Orientador: Antônio Carlos Alessi / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Resumo: Os tumores mamários representam aproximadamente 52%, de todas as neoplasias observadas em cadelas. Lecitinas são proteínas naturais de origem não imune, que se ligam a carboidratos. Por existir um grande número de lecitinas com capacidade de ligação com diferentes carboidratos, esta versátil molécula tem sido utilizada em diversos segmentos da pesquisa biológica. O presente trabalho tem por objetivo investigar, em tecido mamário canino, receptores das lecitinas UEA - Ulex europaeus (carqueja), PNA - Arachis hypogaea (amendoim), HPA - Helix pomatia (caracol romano) e DBA - Dolichos biflorus (faveira) presentes em tecido mamário normal, em neoplasias mamárias e em metástases dessas neoplasias. Para tanto, foram utilizadas 125 amostras de mama, classificadas de acordo com Cassali et al., (2011). Para a quantificação da frequência da marcação foram aleatoriamente selecionados quatro campos por corte e estabelecido um valor para o percentual de células marcadas, utilizando-se objetiva de 40x. Os resultados foram submetidos às análises de variância e à comparação de médias pelo teste de Tukey (p<0,05). Para a lecitina UEA, não foi observada diferença significativa entre nenhum dos tipos histológicos. Para PNA, foi observada menor marcação no carcinoma sólido grau II, que diferiu significativamente dos demais tipos histológicos. Para HPA, observou-se menor marcação do grupo carcinossarcoma, que diferiu significativamente dos demais tipos histológicos. Para DBA, houve menor marcação do carcinoma papilar grau II com relação aos demais tipos histológicos. Na comparação das lecitinas utilizadas no presente estudo, por tipo histológico, não foi observado nenhum padrão. Quanto à formação de glicoconjugados em estruturas celulares (tipo celular e marcação de membrana, citoplasmática ou nuclear), as lecitinas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mammary tumors represent approximately 52% of all malignancies observed in dogs. Lectins are natural proteins of non-immune origin which bind to carbohydrates. Because there is a large number of lectins, with binding affinity for different carbohydrates, this versatile molecule has been used in several segments of biological research. The present study aims to investigate, in canine mammary tissue, lectins receptors UEA - Ulex europaeus (gorse), PNA - Arachis hypogaea (peanut), HPA - Helix pomatia (Roman snail) and DBA - Dolichos biflorus (horse gram) present in normal breast tissue, in breast neoplasms and metastases in these neoplasms. Thus, we used 125 samples of breast, classified according Cassali et al., (2011). To quantify the frequency of marking, four fields per section were randomly selected and a value for the percentage of labeled cells was set, using a 40x objective. The results were submitted to analysis of variance and comparison of means by Tukey test (p <0.05). For lectin UEA, there was no significant difference between any of histological types. For PNA, the lowest marking was observed in solid carcinoma grade II, which differed significantly from other histologic types. For HPA, a lower markup in carcinosarcoma group was observed, which differed significantly from other histological types. For DBA the smaller markup was for grade II papillary carcinoma in relation to other histologic types. Comparison the lectins used in this study for histological type showed no observable pattern. None of lectins had more or less marking in all groups, marking or different histological types between more and less aggressive. Lectins PNA and HPA have shown promise for the diagnostic evaluation of canine mammary neoplasms. The formation of glycoconjugates for PNA varied between different histological types and HPA was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Este estudo teve como objetivo principal avaliar a resposta tumoral ao tratamento quimioterápico neoadjuvante (QT neo) por meio da cintilografia de mamas com sestamibi-99mTc (CM) pelo método quantitativo. Estudo com 55 portadoras de CMLA, submetidas à QT neo que realizaram CM e o exame clínico (EC) pré e pós-quimioterapia e estudo do espécime cirúrgico. A quantificação da intensidade de concentração do sestamibi-99mTc foi realizada com cálculo de índice, de contagens/píxels de áreas de interesse idênticas criadas na lesão tumoral, sobre área de referência na mama contra-lateral. A resposta tumoral pela CM, pelo método quantitativo, foi determinada pela redução do índice entre os estudos pré e pós QT neo. O EC avaliou a redução da dimensão tumoral durante o tratamento, classificando-se a resposta em boa, parcial