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FERNANDES, Camila. Aumento da frequência de células T regulatórias CD4+ CD25+ FOXP3 high e com CD8+ CD25+ FOXP3high em pacientes menores de 15 anos com hanseníase multibacilar. 2013. 92 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica ) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-17T15:36:30Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_cfernandes.pdf: 2771950 bytes, checksum: 5cdf0fffe2babc36cf1e1e546cb73d99 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-20T12:41:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_cfernandes.pdf: 2771950 bytes, checksum: 5cdf0fffe2babc36cf1e1e546cb73d99 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T12:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_cfernandes.pdf: 2771950 bytes, checksum: 5cdf0fffe2babc36cf1e1e546cb73d99 (MD5) Previous issue date: 2013 / Leprosy is a chronic disease caused by Mycobacterium leprae, which represents an important health problem worldwide, especially in Ceará, Brazil. The incidence in under-15-year-olds reflects the endemicity of the region and the difficulty in its control. The disease presents a wide spectrum of clinical manifestations that reflects the immune response developed, with Th1 and Th2 responses related to the paucibacillary and multibacillary (MB) forms, respectively. Regulatory T cells(Tregs) cells have received special attention in the literature and have been associated with development of chronic infections, however its role in leprosy in children under-15-years-old has not yet been elucidated. This study aimed to evaluate the frequency of CD4+CD25+FOXP3high, CD8+CD25+FOXP3high, CD4+CD25highFOXP3+ and CD8+CD25highFOXP3+ Treg cells in patients with leprosy and household contacts(HHC), both under 15 years. Peripheral blood mononucelares cells were cultured for 72 hours with activators(anti-CD3 and anti-CD28) and/or with M.leprae total sonicated. After culture, Treg cells were identified by flow cytometry. We found a greater frequency of CD4+CD25+FOXP3high cells in patients than in HHC, where there were no differences in the other cell populations evaluated. The multibacillary patients had a higher frequency of CD4+CD25+FOXP3high and CD8+CD25+FOXP3high cells compared to HHC. Only these patients, CD4+CD25+FOXP3high cells were negatively correlated with CD4+ and CD8+ non-Treg lymphocytes , and CD8+CD25+FOXP3high cells with CD4+ non-Treg lymphocytes. The greater frequency of Tregs with high expression of FOXP3 in individuals with multibacillary leprosy under-15-years-old and its inverse correlation with the frequency of non-regulatory lymphocytes in these patients suggests the involvement of these cells in the perpetuation of M. leprae infection. / A hanseníase é uma doença crônica causada pelo Mycobacterium leprae, que representa um importante problema de saúde pública mundial, especialmente no estado do Ceará, Brasil. A incidência nos menores de 15 anos de idade reflete a endemicidade da região e a dificuldade no seu controle. A doença apresenta um espectro variado de manifestações clínicas que está relacionado a resposta imune desenvolvida pelo indivíduo, com as respostas Th1 e Th2 relacionadas com as formas paucibacilar e multibacilar, respectivamente. Células T regulatórias (Tregs) têm recebido atenção especial na literatura e têm sido relacionadas com o desenvolvimento de infecções crônicas, entretanto seu papel na hanseníase nos menores de 15 anos ainda não foi elucidado. Esse trabalho teve por objetivo avaliar a freqüência das Tregs CD4+CD25+FOXP3high, CD8+CD25+FOXP3high, CD4+CD25highFOXP3+ e CD8+CD25highFOXP3+ em pacientes com hanseníase e contatos intradomiciliares, ambos menores de 15 anos. Células mononucelares de sangue periférico foram cultivadas por 72 horas com ativadores (anti-CD3 e anti-CD28) e/ou com M.leprae total sonicado. Após cultura, a frequência das Tregs foi identificada por citometria de fluxo. Observamos maior freqüência de células CD4+CD25+FOXP3high em pacientes do que em contatos,não havendo diferenças entre eles com relação às outras populações avaliadas. Os pacientes multibacilares apresentaram maior freqüência de células CD4+CD25+FOXP3high e CD8+CD25+FOXP3high do que os contatos. Apenas nesses pacientes, as células CD4+CD25+FOXP3high foram negativamente correlacionadas com linfócitos CD4+ e CD8+ não-regulatórios e as células CD8+CD25+FOXP3high com linfócitos CD4+ não-regulatórios. A maior frequência de Tregs com elevada expressão de FOXP3 nos menores de 15 anos com hanseníase multibacilar, bem como sua correlação inversa com a frequência de linfócitos não regulatórios nesses pacientes sugere a participação dessas células na perpetuação da infecção pelo M. leprae.

