Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade de Brasília, Brasília, 2013. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo: foi restrito o capítulo 3. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-08-09T15:31:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / A família Geminiviridae é caracterizada por espécies virais com partículas de morfologia geminada e genoma composto por DNA circular de fita simples, sendo o gênero Begomovirus o mais importante em termos de número de espécies e impacto econômico. Os begomovírus do Novo Mundo, em sua maioria, possuem dois componentes genômicos (DNA-A e DNA-B), são transmitidos por Bemisia tabaci (mosca-branca) e infectam plantas dicotiledôneas. A forma mais eficiente de controle tem sido o emprego de cultivares resistentes ao vírus e/ou ao vetor. No entanto, os dados referentes à eficiência e ao espectro da resposta das diferentes fontes de resistência para as espécies que compõe o complexo de begomovírus bipartidos do Brasil ainda são escassos. Os principais fatores de resistência empregados têm sido os loci Ty-1 e Ty-3 derivados de S. chilense. No entanto, a linhagem ‘TX-468-RG’ (portadora do gene recessivo tcm-1) derivada de ‘Tyking’ tem se destacado entre as diversas fontes por apresentar elevados níveis de resistência contra uma ampla gama de espécies de begomovírus de genoma bipartido do Brasil e monopartido da Europa. A estratégia de piramidização de genes de resistência aos begomovírus, para ser eficiente, requer o uso de marcadores moleculares em sistemas de melhoramento assistido para monitorar a incorporação de diferentes loci (dominantes e recessivos), especialmente por eles conferem idêntico fenótipo. No entanto, até o presente momento, não foram desenvolvidos trabalhos visando identificar a localização cromossômica ou desenvolver marcadores moleculares para monitorar a incorporação do locus tcm-1 em programas de seleção assistida. No Capítulo 2, a linhagem ‘TX-468-RG’(controle resistente) e cinco novas fontes/acessos de S. lycopersicum que se mostraram como promissoras fontes em ensaios conduzidos em telado e campo (‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ e ‘Ty-198’) foram inoculadas via bombardeamento de micropartículas com clones infectivos de quatro espécies do complexo de begomovírus bipartidos do Brasil: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) e Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). A cultivar ‘Viradoro’ foi utilizada como controle suscetível. A acumulação do DNA viral nos diferentes acessos foi monitorada via Southern Blot. ‘Viradoro’ apresentou sintomas severos e alto acúmulo de DNA para todos os vírus. O acesso ‘H-24’ (fonte do locus Ty-2 introgredido de S. habrochaites) se mostrou suscetível ao ToSRV e ToRMV. A linhagem ‘LAI 132’ mostrou resistência efetiva apenas contra ToCMoV. ‘TX-468-RG’ e os acessos ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ foram resistentes a todas as espécies virais, sendo, portanto, recomendados como fontes preferenciais em programas de melhoramento, para incorporar fatores de resistência de mais amplo espectro. Uma análise foi conduzida com um painel de marcadores moleculares ligados aos principais loci de resistência a begomovírus caracterizados em tomateiro (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5). Os resultados indicaram que os acessos ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ representam fontes de novos genes e/ou alelos de resistência. No Capítulo 3 o objetivo foi identificar e ancorar marcadores moleculares associados com o gene/locus tcm-1 no genoma-referência do tomateiro, permitindo a localização física desse fator de resistência. Os resultados da análise de uma população F2 segregando para reação a um isolado do ToSRV e da caracterização molecular de um painel de marcadores do tipo SCAR e CAPS associados com a resistência indicaram que o gene tcm-1 está localizado no topo do cromossomo 6. O locus tcm-1 se encontra em ligação estreita com um grupamento (‘cluster’) de genes de resistência que engloba a região genômica contendo os genes Ty-1 e Mi. Recentemente, um locus recessivo no cromossomo 4 controlando resistência a isolados da espécie de genoma monopartido Tomato yellow leaf curl virus foi reportado na Flórida. Essa região genômica contem o gene dominante Ty-5 e uma provável variante alélica de natureza recessiva (também derivada do híbrido ‘Tyking’) nomeada como ty-5. Embora polimórficos na população de mapeamento utilizada no presente trabalho, os marcadores moleculares para o locus Ty-5/ty-5 não se mostraram associados com a resposta de resistência ao ToSRV. Desta forma, nossos resultados indicam que tcm-1 e Ty-5/ty-5 são fatores genéticos distintos e que o híbrido ‘Tyking’ (fonte original do locus tcm-1) pode representar uma pirâmide de diferentes genes recessivos do tipo espécie-específico que, quando em associação, se mostram efetivos contra uma ampla gama de espécies de Begomovirus de genoma monopartido e bipartido de diferentes continentes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Geminiviridae