e inadequada. Houve correlação positiva, estatisticamente significativa, entre a redução do índice pela CM com a redução da dimensão tumoral pelo EC (p=O,001). Comparação de médias entre as ariáveis, redução do índice entre resposta clínica e tipo histológico, redução clínica tumor e resposta clínica e, índice pré-QT neo e redução do índice, apresentou-se significativa. Os achados da variação da concentração do sestamibi-99mTc na cintilografia de mamas pré e pós quimioterapia neoadjuvante nos permite utilizá-Ia mo método eficaz na avaliação da resposta quimioterápica neoadjuvante, uma vez, que esta quantificação reflete a biologia do tumor frente ao esquema quimioterápico. Além disso, a análise adicional do índice pré-quimioterápico sugere a utilidade para predizer a resposta ao tratamento quimioterápico. / Abstract: The main aim of this study was to evaluate the neoadjuvant chemotherapy (Neo QT) response by 99mTc-sestamibi scintimammography (SMM) through quantitative analysis. Fifty five bearers with locally advanced breast carcinoma (LABC) were undergone to Neo QT and had to SMM and clinical exam (CE) before and after chemotherapy and surgical specimen study. The 99mTc-sestamibi uptake index was made by counts/pixels in identical region of interest under tumor lesion and the refence region in the contra lateral breast. The tumour response by the index was determined by the rate reduction between the before and after Neo QT studies. The CE has evaluated the tumour size reduction during the treatment describing them as good response, partial and inadequate. Comparison of the means between variables reducing the rate of clinical response and histological type, clinical reduction of tumour and clinical response, and the pre Neo QT rate and reduction of the rate, proved to be significant. The findings of 99mTc-sestamibi uptake range on SMM before and after neoadjuvant chemotherapy allows us to use it as an effective method in the evaluation of neoadjuvant chemotherapy response once this quantification shows the biology of tumour before the chemotherapy treatment. The adictional analysis of pre chemotherapy index suggests the utility to predict the chemotherapy treatment response. / Orientador: Jorge Nahás Neto / Coorientador: Sonia Marta Moriguchi / Banca: Beatriz Lotufo Griva / Banca: José Soares Júnior / Mestre

Resumo: Por ser a maior causa de morte entre as fêmeas caninas, o câncer de mama desperta o interesse da comunidade científica, pois sua apresentação e evolução clínica são muito semelhantes aos casos de câncer de mama na mulher. No intuito de permitir a continuação dos estudos comparativos entre os tumores de cadelas e os das mulheres é fundamental a padronização da classificação histopatológica e imunoistoquímica. Por meio da técnica de Tissue microarray foi possível concentrar um grande número de amostras e compará-las numa mesma lâmina, permitindo que uma casuística maior pudesse ser analisada, evitando desperdícios de materiais e reagentes. A partir dos resultados da imunoistoquímica foi possível a reclassificação dos tumores de mama da cadela em Luminal A (RE+ e HER-2-) (36,36%), Luminal B (RE+ e HER-2 +) (9,09%), Basal (RE-, HER-2 - e p63 e/ou CK5 +) (37,88%) e Super-expressão de HER-2 (RE- e HER-2 +) (12,12%) assim como classificados em Medicina Humana. Além disso, foi realizada a marcação para a Catepsina D e proteína S100A4, para demonstrar o potencial metastático desses tumores. Os resultados permitem concluir que é possível a reclassificação dos carcinomas de mama em cadela assim como os tumores de mama em mulheres, promovendo um melhor entendimento das características moleculares por meio das imunoexpressões de proteínas. A Catepsina D e a proteína S100A4 se mostraram importantes na caracterização do potencial metastático, contudo novos estudos devem ser realizados para confirmar o papel desses marcadores nos carcinomas de mama metastáticos de cadelas e das mulheres. / Abstract: For being the biggest cause of death between the canine females, breast cancer arises the interest of the scientific community, therefore its presentation and clinical outcome are very similar to the cases of breast cancer in the woman. In intention to allow the following of comparative studies between the tumors of dogs and of the women the standardization of the histopathogical and imunohistochemical classification is needed. By the technique of Tissue microArray it was possible to concentrate a great number of samples and to compare them in one same slide, allowing that a bigger casuistry could be analyzed, preventing the waste of materials and reagents. From the results of the imunohistochemistry the reclassification of the breast tumors of the dog was possible. They're reclassified in Luminal A (RE+ and HER-2-) 36.36%), Luminal B (RE+ and HER-2 +) (9.09%), Basal (RE-, HER-2 - and p63 and/or CK5 +) (37.88%) and HER-2 Super-expression (RE- and HER-2 +) (12.12%) as well as classification in Medicine Human. Moreover, it was carried through the marking for Cathepsin D and protein S100A4, to demonstrate the metastatic potential of these tumors. The results allow concluding that the reclassification of breast carcinomas in dog as well as the breast tumors in women is possible, promoting a better agreement of the molecular characteristics by means of the imunoexpression of proteins. Cathepsin D and protein S100A4 had shown important in the characterization of the metastatic potential. However more studies must be carried through to confirm the paper of these markers in the metastatic breast carcinomas of dogs and of women. / Orientador: Noeme Sousa Rocha / Coorientador: Fernando Schmitt / Banca: Alfredo Ribeiro da Silva / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Mestre

Orientador: Claudia Aparecida Rainho / Banca: Patrícia Pintor dos Reis / Banca: Enilze Maria de Souza Fonseca Ribeiro / Resumo: Alterações epigenéticas, incluindo as alterações da metilação do DNA, das modificações de histonas e da atividade de RNAs não codificadores, são eventos frequentes em células tumorais e estão associados às mudanças da estrutura da cromatina e dos níveis de expressão gênica. O gene RASSF1, localizado em 3p21.3, é responsável pela transcrição de sete variantes a partir de regiões promotoras distintas, associadas a duas ilhas CpG. Dentre os transcritos estão RASSF1A e RASSF1C, codificados por regiões promotoras diferentes, e que têm sido descritos na literatura como codificadores de proteínas com funções celulares opostas: RASSF1A é caracterizado como supressor tumoral e é frequentemente silenciado por metilação anormal em vários tipos de câncer, enquanto RASSF1C tem sido associado a atividades oncogênicas, e não há relatos de metilação de ilha CpG associada à sua região promotora. Com a finalidade de investigar uma possível associação entre parâmetros clínicos e histopatológicos em pacientes diagnosticadas com câncer de mama e o padrão de metilação de RASSF1A e RASSF1C, foram analisadas 84 amostras de carcinomas mamários pela técnica de MS-PCR (Methylation-Specific Polymerase Chain Reaction). Para RASSF1A, foi encontrada uma frequência de metilação de 84,5% das amostras, enquanto que para RASSF1C todas as amostras apresentaram alelos exclusivamente não-metilados, o que sugere uma regulação de expressão diferente da observada para RASSF1A. Devido ao fato de 75 das 84 amostras utilizadas serem diagnosticadas como carcinomas ductais invasivos, as análises estatísticas incluíram apenas esse subtipo histológico. Não foi encontrada diferença estatística significativa para as características clínicas/histopatológicas e presença/ausência de metilação de RASSF1A. Foi também analisado o padrão de metilação das ilhas CpGde RASSF1 em 17 linhagens celulares derivadas de carcinomas ... / Abstract: Alterações epigenéticas, incluindo as alterações da metilação do DNA, das modificações de histonas e da atividade de RNAs não codificadores, são eventos frequentes em células tumorais e estão associados às mudanças da estrutura da cromatina e dos níveis de expressão gênica. O gene RASSF1, localizado em 3p21.3, é responsável pela transcrição de sete variantes a partir de regiões promotoras distintas, associadas a duas ilhas CpG. Dentre os transcritos estão RASSF1A e RASSF1C, codificados por regiões promotoras diferentes, e que têm sido descritos na literatura como codificadores de proteínas com funções celulares opostas: RASSF1A é caracterizado como supressor tumoral e é frequentemente silenciado por metilação anormal em vários tipos de câncer, enquanto RASSF1C tem sido associado a atividades oncogênicas, e não há relatos de metilação de ilha CpG associada à sua região promotora. Com a finalidade de investigar uma possível associação entre parâmetros clínicos e histopatológicos em pacientes diagnosticadas com câncer de mama e o padrão de metilação de RASSF1A e RASSF1C, foram analisadas 84 amostras de carcinomas mamários pela técnica de MS-PCR (Methylation-Specific Polymerase Chain Reaction). Para RASSF1A, foi encontrada uma frequência de metilação de 84,5% das amostras, enquanto que para RASSF1C todas as amostras apresentaram alelos exclusivamente não-metilados, o que sugere uma regulação de expressão diferente da observada para RASSF1A. Devido ao fato de 75 das 84 amostras utilizadas serem diagnosticadas como carcinomas ductais invasivos, as análises estatísticas incluíram apenas esse subtipo histológico. Não foi encontrada diferença estatística significativa para as características clínicas/histopatológicas e presença/ausência de metilação de RASSF1A. Foi também analisado o padrão de metilação das ilhas CpGde RASSF1 em 17 linhagens celulares derivadas de ... / Mestre

