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Estimación de la seguridad vial para peatones en intersecciones aplicando la matriz de riesgo / Estimation of road safety for pedestrians at intersections applying the risk matrix

Aroni Yallercco, Tony, Mantarí Cisneros, Marco Daniel 01 June 2020 (has links)
Los accidentes de tránsito es uno de los grandes peligros que afectan tanto a los individuos y a la sociedad. Cada año, más de 1.2 millones de personas mueren en el mundo y decenas de millones resultan gravemente heridas debido a los accidentes de tránsito. Actualmente, se utilizan diferentes metodologías para evaluar el nivel de seguridad vial, pero estas ya tienen parámetros determinados. Sin embargo, la matriz de riesgo permite agregar todos los atributos necesarios para una mejor evaluación. Dicha matriz se utiliza porque no requiere técnicas especializadas y es de simple aplicación. Para la discusión de los resultados se evaluó una intersección en zona escolar utilizando el iRAP, obteniendo un puntaje de 17.69, equivalente a 3 estrellas. Los parámetros y atributos fueron extraídos del iRAP para la realización de la matriz de riesgos, obteniendo como resultado vulnerabilidad ALTA, peligro MUY ALTO y riesgo ALTO. / Traffic accidents are one of the great hazards that affect both individuals and society. Each year, more than 1.2 million people die in the world and tens of millions are seriously injured due to traffic accidents. Currently, different methodologies are used to assess the level of road safety, but these already have certain parameters. However, the risk matrix allows adding all the necessary attributes for a better evaluation. This matrix is used because it does not require specialized techniques and is simple to apply. For the discussion of the results, an intersection in the school zone was evaluated using the iRAP, obtaining a score of 17.69, equivalent to 3 stars. The parameters and attributes were extracted from the iRAP for the realization of the risk matrix, resulting in HIGH vulnerability, VERY HIGH hazard and HIGH risk. / Trabajo de investigación
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Análisis elemental directo de muestras clínicas mediante espectrometría de masas con fuente de ionización de plasma acoplado por inducción

Cañabate López, Águeda 18 June 2019 (has links)
El análisis elemental de muestras clínicas presenta grandes dificultades que superar como el bajo volumen de muestra, la baja concentración de analitos de interés y la compleja matriz de la muestra. El sistema hTISIS se plantea como una posible solución para llevar a cabo este tipo de análisis, debido a que se puede trabajar en modo de introducción de muestra segmentada, siendo el volumen de muestra necesario de unos cuántos µL y a que se consigue una eficacia de transporte cercana al 100%, al trabajar con dicho sistema a elevadas temperaturas, independientemente de la matriz. Esto hace que se pueda analizar este tipo de muestras mediante calibración externa con patrones acuosos, lo cual es una gran ventaja sobre todo para aquellas muestras en las que además no existen patrones de referencia.
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Matrix of guidelines to improve the understandability of non-expert users in process mining projects

Teran, Bryhan Chise, Bravo, Jimmy Manuel Hurtado, Armas-Aguirre, Jimmy, Mayorga, Santiago Aguirre 01 June 2020 (has links)
El texto completo de este trabajo no está disponible en el Repositorio Académico UPC por restricciones de la casa editorial donde ha sido publicado. / Process Mining is a discipline that recognizes three types of analysis: Discovery, monitoring, and process improvement. Organizations are focusing on redesigning and automating their major processes, according to a report published in 2018 [1]. In this way, a challenge n process mining is to show the results of the process analysis in a way that is understandable to non-expert users. Therefore, this research paper introduces a matrix of guidelines to guide process mining specialists/tool developers to improve the results of the analysis in process mining projects. This matrix is composed of 2 study fields that throughout the literature have been merging their virtues. First, process mining under 2 of its 3 types of projects: (1) based on objectives and (2) based on questions. The last type is based on data (exploratory analysis). Second, visualization of data with its techniques to represent data graphically. This research proposes a matrix of guidelines that integrates the discipline of process mining and the set of data visualization techniques based on the purpose of each graph (technique), the question / objective to be achieved and the importance that colors take in the analysis results in the process mining projects. / Revisión por pares