family is composed by virus species with geminated particles and circular, single-stranded DNA genome. The genus Begomovirus is the most important within this family in terms of number of species as well as in economic impact. The majority of begomoviruses from the New World has two genomic components (DNA-A and DNA-B), and they are transmitted to dicotyledonous plants by the whitefly Bemisia tabaci. The most efficient disease control strategy is the employment of cultivars with genetic resistance to either the virus or its vector. However, the amount of information available about the phenotypic expression, as well as the spectrum of efficiency of the distinct Solanum (section Lycopersicon) resistance sources to Brazilian begomovirus is still limited. So far, the Ty-1 and Ty-3 loci (introgressed from accessions of the wild species S. chilense) are the most employed resistance factors. The inbred line ‘TX-468-RG’ derived from the hybrid S. lycopersicum ‘Tyking’ is one of the most important sources of wide-spectrum resistance, being effective against a wide range of begomovirus isolates from both bipartite species from Brazil and monopartite species from Europe. To increase the efficiency of the pyramidization process, the establishment of a marker assisted selection system to all known (dominant and recessive) begomovirus resistance loci is necessary. However, molecular markers are still not available for the tcm-1 locus and even its genomic location is yet unknown. In Chapter 2, ‘TX-468-RG’ (resistant control due to presence of the recessive locus tcm-1) and five new accessions identified as promising sources of resistance in assays conducted under either greenhouse orfield conditions (named as ‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ and ‘Ty-198’), were evaluated in biolistic assays with infective clones of four begomovirus of the Brazilian complex virus: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) and Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). The tomato cultivar ‘Viradoro’ was employed as susceptible control. Virus accumulation was monitored in all accessions via Southern Blot assays using a universal probe. ‘Viradoro’ displayed severe symptoms and high viral DNA accumulation in all assays. The line ‘H-24’ (source of Ty-2 locus introgressed from S. habrochaites) displayed a susceptible reaction to ToSRV and ToRMV. The accession ‘LAI 132’ displayed a peculiar species-specific resistant reaction only to ToCMoV. The ‘TX-468-RG’ as well as the accessions ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ were resistant to all virus species, being, therefore, recommended for preferential use in breeding programs aiming to develop lines with wider spectrum of resistance. Analyses conducted with a panel of molecular markers linked to all currently characterized begomovirus resistance loci in tomato (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5) indicated that ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ are sources of either new genes or alleles for begomovirus resistance. In Chapter 3, molecular markers were developed in association with tcm-1 and were anchored in the reference tomato genome, aiming to develop efficient marker-assisted selection systems for this locus. Co-segregation analyses of an F2 population inoculated with an ToSRV isolate and the molecular characterization of a panel of SCAR and CAPS markers linked to the resistant reaction indicated that tcm-1 is located on the top of the chromosome 6 in linkage with a the well-characterized cluster of resistance genes, encompassing the Ty-1 and Mi loci. More recently, a recessive resistance to Florida isolates of the monopartite Tomato yellow leaf curl virus was also was characterized in inbred lines derived from the hybrid ‘Tyking’. This gene and its putative allelic variant (located in chromosome 4) have been tentatively named as Ty-5/ty-5. Even though polymorphic in our mapping population, the molecular marker linked with the Ty-5/ty-5 genomic region segregated independently from the resistant reaction to ToSRV. Therefore, our results indicated that tcm-1 and Ty-5/ty-5 are distinct resistance factors, and that ‘Tyking’ (the original source of the locus tcm-1) might represent a pyramid of distinct Begomovirus species-specific recessive genes, that in association might confer effective reaction observed against a range of monopartite and bipartite species in distinct continents.