Orientador: Rozany Mucha Dufloth / Coorientador: Fernando Carlos de Lander Schmitt / Banca: Mariângela Esther Alencar Marques / Banca: Luis Otávio Zanatta Sarian / Resumo: INTRODUÇÃO: O valor prognóstico da classificação molecular do carcinoma de mama recentemente proposta tem sido validado por numerosos estudos. Entretanto, a maioria destes trabalhos estudou o tipo histológico mais comum denominado carcinoma ductal invasivo usual (CDI), uma entidade reconhecidamente heterogênea. Poucos estudos concentraram-se especificamente em outros tipos histológicos como o carcinoma lobular invasivo (CLI) que é o tipo especial mais frequente. O CLI apresenta-se com características clínico-patológicas e história natural bastante distintas do CDI sendo claramente entidades biológicas diferentes. Além disso, é uma doença relativamente frequente com aumento de sua incidência no mundo. OBJETIVO: Estudar comparativamente os subtipos moleculares luminais A e B de dois grupos de pacientes com CLI e CDI da mama, bem como determinar o valor prognóstico independente da classificação molecular nestes tumores correlacionando os subtipos moleculares com a sobrevida específica por carcinoma de mama (BCSS) e a sobrevida global (OS). SUJEITOS E MÉTODOS: Estudo do tipo transversal analítico. Foram selecionados blocos de parafina de mulheres com diagnóstico histopatológico de CLI e CDI no Laboratório de Patologia do Hospital Amaral Carvalho (HAC), Jaú, São Paulo, Brasil. Os respectivos prontuários médicos e o Registro Hospital de Câncer (RHC) do HAC foram consultados para a pesquisa das informações clínicas e de seguimento destas mulheres (média de 121,77 e 131,27 meses para o CLI e CDI, respectivamente), totalizando 186 casos. Dos blocos doadores, foram extraídas duas amostras de 2 mm de diâmetro e depositadas nos blocos de parafina receptores usando Tissue Microarray Builder ab1802 (Abcam®, Cambridge, UK). Nestes cortes foi feita a pesquisa dos seguintes marcadores imunoistoquímicos: receptor de estrógeno α (RE), receptor de progesterona (RP), HER2 e Ki67. Os subtipos moleculares (luminal A, luminal ... / Abstract: INTRODUCTION: The prognostic value of the molecular classification of breast cancer recently proposed has been validated by many studies. However, the great majority of these studies has focused on invasive ductal carcinoma no special type (IDC), a widely recognized heterogeneous entity. Few papers have studied other special types of breast cancer such as invasive lobular carcinoma (ILC) the most common special type. ILC shows clinico-pathological features and natural history quite distinctive from IDC being clearly separate biologic entities. Moreover, ILC is relatively frequent and has been increasing in incidence over the recent years. OBJECTIVE: to study comparatively the luminal molecular subtypes A e B of two groups of patients with ILC and IDC and to determine the prognostic independent value of the molecular classification in ILC patients by correlating the molecular subtypes with clinical outcomes such as breast cancer specific survival (BCSS) and overall survival (OS). MATERIALS AND METHODS: archival paraffin blocks from women diagnosed with ILC and IDC at the Pathology Laboratory of Hospital Amaral Carvalho, Jau, Sao Paulo, Brazil, were retrieved. Patient's charts and the Hospital Amaral Carvalho Cancer Registry were consulted for obtaining the staging and follow-up information (median 121.77 and 131.27 months for ILC and IDC, respectively) and 186 patients were selected. Two samples from each paraffin block were extracted to mount tissue microarray (TMA) blocks by using a Tissue Microarray Builder ab1802 (Abcam®, Cambridge, UK). The following immunohistochemical markers were performed in the TMA blocks: estrogen receptor α, progesterone receptor, HER2 and Ki67 protein. The intrinsic molecular subtypes (luminal A, luminal B, HER2 and triple negative) were determined based on the immunohistochemical profile of each tumor. Prognostic clinico-pathological features were analysed in absolute (n) and relative frequency (%). The ... / Mestre

