizados a fim de investigar a atividade biológica destes complexos. / [en] Considering the limitations and undesirable side effects observed in cancer therapy with platinum derivatives, many efforts have been made with the aim of obtaining new drugs more effective and less toxic, able to promote the hydrolytic cleavage or oxidative DNA chain other subcellular structures critical. Until now, some copper complexes have been developed and showed excellent in vitro activity against a variety of experimental tumors. Thus, knowledge on the cytotoxicity and selectivity compounds of copper (II) containing bridging hydroxide is therefore of importance in the search for new drugs for cancer treatment. Moreover, because it is a physiological metal, its compounds are usually less toxic than platinum derivatives, thus reducing unwanted side effects and thereby enabling the increase of chemotherapeutic arsenal available for treatment of the disease. In this context, were developed in this work binucleantes two ligands derived from isoniazid (INH). One of these ligands, the non-symmetrical N-isonicotinoil-2-hydroxy-3-{[(2-hydroxybenzyl) (2-piridilmetil) amino]-methyl}-5-hydrazone methylbenzaldehyde, is new. But the other, the symmetrical ligand N, N -diisonicotinoyl-2-hydroxy-5-methylisophthalaldehyde dihydrazone, was originally synthesized by a team led by Chen in 1992. From these ligands, four new binuclear complexes of Cu (II) bridges containing exogenous hydroxo and acetate, all of which contain a hydroxo-bridge type between the metals were synthesized and characterized by various instrumental techniques of analysis. In addition, theoretical calculations were made with the aim of helping the proposals regarding the structure of the compounds. Future works will be performed to investigate the biological activity of these complexes.

A tuberculose, causada por Mycobacterium tuberculosis, ainda é uma emergência de saúde pública global. O surgimento das cepas multirresistentes (MDR) e das cepas extensivamente resistentes (XDR) agravam a situação, diminuindo o número de fármacos disponíveis para o tratamento. Embora a isoniazida seja uma das primeiras moléculas introduzidas no tratamento da tuberculose, diferentes mecanismos de resistência têm sido propostos e o tema ainda não foi totalmente esclarecido. Neste trabalho foi realizada a caraterização estrutural e biofísica de 7 mutantes da proteína InhA identificadas a partir de isolados clínicos de M. tuberculosis resistentes à isoniazida. Os ensaios de calorimetria de titulação isotérmica (ITC) mostram diminuições nos valores da constante de dissociação (Kd) dos mutantes para os NADH em aproximadamente cinco vezes quando comparado com a proteína selvagem. As estruturas cristalográficas dos mutantes de InhA mostram novas moléculas de água que parecem estar envolvidas nas variações entrópicas e entálpicas observadas em dados calorimétricos. Estes resultados corroboram e sugerem que a diminuição na afinidade pelo NADH e a desestabilização do tetrâmero de InhA podem ser fenômenos associados a resistência à isoniazida. / Tuberculosis, caused by the infection of Mycobacterium tuberculosis, still remains as a global health emergency. The emergence of multidrug-resistant strains (MDR) and extensively drug-resistant strains (XDR) strains further aggravates the crisis, reducing the limited number of drugs available for the treatment of the disease. Even though isoniazid was one of the first drugs introduced in the antitubercular therapy, many resistance mechanisms were proposed and the subject is still not clear. In this work, a structural and biophysical characterization of seven mutant InhA proteins identified in clinical M. tuberculosis strains resistant to isoniazid were performed. Isothermal titration calorimetry (ITC) assays showed a decrease in the dissociation constant (Kd) values of the InhA mutants by up to almost five-fold when compared to the wild-type protein. Crystallographic structures of InhA mutants showed new water molecules that appear to be involved in the entropic and enthalpic variations described by the thermodynamic assays. These results corroborate and suggest that the decrease in affinity for NADH and the destabilization of the InhA tetramer may be the phenomena associated to isoniazid resistance.