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-11-29T14:31:37Z No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-12-05T13:23:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / A técnica de produção in vitro de embriões (PIVE) refere-se a uma série de procedimentos in vitro, maturação (MIV), fertilização (FIV) e cultura do zigoto (CIV), necessárias para produzir embriões a partir de oócitos imaturos. Para avaliar a viabilidade e a competência do embrião é evidente que a transferência deste para fêmea receptora (TE) e a análise do neonato é o que vai definir a real efetividade dos processos de PIVE. O nosso objetivo é a montagem e padronização das técnicas de PIVE e TE, validação das técnicas in vitro pela produção de embriões provenientes de oócitos captados por aspiração folicular e maturados em meio TCM-199; e oócitos de matadouro maturados em meios testes de α-MEM e controle comercial. Em busca de melhores condições de cultura e de um sistema in vitro que fosse menos variável e, ao mesmo tempo, que simulasse a maturação do oócito observada no animal in vivo, desenvolvemos vários sistemas de cultura para a MIV, nos quais meios definidos foram formulados, testados e alguns patenteados. Os meios foram: α-MEMC, α-MEMB e α–MEMO. O primeiro meio, mais complexo, utiliza hormônios e agentes oxidantes, o segundo meio, não contém hormônios e o terceiro é composto pelo diluente. Ao serem comparados com o meio controle TCM-199, inibiram a maturação nuclear, produziram menor grau de poliespermia (α-MEMC), produziram a mesma porcentagem de embriões. FSH de suíno foi usado nos meios α-MEMB e α–MEMO e não houve diferenças na porcentagem de embriões produzidos calculados com base no número de oócitos. Estes experimentos foram realizados com ovários provenientes de abatedouros. In vivo foram coletados 600 oócitos de doadoras mestiças girolandas, maturados no meio controle TCM-199, sendo os embriões transferidos para as fêmeas receptoras aneloradas, previamente escolhidas, e preparadas por protocolo hormonal para a sincronização do cio e avaliadas com ultrassom para receber o embrião de FIV. Os demais embriões formados nos meios testes foram congelados para estudos futuros de expressão de gens de competência e viabilidade e epigenética. Após a TE as fêmeas receptoras foram monitoradas e avaliadas 30 e 90 dias após PIVE para verificar a taxa de gestação; sendo confirmada a prenhez, as fêmeas receptoras foram separadas para acompanhamento da gestação até o momento do parto. As taxas de prenhez foram de 40%, as de nascimentos 25% e de neonatos saudáveis 20%, valores iguais ou maiores dos relatados na literatura. De maneira importante, a metodologia apresentada neste trabalho é a parte prática realizada in vivo, que envolve a captação de oócitos por aspiração folicular, a preparação da receptora, a transferencia dos embriões de PIVE, a avaliação da prenhez e do neonato; representam uma alternativa viável para serem utilizadas em experimentos futuros e para a aplicação comercial. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The technique of production in vitro embryos (PIVE) refers to a series of procedures in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF) and zygote culture (MIC) needed to produce embryos from Immature oocytes. To assess the viability and competence of the embryo is evident that this transfer to recipient female (TE) and the analysis of the neonate is what will define the actual process effectiveness PIVE. Our goal is the assembly and standardization of techniques and PIVE TE, and validation techniques in vitro by the production of embryos from oocytes by ovum and matured in TCM-199; slaughterhouse and oocytes matured in means tests of α-MEM and commercial control. In search of a better culture and a system in vitro that was less variable and at the same time, to simulate oocyte maturation observed in animal in vivo, developed several systems for IVM culture, in which defined media were formulated, tested and patented some. The means were: MEMC-α, α-MEMB and α-MEM. The first half, more complex, uses oxidizing agents hormones and the second half contains no hormones and the third consists of the diluent. To be compared with the control medium TCM-199, inhibited nuclear maturation, produced a low degree of polyspermy (α-MEMC), produced the same percentage of embryos. FSH pig was used in the media and MEMB α-α-MEM and there were no differences in the percentage of embryos produced calculated based on the number of oocytes. These experiments were performed with ovaries from slaughterhouses. In vivo 600 oocytes were collected from crossbred donors Girolanda, matured in control medium TCM-199, and the embryos transferred (ET) for females receiving graded Nelore, previously chosen and prepared by hormonal protocol for synchronization of estrus and evaluated with receiving ultrasound to IVF embryos. The remaining embryos formed in means tests were frozen for future studies of expression of genes of competence and viability and epigenetics. After receiving TE females were monitored and evaluated 30 and 90 days after PIVE to verify pregnancy rate, pregnancy is confirmed, the recipient females were separated for the monitoring of pregnancy until delivery. Pregnancy rates were 40%, the 25% of births and 20% of healthy neonates, equal or higher values reported in the literature. Importantly, the methodology presented in this paper is the practical performed in vivo, which involves the collection of oocytes by ovum, the preparation of the recipient, the transfer of embryos PIVE, assessment of pregnancy and the newborn, represent a viable alternative for use in future experiments and for commercial application.