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Sistema experto basado en reglas para optimizar la identificación, evaluación y medidas de mitigación de impactos ambientales apoyado en la matriz de Leopold

García Samamé, Silvia Cristina January 2012 (has links)
En la presente tesis aplicada en la gerencia de desarrollo Olmos área perteneciente al Proyecto Especial Olmos-Tinajones, se observa que dentro de todo proyecto de inversión, ya sea público o privado, los procesos que presentan más problemas son los de identificación, evaluación y medidas de mitigación. Debido a que dichos procesos son realizados manualmente, originan una situación de agotamiento y de trabajo tedioso para el responsable de realizar la evaluación de impacto ambiental contenida dentro del estudio de impacto ambiental de todo proyecto. Así como también, no es posible disponer de información histórica en un tiempo oportuno y de manera práctica debido a la falta de sistematización de las actividades que se desarrollan durante la ejecución de un proyecto y de los capítulos concernientes a la identificación, evaluación y plan de manejo ambiental donde se definen las medidas de mitigación a llevar a cabo. Es por esto, que los plazos estimados para la realización de estudios de impacto ambiental resultan muy amplios pudiendo demorar de 4 a 6 meses, dependiendo de la magnitud del proyecto que se realice. Por lo mencionado anteriormente, se tiene como objetivo mejorar los procesos de identificación y evaluación de impactos ambientales y obtener de manera más rápida y precisa, a través de la implementación del sistema experto basado en reglas, las medidas de mitigación de Estudios de Impacto Ambiental. Este trabajo de tesis se justifica debido a que gracias a la presente propuesta se logrará minimizar el tiempo empleado para la realización de los procesos, se permitirá disminuir los plazos de la realización de estudios ambientales.
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Optimización del sistema operacional de una línea expresa mediante el uso de datos de embarque y desembarque ante la alta demanda de viajes en hora punta de 5 a 8pm en el Metropolitano (Lima, Perú) / Operational system optimization of an express line by using shipping and landing data with the high travel demand at peak hours from 5 to 8 pm in the Metropolitano (Lima, Peru)

Barreto Dongo, Noel Alexander, Ramirez Gaviria, Alberto Alejandro 21 July 2020 (has links)
La presente investigación modela el sistema BRT Metropolitano mediante el uso del software TransCAD. Para la adecuada construcción de la matriz origen destino se recopilan datos de embarque y desembarque en los diferentes paraderos del sistema. Es por ello, que se calcula la muestra de encuestas a través de datos proporcionados por Protransporte, la empresa que administra el Metropolitano. En la información proporcionada se excluyeron días atípicos donde se obtuvo 1032 encuestas con una confiabilidad de 95% y un error de 4.2%. Luego, se usa el factor de expansión para obtener la situación actual con un total de 53,776 usuarios que viajan en la hora más crítica de la tarde de 6 a 7pm. Así mismo, se inserta la matriz OD para la asignación de viajes mediante el método de equilibrio de usuarios estocástico (SUE); en el cual, se obtiene una primera calibración de la situación actual. Posteriormente, se propone el escenario más óptimo a partir del cálculo de las cargas máximas con el uso de hojas de cálculo. Además, se obtienen nuevos parámetros como frecuencias, cantidades de buses, tiempo de viaje total, etc. Finalmente, se realiza la comparación de los resultados del escenario propuesto y actual donde se observan beneficios para el operador y los usuarios. Debido a que, la propuesta cuenta con un ahorro de 7,154.26 minutos de tiempo de viaje total por hora, la operación del sistema con quince buses menos y un índice de pasajeros por kilómetro recorrido (IPK) de cinco puntos adicionales al actual. / The present investigation models the BRT Metropolitano system through the use of TransCAD software. For the proper construction of the destination origin matrix, embarkation and disembarkation data must be collected in the different stops of the system. That is why the sample of surveys is calculated through data provided by Protransporte, the company that manages the Metropolitano. In the information provided, atypical days were excluded where 1,032 surveys were obtained with a 95% reliability and an error of 4.2%. Then, the expansion factor is used to obtain the current situation with a total of 53,776 users traveling in the most critical time of the afternoon from 6 to 7pm. Likewise, the OD matrix is inserted as a previous step to the travel assignment using the stochastic user equilibrium method (SUE), in which a first calibration of the current situation will be obtained. Subsequently, the most optimal scenario is proposed based on the calculation of the maximum loads with the use of spreadsheets. In addition, new parameters such as frequencies, bus numbers, total travel time, and various others are obtained. Finally, the results of the proposed scenario and the current one were compared, where benefits for the operator and the users of the system are observed. Since the proposal has a saving of 7,154.26 minutes of total travel time per hour, the operation of the system with fifteen fewer buses and a passenger index per kilometer traveled (IPK) five points more than the current one. / Tesis
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Avaliação histoquímica da densidade estromal e tipificação imuno-histoquímica de fibras colágenas envolvidas no carcinoma mamário de gatas

Jorge, Mariana Fernandes January 2019 (has links)
Orientador: Júlio Lopes Sequeira / Resumo: O carcinoma mamário em gatas apresenta comportamento clínico agressivo, com fatores biológicos semelhantes aos tipos triplo-negativo e basal do câncer de mama nas mulheres. O aumento na deposição de fibras colágenas com o passar do tempo representa um fator de risco ao seu desenvolvimento. Existe uma interação dinâmica e mútua entre as células neoplásicas e o estroma do microambiente dos tumores glandulares, com alta atividade biológica na periferia em relação ao centro. Este trabalho objetiva identificar a relação entre a densidade estromal das fibras colágenas (tipo I e III) e a agressividade do carcinoma mamário de gatas, nas regiões periférica e central do tecido, e compará-las segundo classificação histopatológica. Grupo controle representa o tecido saudável, e as 31 amostras de carcinoma mamário foram agrupadas segundo tipos histopatológicos (túbulo-papilífero; sólido; cribriforme), graduações (I, II, e III), e baixo e alto grau. As imagens dos cortes histológicos tratados pelo Picrossirius Red, foram avaliadas pelo Image.J® para obter valor médio de curtose, e pelo MatLab®, para entropia. Analisados estatísticamente pelo GraphPad 5 (GraphPad Software Inc®, La Jolla, CA) ANOVA com variância uniderecional, seguida teste de Bonferroni (p < 0,01). As fibras colágenas formam tipificadas e analisadas de forma descritiva. Houve diferença significativa entre os carcinomas e o tecido saudável em ambas regiões, com aumento da forma madura de colágeno III na porção central. Concl... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Feline mammary carcinoma Breast presents aggressive clinical behavior, with biological factors similar to the triple-negative and baseline types of breast cancer in women. The increase in the deposition of collagen fibers over time represents a risk factor for its development. There is a dynamic and mutual interaction between neoplastic cells and the stroma of the microenvironment of glandular tumors, with high biological activity on the periphery in relation to the center. This work aims to identify the relationship between the stromal density of collagen fibers (types I and III) and the aggressiveness of mammary carcinoma in cats, in the peripheral and central regions of the tissue, and to compare them according to histopathological classification. Control group represents healthy tissue, and the 31 breast cancer samples were grouped according to histopathological types (tubule-papillary; solid; cribriform), gradations (I, II, and III), and low and high grade. The images of the histological sections treated by Picrossirius Red, were evaluated by Image.J® to obtain an average kurtosis value, and by MatLab®, for entropy. Statistically analyzed by GraphPad 5 (GraphPad Software Inc®, La Jolla, CA) ANOVA with one-way variance, followed by Bonferroni test (p< 0.01). Collagen fibers are typified and analyzed in a descriptive way. There was a significant difference between carcinomas and healthy tissue in both regions, with an increase in the mature form of collagen III in the cent... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Influência da mercerização e irradiação por feixe de elétrons na aderência da fibra do ouriço da castanha do Brasil em matriz de polietileno de alta densidade / Influency of mercerization and electron beam irradiation on the adhesion between fibre from Brazil nut pod and a high density polyethilene matrix