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania spp que afetam 98 países. No Brasil, no ano de 2013, foram relatados 3.253 casos de leishmaniose visceral e 18.226 casos de Leishmaniose Tegumentar Americana. O tratamento de primeira escolha continua sendo realizado com antimoniais pentavalentes, e em casos de insucessos os fármacos de segunda escolha são a pentamidina e a anfotericina B. Tais medicamentos causam intensos efeitos adversos e ultimamente têm surgido cepas resistentes aos mesmos. Em áreas endêmicas têm sido cada vez mais comum o surgimento da co-infecção Leishmania com Mycobacterium tuberculosis. O tratamento para a tuberculose com pirazinamida (PZA) e isoniazida (INZ), controla a leishmaniose. Esses dados sugerem atividade anti-leishmania da PZA e da INZ. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade in vitro da INZ e da PZA e seus compostos derivados (série G e série R, respectivamente) sobre Leishmania (Viannia) braziliensis. As moléculas foram testadas em monocamadas de macrófagos peritoneais de camunongos infectados com L. (V) braziliensis durante 48h. Todas as moléculas testadas inibiram o índice de infecção de forma dose dependente em comparação aos controles. As moléculas da série R foram mais ativas do que a PZA, porém o resultado foi significativo somente para a R02 (p < 0,005). Apenas a molécula R05 (76,64M) foi relativamente tóxica para macrófagos. Os compostos mais ativos foram R02, G01 e G02, cujos índices de seletividade foram 14,31, 19 e 30, respectivamente. A dosagem de nitrito foi feita em sobrenadantes de monocamadas de macrófagos peritoniais infectados e tratados com as substâncias nas concentrações 10 e 100M. A G01 e a G02 estimularam a produção de NO2 nas duas concentrações, entretanto o resultado foi estatisticamente significativo para a G02 em 100M (p < 0,0001), a G05 só estimulou óxido nítrico na maior concentração. Todos os compostos da série R estimularam NO2, contudo, o resultado foi estatisticamente significativo para a R03 e R05 a 100M (p < 0,001). Adicionalmente, foi realizado uma análise preditiva in sílico de parâmetros farmacocinéticos das moléculas mais ativas in vitro, utilizando o software admetSAR. Os dados obtidos mostraram que de forma semelhante às suas moléculas originais a G01, G02 e R02 apresentaram alta capacidade de serem absorvidas pelo trato gastrointestinal, baixo potencial hepatotoxico e carcinogênico. Juntos, esses dados demonstram que essas moléculas são seletivamente tóxicas para o parasito com potencial para serem testadas pela via oral em estudos em modelo experimental de infecção. / Leishmaniasis are a group of diseases caused by protozoan of genus Leishmania spp affecting of 98 countries. In Brazil, in the year 2013 were 3.253 reported cases of visceral leishmaniasis and 18.226 cases of cutaneous leishmaniasis. The first choice of treatment is still performed with pentavalent antimonials and in cases of failures drugs of second line of treatment are pentamidine and anfotericin B. These drugs cause many adverse effects and has lately emerged resistant strains. In endemic areas it has been increasingly common the appearance of co-infection Leishmania and Mycobacterium tuberculosis. The treatment of tuberculosis with pyrazinamid and isoniazid control the leishmaniasis.The aim of this study was evaluate the anti-leishmania activity in vitro of INZ and PZA and yours derivatives compounds (serie G and serie R,respectively) on the Leishmania (Viannia) braziliensis. The molecules were tested on infected monolayers of peritoneal murine macrophages for 48h. All the molecules te inhibited the infection index in a dose-dependent manner in relation to controls. The molecules of the R series were more active than PZA, but the result was only significant for R02 (p < 0,005). Only R05 (CC50 = 76,64M) was relatively toxic to macrophages. The most active compounds were R02, G01 and G02 whose select index were 14,31, 19 and 30, respectively. Nitrite assay was performed in supernatants of infected monolayers of peritonial macrophages treated with the substancies at 10 and 100M. G01 and G02 stimulated NO2 prodution, however, the result was only statistically significant for G02 at 100M (p < 0,001). All the compounds of R serie stimulated NO2 production however the results were statistically significant for the R03 and R05 at 100M (p < 0,001). Additionally, a in silico preditive pharmacokinetic analysis was performed to active molecules using the admetSAR software the data showed that G01, G02 and R02 were similar to their original molecules as to high capacity to be absorbed by the gastrointestinal tract, low hepatotoxic and carcinogenic potencial. Together, these data demonstrate that these molecules are selectively toxic to the parasite with the potencial to be tested orally on studies in experimental infection.

Doutor -- Universidade de Sao Paulo. Faculdade de Saude Publica. Departamento de Epidemiologia, Sao Paulo, 2004.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DaianeSS_DISSERT.pdf: 2054024 bytes, checksum: bee46a4b535270b61e0c79e3911040aa (MD5) Previous issue date: 2013-05-22 / Clays are natural materials that have great potential for use as excipients for solid dosage forms. Palygorskite is a type of clay that has hydrophilic properties as well as a large surface area, which could contribute to the dissolution of drugs. Thus, the present study aims to evaluate the use of palygorskite clay, from Piaui (Northeast region of Brazil), as a pharmaceutical excipient for solid dosage forms, using rifampicin and isoniazid as the model drugs. The former is a poorly soluble drug often associated with isoniazid for tuberculosis treatment. Palygorskite was characterized by X-ray diffraction (XRD), X-ray fluorescence (XRF), particle size, transmission electron microscopy (TEM), scanning electron microscopy (SEM) and specific surface area (BET). The rheological and technological properties of palygorskite were determined and compared to those of talc, magnesium stearate and Aersosil 200&#61650;. Mixtures between drugs and palygorskite were analyzed by differential scanning calorimetry (DSC), thermogravimetric analysis (TG) combined with thermal analysis (DTA) and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR), where the results were compared with those of the individual compounds. In addition, dissolution studies of solid dispersions and capsules containing the drugs, mixed with either palygorskite or a mixture of talc and magnesium stearate, were performed. The results showed that palygorskite has small particles with a high surface area. Its rheological characteristics were better than those of others commonly used glidants and lubricants. There was no interaction between palygorskite and the drugs (rifampicin and isoniazid). Among the dispersions studied, the mixture with palygorskite (5%) showed the highest drug dissolution when compared to other excipients. The dissolution of the rifampicin capsules containing palygosrkite was faster in higher concentrations. However, these differences were statistically different only in the first minutes of the dissolution experiment. The dissolution profile of isoniazid was also statistically different on the initial part of the experiment. The formulations prepared with isoniazid and palygorskite showed higher drug dissolution, but it was in descending order of concentration. According to these results, the palygorskite clay used in this study has great potential for application as an excipient for solid dosage forms / Argilas s?o materiais naturais, com baixa toxicidade e com potencial para atuar como excipiente. A atapulgita ? uma argila com caracter?stica hidrof?lica e grande ?rea superficial. Assim, este trabalho tem por objetivo avaliar o uso da atapulgita como excipiente farmac?utico em formas s?lidas, utilizando a rifampicina e a isoniazida como f?rmacos-modelo. A atapulgita ? proveniente do Estado do Piau?, Nordeste, Brasil. A rifampicina ? um f?rmaco de baixa solubilidade frequentemente associado ? isoniazida para o tratamento da tuberculose. Inicialmente a atapulgita foi caracterizada por difra??o de raios-X (DRX), fluoresc?ncia de raios-X (FRX), an?lise granulom?trica, microscopia eletr?nica de transmiss?o (MET) e varredura (MEV) e determina??o da ?rea de superf?cie espec?fica (BET). As propriedades reol?gicas e tecnol?gicas da argila foram determinadas e comparadas ao talco, estearato de magn?sio e Aerosil 200&#61650;. Misturas entre os f?rmacos e a argila (1:1, 1:2 e 1:1:1), bem como os materiais isolados, foram avaliadas por calorimetria explorat?ria diferencial (DSC), an?lise termogravim?trica (TG) combinada ? an?lise t?rmica diferencial (DTA) e espectroscopia na regi?o do infravermelho com transformada de Fourier (FT- IR). Estudos de dissolu??o de dispers?es s?lidas e de c?psulas contendo os f?rmacos e a atapulgita foram realizados e comparados ao emprego de talco e estearato de magn?sio. Os resultados mostraram que a atapulgita apresenta part?culas pequenas, com grande ?rea de superf?cie. Apresentou boas caracter?sticas reol?gicas quando comparada ao demais reguladores de fluxo. N?o foi evidenciada intera??o com os f?rmacos testados. Entre as dispers?es, as misturas com atapulgita (5%) mostraram maior dissolu??o dos f?rmacos em rela??o a outros excipientes . O perfil de dissolu??o da rifampicina foi superior na formula??o de c?psula contendo atapulgita em maior concentra??o, sendo estatisticamente diferente nos primeiros minutos. O perfil de dissolu??o da isoniazida tamb?m se mostrou estatisticamente diferente nos primeiros minutos, sendo as formula??es com atapulgita as que apresentaram maior dissolu??o do f?rmaco, por?m em ordem decrescente de concentra??o. A argila atapulgita apresenta, portanto, potencial para aplica??o como excipiente em formas farmac?uticas s?lidas

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Rosângela Gonçalves Peccinini Machado / Banca: Regina Lúcia Moraes Moreau / Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar os efeitos da rifampicina (RMP) sobre os parâmetros farmacocinéticos da isoniazida (INH), sobre a produção de seus metabólitos e sobre a sua hepatotoxicidade. Foram utilizados 140 ratos (Wistar, machos, peso médio 250g) que receberam, por gavagem, durante 21 dias: Grupo I - água estéril (n = 20); Grupo II - INH (100mg/Kg) (n = 50); Grupo III - RMP (100mg/Kg) (n = 20) e Grupo IV- INH (100mg/Kg) + RMP (100mg/Kg) ( n= 50). Anteriormente ao início do experimento, o sangue de todos os animais foi coletado pela cauda para determinação da atividade sérica de AST e ALT, cujos valores foram considerados como basais. No 21o do experimento os animais foram sacrificados por decapitação e o material biológico obtido foi utilizado para a determinação da atividade de AST e ALT e para a análise dos parâmetros farmacocinéticos da INH nos grupos II e IV. A cinética da isoniazida e de seus metabólitos foi investigada com base na relação concentração plasmática x tempo a partir de amostras seriadas de sangue em 10 tempos diferentes (0; 15þ; 30þ; 45þ; 60þ; 1,5h; 3h; 6h; 12h; e 24h); para cada tempo de coleta foram empregados 5 ratos (5 replicatas). As amostras de soro foram desproteinizadas com ácido tricloroacético 10%, derivatizeda com cinamaldeído 1% e analisada por HPLC...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the hepatotoxicity, pharmacokinetic parameters and biotransformation of isoniazid when rats were treated with isoniazid (INH); rifampicin (RMP); and INH + RMP. Daily doses of the tuberculostatic drugs were administrated intragastrically to the animals (Wistar rats) for one period of 21 days as follow: sterile water (group I, control); INH (100mg/Kg) (group II), RMP (100mg/Kg) (group III); INH (100mg/Kg) + RMP (100mg/Kg) (group IV). The serum levels of the biomarkers aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) were determined before the administration of the drugs (basal) and after the 21 days treatments. On day 21, blood samples were obtained before and 15þ; 30þ; 45þ; 60þ; 1,5; 3h; 6h; 12h and 24 hours after the dose. (five animals for each point). The blood samples were deproteinized with 10% trichloroacetic acid, derivatized by 1% cinnamaldehyde and analyzed by liquid chromatograph. For the determination of the acetylated metabolites acetylisoniazid (AcINH) and acetylhydrazine (AcHz) a previous hydrolysis with 6 M hydrochloride acid was performed. The results are presented as mean and SEM. The pharmacokinetic parameter of the INH and its metabolites AcINH and hydrazine (Hz) were compared between the groups (p < 0.05, Student t-test)...(Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Rosângela Gonçalves Peccinini Machado / Banca: Regina Lúcia de Moraes Moreau / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da administração simultânea de PYR sobre os parâmetros farmacocinéticos da INH e a produção de seus metabólitos, em um grupo de animais sob tratamento com INH+PYR e outro com INH+RMP+PYR, bem como de avaliar o comportamento dos biomarcadores de hepatotoxicidade, as transaminases AST e ALT, nesses grupos. Na primeira fase do protocolo experimental foi coletado sangue da cauda dos animais (ratos Wistar, machos, peso~250g) para análise dos biomarcadores como valores basais, em seguida realizou-se a administração, por gavagem, de doses múltiplas de INH (100mg/Kg) (grupo I), INH+PYR (350mg/Kg) (grupo II), INH+PYR+RMP (100mg/Kg) (grupo III), PYR (grupo IV) e água estéril (grupo V – controle) por 21 dias. Para os animais que receberam INH (grupo I, grupo II e grupo III) construiu-se a curva de sua concentração plasmática x tempo. Amostras seriadas de sangue foram coletadas em 10 tempos diferentes entre 0-24h; para cada tempo de coleta foram empregados 5 ratos. As amostras foram desproteinizadas com ácido tricloroacético a 10%; para análise dos metabólitos acetilados promovendo a hidrólise com HCl 6M; em seguida, a INH e a Hz foram derivatizadas com cinamaldeído. As amostras foram analisadas por HPLC usando coluna Resolve TM C18 e detector UV-VS, operando a 340nm. Os parâmetros farmacocinéticos da INH apresentam diferenças estatisticamente significativas (p<0,05, teste de Tukey) entre os grupos, e sua média e EPM foram: Grupo INH vs Grupo INH+PYR: t1/2 = 1,4 (0,070) vs 1,0 (0,100); K = 0,51 (0,024) vs 0,77 (0,100); t1/2 = 3,4 (0,026) vs 7,2 (0,910); Kel = 0,21 (0,015) vs 0,10 (0,018); ClT/F = 0,68 (0,016) vs 0,90 (0,047); Vd/F = 3,32 (0,19) vs 9,52 (1,52); AUC0-24 ss INH = 146,36 (3,25) vs 111,96 (5,60); AUC0-24 ss Hz = 2,87 (0,07) vs 4,60 (0,09)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the hepatotoxicity effect, pharmacokinetic response and biotransformation of isoniazid of rats treated with i) isoniazid (INH), ii) INH + pyrazinamide (PYR) and iii) INH + PYR + rifampicin (RMP). Daily doses of the tuberculostatic drugs were administrated intragastrically to the animals (Wistar rats) for one period of 21 days as follow: INH (100mg/Kg) (group I), INH (100mg/Kg) + PYR (350mg/Kg) (group II), INH (100mg/Kg) + PYR (350mg/Kg) + RMP (100mg/Kg) (group III), PYR (350mg/Kg) (group IV) and sterile water (group V, control). The serum levels of the biomarkers aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) were determined before the administration of the drugs (basal) and after the 21 days treatments. On day 21, blood samples were obtained before and 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,5; 3; 6; 12 and 24 hours after the dose (five animals for each point). The blood samples were deproteinized with 10% trichloroacetic acid, derivazed by 1% cinnamaldehyde. For the determination of the acetylated metabolites acetylisoniazid (AcINH) and acetylhydrazine (AcHz) a previous hydrolysis with 6 M hydrochloride acid was performed. Then, the samples were centrifuged and the supernatant analyzed by liquid chromatograph. The results are presented as mean and SEM. The pharmacokinetic parameter of the INH and its metabolites AcINH and hydrazine (Hz) were compared between the groups (p < 0.05, Turkey’s test). The results significantly different were: Group INH vs Group INH+PYR: t1/2 = 1,4 (0,070) vs 1,0 (0,100); K = 0,51 (0,024) vs 0,77 (0,100); t1/2 = 3,4 (0,026) vs 7,2 (0,910); Kel = 0,21 (0,015) vs 0,10 (0,018); ClT/F = 0,68 (0,016) vs 0,90 (0,047); Vd/F = 3,32 (0,19) vs 9,52 (1,52); AUC0-24 ss (INH) = 146,36 (3,25) vs 111,96 (5,60); AUC0-24 ss (Hz) = 2,87 (0,07) vs 4,60 (0,09)... (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania spp que afetam 98 países. No Brasil, no ano de 2013, foram relatados 3.253 casos de leishmaniose visceral e 18.226 casos de Leishmaniose Tegumentar Americana. O tratamento de primeira escolha continua sendo realizado com antimoniais pentavalentes, e em casos de insucessos os fármacos de segunda escolha são a pentamidina e a anfotericina B. Tais medicamentos causam intensos efeitos adversos e ultimamente têm surgido cepas resistentes aos mesmos. Em áreas endêmicas têm sido cada vez mais comum o surgimento da co-infecção Leishmania com Mycobacterium tuberculosis. O tratamento para a tuberculose com pirazinamida (PZA) e isoniazida (INZ), controla a leishmaniose. Esses dados sugerem atividade anti-leishmania da PZA e da INZ. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade in vitro da INZ e da PZA e seus compostos derivados (série G e série R, respectivamente) sobre Leishmania (Viannia) braziliensis. As moléculas foram testadas em monocamadas de macrófagos peritoneais de camunongos infectados com L. (V) braziliensis durante 48h. Todas as moléculas testadas inibiram o índice de infecção de forma dose dependente em comparação aos controles. As moléculas da série R foram mais ativas do que a PZA, porém o resultado foi significativo somente para a R02 (p < 0,005). Apenas a molécula R05 (76,64M) foi relativamente tóxica para macrófagos. Os compostos mais ativos foram R02, G01 e G02, cujos índices de seletividade foram 14,31, 19 e 30, respectivamente. A dosagem de nitrito foi feita em sobrenadantes de monocamadas de macrófagos peritoniais infectados e tratados com as substâncias nas concentrações 10 e 100M. A G01 e a G02 estimularam a produção de NO2 nas duas concentrações, entretanto o resultado foi estatisticamente significativo para a G02 em 100M (p < 0,0001), a G05 só estimulou óxido nítrico na maior concentração. Todos os compostos da série R estimularam NO2, contudo, o resultado foi estatisticamente significativo para a R03 e R05 a 100M (p < 0,001). Adicionalmente, foi realizado uma análise preditiva in sílico de parâmetros farmacocinéticos das moléculas mais ativas in vitro, utilizando o software admetSAR. Os dados obtidos mostraram que de forma semelhante às suas moléculas originais a G01, G02 e R02 apresentaram alta capacidade de serem absorvidas pelo trato gastrointestinal, baixo potencial hepatotoxico e carcinogênico. Juntos, esses dados demonstram que essas moléculas são seletivamente tóxicas para o parasito com potencial para serem testadas pela via oral em estudos em modelo experimental de infecção. / Leishmaniasis are a group of diseases caused by protozoan of genus Leishmania spp affecting of 98 countries. In Brazil, in the year 2013 were 3.253 reported cases of visceral leishmaniasis and 18.226 cases of cutaneous leishmaniasis. The first choice of treatment is still performed with pentavalent antimonials and in cases of failures drugs of second line of treatment are pentamidine and anfotericin B. These drugs cause many adverse effects and has lately emerged resistant strains. In endemic areas it has been increasingly common the appearance of co-infection Leishmania and Mycobacterium tuberculosis. The treatment of tuberculosis with pyrazinamid and isoniazid control the leishmaniasis.The aim of this study was evaluate the anti-leishmania activity in vitro of INZ and PZA and yours derivatives compounds (serie G and serie R,respectively) on the Leishmania (Viannia) braziliensis. The molecules were tested on infected monolayers of peritoneal murine macrophages for 48h. All the molecules te inhibited the infection index in a dose-dependent manner in relation to controls. The molecules of the R series were more active than PZA, but the result was only significant for R02 (p < 0,005). Only R05 (CC50 = 76,64M) was relatively toxic to macrophages. The most active compounds were R02, G01 and G02 whose select index were 14,31, 19 and 30, respectively. Nitrite assay was performed in supernatants of infected monolayers of peritonial macrophages treated with the substancies at 10 and 100M. G01 and G02 stimulated NO2 prodution, however, the result was only statistically significant for G02 at 100M (p < 0,001). All the compounds of R serie stimulated NO2 production however the results were statistically significant for the R03 and R05 at 100M (p < 0,001). Additionally, a in silico preditive pharmacokinetic analysis was performed to active molecules using the admetSAR software the data showed that G01, G02 and R02 were similar to their original molecules as to high capacity to be absorbed by the gastrointestinal tract, low hepatotoxic and carcinogenic potencial. Together, these data demonstrate that these molecules are selectively toxic to the parasite with the potencial to be tested orally on studies in experimental infection.