Os solos de várzea ou hidromórficos têm como principal característica a drenagem natural defi lente. No Rio Grande do Sul, este tipo de solo representa 20% da ár a, sendo cultivado principalmente em um sistema de arroz e pecuária de corte. O milho pode ser uma alternativa para rotação de culturas em áreas de várzea, entretanto é indispensável o desenvolvimento de genótipos tolerantes ao encharcamento do solo. Este trabalho teve por objetivo avaliar a variabilidade enética da tolerância ao encharcamento do solo em milho, bem como avalia a complexidade de fatores envolvidos na tolerância ao encharcamento. Uma série de experimentos foi realizada em casa de vegetação para testar a reação de 105 genótipos de milho sob estresse e foram feitas análises de tecido da parte aérea das plantas para avaliar os diferentes fatores en olvidos. Os resultados indicaram a presença de variabilidade genética para a tolerância ao estresse. Em torno de 4% dos genótipos testados de onstraram tolerância, apresentando-se mais verdes e mais vigorosos em rel ção aos demais no decorrer de cada experimento. A temperatura foi um f tor decisivo na avaliação da tolerância, sendo que temperaturas mais altas aumentaram os efeitos nocivos ocasionados pelo encharcamento. O alagamento do solo determinou uma elevação drástica na concentração de ferre e uma redução nos elementos nitrogênio, fósforo, potássio e boro no tccido das plantas. As plantas sensíveis apresentaram teores de sódio signifi ativamente maiores no tecido em comparação com as plantas tolerantes. Co o conclusão, é possível selecionar genótipos de milho adaptados às condiço:s de encharcamento do solo, entretanto a análise deste estresse é complexa • evido à interação com diversos fatores do ambiente, especialmente a temperatura. / Lowland or hydromorphic soils present naturally poor drainage. In Rio Grande do Sul this type of soil represents 20% of the total cultivated area. R is cultivated under a rice and livestock succession system. Maize may be an alternative to crop rotation in these areas, however it is essential to develop waterlogging tolerant genotypes. This study aimed to evaluate the genetic variability for waterlogging tolerance in maize, and to assess the complexity of factors involved in waterlogging tolerance. Several experiments were conducted in greenhouse to test the reaction of 105 maize genotypes. Tissue analysis was additionally performed to evaluate different factors involved. Results indicated genetic variability for stress tolerance. About 4% genotypes showed tolerance, presenting greener leaves and more vigorous during each experiment. Temperature was a decisive factor for tolerance evaluation, where higher temperatures increased stress by fiooding. Waterlogging caused an elevation in iron tissue concentration. At the same time nitrogen, phosphorus, potassium, and boron concentration were decreased. Sensitive plants showed significantly higher levels of sodium on the tissues when compared to tolerant plants. As a conclusion, it is possible to select maize genotypes adapted to waterlogging conditions, however stress analysis is complex due to interaction with several environmental factors, especially temperature.

As condições ambientais do subtrópico brasileiro favorecem o desenvolvimento da ferrugem da folha da aveia de maneira que a severidade torna-se alta e extremamente danosa. O desenvolvimento de variedades com resistência parcial (RP), tem sido sugerido como uma estratégia para tornar a efetividade da resistência à ferrugem da folha mais durável. Este trabalho teve por objetivos determinar a variabilidade, quantificar a herdabilidade e identificar as regiões genômicas (QTLs) associadas à expressão da RP, em linhagens do cruzamento UFRGS 7 x UFRGS910906, avaliadas na média de parcelas. Oitenta e três linhagens F6:7 e F6:8 e os genitores UFRGS 7 (suscetibilidade) e UFRGS 910906 (parcialmente resistente) foram avaliados, em 2002 e 2003, quanto à severidade da ferrugem da folha da aveia no decorrer do ciclo da cultura, em parcelas experimentais. A partir desses dados, foi calculada a área sob a curva do progresso da doença (ASCPD), a severidade máxima (SM) e o tempo em dias para atingir 12,5% da SM (T12,5). O rendimento de grãos (REND) e o peso de hectolitro (PH) das linhagens com RP foram comparados nos tratamentos com e sem fungicida. Uma análise por intervalo simples foi utilizada para identificar em mapa molecular F6, anteriormente desenvolvido, QTLs associados à ASCPD, SM e T12,5. A população de UFRGS 7 X UFRGS 910906 apresentou variabilidade para os parâmetros da RP, com as linhas 211, 238, 241, 243 e 245 apresentando os menores valores de ASCPD, SM e T12,5, nos dois anos. As estimativas de herdabilidade de ASCPD (0,87), SM (0,86), T12,5 (0,76), REND (0,99) e PH (0,64) foram altas. Seis QTLs foram identificados para as características ASCPD, SM e T12,5, avaliadas com base em parcelas experimentais, nos dois anos de estudo. Os resultados permitem concluir que a avaliação em parcelas da RP à ferrugem da folha de UFRGS 910906 é efetiva na distinção de genótipos resistentes. O nível de RP conferido por UFRGS 910906 não fornece proteção suficiente para manter o rendimento e qualidade de grãos, na presença de alta severidade da moléstia. A RP de UFRGS 910906 apresenta um QTL identificado pelo marcador AFLP PaaMtt340 com consistência de expressão em diferentes ambientes, capaz de ser detectado na avaliação de parcelas experimentais e com potencial para ser explorado através do uso de seleção assistida por marcadores moleculares em programas de melhoramento de aveia.

Nos últimos anos, o aumento na produção de plantas em sistemas de cultivo hidropônico ou em substratos comerciais, além da proibição do uso de brometo de metila, resultou em uma maior incidência de doenças radiculares causadas por patógenos de solo como Pythium spp.. A caracterização dos mecanismos de patogênese de espécies do gênero Pythium que causam danos às culturas poderia promover maiores possibilidades de controle. O objetivo do presente estudo foi caracterizar a resposta de tomate (Solanum lycopersicum) à infecção de isolados de diferentes espécies do gênero Pythium. A incidência da doença em plântulas, causada pela inoculação com cinco isolados do gênero Pythium, foi avaliada quanto à ocorrência de mortalidade, enquanto a severidade foi avaliada quanto a alterações no comprimento da parte aérea e das raízes. O efeito da temperatura e da concentração do inóculo na severidade da doença também foi avaliado. A fim de caracterizar a ação de alguns compostos químicos na ocorrência da doença, foi avaliada a aplicação de ácido abscísico, ácido salicílico (AS), etefon (ET), aminoetoxivinilglicina e um surfactante sintético. Por fim, a técnica de quantificação relativa por PCR em tempo real foi utilizada para avaliar o acúmulo de mRNA de genes de defesa em resposta à inoculação. Na caracterização biológica, verificou-se que todos os isolados foram patogênicos a tomate, apresentando variações na severidade da doença causada. A severidade da doença provocada por P. inflatum é baixa, quando comparada com os outros isolados. Já P. ultimum causa sintomas inicialmente pouco severos, mas que evoluem rapidamente. A adição de ET, AS e do surfactante reduziu significativamente a severidade da doença. Na caracterização molecular, observou-se que um maior acúmulo de mRNAs dos genes LOXD, PR-1A1 e PR-5 depende da interação em questão. A diversidade observada nos resultados reflete a complexidade das respostas de S. lycopersicum induzidas pelos patógenos. A análise funcional in vivo desses e de outros genes poderá contribuir para utilização dos mesmos na obtenção de resistência contra Pythium spp.. / In recent years, the increase in plant production in hydroponic culture systems or in commercial soil media, in addition to the ban on the use of methyl bromide, resulted in a higher incidence of root diseases caused by soil pathogens like Pythium spp.. The characterization of the pathogenesis mechanisms of species of the genus Pythium that cause damage to crops could promote greater opportunities for control. The objective of this study was to characterize the response of tomato (Solanum lycopersicum) to the infection with isolates of different species of the genus Pythium. The disease incidence in seedlings caused by inoculation with five isolates from the genus Pythium was evaluated according to the occurrence of death, while the severity was assessed by changes in the length of shoots and roots. The effect of temperature and inoculum concentration in disease severity was also assessed. In order to characterize the action of some chemical compounds in the disease occurrence the application of abscisic acid, salicylic acid (SA), ethephon (ET), aminoethoxyvinilglycine and a synthetic surfactant was evaluated. Finally, the technique of relative quantification by realtime PCR was used to assess the accumulation of mRNA from defense genes in response to the inoculation. In the biological characterization, it was found that all isolates were pathogenic to S. lycopersicum, although they have induced variable disease severity. The disease severity caused by P. inflatum is low when compared with the other isolates. On the other hand, P. ultimum initially causes less severe symptoms which progress very rapidly. The addition of ET, AS, and the surfactant, significantly reduced the severity of the disease. In the molecular characterization, it was observed that the accumulation of mRNAs of genes LOXD, PR-1A1, and PR-5 depends on the species of Pythium in the interaction. The diversity observed in the results reflects the complexity of the responses of S. lycopersicum induced by pathogens. In vivo functional analysis of these and other genes could contribute to the use of them in obtaining resistance against Pythium spp..

As plantas estão expostas a uma gama de patógenos que utilizam diversas estratégias para infectar seus hospedeiros. Em resposta, as plantas expressam diferentes mecanismos de defesa, onde ocorre o reconhecimento de moléculas conservadas do patógeno por receptores específicos das plantas, desencadeando as respostas de defesa. A descoberta de sinais endógenos e exógenos que regulam a expressão de genes de defesa em Arabidopsis thaliana tem auxiliado a compreensão dos mecanismos de defesa. O desenvolvimento de uma estratégia de superexpressão para avaliação do papel do peptídeo endógeno AtPep1 na resistência a isolados de diferentes espécies do gênero Pythium é importante para a compreensão do mecanismo de defesa e a futura utilização do mesmo em cultivares resistentes ao patógeno. Nesse sentido, foram realizados experimentos que consistiram da inoculação de A. thaliana com isolados das espécies de P. graminicola, P. inflatum, P. deliense e P. ultimum. As plantas foram avaliadas quanto à presença de sintomas da doença. Paralelamente, o gene codificante do peptídeo AtPep1, PROPEP1, foi isolado de A. thaliana, ligado nos vetores binários pGSA1427 ou pEGAD, e transformados em Agrobacterium tumefaciens. Células de A. tumefaciens contendo os plasmídeos com e sem PROPEP1 foram usadas para transformação floral de A. thaliana. As plantas transformadas foram selecionadas pela presença do gene que confere tolerância ao herbicida glufosinato de amônio e, no caso da planta transformada com o vetor pEGAD, também pela presença da GFP (proteína verde fluorescente). A presença dos genes inseridos foi confirmada por PCR seguido de seqüenciamento. As plantas transformadas foram avaliadas quanto ao acúmulo de mRNA de PROPEP1 e a resistência aos isolados do gênero Pythium. Os resultados indicam que plantas tipo selvagem de A. thaliana são suscetíveis aos isolados das diferentes espécies do gênero Pythium. As plantas pEGAD-AtPep apresentaram um aumento na expressão relativa de PROPEP1 de até 4.000 vezes a encontrada nas plantas controle. Este alto acúmulo de PROPEP1 nas plantas pEGAD-AtPep e pGSAAtPep revelou ser importante na resistência ao isolado de P. deliense. As evidências suportam o papel do peptídeo AtPep1 como um elicitor endógeno que é gerado em resposta aos patógenos e suas PAMPs. / Plants are exposed to a range of pathogens that use several strategies to infect their host. In response, the plants express different mechanisms of defense, in which the recognition of conserved pathogen molecules by plant specific receptors triggers the defence responses. The discovery of exogenous and endogenous signals that regulate the expression of defense genes in Arabidopsis thaliana has helped the understanding of the mechanisms of defense. The development of a strategy of overexpression for evaluating the role of endogenous peptide AtPep1 in resistance to isolates of different species of the genus Pythium is important for understanding the mechanism of defense and its future use in resistant cultivars to the pathogen. Therefore, experiments that were performed consisted in the inoculation of A. thaliana with isolates of the of P. graminicola, P.inflatum, P. deliense, and P. ultimum species. The plants were evaluated for the presence of disease symptoms. In addition to that, the gene coding the peptide AtPep1, PROPEP1 was isolated from A. thaliana, ligated in the binary vectors pGSA1427 or pEGAD, and transformed in Agrobacterium tumefaciens. Cells of A. tumefaciens containing the plasmids with or without PROPEP1 were used to floral transformation of A. thaliana. The transformed plants were selected for the presence of the gene that confers tolerance to the herbicide ammonium glufosinate and, in the case of plants transformed with the vector pEGAD, they were also selected for the presence of GFP (green fluorescent protein). The presence of the inserted gene was confirmed by PCR followed by sequencing. The transformed plants were evaluated on the accumulation of mRNA from PROPEP1 and resistance to isolates of the genus Pythium. The results indicate that A. thaliana wild type plants are susceptible to isolates from various species of the genus Pythium. The pEGAD-AtPep plants showed an increase in the expression of PROPEP1 of up to 4.000 times more than that was found in control plants. Such high accumulation of PROPEP1 in pEGAD-AtPep and pGSA-AtPep plants was shown to be important in resistance to the isolate of P. deliense. The evidences support the role of the peptide AtPep1 as an endogenous elicitor that is generated in response to pathogens and their PAMPs.