FERNANDES, C. A depleção de células TREGS agrava a mucosite intestinal experimental induzida por irinotecano. 2017. 126 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-11-10T17:00:35Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cfernandes.pdf: 6243807 bytes, checksum: 40210c70777a4901e7b5e2c7df59e10d (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-13T10:37:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cfernandes.pdf: 6243807 bytes, checksum: 40210c70777a4901e7b5e2c7df59e10d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-13T10:37:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cfernandes.pdf: 6243807 bytes, checksum: 40210c70777a4901e7b5e2c7df59e10d (MD5) Previous issue date: 2017-09-13 / Intestinal mucositis (IM) is a common side effect related to anti-cancer chemotherapy based on irinotecan. MI is characterized by severe diarrhea and significantly affects patients' quality of life, increasing morbidity and health costs. Up to 80% of irinotecan-treated patients develop some degree of MI. The pathophysiology of this side effect is not fully understood and, unfortunately, there is no specific and effective treatment. The investigation of pathophysiological mechanisms may potentially guide the discovery of biomarkers or new therapeutic strategies. Previous studies point to the involvement of inflammatory molecules and cells, such as nitric oxide, COX-2, KC (analogous to human IL-8), TNF-α, IL-1, IL-18 and IL-33, toll-like receptors and neutrophils in the pathogenesis of MI in murine models. However, the participation of other innate and adaptive immune system cells, regulated in part by these cytokines, has not been investigated yet. Aim: To identify the expression profile of Tregs, Th7, Th (non-reg and non-Th17 cells) and type 3 innate lymphoid cells along the development of irinotecan-induced IM and to evaluate the role of Tregs in the pathogenesis. Methods: C57BL/6 (20-25g) received saline or irinotecan (75 mg/kg, i.p.), once daily/4 days, for induction of MI. Euthanasia occurred on days 1 (D1), D3, D5 or D7. For depletion of the Tregs the mice were pretreated with cyclophosphamide (100 mg/kg), 2h before the first dose of irinotecan, and euthanized on D7. Lymphocytes from intestinal lamina propria were isolated by enzymatic digestion and percoll gradient and splenic cells by mechanical digestion. The frequency of different lymphocyte subpopulations was identified by flow cytometry. On the day of euthanasia, a peripheral blood sample was collected for blood leukocyte count (x 103/l) and ileum samples for MPO, cytokine and histopathological assay. Results: The mice with MI had weight loss (P<0.05), leucopenia (P<0.05), diarrhea (P <0.05), intestinal damage (P<0.05) and reduction of villus/crypt ratio (P<0.05). In addition, irinotecan injection induced the increase of the % of Tregs (P<0.05) and % of Th17 cells (P<0.05), intestinal and splenic. The ratio of intestinal %Treg / Th17 correlated positively with severity parameters, such as diarrhea (P<0.05) and histopathological (P<0.05) scores of mice. There was a negative correlation between % Treg / Th17 splenic and these same parameters (P<0.05). Tregs depletion aggravated MI, increasing weight loss (P<0.05), diarrhea scores (P<0.05), mortality (100%) and reducing villus/crypt ratio (P<0, 05). The number of intestinal neutrophils increased after irinotecan injection, with the peak on D5 (P<0.05). In D7, there was a reduction in the number of these cells vs D5 (P<0.05). In addition, there was a negative correlation between the number of neutrophils and the % of Tregs (P<0.05). The frequency of type 3 innate lymphoid cells (P<0.05) and other Th cells, non-Treg and non-Th17 cells (P<0.05), decreased after irinotecan injection and were positively modulated after Tregs depletion. In addition, irinotecan injection elevated TNF-, IL-1, KC and IL-17A cytokines in the gut (P<0.05). With Tregs depletion, the levels of KC (P <0.05) and TNF- (P<0.05) were potentialized, and there was a reduction of IL-10 (P<0.05). Conclusion: Tregs cells are important to counterbalancing inflammation in irinotecan induced-IM. / A mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral comum relacionado à quimioterapia anti-câncer baseada em irinotecano. MI cursa com diarreia intensa e afeta de forma significativa a qualidade de vida dos pacientes, aumentando a morbidade e os custos com a saúde. Cerca de até 80% dos pacientes tratados com irinotecano desenvolvem algum grau de MI. A fisiopatologia deste efeito colateral não está completamente esclarecida e, infelizmente, não há um tratamento específico e efetivo. A investigação de mecanismos fisiopatológicos pode potencialmente guiar a descoberta de biomarcadores ou novas estratégias terapêuticas. Estudos anteriores apontam para o envolvimento de moléculas e células inflamatórias, tais como: óxido nítrico, COX-2, KC (análoga à IL-8 humana), TNF-α, IL1-, IL-18 e IL-33, receptores semelhantes a toll e neutrófilos na patogênese da MI em modelos murinos. Entretanto, a participação de outras células do sistema imune inato e adaptativo, reguladas em parte por estas citocinas, ainda não foi investigada. Objetivo: Traçar o perfil de expressão das células Tregs, Th7, Th (não-reg e não-Th17) e linfoides inatas do tipo 3 ao longo do desenvolvimento da MI induzida por irinotecano e avaliar o papel das Tregs na patogênese. Métodos: C57BL/6 (20-25g) receberam salina ou irinotecano (75 mg/kg, i.p.), uma vez ao dia/4 dias, para indução da MI. A eutanásia ocorreu nos dias 1(D1), D3, D5 ou D7. Para depleção das Tregs os animais foram pré-tratados com ciclofosfamida (100mg/kg), 2h antes da primeira dose de irinotecano e eutanasiados no D7. Os linfócitos da lâmina própria foram isolados por digestão enzimática e gradiente de percoll e as células esplênicas por digestão mecânica. A frequência das diferentes subpopulações linfocitárias foi identificada por citometria de fluxo. No dia da eutanásia coletou-se amostra de sangue periférico para contagem de leucócitos sangúíneos (x103/l) e amostras de íleo para ensaio de MPO, dosagem de citocinas e histopatológico. Resultados: A MI cursou com perda ponderal (P<0,05), leucopenia (P<0,05), diarreia (P<0,05), lesão intestinal (P<0,05) e redução da razão vilo/cripta (P<0,05). Adicionalmente, a injeção de irinotecano induziu o aumento do %Tregs (P<0,05) e %Th17 (P<0,05), intestinais e esplênicas. A razão entre % Treg/Th17 intestinal correlacionou-se positivamente com parâmetros de gravidade, como os escores de diarreia (P<0,05) e histopatológicos (P<0,05) dos animais. Houve uma correlação negativa entre %Treg/Th17 esplênico e esses mesmos parâmetros (P<0,05). A depleção de Tregs agravou a MI, aumentando a perda ponderal (P<0,05), os escores de diarreia (P<0,05), a mortalidade (100%) e reduzindo a razão vilo/cripta (P<0,05). O número de neutrófilos intestinais aumentou após injeção de irinotecano, com pico no D5 (P<0,05). No D7, houve uma redução no número dessas células vs D5 (P<0,05). Além disso, houve uma correlação negativa entre o número de neutrófilos e o %Tregs (P<0,05). A frequência de células linfoides inatas do tipo 3 (P<0,05) e de outras células Th, não-Treg e não-Th17 (P<0,05), diminuiu após a injeção de irinotecano, sendo moduladas positivamente após a depleção de Tregs. Além disso, a injeção de irinotecano elevou as citocinas TNF-, IL-1, KC e IL-17A no intestino dos animais (P<0,05). Com a depleção das Tregs, os níveis de KC (P<0,05) e TNF-P<0,05) foram potencializados, além de ocorrer uma redução de IL-10 (P<0,05). Conclusão: As células Tregs são importantes para contrabalancear a inflamação na MI induzida por irinotecano.

REZENDE, Daniela Ventin Prates. Estudo da expressão imunohistoquímica de linfócitos T-REG em pacientes com formas polares de hanseníase e reações hansênicas. 2013. 75 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-04T15:03:32Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_dvprezende.pdf: 2239058 bytes, checksum: 2dbb8f8181af72d0a4856cfaee6a4dc3 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-04T15:03:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_dvprezende.pdf: 2239058 bytes, checksum: 2dbb8f8181af72d0a4856cfaee6a4dc3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-04T15:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_dvprezende.pdf: 2239058 bytes, checksum: 2dbb8f8181af72d0a4856cfaee6a4dc3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae and presents a wide range of clinical manifestations, depending on the host immune response. At the tuberculoid pole, patients have an effective Th1 cellular immune response against bacillus, with well-demarcated granulomas, which limits the disease, while the lepromatous pole is characterized by the absence of specific cellular immunity against Mycobacterium leprae, with a Th2 immune response, uncontrolled proliferation of leprosy bacilli and a spread disease. In addition to Th1 and Th2 lymphocytes, recently other subset of T cells has been described. T regulatory lymphocytes play an immunosuppressive role in the activity of other cells and seem to participate in modulating the immune response in human chronic infections and self-tolerance. We performed immunohistochemical study on skin biopsies of 35 patients with different forms of leprosy using anti-CD4, anti-CD8 and anti-FoxP3 antibodies. There was an increased CD4 expression in tuberculoid patients and an increased CD8 expression in lepromatous patients. The FoxP3 expression was higher in lepromatous and reversal leprosy reaction patients. As previously demonstrated in other granulomatous infections, T regulatory cells may play a role in the immunopathology of leprosy. However, studies with larger series of patients are required to further elucidate the relationship between the presence of these cells and the clinical form of the disease. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae e apresenta uma grande variedade de manifestações clínicas que dependem da resposta imunológica do hospedeiro. Em um polo está a forma tuberculoide, na qual os pacientes apresentam uma resposta imunológica Th1 celular contra o bacilo, com formação de granulomas bem delimitados com doença localizada. No outro polo temos a forma virchowiana caracterizada pela ausência de imunidade celular específica ao Mycobacterium leprae, com padrão de resposta imunológica Th2, com macrófagos repletos de bacilos, mas com poucos linfócitos, sem formação de granulomas e com disseminação da doença. Além dos linfócitos Th1 e Th2, outra população de linfócitos T foi descrita recentemente. Os linfócitos T regulatórios desempenham um papel imunossupressor na atividade de outros linfócitos e de outras células inflamatórias e parecem participar da modulação da resposta imunológica em infecções crônicas em seres humanos e da autotolerância. Neste trabalho, foram analisadas 35 biópsias cutâneas de lesão de pacientes portadores de diferentes formas de hanseníase quanto à expressão dos marcadores celulares CD4, CD8 e FoxP3 por imunohistoquímica. Enquanto a expressão do CD4 foi maior nos pacientes portadores da forma tuberculoide da hanseníase, a expressão do CD8 mostrou-se maior nos portadores de hanseníase virchowiana. Quanto à expressão do FoxP3, esta foi maior nos portadores da forma virchowiana da hanseníase e da reação hansênica tipo 1 em relação aos indivíduos sadios. Parece que, assim como já demonstrado em outras doenças infecciosas granulomatosas, os linfócitos Treg participam da imunopatologia da hanseníase. Entretanto, estudos com maior número de pacientes são necessários, para um melhor entendimento da relação entre a presença desses linfócitos e a forma clínica da doença.

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 victor_bornstein_ioc_mest_2010.pdf: 1739981 bytes, checksum: 422f59df408ce1aa65ea4a342efd11cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A sepse é uma das principais doenças causadoras de óbitos em unidades de tratamento intensivo. Ademais, a forma grave dessa síndrome induz uma imunossupressão prolongada que causa diversas complicações, a maior parte dessas relacionadas a infecções pulmonares. O conhecimento atual sobre a imunossupressão induzida por sepse grave é muito limitado; no entanto já foi demonstrado que esta condição induz disfunções em linfócitos T CD4 e células dendríticas devido a alterações epigenéticas. O objetivo do presente trabalho foi o de estudar os linfócitos T \03B3\03B4 no pulmão durante a sepse grave assim como possíveis dinfunções destas células durante a imunossupressão pós-sepse. Para isso, a sepse grave foi induzida em camundongos C57BL/6 através da ligação e perfuração do ceco (CLP; 9 perfurações com agulha de 21 gauge e tratamento com antibiótico por 3 dias), modelo experimental descrito por ser capaz de desencadear e manter um estado de imunossupressão. No primeiro dia após a CLP os números de linfócitos T \03B3\03B4 e \03B1\03B2 se encontram elevados no pulmão. No 3º dia, o número de linfócitos T \03B1\03B2 retornou a níveis basais, no entanto, os números de linfócitos T \03B3\03B4 continuaram elevados. A análise por citometria de fluxo da expressão de anexina V, CD25, e c-Fos, sugere que este número aumentado de linfócitos T \03B3\03B4 no 3º dia após CLP seja devido a uma rápida e duradoura proliferação destas células em órgãos linfóides secundários e não devido a uma diminuição da morte celular, evento característico da sepse. De modo interessante, o aumento da expressão de CD25 por linfócitos T \03B3\03B4 foi observada tanto no pulmão (3º e 10º dia após CLP) quanto no baço (1º, 3º e 10º dia após CLP), em tempos anteriores aos observados para os linfócitos T \03B1\03B2. No 10º dia após a CLP, os camundongos já se encontram recuperados da sepse, contudo, os linfócitos T \03B3\03B4 e \03B1\03B2 apresentam uma incapacidade de migrar em direção ao pulmão inflamado, como foi observado em ensaio de transferência adotiva. Em contrapartida, no 10º dia, um maior número de linfócitos T \03B3\03B4 (mas não \03B1\03B2) recuperados do pulmão de animais pós-sépticos estão produzindo IL-17, enquanto há um menor número de linfócitos T \03B3\03B4 IL-10+ ou IFN- \03B3+. Este aumento na produção de IL-17 foi acompanhado de um aumento do número de neutrófilos. Em síntese, esses dados sugerem que, diferente dos linfócitos T \03B1\03B2, os linfócitos T \03B3\03B4 apresentam um perfil pró-inflamatório durante a imunossupressão pós-sepse grave induzida por CLP. / Sepsis is a major cause of death at intensive care units. Severe sepsis also leads to systemic long-term immunosuppression, which causes several c omplications, most of them related to lung infections. The current knowledge about sepsis-indu ced immunosuppression is poor; however it has been demonstrated that post-septic mice present dendritic and CD4 T cells dysfunction caused by epigenetic changes. In the present work, we aime d to investigate lung γδ T cells during severe sepsis and whether these cells were immunocompetent during immunosuppression post-sepsis. For that, severe sepsis was induced in C57BL/6 mice by cecal ligation and puncture (CLP; 9 punctures with 21 gauges needle and antibiotics tre atment for 3 days), a model previously described as triggering and maintaining immunosuppr ession. One day after CLP, both γδ and αβ T lymphocyte numbers were increased in lung tissue. A t day 3, αβ counts return to basal levels due to a post-sepsis apoptotic event; however, γδ T cell numbers remained elevated. This phenomenon seems to be due to an early and long-lasting prolif eration of γδ T cells (as compared to αβ ), instead of to decreased cell death rate, as assesse d by flow cytometry using annexin V, CD25, and c-Fos staining. Interestingly, the increase in CD25 expression by γδ T cells was observed in lung (3 rd and 10 th days post-CLP) and spleen (1 st , 3 rd and 10 th day post-CLP), at early time points than the ones observed for αβ T cells. At the 10 th day after CLP, mice were recovered from sepsis, bu t splenic γδ and αβ T cells showed a disability to migrate towards inf lamed lung in a cell adoptive transfer assay. Nevertheless, during day 10 th , lung γδ T cells (but not αβ T cells) recovered from post-septic mice produced increased IL-17 levels, w hereas decreased the production of IFN- γ and IL-10, showing a Th17-like response. The increased IL-17 production was accompanied by neutrophil infiltration in the lungs. In summary, t hese data suggest that, in contrast to other T lymphocytes, γδ T cells seem to maintain an effective immune-respo nse in the lungs during severe sepsis-induced immunosuppression caused by CLP.

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Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T20:35:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES. / A esquistossomose assume o segundo lugar em importância clínica e epidemiológica dentre as doenças parasitárias no mundo. A resposta imune do hospedeiro é considerada essencial na proteção e na patogênese da doença. A fase crônica é caracterizada pela produção de citocinas Th2, sendo as mesmas associadas ao desenvolvimento de fibrose periportal. Pouco se sabe sobre o fenotipo e o grau de ativação dos diferentes subtipos de células T no processo de fibrose. Objetivo: avaliar o fenótipo e o grau de ativação dos linfócitos T em pacientes esquistossomóticos com fibrose periportal. Método: Estudo de corte transversal, realizado no povoado de Água Preta, Gandu-Bahia, incluindo 37 indivíduos com fibrose periportal determinado por ultrassonografia. Quinze deles apresentavam fibrose incipiente, sete apresentavam fibrose moderada a grave e quinze não apresentavam fibrose. Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas por gradiente de Ficcol-hypaque e a frequência de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e a expressão dos marcadores de superfície CD28, CD69, CD25 e CTLA-4 foram determinadas por citometria de fluxo. Resultados: Não houve diferença significativa na frequência das células TCD4+ entre os pacientes com diferentes graus de fibrose periportal, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada e grave apresentaram uma frequência menor de células TCD8+, comparados aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de células TCD8+CD28+, bem como de células TCD4+CD69+ foi maior no grupo de pacientes com fibrose incipiente, em comparação com aqueles sem fibrose. Em relação à frequência das células TCD4+CD25Low, não houve diferença significativa entre os grupos de pacientes, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada a grave apresentaram uma menor frequência de células TCD4+CD25High comparados àqueles sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de linfócitos TCD4+CTLA-4+ em indivíduos com fibrose moderada a grave foi também menor em relação aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Conclusão: A alta frequência de células T ativadas nos pacientes com fibrose indica que estas células devem participar do processo de formação da fibrose periportal. Adicionalmente, a menor frequência de células T com o perfil regulatório nos pacientes com fibrose moderada a grave reforça a hipótese de uma falta de regulação da resposta imune nestes pacientes. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora esteja bem estabelecido, há mais de quinze anos, que linfócitos T CD8+ restritos por moléculas de MHC-Ia são importantes no controle da parasitemia e sobrevivência de camundongos infectados com Trypanosoma cruzi, pouco se sabia da especificidade desses linfócitos. A ausência de epítopos bem definidos impedia o estudo detalhado da cinética da resposta imune e dos mecanismos de controle da imunodominância. Assim, o objetivo inicial desta tese foi a identificação de epítopos reconhecidos pelos linfócitos T CD8+ ativados durante a infecção pelo T. cruzi. Uma vez definidos esses epítopos, estudamos a cinética de ativação dessas células e alguns dos parâmetros que a controlavam. Por fim, estudamos os possíveis mecanismos de imunodominância durante a resposta imune. Durante a infecção experimental com a cepa Y de T. cruzi, nós observamos que os epítopos VNHRFTLV, IYNVGQVSI ou TEWETGQI foram reconhecidos por camundongos infectados C57BL/6, BALB/c ou B10.A, respectivamente. Esses epítopos, expressos por membros da família das trans-sialidases, geraram forte resposta imune medida pela citotoxicidade in vivo ou pela produção de IFN-γ ex vivo (Elispot). A cinética da ativação desses linfócitos T CD8+ se iniciou no pico da parasitemia e dependeu da carga parasitária. Ou seja, quanto mais tempo a parasitemia demorou para atingir o pico, mais lenta foi a aparição das células específicas. Uma vez que a resposta chegou ao máximo, essa se manteve alta por meses e só então começou a declinar lentamente. O fenótipo dos linfócitos T CD8+ específicos de memória é CD62Llow, característico de células de memória efetoras. Tanto a cinética, quanto o fenótipo dessas células diferiram dos achados observados para vírus, bactérias e outros protozoários intracelulares. Em animais previamente vacinados com DNA plasmidial ou proteínas recombinantes, uma significativa aceleração da resposta imune específica foi observada, a qual correlacionou com a imunidade protetora. A fim de estudarmos os fatores que contribuíram para ativação dessas células, nós utilizamos camundongos geneticamente deficientes. Observamos que a deficiência para a produção de IL-12 e Interferon tipo I não causou nenhuma redução na geração das células citotóxicas específicas. O mesmo foi observado em animais deficientes para os receptores do tipo Toll 2, 4 ou 9. Por outro lado, animais geneticamente deficientes que não expressavam as moléculas de MHC-II ou CD4 apresentaram significativa redução na resposta específica de linfócitos T citotóxicos. O estudo dos mecanismos que controlam a imundominância da resposta imune mediada por linfócitos T CD8+ específicos foi feito, inicialmente, pela comparação da resposta imune em camundongos C57BL/6. Observamos que a resposta imune para o epítopo VNHRFTLV foi imunodominante sobre os demais epítopos restritos pelo MHC-Ia H-2Kb . A fim de determinar se essa imunodominância poderia ser exercida sobre epítopos restritos por MHC-Ia H-2Kk (TEWETGQI) ou H- 2Kd (IYNVGQVSI), comparamos as respostas imunes em camundongos infectados homozigotos e heterozigotos. No caso do epítopo VNHRFTLV, nós observamos que a resposta imune se manteve alta em ambas as linhagens de camundongo. Já no caso dos dois outros epítopos restritos por MHC-Ia, H-2Kk ou H-2Kd , observamos uma significativa redução na resposta imune dos animais heterozigotos em relação aos homozigotos. Essa competição não foi dependente do tempo ou da dose de parasitas inoculados. Também não foi observada quando os animais foram imunizados com adenovírus recombinantes contendo esses mesmos epítopos. O mais importante foi observar que a imunodominância pode ser evitada quando duas cepas de parasitas, contendo epítopos imundominantes distintos, foram utilizadas simultaneamente para infecção, sugerindo que há uma competição pelas células apresentadoras de antígenos durante o “priming”. Esse mecanismo de imundominância reduz a magnitude e o repertório da resposta imune e pode ser um mecanismo sofisticado de escape do parasita para evitar a eliminação completa pelos mecanismos efetores do hospedeiro. / Although it is well established for more than 15 years that CD8+ lymphocytes restricted by MHC-Ia molecules are important for the control of the parasitemia and survival during rodent infection with Trypanosoma cruzi, little was known about the specificity of these lymphocytes. The lack of well defined epitopes hindered the detailed study of the kinetic of the immune response and the mechanisms of control of the immunodominance. Therefore, the initial objective of this thesis, was to identify epitopes recognized by CD8+ T lymphocytes activated during the T. cruzi infection. Once we defined these epitopes, we studied the kinetics of activation of these cells and some of the parameters that controlled it. Finally, it was possible to study the mechanisms of immunodominance during the immune response. During the experimental infection with Y strain of T. cruzi, we observed that the epitopes VNHRFTLV, IYNVGQVSI or TEWETGQI were recognized by C57BL/6, BALB/c or B10.A infected mice, respectively. These epitopes, expressed by members of the trans-sialidase family of surface proteins, generated strong immune response as measured by the in vivo cytotoxicity or by the production of interferon-γ (Elispot). The kinetics of the activation of these CD8+ T cells initiated on the peak of parasitemia and depended on the parasite load. The longer delayed the parasitemia to reach its peak, slower was the appearance of these specific T cells. When the immune response reached the maximum, it was kept high for months and then, it declined slowly. The phenotype of memory CD8+ T lymphocytes was CD62LLow characteristic of effector memory cells. The kinetic one and phenotype of these cells had differed from the findings observed for other intracellular viruses, bacteria and protozoan parasites. In animals previously vaccinated with plasmidial DNA or recombinant proteins, a significant acceleration of the specific immune response was observed that correlated with the protective immunity. To study the factors that contributed for the activation of these cells, we used genetically deficient mice. We observed that deficiency for production of IL-12 and Interferon type I did not cause any reduction in the specific cytotoxic response. The same was observed in animals deficient for the Toll-like receptors 2, 4 or 9. On the other hand, genetically deficient animals that did not express MHC-II or CD4 molecules had significant reduction in the cytotoxic response mediated by CD8+ T cells. Finally, we described that following infection of mice with T. cruzi, an immunodominant CD8+ T cell immune response was developed directed to the epitope VNHRFTLV. To determine whether this immunodominance was exerted over other non H-2Kb -restricted epitopes, we measured during infection of heterozygote mice, immune responses to three distinct epitopes, all expressed by members of the trans-sialidase family, recognized by H-2Kb , H-2Kk (TEWETGQI), or H-2Kd (IYNVGQVSI)- restricted CD8+ T cells. Infected heterozygote or homozygote mice displayed comparably strong immune responses to the H-2Kb -restricted immunodominant epitope. In contrast, H-2Kk or H-2Kd -restricted immune responses were significantly impaired in heterozygote infected mice when compared to homozygote ones. This interference was not dependent on the dose of parasite or the timing of infection. Also, it was not seen in heterozygote mice immunized with recombinant adenoviruses expressing T. cruzi antigens. Finally, we observed that the immunodominance was circumvented by concomitant infection with two T. cruzi strains containing distinct immunodominant epitopes, suggesting that the operating mechanism most likely involves competition of T cells for limiting APCs. This type of interference never described during infection with a human parasite may represent a sophisticated strategy to restrict priming of CD8+ T cells of distinct specificities, avoiding complete pathogen elimination by host effector cells, and thus favoring host parasitism. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A tuberculose é considerada um problema de saúde pública mundial. Estima-se que um terço da população mundial está infectada pelo Mycobacterium tuberculosis. Trabalhos avaliando a interação patógeno vs. hospedeiro tem incentivado o estudo dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica inicial nos indivíduos infectados e doentes. A participação dos linfócitos T na resposta contra a micobactéria tem destacado a importância dessas células na imunopatogênese. Uma subpopulação de linfócitos T, as células T γδ têm sido investigada quanto à sua participação na resposta imunológica, principalmente frente a processos infecciosos e inflamatórios. Essas células carregam cadeia TCR γδ, atuam tanto na resposta inata como na adaptativa e são encontradas em epitélios de alguns órgãos e no sangue periférico. Duas subpopulações são predominantes no sangue periférico, aquelas expressando TCR Vγ2Vδ2 e outras expressando TCR VγnVδ1. A subpopulação Vδ2 tem demonstrado reatividade a produtos micobacterianos, enquanto que os mecanismos específicos das células T Vδ1 permanecem desconhecidos. Este trabalho propôs investigar através da citometria de fluxo a distribuição dos linfócitos T γδ, Vδ1 e Vδ2 na infecção pelo M. tuberculosis. Este trabalho foi realizado com amostras de pacientes com tuberculose pulmonar na fase aguda e durante terapia específica, indivíduos expostos ao M. tuberculosis e controles saudáveis. Nós encontramos uma diminuição na freqüência de células T Vδ2 nos pacientes com tuberculose, permanecendo estável durante terapia. Ao contrário as células T Vδ1 revelaram tanto uma freqüência aumentada na fase aguda, como também aumento contínuo ao longo da terapia específica. Com base no impacto da doença na freqüência desses linfócitos T γδ, acreditamos que essas células estejam envolvidas na resposta imunológica inicial contra a micobactéria, e que exista uma provável função complementar dessas células com as xi células T αβ. Nós recomendamos futuros estudos para explorar e avaliar a funcionalidade das células T Vδ1 e Vδ2, esses dados serão de grande valia para melhor compreender a contribuição dessas células na resposta imune durante a tuberculose. / Tuberculosis is an enormous challenge to global health. One third of the world’s population is estimated to be infected by the Mycobacterium tuberculosis. Previous reports assessing the interaction between the pathogen and the host have promoted further studies on the mechanisms involved during the innate immune response of infected individuals. The participation of T lymphocytes in the response against the mycobacterium has revealed the importance of these cells in immunopathogenesis of the disease. The γδ T cells, a subset of T lymphocytes, have been investigated with regard to their participation in the immune response, mainly against infectious and inflammatory processes. These cells express TCR γδ chains, participating in innate as well as adaptive responses, and are found in the epithelium of some organs and in the peripheral blood. There are two predominant subsets of cells in the peripheral blood: those expressing TCR Vγ2Vδ2 chains and those expressing TCR VγnVδ1 chains. The Vδ2 subset has demonstrated reactivity to compounds produced by M. tuberculosis, while the specific mechanisms of Vδ1 T cells remain unknown. Using flow cytometry, this study aims were to investigate the frequency of both Vδ1 and Vδ2 subsets of γδ T cells in Mycobacterium tuberculosis infection. This study was performed with samples that include acute tuberculosis patients, those receiving specific therapy, exposed individuals, and healthy controls. We found that the frequency of Vδ2 T cells was diminished in tuberculosis patients, and remained steadily low during specific therapy. In contrast, the Vδ1 T cells subset displayed not only increased frequency at acute phase, but also continued to rise throughout the course of specific therapy. Based on the impact of the disease on the γδ T cells frequency, we believe that these cells may be involved in an innate immune response xiii against the mycobacterium. Additionally, it is likely that they play a complementary role to αβ T cells during infectious processes. We recommend future studies to explore and evaluate the funcionality of Vδ1 and Vδ2 T cells in order to better understand the contribution of these subsets in the immune response during tuberculosis infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações