No presente trabalho, foram desenvolvidas nanocápsulas de núcleo lipídico (LNCs) para posterior revestimento com manana através da utilização de duas metodologias diferentes, sendo ambas por interações eletrostáticas. Na primeira metodologia, soluções de manana em diferentes concentrações foram gotejadas sobre a formulação LNC-Quit+ e na segunda metodologia a LNC-Quit+ foi injetada nas soluções de manana. Através de análises de diâmetro, mobilidade eletroforética, potencial zeta e viscosidade, foi possível notar que a primeira metodologia não apresenta reprodutibilidade, demonstrando valores aleatórios, ao passo que, na segunda metodologia os valores são reprodutíveis para a concentração de 0,5 μg/mL final de manana. Também foi possível observar que as nanopartículas revestidas com manana não apresentam estabilidade após 24 horas, sugerindo-se que a manana se desprende da superfície da partícula. Nas duas metodologias foram utilizadas concentrações diferentes de material de partida, e com isso, foi criada a metodologia 2B para que as anteriores pudessem ser comparadas. Com estes resultados tem-se um caminho promissor para estudos futuros e o aprimoramento deste tipo de revestimento. / In the present work, lipid core nanocapsules (LNCs) was developed for subsequent coating with mannan by using two different methodologies and both by electrostatic interactions. In the first methodology, mannan solutions at different concentrations were drop wise on LNC-Quit+ formulation and the second methodology, LNC-Quit+ was injected in mannan solutions. Through analysis of diameter, electrophoretic mobility, zeta potential and viscosity, it was possible to notice that the first methodology was not reproductible, showing random values, whereas, in the secont methodology the values was reproductible for the 0,5 μg/mL concentration. It was also possible to observe that the particle coated with mannan has no stability after 24 hours, suggesting that mannan detaches from the particle surface. In this methodologies, two different concentrations of raw materials are used, and with that, it was created the methodology 2B so that the results could be compared. With these results, it was a promising path way for future studies and enhancement of this type of coating.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:51:05Z : No. of bitstreams: 1 gomes_mos_me_jabo.pdf: 622478 bytes, checksum: be8b00fa47ea963d66d4d14490453d61 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Considerando a importância da eubiota intestinal na saúde dos animais, o papel da dieta em sua composição e metabolismo tem sido estudado. Neste aspecto os prebióticos têm merecido destaque, incluindo-se a parede celular de leveduras (PCL), uma fonte natural de mananoligossacarídeos. Para o estudo de seu potencial prebiótico para cães, foram empregadas quatro dietas isonutrientes com inclusão de 0% (T0), 0,15% (T15), 0,30% (T30) e 0,45% (T45) de PCL. Foram utilizados oito Beagles adultos, divididos em dois quadrados latinos 4 X 4. Em cada período uma fase de adaptação de 15 dias precedeu 5 dias de coleta total de fezes para o ensaio de digestibilidade e 1 dia de coleta de fezes frescas para enumeração bacteriana, mensuração de pH e determinação das concentrações de ácidos graxos de cadeia curta e aminas bioativas. No dia 21 de cada período, amostra de sangue foi colhida para quantificação imunofenotípica por citometria de fluxo das subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+, CD5+CD8+, CD45+ e CD45+CD21+. Os dados foram avaliados pelo Proc GLM do SAS, sendo as médias comparadas pelo teste de Tukey e por contraste polinomial e ortogonal (p<0,1). Os coeficientes de digestibilidade dos nutrientes não variaram com a inclusão de PCL (p>0,1). A inclusão de PCL não resultou em diferenças quanto às contagens de anaeróbios totais, aeróbios totais, bifidobactéria, lactobacilos, clostridios nas fezes dos cães (p>0.1). Verificou-se aumento linear na concentração fecal de butirato (p=0,055), redução linear das concentrações fecais de tiramina (P=0,1) e histamina (P=0,07) e redução quadrática de feniletilamina e triptamina (P=0,07). Os cães apresentaram, também, aumento linear na concentração de linfócitos CD5+ (P=0,10) e maior número de linfócitos CD45+CD21+ (P=0,053) mediante ingestão de PCL. Concluiu-se que a PCL apresenta efeito prebiótico... / Considering the importance of the intestinal microbiota to the animal health, the role of diet upon microbiota composition and metabolism have been studied. Prebiotics have been emphasized on this regard, including the yeasts cell walls (YCW), a natural source of mannanoligosaccharides. To study the prebiotic potential of this compound for dogs, four isonutrient diets were used with inclusion of 0% (T0), 0,15% (T15), 0,30% (T30) and 0,45% (T45) of YCW. Eight Beagles adults were used, arranged in two 4 X 4 Latin squares. In each replicate an adaptation phase of 15 days preceded a 5 days of total feces collection for digestibility trial and 1 day collection of fresh fecal samples for bacterial enumeration, pH measurement and determination of short chain fatty-acids and bioactive amines concentration. On day 21, a blood samples were collected for immunophenotypic quantification of lymphocyte subsets CD5+CD4+, CD5+, CD5+CD8+, CD45+ e CD45+CD21+ through flow cytometry. The data were evaluated using Proc GLM of SAS, means were compared by Tukey test and polinomial and orthogonal contrasts (p <0,1). The inclusion of YCW did not change the coefficient of total tract apparent digestibility of nutrients (p>0.1) nor the fecal bacterial enumeration (total aerobes and anaerobes, Bifidobacterium, Lactobacillus, Clostridium and Escherichia coli) in dog’s feces (p>0.1). Fecal butirate concentration increased linearly with YCW addition (p=0,055), fecal concentrations of tyramine (P=0,1) and histamine (P=0,07) decreased linearly, and phenylethylamine (P=0,07) and tryptamine (P=0,07) concentrations showed a quadratic reduction with YCW consumption. Dogs also presented a linear increase in lymphocytes CD5+ concentration (P=0,10) and a greater CD45+CD21+ lymphocytes number (P=0,053) with YCW addition. In conclusion YCW presents a prebiotic (changing bacterial end product formation) and immunostimulating effect for dogs.

No presente trabalho, foram desenvolvidas nanocápsulas de núcleo lipídico (LNCs) para posterior revestimento com manana através da utilização de duas metodologias diferentes, sendo ambas por interações eletrostáticas. Na primeira metodologia, soluções de manana em diferentes concentrações foram gotejadas sobre a formulação LNC-Quit+ e na segunda metodologia a LNC-Quit+ foi injetada nas soluções de manana. Através de análises de diâmetro, mobilidade eletroforética, potencial zeta e viscosidade, foi possível notar que a primeira metodologia não apresenta reprodutibilidade, demonstrando valores aleatórios, ao passo que, na segunda metodologia os valores são reprodutíveis para a concentração de 0,5 μg/mL final de manana. Também foi possível observar que as nanopartículas revestidas com manana não apresentam estabilidade após 24 horas, sugerindo-se que a manana se desprende da superfície da partícula. Nas duas metodologias foram utilizadas concentrações diferentes de material de partida, e com isso, foi criada a metodologia 2B para que as anteriores pudessem ser comparadas. Com estes resultados tem-se um caminho promissor para estudos futuros e o aprimoramento deste tipo de revestimento. / In the present work, lipid core nanocapsules (LNCs) was developed for subsequent coating with mannan by using two different methodologies and both by electrostatic interactions. In the first methodology, mannan solutions at different concentrations were drop wise on LNC-Quit+ formulation and the second methodology, LNC-Quit+ was injected in mannan solutions. Through analysis of diameter, electrophoretic mobility, zeta potential and viscosity, it was possible to notice that the first methodology was not reproductible, showing random values, whereas, in the secont methodology the values was reproductible for the 0,5 μg/mL concentration. It was also possible to observe that the particle coated with mannan has no stability after 24 hours, suggesting that mannan detaches from the particle surface. In this methodologies, two different concentrations of raw materials are used, and with that, it was created the methodology 2B so that the results could be compared. With these results, it was a promising path way for future studies and enhancement of this type of coating.

No presente trabalho, foram desenvolvidas nanocápsulas de núcleo lipídico (LNCs) para posterior revestimento com manana através da utilização de duas metodologias diferentes, sendo ambas por interações eletrostáticas. Na primeira metodologia, soluções de manana em diferentes concentrações foram gotejadas sobre a formulação LNC-Quit+ e na segunda metodologia a LNC-Quit+ foi injetada nas soluções de manana. Através de análises de diâmetro, mobilidade eletroforética, potencial zeta e viscosidade, foi possível notar que a primeira metodologia não apresenta reprodutibilidade, demonstrando valores aleatórios, ao passo que, na segunda metodologia os valores são reprodutíveis para a concentração de 0,5 μg/mL final de manana. Também foi possível observar que as nanopartículas revestidas com manana não apresentam estabilidade após 24 horas, sugerindo-se que a manana se desprende da superfície da partícula. Nas duas metodologias foram utilizadas concentrações diferentes de material de partida, e com isso, foi criada a metodologia 2B para que as anteriores pudessem ser comparadas. Com estes resultados tem-se um caminho promissor para estudos futuros e o aprimoramento deste tipo de revestimento. / In the present work, lipid core nanocapsules (LNCs) was developed for subsequent coating with mannan by using two different methodologies and both by electrostatic interactions. In the first methodology, mannan solutions at different concentrations were drop wise on LNC-Quit+ formulation and the second methodology, LNC-Quit+ was injected in mannan solutions. Through analysis of diameter, electrophoretic mobility, zeta potential and viscosity, it was possible to notice that the first methodology was not reproductible, showing random values, whereas, in the secont methodology the values was reproductible for the 0,5 μg/mL concentration. It was also possible to observe that the particle coated with mannan has no stability after 24 hours, suggesting that mannan detaches from the particle surface. In this methodologies, two different concentrations of raw materials are used, and with that, it was created the methodology 2B so that the results could be compared. With these results, it was a promising path way for future studies and enhancement of this type of coating.

The cell wall of Candida albicans is central to the yeasts ability to withstand osmotic challenge, to adhere to host cells, to interact with the innate immune system and ultimately to the virulence of the organism. Little is known about the effect of culture conditions on the cell wall structure and composition of C. albicans. We examined the effect of different media and culture temperatures on the molecular weight (Mw), polymer distribution and composition of cell wall mannan and mannoprotein complex. Strain SC5314 was inoculated from frozen stock onto yeast peptone dextrose (YPD), blood or 5 serum agar media at 30 or 37°C prior to mannan/mannoprotein extraction. Cultivation of the yeast in blood or serum at physiologic temperature resulted in an additive effect on Mw, however, cultivation media had the greatest impact on Mw. Mannan from a yeast grown on blood or serum at 30°C showed a 38.9 and 28.6 increase in Mw, when compared with mannan from YPD-grown yeast at 30°C. Mannan from the yeast pregrown on blood or serum at 37°C showed increased Mw (8.8 and 26.3) when compared with YPD mannan at 37°C. The changes in Mw over the entire polymer distribution were due to an increase in the amount of mannoprotein (23.8-100) and a decrease in cell wall mannan (5.7-17.3). We conclude that C. albicans alters the composition of its cell wall, and thus its phenotype, in response to cultivation in blood, serum and/or physiologic temperature by increasing the amount of the mannoprotein and decreasing the amount of the mannan in the cell wall.

Several published functions associated with the CHK1 histidine kinase of Candida albicans resemble those of the MAPK Cek1p and its cognate receptor Sho1p (SSU81). To explore this further, we have compared mutants lacking the proteins mentioned above and have constructed a double sho1/chk1Δ null mutant to determine relationships among these proteins. We observed that the sensitivity to Congo red (CR), calcofluor white (CW), as well as clumping of cells, was slightly increased in the double mutant compared to the single chk1Δ or sho1Δ mutants. However, Cek1p phosphorylation via Sho1p, which occurs during log phase growth in the presence or absence of CR in Wt cells, does not require Chk1p. These data suggest that Chk1p and Sho1p are components of parallel but independent signal pathways. In addition, bulk mannan of strains was analyzed by GLC/MS and GPC MALLS and NMR. Compared to Wt and a CHK1 gene-reconstituted strain (CHK23) that contained high, intermediate and low Mw mannan species, we found that the mannan of strains CHK21 (chk1Δ null), the cek1Δ null, and the double mutant consisted only of low Mw mannan. The sho1Δ null mutant only demonstrated a reduced intermediate type of mannan. Alcian blue binding was lower in cek1Δ, chk1Δ, and the double sho1/chk1Δ null mutant lacking high and intermediate Mw mannan than in the sho1Δ null which had a partial loss of intermediate Mw mannan only. We conclude that the Chk1p HK is part of a functionally similar but parallel pathway to the Sho1p-Cek1p pathway that confers resistance to the cell wall inhibitors CR and CW. However, a functional relationship in mannan biosynthesis of Chk1p and Cek1p exists that only partially requires Sho1p.

No description available.

O presente estudo buscou avaliar os efeitos dos Mananoligossacarídeos (MOS) como aditivo alimentar no desempenho de primíparas suínas em final de gestação e em lactação, bem como no desempenho e na saúde dos leitões até os 65 dias de idade. O experimento foi realizado no Laboratório de Pesquisa em Suínos (VNP-FMVZ-USP) Pirassununga SP. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial de tratamentos, sendo um fator o fornecimento dos MOS para fêmeas e o segundo para os leitões. Foram utilizadas 17 primíparas prenhes, tratadas a partir de 81 &plusmn;1,36 dias de gestação com 0,2% de MOS na dieta. Aos 82 &plusmn; 1,36 dias de gestação as fêmeas foram submetidas à coleta de sangue e à vacinação contra rinite atrófica progressiva, sendo pesadas quinzenalmente até a transferência para a maternidade, aos 109 &plusmn; 1,36 dias de gestação. Na segunda quinzena as fêmeas tratadas apresentaram uma vantagem numérica no ganho de peso médio diário (P=0,063). Durante o parto foram colhidas amostras de sangue e colostro para titulação de anticorpos contra o antígeno vacinal, sendo consideradas positivas 66,67% das fêmeas MOS e 42,86% das fêmeas controle. Os leitões aleitados por fêmeas tratadas tiveram um maior ganho numérico de peso na primeira semana (p=0,0614), significativo na segunda semana (p=0,047). Na terceira semana foi introduzido o segundo fator através do oferecimento de alimento sólido (0,4% de MOS). No período total, do nascimento aos 21 dias, foi observada uma vantagem numérica (p=0,0989) no ganho de peso a favor dos leitões de fêmeas MOS. As fêmeas, contudo, não diferiram quanto à variação de peso ou consumo durante a fase de lactação. Aos 23 &plusmn; 1,91 dias de idade dos leitões foi realizado o desmame abrupto com a transferência dos leitões para unidade de creche, onde foram alojados em gaiolas para 4 animais. O peso ao desmame foi maior nos leitões aleitados por fêmeas tratadas (p<0,0001), bem como em todas as pesagens semanais até a quinta semana pós-desmame. O consumo na primeira semana sofreu influência da suplementação de MOS nas fêmeas e do maior peso à desmama se mostrando superior nesses animais (P=0,049) influenciando diretamente o ganho de peso, superior na segunda semana (p=0,002). O MOS para os leitões aumentou o consumo de alimento (p=0,0784), e a conversão alimentar na segunda semana (p=0,0103). Aos 14 dias pós-desmame foram colhidas amostras de sangue para hemograma e realizada a aplicação oral de 108 UFC de Salmonella Typhimurium. Foram observadas diariamente a consistência das fezes por 28 dias e aferidas as temperaturas retais por 9 dias. Leitões tratados com MOS e os leitões oriundos de fêmeas MOS tenderam a apresentar o pico de hipertermia mais cedo que os demais (p=0,0629 e p=0,0976, respectivamente) e os leitões alimentados com MOS tenderam a ter uma temperatura de pico mais baixa (p=0,0989). Na última semana os leitões de fêmeas MOS apresentaram um maior consumo (p=0,0007) e uma incidência de Salmonella numéricamente inferior em linfonodos mesentéricos e nas fezes colhidas aos 36 dias pós-desafio. Pode-se concluir que a suplementação de MOS para primíparas prenhes e lactentes pode melhorar o desempenho e a saúde entérica de seus leitões nas fases de aleitamento e creche. / The present study evaluated the effects of mananoligossacarides (MOS) as a feed additive on the performance of primiparous sows in late gestation and lactation, as well as on performance and health status of their progeny up to 65 days of age. The experiment was conducted in the Laboratory of Swine Research (FMVZ/USP) Pirassununga SP. For this purpose a completely random factorial design was used, factors which corresponded to (1) feeding sows with MOS and (2) feeding piglets with MOS, characterizing 4 treatments: MM Feeding MOS to both sows and piglets, MC Feeding MOS only to the sows, CM Feeding MOS only to piglets, CC Control diets for both sows and piglets. A total of seventeen pregnant gilts were used, and divided into 2 groups: MOS (n=9) and Control (n=8). MOS gilts had 0,1% MOS added to their diets from 81 &plusmn; 1,36 days of gestation onward. On day 82 &plusmn; 1,36 blood was collected and vaccination against Progressive Atrophic Rhinitis was conducted. Animals were weighted biweekly until 109 &plusmn; 1,36 days of gestation, when transference to the farrowing unit was conducted. Between the first and second weighing, MOS gilts show a numerical advantage in daily weight gain (p=0,063). At farrowing, blood and colostrum samples were collected for determination antibodies titles against vaccine antigen, being considered positive 66,67% and 42,86% of MOS and Control sows, respectively. Piglets nursed by MOS sows had a numerical advantage in weight gain in the first week (p=0,0614), with statistical significance in the second week (p=0,047). On the third week, the second factor was introduced by the offering of solid feed (0,4% MOS). During the suckling period, from birth to 21 days of age, a numerical advantage in weight gain was observed for MOS sows piglets (p=0,0989). The sows themselves did not differ in weight change or feed consumption. At 23 &plusmn; 1,91 days of age, weaning was conducted, as piglets were transferred to nursing facilities and allocated in pens of 4 animals. Weight of MOS sows piglets was higher at weaning (p<0,001) and until the 5th week port-weaning. Feed consumption was affected by MOS supplementation of sows and by the higher weaning weight (p=0,0049), directly influencing weight gain, which was superior in the 2nd week. Feeding MOS to piglets enhanced feed consumption (p=0,0784) and feed conversion (p=0,0103) on the 2nd week. At 14 days of age, blood samples were collected for hemogram analysis and an oral dose of 108 CFU of Salmonella Typhimurium administered. Fecal consistency and rectal temperature were evaluated for 28 and 9 days, respectively. Piglets treated with MOS and MOS sows\' piglets tended to show a peek of hyperthermia earlier (p=0,0629 e p=0,0976, respectively). Piglets fed with MOS tended to show a lower temperature peek (p=0.0989). In the last week, MOS sows\' piglets show a higher feed consumption (p=0.0007) and a numerically inferior Salmonella incidence in mesenteric lymph nodes and feces 36 days after the bacterial challenge. In conclusion, supplementing primiparous sows with MOS during gestation and lactation can enhance their body weight gain and the performance and intestinal health of the offspring during the suckling and nursing period.

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Luiz Edivaldo Pezzato / Banca: Newton Castagnolli / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Sérgio Henrique Canello Schalch / Resumo: o objetivo deste estudo foi avaliar a aplicabilidade do modelo de crescimento exponencial no estudo da eficiência da suplementação alimentar com mananoligossacarídeo e 'beta'-glucano para tilápias do Nilo criadas em tanques-rede. O experimento foi realizado em piscicultura de criação de tilápias em tanques-rede, no município de Zacarias, SP. Foram utilizadas tilápias jovens, com peso inicial de 25,4 ± 2,04 g, distribuídas em 12 tanques-rede de 2 x 2 x 1,5 m, com volume útil de 6 m3 e densidade de 2500 peixes por tanque. Para estudo das curvas de crescimento, realizou-se a biometria individual de uma amostra aleatória de 5 % dos peixes de cada unidade experimental. Os resultados do presente estudo permitem concluir que a adição de 2000 mg de suplemento/kg de ração incrementa a taxa de crescimento de tilápias do Nilo criadas em sistema de tanques-rede e que o modelo de curvas exponenciais pode ser usado para comparar a eficiência de diferentes dietas em estudos de nutrição de peixes. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the exponential growth model applicability to study feed supplementation efficiency with mannan oligosaccharide and 'beta'-glucan in Nile tilapia raised in net cage. The trial was carried out in a cage fish farm, at Zacarias city, SP. Juveniles tilapia (initial weigh 25,4 ± 2,04 g) were distributed in 12 cages (2 x 2 x 1,5 m), with 6 m3 volume and stock density of 2500 fish per cage. To evaluate the exponential growth model, a randomized sample of 5 % fish was collected for individual biometry in each experimental unit. The results show that 2000 mg of supplement/kg diet increase the growth ratio of Nile tilapias raised in net cage and the exponential growth model can be used to compare efficiency of different diets in nutrition studies. / Doutor

As doenças negligenciadas infectam mais de um bilhão de pessoas no mundo, no entanto, uma fração ínfima dos fármacos registrados nos últimos anos é direcionada a essas patologias. Entre as doenças negligenciadas consideradas prioridade, encontram-se doença de Chagas e leishmaniose. A tuberculose, que recentemente não é mais classificada como negligenciada pela Organização Mundial da Saúde, também está entre as prioridades do Ministério da Saúde no Brasil. O arsenal terapêutico disponível para o tratamento destas enfermidades compreende fármacos com toxicidade elevada e resistência crescente, entre outros inconvenientes. Dessa forma, verifica-se a importância no desenvolvimento de novos fármacos para as referidas doenças. Para este fim, o presente trabalho objetivou a síntese de um fármaco dirigido de hidroximetilnitrofural (NFOH) com manana para a liberação específica em macrófagos. O processo de latenciação foi utilizado para a consecução desse objetivo por meio da estratégia de fármacos dirigidos, buscando elevar seletividade e potência do NFOH. Este composto protótipo possui ação potencial tripanomicida, leishmanicida e tuberculostática. O transportador utilizado foi a manana, polímero de manose, que direciona a liberação da molécula ativa em receptores de manose observados na superfície de macrófagos. Em razão da presença de Trypanosoma cruzi, Leishmania sp. e Mycobacterium tuberculosis no interior de macrófagos em parte de seu ciclo biológico, o referido receptor é considerado um alvo adequado à liberação específica. Na tentativa de obter o referido fármaco dirigido, diversas metodologias sintéticas foram desenvolvidas. Também, realizaram-se estudos de modelagem molecular a fim de se obter informações sobre a liberação do fármaco dirigido proposto. Face à dificuldade de obtenção do derivado de NFOH, adicionalmente, realizou-se metodologias sintéticas a fim de se sintetizar um fármaco dirigido de metronidazol, fármaco que possui atividade antichagásica conhecida. Realizaram-se, também, estudos de modelagem molecular relacionados à sua liberação. / Neglected diseases infect more than one billion people worldwide. However, a small fraction of the drugs registered in recent years is addressed to these pathologies. Leishmaniasis and Chagas\' disease are among the neglected diseases considered priority. Tuberculosis, which is no longer classified as a neglected disease by the World Health Organization, is also among the priorities of the Ministry of Health in Brazil. The therapeutic arsenal available for the treatment of those diseases comprehends drugs with high toxicity and increasing resistance, among other inconveniences. Thus, it is important the development of new drugs for those diseases. For this purpose, this study aimed at synthesizing hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) drug targeted with mannan for the specific release in the macrophages. Prodrug design was used to achieve this goal by means of targeted drugs strategy towards increasing NFOH selectivity and potency. This lead compound has potential trypanocidal, leishmanicidal and tuberculostatic activity. The directing group used was a mannose polymer, mannan, which directs the release of the active compound to mannose receptors (MR) on macrophages surface. Due to the presence of Trypanosoma cruzi, Leishmania sp. and Mycobacterium tuberculosis inside macrophages during part of their life cycle, MR are considered a suitable target for specific release. In an attempt to obtain the proposed compound, several synthetic methods have been developed. Also, molecular modeling studies were carried out to obtain information about the targeted drug release. Due to the difficulty of obtaining NFOH derivative, the synthesis of metronidazole targeted drug was tried. Also molecular modeling studies to predict metronidazole release from mannan derivative were performed.