Campos, Rejane Daniela de 18 September 2015 (has links)
O interesse na utilização de fibras naturais com matrizes poliméricas para a preparação de compósitos espalhou-se rapidamente ao longo dos últimos anos. No entanto, a adesão interfacial entre a fibra e a matriz tem ainda de ser aperfeiçoada. Para melhorar a adesão entre os constituintes e, consequentemente as propriedades mecânicas e térmicas dos materiais, duas abordagens foram investigadas: a irradiação por feixe de elétrons e a mercerização. Este trabalho descreve a fabricação e caracterização de biocompósitos de polietileno de alta densidade e fibra do ouriço da castanha do Brasil que foram preparadas por duas metodologias diferentes: a primeira foi irradiar o compósito com 150 kGy e a segunda foi irradiar a matriz com 15 kGy e então produzir o compósito. Para ambas as metodologias foram utilizadas fibras naturais mercerizadas e não mercerizadas. O efeito dos tratamentos estudados para melhorar a adesão entre a fibra e a matriz polimérica foi avaliado através de caracterizações mecânica, química, térmica e morfológica. Com base neste estudo, observou-se que a fibra do ouriço da castanha do Brasil é um material tecnicamente viável para uso como reforço em compósitos poliméricos. Observou-se que o processo de irradiação da matriz seguida da produção dos compósitos é um método eficaz para melhorar as propriedades térmicas e mecânicas dos compósitos biopoliméricos e que, quando comparado com o processo de mercerização, esse método pode ser considerado mais ambientalmente correto (sem produtos químicos e sem geração de resíduo), mais barato e mais simples. / The interest in the use of natural fibres with polymeric matrix for the preparation of composite spread rapidly over the last years. However, the interfacial adhesion between the fiber and the matrix has to be improved. To improve the adhesion between the constituents and consequently the mechanical and thermal properties of materials, two approaches were investigated: electron beam irradiation and mercerization. This paper describes the fabrication and characterization of biocomposites compounds with high density polyethylene and fibre from Brazil nut pod that were prepared by two different methods: the first irradiating the composite with 150 kGy and the second was radiating matrix with 15 kGy and then produce the composite. For both methodologies, natural fibers, mercerized and non-mercerized were used. The effect of the treatments to improve adhesion between the fiber and the polymer matrix was evaluated through mechanical, chemical, thermal and morphology charcterization. Based on this study, it was observed that fibre from Brazil nut pod is a technically viable material for use as reinforcement in polymer composites. It was observed that the process of matrix irradiation followed by the composite fabrication is an effective method for improving the thermal and mechanical properties of the composites, when compared with mercerization process, this method can be considered more environmentally friendly (no chemicals, and without generating waste), cheaper and simpler.
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Recidiva local de carcinomas epidermóides da boca e orofaringe: estudo de variáveis anatomopatológicas e de marcadores biológicos associados ao prognóstico em pacientes submetidos à cirurgia de resgate / Local recurrence of squamous cell carcinomas of the mouth and oropharynx: a study of anatomic pathology variables and biological markers associated with prognosis in patients submitted to salvage surgery

Agra, Ivan Marcelo Gonçalves 16 August 2007 (has links)
INTRODUÇÃO: Recidivas locais e loco-regionais são as principais causas de falha do tratamento em pacientes portadores de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe. A cirurgia de resgate é geralmente a melhor opção terapêutica para esses pacientes. Esse estudo tem por objetivo avaliar a importância prognóstica da expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 e VEGF em pacientes com recidiva local submetidos à cirurgia de resgate. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Os prontuários de 111 pacientes portadores de recorrência local de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe foram analisados de forma retrospectiva. A localização do tumor primário foi o lábio em 10 casos (9%), a cavidade oral em 68 (61%) e a orofaringe em 33 (30%). O tratamento prévio foi cirurgia em 33 casos (30%), radioterapia associada ou não à quimioterapia baseada em cisplatina em 46 (41%) e cirurgia com radioterapia adjuvante em 32 (29%). A expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF foi avaliada com a técnica do Tissue Microarray. RESULTADOS: O intervalo livre de doença variou de 0,89 a 140,9 meses, com uma mediana de 6,87 meses. As recidivas foram diagnosticadas em intervalo de tempo inferior a 1 ano em 69 pacientes (62,2%) e após 1 ano em 42 (37,8%). Os pacientes com intervalo livre de doença inferior a 1 ano apresentaram pior resultado de sobrevida (p=0,01). O estádio clínico da recidiva (rEC) foi I ou II em 31 casos (27,9%) e III ou IV em 80 (72,1%). Pacientes com doença em estádio clínico mais avançado (rEC III ou IV) apresentaram piores taxas de sobrevida específica por câncer (p=0,04). Hiper-expressão do EGFR foi associada a pior resultado do tratamento. Os casos com EGFR positivo obtiveram sobrevida específica por câncer em 3 anos de 27,2%, enquanto pacientes com EGFR negativo alcançaram 64,3% de sobrevida em 3 anos (p=0,001). A expressão das proteínas MMP-2, MMP-9 e VEGF não se mostrou significativa para o prognóstico (p=0,83, p=0,15 e p=0,86, respectivamente). Na análise multivariada, apenas o intervalo livre de doença e a expressão do EGFR foram associadas à maior risco de morte. CONCLUSÕES: Recidivas locais de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe são associadas a mau prognóstico. Intervalo livre de doença superior a 1 ano e ausência de expressão do EGFR foram os principais fatores associados a melhores resultados de sobrevida específica por câncer em pacientes submetidos à cirurgia de resgate. / INTRODUCTION: Local and regional relapses are the main sites of treatment failure in patients with oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma. In these instances, salvage surgery is the most widely used treatment approach. The aim of this study is to analyze the prognostic effect of the expression of EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF in patients with recurrent cancer sumitted to salvage surgery. METHODS: The charts of 111 patients with local recurrence of oral or oropharyngeal squamous cell carcinomas were retrospectively analyzed. The tumor sites were: the lip in 11 cases (9%), the oral cavity in 68 (61%) and the oropharynx in 33 (30%). The previous treatment was: Surgery in 33 patients (30%), radiotherapy with or without cisplatin based chemotherapy in 46 (41%) and surgery with adjuvant radiotherapy in 32 (29%). EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF expressions were analyzed with tissue microarray immunohistochemical technique. RESULTS: The disease-free interval ranged from 0.89 to 140.9 months with a median of 6.87 months. The patients were categorized into two groups: Those with recurrence in less than 1 year (69 patients - 62.2%) and those with recurrence after 1 year (42 - 37.8%). The group with the shorter disease-free interval presented a worse prognosis (p=0.01). The clinical stage of recurrence (rCS) was I/II in 31 cases (27.9%) and III/IV in 80 cases (72.1%). Patients with more advanced diseases (rCS III/IV) had worse rates of cancer specific survival (CSS) than patients with rCS I/II (p=0.04). An over-expression of EGFR was associated with worse treatment results. Positive EGFR cases had a 3 year CSS of 27.2%, while EGFR negative patients had 64.3% (p=0.001). The MMP-2 and MMP-9 over-expression were also associated with a worse prognosis but without statistical significance (p=0.83 and p=0.15). VEGF expression did not show prognostic significance in this group of patients. In a multivariate analysis only the disease-free interval and over-expression of EGFR were associated with a higher risk of death. CONCLUSION: Local recurrence in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas usually indicates an unfavorable prognosis. A disease-free interval greater than 1 year and a negative EGFR expression are the main prognostic factors which indicate a better cancer specific survival rate in patients submitted to salvage surgery.
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Utilização da matriz dérmica acelular e matriz óssea inorgânica/P-15 na preservação das deformidades da crista óssea alveolar após extração dentária em humanos / Ridge Preservation with Acellular Dermal Matrix and Anorganic Bone Matrix Cell-Binding Peptide P-15 following tooth extraction in humans

Fernandes, Patricia Garani 28 May 2010 (has links)
Introdução: A regeneração óssea guiada baseia-se no princípio de seletividade celular, utilizando membranas para impedir a migração de células indesejadas dos tecidos moles e guiar a proliferação de células osteogênicas. A MDA é um biomaterial que tem sido amplamente utilizado em procedimentos regenerativos periodontais, não somente por ser biocompatível, mas também pela sua capacidade reconstrutiva em proporcionar um aumento da faixa de tecido queratinizado. Em pesquisas recentes, foi demonstrado o envolvimento de uma cadeia de 15 aminoácidos do colágeno (P-15) na diferenciação celular de fibroblastos e osteoblastos. A associação de matriz óssea inorgânica bovina com o P-15 (MOI/P-15) tem apresentado bons resultados. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a eficácia da MDA associada à MOI/P-15 na preservação da crista alveolar após extração dentária em humanos. Metodologia: Foram selecionados 18 pacientes que necessitavam de exodontia de dentes anteriores da maxila com pelo menos dois dentes não contíguos. Foi adotado o modelo boca dividida. Após as extrações dentárias foram realizadas cirurgias regenerativas de preservação da crista alveolar utilizando MOI/P-15 (GT) em um alvéolo e o coágulo sanguíneo no outro alvéolo (GC). Após a inserção do substituto ósseo, a MDA foi posicionada e fixada com parafusos sobre os dois alvéolos para servir como membrana. O retalho foi suturado deixando 2 mm da MDA expostos na porção central. As medidas clínicas MVEP, MVEV e MAH foram registradas na primeira cirurgia e após 6 meses, na cirurgia de reentrada, tomando-se como pontos de referência os parafusos de titânio. Resultados Na análise intragrupos, após seis meses, houve redução estatisticamente significante nas medidas MVEP, MVEV e MAH para ambos os grupos. Para o grupo teste, houve redução na MVEP de 2,80 ± 1,61 para 1,97 ± 1,67 mm; na MVEV de 5,80 ± 1,74 para 4,60 ± 2,05 mm e na MAH de 7,40 ± 2,16 para 4,87 ± 1,51 mm. Para o grupo controle, a MVEP variou de 2,50 ± 1,24 para 1,63 ± 1,32 mm; a MVEV de 6,27 ± 1,75 para 4,77 ± 1,59 mm e MAH de 7,60 ± 1,18 para 4,20 ± 1,00 mm. Para a comparação entre os grupos, além das medidas iniciais e finais, foram calculadas as diferenças entre elas para cada grupo. No grupo teste, a diferença para MVEP foi de 0,83 ± 1,53 e no controle foi de 0,87 ± 1,13 mm; e para MVEV foi de 1,20 ± 2,02 e 1,50 ± 1,15 mm para os grupos teste e controle, respectivamente. Na medida horizontal (MAH) foi encontrada diferença estatística quando comparadas as diferenças no grupo teste e controle que foi de 2,53 ± 1,81 mm para o grupo teste e 3,40 ± 1,39 mm para o grupo controle (p<0,05). Conclusão: Os resultados deste estudo mostram que a MDA, associada ou não a MOIP-15, pode ser utilizada com sucesso como membrana para preservação do rebordo alveolar após extração dentária de dentes maxilares anteriores. A associação com o enxerto favorece de maneira significativa a manutenção da espessura no sentido horizontal da crista alveolar. / Background: Preventing ridge collapse with the extraction of maxillary anterior teeth is vital to an esthetic restorative result. Several techniques are available to regenerative procedures and are used for socket preservation. The aim of this study was to analyze by clinical parameters the use of acellular dermal matrix (ADM) and anorganic bovine bone matrix (ABM) with a synthetic cell-binding peptide P-15 to preserve alveolar bone after tooth extraction. Methods: Eighteen patients in need of extraction of maxillary anterior teeth were selected and they were randomly assigned to the test (ADM plus ABM/P-15) or control (ADM only). Clinical measurements were recorded at initial and 6 months after ridge preservation procedures. Results: In the clinical measurements - External Vertical Palatal, External Vertical Buccal and Alveolar Horizontal (EVPM, EVBM and AHM) -, the statistical analysis showed no difference between test and control groups in the initial and at six months. The intragroup analysis, after six months, showed a statistically significant reduction in the measurements for both groups. In the comparison between the groups, the differences (mm), in the test group, were: EVLM=0.83±1.53, EVBM=1.20±2.02, AHM=2.53±1.81 and in the control were: EVLM=0.87±1.13, EVBM=1.50±1.15, AHM=3.40±1.39. The differences in EVLM and EVBM measurements were no statistically significant; however, in horizontal measurement (AHM), there was statistically difference (p<0.05). Conclusion: The results of this study show that ADM, with or without ABM/P-15, can be successfully when it is used as a membrane for preservation of alveolar ridge after tooth extraction of maxillary teeth earlier.
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Expressão gênica de moléculas da matriz extracelular e da membrana celular durante a diferenciação de células-tronco adultas da polpa dentária humana / Gene expression of extracellular matrix and cell membrane molecules during cellular differentiation from human dental pulp stem cells

Silva, Luiz Henrique Santos 17 March 2014 (has links)
As células-tronco mesenquimais (MSCs) são células multipotentes que tem o potencial de se diferenciarem em várias linhagens celulares in vitro e in vivo. Estas são encontradas em nichos específicos em muitos órgãos e tecidos adultos, tais como medula óssea, tecido adiposo, músculo, dente, cordão umbilical, pele, cartilagem articular, sendo facilmente isoladas, expandidas e com alta capacidade proliferativa in vitro. Assim, estas características têm despertado grande interesse na sua utilização como uma potencial fonte de células para o reparo e regeneração tecidual de diversos órgãos e tecidos. Pouco se conhece sobre as moléculas que são secretadas pelas MSCs para a matriz extracelular (MEC) e que estão na interface célula-matriz e estão presentes em vias de transdução de sinais intracelulares. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil de expressão gênica de enzimas que remodelam a MEC (metaloproteinases de matriz MMPs: 15 membros) e seus inibidores (inibidores teciduais das metaloproteinases de matriz TIMPs: 4 membros e RECK) e proteína da membrana plasmática (Caveolina-1) durante a diferenciação osteogenica in vitro a partir de células-tronco mesenquimais da polpa dentária humana (DPSCs). Para tanto, utilizamos polpas dentárias humanas provenientes de terceiros molares de indivíduos adultos (18-32 anos n=3) e as DPSCs isoladas foram imunofenotipadas por citometria de fluxo, avaliada a taxa de proliferação, induzidas as diferenciações osteogênica (1, 7, 14, 21 e 28 dias) e adipogênica (28 dias) e os transcritos avaliados por PCR em tempo real. Estas células foram positivas para o marcadores CD29, CD105, STRO-1, CD44, CD90 negativas os marcadores para CD31, CD45, CD34 e CD14 e são capazes de se diferenciarem em osteoblastos e adipócitos. Verificamos que as MMP-2, MMP-3, MMP-13, MMP-14, MMP-25, TIMP-3, TIMP-4 e Caveolina-1 foram diferencialmente expressas durante a diferenciação osteogênica, sendo reguladas positivamente apenas no período de 28 dias pós indução e a TIMP-1 regulada positivamente desde o primeiro dia de indução. A MMP-11 e MMP-16 não foram detectadas nas DPSCs e nem durante a diferenciação osteogênica. Desta forma, concluímos que MMPs encontradas bem como a Caveolina-1 e as TIMP-3 e TIMP-4 podem estar participando dos dos eventos de diferenciação óssea em DPSCs, a TIMP-1 pode estar participando de eventos biológicos relacionados as propriedades do estado indiferenciado das DPSCs e da diferenciação óssea e que as MMP-11 e MMP-16 não são expressas pelas DPSCs e também não estão envolvidas na diferenciação osteogênica. / Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent cells that have the potential to differentiate into various cell lineages in vitro and in vivo. These are found in specific niches in many adult organs and tissues, such as bone marrow, adipose tissue, muscle, tooth, umbilical cord, skin, cartilage, being easily isolated, expanded and high proliferative capacity in vitro. Thereby, these features have attracted great interest in its use as a potential source of cells for tissue repair and regeneration of various organs and tissues. Little is known about the molecules secreted by MSCs into the extracellular matrix (ECM), present at cell-matrix interface and present on intracellular signal transduction. Thus, the aim of this study was to evaluate gene expression profile of ECM remodeling enzymes (matrix metalloproteinases MMPs: 15 members) and their inhibitors (tissue inhibitors of matrix metalloproteinases TIMPs: 4 members and RECK) and plasma membrane proteins (Caveolin-1) that participate in signaling pathways during osteogenic differentiation in vitro from human dental pulp stem cells (DPSCs). Normal human impacted third molars were collected from adults (18-32 years-old n=3) and DPSCs isolated were immunophenotyping by flow cytometry, evaluated the proliferation ratio, induced to osteogenic (1, 7, 14, 21 and 28-days) and adipogenic differentiation (28-days) and the transcript levels evaluated by Real Time PCR. These cells are positive for CD29, CD105, STRO -1, CD44, and CD90 markers and negative for CD31, CD45, CD34, and CD14 markers and are capable of differentiating into osteoblasts and adipocytes. We found that MMP- 2, MMP -3, MMP -13, MMP -14, MMP -25, TIMP-3, TIMP-4 and Caveolin-1 were differentially expressed during osteogenic differentiation, being upregulated only at 28 days post-induction and TIMP-1 upregulated from the first day of induction. MMP-11 and MMP-16 were not detected in DPSCs neither during differentiation. Thus, we conclude that MMPs, Caveolin-1 found as well as TIMP-3 and TIMP-4 may be participating in the event of bone differentiation in DPSCs, TIMP-1 may participate in biological events related to the properties of the undifferentiated state DPSCs and osteogenic differentiation, MMP-11 and MMP-16 are not also expressed by DPSCs and are not involved in osteogenic differentiation.

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