Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2013. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T17:31:58Z No. of bitstreams: 1 2013_JeronimoMoisesMendozaFlores.pdf: 2327618 bytes, checksum: e8d12593cfffd2a7d110cbaceeabef2e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-17T20:24:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_JeronimoMoisesMendozaFlores.pdf: 2327618 bytes, checksum: e8d12593cfffd2a7d110cbaceeabef2e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-17T20:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_JeronimoMoisesMendozaFlores.pdf: 2327618 bytes, checksum: e8d12593cfffd2a7d110cbaceeabef2e (MD5) / Oito taxas da mandioca Manihot esculenta Crantz: seis variedades denominadas UnB 032, UnB 318, UnB 530, UnB 567, UnB 110, UnB 122, e dois escapees, foram estudados citogenética e morfologicamente. Avaliou-se o comportamento cromossômico meiótico, em que cinco das seis variedades (UnB 032, UnB 318, UnB 530, UnB 567, UnB 110) registraram pareamento regular. Na metáfase I, o pareamento apresentou uma variação de 18 bivalentes até 17 bivalentes, e um par de univalentes, com uma frequência média de bivalentes de 17,7-18. Tal pareamento refletiu na formação de tétrades – apresentando variação de 94,2-96.1% de regularidade – e na viabilidade do pólen, que esteve entre 79-94.5%, conforme cada variedade e idade. Entre as cultivares, a exceção foi a variedade UnB 122, que apresentou pareamento irregular de 16 bivalentes e dois pares de univalentes – o que comprometeu a formação das tétrades, observando-se 31,3% de regularidade e, consequentemente, baixa fertilidade de pólen: 19,8%. Este fato pode ser interpretado devido a natureza híbrida entre mandioca e Manihot anomala Pohl. Os escapees apresentaram características morfológicas que permitem ser reconhecidas nos espécimes dos herbários e em habitat natural, mesmo não sendo suficientemente robustos para serem distinguidos como espécies. O registro dos referidos escapees – algo novo para a cultura da mandioca – merece especial atenção, devendo ser ação de futuras pesquisas, uma vez que estes podem facilitar o cruzamento com a espécie cultivada, tornando-se uma questão de interesse relevante para o melhoramento da cultura. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Eight taxa of cassava - Manihot esculenta Crantz: six varieties namely UnB 032 e UnB 318, UnB 530, UnB 567, UnB 110, UnB 122 and two escapee, were studied cytogenetic and morphologically. Meiotic behaviour was evaluated, where five of the six varieties (UnB 032 e UnB 318, UnB 530, UnB 567 and UnB 110) registered regular pairing. In metaphase I pairing varied from 18 bivalent to 17 bivalent and a pair of univalent, with a frequency of bivalents is ranging from 17.7-18. This pairing reflected tetrad formation that ranged from 94.2-96.1% of regularity, and consequently pollen viability achieving 79-94.5%, due the variety and time that sample was synthesized. Within the cultivars the exception was the variety UNB 122 which presented irregular pairing of 16 bivalents and two pairs of univalent. This committed the formation of tetrads with only 31.3% of regularity and consequently low pollen fertility, only 19.8%. This fact can be interpreted due to its hybrid nature between cassava and Manihot anomala Pohl. The escapee showed a morphological feature that allows it to be recognized in specimens from herbaria and natural habitat, but these are not sufficiently robust to distinguish them as independent species. The register of these two escapes, new for cassava crop, deserves special attention and should be the subject of future research. Mainly because it has the benefit of being able to easily cross with cultivated species, fact of high interest for cassava improvement.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-06-24T14:51:11Z No. of bitstreams: 1 2012_CarolinaPaolaSansaloni.pdf: 5318992 bytes, checksum: dde47187b1abc046f14521cb2bd0972f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-06-24T15:28:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CarolinaPaolaSansaloni.pdf: 5318992 bytes, checksum: dde47187b1abc046f14521cb2bd0972f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-24T15:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CarolinaPaolaSansaloni.pdf: 5318992 bytes, checksum: dde47187b1abc046f14521cb2bd0972f (MD5) / Espécies de Eucalyptus tem sido utilizadas com sucesso para plantios florestais devido ao seu rápido crescimento, sua capacidade de adaptação às diversas condições edafo-climáticas e pelo seu potencial econômico na produção de energia, fibra e madeira sólida, reduzindo assim a pressão sobre as florestas tropicais e a biodiversidade associada. Marcadores moleculares tais como RAPD, AFLP, microssatélites, e mais recentemente SFP e SNPs têm contribuído para a caracterização e conservação dos recursos genéticos do gênero Eucalyptus, auxiliando também na compreensão da evolução do gênero, além de permitir a construção de mapas de ligação e identificação de QTLs (Quantitative trait loci). Entretanto, estas técnicas são lentas, laboriosas, apresentam limitações de cobertura genômica e envolvem custos elevados para a análise de muitos indivíduos. Diversity Arrays Technology (DArT) é um método baseado em hibridização que permite genotipar centenas a milhares de marcadores num simples ensaio. Esta tecnologia gera um perfil genômico com um alto rendimento e um grande poder de transferibilidade entre espécies. Neste trabalho é apresentado o desenvolvimento da primeira plataforma de genotipagem de alto desempenho de marcadores DArTs em microarranjo para o gênero Eucalyptus, e demonstrada sua eficiência em estudos de diversidade genética, filogenia e mapeamento genético. Foram desenvolvidas 18 bibliotecas genômicas de complexidade reduzida a partir de 64 espécies diferentes do gênero. Um total de 23.808 fragmentos de DNA foram avaliados para revelação de polimorfismos DArT, e 13.300 (56%) destes declarados polimórficos entre um painel de triagem composto por 284 indivíduos. Destes, 7.680 marcadores foram selecionados para a construção de um microarranjo de genotipagem para uso em rotina. Em um estudo de diversidade intra-específica, 4.752 marcadores foram polimórficos e 5.013 mostraram segregação mendeliana em seis populações segregantes não relacionadas, com uma média de 2.211 marcadores polimórficos por população. Na etapa seguinte do trabalho, foi otimizada a tecnologia de genotipagem por sequenciamento DArT-seq para a construção de um mapa genético de alta densidade para uma população segregante do cruzamento entre árvores elite de E. grandis (BRASUZ1 x M4D31). A população foi genotipada com o microarranjo DArT e com a técnica DArTseq. Enquanto o microarranjo DArT forneceu 1.088 marcadores, a genotipagem DArT-seq forneceu 2.449. No total, um mapa de ligação integrado por 564 marcadores DArT, 1.930 marcadores DArTseq e 29 microssatélites foi construído. Além destes marcadores, mais de 1.500 SNPs derivados da metodologia DArT-seq foram obtidos proporcionando uma vantagem adicional pela inclusão de marcadores co-dominantes no mapa. O desenvolvimento de metodologias de genotipagem por sequenciamento (GbS) via enzimas de restrição como DArT-seq ou captura com sondas, representa uma aplicação adicional das tecnologias de "next generation sequencing" além do sequenciamento, 2 potencializando a análise genética com marcadores moleculares. A combinação do elevado número de marcadores, baixo custo, metodologia relativamente accessível e uso de reagentes universais, aponta para um uso crescente de GbS nos próximos anos nas mais diversas aplicações em estudos de genética de populações, investigações evolutivas e em apoio ao melhoramento acelerando e aumentando a precisão da seleção direcional de características multifatoriais complexas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Species of Eucalyptus have been successfully used for forest plantations due to its rapid growth, its ability to adapt to various soil and climatic conditions and its economic use in energy, fiber and solid wood, reducing pressure on tropical forests and associated biodiversity. Molecular markers such as RAPD, AFLP, microsatellites, and more recently SFP and SNPs have contributed to the characterization and conservation of genetic resources of the genus, to the understanding of the evolution of the genus, and allowing the construction of linkage and QTLs maps. However, these techniques are slow, laborious, provide limited genome coverage and are costly for the analysis of large sample sizes. Diversity Arrays Technology (DArT) is a hybridization-based method that allows genotyping hundreds to thousands of markers in a single assay. This technology generates a genomic profile with high throughput and transferability between species. This study presents the development of the first high throughput genotyping platform for species of Eucalyptus based on a DArT microarray and demonstrates its use for diversity, phylogeny and mapping studies. A total of 18 reduced representation genomic libraries from 64 different species of the genus were developed. A total of 23,808 DNA fragments were screened for polymorphism and 13,300 (56%) of them declared polymorphic in a panel of 284 individuals. Out of these, 7,680 markers were selected to populate a routine DArT genotyping microarray. In an inter-specific diversity study, 4,752 were deemed polymorphic while 5,013 showed Mendelian segregation when assessed in six inter-specific mapping pedigrees, with an average of 2,211 polymorphic markers per pedigree. The subsequent step of the study, involved the optimization of the genotyping-by-sequencing technology called DArT-seq to construct a high density genetic map for a segregating population derived from the E. grandis elite trees (BRASUZ1 x M4D31). The population was genotyped both with the DArT microarray and with DArT-seq. While the DArT microarray yielded 1,088 markers, the DArT-seq method supplied 2,449 markers. In total, an integrated linkage map with 564 DArT markers, 1,930 DArT-NGS markers and 29 microsatellites was built. Besides these mapped markers, an additional set of over 1,500 SNPs derived from DArT-seq were scored providing an additional advantage by the inclusion of co-dominant markers on the map. The development of genotyping by sequencing (GBS) 3 methods via restriction enzymes as DART-seq or capture probes, represents a further application of the technologies of "next generation sequencing" beyond sequencing, empowering the genetic analysis with molecular markers. The combination of the large number of markers, low cost, relatively accessible methodology and use of universal reagents, points to an increased use of GBS in the coming years in several applications in studies of population genetics, evolutionary investigations and in support to plant breeding accelerating and increasing accuracy of directional selection for complex multi-factorial traits.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Kelly Marques (pereira.kelly@gmail.com) on 2009-11-04T19:19:01Z No. of bitstreams: 1 2008_AlineRodriguesRabello.pdf: 891755 bytes, checksum: 8d12b640b6d0853a9e04749d8a346d45 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-01-27T13:09:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AlineRodriguesRabello.pdf: 891755 bytes, checksum: 8d12b640b6d0853a9e04749d8a346d45 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-27T13:09:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AlineRodriguesRabello.pdf: 891755 bytes, checksum: 8d12b640b6d0853a9e04749d8a346d45 (MD5) Previous issue date: 2008-12 / O arroz é cultivado sob diferentes formas, no entanto seu cultivo em condições de sequeiro apresenta perdas consideráveis de quantidade e qualidade dos grãos produzidos. A ocupação de novas áreas como o Cerrado, aliado à preferência de grãos, tem exigido o desenvolvimento de novas cultivares mais adaptadas e resistentes a estresses bióticos e abióticos. A disponibilidade da sequência do genoma de arroz torna os estudos de genômica funcional sob condições de estresse hídrico incontestavelmente necessários. Neste estudo, bibliotecas subtrativas de cDNA de raiz de arroz de genótipos contrastantes para a tolerância à seca foram construídas. Foi realizada também uma análise proteômica para a identificação de proteínas diferencialmente expressas. Os resultados obtidos revelaram vários genes possivelmente envolvidos com a tolerância à seca, principalmente os relacionados com a manutenção da integridade da célula, além de proteínas expressas sob estresse hídrico. A identificação desses genes e proteínas contribui para a compreensão do funcionamento global de tolerância a seca em arroz de sequeiro. Atualmente, as variedades de sequeiro têm sido submetidas a intensos trabalhos de melhoramento com o objetivo de transformá-las em variedades adaptáveis e altamente atrativas para o cultivo sob condições aeróbicas. A compreensão dos mecanismos de tolerância a seca em arroz de sequeiro contribuem para auxiliar os programas de melhoramento visando a obtenção de genótipos melhor adaptados a condições de restrição hídrica. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Rice is cultivated under different systems, and when it is cultivated in dry conditions, considerable losses in terms of quantity and quality of grain produced are obtained. The occupation of new areas such as Cerrado, combined with grain preferences, has called attention for the need to develop new varieties more adapted and resistent especially to biotic and abiotic stresses. The availability of the genome sequence of rice makes the study of functional genomics under conditions of water stress unquestionably important. In this study, cDNA subtractive libraries of rice roots of genotypes contrasting for the tolerance to drought were constructed. A proteomic analysis to identify proteins differentially expressed was also performed. The results revealed several genes possibly involved in the tolerance to drought, especially those related to maintainance of cell integrity, and proteins expressed under water stress. The identification of these genes and proteins contribute to a better understanding of the global functioning of tolerance to drought in upland rice. Currently the uplands varieties have been subjected to intense genetic improvement aiming to obtain more adapted varieties for the cultivation under aerobic conditions. The understanding of the mechanisms of drought tolerance in upland rice can contribute to the genetic improvement programs to obtain genotypes better adapted to conditions of water restriction.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Alexandre Marinho Pimenta (alexmpsin@hotmail.com) on 2009-11-16T20:16:00Z No. of bitstreams: 1 2006_MárciodeCarvalhoMoretzsohn.pdf: 1215656 bytes, checksum: f2e2c88e48af0d2dda769d96b02350f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-12-07T19:35:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_MárciodeCarvalhoMoretzsohn.pdf: 1215656 bytes, checksum: f2e2c88e48af0d2dda769d96b02350f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-07T19:35:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_MárciodeCarvalhoMoretzsohn.pdf: 1215656 bytes, checksum: f2e2c88e48af0d2dda769d96b02350f0 (MD5) Previous issue date: 2006 / O amendoim cultivado (Arachis hypogaea) é uma cultura importante, amplamente cultivada nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. É bastante susceptível a diversos estresses bióticos e abióticos, para os quais muitas das espécies silvestres são resistentes. Como um primeiro passo visando a introgressão desses genes de resistência no amendoim cultivado, um mapa de ligação foi construído, usando uma população F2, obtida do cruzamento entre duas espécies silvestres diplóides de genoma AA (A. duranensis e A. stenosperma). Esse mapa foi baseado em marcadores microssatélites e marcadores âncoras, ambos codominantes e transferíveis entre espécies aparentadas. Um total de 271 novos marcadores microssatélites foi desenvolvido no presente trabalho, a partir de bibliotecas genômicas enriquecidas para microssatélites, de bibliotecas de etiquetas de seqüências expressas (ESTs ou “expressed sequence tags”) e por mineração (“data mining”) de seqüências disponíveis no GenBank. Para facilitar o desenvolvimento dos marcadores a partir de um grande número de seqüências, foi utilizado um módulo de programas desenvolvido em parceria com a Universidade Católica de Goiás e com a Universidade Católica de Brasília. Esse módulo integra um programa para busca de microssatélites (TROLL), um conjunto de programas para agrupamento e processamento das seqüências (Staden package) e um terceiro programa, para desenho de primers (Primer3). Com isso, o desenvolvimento dos marcadores pôde ser automatizado, tornando o processo bem mais rápido e eficiente. Dos 271 novos marcadores microssatélites, 66 mostraram-se polimórficos para o amendoim cultivado e 62 deles foram utilizados para análise das relações genéticas entre acessos representando as seis variedades botânicas descritas de A. hypogaea. Os resultados obtidos foram consistentes com a classificação taxonômica atual, exceto para as variedades fastigiata/peruviana e fastigiata/aequatoriana, que formaram um grupo separado e distante das outras duas variedades da subespécie fastigiata. Os 271 novos marcadores microssatélites, além de outros 218 publicados ou em publicação para o amendoim foram testados, usando-se os dois progenitores. Desses 489 marcadores microssatélites, 215 (44,0%) mostraram-se polimórficos, sendo 181 codominantes e 34 dominantes (amplificaram alelos nulos em um dos progenitores). Os 99 marcadores microssatélites codominantes que não apresentaram distorções da segregação 1:2:1 esperada (p<0,05), junto aos 40 2 marcadores âncoras não distorcidos (de um total de 72), foram utilizados para o estabelecimento dos grupos de ligação. Em seguida, os marcadores distorcidos e os dominantes foram incluídos no mapa. Usando um LOD escore mínimo de 11, 182 marcadores microssatélites, 66 marcadores âncoras e 12 RGAs foram mapeados em 10 grupos de ligação, como esperado, uma vez que Arachis duranensis e A. stenosperma são espécies diplóides com 2n=20 cromossomos. Um comprimento de mapa total igual a 1645,1 cM foi obtido, com uma distância média de 6,32 cM entre marcadores. Esse mapa foi utilizado para o mapeamento de QTLs que controlam três características de interesse para o melhoramento do amendoim. Dez QTLs que controlam o peso de sementes, oito QTLs que controlam o número de sementes produzidas por planta e dois QTLs para resistência ao fungo causador da mancha preta (Cercosporidium personatum) foram significativamente identificados pelo método de mapeamento por intervalo múltiplo. Esse é o primeiro mapa baseado em marcadores microssatélites desenvolvido para Arachis. Além disso, os primeiros QTLs para componentes da produtividade e para resistência à mancha preta foram mapeados em Arachis spp. Uma vez que a maioria dos marcadores microssatélites utilizados foi desenvolvida a partir de ESTs e de bibliotecas genômicas digeridas com enzimas de restrição sensíveis a metilação, mais da metade dos marcadores mapeados, incluindo os marcadores âncoras, são provavelmente gênicos. Os grupos de ligação identificados nesse trabalho, as ordens dos marcadores obtidas e os QTLs mapeados estão sendo validados em outras populações de mapeamento, visando a construção de um mapa de referência para Arachis e a obtenção de estimativas mais robustas sobre os QTLs identificados, para uso dessas informações nos programas de melhoramento do amendoim. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cultivated peanut (Arachis hypogaea) is an important crop, widely grown in tropical and subtropical regions of the world. It is highly susceptible to several biotic and abiotic stresses to which wild species are resistant. As a first step towards the introgression of these resistance genes into cultivated peanut, a linkage map was constructed, using an F2 population obtained from a cross between two diploid wild species with AA genome (A. duranensis and A. stenosperma). The map was based on microsatellite and anchor markers that are both codominant and transferable among related species. A total of 271 new microsatellite markers were developed in the present study from SSR-enriched genomic libraries, ESTs, and by “data-mining” sequences available in GenBank. To aid the development of microsatellite markers from a great number of sequences, a module, developed in collaboration with the Catholic University of Goiás and the Catholic University of Brasília, was used. This module integrates a program for the detection of microsatellites (TROLL), the Staden Package for the assembly and processing of sequences, and a software for primer design (Primer3). By using this module, the SSR marker development was automated, and the process proved to be fast and efficient. Of the 271 new SSR markers, 66 were polymorphic for cultivated peanut and 62 were used for the genetic relationship analysis of accessions representing the six described botanical varieties of A. hypogaea. Results were consistent with the actual taxonomic classification, except for the fastigiata/peruviana and fastigiata/aequatoriana varieties, which formed a separated group, distant from the other two fastigiata varieties. The 271 new markers plus another 218 published or being published for peanut were screened against both progenitors. A total of 215 (44.0%) were polymorphic, with 181 codominant and 34 dominant markers (amplified null alleles in one of the progenitors). The 99 codominant markers segregating 1:2:1 (p<0.05) plus the 40 non-distorted anchor markers (of a total of 72 markers) were initially used to establish the linkage groups. Distorted and dominant markers were subsequently included in the map. By using a minimum LOD score of 11 and a maximum recombination fraction of 0.35, 182 microsatellite markers, 66 anchor markers and 12 RGAs mapped in 10 linkage groups, as expected, since A. duranensis and A. stenosperma are diploid species with 2n=20 chromosomes. A total map distance of 1645.1 cM was obtained, with an average distance of 6.32 cM between markers. This map was used 4 for the mapping of QTL for three traits of interest for the peanut breeding programs. Ten QTL controlling seed weight, eight QTLs for seed number and two QTLs for resistance against the fungus C. personatum were significantly mapped by using the multiple interval mapping method. This is the first microsatellite-based map published for Arachis. Moreover, the first QTLs for yield components and for resistance to late leafspot were mapped in Arachis spp. Because most markers used were derived from ESTs and genomic libraries made using methylation sensitive restriction enzymes, more than a half of the markers, including the anchor markers, are genic. Linkage group ordering and the mapped QTL are being validated in other mapping populations, with the aim of constructing a transferable reference map for Arachis and to obtain more robust estimates about the mapped QTL for use in the peanut breeding programs.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-17T13:48:49Z No. of bitstreams: 1 2009_ArnubioValenciaJimenez.pdf: 1332526 bytes, checksum: 5d99a28ecacddcd233c64d4de0727188 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-24T12:05:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_ArnubioValenciaJimenez.pdf: 1332526 bytes, checksum: 5d99a28ecacddcd233c64d4de0727188 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-24T12:05:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_ArnubioValenciaJimenez.pdf: 1332526 bytes, checksum: 5d99a28ecacddcd233c64d4de0727188 (MD5) Previous issue date: 2009-04 / Sementes do feijão (Phaseolus coccineus) foram analisadas pela presença e atividade do inibidor de amilase (-AI). Por meio do uso de anticorpos policlonais gerados contra o inibidor -AI-1 do feijão comum (P. vulgaris), foi possível detectar polipeptídios típicos deste inibidor (Mr. 14 18 kDa), além do polipeptídeo de 32 kDa. Os resultados encontrados nos testes de inibição permitem sugerir que o inibidor presente nas sementes de P. coccineus 35590 seria o melhor candidato para a transformação genética do café visando à geração de plantas com resistência a larvas da broca-do-café. A digestão proteolítica in vitro do inibidor puro causou uma perda rápida da sua atividade inibitória, afetando seriamente sua capacidade natural de interagir com as -amilases. Também, neste trabalho foram estudadas as propriedades das -amilases presentes no trato digestivo de larvas de Tecia solanivora, um inseto-praga que gera um dano importante à batata (Solanum tuberosum). O inseto tem no mínimo três isoformas principais de -amilases digestivas, as quais apresentaram pontos isoelétricos de 5.30, 5.70 e 5.98. A atividade da -amilase digestiva tem um pH ótimo entre 7.0 e 10.0, com um pico de atividade em pH 9.0. A enzima foi inibida por inibidores de natureza protéica presentes nas sementes de P. coccineus (70% de inibição) e de P. vulgaris cv Radical (87% de inibição) em pH 6.0. Os resultados mostram também que o inibidor de - amilase de amaranto pode ser o melhor candidato para gerar batatas modificadas geneticamente resistentes a este inseto-praga. Futuras pesquisas precisam ser desenvolvidas para esclarecer se estes inibidores de -amilase são resistentes às proteases presentes no trato digestivo da lagarta de batata, T. solanivora. Em um ensaio subseqüente, foi desenvolvido e testado um novo e sensível método espectrofotométrico para a detecção da atividada leucine aminopeptidase (-aminoacyl-peptide hydrolase, EC 3.4.11.1) proveniente do trato digestivo de larvas de Telchin licus (Lepidoptera: Castniidae), fazendo uso do substrato L-leucyl-2- naphthylamide. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Seeds of scarlet runner bean (Phaseolus coccineus L.) were analyzed for -amylase inhibitor (-AI) activity. By using polyclonal antibodies raised against pure a−AI-1 from common bean (Phaseolus vulgaris L.) it was possible to detect the typical -AI polypeptides (Mr 14 -18 kDa) as well as a large polypeptide of Mr 32,000 Da. Differential inhibition curves lead us to suggest that the gene encoding one of the inhibitors in P. coccineus (in accession G35590) would be a good candidate for genetic engineering of coffee resistance towards the coffee berry borer Hypothenemus hampei Ferrari (Coleoptera: Scolytidae). An in vitro proteolytic digestion treatment of pure a−AI−1, resulted in a rapid loss of the inhibitory activity, seriously affecting its natural capacity to interact with mammalian -amylases. In addition, the properties of the digestive -amylase from T. solanivora larvae, an important insect pest of potato (Solanum tuberosum), were studied. This insect has three major digestive -amylases with isoelectric points 5.30; 5.70 and 5.98 respectively, which were separated using native and isoelectric focusing gels. The -amylase activity has an optimum pH between 7.0 and 10.0 with a peak at pH 9.0. The enzyme was inhibited by proteinaceous inhibitors from P. coccineus (70% inhibition) and P. vulgaris cv. Radical (87% inhibition) at pH 6.0. The results show that the -amylase inhibitor from Amaranthus may be a better candidate to make genetically modified potatoes resistant to this insect. However, it is necessary to know if these -amylase inhibitors are resistant to the gut proteases from T. solanivora. On the other hand, a simple and sensitive spectrophotometric assay to determine the activity of leucine aminopeptidase (-aminoacyl-peptide hydrolase, EC 3.4.11.1) from insect intestinal tracts of Telchin licus (Lepidoptera: Castniidae), using L-leucyl-2- naphthylamide as substrate, was developed.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-19T18:35:48Z No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-01T02:12:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-01T02:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / Apesar do enorme crescimento obtido pela técnica de produção in vitro de embriões nos últimos anos, uma limitação continua evidente, os embriões são mais susceptíveis à criopreservação que embriões produzidos in vivo. Pesquisadores buscam melhorar a qualidade do embrião produzido in vitro ou alterar os sistemas de criopreservação visando obter melhores resultados no procedimento de criopreservação. O presente trabalho teve como objetivo definir os melhores parâmetros para o uso da pressão hidrostática como nova ferramenta no processo de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro e avaliar ultraestruturalmente e pela análise de expressão gênica os efeitos causados pela pressão hidrostática e pelo procedimento de criopreservação nestes embriões. Os resultados indicaram que a pressurização de embriões a partir de 80 MPa passou a ser deletéria para o desenvolvimento embrionário. Mas o uso da pressão no nível de 60 MPa por 1 hora promoveu um incremento na taxa de eclosão dos embriões após a vitrificação comparado ao grupo apenas vitrificado (79% vs 66%). E que 1 hora após a pressurização seria o melhor momento para a vitrificação, com melhores taxas de re-expansão, eclosão (90% e 74%, respectivamente), maior velocidade de re-expansão após vitrificação/desvitrificação e maior abundância de transcritos do gene ERG 25 nesse momento comparados com grupo controle, imediatamente e 2 horas após a pressão. Ultraestruturalmente embriões submetidos a pressão apresentavam maior quantidade de microvilosidades e aumento de mitocôndrias tipo hooded que os embriões controle. No grupo de embriões vitrificados após a pressão observou-se uma maior quantidade de núcleos por área de MCI quando comparados ao grupo apenas vitrificado. Determinados níveis de tratamento com pressão hidrostática melhoraram a sobrevivência in vitro de embriões bovinos vitrificados. Células embrionárias reagem em resposta ao estresse, aumentando a expressão de genes específicos, como o ERG 25 e alterando sua ultraestrutura, o que pode promover uma maior resistência a outros processos estressantes, como a vitrificação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Despite the enormous growth achieved by the technique of bovine embryo in vitro production in recent years, a limitation is still evident, these embryos are more susceptible to cryopreservation than their counterparts in vivo produced. To obtain better results in the cryopreservation procedure, researchers are seeking improve embryos in vitro produced quality or change cryopreservation systems. The aim of this work was to define parameters for the use of hydrostatic pressure as a new tool in the process of vitrification of bovine embryos produced in vitro by evaluating the effects of it on ultrastructurally and gene expression on these embryos. The results indicated that embryo pressurization at 80 MPa had become deleterious to embryonic development. But pressure level at 60 MPa for 1 hour improved hatching rate after embryo vitrification compared to only vitrified group (79% vs 66%). And 1 hour after pressurization would be the best time to vitrification, with higher rates of re-expansion, hatching (90% and 74% respectively), increased speed of re-expansion after vitrification/devitrification and higher abundance of ERG 25 transcripts at this time, compared with the control group, immediately and 2 hours after the pressure. Ultrastructurally, embryos submitted to pressure had greater amount of microvilli and increased mitochondria hooded that control embryos. In the group of vitrified embryos after pressure there were a greater number of nuclei per area when compared to the only vitrified group. Certain levels of hydrostatic pressure treatment improved the in vitro survival vitrified bovine embryos. Embryonic cells react in response to stress, xiii increasing the expression of specific genes, such as ERG 25, and changing ultrastructure, which may promote increased resistance to other stressful procedures, such as vitrification.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T17:18:04Z No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-05T19:22:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-05T19:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) Previous issue date: 2009 / Diversas doenças de etiologia viral têm sido relatadas afetando a tomaticultura em todo mundo causando importantes perdas qualitativas e quantitativas. Dentre as principais doenças viróticas estão as causadas pelo gênero Tospovirus e pelo gênero Potyvirus. Os tospovírus (família Bunyaviridae) são responsáveis pela doença conhecida como vira-cabeça que causa severas perdas anuais. Espécies desse gênero possuem distribuição mundial e apresentam grande diversidade de espécies infectando uma vasta gama de hospedeiros. O principal fator de resistência empregado no melhoramento genético do tomateiro para resistência ampla a diferentes espécies de tospovírus é o gene Sw-5. Plantas com este gene apresentam reações de hipersensibilidade nas folhas inoculadas que restringem a infecção viral sistêmica. Porém, a quebra deste gene de resistência já foi reportada em diferentes partes do mundo. Além dos tospovírus, espécies do gênero Potyvirus representam uma constante ameaça à cultura do tomate. Uma nova espécie de Potyvirus, o Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), foi identificada inicialmente em pimentão, mas também é capaz de afetar tomateiros, hospedeiro no qual pode causar perdas de até 100%. Trabalhos de buscas de fontes de resistência a PepYMV em tomate já foram iniciadas, mas o germoplasma explorado ainda representa um número reduzido de acessos. Esta tese apresenta a avaliação de coleções de germoplasma visando identificar novas fontes de resistência tanto a PepYMV quanto às espécies neotropicais de Tospovirus. Além disso, foi desenvolvido um marcador co-dominante para o gene Sw-5, capaz de identificar indivíduos resistentes através de uma simples PCR. Foi também realizada uma análise preliminar do componente de avirulência da interação Sw-5/Tomato spotted wilt virus (TSWV) através do uso de construções contendo os genes independentes de TSWV, isolados BR-01 (avirulento ao gene Sw-5) e o isolado GRAU (capaz de quebrar a resistência conferida por Sw-5), em uma plataforma baseada em Nicotiana benthamiana transgênica expressando o gene Sw-5. Em relação à identificação de novas fontes de resistência a potyvírus e tospovírus (Capítulos 2 e 3, respectivamente), acessos de S. habrochaites se mostraram como fontes promissoras de resistência a PepYMV bem como a Potato virus Y (PVY). Por outro lado, acessos de S. peruvianum confirmaram esta espécie como a principal fornecedora de fatores de resistência a tospovírus. Observou-se que um acesso de S. chilense, bem como uma seleção de um acesso de S. lycopersicum, apresentaram bons níveis de resistência/tolerância às espécies de tospovírus testadas. Ambas as análises foram comparadas com levantamentos previamente realizados por outros grupos. O marcador específico para Sw-5 (Capítulo 4) foi avaliado em uma ampla gama de acessos, apresentando um perfil único capaz de distinguir acessos resistentes e suscetíveis em todas as situações, comprovando sua eficiência como uma nova ferramenta para sistemas de seleção assistida e, mesmo para potencial isolamento de alelos ou análogos deste gene em tomate e outras solanáceas. A análise do componente de avirulência do TSWV (Capítulo 5) apontou que nenhum dos genes virais avaliados (Nsm, os precursores das glicoproteínas, N e Nss) parece estar envolvido, de maneira independente, com o processo de indução do mecanismo de reconhecimento pelo gene Sw-5. Nenhum dos genes testados induziu a reação típica de hipersensibilidade característica da infecção causada por TSWV em genótipos contendo esse gene de resistência. A estratégia usada nesse estudo também demonstrou que o modelo biológico representado por N. benthamiana transgênica, expressando uma cópia ativa do gene Sw-5, é adequada para o estudo de mecanismos envolvidos com a resistência a tospovírus, assim como para o estudo da superação dessa resistência por isolados virulentos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Many diseases of viral etiology have been identified affecting tomato production worldwide, causing important qualitative and quantitative losses. Among the main viral diseases, there are the ones caused by the genus Tospovirus and the genus Potyvirus. The Tospovirus (family Bunyaviridae) are responsible for the disease known as vira-cabeça, causing severe annual losses, mainly in horticultural crops. Species of this genus have a worldwide distribution and a great number of species infecting a vast array of hosts. The main resistance factor employed in tomato breeding for broad spectrum resistance to different tospovirus species is the Sw-5 gene. Plants that harbor this gene express hypersensitivity reactions that restrict the viral systemic infection. However, the breaking of this resistance gene has already been reported in different parts of the world. Apart from tospoviruses, species of the genus Potyvirus represent a constant threat to tomato culture. A new species of this genus, Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), was initially identified in pepper but it is also capable of infecting tomatoes, causing up to 100% losses. The search for resistance sources for PepYMV on tomato have already started, but the explored germplasm still represents a reduced number of accessions. This thesis shows the evaluation of germplasm collections seeking to identify new resistance sources to PepYMV and to the neotropical species of tospoviruses. Beyond that, a co-dominant marker for the Sw-5 gene was developed, capable of identifying resistant individuals through a simple PCR. A preliminary analysis of the avirulence component of the Sw-5/Tomato spotted wilt virus (TSWV) interaction was also done, using constructions containing independent TSWV genes, isolates BR-01 (avirulent for the Sw-5 gene) and GRAU (capable of breaking the Sw-5 gene resistance), using a platform based on transgenic Nicotiana benthamiana expressing the Sw-5 gene. In relation to the identification of the new resistance sources (Chapters 2 and 3, respectively), accessions of S. habrochaites showed to be promising sources of resistance to both PepYMV and Potato virus Y (PVY). On the other hand, accessions of S. peruvianum confirmed this species as the main source of resistance factors to tospoviruses. An accession of S. chilense and a selection of an accession of S. lycopersicum, showed good resistance/tolerance levels to the tospovirus species tested. Both analyses where compared to screenings that where previously done. The Sw-5 specific marker (Chapter 4) was evaluated with a broad array of accessions, showing a profile capable of identifying resistant and susceptible accessions in all situations. Therefore, this marker represents an efficient new tool for assisted selection systems and its future potential use for isolation or detection of alleles or analogous genes in tomato and other solanaceous species. The avirulence component analysis showed that none of the viral genes that where evaluated (Nsm, the glycoprotein precursors, N and Nss) seems to be related in an independent manner with the induction process of the Sw-5 gene recognition mechanism. None of the genes tested was able to induce typical hypersensitive reaction observed when tomato genotypes containing this resistance gene are challenged by TSWV. The strategy used in this study also demonstrated that the biological model represented by transgenic N. benthamiana expressing an active copy of the Sw-5 gene is suitable for analyzing the mechanisms involved in tospovirus resistance. In addition, this system can also be used to investigate Sw-5- resistance breaking isolates.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-06-28T16:06:09Z No. of bitstreams: 1 2010_TomazGelsonPezzini.pdf: 1672535 bytes, checksum: 6463a1919396bf511b635dc9291f8568 (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-30T12:52:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_TomazGelsonPezzini.pdf: 1672535 bytes, checksum: 6463a1919396bf511b635dc9291f8568 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-30T12:52:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_TomazGelsonPezzini.pdf: 1672535 bytes, checksum: 6463a1919396bf511b635dc9291f8568 (MD5) / A raça bovina Crioula Lageana, uma raça naturalizada brasileira, é descendente dos animais trazidos pelos colonizadores portugueses a partir do século XVI. A partir daí, a população cresceu extensivamente até a introdução das raças comerciais no final do século XIX. Atualmente, somente 1.408 animais permanecem na região do Planalto Catarinense. Com o objetivo de avaliar as características fenotípicas, genéticas e o risco de extinção desta raça foram realizados três estudos. O primeiro analisou a estrutura genética da população, por meio de dados de registro de 1.638 animais, fornecidos pela Associação Brasileira de Criadores de Bovinos da Raça Crioula Lageana, coletados entre os anos de 1970 e 2008. Os resultados indicam que apesar do reduzido número de animais e do desenvolvimento populacional a partir de uma estreita base genética, a população apresenta baixos níveis de endogamia, baixa diferenciação genética e tamanho efetivo populacional adequado para conservação da raça. O segundo estudo avaliou os dados morfométricos de 346 animais, classificando-os de acordo com a idade, sexo e região de origem no Planalto Catarinense. Os resultados indicaram acentuado dimorfismo sexual, terminação tardia, baixa diferenciação entre as regiões e altas correlações entre as medidas morfométricas. O terceiro estudo analisou a interferência de parâmetros demográficos, ambientais e genéticos na viabilidade populacional da raça Crioula Lageana ao longo de 500 anos, por meio da simulação de 128 cenários hipotéticos. Os resultados mostraram que a população não apresenta risco aparente de extinção, em consequência da alta diversidade genética, elevada taxa de crescimento populacional e adequada estrutura demográfica. O conhecimento e a aplicação das informações geradas neste estudo pelos criadores da raça poderão auxiliar na conservação deste valioso recurso genético. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Criollo Lageano cattle breed is a naturalized Brazilian breed that descends from animals brought by the Portuguese settlers in the 16th century. Since then, the population increased in numbers, until the introduction of commercial breeds at the end of the 19th century. Currently, only 1,408 animals remain on the Plateau of Santa Catarina State. Three studies were undertaken to evaluate phenotypic and genetic parameters of this breed, as well as its risk of extinction. The first one examined the genetic structure of the population, using data of 1,638 animals, supplied by the Criollo Lageano Cattle Breeders Association, collected between 1970 and 2008. The results indicate that despite the small number of animals and the population development from a narrow genetic base, the population presents low levels of inbreeding, low genetic differentiation and an effective population size suitable for conservation of the breed. The second study assessed the morphometric data of 346 individuals, taking into consideration age, sex and region of origin in the Plateau of Santa Catarina State. The results showed marked sexual dimorphism, late termination, low differentiation between regions and high correlations between the morphometric measurements. The third study analyzed the interference of demographic, environmental and genetic factors on the viability of Criollo Lageano cattle population over 500 years, through 128 hypothetical scenarios. The results showed that the population has no apparent risk of extinction as a consequence of its high genetic diversity, high rate of growth and appropriate demographic structure. The knowledge of the results obtained in this study and their utilization by the breeders of the Criollo Lageano cattle may help in the conservation of this valuable genetic resource.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Agronomia, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-09-16T19:51:25Z No. of bitstreams: 1 2011_JulianaEvangelistadaSilvaRocha.pdf: 1124050 bytes, checksum: 3abf37c1209484bb4ce6bd082ca4fba0 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-10-14T12:54:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JulianaEvangelistadaSilvaRocha.pdf: 1124050 bytes, checksum: 3abf37c1209484bb4ce6bd082ca4fba0 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-14T12:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JulianaEvangelistadaSilvaRocha.pdf: 1124050 bytes, checksum: 3abf37c1209484bb4ce6bd082ca4fba0 (MD5) / A quinoa, originária do altiplano entre Bolívia e Peru, é um exemplo de espécie potencial que tem se destacado nos trabalhos pioneiros objetivando produção de grãos com qualidade nutricional e biomassa para proteger o solo. No Brasil, as pesquisas começaram na década de 1990, pela Embrapa, em colaboração com a Universidade de Brasília (UnB). Resultados promissores estimularam a continuidade dos trabalhos até que se conseguisse adaptá-la ao cultivo no Cerrado Brasileiro. Entretanto, os primeiros genótipos apresentavam fatores limitantes, como no caso da BRS Piabiru, primeira cultivar lançada no Brasil. Em seqüência, logrou-se obter a BRS Syetetuba, com ciclo menor, grãos maiores e ausentes de saponina, tornando-se uma opção aos agricultores. Para que a quinoa integre o sistema agrícola é preciso se obterem variedades com características agronômicas desejáveis, como ciclo de precoce a médio, alto rendimento, altura compatível com colheita mecanizada e grãos grandes e com qualidade. Em geral, complexas em sua expressão genética resulta da interação de vários componentes, não sendo encontradas simultaneamente nas progênies obtidas por aproveitamento da variabilidade em acessos do germoplasma. Assim, realizaram-se hibridações controladas, visando aumento do tamanho do grão, associado aos demais caracteres. Na ausência de registros de híbridos artificiais para o melhoramento da quinoa no Brasil, cruzamentos induzidos por emasculação com álcool e artificial por manipulação das flores, resultaram híbridos entre genótipos previamente selecionados. Para a identificação de F1, caracteres morfológicos como pigmentação de partes da planta foi testada quanto ao modo de herança, confirmando-se dominância de coloração sobre ausência. Pleiotropia para oxalato de cálcio das folhas, estrias do caule, axila foliar e inflorescência, foi encontrada, sendo uma ferramenta de apoio à seleção. A partir de hibridações controladas entre genitores divergentes, caracteres agronômicos e físico-químicos foram estudados em F2 quanto aos seus componentes genéticos. Altura de plantas e teor de proteína foram as menos influenciadas pelo ambiente, criando possibilidades reais de ganho por seleção. Demonstrou-se a importância dos condicionantes genéticos para caracteres de interesse econômico em quinoa, principalmente os de efeito quantitativo, que possam contribuir ao desenvolvimento e à obtenção de cultivares.. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Quinoa, originated from the Altiplano between Bolivia and Peru, is an example of potential species which has shown outstanding performance by the pioneer work aiming at nutritional quality and biomass to protect the soil In Brazil, the research started in the 1990’s, by Embrapa in collaboration with Universidad de Brasília (UnB). Promising results stimulated the continuation of research efforts until it was possible to adapt the crop to the Brazilian Savannah. The first selected genotypes, however, had limiting factors, as in the case of BRS Piabiru, first cultivar released for cultivation in Brazil. In sequence, BRS Syetetuba was acquired, possessing short plant cycle and large, saponin-free, grains, becoming an option to farmers. For quinoa to be inserted in the agricultural system, varieties should meet desirable agronomic characteristics, such as short- to mid-cycle, high grain yield, plant height suitable to combine harvest and large, high quality grains. In general, these are complex in their genetic expression, resulting from interaction of various components, not being found simultaneously in progenies derived from existing germless. Thus, controlled hybridizations were conducted to increase grain size, in association with other characters. In the absence of records for artificial hybrids being employed in Brazil, for quinoa breeding, induced crosses, by emasculation with alcohol and artificial handling of flowers resulted hybrids among selected genotypes. The F1 hybrids were identified by morphological characters such as the presence of pigment in plant parts and the character was tested for genetic inheritance, confirming dominance over absence. Pleiotropy for as a tool in selection. From controlled hybridizations among divergent genotypes, agronomic and physic-chemical characters were studied in F2 for genetic components. Plant height and protein content were less influenced by environment, creating real opportunities for gain from selection. It has been demonstrated the value of genetic conditioners in characters with economic interest in quinoa, governed by quantitative effects, that might contribute to genotypic enhancement and cultivar acquisition.

Tese (doutorado)–Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Washington da Silva Chagas (washington@bce.unb.br) on 2012-02-07T23:05:10Z No. of bitstreams: 1 2010_BiancaDamianiMarquesSilva.pdf: 380297 bytes, checksum: 2a4f117cad77ae396ced826b631fb39f (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2012-02-16T10:48:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_BiancaDamianiMarquesSilva.pdf: 380297 bytes, checksum: 2a4f117cad77ae396ced826b631fb39f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-16T10:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_BiancaDamianiMarquesSilva.pdf: 380297 bytes, checksum: 2a4f117cad77ae396ced826b631fb39f (MD5) / No primeiro experimento foi encontrado um novo alelo do GDF-9, nomeado FecGE (Embrapa), que leva a uma substituição da fenilalanina por uma cisteína em uma posição conservadora do peptídeo maduro do gene. Para investigar a associação entre os genótipos FecGE e a taxa de ovulação, 39 ovelhas (15 FecG+/+, 15 FecG+/E e 9 FecGE/E) foram selecionadas dos rebanhos genotipados, e submetidas a dois protocolos de sincronização de estro (PGF2? e MAP + eCG). A taxa de ovulação foi maior (P < 0,001) no grupo homozigoto mutante (E/E) o qual mostrou um aumento de 82% na média de CL (2,22± 0,12), assim como a freqüência mais elevada (96,3%) de ovelhas com múltipla ovulação, quando comparado ao grupo +/E e +/+. O grupo heterozigoto (+/E) não apresentou nenhuma diferença (P = 0,612) na média de CL (1,34 ± 0,08), ou na freqüência (31,8%) de ovelhas com ovulações múltiplas, quando comparado as ovelhas do tipo selvagem (1,22 ± 0,11 e 14,6%, respectivamente). Foi observado efeito do genótipo no número de gêmeos por ovelha (P = 0,0136); as ovelhas E/E tiveram 44% de prenhez gemelar, +/E 14% e +/+ 0%. Em conclusão, as ovelhas homozigotas para a mutação tiveram maior taxa de ovulação e prolificidade que as heterozigotas e selvagens. No segundo trabalho foi realizado a superovulação e coleta de embriões de 18 ovelhas (6 +/+, 6 +/E e 6 E/E) para comparação da resposta ovulatória. Foram utilizados dois protocolos de superovulação: protocolo tradicional e protocolo Dia 0. A IA foi realizada com sêmen fresco de um único carneiro, de fertilidade comprovada. Cinco dias após a IA os embriões foram recuperados cirurgicamente, através de laparotomia. Dentre os parâmetros avaliados não houve diferença (P>0,05) entre o protocolo Dia 0 (CL totais 9,8 ± 5,3; estruturas totais 4,5 ± 4,6; estruturas viáveis 1,6 ± 2,0) e o protocolo tradicional (CL totais 10,0 ± 6,0; estruturas totais 3,5 ± 4,3; estruturas viáveis 1,7 ± 2,4). Para quantidade de corpos lúteos nos ovários (E/E 9,0±6,3; +/E 10,1 ±5,3; +/+ 10,5±5,3), estruturas totais coletadas (E/E 4,9±5,0; +/E 3,1±3,1; +/+ 4,1±5,2), e viáveis (E/E 1,9±2,1; +/E 2,2±2,6; +/+ 0,9±1,7), não houve diferença (P>0,05) entre os diferentes genótipos. Foi observado maior número de animais respondendo ao tratamento superovulatório quando utilizado o protocolo Dia 0 (10/18) em comparação ao protocolo tradicional (6/18). Quando se comparou a quantidade de ovelhas que responderam aos protocolos de superovulação, pelo genótipo não houve diferença significativa: E/E 6/12; +/E 5/12 e +/+ 5/12. Não foi observada alteração nos ovários, no crescimento folicular e nem na produção de embriões viáveis quando se comparou os genótipos. Os dois protocolos foram eficientes em estimular a superovulação e produção de embriões, mas não houve diferença entre os genótipos avaliados quanto a taxa de ovulação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In the first experiment was found a new allele of GDF-9, named FecGE (Embrapa), which leads to a substitution of a phenylalanine by a cysteine in a conservative position of the mature peptide in the gene. To investigate the association between the FecGE genotypes (E/E, +/E, and +/+) and the ovulation rate, 39 ewes (15 FecG+/+, 15 FecG+/E and 9 FecGE/E) were selected from the genotyped flocks, and submitted to two estrus synchronization protocol (PGF2α and MPA + eCG). The ovulation rate was greater (P<0.001) in the homozygote mutant (E/E) group which showed an 82% increase in CL average (2.22± 0.12), as well as the highest frequency (96.3%) of multiple-ovulating ewes, when compared to +/E and +/+ groups. The heterozygote group (+/E) presented no difference (P=0.612) in CL average (1.34±0.08), or in the frequency (31.8%) of ewes with multiple ovulations, when compared to the wild-type ewes (1.22±0.11 and 14.6%, respectively). Was observed a genotype effect on the number of twins per ewe (P=0.0136); E/E ewes showed 44% of twinpregnancy, +/E 14% e +/+ 0%. In conclusion, the homozygote ewes had higher ovulation rate and prolificacy than heterozygote and the wild-types. In second experiment the superovulation and embryo recovery was made in 18 ewes (6 +/+, 6 +/E e 6 E/E) to compare ovarian response among genotype. Two protocols of superovulation were used: traditional protocol and Day 0 protocol. Was used fresh semen for AI of one male with proved fertility. Five days after AI the embryos were recovered cirurgically, by laparotomy. There was no difference among evaluated parameters (P>0.05) between Day 0 protocol (total CL 9.8 ± 5.3; total structures 4.5 ± 4.6; viable structures 1.6 ± 2.0) and traditional protocol (total CL 10.0 ± 6.0; total structures 3.5 ± 4.3; viable structures 1.7 ± 2.4). Corpora lutea in the ovaries (E/E 9.0±6.3; +/E 10.1 ±5.3; +/+ 10.5±5.3), total structure recovered (E/E 4.9±5.0; +/E 3.1±3.1; +/+ 4.1±5.2), and viable embryos (E/E 1.9±2.1; +/E 2.2±2.6; +/+ 0.9±1.7), there was no difference (P>0.05) among groups of genotype animals. Was observed higher number of animals answering the superovulation treatment when used Day 0 protocol (10/18) in comparison with traditional protocol (6/18). The ewes that answered to superovulation protocol, by genotype, there were no significative difference E/E 6/12; +/E 5/12 e +/+ 5/12. Was not observed alteration in ovaries, in follicular growth and neither in viable embryo production when compare among genotypes. Both protocols were efficient in superovulation and embryo production, but there were no difference among evaluated genotypes in ovulation rate.