Orientador: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Deilson Elgui de Oliveira / Banca: Vinicius Santana Nunes / Resumo: O gene SFN (stratifin; 14-3-3sigma) atua como um gene supressor tumoral cuja expressão é induzida em resposta a danos ao DNA, promovendo o bloqueio do ciclo celular no checkpoint G2/M. A inativação ou redução da expressão gênica por hipermetilação de sua ilha CpG foi apontada como um mecanismo comum a vários tipos de cânceres humanos e também foi associada com resposta ao tratamento. O objetivo desse estudo foi caracterizar alterações genéticas e epigenéticas do gene SFN em carcinomas mamários primários e investigar a sua relação com parâmetros clínicos e histopatológicos. Em adição, linhagens derivadas de epitélio mamário normal e de carcinomas mamários foram utilizadas para a caracterização do efeito do número de cópias e do padrão de metilação do DNA na expressão gênica e para o estudo do efeito combinado do tratamento com o agente desmetilante 5-Aza-dC (5-Aza-2'-Desoxicitidina) e da exposição à radiação nas taxas de sobrevivência celular. O padrão de metilação do DNA foi determinado por MS-PCR (Methylation Specific-Polimerase Chain Reaction), após modificação do DNA por bissulfito de sódio, em uma série de 84 carcinomas mamários (76 ductais infiltrantes, 5 lobulares infiltrantes, 1 metaplásico, 1 apócrino e 1 papilífero) , bem como em um painel de 20 linhagens celulares (3 normais e 17 derivadas de carcinomas). O número de cópias foi determinado por qPCR (quantitative Polimerase Chain Reaction) em 82 destas amostras. Os níveis de expressão do transcrito foram avaliados por RT-qPCR em 8 linhagens celulares selecionadas com base no número de cópias, padrão de metilação e o status da proteína p53. O efeito da exposição à radiação ionizante, em uma única dose de 4 Gy em intervalos de tempo de 12, 24, 48 e 72h foi estudado através do ensaio de MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) em três linhagens celulares (T47D, MDA-MB-231 e MDA-MB-436) ... / Abstract: The SFN gene (Stratifin; 14-3-3 sigma) plays roles as a tumor suppressor gene and its expression is induced in response to DNA damage by disabling the cell cycle arrest at the G2/M checkpoint. Inactivation or down-regulation of gene expression levels has been generally attributed to the hypermethylation of its CpG island, identified as a common mechanism in a variety of human cancers, also associated to treatment response. The aim of the present study was to characterize epigenetics and genetics alterations of the SFN gene in primary breast cancer and to investigate the relationship with clinical and histopatological variables. In addition, cell lines derived from normal breast and breast cancer tissues, were employed to identify the effect of copy number dosage and DNA methylation pattern in gene expression, besides the study of combined response to 5-Aza-dC (5-Aza-2'-Deoxycytidine) and radiation exposure on cell survival. After sodium bisulfite modification, the DNA methylation pattern was determined by Methylation-Specific Polymerase Chain Reaction (MS-PCR) in a series of 84 Breast cancer samples (76 infiltrating ductal carcinomas, 5 infiltrating lobular, 1 metaplasic, 1 apocrine and 1 papillary) as well as in a panel of 20 human cell lines (3 derived from normal breast and 17 from breast cancer). SFN copy number was performed using relative quantification, by qPCR (quantitative Polimerase Chain Reaction) in 82 samples. Transcript levels were evaluated by RT-qPCR within a selection of 8 cell lines, based on DNA methylation, SFN copy number dosage and p53 status. Ionizing radiation effect was studied through MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, by using a single dose of 4 Gy at different time intervals (12, 24, 48 and 72h) in tree cell lines (T47D, MDA-MB-231 e MDA-MB-436) treated or not with 5-Aza-dC. SFN methylation was observed in 79% of primary breast cancer, while copy number alterations ... / Mestre

Orientador: Célia Regina Nogueira / Coorientador: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Banca: Vânia dos Santos Nunes / Banca: Glaucia Maria F. da Silva Mazeto / Banca: Patrícia Pinto Saraiva / Banca: Maria Tereza Nunes / Resumo: A incidência de câncer de mama (CM) tem aumentado de maneira alarmante nos últimos anos. Diversas pesquisas conduziram à descoberta de amphiregulin (AREG) como um oncogene, tendo sua expressão relacionada com diversos tipos de cânceres. Nosso grupo evidenciou a ação do T3 sobre diferentes genes em células de câncer de mama, por meio de microarray, porém nesse estudo não foi avaliado o mecanismo de ação pelo qual o T3 regula a expressão desses genes e o envolvimento de ER. A relação entre a expressão de AREG e a presença de HT permanece desconhecida, portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar a ação nuclear e extra-nuclear do T3 na expressão gênica do oncogene AREG em linhagens celulares de adenocarcinoma de mama, MCF-7 e MDA-MB-231. As linhagens celulares foram submetidas ao tratamento com 10-8M de T3 nos tempos de 10', 30', 1h e 4h, na presença ou ausência de Fulvestrant (ICI 182,780), inibidor de ER, Actinomicina D (ACTD) - inibidor da expressão gênica, Ciclohexamida (CHX), inibidor da síntese protéica, e LY294002 - inibidor da via PI3K. O mRNA de AREG foi analisado pela técnica de RT-PCR. Para a análise dos dados foi utilizado ANOVA complementado com teste de Tukey e adotado significância mínima de 5%. O T3 elevou os níveis de expressão gênica de AREG, em relação ao grupo controle, nas duas linhagens celulares, independente dos tempos de incubação. Nosso trabalho confirma que a expressão gênica de AREG está aumentada na presença T3, em ambas as linhagens e em todos os tempos estudados. Os dados desse estudo indicam que T3 pode agir por meio de ER, diminuindo a expressão de AREG após 30' de tratamento nas células MCF-7 e não alterando a expressão desse gene nas células MDA-MB-231, as quais não possuem ER. Além disso, podemos sugerir que a ação de T3 sobre a expressão gênica de AREG ocorre de forma indireta. O T3 mantém a expressão de AREG mesmo após... / Abstract: The incidence of breast cancer (BC) has increased alarmingly in recent years. Several studies have been lead to the discovery of amphiregulin (AREG) as an oncogene, with its expression related to various cancer types. Our group showed the action of T3 on different genes in BC cells using microarray, but the mechanism which T3 regulates the expression of these genes and the involvement of ER have not been evaluated yet. The relationship between the expression of AREG and the presence of TH remains unknown, therefore, the aim of this study was to verify the nuclear and extra-nuclear action of T3 on AREG gene expression in breast adenocarcinoma cell lines, MCF-7 and MDA-MB-231. The cell lines were subjected to treatment with 10-8M T3 at the times 10', 30', 1h and 4h in the presence or the absence of Fulvestrant (ICI 182,780) - ER inhibitor, Actinomycin D (ACTD) - inhibitor of gene expression, cycloheximide (CHX) - inhibitor of protein synthesis, and LY294002 - inhibitor of PI3K pathway. The AREG mRNA levels were analyzed by RT-PCR. For data analysis we used ANOVA followed by the post hoc Tukey's test with a significance level of 5%. T3 increased AREG gene expression levels, compared to the control group in both cell lines, regardless of the incubation times. Our study confirms that AREG gene expression is increased in the presence of T3 in both cell lines and at all the times studied. The data from this study indicate that T3 might act through ER, decreasing AREG expression after 30' treatment in MCF-7 cells and did not alter the expression of this gene in MDA-MB-231 cells, which lack ER. Furthermore, we suggest that T3actionon AREG gene expression occurs indirectly. The T3 maintains AREG expression even after the inhibition of transcription. And, the PI3K pathway activation by T3 is required for the modulation of AREG in both cell lines studied / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Samuel Cos Corral / Banca: Bruno Cogliati / Resumo: O câncer de mama apresenta altas taxas de incidência e mortalidade, sendo a neoplasia mais comum entre as mulheres. O rápido crescimento do tumor resulta em hipóxia no microambiente tumoral, levando a uma cascata de eventos que induzem a angiogênese e conseqüente progressão do câncer. Assim, a identificação de agentes terapêuticos que possam inibir a angiogênese é essencial para o controle da progressão tumoral. Nesse sentido, tem sido demonstrado que a administração exógena da melatonina, um hormônio naturalmente secretado pela glândula pineal, apresenta diversos efeitos oncostáticos em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a efetividade do tratamento com melatonina sobre a angiogênese do câncer de mama, em estudos in vitro e in vivo. No estudo in vitro, as linhagens de câncer de mama MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina sob condições de hipóxia mimetizadas pelo Cloreto de Cobalto (CoCl2). A viabilidade celular foi verificada pelo ensaio MTT, a expressão do fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A) foi avaliada por PCR em tempo real e imunocitoquímica. Além disso, demais proteínas envolvidas na angiogênese foram avaliadas por Protein Array. No estudo in vivo, as células MDA-MB-231 foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram tratados com melatonina (40 mg/kg) por 21 dias. O tumor foi medido semanalmente e a avaliação da angiogênese foi realizada pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc- 99m-HYNIC-VEGF-c, agente específico