Leishmanioses são um complexo de doenças infecciosas causadas por protozoários intramacrofágicos do gênero Leishmania, fatal se não tratadas adequadamente. Os antimoniais pentavalentes são os medicamentos de primeira escolha para o tratamento, apesar de sua toxicidade e seu mecanismo de ação pouco esclarecido. Uma terapia mais eficaz pode ser conseguida pelo direcionamento de fármacos antileishmania para os locais de infecção. Os lipossomas são vesículas lipídicas que promovem melhora na eficácia e na ação de fármacos na célula alvo. Os lipossomas são capturados preferencialmente pelas células do sistema mononuclear fagocitário (SMF). O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de antimoniato de meglumina lipossomal, constituído por fosfatidilserina e estudar sua farmacocinética em animais sadios para esclarecer seu metabolismo e distribuição. As análises quantitativas de antimônio em lipossomas demonstram que Análise por Ativação Neutrônica foi a técnica mais sensível com cerca de 100 % de precisão. Todas as formulações de lipossomas apresentaram um tamanho de diâmetro médio de 150 nm. A determinação da CE50 em macrófagos infectados mostrou que as formulações de antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas foram entre 10 - 63 vezes mais eficazes do que a fármaco livre, indicando maior índice de seletividade. Por microscopia de fluorescência, foi verificada uma maior internalização de lipossomas fluorescentes em macrófagos infectados durante um curto tempo de incubação em comparação com macrófagos não infectados. A biodistribuição do antimoniato de meglumina irradiado encapsulado em lipossomas contendo fosfatidilserina mostrou que a formulação lipossomal promoveu um direcionamento seletivo do antimônio para tecidos do SMF, além do que manteve as doses elevadas nos órgãos por um período prolongado. Em conclusão, estes dados sugerem que o antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas apresentou maior eficácia do que a fármaco não lipossomal contra a infecção por Leishmania. O desenvolvimento de formulações lipossomais pode ser uma nova alternativa para a quimioterapia de doenças infecciosas, especialmente Leishmanioses, já que são usados como sistemas carreadores para entrega sustentada e direcionada de fármacos ao local da infecção. / Leishmaniases are a complex of parasitic diseases caused by intramacrophage protozoa of the genus Leishmania, and is fatal if left untreated. Pentavalent antimonials, though toxic and their mechanism of action being unclear, remain the first-line drugs for treatment. Effective therapy could be achieved by delivering antileishmanial drugs to these sites of infection. Liposomes are phospholipid vesicles that promote improvement in the efficacy and action of drugs in target cell. Liposomes are taken up by the cells of mononuclear phagocytic system (MPS). The purpose of this study was to develop a preparation of meglumine antimoniate encapsulated in liposomes of phosphatidylserine and to study its pharmacokinetic in healthy mice to establish its metabolism and distribution. Quantitative analysis of antimony from liposomes demonstrated that Neutron Activation Analysis was the most sensitive technique with almost 100 % of accuracy. All liposome formulations presented a mean diameter size of 150 nm. The determination of IC50 in infected macrophage showed that liposome formulations were between 10 63 fold more effective than the free drug, indicating higher selectivity index. By fluorescence microscopy, an increased uptake of fluorescent-liposomes was seen in infected macrophages during short times of incubation compared with non-infected macrophages. Biodistribution studies showed that meglumine antimoniate irradiated encapsulated in liposomes of phosphatidylserine promoted a targeting of antimony for MPS tissues and maintained high doses in organs for a prolonged period. In conclusion, these data suggest that meglumine antimoniate encapsulated in liposomes showed higher effectiveness than the non-liposomal drug against Leishmania infection. The development of liposome formulations should be a new alternative for the chemotherapy of infection diseases, especially Leishmaniasis, as they are used to sustain and target pharmaceuticals to the local of infection.

Anacorese é o fenômeno pelo qual microrganismos circulantes, corantes, pigmentos, substâncias metálicas, proteínas estranhas e outros materiais são fixados em áreas circunscritas de inflamação. Objetivando verificar anacorese em região periapical, 104 raízes de dentes de quatro cães foram tratadas endodonticamente com cimento de óxido de zinco e eugenol, metade delas obturadas no limite canal-dentina-cemento e as demais sobreobturadas. Após 120 dias do tratamento endodôntico, bacteremia experimental foi induzida pela inoculação endovenosa de 4ml de uma suspensão de 5.106UFC/ml de Streptococcus pyogenes com diferentes marcadores de resistência a antimicrobianos. O sacrifício dos animais ocorreu 48 horas e 30 dias após a inoculação bacteriana. A análise microbiológica dos tecidos periapicais, evidenciou a presença do microrganismo inoculado 48 horas após a bacteremia, mas não após 30 dias. Cortes microscópicos evidenciaram bactérias, morfologicamente semelhantes às inoculadas, em 46,88% dos casos para o período de 48 horas e outros microrganismos em 28,12% após 30 dias, sendo que algumas sugerem morfologicamente as inoculadas, distribuídas pelo canal cementário, delta apical, periodonto apical e lateral em ambos os períodos. Em dois animais, detectou-se também a presença da Leishmania sp. O periápice de dentes tratados endodonticamente mostrou-se propício à anacorese, independentemente do nível de obturação. Esses microrganismos podem persistir ou colaborar com a colonização da região por outras espécies mais sensíveis. O modelo experimental mostrou-se adequado para o estudo de anacorese. / Anachoresis is that phenomenon by which blood-borne bacteria, dyes, pigments, metallic substances, foreign proteins and other materials are attracted to, and fixed in, circumscribed areas of inflammation. This study evaluated the occurrence of anachoresis in the periapical region. 104 roots from four dogs where endodontically treated and root canals filled with zincoxide-eugenol cement. 50% where filled until the CDC limit and the others overfilled. 120 days after root canal treatment, a experimental bacteremia was induced by means of intravenous inoculation of a Streptococcus pyogenes culture containing 5.106CFU/ml. Inoculated bacteria presented several antimicrobial resistance markers. The euthanasia of dogs was conducted 48 hours and 30 days after the bacteremia. Microbial processing of periapical tissues evidenced the presence of inoculated microorganisms at 48 hours specimens but not at 30 days samples. Microscopic analysis had evidenced similarity between bacterias of the tissues and the inoculated strain in 46,88% of the specimens after 48 hours and other microorganisms in 28,12% after 30 days. Some of these cocci have shown morphological similarities to the inoculated bacterias. They were localized in the cementary canal, apical delta, lateral and apical periodontium in both periods of time. Leishmania sp. was also detected in two dogs. Endodontically treated periapices seemed to be propitious for anachoresis and it was not any relation between the phenomena and root canal filling level. Microorganisms might persist in periapical region and/or collaborate to this tissues colonization by other more sensitive species. The experimental pattern seemed to be adequate for the a nachoresis study

A leishmaniose é uma doença tropical negligenciada que afeta milhares de pessoas podendo até levar a óbito em sua forma visceral. Durante o seu ciclo de vida, o parasita passa por diversas mudanças ambientais como mudança de temperatura e pH, principalmente quando da transfecção do inseto vetor para o hospedeiro mamífero. Tais mudanças geram estresse celular que pode levar proteínas ao enovelamento incorreto assim como a processos agregativos, sendo necessários sistemas de controle de qualidade proteico para manter a homeostase celular, do qual fazem parte as chaperonas moleculares. Chaperonas como a Hsp100, ajudam a manter a homeostase celular e a adaptação desempenhando um papel importante para protozoários como a Leishmania braziliensis, causador da leishmaniose. A Hsp100 tem papel desagregase, atuando com outras chaperonas moleculares para a extração de polipeptídios de agregados proteicos possibilitando seu desenovelamento e posterior reenovelamento, evitando seu efeito tóxico sobre a célula. A Hsp100 parece ser essencial para esses microrganismos, no entanto não há muito dados disponíveis para Hsp100 em Leishmania sp. e Plasmodium sp. Neste trabalho está descrito o protocolo para expressão e purificação da Hsp100 recombinante de L. braziliensis (rLbHsp100), assim como sua caracterização estrutural e funcional inicial in vitro. A proteína foi analisada por espectropolarimetria de dicroísmo circular, apresentando estrutura típica de proteínas ricas em hélices α, a fluorescência estática de triptofano demonstrou que a proteína possui estrutura terciária local com seus triptofanos parcialmente expostos ao solvente. Por cromatografia de exclusão molecular analítica, observou-se que a LbHsp100 se comporta como um oligômero cujo estado é influenciado tanto pela concentração proteica como pela presença de nucleotídeos adenosina. Análises por ultracentrifugação analítica evidenciaram que a rLbHsp100 em solução apresenta um equilíbrio de diversas espécies havendo deslocamento para um hexâmero de maneira concentração dependente. Análises de SAXS confirmaram a estrutura hexamérica e proporcionaram a obtenção de um modelo ab initio da proteína. Através de microscopia eletrônica de transmissão pode-se observar a forma toróide e a dispersividade do sistema. Por fim, atestou-se que a proteína foi obtida funcional com fraca atividade ATPásica, apresentando também interações com nucleotídeos adenosina (ATP e ADP) assim como com a suramina. / Leishmaniasis is a neglected tropical disease that affects thousands of people and may even lead to death in its visceral form. During its life cycle, the parasite undergoes several environmental changes such as temperature and pH changes, especially when transfecting from the vector insect into the mammalian host. Such changes generate a cellular stress that can lead to misfolding as well as to aggregative processes, therefore a protein quality control system is necessary to maintain cell homeostasis, which includes molecular chaperones. Chaperones such as Hsp100 can help maintain cellular homeostasis and adaptation playing an important role for protozoa such as Leishmania braziliensis, which causes leishmaniasis. The Hsp100 has a disaggregase action, acting with other proteins of the chaperone system to extract polypeptides from protein aggregates, allowing their unfolding and subsequent refolding, avoiding their toxic effect on the cell. Hsp100 appears to be essential for these microorganisms, however there is not much data available for Hsp100 in Leishmania sp. and Plasmodium sp. This work describes the protocol for expression and purification of the recombinant Hsp100 of Leishmania braziliensis (rLbHsp100), as well as its initial in vitro characterization. The protein was analyzed by circular dichroism spectropolarimetry, presenting a typical structure of ?-helix rich protein as well as a concentration-dependent structure gain, static fluorescence of tryptophan demonstrated that the protein has local tertiary structure with its tryptophans partially exposed to the solvent. Analytical size exclusion chromatography showed that LbHsp100 behaves as an oligomer whose state is influenced by both the concentration and the presence of adenosine nucleotides. Analysis by analytical ultracentrifugation has shown that the rLbHsp100 in solution exhibits an equilibrium of several species shifting towards a hexamer in a concentration dependent manner. SAXS analyzes confirm the hexameric structure and had provide an ab initio model for the protein. Transmission electron microscopy shows the toroidal form and dispersivity of the system. Finally, the obtained protein had showed catalytic function, and also interacted with adenosine nucleotides (ATP and ADP) as well as suramine.

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2016-09-22T19:18:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016ErisnaldoFranciscoReis.pdf: 6362059 bytes, checksum: 41ab88e944ed632f788260a00b05a912 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2016-09-29T19:23:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016ErisnaldoFranciscoReis.pdf: 6362059 bytes, checksum: 41ab88e944ed632f788260a00b05a912 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-29T19:23:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016ErisnaldoFranciscoReis.pdf: 6362059 bytes, checksum: 41ab88e944ed632f788260a00b05a912 (MD5) Previous issue date: 2016-09 / Esta dissertação se refere a uma pesquisa qualitativa que teve como objetivo analisar as implicações do uso da Modelagem Matemática nos processos de ensino e de aprendizagem envolvendo o tema leishmaniose. O aporte teórico seguiu as concepções de pesquisadores que trazem a relação Biologia/Matemática e daqueles que estudam a Modelagem Matemática. Dentre os vários estudiosos da Modelagem Matemática, foram seguidas as ideias do pesquisador Burak. Durante a pesquisa, o intuito foi apresentar um ensino que estivesse mais próximo da realidade dos alunos, para que eles percebessem o significado daquilo que estudam, para as suas vidas. Para tanto, foram realizados quinze encontros em que os alunos fizeram um estudo da leishmaniose no município de Rubim-MG, relacionando a disciplina Biologia e a disciplina Matemática. O processo de Modelagem Matemática ocorreu por meio das atividades realizadas e a relação Biologia/Matemática foi visível. Ficou constatado que atividades realizadas fora do ambiente da sala de aula e recurso tecnológico como ferramenta de apoio, os alunos mostram-se entusiasmados e trabalham sem reclamações. Com as atividades emergiram conteúdos matemáticos, tais como: gráficos, regra de três, teoria dos conjuntos e porcentagem. Os resultados apontaram ainda, que ao utilizar a Modelagem Matemática na sala de aula, os alunos interagem, se motivam a aprender e os conteúdos passam a ter significado. Por meio da utilização desta metodologia, há condições de discutir, propor análises e reflexões relacionadas com a realidade cotidiana dos alunos, de modo que esta realidade possa ser trazida para a sala de aula em Biologia, em Matemática ou em qualquer outra disciplina. / This dissertation refers to a qualitative research that aimed to analyze the implications of the use of Mathematical Modeling in the teaching and learning processes involving the theme of leishmaniasis. The theoretical contribution followed the conceptions of researchers who bring the Biology/Mathematical relationship and those who study the Mathematical Modeling. Among the many scholars of Mathematical Modeling, were followed the ideas of the researcher Burak. During the research the aim was to introduce a teaching that was closer to the reality of the students, so that they realize the significance of what they study for their lives. To do so, were held 15 meetings in which students did a study of leishmaniasis in the municipality of Rubim-MG, relating the discipline Biology and Mathematics discipline. The process of mathematical modeling occurred through the activities carried out and the relationship Biology / Mathematics was visible. It was found that activities outside of the classroom environment and using technological resources as a support tool, students show up enthusiastic and work without complaints. With the activities emerged mathematical content, such as graphics, rule of three, set theory and percentage. The results show that when using the Mathematical Modeling in the classroom, students interact, if motivate learning and contents are meaningless. Through the use of this methodology, there are conditions of discussing, proposing analysis and reflections related to the everyday reality of the students, so that this fact can be brought into the classroom in Biology, in Mathematics or in any other discipline.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2016. / Introdução: As leishmanioses representam um conjunto de doenças infecciosas, sendo transmitidas principalmente pela picada de flebotomíneos fêmeas infectadas. Uma das medidas de controle dessas enfermidades trata-se do controle de vetores por meio de inseticidas químicos. Apesar das contínuas e intensivas campanhas de controle contra os flebotomíneos poucos estudos têm sido realizados para detectar mudanças na suscetibilidade de populações desses insetos. Objetivo: Caracterizar o perfil de suscetibilidade de populações naturais de flebotomíneos ao piretróide alfacipermetrina. Método: Flebotomíneos de seis municípios brasileiros e espécimes de laboratório classificados como “Linhagem Referência de Suscetibilidade” (LRS) foram avaliados pelo método de garrafas do Centro de Controle e Prevenção de Doenças para diferentes dosagens (3 ug/ml, 5 ug/ml, 7 ug/ml e 9 ug/ml) do inseticida alfacipermetrina. Acetona foi utilizada como controle. Resultados: Ao todo 2.198 flebotomíneos foram utilizados nos bioensaios. A espécie Lutzomyia longipalpis foi a mais capturada em todos os municípios. A dose ideal para diagnóstico nas alterações de suscetibilidade ao inseticida alfacipermetrina foi de 2,38 ug/ml. As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier apontaram que as populações de flebotomíneos de Montes Claros e Paracatu possuem maior tolerância a inseticidas, seguida da população de Pirenópolis, Unaí, Januária e Belo Horizonte. O tempo diagnóstico variou conforme as concentrações do inseticida sendo de 40 minutos para a dosagem de 9 ug/ml, 50 minutos para a dosagem de 7 ug/ml, 60 minutos para a dosagem de 5 ug/ml e 70 minutos para a dosagem de 3 ug/ml. Conclusões: As populações de flebotomíneos oriundas dos municípios de Unaí, Paracatu, Belo Horizonte, Pirenópolis, Montes Claros e Januária, assim como a LRS apresentaram alterações nos perfis de suscetibilidade ao piretróide alfacipermetrina. / Introdution: Leishmaniases are a group of infectious diseases primarily transmitted by infected females of phlebotomine sand flies. Chemical insecticides are one of the control measures of these diseases used against vectors. Despite of the continuous and intensive control campaigns few studies have been carried out to detect changes in the susceptibility of sand flies by insecticides. Objective: Characterize the susceptibility profile of populations of sand flies to alphacypermetrin pyrethroid. Methods: Sand flies caught in six Brazilian municipalities and specimens of laboratory classified as Susceptibility Reference Lineage (SRL) were evaluated using CDC bottles trough different concentrations of alphacypermetrin (3 ug/ml, 5 ug/ml, 7 ug/ml and 9 ug/ml). Acetone P.A was used as control. Results: A total of 2,198 sand fly specimens were used in bioassays and Lutzomyia longipalpis was the species most caught in all municipalities. The ideal dose for diagnosing the susceptibility changes to alfacipermetrina insecticide was 2.38 ug / ml. Kaplan-Meier survival curves showed that sand flies of Montes Claros and Paracatu municipalities had major tolerance by alphacypermetrin, then specimens of Pirenópolis, Unai Januária, and Belo Horizonte. Diagnosis time varied according to the insecticides concentrations: 40 minutes for 9 ug/ml, 50 min. for 7 ug/ml, 60 min. for 5 ug/ml and 70 min. for 3 ug / ml. Conclusions: Sand fly populations of the municipalities of Unaí, Paracatu, Belo Horizonte, Pirenópolis, Montes Claros and Januária, as well as the SRL specimens showed changes in susceptibility profiles, indicating tolerance a alphacypermetrin.

Orientador: Rosângela Gonçalves Peccinini / Resumo: Estudos precoces de ADME podem agilizar o processo de desenvolvimento de novos fármacos, selecionando os mais promissores para futuros estudos farmacocinéticos. Nesse sentido, e considerando a necessidade de novos tratamentos para a leishmaniose visceral e para a tripanossomíase americana, as moléculas LINS03006, LINS03011 e LINS03013 com ação sobre o Trypanosoma cruzi e a Leishmania infantum foram desenvolvidas por pesquisadores da UNIFESP/Diadema. O presente trabalho teve como objetivo realizar estudos físico-químicos e de ADME para a seleção das moléculas LINS mais promissoras para futuros estudos in vivo. Métodos analíticos e bioanalíticos por UHPLC/UV foram desenvolvidos para a quantificação dos compostos nos ensaios realizados. Foram realizados estudos de estabilidade química em diferentes pHs (1,2; 7,4 e 8,8), estabilidade metabólica em microssomos de rato e humano, estabilidade ex vivo, coeficientes de partição (log P) e permeabilidade em células Caco-2. Os compostos apresentaram estabilidade de até 24 horas em todos os pHs avaliados, levando à expectativa de que na administração oral não ocorrerá degradação decorrente do pH estomacal, sanguíneo e duodenal. O estudo em plasma de rato resultou, para todos os compostos, estabilidade em tempo suficiente – ao menos 6 horas – com expectativa de que ocorra efeito in vivo. Nos estudos de logP, os compostos apresentam características lipofílicas, favorecendo a permeabilidade e o clearance hepático. No ensaio de permeabilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Early studies of ADME can speed up the development of new drugs, selecting the most promising for future pharmacokinetic studies. In this sense, and considering the need for new treatments for visceral leishmaniasis and american trypanosomiasis, the molecules LINS03006, LINS03011 and LINS03013 with action on Trypanosoma cruzi and Leishmania infantum were developed by researchers from UNIFESP/Diadema. The present work aimed to perform physical-chemical and ADME studies to select the most promising LINS molecules for future in vivo studies. Analytical and bioanalytical methods by UHPLC/UV were developed for the quantification of compounds in the assays performed. Chemical stability studies were performed at different pHs (1.2, 7.4 and 8.8), metabolic stability in rat and human microsomes, ex vivo stability, partition coefficients (log P) and permeability in Caco-2 cells. The compounds exhibited stability of up to 24 hours in all evaluated pHs, leading to the expectation that oral degradation will not occur due to stomach, blood and duodenal pH. The study in rat plasma resulted, for all compounds, stability in sufficient time - at least 6 hours - with the expectation that in vivo effect would occur. In logP studies, the compounds presented lipophilic characteristics, favoring permeability and hepatic clearance. In the permeability assay, the LINS compounds presented Papp > 5.0xE-06 cm/s, which can be classified as medium or high permeability, thus, there is an expectation of abs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Coorientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: Maria Cecilia Rui Luvizotto / Banca: Juliana Giantomassi Machado / Banca: Simone Baldini Lucheis / Banca: Lisiane Almeida Martins / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar a resposta humoral, a carga parasitária e os aspectos histopatológicos presentes no fígado em camundongos BALB/c experimentalmente infectados por L. (L.) chagasi e imunossuprimidos. 96 camundongos foram subdivididos em quatro grupos: controle (I) - sem tratamento; imunossuprimidos (II) - tratamento com dexametasona (DXM) e pentoxifilina (PTX); infectado (III) - infecção por L (L.) chagasi e infectados e imunossuprimidos (IV) - infecção por L (L.) chagasi e tratados com DXM e PTX. O dia de infecção foi considerado como o dia zero e a imunossupressão ocorreu 60 dias pós-infecção. As amostras foram obtidas de cada grupo, em momentos distintos 15, 30, 60, 75 e 90 dias pós-infecção, em que se coletou sangue total, para detecção de IgG1 e IgG2a pelo ensaio imunoenzimático (ELISA), fragmentos de baço e fígado, para detecção da carga parasitária pela técnica de microtitulação em cultura e fragmentos de fígado para o exame histopatológico. Houve diferença significativa na produção das imunoglobulinas e IgG1 foi à subclasse de imunoglobulina mais produzida pelos grupos (P < 0,0001). Quando comparadas a subclasses de imunoglobulinas dentro do mesmo grupo, IgG1 também apresentou médias maiores de produção nos grupos III e IV (P = 0,014 e P = 0,009). E quando se considera o momento, não houve diferenças significativas entre IgG1 e IgG2a. Aos 90 dias pós-infecção foram encontradas diferenças significativas entre as médias de produção de IgG1 e IgG2a, entre os grupos III e IV e o grupo III produziu mais as duas subclasses (P = 0,02). Nos momentos 75 e 90 dias pós-infecção houve produção maior de IgG1 e IgG2a. O Grupo IV apresentou maior carga parasitária (P < 0,005). A carga parasitária no fígado foi mais elevada 15 e 30 dias pós-infecção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the humoral response, the parasite load and liver histopathological features in BALB/c experimentally infected by L. (L.) chagasi and immunosuppressed Ninety-six mice divided into four groups: control (I) - no treatment; immunosuppressed (II) - Treatment with dexamethasone (DXM) and pentoxifylline (PTX), infected (III) - infection by L. (L.) chagasi and infected and immunosuppressed (IV) - infection by L (L.) chagasi and treated with PTX and DXM. The days of infection was considered as day zero and immunosuppression occurred 60 days post-infection. Samples were obtained from each group at different times 15, 30, 60, 75 and 90 days post-infection, which collected whole blood for detection of IgG1 and IgG2a by test immunoassay (ELISA), fragments of spleen and liver, to detect the parasite load in the technique microtiter culture and fragments of liver for histopathology. Significant differences in production of immunoglobulins, IgG1 was the subclass immunoglobulin produced by most groups (P<0.0001). When comparing the immunoglobulin subclasses within the same group, IgG1 also showed higher average production in groups III and IV (P=0.014 and P=0.009). When one considers the time, there were no significant differences between IgG1 and IgG2a. At 90 days post-infection were significant differences between the means of production of IgG1 and IgG2a between group III and IV and group III produced over the two subclasses (P=0.02). In periods of 75 and 90 days post-infection there was increased production of IgG1 and IgG2a. Group IV showed a higher parasite load (P <0.005). The parasite load in the liver was higher 15 and 30 days post-infection and 60 post-infection in spleen (P = 0.0001, P = 0.004, P=0.01), regardless of group. Considering the group IV, 15 days post-infection... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Daniel Cortes Beretta / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Resumo: Os cães infectados pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi podem ou não apresentar sinais clínicos dessa zoonose e são a principal fonte de infecção para o homem. A pele é o primeiro órgão infectado pelo parasito na LVC. As enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) atuam na degradação da matriz extracelular (MEC) e na modulação da resposta inflamatória, frente a vários tipos de injúrias. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9, por meio da técnica de imuno-histoquímica e zimografia na pele de cães naturalmente acometidos por LVC e comparar estes resultados com a imunodetecção das citocinas TNF- e TGF- e do protozoário Leishmania, com as possíveis alterações da matriz extracelular dermal. A alteração da composição de fibras colágenas da derme foi avaliada pela coloração PicroSirius. O método foi usado para diferenciar fibras colágenas dos tipos I e III, nas regiões do focinho, orelha e abdômen. A carga parasitária, intensidade de inflamação e a produção de MMP 2 e 9 foram maiores nas regiões cutâneas da orelha e focinho. Os macrófagos, linfócitos e plasmócitos predominaram no infiltrado inflamatório da derme superficial, formando granulomas, associados a degradação do colágeno maduro (tipo I) e a discreta deposição de colágeno jovem (tipo III), com maior intensidade nos cães com elevada carga parasitária cutânea. O TGF-β foi detectado nos três grupos de cães infectados (assintomático, oligossintomático e sintomático), sem diferenças significativas entre eles. O TNF-α não foi detectado na maioria dos animais infectados e no grupo controle. Conclui-se que quanto maior a carga parasitária e a intensidade de inflamação na pele, maior a degradação do colágeno maduro, produção de MMPs 2 e 9 e produção de TGF-β. A MMP-9 ativa poderia ser utilizada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi may or may not show clinical signs of the zoonosis and they are the main source of infection for man. The skin is the first organ infected by the parasite in the LVC. The enzyme matrix metalloproteinases (MMPs) act on the degradation of extracellular matrix (ECM) and in the inflammatory response modulation against many kinds of injuries. The aim of this study was to evaluate the expression of MMP-2 and MMP-9 by immuno-histochemistry and zymography in the skin of dogs naturally affected by LVC and the immunodetection of TNF- and TGF- and of Leishmania and compare these results with the possible alterations of dermal extracellular matrix. The method was used to differentiate collagen fibers in the dermis was evaluated by Picrosirius red staining to differentiate collagen types I and III, in regions of the nose, ear and abdomen. The parasite load, intensity of inflammation, increased production of MMP 2 and 9 were higher in regions of the ear and muzzle. Macrophages, lymphocytes and plasma cells predominated in the inflammatory infiltrate of the superficial dermis, forming granulomas, associated with degradation of mature collagen (type I) and the discrete deposition of the young collagen (type III), with greater intensity in dogs with high parasite load skin. The TGF-β was detected in all groups of infected dogs (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic), no significant differences among them. The TNF-α was not detected in most infected animals and the control group. It follows that the greater is the intensity of parasitic load and inflammation of the skin, the greater is the degradation of mature collagen, the production of MMPs and 2 and 9, production of TGF-β. Active MMP-9 could be used as a marker of inflammation in infected dogs. This profile of the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Leishmanioses são um complexo de doenças infecciosas causadas por protozoários intramacrofágicos do gênero Leishmania, fatal se não tratadas adequadamente. Os antimoniais pentavalentes são os medicamentos de primeira escolha para o tratamento, apesar de sua toxicidade e seu mecanismo de ação pouco esclarecido. Uma terapia mais eficaz pode ser conseguida pelo direcionamento de fármacos antileishmania para os locais de infecção. Os lipossomas são vesículas lipídicas que promovem melhora na eficácia e na ação de fármacos na célula alvo. Os lipossomas são capturados preferencialmente pelas células do sistema mononuclear fagocitário (SMF). O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de antimoniato de meglumina lipossomal, constituído por fosfatidilserina e estudar sua farmacocinética em animais sadios para esclarecer seu metabolismo e distribuição. As análises quantitativas de antimônio em lipossomas demonstram que Análise por Ativação Neutrônica foi a técnica mais sensível com cerca de 100 % de precisão. Todas as formulações de lipossomas apresentaram um tamanho de diâmetro médio de 150 nm. A determinação da CE50 em macrófagos infectados mostrou que as formulações de antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas foram entre 10 - 63 vezes mais eficazes do que a fármaco livre, indicando maior índice de seletividade. Por microscopia de fluorescência, foi verificada uma maior internalização de lipossomas fluorescentes em macrófagos infectados durante um curto tempo de incubação em comparação com macrófagos não infectados. A biodistribuição do antimoniato de meglumina irradiado encapsulado em lipossomas contendo fosfatidilserina mostrou que a formulação lipossomal promoveu um direcionamento seletivo do antimônio para tecidos do SMF, além do que manteve as doses elevadas nos órgãos por um período prolongado. Em conclusão, estes dados sugerem que o antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas apresentou maior eficácia do que a fármaco não lipossomal contra a infecção por Leishmania. O desenvolvimento de formulações lipossomais pode ser uma nova alternativa para a quimioterapia de doenças infecciosas, especialmente Leishmanioses, já que são usados como sistemas carreadores para entrega sustentada e direcionada de fármacos ao local da infecção. / Leishmaniases are a complex of parasitic diseases caused by intramacrophage protozoa of the genus Leishmania, and is fatal if left untreated. Pentavalent antimonials, though toxic and their mechanism of action being unclear, remain the first-line drugs for treatment. Effective therapy could be achieved by delivering antileishmanial drugs to these sites of infection. Liposomes are phospholipid vesicles that promote improvement in the efficacy and action of drugs in target cell. Liposomes are taken up by the cells of mononuclear phagocytic system (MPS). The purpose of this study was to develop a preparation of meglumine antimoniate encapsulated in liposomes of phosphatidylserine and to study its pharmacokinetic in healthy mice to establish its metabolism and distribution. Quantitative analysis of antimony from liposomes demonstrated that Neutron Activation Analysis was the most sensitive technique with almost 100 % of accuracy. All liposome formulations presented a mean diameter size of 150 nm. The determination of IC50 in infected macrophage showed that liposome formulations were between 10 63 fold more effective than the free drug, indicating higher selectivity index. By fluorescence microscopy, an increased uptake of fluorescent-liposomes was seen in infected macrophages during short times of incubation compared with non-infected macrophages. Biodistribution studies showed that meglumine antimoniate irradiated encapsulated in liposomes of phosphatidylserine promoted a targeting of antimony for MPS tissues and maintained high doses in organs for a prolonged period. In conclusion, these data suggest that meglumine antimoniate encapsulated in liposomes showed higher effectiveness than the non-liposomal drug against Leishmania infection. The development of liposome formulations should be a new alternative for the chemotherapy of infection diseases, especially Leishmaniasis, as they are used to sustain and target pharmaceuticals to the local of infection.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-03-20T14:23:49Z No. of bitstreams: 1 DIS_CATIELI_GOBETTI_LINDHOLZ_COMPLETO.pdf: 610881 bytes, checksum: 802c9e980339f9212a7fbe652acc4378 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T14:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_CATIELI_GOBETTI_LINDHOLZ_COMPLETO.pdf: 610881 bytes, checksum: 802c9e980339f9212a7fbe652acc4378 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / The Leishmaniasis is a complex of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania spp., observed in the promastigote forms (flagellated, extracellular) in invertebrate hosts, and amastigote forms (no scourge, intracellular required) in vertebrates. Nowadays, these diseases are distributed in 88 countries in the Americas, Africa, India, Asia and the Mediterranean. According to the World Health Organization, 500.000 and 1.5 million new cases, respectively of Visceral Leishmaniasis and Cutaneous Leishmaniasis occur annually, and considered one of the infectious and parasitic diseases of major global impact. Transmitted at the moment the blood feeding by the female sandflies (Diptera: Psychodidae), Leishmaniasis is the shown to expand in all regions of Brazil, placing the country among the five most affected in the world. In Brazil, many studies have been carried out to elucidate the species responsible for the transmission of Leishmania spp., and consequently, prescribe important areas of to public health. However, these approaches are uncommon in the Rio Grande do Sul state. This study aimed to investigate the sandfly species occurring in a rural area in Itapu? district, city of Viam?o, metropolitan region of Porto Alegre, and verify the presence of DNA of Leishmania spp. in captured females. The collections were carried out with CDC light traps in intradomicile, peridomicile and forest remnants to verify possible population or species differences among the sites. The captures occurred for three consecutive nights, from May 2013 to April 2014. The sandflies were identified and females were grouped in pools of five animals each, according to the species. A total of 516 phlebotomines were captured, pertaining belonging to the Lutzomyia neivai (37.2%), Lutzomyia migonei (34.5%), Lutzomyia fischeri (21.7%), and Lutzomyia lanei (6.5%). For DNA extraction, 245 females were used. Fragments of 120 bp of conserved region of Leishmania kinetoplast were amplified from samples of Lutzomyia neivai, L. fischeri and L. migonei. / As Leishmanioses s?o um complexo de doen?as causadas por protozo?rios do g?nero Leishmania spp., observados nas formas promastigota (flagelada, extracelular) nos hospedeiros invertebrados, e forma amastigota (aus?ncia de flagelo, intracelular obrigat?rio) nos vertebrados. Atualmente, estas doen?as encontram-se distribu?das em 88 pa?ses nas Am?ricas, ?frica, ?ndia, ?sia e Mediterr?neo. Segundo a Organiza??o Mundial da Sa?de (OMS), estima-se que 500 mil novos casos de Leishmaniose Visceral (LV) e 1,5 milh?es de novos casos de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) ocorram anualmente, sendo considerada uma das doen?as infecto-parasit?rias de maior incid?ncia mundial. Transmitidas no momento do repasto sangu?neo pelas f?meas de flebotom?neos (Diptera: Psychodidae), as Leishmanioses se mostram em expans?o em todas as regi?es brasileiras, colocando o pa?s entre os cinco mais afetados no mundo. No Brasil, muitas pesquisas t?m sido desenvolvidas no intuito de esclarecer as esp?cies respons?veis pela transmiss?o de Leishmania spp., e consequentemente, apontar ?reas de import?ncia ? sa?de p?blica. A LTA chegou a capital do RS em 2002 e ainda s?o escassos os estudos de esp?cies transmissoras neste Estado. Este estudo teve como objetivo investigar as esp?cies de flebotom?neos ocorrentes em uma localidade rural no distrito de Itapu?, munic?pio de Viam?o, regi?o metropolitana de Porto Alegre, e verificar, a presen?a de DNA de Leishmania spp. nas f?meas capturadas. As capturas foram realizadas com armadilhas luminosas tipo CDC (Center for Diseases Control) em ambiente intradomiciliar, peridomiciliar e mata, a fim de verificar poss?veis diferen?as populacionais e/ou espec?ficas entre os locais. As capturas ocorreram durante tr?s noites consecutivas, no per?odo de Maio de 2013 a Abril de 2014. Os flebotom?neos coletados foram identificados taxonomicamente e as f?meas foram agrupadas em pools de cinco indiv?duos cada, de acordo com esp?cie. Um total de 516 flebotom?neos foi capturado, pertencentes ?s esp?cies Lutzomyia neivai (37,2%), Lutzomyia migonei (34,5%), Lutzomyia fischeri (21,7%), e Lutzomyia lanei (6,5%). Para extra??o de DNA foram utilizadas 245 f?meas. Foram amplificados fragmentos de 120 pares de bases referentes ? regi?o conservada do kDNA de Leishmania em amostras de Lutzomyia neivai, Lutzomyia fischeri e Lutzomyia migonei.