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12141_SÂMILA ESTEVES DELPRETE.pdf: 1250239 bytes, checksum: 63aace3a7b97bd0035c61b22b161102d (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Objetivou-se avaliar características produtivas sob pastejo de uma população melhorada de Brachiaria ruziziensis, denominada EGLRuzi#01, comparando-a com a cultivar comercial Kennedy, visando avaliar a possibilidade de lançamento da EGLRuzi#01 como nova cultivar forrageira. O experimento foi implantando no Campo Experimental José Henrique Bruschi (CEJHB) da Embrapa Gado de Leite, em Coronel Pacheco - MG. Avaliou-se uma população melhorada de B. ruziziensis (EGLRuzi#01) obtida no terceiro ciclo de seleção recorrente intrapopulacional do programa de melhoramento de forrageiras da Embrapa Gado de Leite e a cultivar comercial Kennedy como testemunha. As variáveis avaliadas foram: altura de entrada; cobertura; densidade populacional de perfilhos; porcentagens de folha, colmo e material morto; relação folha:colmo; massa de forragem pré-pastejo; altura de saída e massa de forragem pós-pastejo. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, com dois tratamentos (população melhoradaEGLRuzi#01 e cultivar Kennedy), dois blocos e cinco sub-blocos para o primeiro período e 12 sub-blocos para o segundo período. Cada sub-bloco foi composto pelas datas de avaliação. Os dados foram submetidos à análise de variância (P<0,05) utilizando-se o procedimento MIXED do SAS e método da máxima verossimilhança para estimação dos componentes de variância, considerando-se fixo o efeito de tratamento e aleatório os efeitos de bloco e sub-bloco. Não houve diferença significativa (P>0,05) quanto à altura de entrada dos animais nos piquetes, porém, houve diferença significativa (P<0,05) para altura de saída. As alturas de saída para a população melhorada EGLRuzi#01 estiveram acima das predeterminadas de 30 cm para o primeiro período e 25 cm para o segundo. Este fato acarretou menor porcentagem de folha e maior de material morto no segundo período (P<0,05). Para as variáveis cobertura do solo, relação folha:colmo e massa de forragem pré e pós-pastejo não houve diferença significativa (P>0,05). Houve diferença significativa (P<0,05) para a densidade populacional de perfilhos no primeiro período, em que a população melhorada EGLRuzi#01 apresentou maior valor, com 27,90% perfilhos a mais por m² em relação à cultivar Kennedy, característica que encontra-se diretamente ligada à perenidade do pasto e está relacionada à produtividade da pastagem, o que torna a característica de maior perfilhamento da EGLRuzi#01 interessante. Desta forma, a população melhorada de B. ruziziensis (EGLRuzi#01) apresenta características produtivas superiores à cultivar Kennedy, como a maior densidade populacional de perfilhos, que a torna promissora para ser lançada como nova cultivar comercial.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9293_Luciana Linhares Marcelino.pdf: 568624 bytes, checksum: a5c5e47d76f462ec3a2627fffd761b55 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / A demanda pela produção de sementes no Brasil vem aumentando desde a década de 80 em função do aumento das áreas de pastagens cultivadas por sementes ao invés da propagação vegetativa como ocorria até a década de 70. Em especial, a demanda por sementes de B. ruziziensis que são uma boa opção na integração entre agricultura, pecuária e floresta. Das espécies cultivadas no Brasil a Brachiaria ruziziensis é a única sexual e diploide o que possibilita a geração de variabilidade para seleção dos melhores genótipos. O objetivo com esta pesquisa foi selecionar quais populações melhoradas de B. ruziziensis originadas de um ciclo de seleção recorrente obtiveram melhor valor nutricional para serem recombinadas e se obter novas populações para avaliações posteriores.Foram avaliadas dez populações melhoradas e duas testemunhas (B. ruziziensis cv. Kennedye B. brizantha cv. Marandu) em experimentos conduzidos no delineamento em blocos ao acaso com três repetições, em cinco cortes realizados em 14/01, 19/02, 05/05, 09/07 e 08/10, todos no ano de 2014, sendo que o primeiro corte foi realizado após 41 dias do corte de uniformização. Em cada corte foram coletadas amostras para a obtenção das porcentagens de proteína bruta, digestibilidade in vitro da matéria seca, fibra em detergente ácido, fibra em detergente neutro, lignina e cinzas. Os dados foram submetidos à análise de variância conjunta no esquema de parcela subdividida no qual o fator primário foram as populações e o secundário os cortes. Para a comparação das médias utilizou-se o teste de Tukey a 5% de significância e, a partir das análises conjuntas, foram estimadas as correlações de Pearson entre as variáveis. De modo geral, as populações melhoradas apresentaram melhor desempenho que a cultivar Marandu e desempenho semelhante a cultivar Kennedy. As populações melhoradas III, IV, V, VI e IX foram selecionadas para novas recombinações e avaliações pelos melhores teores de PB, FDA e FDN tanto no período das águas como no período das secas.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:57:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10674_Dissertação Final Natalia Caroliny da Silva Dias.pdf: 2889516 bytes, checksum: fe866e44b7ab3e33c10433bd291c9222 (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / A espécie Euterpe edulis Martius caracteriza-se por produzir uma elevada quantidade de frutos que servem de alimento para aves e mamíferos durante longos períodos de escassez de recursos. Entretanto, estima-se que esteja ocorrendo perdas na diversidade da espécie devido à fragmentação florestal e ao intenso extrativismo do palmito produzido desde a colonização do país até os dias atuais. Atualmente, a espécie encontra-se na lista de espécies ameaçadas de extinção. O objetivo deste trabalho foi caracterizar quimicamente a polpa desidratada dos frutos de 60 acessos E. edulis coletados na região Sul do Espírito Santo; avaliar a variabilidade genética e selecionar genótipos baseados em caracteres químicos relacionados à comercialização dos frutos a fim de aplicá-los ao programa de melhoramento da espécie. Foram coletados frutos de 60 acessos e realizadas análises das seguintes características: umidade, biomassa, rendimento, acidez total titulável (ATT), sólidos solúveis totais (SST), fibra bruta (FIB), lipídeos (LIP), pH, conteúdo mineral (CM), compostos fenólicos totais (FNT), antocianinas totais (ANT), flavonóis totais (FLV); proteína bruta (PROT); açucares solúveis totais (AT) e açucares solúveis redutores (AR). Realizou-se o teste de agrupamento Scott-Knott a 5% de probabilidade. Para análise da variabilidade genética entre e dentre os acessos utilizou-se o método de agrupamento de ligação média entre grupos (UPGMA) e a análise de variância molecular (AMOVA). Para a seleção dos indivíduos foram utilizados o índice de seleção com base em modelos mistos (REM/BLUP) e rank médio de Mulamba e Mock. Os materiais vegetais de E.edulis do sul do Espírito Santo apresentaram variação considerável nos teores químicos tendo-se acessos divergentes dentro de uma mesma localidade. O agrupamento UPGMA estruturou os 60 acessos em quatro grupos pela significância obtida pelo método de Mojena (1977). A distância genética entre os acessos dos grupos I e II foi baixa indicando alta similaridade entre eles. Os grupos III e IV apresentaram apenas um acesso, que divergiram de todos os outros. A AMOVA não foi significativa. Os acessos que obtiveram os melhores ganhos preditos de acordo com os índices de seleção foram IB3P4, IB3P9, IB3P5, IB3P6 e IB3P1, podendo ocupar posição de indivíduos base para cruzamento no programa de melhoramento da espécie.

Orientador: Marcos Antonio Machado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:32:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AntonioCarlosde_D.pdf: 15120057 bytes, checksum: ed6190d1a0d4bcf76f05bafaf3740762 (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado