O corpo lúteo (CL) canino é responsável pela síntese de E2 durante o diestro. O E2 atua de forma autócrina e/ou parácrina sobre essa glândula. O mecanismo de atuação do E2 depende da razão entre receptor alfa (ERα) e receptor beta (ERβ). A ligação ao ERα tem efeito proliferativo e ao ERβ antiproliferativo. O objetivo deste trabalho foi entender a sinalização mediada pelo ERα e ERβ no processo de formação e regressão do CL. CLs foram obtidos de cadelas não prenhes (n=30) nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 (n=5/grupo) após a ovulação (po). No dia da ovariossalpingohisterectomia foi colhido sangue para mensuração das concentrações de P4 e E2. Dezoito CLs (n=3/grupo) foram submetidos ao sequenciamento de RNA (RNAseq). Os genes diferencialmente expressos (DE) identificados pelo RNAseq foram submetidos ao software oPOSSUM3 para identificação das regiões de ligação mais representadas nos fatores de transcrição relacionados aos genes do ERα (ESR1) e ERβ (ESR2). A análise de expressão temporal revelou a presença de 5.116 diferencialmente expressos (DE) em pelo menos uma comparação e 1.106 não foram anotados ainda no genoma canino, destes genes DE 295 apresentavam regiões de ligação de fatores de transcrição em comum com ESR1 e ESR2. Dez genes DE foram selecionados para validação dos resultados de RNAseq através do qPCR; usando o GAPDH como gene de referência. Desses genes, quatro apresentaram regioes em comum com ESR2 (LEF-1; PAPPA; NDGR2 ATP1A1) e um com ESR1 (CAV1) e os demais controlam proliferação celular (CTNNB1; CCND1; IGFBP 3, 4 e 5). A expressão proteíca de PAPPA e IGFBP 3, 4 e 5 (componentes do sistema IGF) foi avaliada também por imunohistoquímica. Durante a primeira metade do diestro, nossos resultados indicam que a sinalização mediada pelo E2 ocorre via interação do ERα com CAV-1 (sinalização não genômica), ativando as vias de sinalização IGF e WNT/βcatenina, regulando o processo de proliferação celular. Enquanto na segunda metade, o ERβ regularia a expressão gênica de NDGR2 e ATP1A1, contribuindo para a regressão do CL. Assim nos resultados sugerem que o E2 atue tanto como um fator luteotrófico e quanto regulador da regressão do CL canino. / The canine corpus luteum (CL) is responsible for E2 synthesis during diestrus, which acts in an autocrine and / or paracrine manner in this gland. The E2 mechanism of action depends on the ratio between alpha (ERα) and beta (ERβ) receptor The binding to ERα has a proliferative effect whereas to ERβ an antiproliferative. The objective of this study was to understand the signaling mediated by ERα and ERβ in the formation and regression of the CL. CLs were obtained from non-pregnant bitches (n = 30) on days 10, 20, 30, 40, 50 and 60 (n = 5 / group) post-ovulation (po). On the day of ovariohysterectomy blood was collected for measurement of P4 and E2 concentrations. Eighteen CLs (n = 3 / group) were subjected to RNA sequencing (RNA-Seq). Genes differentially expressed (DE) identified by RNA-Seq were submitted to oPOSSUM3 software for detection of over-represented transcription factors binding sites (TFBS) related to the ERα (ESR1) and ERβ (ESR2) genes. The temporal expression analysis revealed the presence of 5116 differentially expressed (DE) genes in at least one comparison, and 1106 genes, which have not been recorded to the canine genome yet From these, 295 genes showed TFBS in common with ESR1 and ESR2. Ten DE genes were selected to validate the results of RNA-Seq by qPCR; using GAPDH as reference gene. Of these genes, four had TFBS in common with ESR2 (LEF-1; PAPPA; NDGR2; ATP1A1) and one with ESR1 (CAV1) and others genes were chosen because they control cell proliferation (CTNNB1; CCND1, IGFBP 3, 4 and 5). Protein expression of the IGF related genes (PAPPA and IGFBP 3, 4 and 5) was also evaluated by immunohistochemistry. During the first half of diestrus, it appears that E2 mediated signaling occurs via interaction of ERα with CAV-1 (non-genomic signaling), activating signaling pathways of IGF and WNT / βcatenin, then regulating the cell proliferation process. Whereas in the second half, ERβ appears to regulate NDGR2 and ATP1A1 gene expression, contributing to the regression of the CL. Thus our results suggest that E2 may act as a luteotrophic and also a luteolytic factor in the canine CL.

O uso de biotecnologias pode ser um método eficaz para melhorar a eficiência da reprodução e aumentar a produção de animais geneticamente superiores. O tratamento superovulatório é uma técnica comum utilizada com o objetivo de difundir o material genético desejado, embora seu uso em búfalos ainda apresente limitações, principalmente relacionada à baixa taxa de recuperação de embriões. O corpo lúteo (CL) é uma glândula reprodutiva transitória que produz progesterona, requerida para o estabelecimento e manutenção da prenhez e regulação do ciclo reprodutivo. O desenvolvimento e as funções do corpo lúteo são afetados pela hiperestimulação ovariana. As células luteínicas de animais superovulados apresentam características compatíveis com alta síntese de proteína. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e o fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF) são reguladores importantes do desenvolvimento e função do CL, e também são afetados pelo tratamento superovulatorio. Vários estudos sugerem que o LH (hormônio luteinizante) e hCG (gonadotrofina coriônica humana) modulam a expressão dos fatores de crescimento. Este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão gênica e protéica dos sistemas VEGF e bFGF em corpo lúteo cíclico de búfalas não tratadas e superovuladas. Foram utilizados vinte corporea lutea (CLL) divididos em 5 grupos de acordo com o estágio do ciclo estral (2, 6, 12, 17 e 26 dias após ovulação p.o.) e o grupo 6 era composto de CLL de animais superovulados no dia 6 p.o. Os CLL foram coletados em abatedouro, dissecados e congelados imediatamente em nitrogênio líquido para posterior extração de proteína e de mRNA. A análise protéica do VEGF, KDR, bFGF, FGFR-2 e FGFR-3 foi determinada por western blotting, enquanto a análise da expressão gênica de VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 a 4, por RT-PCR em tempo real. No CL de búfalas superovuladas observou-se maior expressão protéica dos sistemas VEGF e bFGF, em relação aos animais não tratados (p<0,05). Por outro lado, a expressão do mRNA de todos os genes estudados decresceu (sistema VEGF-A p<0.001, bFGF, FGFR-1 e FGFR-3, p<0.05) ou apresentou tendência a decrescer (FGFR-2 e FGFR-4, p<0.1) nos animais superovulados. Durante o ciclo estral, a expressão protéica do VEGF não variou, apesar da expressão de todas as outras proteínas e mRNA estudados apresetarem variações de acordo com a fase do ciclo estral. Os resultados obtidos sugerem que o tratamento superovulatório aumenta a taxa de tradução dos fatores angiogênicos no CL de búfalas, e que a expressão dos sistemas VEGF e bFGF ao longo do ciclo estral é tempo-dependente, indicando um papel importante destes fatores na regulação das funções do CL. / Biotechniques can be an effective way of improving reproduction efficiency and enhancing the production of genetically superior animals. The superovulatory treatment is a common technique aiming to spread desired genetical material, although its use in buffalos still presents limitations, mainly the low embryo recovery rate. The corpus luteum (CL) is a temporary endocrine gland that produces progesterone (P), which is required to the establishment and maintenance of pregnancy and regulation of reproductive cycle. CL development and function are affected by ovarian hyperestimulation. The luteal cells of superovulated animals are described to show characteristics compatible with higher protein synthesis. The vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) are important regulators of CL and are also affected by superovulatory treatment. Several studies suggest that LH (luteinizing hormone) and hCG (human chorionic gonadotropin) modulate expression of growth factors. The aim of this work was to access gene and protein expression of VEGF and bFGF systems in cyclic CL of nontreated and superovulated water buffalos. Twenty water buffaloes corpora lutea (CLL) were divided in five groups according to estrous cycle stage (days 2, 6, 12, 17 and 26 after ovulation - p.o.) and the sixth group was composed by superovulated CLL from day 6 p.o. The CLL were collected at the slaughterhouse, dissected and frozen immediately in liquid nitrogen for posterior protein and mRNA extraction. Protein expression of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 as well as bFGF and its receptors FGFR-2 and FGFR-3 was measured by western blotting (WB). For the relative gene expression of VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 to 4, we used real time RT-PCR. VEGF and bFGF systems protein expression showed an increase (p <0.05) in superovulated CLL compared to non-treated CLL on day 6 after p.o. On the other hand, mRNA expression from all studied genes was decreased (VEGF-A system p<0.001, bFGF, FGFR-1 and FGFR-3, p<0.05) or tended to decrease (FGFR-2 and FGFR-4, p<0.1) in superovulated CLL. In estrous cycle CLL VEGF protein did not show a time dependent expression although all other proteins and mRNAs expression were dependent on estrous cycle stage. These results indicate that the superovulatory treatment increased transduction rate of angiogenic factors in CL and that VEGF and bFGF systems are expressed in a time-dependent manner during the estrous cycle, indicating that these growth factors are important regulators of CL function.

O presente estudo visou avaliar o efeito das características morfológicas e da dinâmica vascular do folículo e corpo lúteo sobre a fertilidade de vacas de corte submetidas à protocolo de sincronização de estro e ovulação. Para isso o estudo foi dividido em três experimentos sendo: No primeiro experimento foi avaliado, no momento da transferência de embriões (TE), a vascularização do corpo lúteo e sua relação com as taxas de prenhez em vacas multíparas Nelore utilizadas como receptoras de embriões. No segundo experimento analisou-se a área e vascularização do folículo no momento da inseminação artificial em vacas, novilhas e primíparas Nelore e vacas Tabapuã multíparas submetidas a protocolo de sincronização de estro e ovulação. No dia 11 após as inseminações foram avaliados a área, diâmetro e vascularização do corpo lúteo e no dia 30 realizou-se o diagnóstico gestacional dos animais. No terceiro experimento foram utilizadas vacas multíparas Nelore e cruzadas submetidas ao mesmo protocolo de sincronização de estro e ovulação do experimento 2. Neste experimento foi analisada a área dos folículos no momento da inseminação artificial e aplicados 400 UI de eCG 14 dias após, quando então avaliou-se o tamanho do corpo lúteo e dos folículos existentes. No dia 30 após a IA foi realizado o diagnóstico gestacional e análise da vascularização do corpo lúteo permitindo avaliar a relação da aplicação do eCG com o aumento da vascularização e taxas de prenhez. No presente estudo foi encontrada uma provável correlação positiva em relação à vascularização e tamanho do folículo pré-ovulatório com o tamanho e vascularização do corpo lúteo, porém apenas nos experimentos 1 e 3 houve um aumento nas taxas de prenhez conforme o aumento na vascularização. / The present study evaluated the effect of the morphological characteristics and the vascular dynamics of the follicle and corpus luteum in the fertility of beef cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation. Three experiments were done. In the first experiment, the corpus luteum vascular perfusion and its relationship with the pregnancy rates of Nelore recipient cows after embryo transfer (ET) were evaluated. In the second experiment, the area and vascular perfusion of the follicle at the time of artificial insemination (AI), the area, diameter and vascular perfusion of the corpus luteum on Day 11 after ovulation of Nelore cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation were evaluated. In the third experiment, Nelore cows were submitted to the same protocol of estrus synchronization and ovulation used in experiment 2 and the area of the follicle was measured at the time of the AI. After 14 days of the AI, 400 UI de eCG was given to the cows and the size of the corpus Luteum and the largest follicle were evaluated. On Day 30 after AI the size and vascular perfusion of the corpus luteum was evaluated. The pregnancy diagnosis was done on Day 30 after ovulation for all the three experiments. In the present study, it was found a positive correlation between the vascular perfusion and the size of the pre-ovulatory follicle, and the size and vascular perfusion of the corpus luteum. However, only in the experiments 1 and 3 the pregnancy rates increased with the increase in the corpus luteum vascular perfusion.

Biotécnicas aplicadas à reprodução animal são empregadas com o intuito de melhorar qualitativa e quantitativamente os rebanhos. A superovulação assim como a estimulação do folículo dominante utilizando-se doses suprafisiológicas de eCG (gonadotrofina coriônica eqüina) são empregadas em bovinos e bubalinos, mas nem sempre alcançam os resultados esperados. Entretanto, foram relatadas alterações morfofuncionais em corpos lúteos (CL) de animais submetidos a estes tratamentos, o que implica, necessariamente, em levantamento de hipóteses relativas ao(s) mecanismo(s) pelo(s) qual(is) as gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos folículos e corpos lúteos resultantes. Com o intuito de melhor compreensão do papel exercido pelo eCG sobre a célula luteínica bovina, 16 vacas foram sincronizadas e submetidas (grupos tratados) ou não (grupo controle) ao tratamento com eCG. O tratamento foi realizado previamente (superovulação) ou posteriormente (estimulação do folículo dominante) ao desvio folicular. No dia 6 após a ovulação, estes animais foram abatidos e os CL coletados para realização de análises histológicas e ultra-estruturais, assim como o sangue coletado para dosagem de progesterona. Para comparação dos dados obtidos entre os diferentes grupos utilizou-se o programa GraphPrism e as médias foram consideradas diferentes quando p < 0.05. Em relação à densidade de mitocôndrias e densidade numérica das mitocôndrias elipsóides não houve diferença significativa entre os grupos estudados. Quando se calculou o volume total das mitocôndrias no CL bovino, houve diferença significativa do grupo superovulado em relação aos outros grupos. Já para as mitocôndrias esferóides observou-se diferença significativa do grupo estimulado comparado aos grupos controle e superovulado. À imunofluorescência os animais do grupo superovulado apresentaram visualmente uma marcação mais fluorescente intensa para mitocôndrias quando comparados aos grupos controle e estimulado; e o grupo estimulado apresentou uma marcação mais intensa em relação ao grupo controle. Houve diferença significativa entre os três grupos em relação à quantidade das células luteínicas grandes. Quando se corrigiu o número de células luteínicas grandes pelo volume do CL, os mesmos resultados foram encontrados. Quanto às medidas do maior diâmetro das células luteínicas grandes houve uma diferença significativa quando comparado o grupo estimulado com os demais. Aspectos qualitativos da microvascularização do CL em animais controle e superovulados revelam vascularização mais abundante no grupo tratado. Estes dados apontam para modificações morfológicas da célula luteínica e do CL bovino direcionadas à maior produção hormonal após tratamento com eCG e indicam que doses diferentes aplicadas em momentos diferentes do ciclo estral levam à respostas diversas da célula luteínica e do próprio CL. / Biotechnologies applied to animal reproduction are employed in order to improve livestock quality and quantity. Superovulation and the stimulation of the dominant follicle using supraphysiological doses of eCG (equine chorionic gonadotropin) are used in cattle and buffaloes, but not always achieve the expected results. However, morphofunctional changes in corpora lutea (CL) derived from animals submitted to these treatments were reported, which necessarily implies a survey of hypotheses regarding the mechanism(s) by which exogenous gonadotrophins result in altered cellular functions in the follicles and corpora lutea. In order to better understand the role played by eCG on bovine luteal cells, 16 cows were synchronized and submitted (treated groups) or not (control group) to treatment with eCG. The treatment was performed previously (superovulation) or after (stimulation of the dominant follicle) follicular deviation. At 6 days after ovulation, animals were slaughtered and the CL collected for histological and ultrastructural analysis, as well as blood for determining plasmaprogesterone.For statistical analysis the program Graph Prism was used and mean considered significant different when p < 0.05. In relation to mitochondria number and volume density there were no differences among the studied groups. Values of mitochondria total volume in CL were different if stimulated was compared to the other groups. Imunofluoresce for mitochondria showed a more intensive signal for animals from the superovulated group, followed by animals belonging to the stimulated group. The number of large luteal cells was different among all groups. Even though this number was corrected by CL volume, the same results were found. The biggest diameter of large luteal cells was compared among the groups and stimulated group showed higher values. Qualitative aspects of CL microvascularization in control and superovulated animals reveal more abundant vascularization in treated group. These data point towards morphological modification of bovine CL and luteal cell directed to increased hormonal production after eCG treatment. Moreover, results indicate that different eCG dosis applied in different time points of estrous cycle lead to different responses from CL and luteal cells.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A aspiração folicular tem sido aplicada na pesquisa com diferentes finalidades. Atualmente a técnica está sendo utilizada para conhecer a natureza da dinâmica e emergência da onda folicular e sincronização da ovulação entre os animais. Nesta pesquisa a técnica foi empregada para identificar o grupo folicular que resulta em melhores índices de luteinização e para avaliar a formação estrutural e funcional do Corpus luteum (CL). Para isto foram conduzidos dois experimentos. No experimento I as éguas mestiças foram distribuídas em grupos conforme o diâmetro folicular (Ø) aspirado: 25-29mm (n=10); 30-35mm (n=14) e >35mm (n=17). Éguas com ovulação natural serviram como Controle (n=18). A produção de progesterona (P4) das éguas com a ovulação natural foi maior (P<0,0001) quando comparada as éguas aspiradas. A análise de regressão linear estabeleceu que a concentração de P4 iminuiu ,365ng/mL/dia (P=0,0065) do dia da aspiração (D0) até D8 no grupo de éguas aspiradas com diâmetro folicular entre 25-29mm. No entanto, a P4 aumentou 0,258ng/mL/dia (P=0,001) nas éguas com diâmetro folicular entre 30-35mm; 0,481ng/mL/dia (P<0,0001) nas éguas com folículos >35mm e 1,236ng/mL/dia (P<0,0001) nas éguas com ovulação natural. Das 25 éguas aspiradas que luteinizaram (P4>1ng/mL), em 23 (92%) a concentração sérica de P4 foi >2ng/mL. Destas, 75% (3/4), 90% (9/10) e 100% (11/11) das éguas, pertenciam aos grupos com diâmetro folicular de 25-29mm, 30-35mm, >35mm, respectivamente. No Experimento II (n=26), comparou-se a aparência ultra-sonográfica do Corpus luteum com a produção de P4 sérica. Para isto um critério de avaliação subjetivo foi elaborado para definir a forma, a aparência e a ecogenicidade do Corpus luteum: CL 1 Corpus luteum não visualizado após aspiração; CL 2 aparência de estrutura lútea formada, porém pouco evidente e com baixa ecogenicidade; CL 3 Imagem compatível com Corpus luteum, aparência de estrutura lútea formada e com evidente ecogenicidade. A taxa de luteinização (P>0,05) dos folículos aspirados foi de 57,14% (4/7; Ø entre 25-30mm), 75% (6/8; Ø entre 30-35mm) e 72,73% (8/11; Ø > 35mm). Os critérios ecográficos aqui definidos corresponderam significativamente (P<0,0001) aos teores séricos de P4 produzidos. Das 18 éguas aspiradas que apresentaram luteinização (n=26) confirmada pela avaliação sérica (P4 > 1ng/mL), 94,44% (n = 17) apresentaram aparência de corpo lúteo de acordo com o critério ecográfico estabelecido (P=0,0372). Destas, em 16 animais a concentração sérica de P4 foi superior a 2ng/mL no dia 8 pós-aspiração. A concentração sérica de P4 foi compatível em 100% (n=15; P=0,0056) dos CL avaliados visualmente como escore 3, sendo superior a 2ng/mL em 93,33% (14/15) das éguas (Experimento II). Estes resultados sugerem que um Corpus luteum funcional pode ser induzido em éguas pela técnica de aspiração. No entanto, para que a produção de progesterona seja compatível com a de um Corpus luteum produzido através de ovulação natural é necessário que o folículo a ser aspirado tenha no mínimo 35mm de diâmetro. O escore ecográfico atribuído apresentou-se como um método de seleção prático e eficaz para estimar a luteinização e foi adequado para o preparo de éguas receptoras para transferência de embriões.

O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos da aplicação de hCG no quarto dia após a inseminação a tempo fixo (IATF) sobre o tamanho do corpo lúteo (CL) existente, a indução de CL acessórios, a concentração de progesterona (P4) sérica e taxa de prenhez de vacas de corte em lactação. Nos três experimentos, vacas de corte multíparas (n=569), cruza Bos taurus, com período pós-parto entre 45 e 70 dias, foram sincronizadas com a administração de 2mg de benzoato de estradiol i.m. e a inserção de um dispositivo intravaginal contendo 0,750g de P4 (Dia -9). Sete dias após, administraram-se 150 μg de D-cloprostenol e 0,5 mg de cipionato de estradiol, i.m., no momento da retirada do dispositivo (Dia -2). Sessenta vacas de corte em lactação foram divididas aleatoriamente em dois grupos: hCG (n=30) tratadas com 1500UI i.m. de hCG e Controle (n=30) injetadas com 1,5 mL de solução salina i.m. no dia 4 depois do estro (Dia 0). Realizaram-se coletas sanguíneas dos animais para mensuração da concentração sérica de P4 nos Dias 4, 7, 10 e 14 do ciclo estral. Para acompanhamento da dinâmica ovariana, sessenta animais foram divididos aleatoriamente nos grupos hCG (n=30) ou Controle (n=30) e receberam o mesmo protocolo hormonal como citado anteriormente. No Dia 0, os ovários foram examinados por ultrassonografia transretal para determinar o diâmetro do folículo ovulatório; no Dia 4, o diâmetro do FD e presença do CL e no Dia 7 para mensurar a área luteal do CL e a presença de CL acessório. Quinhentas e sessenta e nove vacas (hCG, n= 269 e Controle, n= 300) foram inseminadas a tempo fixo 52-56 horas depois da retirada dos implantes de P4 e tratadas no Dia 4, conforme o protocolo descrito. O diagnóstico de prenhez foi realizado por ultrassonografia 30 dias após a IATF. Os resultados observados, mostraram que vacas tratadas com hCG no Dia 4 apresentaram maiores concentrações sérica de P4 no Dia 7, comparadas com as do grupo Controle (4,45 vs. 3,37ng/mL, respectivamente; p<0,05), mas níveis semelhantes de P4 nos Dias 10 e 14. Os animais do grupo hCG apresentaram CL com maior (p<0,01) área luteal no Dia 7, em relação ao grupo Controle (3,52 cm² vs. 2,66 cm², respectivamente) e uma incidência de 29,6 % de indução da ovulação do FD presente no Dia 4. Observou-se uma taxa de prenhez maior (p=0,071) no grupo tratado com hCG (53,9%) comparando-se com as vacas não tratadas (46,3%). Conclui-se que a administração de hCG no quarto dia do ciclo estral promove o aumento da área do CL, melhora função luteal, pode induzir a formação de CL acessório e tende a aumentar a taxa de prenhez de vacas de corte em lactação. / The aim of this study was to determine the effects of injection of hCG on the fourth day after the TAI on the size of the existing corpus luteum (CL), the induction of CL accessories, the concentration of progesterone (P4) levels and the possibility of increasing the rate of pregnancy of lactating beef cows subjected to synchronization of estrus and ovulation. Multiparous beef cows (n= 569), Bos taurus crossbreed with postpartum between 45 and 70 days were synchronized by administration of 2mg of estradiol benzoate im and the insertion of an intravaginal device containing 0,750g of P4 (Day -9). Seven days later, were administered 150mg of D- cloprostenol 0.5 mg of estradiol cypionate, im, at the time of device removal (Day -2). Sixty lactating beef cows were randomly divided into two groups: hCG (n= 30) treated with im 1500UI hCG and Control (n= 30) injected with 1.5 ml of saline im on day 4 after estrus (Day 0). There were blood collections of animals for measurement by radioimmunoassay of serum P4 on Days 4, 7, 10 and 14 of the estrous cycle. To evaluate the ovarian dinamics, sixty animals (hCG, n= 30 and Control, n = 30) received the same hormonal protocol and were uniformly distributed into groups according to the diameter of the ovulatory follicles on day 0 (estrus). On Day 0, the ovaries were examined by transrectal ultrasonography to determine the diameter of the ovulatory follicle, on Day 4, the diameter of the dominant follicle (DF) and the presence of CL on Day 7 to measure the area of the luteal CL and the presence of accessory CL. Five hundred and sixty-nine cows (hCG, n= 269 and Control, n= 300) were inseminated at a fixed time 52 to 56 hours after removal of the P4 devices treated on Day 4, according to the protocol described previously. The diagnosis of pregnancy were performed by ultrasonography 30 days after TAI. The results demonstrate that cows treated with hCG on Day 4 showed higher serum concentrations of P4 on Day 7, compared with the control group (4.45 vs. 3.37ng/mL, respectively, (p<0.05), but similar levels of P4 on Days 10 and 14. The animals of hCG group had greater (p<0,01) luteal area on Day 7, compared to the Control group (3.52cm² vs. 2.66cm², respectively) and a 29.6% incidence of induction DF ovulation present on Day 4. We observed a higher rate of pregnancy (p= 0.071) in the group treated with hCG (53.9%) comparing with untreated cows (46.3%). We conclude that administration of hCG on the fourth day of the estrous cycle increase the CL area, improves luteal function, can induce the formation of accessory CL and tends to increase the pregnancy rate of lactating beef cows.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francielle Alves Caldato.pdf: 206297 bytes, checksum: 76f7cbc3c353feae2e5df0057c4ca517 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / The present study aimed to evaluate the effects of supplementation with resveratrol on the reproductive organs (uterus and ovaries) of female rats With diet-induced obesity palatable diet (DPH). We studied 64 Wistar rats were divided into 4 groups: control group (G-CM n = 16): animals fed with commercial feed supplementation Labina ® over placebo (0.5 mL of deionized water, by gavage); Control Group Res + (G-MR n = 16) animals fed commercial feed supplemented with more Labina ® 30 mg resveratrol / kg / day diluted in 0.5 ml deionized water by gavage; group O(G-CO n = 16): animals fed palatable diet (DPH) over placebo supplementation; group O + Res (G- RO n = 16): animals fed with DPH or supplemented with resveratrol 30mg / kg / day. The animals received the diets and supplements for 12 weeks (84 days) and after the experimental period, the rats were euthanized and organs (uterus and ovaries) were removed, weighed and processed for histology. From the results obtained we conclude that supplementation with resveratrol increases ovarian activity evidenced by increase of LCs, as well as in ovarian follicles. In the uterus, the animals that receiving resveratrol was demonstrated by the proliferative capacity characteristic of NORs smaller and in greater quantity. / O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação com resveratrol sobre os órgãos reprodutivos (útero e ovários) de ratas Wistar com obesidade induzida por dieta palatável hiperlipídica (DPH). Foram estudadas 64 ratas Wistar, divididas em 4 grupos: Grupo Controle (G-CM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação de placebo (0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem); Grupo Controle+Res (G-RM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia diluídos em 0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem; Grupo Obeso (G-CO n=16): animais alimentados com dieta palatável hiperlipídica (DPH) mais suplementação de placebo; Grupo Obeso+Res (G-RO n=16): animais alimentados com DPH mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia. Os animais receberam as dietas e suplementos durante 12 semanas (84 dias) e após o período experimental as ratas foram eutanasiadas e os órgãos (útero e ovários) retirados, pesados e processados para histologia. Pelos resultados obtidos concluímos que a suplementação com resveratrol aumenta a atividade ovariana evidenciada pelo aumento de CLs, bem como nos folículos ovarianos. No útero dos animais que receberam o resveratrol houve maior capacidade proliferativa demonstrada pela característica das NORs (regiões organizadoras de nucléolos) pequenas e em maior quantidade.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francielle Alves Caldato.pdf: 206297 bytes, checksum: 76f7cbc3c353feae2e5df0057c4ca517 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / The present study aimed to evaluate the effects of supplementation with resveratrol on the reproductive organs (uterus and ovaries) of female rats With diet-induced obesity palatable diet (DPH). We studied 64 Wistar rats were divided into 4 groups: control group (G-CM n = 16): animals fed with commercial feed supplementation Labina ® over placebo (0.5 mL of deionized water, by gavage); Control Group Res + (G-MR n = 16) animals fed commercial feed supplemented with more Labina ® 30 mg resveratrol / kg / day diluted in 0.5 ml deionized water by gavage; group O(G-CO n = 16): animals fed palatable diet (DPH) over placebo supplementation; group O + Res (G- RO n = 16): animals fed with DPH or supplemented with resveratrol 30mg / kg / day. The animals received the diets and supplements for 12 weeks (84 days) and after the experimental period, the rats were euthanized and organs (uterus and ovaries) were removed, weighed and processed for histology. From the results obtained we conclude that supplementation with resveratrol increases ovarian activity evidenced by increase of LCs, as well as in ovarian follicles. In the uterus, the animals that receiving resveratrol was demonstrated by the proliferative capacity characteristic of NORs smaller and in greater quantity. / O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação com resveratrol sobre os órgãos reprodutivos (útero e ovários) de ratas Wistar com obesidade induzida por dieta palatável hiperlipídica (DPH). Foram estudadas 64 ratas Wistar, divididas em 4 grupos: Grupo Controle (G-CM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação de placebo (0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem); Grupo Controle+Res (G-RM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia diluídos em 0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem; Grupo Obeso (G-CO n=16): animais alimentados com dieta palatável hiperlipídica (DPH) mais suplementação de placebo; Grupo Obeso+Res (G-RO n=16): animais alimentados com DPH mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia. Os animais receberam as dietas e suplementos durante 12 semanas (84 dias) e após o período experimental as ratas foram eutanasiadas e os órgãos (útero e ovários) retirados, pesados e processados para histologia. Pelos resultados obtidos concluímos que a suplementação com resveratrol aumenta a atividade ovariana evidenciada pelo aumento de CLs, bem como nos folículos ovarianos. No útero dos animais que receberam o resveratrol houve maior capacidade proliferativa demonstrada pela característica das NORs (regiões organizadoras de nucléolos) pequenas e em maior quantidade.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2016-08-15T17:53:17Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Molinari de Mattos.pdf: 259716 bytes, checksum: 4ece0001439fe6d5a4573f9a3129ac49 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabriel Molinari de Mattos.pdf: 259716 bytes, checksum: 4ece0001439fe6d5a4573f9a3129ac49 (MD5) Previous issue date: 2016-03-25 / This study aimed to evaluate the luteal development and the plasma concentration of progesterone in pregnant Nelore heifers and non-pregnant supplemented with sunflower seed. 30 animals were aged 2 to 3 years, with body condition score 2.5 to 3.5 (1 to 5), kept in Brachiaria decumbens, water and mineral salt ad libitum. Before starting the sonographic evaluations of the reproductive system, heifers were divided into two groups where they received: 1.7 kg / day of dietary supplement with 40% soybean meal and 60% sunflower seed (Group Treaty GT: n = 11) or 1.7 kg / day of dietary supplement containing 53% of soybean meal, 47% corn (control group, CG, n = 15) for 60 days. Immediately after this period heifers were synchronized ovulation with hormonal protocol TAI (artificial insemination in fixed time) lasting eight days. On AI held ultrasound examination (US) of the ovaries and blood collection to monitor the development of the corpus luteum (CL) and plasma progesterone (P4), every 48 hours for 26 days. CL diameter was observed on days 22, 24 and 26 after IA in pregnant females, where the diameter was significantly greater (P <0.05) than in non-pregnant, regardless of diet. There was no treatment effect on plasma progesterone concentrations, but the reproductive status influenced (P <0.05). There was a higher concentration of P4 in pregnant animals from day 16 after AI. It is concluded that the diet with sunflower seed did not influence the concentration of progesterone and diameter of the corpus luteum. It was observed that the reproductive status influenced the diameter P4 and CL. / Objetivou-se avaliar o desenvolvimento luteal e a concentração plasmática de progesterona em novilhas da raça Nelore prenhes e não prenhes suplementadas com semente de girassol. Foram utilizados 30 animais com idade de 2 a 3 anos, com escore de condição corporal de 2,5 a 3,5 (1 a 5), mantidas em pastagem de Brachiaria decumbens, com água e sal mineral ad libitum. Antes de iniciar as avaliações ultrassonográficas do aparelho reprodutor, as novilhas foram divididas em dois grupos, onde receberam: 1,7 Kg/dia de suplemento alimentar com 40% de farelo de soja e 60% de semente de girassol (Grupo Tratado, G-T: n=11) ou 1,7Kg/dia de suplemento alimentar contendo 53% de farelo de soja e 47% de milho (Grupo Controle, G-C: n=15) durante 60 dias. Imediatamente após este período as novilhas tiveram a ovulação sincronizada com protocolo hormonal de IATF (inseminação artificial em tempo fixo) com duração de 8 dias. No dia da IA realizou-se exame de ultrassom (US) dos ovários e coleta de sangue para acompanhar o desenvolvimento do corpo lúteo (CL) e concentração plasmática de progesterona (P4), a cada 48 horas, durante 26 dias. Foi observado diâmetro do CL nos dias 22, 24 e 26 após IA, nas fêmeas prenhes, onde o diâmetro foi significativamente maior (P<0,05) que nas não prenhes, independente da dieta. Não houve efeito do tratamento nas concentrações plasmáticas de progesterona, mas o status reprodutivo influenciou (P<0,05). Foi observada maior concentração de P4 nos animais gestantes a partir do dia 16 após IA. Conclui-se que a dieta com semente de girassol não influenciou a concentração de progesterona e diâmetro do corpo lúteo. Observou-se que o status reprodutivo influenciou a concentração de P4 e diâmetro do CL.

To increase profitability in beef and dairy cattle operations, adequate reproductive management strategies that provide high service and conception rates, especially at the beginning of the breeding season for beef cattle, and after the voluntary waiting period for dairy herds, are necessary. To achieve these goals various hormonal protocols have been developed to synchronize the emergence of a new follicular wave, estrus and ovulation, thus allowing fixed time artificial insemination (FTAI). Treatment with eCG has been included in FTAI protocols. Considering that eCG is an indispensable tool for reproductive management, a better understanding of its biological action in the final follicular growth process, ovulation and luteal development is crucial to optimize its use in hormonal protocols. At the same time, alternatives for eCG need to be tested. In this regard, it is important a better understanding of how FSH and LH act in the dominant follicle. Based on that, three studies were performed. The first study evaluated effects of eCG on fertility of 679 crossbred lactating grazing cows synchronized for FTAI. Treatment with eCG tended to increase P/AI at 30 and 60 days and increased P/AI at 30 and 60 days for cows inseminated at &le; 70 DIM but had no effect in cows receiving AI after 70 DIM. The second study evaluated the effect of eCG or different doses of hCG on the final growth of the dominant follicle in 84 Nelore cows submitted FTAI. No differences were observed for the diameter of the largest follicle on D8 or D10. However, the growth rate of the dominant follicle between D8 and D10 was greater for the groups eCG and hCG 300. In addition, more cows from the Groups hCG 300 and hCG 200 SC presented premature ovulation. Treatment with different hCG doses on D8 of a FTAI protocol failed to produce similar effects compared to eCG. The third study evaluated the effect of eCG, FSH, or hCG on follicular growth rate, ovulatory follicle size, CL volume and circulating E2 and P4 concentrations, as well as the number of large and small luteal cells in cows submitted to a protocol for synchronization of ovulation. Seventeen non-lactating Nelore cows were used. Two Latin squares were done, totaling eight replicates. The gonadotropin treatments, eCG, FSH, or hCG, were effective in increasing the follicular growth rate between D7-10 and consequently the follicular diameter on D10 and ovulatory follicle diameter in comparison to Control. In addition, treatment with different gonadotropins increased the number of large and small luteal cells, however, there was no difference in preovulatory E2 peak concentration, CL volume and circulating P4 concentration post ovulation. / Para aumentar a rentabilidade nos sistemas de produção de bovinos de corte e leiteiro, são necessárias estratégias de manejo reprodutivo que proporcionem elevadas taxas de serviço e concepção, especialmente no início da estação de monta em bovinos de corte e após o período de espera voluntária para rebanhos leiteiros. Para atingir esses objetivos, vários protocolos hormonais foram desenvolvidos com o intuito de sincronizar a onda folicular, o estro e a ovulação, permitindo assim inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Considerando que a eCG é uma ferramenta indispensável para o manejo reprodutivo, é fundamental uma melhor compreensão de sua ação biológica no processo de crescimento folicular final, ovulação e desenvolvimento luteal, otimizando seu uso em protocolos hormonais. Além disso, alternativas para a eCG precisam ser testadas. Dessa forma é importante uma melhor compreensão de como FSH e LH atuam no folículo dominante. Com base nisso, três estudos foram realizados. O primeiro avaliou os efeitos da eCG na fertilidade de 679 vacas lactantes mestiças em sistema de pastejo sincronizadas para IATF. O tratamento com eCG tendeu em aumentar a P/IA aos 30 e 60 dias e aumentou a P/IA aos 30 e 60 dias para vacas inseminadas com DEL &le; 70, mas não houve efeito nas vacas que receberam IA após 70 DEL. O segundo avaliou o efeito da eCG ou diferentes doses de hCG no crescimento final do folículo dominante em 84 vacas Nelore submetidas a IATF. Não houve diferença quanto ao diâmetro do maior folículo no D8 ou D10. No entanto, a taxa de crescimento folicular entre D8 e D10 foi maior para os grupos eCG e hCG 300. No entanto, mais vacas dos Grupos hCG 300 e hCG 200 SC apresentaram ovulação precoce. O tratamento com diferentes doses de hCG no D8 do protocolo de IATF não produziu efeitos semelhantes em relação à eCG. O terceiro estudo avaliou o efeito de eCG, FSH ou hCG na taxa de crescimento folicular, tamanho do folículo ovulatório, volume de CL e concentrações circulantes de E2 e P4, bem como o número de células lúteas grandes e pequenas em vacas submetidas a sincronização da ovulação. Foram utilizadas 17 vacas Nelore não lactantes em delineamento com dois quadrados latinos, totalizando oito réplicas. Os tratamentos com as gonadotrofinas eCG, FSH, ou hCG foram efetivos em aumentar a taxa de crescimento folicular entre D7-10 e consequentemente o diâmetro folicular no D10 e o diâmetro do folículo ovulatório em relação ao Controle. Além disso, o tratamento com diferentes gonadotrofinas aumentou o número de células lúteas grandes e pequenas sem, entretanto, se detectar diferenças no pico pré-ovulatório de E2, volume luteal e concentração circulante de P4 após a ovulação.