The lima bean (Phaseolus lunatus) is one of four cultivated species in the genus Phaseolus. The species was domesticated in South or Central America. It is one of the main cultivated legumes in the tropics and has a great potential as a source of vegetable protein to the population. Among its most important diseases are those caused by viruses, particularly by begomoviruses (family Geminiviridae). Infected plants display an intense yellow or golden mosaic, and have a drastically reduced yield. The objective of this work was to characterize the genetic structure of begomovirus populations infecting lima beans in the state of Alagoas, by analyzing complete DNA-A sequences. Lima bean plants with typical symptoms of begomovirus infection were collected in a number of areas around the states of Alagoas and Pernambuco during 2005. Total DNA was extracted and the presence of a begomovirus was confirmed by PCR. The viral genomic components were amplified using the DNA polymerase from phage phi29, and then cleaved with either BamH I or Hind III. Cleaved products were ligated to the pBluescript KS+ plasmid vector and the recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli DH5α. Clones were submitted to cleavage with Hae III and, according to the obtained restriction pattern, 22 (20 from samples collected in Alagoas, and two from samples collected in Pernambuco) were selected for sequencing. Phylogenetic analysis was carried out with MEGA 4.0 using the Neighbour-Joining method. The genetic diversity of the population was evaluated using the DnaSP program, version 5. Analysis of the 22 sequences revealed that they all belonged to a single begomovirus species, Bean golden mosaic virus, with 90 to 94% nucleotide sequence identity with a BGMV isolate from soybean (access number FJ665283.1). All sequences clustered with other Brazilian BGMV isolates from common bean and soybean in the phylogenetic tree, although the two isolates from Pernambuco are closer to the soybean isolate than the 20 isolates from Alagoas. Thus, the lima bean isolates clustered based on their geographical origin. Analysis of the population indicated a high degree of genetic variability, significantly higher than that observed for two begomovirus populations from tomato obtained in the southeastern region of Brazil. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A fava (Phaseolus lunatus) é uma das quatro espécies do gênero Phaseolus exploradas comercialmente. A espécie foi domesticada na América do Sul ou Central. É uma das principais leguminosas cultivadas na região tropical e apresenta potencial para fornecimento de proteína vegetal à população. Entre as doenças mais importantes estão as viroses, principalmente aquelas ocasionadas por begomovírus (família Geminiviridae). As plantas infectadas apresentam um mosaico amarelo intenso e têm a produtividade drasticamente reduzida. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a estrutura genética dos begomovírus que infectam fava no estado de Alagoas, através da análise da sequência completa do DNA-A. Plantas de fava com sintomas típicos de infecção por begomovírus foram coletadas em áreas produtoras localizadas nos estados de Alagoas e Pernambuco no ano de 2005. Foi então realizada a extração de DNA, e confirmada por PCR a presença de begomovírus. Os componentes genômicos foram amplificados utilizando-se a enzima DNA polimerase do bacteriófago phi29, clivados com as enzimas de restrição BamH I e Hind III, ligados ao vetor pBluescript KS+ e utilizados para transformação de Escherichia coli DH5α. Os clones foram submetidos a digestão com a enzima Hae III e, de acordo com o padrão eletroforético observado, 22 clones (20 provenientes de amostras de Alagoas e 2 de Pernambuco) foram selecionados para sequenciamento. A análise filogenética foi realizada utilizando-se o programa MEGA 4.0 através do método ―Neighbour-Joining‖. A avaliação de diversidade genética foi realizada utilizando-se o programa DnaSP versão 5. Análise das 22 sequências obtidas revelou que apenas uma espécie de begomovírus estava infectando as amostras de fava, o Bean golden mosaic virus, apresentando entre 90% e 94% de identidade de nucleotídeos com um isolado de BGMV de soja (acesso FJ665283.1). Todas as sequências obtidas agruparam-se com isolados de BGMV de soja e feijão do Brasil, e os isolados clonados a partir da amostra de fava coletada em PE possuem um relacionamento filogenético mais próximo com o isolado de BGMV de soja do que os isolados de Alagoas. Os isolados apresentaram agrupamento filogenético de acordo com sua origem geográfica, com os isolados de BGMV de fava de PE divergindo dos de AL. A análise da população de BGMV infectando fava indicou uma alta taxa de variabilidade genética, significativamente maior que a observada para duas populações de begomovírus que infectam tomateiro no sudeste brasileiro.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-06T12:21:20Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1977225 bytes, checksum: 4fbd41473c4fb59dd997d5983d38f034 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T12:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1977225 bytes, checksum: 4fbd41473c4fb59dd997d5983d38f034 (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lectins are proteins with the ability to interact specifically and reversibly with carbohydrates. They are present in all forms of life, performing vital functions for the maintenance of these beings. The legume lectins have numerous biological activities that can be used for therapy. The aim of this study was to isolate a lectin of Phaseolus lunatus seeds var. cascavel (PLUN), as well as to characterize it and check anti-hemolytic, antioxidant, antitumor and gastroprotective activities. The presence of lectins and an indication of their carbohydrate inhibitor was determined using the hemagglutination activity against human type ABO red blood cells. Protein concentration was determined by Bradford method using bovine serum albumin as standard. The isolation of PLUN was performed by size exclusion chromatography on Sephadex G-100. The weight and the purity of lectin was estimated by EGPA (polyacrylamide gel electrophoresis) under reducing and non-reducing conditions. The characterization was performed PLUN checking their resistance to pH and temperature variations, the presence front integrity of urea, DTT (dithiothreitol), beta-mercaptoethanol, EDTA (ethylenediaminetetra acetic acid), as well as the action of the trypsin and chymotrypsin enzymes . The characterization of glycoproteins was carried out by electrophoretic and staining for determination of total carbohydrates. The anti-hemolytic activity was performed using human ABO red blood cells, the antioxidant activity was determined by the molybdenum reduction methods (total antioxidant) and capture of the DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hidrazila), and ABTS (2,2' sulfonic -azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6 acid), antitumor activity was determined by the MTT (3- [4,5-dimethyl-thiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide) against cells melanoma A375 and the gastroprotective the protection induced gastropathy ethanol. The hemagglutinating activity indicated the presence of lectins only able to agglutinate erythrocytes of type A. This was inhibited only by lectin-carbohydrate N-acetyl-D-galactosamine at a concentration of 25 mM. The molecular exclusion was enough to isolate the lectin, where the peak I obtained from chromatography was active against type A red blood cells (PLUN). The estimated weight by EGPA indicated that it has about 128 kDa. The final purification yield was 80%, and this purified protein about 28 times. Thermostability and pH indicated variations in resistance to 80°C and pH between 2 and 11. Only the 8 M urea was able to inhibit the lectin. The 250 mM EDTA was inhibitory effect on hemagglutination activity was recovered in the presence of manganese ions. PLUN is a glycoprotein, with approximately 2% of carbohydrates in its composition. The lectin has no anti-hemolytic effect for no human blood type. PLUN has antioxidant action with AAEAA (μMAA/g) of 418.20, 326 and 82.9 for total antioxidant activity, ABTS radical capture and capture of DPPH radical, respectively. The IC50 (mg/ml) stood at 1.22, 0.21 and 4.39 for the tests cited above, respectively. The lectin has antitumor activity against melanoma derived cells at doses of 100 and 50 mg/ml, reducing up to 83% tumor cells, and gastroprotective action in a concentration of 1000 mg / kg, reducing up to 63% of the injured area stomach. / Lectinas são proteínas com a capacidade de interagir de forma específica e reversível com carboidratos. Estão presentes em todas as formas de vida desempenhando funções vitais. As lectinas de leguminosas apresentam inúmeras atividades biológicas que podem ser utilizadas pela terapêutica. O objetivo desse estudo foi isolar uma lectina de sementes de Phaseolus lunatus var. cascavel (PLUN), bem como caracterizá-la e verificar as atividades antihemolítica, antioxidante, antitumoral e gastroprotetora. A presença de lectinas e a indicação do seu carboidrato inibidor foi determinada utilizando a atividade hemaglutinante. A concentração proteica foi determinada pelo método de Bradford utilizando a albumina sérica bovina como padrão. O isolamento de PLUN foi realizado por cromatografia de exclusão em Sephadex G-100. O peso e a pureza da lectina foram estimados por EGPA (eletroforese em gel de poliacrilamida). A caracterização de PLUN foi realizada verificando sua resistência às variações de temperatura e pH, integridade frente à presença de ureia, ditiotreitol, beta-mercaptoetanol, EDTA, tripsina e quimiotripsina. A caracterização para glicoproteínas foi realizada pela coloração eletroforética e pela dosagem de carboidratos totais. A atividade antihemolítica foi realizada utilizando hemácias humanas ABO, a atividade antioxidante foi determinada pelos métodos de redução do molibdênio (antioxidante total) e captura dos radicais DPPH e ABTS, a atividade antitumoral foi determinada pelo ensaio do MTT contra células de melanoma A375 e a gastroprotetora pela proteção a gastropatia induzida por etanol. A atividade hemaglutinante indicou a presença de lectinas capazes de aglutinar apenas hemácias do tipo A. Essa lectina foi inibida apenas pelo carboidrato n-acetil-D-galactosamina em uma concentração de 25 mM. A exclusão molecular foi suficiente para isolar a lectina, onde o pico I obtido da cromatografia foi ativo contra hemácias tipo A (PLUN). A estimativa do peso por EGPA indicou que esta apresenta aproximadamente 128 kDa. O rendimento final da purificação ficou em 80%, sendo essa proteína purificada cerca de 28 vezes. A termoestabilidade e as variações de pH indicaram resistência em até 80ºC e em pH entre 2 e 11. Apenas a ureia 8 M foi capaz de inibir a lectina. O EDTA 250 mM teve efeito inibidor sobre a atividade hemaglutinante que foi recuperada em presença de íons manganês. PLUN é um glicoproteína, apresentando aproximadamente 2% de carboidratos em sua composição. A lectina não apresenta efeito antihemolítico para nenhum tipo sanguíneo humano. PLUN apresenta ação antioxidante com AAEAA (μMAA/g) de 418,20, 326 e 82,9 para a ação antioxidante total, captura do radical ABTS e captura do radical DPPH, respectivamente. As IC50 (mg/mL) ficaram em 1,22, 0,21 e 4,39 para os ensaios acima citados, respectivamente. A lectina apresenta atividade antitumoral contra células oriundas de melanoma em doses de 100 e 50 μg/mL, reduzindo em até 83% as células tumorais, e ação gastroprotetora em uma concentração de 1000 μg/kg, reduzindo em até 63% a área lesada do estômago. Os resultados indicam uma lectina com considerada atividades antioxidante, antitumoral e gastroprotetora. Mais estudos devem ser realizados para verificar possíveis mecanismos moleculares envolvidos nessas observações, bem como a determinação da estrutura tridimensional da proteína.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-24Bitstream added on 2014-06-13T21:06:46Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_ems_dr_jabo.pdf: 998912 bytes, checksum: fca2c550ea3f00d2dbfbc2f1213a506f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A antracnose é freqüentemente encontrada em feijão-fava na região nordeste do Brasil, porém é pouco estudada. Nesse sentido, objetivou-se caracterizar o agente causal da antracnose, determinar a reação de genótipos a Colletotrichum truncatum e investigar a viabilidade da utilização da técnica de folhas destacadas em estudos relacionados a essa doença. Isolados foram caracterizados em relação a aspectos morfoculturais quando cultivados em meios de cultura batata-dextrose-ágar (BDA) e feijão-dextrose-ágar (FDA), em temperaturas de 26, 28 e 30ºC e fotoperíodo de 12 horas. A patogenicidade dos isolados e a reação dos genótipos foram avaliadas em folhas destacadas e na planta. O comportamento dos genótipos foi avaliado em duas épocas, no período chuvoso (17 de abril a 02 de junho/2008) e período seco (13 de junho a 29 de julho/2008). O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado com cinco e quatro repetições para avaliação da patogenicidade e dos genótipos, respectivamente. As características morfológicas e culturais variaram de acordo com o isolado e condições de cultivo, porém, foram compatíveis com as descritas para a espécie C. truncatum. A patogenicidade foi comprovada, porém não foram detectadas diferenças significativas entre os isolados. Os primeiros sintomas da doença apareceram aos três dias após a inoculação em folhas destacadas e plantas. Os genótipos UFPI - 578, UFPI - 468 e UFPI - 26 foram suscetíveis a C. truncatum. Quando avaliados em folha destacada não diferiram estatisticamente entre si no nível de infecção, independente da época. Em planta e na ausência de chuva, UFPI - 26 apresentou o maior nível de infecção, enquanto UFPI - 578, o menor. A correlação positiva e significativa (P<0,0001) entre folha destacada e planta comprova a viabilidade do emprego da técnica de folhas destacadas em estudos relacionados a essa doença / Anthracnose is often found in lima bean plantations in the northeast region of Brazil, however, has been little studied. In this sense, the goals were to characterize the causal agent of anthracnose, determine the reaction of genotypes to Colletotrichum truncatum and investigate the viability of using the technique of detached leaves in studies related to this disease. Isolates were characterized in relation to aspects morphocultural when grown in culture BDA and FDA, in temperatures of 26, 28 and 30ºC and photoperiod of 12 hours. The pathogenicity of the isolates and the reaction of the genotypes were evaluated in detached leaf and plant. The behavior of the genotypes were evaluated in two seasons, in the presence and absence of rain. The design was completely randomized to five and four replicates to evaluate the pathogenicity and genotypes, respectively. The cultural and morphological characteristics varied according with the isolates and conditions of the grown, but were compatible with those described for the species C. truncatum. The pathogenicity was proved no significant differences between the isolates. The first symptoms of the disease appeared to three days after inoculation in detached leaves and plants. The genotypes UFPI - 578, UFPI - 468 and UFPI - 26 were susceptible to C. truncatum. When evaluated in detached leaves did not differ significantly among themselves in the level of infection, independent of the season. In plants, UFPI - 26 was the most susceptible in season 2 with the highest level of infection, while the UFPI - 578 was the least susceptible. The positive and significant correlation (P <0.0001) between detached leaves and plant prove the viability of employment of detached leaves in studies related to this disease

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-05-22T13:26:07Z No. of bitstreams: 1 Antunes Romeu Lima do Nascimento.pdf: 1176079 bytes, checksum: 3965be55696a10d228bab8c7064bc386 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-22T13:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antunes Romeu Lima do Nascimento.pdf: 1176079 bytes, checksum: 3965be55696a10d228bab8c7064bc386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The lima bean is a legume producer of edible grains with high protein value, cultivated worldwide, having in Brazil, the Northeast region as the main producer. In this region, the production is made with low use of technology, resulting in low yields. Among the technologies used to increase the production of legume, we can highlight the inoculation of seed with diazotrophic bacterias, with the objective of replace or reduce nitrogen fertilization. The aim of this study was to evaluate the diversity of rhizobia in symbiosis with the lima bean adapted to semiarid conditions. To obtain the isolated was used 02 accessions of lima bean (one of indeterminate growth and other of determinate growth) and 12 composite samples of soil from different mesoregions the states of Paraíba and Pernambuco. Plants were cultived in a protected area with transparent canvas, in design completely randomized in factorial of 12 (soil) x two (accessions) in Leonard pots adapted with plastic bottle containing 1.3 L of sand and 100 mL soil, with three replicates, for 55 days. The variables analyzed were: number of nodules (NN), fresh mass of nodules (MFN), specifies biomass of nodules (BEN), dry mass of the part aerial (MSPA) and dry mass of root (MSR). Data were analyzed using the F test and the means compared by the Scott- Knott test. Of the collected nodules were isolated bacteria and determined their morphological and physiological characteristics in culture medium, in the laboratory of Soil Microbiology of UFRPE (Recife-PE). With the characteristics of the isolates was calculated the coefficient J and was performed the grouping of the bacteria. The soil of Alagoa Grande-PB showed the highest values for NN and MFN, however when analyzing the specific biomass of nodules no detectable differences. For MSR obtained only difference between accessions. And for MSPA differences were observed for both factors, emphasizing the soil of Alagoa Grande-PB, and two soils of native vegetation, Areia-PB and Garanhuns-PE, these being a possible source of efficient strains. The grouping of the bacteria showed that accession of growth determined formed 13 groups, while the other accession, 24. And analyzing all bacteria in one dendrogram were formed groups with bacteria of each separate accession and also united. Accessions differ in groups of rhizobia able to form symbiosis. / O feijão-fava é uma leguminosa produtora de grãos comestíveis com alto valor protéico, cultivada mundialmente, tendo no Brasil, a região Nordeste como principal produtora. Nessa região, a produção é feita com baixa utilização de tecnologia, o que resulta em baixos rendimentos. Entre as tecnologias utilizadas para aumentar a produção de leguminosas, pode-se destacar a inoculação das sementes com bactérias diazotróficas, com o objetivo de substituir ou reduzir a adubação nitrogenada. O objetivo do presente estudo foi avaliar a diversidade de rizóbios em simbiose com o feijão-fava adaptados às condições do Semiárido. Para a obtenção dos isolados foram utilizados dois acessos de feijão-fava (um de crescimento indeterminado e outro de crescimento determinado) e 12 amostras compostas de solo de diferentes mesorregiões dos estados da Paraíba e Pernambuco. As plantas foram cultivadas em uma área protegida com lona transparente, em delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial de 12 (solos) x dois (acessos) em vasos de Leonard adaptados com garrafas PET contendo 1,3 L de areia e 100 mL de solo, com três repetições, por 55 dias. As variáveis analisadas foram: número de nódulos (NN), massa fresca de nódulos (MFN), biomassa especifica dos nódulos (BEN), massa seca da parte aérea (MSPA) e da raiz (MSR). Os dados foram submetidos ao teste F e as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Dos nódulos coletados foram isoladas bactérias e determinadas suas características morfofisiológicas em meio de cultura, no laboratório de Microbiologia do Solo da UFRPE (Recife-PE). Com as características dos isolados calculou-se o coeficiente J e realizou o agrupamento das bactérias. O solo de Alagoa Grande-PB foi o que apresentou os maiores valores de NN e MFN, entretanto quando analisada a biomassa especifica dos nódulos não se evidenciou diferenças. Para MSR obteve-se diferença apenas entre os acessos. Para MSPA foram observadas diferenças para ambos os fatores, destacando-se o solo de Alagoa Grande-PB, e dois solos de vegetação nativa, Areia-PB e Garanhuns-PE, sendo estes uma possível fonte de estirpes eficientes. O agrupamento das bactérias revelou que o acesso de crescimento determinado formou 13 grupos, enquanto o outro acesso, 24. Analisando-se todas as bactérias em um único dendrograma observou-se a formação de grupos com as bactérias de cada acesso separados e também unidos. Os acessos diferem quanto aos grupos de rizóbios capazes de formar simbiose.

The aim of this study was to characterize morphological and agronomic, degree of resistance to golden mosaic and anthracnose on bean accessions, was evaluated seventy accessions of Phaseolus lunatus L., from the active germplasm banks of the Federal University of Piauí and the Federal Rural de Pernambuco, and seeds from the states of Alagoas, Pernambuco, Sergipe and Paraíba, all taken directly from fields and / or fairs, planted in crop year 2008. Seeds were sown in early May the waters. The characterization was made with plant characteristics, flower, pod and seed, according to recommendations of IPGRI. To evaluate the impact of the golden mosaic design was randomized blocks with two replicates in characterization and evaluation of resistance to anthracnose utilized is a single block, represented by seventy access, single row, the severity of the fungus was evaluated in leaves of plants, a greater severity during the rainy season, since the action of whitefly and virus incidence occurred in the dry season, causing damage to production of lima bean. The accessions showed different degrees of polymorphism in relation to all traits; incidence of bean golden mosaic and anthracnose resistance. Systematized information might be used in breeding programs, crop management, training and maintenance of germplasm banks bean. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização morfo-agronômica, grau da resistência ao mosaico-dourado e à antracnose em acessos de fava, foi avaliado setenta acessos de Phaseolus lunatus L., provenientes dos bancos ativos de germoplasma das Universidades Federal do Piauí e Federal Rural de Pernambuco, além de sementes oriundas dos Estados de Alagoas, Pernambuco, Sergipe e Paraíba, todas obtidas diretamente de lavouras e/ou em feiras livres, cultivadas no ano agrícola de 2008. A semeadura foi realizada em maio início das águas. A caracterização foi feita com características da planta, flor, vagem e semente, segundo recomendações do IPGRI. Para a avaliação da incidência do mosaico-dourado o delineamento foi em blocos casualizados com duas repetições, na avaliação da caracterização e resistência à antracnose utilizadou-se um bloco único, representado por setenta acessos, em fileiras simples. A severidade do fungo foi avaliada nas folhas das plantas, ocorreu maior severidade na época das chuvas, já a ação de mosca-branca e incidência do vírus ocorreu na época da seca, causando prejuízos à produção da fava. Os acessos apresentaram diferentes graus polimorfismo em relação a todos os caracteres avaliados; incidência de mosaico dourado e resistência à antracnose. As informações sistematizadas puderam ser usadas nos programas de melhoramento, manejo da cultura, formação e manutenção de bancos de germoplasma de fava.

O feijão-fava (Phaseolus lunatus L.) é uma importante espécie da família Fabaceae, que possui ampla distribuição mundial. A origem e a domesticação da espécie são apontadas no continente americano, no entanto, os locais exatos ainda não estão totalmente esclarecidos, devido à ampla distribuição e a escassez de populações silvestres. Além disso, a perda de germoplasma de feijão-fava em muitas áreas de distribuição natural, o que mostra a importância dos Bancos de Germoplasma, da caracterização da diversidade e dos estudos de domesticação da espécie. O estudo da diversidade genética a nível molecular vem sendo bastante realizado, os marcadores moleculares de microssatélites (SSR), se destacam. O feijão-fava conta com poucos estudos usando como ferramentas os SSRs, não possuindo locos específicos para a espécie, o que limita o conhecimento sobre sua genética. Assim, objetivou-se desenvolver locos microssatélites nucleares (ncSSR) específicos a espécie para estudar a diversidade genética, bem como, o processo de domesticação entre acessos silvestres e domesticados em diferentes países (Brasil, México, Peru, Colômbia e Argentina), por marcadores SSR cloroplastidiais (cpSSR), além de estudar a plasticidade fenotípica de acessos brasileiros. Estimou-se a plasticidade fenotípica de 12 acessos do Brasil em quatro ambientes com diferentes adubos (1 - controle sem adubação; 2 - adubação mineral NPK; 3 - adubação orgânica de esterco bovino; 4 - adubação mineral e orgânica). O delineamento foi inteiramente casualizado com três repetições. Os caracteres avaliados foram: Número de Dias para Floração (NDF), Número de Dias para Maturação (NDM), Número de Vagens por Planta (NVP), Número de Sementes por Planta (NSP), Comprimento de vagem (CV), Largura da Vagem (LV), Número de Lóculos por Vagem (NLV), e Peso de Cem Sementes (P100S). Realizou-se a análise de variância e estimou-se o índice de Plasticidade Fenotípica (IPF) e a Correlação de Pearson entre os caracteres. Para a determinação da diversidade e estrutura genética foram usados marcadores microssatélites, sendo cinco locos cloroplastidiais (cpSSR) e três locos nucleares (ncSSR), em 44 acessos de feijão-fava. Foi possível detectar-se plasticidade fenotípica nos acessos de feijão-fava. Todos os caracteres, com exceção de NDF e NSV, apresentaram interação genótipo × ambiente significativa para os quatro ambientes avaliados. NVP e NSP tiveram os maiores IPF (0,82) e NDF o menor (0,06), sendo assim o mais e o menos plástico, respectivamente, nos quatro ambientes. A maior correlação positiva foi observada entre NVP x NSP, de modo que seus valores variam na mesma direção. NVP x P100S apresentaram a maior correlação negativa. A diversidade genética observada com marcadores microssatélites nucleares e cloroplastidiais mostrou-se maior em acessos do México (cpSSR = 0,163; ncSSR = 0,15), seguido do Brasil (cpSSR = 0,111; ncSSR = 0,00). Em nível de variedades, os acessos silvestres tiveram menor diversidade em cpSSR (0,16) e maior em ncSSR (0,14) do que os domesticados (cpSSR = 0,119; ncSSR = 0,02). Altos níveis de variação e diferenciação genética foram observadas entre países, com 94% da variação e Fst = 0,874 e entre variedades, com 87% e Fst = 0,944 em cpSSR. Já em ncSSR, variação e diferenciação maiores ocorreram entre acessos (61%; Fst = 0,771) e dentro de variedades (80%; Fst = 0,778). Essas diferenças podem estar relacionadas a diferenças no padrão de herança dos marcadores. Os SSR cloroplastidiais são mais conservados e tem herança maternal. Assim, os acessos de mesmo país conservam os mesmos haplótipos, apresentando baixa diferenciação entre eles. O contrário ocorre com os SSR nucleares, que possuem herança biparental e maior porcentagem de mutação. Apresentando assim, maior diferenciação entre os acessos, que é favorecida pelo sistema reprodutivo predominantemente autógamo. Os acessos domesticados brasileiros estão mais próximos geneticamente dos acessos silvestres mexicanos, podendo ter sido resultantes da domesticação de indivíduos silvestres do México. / Lima bean (Phaseolus lunatus L.) is an important species of the Fabaceae family, which is distributed worldwide. The origin and domestication of the species is not fully understood due to the wide distribution and lack of wild accessions, as well as the loss of germplasm in many areas of its natural distribution, which indicates the importance of germplasm banks and the characterization of diversity and of domestication studies. The study of genetic diversity at the molecular level has been quite accomplished, the molecular markers od microsatellites (SSR), stand out. The lima bean has few studies using as tools the SSRs, not having specific loci for the species, which limits the knowledge about its genetics. Thus, the objective was to develop specific nuclear microsatellite loci (ncSSR) to study the genetic diversity, as well as the domestication process involving wild and domesticated accessions in different countries (Brazil, Mexico, Peru, Colombia and Argentina), by chloroplastids SSR markers (cpSSR), besides to study the phenotypic plasticity of Brazilian accessions. The phenotypic plasticity of 12 accessions from Brazil was estimated in four environments with different fertilizers (1 - control without fertilization, 2 - mineral fertilization with NPK, 3 - organic fertilization with bovine manure, 4 - mineral [NPK] and organic fertilization [manure]). The design was completely randomized with three replicates. The evaluated traits were: Number of Days for Flowering (NDF), Number of Days for Maturation (NDM), Number of Pods per Plant (NVP), Number of Seeds per Plant (NSP), Pod Length (CV), Pod Width (LV), Number of Locules per Pod (NLV), and Weight of One Hundred Seeds (P100S). The analysis of variance was performed, the index of Phenotypic Plasticity (IPF) and the Pearson Correlation between the characters were estimated. Microsatellite markers were used for the determination of genetic diversity and structure, with five chloroplastid (cpSSR) and three nuclear loci (ncSSR) in 44 accessions of lima bean. There was phenotypic plasticity in the accessions of lima bean. All characters except for NDF and NSV presentated genotype x environment interaction significant for the four environments evaluated. NVP and NSP had the highest (0.82) and NDF the lowest (0.06) IPF, thus being the most and the least plastic, respectively, in the four environments. The highest positive correlation was observed between NVP x NSP, so that their values vary in the same direction. NVP and P100S had the highest negative correlation. The genetic diversity observed with nuclear and chloroplast microsatellite markers was greater in accessions from Mexico (cpSSR = 0.163; ncSSR = 0.15), followed by Brazil (cpSSR = 0.111; ncSSR = 0.00). At the variety level, wild accessions had lower diversity with cpSSR (0.16) and higher diversity with ncSSR (0.14) than domestic (cpSSR = 0.119; ncSSR = 0.02). High levels of variation and genetic differentiation were observed among countries, with 94% of the variation and Fst = 0.874, and between varieties, with 87% and Fst = 0.944 with cpSSR. With ncSSR, greater variation and differentiation occurred between accessions (61%, Fst = 0.771) and within varieties (80%, Fst = 0.788). These differences may be related to differences in the inheritance pattern of the markers. Chloroplast SSRs are more conserved and have maternal inheritance. Thus, accessions from the same country retain the same haplotypes, presenting low differentiation between them. The opposite occurs with nuclear SSR, which has a biparental inheritance and a higher percentage of mutation. Thus, a greater differentiation exists between the accessions, which is favored by the predominantly autogamous reproductive system. Brazilian domesticated accessions are genetically closest to the Mexican wild accessions, and may have resulted from the domestication of wild individuals from Mexico.

Lima bean (Phaseolus lunatus L.) is one of the four major important grain legumes in Brazil. The occurrence of diseases has difficulted its culture and has affected grain quality of this crop. Among the most important diseases are the viruses, especially those generated from Geminivirus. The high severity of the Geminiviruses diseases is especially due to both the absence of pathogen resistance varieties and increase in the population of a new biotype (biotype B), of the insect vector, commonly named whitefly (Bemisia tabaci). This biotype transmitis the virus more efficiently and it presents a host range larger than biotype A. The present estudy objected the detection, molecular characterization and analisys of the genetic diversity of Begomovirus isolates that infects lima bean plats in Alagoas and Pernambuco States. The detection was realized by PCR technique utilizing as a mold DNA extracted from plants presenting symptoms of geminivirus infection which were colleted from seven locations of Alagoas and one of Pernambuco. It was identified Begomovirus infection in seventeen collected samples. The analisys of genetic diversity, based in PCR-RFLP, revealed that exists diversity among the isolates of Begomovirus that were infecting these plants. According to differences in the patterns of bands generated by PCR-RFLP, it was chosen three isolates (fava Maceió, fava Recife and fava União dos Palmares), in an attempt to sequence analysis. The comparison of the obtained sequences with other deposited in GenBank/NCBI allowed the classification of these isolates as Bean golden mosaic virus, the last one being the first report of infection caused this species in lima bean plants in Alagoas and Pernambuco State. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A fava (Phaseolus lunatus L.) está entre as quatro espécies de leguminosas de grãos mais importantes no Brasil. A ocorrência de doenças tem dificultado o cultivo e afetado a qualidade dos grãos dessa cultura. Entre as doenças mais importantes, estão as viroses, destacando-se aquelas ocasionadas por Geminivirus. A alta severidade das doenças causadas por geminivírus, deve-se principalmente à ausência de variedades resistentes ao patógeno e também ao aumento populacional de um novo biótipo (biótipo B) do inseto vetor, vulgarmente denominado, "mosca branca" (Bemisia tabaci). Este biótipo transmite o vírus mais eficientemente e apresenta uma gama de hospedeiros mais ampla do que o biótipo A. O presente trabalho teve como objetivos principais a detecção, caracterização molecular e a análise da diversidade genética de isolados de Begomovirus que infectam plantas de fava no Estado de Alagoas e Pernambuco. A detecção foi realizada mediante a técnica de PCR utilizando como molde o DNA extraído de plantas com sintomas de infecção por geminivírus, coletadas em sete municípios de Alagoas e em um de Pernambuco. Foi diagnosticada infecção por Begomovirus em dezessete amostras coletadas. A análise da diversidade genética, baseada em PCR-RFLP, demonstrou que existe diversidade entre os isolados de begomovírus que estavam infectando estas plantas. A partir das diferenças nos padrões de bandas gerados através da PCR-RFLP, foram escolhidos três isolados (Fava Maceió, Fava Recife e Fava União dos Palmares), para fins de seqüenciamento. A comparação das seqüências obtidas, com outras seqüências depositadas do GenBank/NCBI permitiu a classificação desses isolados como Bean golden mosaic virus, sendo este o primeiro relato de infecção por esta espécie em plantas de fava, nos estados de Alagoas e Pernambuco.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-14T12:51:13Z No. of bitstreams: 1 Jeferson Araujo Silva.pdf: 166823 bytes, checksum: 6c389068c6abcff8459db563807d3eb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T12:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jeferson Araujo Silva.pdf: 166823 bytes, checksum: 6c389068c6abcff8459db563807d3eb8 (MD5) Previous issue date: 2011-02-22 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The collar rot caused by Sclerotium rolfsii, is an important disease that causes an incidence in lima bean (Phaseolus lunatus L.) at the Northeastern of Brazil. Aiming to select genotypes with potential to be used in a disease management, there were 50 genotypes of lima bean evaluated in relation to an isolate of S. rolfsii. Plants with 10 days old were inoculated by an injury into their base and deposited the sclerotia of the pathogen. The evaluation occurred at the 10th day after the inoculating, by calculating the percentage of the number of plants with symptoms in relation to the total of plants per pot. Most part of the genotypes (58%) behaved as highly susceptible to the pathogen while 28% were classified as susceptible, 10% as moderately resistant. Only two genotypes (F-2 and F-25) behaved as extremely resistant, corresponding to 4% of the total. The stability of resistance of these two genotypes was evaluated in relation to 10 isolates of S. rolfsii. Both genotypes showed a good level of resistance, thus demonstrating the potential of its use as a strategy for management of collar rot of the lima bean crop. / A podridão do colo, causada por Sclerotium rolfsii, é uma importante doença que pode incidir em fava (Phaseolus lunatus L.) no Nordeste brasileiro. Visando selecionar genótipos com potencial de utilização no manejo da doença, foram avaliados 50 genótipos de fava, em relação a um isolado de S. rolfsii. Plantas com 10 dias de idade foram inoculadas pelo método de ferimento do colo e deposição do escleródio do patógeno. A avaliação ocorreu aos 10 dias após a inoculação pela mensuração da incidência da doença, considerando a porcentagem de plantas com sintomas em relação ao total de plantas por vaso. A maioria dos genótipos (58%) se comportou como altamente suscetível ao patógeno, enquanto que 28% foram classificadas como suscetíveis e 10% como medianamente resistentes. Somente dois genótipos (F-2 e F-25) se comportaram como altamente resistentes, correspondendo a 4% do total. A estabilidade da resistência destes dois genótipos foi avaliada em relação a 10 isolados de S. rolfsii. Ambos os genótipos apresentaram um bom nível de resistência, demonstrando potencial de utilização como estratégia de manejo da podridão do colo na cultura da fava.

Orientador: Yong K. Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_AliceFujita_M.pdf: 897627 bytes, checksum: 3a8e323d6f68e62513bf09906ac96620 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Há evidências de que o consumo de soja beneficia a saúde contribuindo para a prevenção de doenças crônicas devido as isoflavonas presentes nessa leguminosa. Essas isoflavonas têm sido intensamente estudadas devido suas propriedades biológicas, tais como: atividade estrogênica e anti-estrogênica, anti-carcinogênica, antioxidante, antifúngica e anti-hemolítica. A soja possui três tipos de isoflavonas agliconas: daidzeína, genisteína e gliciteína. As mesmas isoflavonas quando glicosiladas são chamadas daidzina, genistina e glicitina. A enzima b-glicosidase é capaz de transformar isoflavonas glicosiladas em agliconas. Há evidências que as isoflavonas glicosiladas não são absorvidas pelo intestino somente as agliconas são absorvidas. O presente trabalho teve como objetivo estudar b-glicosidases de fungos filamentosos e b-glicosidase de leguminosas. A partir da extração enzimática foram selecionadas as de maior atividade enzimática, uma enzima de feijão fava (Phaseolus lunatus) com 0,71U/mL e outra enzima de Aspergillus niger com 0,77U/mL. Foi então feita caracterização bioquímica dos extratos brutos enzimáticos. O extrato bruto de feijão fava apresentou pH e temperatura ótimos a pH 5,5 e 60°C, respectivamente. Mostrou-se estável em uma faixa ampla de pH entre 5,0 a 9,0 e temperatura de 40°C a 55°C. O extrato bruto de Aspergillus niger teve pH e temperatura ótimos a pH 5,0 e 60°C, respectivamente. Mostrou-se estável a uma temperatura de 40°C a 55°C e em pH de 4,0 a 9,0. As enzimas, vegetal e microbiana, foram parcialmente purificadas. A b-glicosidase de feijão fava foi purificada 4 vezes em coluna CM-Sepharose com 77,05% de recuperação e atividade específica de 0,18U/mg de proteína. Apresentando 5 bandas na eletroforese SDS-PAGE. A b-glicosidade de A. niger foi purificada 14 vezes em coluna CM-Sephadex C-50 com 2,2%de recuperaçãoe atividade específica de 17U/mg de proteína e apresentou 4 bandas na eletroforese. O estudo da aplicação das enzimas variando o substrato e sua concentração, tempo de reação, tipo e quantidade da enzima para a conversão das isoflavonas glicosiladas em agliconas mostrou-se que todos esses fatores podem influenciar a conversão. Pode-se concluir que enzimas de Phaseolus lunatus e Aspergillus niger convertem isoflavonas glicosiladas (daidzina e genistina) em isoflavonas agliconas (daidzeína e genisteína) / Abstract: There are evidences that the consumption of soy products provides benefits that may help prevent against chronic diseases due to the isoflavones present in these seeds. The isoflavones have been intensively studied due to their biological properties, such as: estrogenic and anti-estrogenic activities, anti-carcinogenic, antioxidative, antifungal and antihemolytic activities. The soybeans have three types of isoflavones aglycones: daidzein, genistein and glycitein. In the b-glucosidase form, they become: daidzin, genistin and glicitin. Several workers reported that the enzyme b-glucosidase is able to convert isoflavone glycosides to aglucones. Others artic1es showed that the isoflavone glycosides are not absorbed in the gut, only the aglucones are absorbed. The aim of this work was to study P-glucosidase from filamentous fungus and b-glucosidase from leguminous seeds. It was selected enzymes which had the highest activity, the enzyme from lima beans (Phaseolus lunatus) with 0.71U/mL and other enzyme from Aspergillus niger with 0.77U/mL. The crude extract from lima beans showed optimum activity at pH 5.5 and 60°C, respectively. It's had high thermo stability and pH range of action was between 5.0 and 9.0 and temperature was 40°C to 55°C. The crude extract from Aspergillus niger had maximum activity at pH 5.0 and 60°C and it's also showed high thermo stability at 40°C to 55°C and stable in pH between 4.0 to 9.0. The following steps were purified vegetal and microbial enzymes. The b-glucosidase from lima beans was purified 4 times by CM-Sepharose column and obtained 77.05% of recovered and specific activity of 0.18U/mg of protein. The SDS-P AGE e1ectrophoresis gave 5 bands. The P-g1ucosidase from A.niger was purified 14 times by CM-Sephadex C 50 column and obtained 2.2% of recovered and specific activity of 17U/mg of protein. The electrophoresis gave 4 bands. After that, were studied applications of enzymes measuring the profile of isoflavones: changing the substrate and their concentration, reaction time, type and amount of enzyme to convert isoflavone glycosides in aglucones and were observed that all factors influenced the conversion. In conclusion enzymes from Phaseolus lunatus and Aspergillus niger hydrolyzed the isoflavone glycosides (daidzin and genistin) to yield isoflavone aglucones (daidzein and genistein) / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-22T14:38:08Z No. of bitstreams: 1 Walma Nogueira Ramos Guimaraes.pdf: 1356016 bytes, checksum: 2e17b7c52a1d154c9fad108c417c905f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T14:38:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Walma Nogueira Ramos Guimaraes.pdf: 1356016 bytes, checksum: 2e17b7c52a1d154c9fad108c417c905f (MD5) Previous issue date: 2005-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Twenty-two lima-beans accessions, which compound the Germoplasm Collection of the Agronomy Department of Federal Rural University of Pernambuco (UFRPE), coming from the States of Ceará, Paraíba and Pernambuco, Brazil, were characterized by their morphological and molecular characteristics (RAPD – Random Amplified Polimorphiysm of DNA). In morphological analysis twenty-four characteristics and in the molecular one were used, seventy-six locis RAPD (polymorphic and morphologic). At the first phase was carried out molecular analyses of twenty-two accessions to assess the genetic variability among them, and then, fourteen of these were morphologically and moleculary characterized. The analysis of sample showed the formation of two main groups and four subgroups. We noticed high genetic variability among the twenty-two accessions. The genetically closer genotypes were FA-01 and FA-02, coming from Ceará, with 85.4% similarity, and the less similar were FA-07 and FA-20, coming from Ceará and Pernambuco, respectively, with 35.9% similarity. Related to the morphological characterization of the fourteen accessions, noticed the genotype FA-13 stood out from the others by presenting higher values of seed weight, number of seeds per pod, length and width of pod, while the FA-16 presented lower values of weight ofone hundred seeds, seeds very small, lower number of pod per plant, lower length of pod and lower production. / Os acessos de feijão-fava que compõe a Coleção de Germoplasma do Departamento de Agronomia da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) oriundos dos Estados do Ceará, Paraíba e Pernambuco, foram caracterizados quanto às características morfológicas e moleculares (RAPDRandom Amplified Polimorphiysm of DNA). Na análise foram utilizados vinte e oito características morfológicas e setenta e seis locos RAPD (polimórficos e monomórficos). Na primeira etapa foi realizada a análise molecular de vinte e dois acessos para avaliar a variabilidade genética entre eles. Quatorze destes acessos foram caracterizados morfológica e molecularmente. A análise de agrupamento mostrou a formação de dois grupos principais e quatro subgrupos, constatou-se elevada variabilidade genética entre os vinte e dois acessos. Os genótipos mais próximos geneticamente foram FA-01 e FA-02, provenientes do Ceará, com grau de similaridade de 85,4% e os mais distantes foram FA-07 e FA-20, provenientes do Ceará e Pernambuco, respectivamente, com grau de similaridade de 35,9%.Quanto à caracterização morfológica dos quatorze acessos, observou-se que o genótipo FA-13 se destacou dos demais por apresentar maiores valores no peso das sementes, no número de sementes por vagem, no comprimento e largura da vagem, enquanto o genótipo FA-16 apresentou menores valores de peso de cem sementes, sementes muito pequenas, menor número de vagem por planta, menor comprimento de vagem e menor produção de semente por planta.