para os receptores de VEGF (VEGFR2/VEGF3). Além disso, as proteínas VEGFR2, VEGFR3, fator de fator de von Willebrand (vWF) e marcador de proliferação celular (Ki-67) foram avaliados no tecido tumoral por imuno-histoquímica, e demais proteínas angiogênicas por Protein Array. O estudo in ... / Abstract: Breast cancer has high rates of incidence and mortality, and it is the most common cancer among women. The rapid tumor growth results in hypoxia on tumor microenvironment, leading to a cascade of events that induce angiogenesis and subsequent cancer progression. Thus, the identification of therapeutic agents that can inhibit angiogenesis is essential for the control of tumor progression. Exogenous administration of melatonin, a hormone secreted by the pineal gland, has been shown several oncostatics effects on different types of cancers. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of melatonin treatment on angiogenesis in breast cancer, in the in vitro and in vivo studies. In the in vitro study, breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) were treated with melatonin under cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic conditions. Cell viability was measured by MTT assay, the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) was assessed by real-time PCR and immunocytochemistry. Additionally, other proteins involved in angiogenesis were evaluated by the Protein Array. In the in vivo study, the MDA-MB-231 cells were implanted in athymic nude mice, which were treated with melatonin (40 mg/kg) for 21 days. The tumor was measured weekly and evaluation of angiogenesis was performed by single-photon emission computed tomography (SPECT) with Tc-99m-HYNIC-VEGF-c, which is specific for VEGF receptors (VEGFR2/VEGF3). Moreover, VEGFR2, VEGFR3, von Willebrand factor (vWF) and cell proliferation marker (Ki-67) were evaluated in tumor tissue by immunohistochemistry, and other angiogenic proteins by Protein Array. Results from the in vitro study showed that 1 mM of melatonin under hypoxic conditions (200 μM CoCl2) led to decreased cell viability, protein levels of HIF- 1α and gene and protein expression of VEGF-A in both cell lines (p < 0.05). Among other proteins evaluated, melatonin ... / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Patricia Matos Biselli Chicote / Banca: Wilson Araújo da Silva Junior / Resumo: As neoplasias mamárias são os tumores de maior ocorrência em mulheres no mundo. A alta incidência deste tipo tumoral deve-se a um conjunto de fatores, entre eles o uso de hormônios, como o estrógeno e a exposição a produtos químicos, entre eles o Bisfenol A (BPA). Apesar da introdução de tratamentos mais efetivos para o câncer de mama, muitas vezes ocorre recorrência e/ou crescimento do tumor, invasão e metástase. As "células-tronco tumorais" (CTTs) vem sendo estudadas em tumores humanos nos últimos anos, consideradas as responsáveis pela recorrência do tumor e resistência a terapias. Devido ao determinante papel das CTTs, é importante a identificação de fatores que controlam sua proliferação. Estudos identificaram o fator de transcrição OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), como um dos responsáveis pela auto-renovação e manutenção da pluripotência das células-tronco. Dessa forma, o estudo de potenciais fármacos que atuem sobre esta população específica no câncer de mama tem especial interesse. A melatonina, parece apresentar efeitos oncostáticos no entanto, pouco se sabe sob sua ação terapêutica sobre as células-tronco tumorais mamárias. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da melatonina sobre a regulação do marcador de células-tronco OCT4 pelo receptor de estrógeno em células-tronco tumorais mamárias, após o tratamento com estrógeno e bisfenol A. Para o estudo, as células de câncer de mama humano MCF-7 e MDA-MB-231 foram submetidas ao cultivo... / Abstract: Breast neoplasms are the most frequent tumors in women worldwide. The high incidence of this tumor type is due to a number of factors, including the use of hormones such as estrogen and exposure to chemicals, including bisphenol A (BPA). Despite the introduction of more effective treatments for breast cancer often occurs recurrence and/or tumor growth, invasion and metastasis. Recently, it was discovered the existence of "cancer stem cells" (CSCs) in human tumors, being responsible for tumor recurrence and resistance to therapy. Due to the important role of CSCs, the identification of factors that control its proliferation is important. Studies have identified the transcription factor OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), as the one responsible for self-renewal and maintenance of pluripotency of stem cells. Thus, it has become interesting the study of potential drugs that target this specific population in breast cancer. Melatonin, seems to have oncostatic effects, however, little is known about its therapeutic action on breast cancer stem cells. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of melatonin on the regulation of the stem cell marker, OCT4, by the estrogen receptor in breast cancer stem cells, after treatment with estrogen and bisphenol A. For the study, human breast cancer cells MCF-7 and MDA-MB-231 cells were submitted to three dimensional growth of mammospheres, representing the stem cells. The CSCs were grown in cell suspension or anchorage ... / Doutor

Orientador: René Aloísio da Costa Vieira / Banca: Gilberto Uemura / Banca: Carlos Antonio Ruiz / Resumo: A mamografia constitui o método populacional mais eficaz na redução da mortalidade por câncer de mama, visto a elevação do diagnóstico de lesões precoces. Países em desenvolvimento apresentam uma elevação na incidência e mortalidade por câncer de mama, decorrente da limitação do exame de mamografia e de programas efetivos de rastreamento. Há inúmeras barreiras relacionadas a não realização do exame de mamografia, podendo estar relacionadas ao sistema de saúde, à educação e à adesão da paciente. Iniciou-se em 2003 na DRS-V um rastreamento mamográfico, controlando as variáveis relacionadas ao sistema de saúde e educação. Na região da DRS/V do Estado de São Paulo, constituída por 19 cidades, iniciou-se um rastreamento mamográfico organizado, a mulheres na faixa etária dos 40-69 anos, através de uma Unidade Móvel de Prevenção (UMP) contendo um mamógrafo, ou em uma unidade fixa, em local onde havia limitação prévia a realização deste exame. Avaliou-se as características de 17.964 mulheres atendidas nos dois primeiros anos do projeto, sendo avaliado as características desta população; e após a cobertura populacional de 50,3% das mulheres, foram entrevistadas 550 mulheres que nunca haviam realizado o exame de mamografia anteriormente. Nas mulheres refratárias foi aplicado questionário avaliando o conhecimento sobre o auto-exame da mama, a importância da mamografia, bem como estratégias para identificação desta população refratária ao exame. No início do projeto o Programa de Saúde da Família foi o principal fator motivador a realização do exame de mamografia (46,8%) e a maioria dos exames foi realizada em UMP (63,7). Cerca de 42,1% das mulheres nunca havia realizado o exame de mamografia na vida, sendo que as mulheres que não haviam realizado o exame previamente constituído principalmente de mulheres da faixa etária 40-69 anos, baixa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mammography breast screening is related to early breast cancer diagnosis and the reduction of breast mortality is related to the increase in early breast cancer diagnosis. Developing countries have an increase in incidence and mortality for breast cancer is related to low income of mammography and the absence of organized screening. There are barriers related to the low adherence to mammography exam, and the main reasons are related to health system, education and adherence to guidelines. In 2003 started in DRS-V a mammography screening controlling the factors related to health system and knowledge. We began a mammographic screening in São Paulo state DRS/5 region, consisted with 19 cities, a mammographic breast cancer screening in women between 40-69 years old using a Mobile Unit with a mammography or in a fixed unit. We evaluated the characteristics of 17.964 women screened from the first two years of the project. When 50,3% of women had been screened we found 550 women non adherent to the project and applied questions related to the knowledge about breast clinical examination or reasons related to non adherence to mammography exam, and we analyze the strategies used to find these women. The "Programa de Saúde da Família" was the main factor related to adherence to mammography (46,8%) and the main local related to exams was the Mobile Unit (63,7%). There were 42,1% of the women who hadn't done de mammography in their life's and these women were principally between 40-49 years old, low socio-economic status and low income. There was an inverse relation in mammography previously and years of schooling and income. There was 39,2% early breast cancer diagnosis. The 550 women had low years of schooling (84,7%), low income (66,8%) and were between 42-49 years old (43,8%). The clinical frequently doesn't realize breast examination (14,9%), and low women know how to do this exam... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre