El presente trabajo tiene como objetivo determinar la composición del aceite y del extracto metanólico hidrofílico de las semillas de lúcuma (Pouteria lucuma), las cuales son generadas como residuos agroindustriales. Estas provienen del distrito de Chilca (ubicado en la provincia de Cañete, a 62 km de Lima), cedidas por la heladería OVNI. La metodología consiste en la obtención del extracto metanólico hidrofílico y del aceite, el primero proviene de la maceración de la semilla con metanol y remoción de la parte lipofílica con hexano, mientras que el aceite es resultado de la separación con hexano a los extractos generados por maceración con metanol y acetona de forma secuencial y por extracción con equipo Sohxlet al residuo final con hexano. Así, metabolitos como ácidos grasos libres, ácidos grasos esterificados, triterpenos lineales, triterpenos esteroidales y no esteroidales, entre otros, son identificados en las tres fracciones que comprende el aceite mediante GC-MS y se registra 851,49 ± 1,29 mg de -sitosterol y 75,42 ± 1,02 mg de estigmasterol por cada 100 g de aceite. Mientras que con el GC-FID y estándares de FAMEs se reporta la presencia de los ácidos oleico, palmítico, esteárico y (9E)-octadecenoico, quienes conforman el 30 % del aceite. El contenido de fenoles totales es de 1130,63 ± 11,89 mg EAG/100 g de semilla seca y de flavonoides totales de 661,23 ± 4,73 mg quercetina/100 g de semilla seca en el extracto metanólico hidrofílico. Mediante UHPLC-ESI-MS/MS, se reporta que metabolitos como aminoácidos, ácidos orgánicos, ácido gálico, una amplia gama de flavonoides, entre otros, están contenidos en el mismo extracto y con empleo del reactivo DPPH se registra que este posee una concentración inhibitoria media (IC50) a 41 g / mL. En base a los resultados se concluye que este residuo agroindustrial posee un valor agregado por explorar. / The aim of this work is to determine the composition of the oil and hydrophilic methanolic extract of lucuma seeds (Pouteria lucuma), which are generated as agroindustrial waste. These come from the district of Chilca (located in the province of Cañete, 62 km from Lima), donated by the OVNI ice cream shop. The methodology consists in obtaining the hydrophilic methanolic extract and the oil, the first comes from the maceration of the seed with methanol and the removal of the lipophilic part with hexane, while the oil is the result of the separation with hexane at the extracts generated by maceration with methanol and acetone sequentially and by extraction with Sohxlet equipment to the final residue with hexane. Thus, metabolites such as free fatty acids, esterified fatty acids, linear triterpenes, steroidal and non-steroidal triterpenes, among others, are identified in the three fractions comprising the oil by GC-MS and 851.49 ± 1.29 mg of -sitosterol and 75.42 ± 1.02 mg of stigmasterol per 100 g of oil. While with the GC-FID and FAME standards, the presence of oleic, palmitic, stearic and (9E) -octadecenoic acids is reported, which make up 30% of the oil. The content of total phenols is 1130.63 ± 11.89 mg EAG / 100 g of dry seed and total flavonoids of 661.23 ± 4.73 mg of quercetin / 100 g of dry seed in the hydrophilic methanolic extract. Through UHPLC-ESI-MS / MS, it is reported that metabolites such as amino acids, organic acids, gallic acid, a wide range of flavonoids, among others, are contained in the same extract and with the use of DPPH reagent it is recorded that it possesses a medium inhibitory concentration (IC50) at 41 μg / ml. Based on the results, it is concluded that this agroindustrial waste has an added value to be explored. / Tesis

Os fungos dermatófitos e as leveduras do gênero Candida são alguns dos microrganismos responsáveis por micoses em humanos. O tratamento dessas doenças acaba se tornando difícil pelo baixo número de antifúngicos existentes no mercado e pelo surgimento de resistência destes às drogas utilizadas. Já as actinobactérias são conhecidas por produzirem uma grande variedade de metabólitos secundários. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica dos metabólitos secundários produzidos por isolados de actinomicetos contra fungos dermatófitos e espécies de Candida sp. de origem clínica. Para a seleção dos isolados de actinomicetos com o melhor potencial de inibição foi realizado o ensaio de dupla camada em meio ágar amido caseína (ACA). Os isolados que mostraram atividade foram submetidos aos ensaios para a otimização da produção do composto ativo em sistema de cultura submersa. Para isso, foram avaliados diferentes meios de cultura, diferentes temperaturas e diferentes faixas de pH. A atividade antifúngica foi avaliada a cada 24h durante oito dias e observada através do ensaio de difusão em poço, onde foi calculado o índice de antibiose (IA). Nenhum dos isolados de fungos dermatófitos foi inibido no ensaio de dupla camada e os isolados 1S, R18(6) e 6(2) demonstraram atividade frente todas as espécies de Candida testadas. O isolado R18(6) mostrou melhor atividade em cultura líquida, sendo que as melhores condições de cultivo para a produção do antifúngico foi meio AC sem controle de pH, temperatura de 30°C e crescimento por 72h. Foram realizados ensaios como a concentração inibitória mínima, teste de termoestabilidade e avaliação do efeito de enzimas na atividade antifúngica do extrato bruto. O extrato bruto padronizado foi submetido à cromatografia de camada delgada (CCD) com diferentes solventes e o ensaio de autobiografia foi realizado para verificar a banda com atividade antifúngica. O composto ativo foi observado em um Rf de 0,35 quando utilizado como solvente a mistura de butanol/ ácido acético/ água. Após identificar a banda com atividade antifúngica foram realizados testes de coloração da CCD com cloreto férrico, ninhidrina e anisaldeído para identificação parcial do composto ativo. O resultado sugere que o composto não possui hidroxilas ligadas a anel aromático, não apresenta grupo amino livre e possivelmente alguma parte da molécula tenha um anel heterocíclico com nitrogênio ligado. Também, foi realizada a caracterização morfológica do isolado R18(6) através de microcultivo e microscopia eletrônica de varredura (MEV) e foram observadas estruturas características do gênero Streptomyces. / The dermatophytes fungi and Candida species are some of the microorganisms responsible for mycoses in humans. The treatment of these diseases eventually becomes difficult by the low number of antifungal agents in the market and by the emergence of resistance to the drugs available today. The actinobacteria are known by producing different secondary metabolites. This study aimed to evaluate the antifungal activity of secondary metabolites produced by actinomycetes isolates against fungal pathogens of clinical origin. For the selection of actinomycetes isolates with the best potential inhibition the assay of double layer was performed on starch casein agar (SCA). The isolates that showed activity were submitted to an optimization of the active compound production in submerged culture system. In order to do so, different culture media, temperatures and pH ranges were assessed. The antifungal activity was evaluated every 24 hours for eight days and activity was observed by well diffusion assay, where the antibiosis index was calculated. None of the dermatophyte isolates were inhibited in the double layer assay. Isolates 1S, R18(6) and 6(2) of the actinobacteria demonstrated activity against all the tested Candida species. Isolate R18(6) showed the highest activity in liquid culture and the best growing conditions for producing the antifungal compound was media starch casein broth , without pH control, temperature of 30°C with 72h of cell growth. Assays were performed as the minimum inhibitory concentration, thermal stability test and the effect of different enzymes on antifungal activity of the crude extract. The crude extract was subjected to standardized thin layer chromatography (TLC) with different solvents and an autobiography assay was conducted to verify band with antifungal activity. The active compound was observed at an Rf of 0.35 when the solvent mixture of butanol/ acetic acid/ water was used. After identifying the band with antifungal activity CCD coloring tests were performed with ferric chloride, anisaldehyde and ninhydrin for partial identification of the active compound; it has been observed that the compound does not have hydroxyl groups attached to the aromatic ring, it has no free amino group and possibly some part of the molecule has a linked nitrogen heterocyclic ring. Also, we performed a morphological characterization of the isolate R18 (6) through microcultive and scanning electron microscopy and structures have been observed characteristics of the genus Streptomyces.

Os fungos dermatófitos e as leveduras do gênero Candida são alguns dos microrganismos responsáveis por micoses em humanos. O tratamento dessas doenças acaba se tornando difícil pelo baixo número de antifúngicos existentes no mercado e pelo surgimento de resistência destes às drogas utilizadas. Já as actinobactérias são conhecidas por produzirem uma grande variedade de metabólitos secundários. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica dos metabólitos secundários produzidos por isolados de actinomicetos contra fungos dermatófitos e espécies de Candida sp. de origem clínica. Para a seleção dos isolados de actinomicetos com o melhor potencial de inibição foi realizado o ensaio de dupla camada em meio ágar amido caseína (ACA). Os isolados que mostraram atividade foram submetidos aos ensaios para a otimização da produção do composto ativo em sistema de cultura submersa. Para isso, foram avaliados diferentes meios de cultura, diferentes temperaturas e diferentes faixas de pH. A atividade antifúngica foi avaliada a cada 24h durante oito dias e observada através do ensaio de difusão em poço, onde foi calculado o índice de antibiose (IA). Nenhum dos isolados de fungos dermatófitos foi inibido no ensaio de dupla camada e os isolados 1S, R18(6) e 6(2) demonstraram atividade frente todas as espécies de Candida testadas. O isolado R18(6) mostrou melhor atividade em cultura líquida, sendo que as melhores condições de cultivo para a produção do antifúngico foi meio AC sem controle de pH, temperatura de 30°C e crescimento por 72h. Foram realizados ensaios como a concentração inibitória mínima, teste de termoestabilidade e avaliação do efeito de enzimas na atividade antifúngica do extrato bruto. O extrato bruto padronizado foi submetido à cromatografia de camada delgada (CCD) com diferentes solventes e o ensaio de autobiografia foi realizado para verificar a banda com atividade antifúngica. O composto ativo foi observado em um Rf de 0,35 quando utilizado como solvente a mistura de butanol/ ácido acético/ água. Após identificar a banda com atividade antifúngica foram realizados testes de coloração da CCD com cloreto férrico, ninhidrina e anisaldeído para identificação parcial do composto ativo. O resultado sugere que o composto não possui hidroxilas ligadas a anel aromático, não apresenta grupo amino livre e possivelmente alguma parte da molécula tenha um anel heterocíclico com nitrogênio ligado. Também, foi realizada a caracterização morfológica do isolado R18(6) através de microcultivo e microscopia eletrônica de varredura (MEV) e foram observadas estruturas características do gênero Streptomyces. / The dermatophytes fungi and Candida species are some of the microorganisms responsible for mycoses in humans. The treatment of these diseases eventually becomes difficult by the low number of antifungal agents in the market and by the emergence of resistance to the drugs available today. The actinobacteria are known by producing different secondary metabolites. This study aimed to evaluate the antifungal activity of secondary metabolites produced by actinomycetes isolates against fungal pathogens of clinical origin. For the selection of actinomycetes isolates with the best potential inhibition the assay of double layer was performed on starch casein agar (SCA). The isolates that showed activity were submitted to an optimization of the active compound production in submerged culture system. In order to do so, different culture media, temperatures and pH ranges were assessed. The antifungal activity was evaluated every 24 hours for eight days and activity was observed by well diffusion assay, where the antibiosis index was calculated. None of the dermatophyte isolates were inhibited in the double layer assay. Isolates 1S, R18(6) and 6(2) of the actinobacteria demonstrated activity against all the tested Candida species. Isolate R18(6) showed the highest activity in liquid culture and the best growing conditions for producing the antifungal compound was media starch casein broth , without pH control, temperature of 30°C with 72h of cell growth. Assays were performed as the minimum inhibitory concentration, thermal stability test and the effect of different enzymes on antifungal activity of the crude extract. The crude extract was subjected to standardized thin layer chromatography (TLC) with different solvents and an autobiography assay was conducted to verify band with antifungal activity. The active compound was observed at an Rf of 0.35 when the solvent mixture of butanol/ acetic acid/ water was used. After identifying the band with antifungal activity CCD coloring tests were performed with ferric chloride, anisaldehyde and ninhydrin for partial identification of the active compound; it has been observed that the compound does not have hydroxyl groups attached to the aromatic ring, it has no free amino group and possibly some part of the molecule has a linked nitrogen heterocyclic ring. Also, we performed a morphological characterization of the isolate R18 (6) through microcultive and scanning electron microscopy and structures have been observed characteristics of the genus Streptomyces.

Os fungos dermatófitos e as leveduras do gênero Candida são alguns dos microrganismos responsáveis por micoses em humanos. O tratamento dessas doenças acaba se tornando difícil pelo baixo número de antifúngicos existentes no mercado e pelo surgimento de resistência destes às drogas utilizadas. Já as actinobactérias são conhecidas por produzirem uma grande variedade de metabólitos secundários. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica dos metabólitos secundários produzidos por isolados de actinomicetos contra fungos dermatófitos e espécies de Candida sp. de origem clínica. Para a seleção dos isolados de actinomicetos com o melhor potencial de inibição foi realizado o ensaio de dupla camada em meio ágar amido caseína (ACA). Os isolados que mostraram atividade foram submetidos aos ensaios para a otimização da produção do composto ativo em sistema de cultura submersa. Para isso, foram avaliados diferentes meios de cultura, diferentes temperaturas e diferentes faixas de pH. A atividade antifúngica foi avaliada a cada 24h durante oito dias e observada através do ensaio de difusão em poço, onde foi calculado o índice de antibiose (IA). Nenhum dos isolados de fungos dermatófitos foi inibido no ensaio de dupla camada e os isolados 1S, R18(6) e 6(2) demonstraram atividade frente todas as espécies de Candida testadas. O isolado R18(6) mostrou melhor atividade em cultura líquida, sendo que as melhores condições de cultivo para a produção do antifúngico foi meio AC sem controle de pH, temperatura de 30°C e crescimento por 72h. Foram realizados ensaios como a concentração inibitória mínima, teste de termoestabilidade e avaliação do efeito de enzimas na atividade antifúngica do extrato bruto. O extrato bruto padronizado foi submetido à cromatografia de camada delgada (CCD) com diferentes solventes e o ensaio de autobiografia foi realizado para verificar a banda com atividade antifúngica. O composto ativo foi observado em um Rf de 0,35 quando utilizado como solvente a mistura de butanol/ ácido acético/ água. Após identificar a banda com atividade antifúngica foram realizados testes de coloração da CCD com cloreto férrico, ninhidrina e anisaldeído para identificação parcial do composto ativo. O resultado sugere que o composto não possui hidroxilas ligadas a anel aromático, não apresenta grupo amino livre e possivelmente alguma parte da molécula tenha um anel heterocíclico com nitrogênio ligado. Também, foi realizada a caracterização morfológica do isolado R18(6) através de microcultivo e microscopia eletrônica de varredura (MEV) e foram observadas estruturas características do gênero Streptomyces. / The dermatophytes fungi and Candida species are some of the microorganisms responsible for mycoses in humans. The treatment of these diseases eventually becomes difficult by the low number of antifungal agents in the market and by the emergence of resistance to the drugs available today. The actinobacteria are known by producing different secondary metabolites. This study aimed to evaluate the antifungal activity of secondary metabolites produced by actinomycetes isolates against fungal pathogens of clinical origin. For the selection of actinomycetes isolates with the best potential inhibition the assay of double layer was performed on starch casein agar (SCA). The isolates that showed activity were submitted to an optimization of the active compound production in submerged culture system. In order to do so, different culture media, temperatures and pH ranges were assessed. The antifungal activity was evaluated every 24 hours for eight days and activity was observed by well diffusion assay, where the antibiosis index was calculated. None of the dermatophyte isolates were inhibited in the double layer assay. Isolates 1S, R18(6) and 6(2) of the actinobacteria demonstrated activity against all the tested Candida species. Isolate R18(6) showed the highest activity in liquid culture and the best growing conditions for producing the antifungal compound was media starch casein broth , without pH control, temperature of 30°C with 72h of cell growth. Assays were performed as the minimum inhibitory concentration, thermal stability test and the effect of different enzymes on antifungal activity of the crude extract. The crude extract was subjected to standardized thin layer chromatography (TLC) with different solvents and an autobiography assay was conducted to verify band with antifungal activity. The active compound was observed at an Rf of 0.35 when the solvent mixture of butanol/ acetic acid/ water was used. After identifying the band with antifungal activity CCD coloring tests were performed with ferric chloride, anisaldehyde and ninhydrin for partial identification of the active compound; it has been observed that the compound does not have hydroxyl groups attached to the aromatic ring, it has no free amino group and possibly some part of the molecule has a linked nitrogen heterocyclic ring. Also, we performed a morphological characterization of the isolate R18 (6) through microcultive and scanning electron microscopy and structures have been observed characteristics of the genus Streptomyces.

Los inhibidores de acetilcolinesterasa encuentran aplicación en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, enfermedad que afecta actualmente a más de diez millones de personas en el mundo. Establecer un tratamiento eficaz constituye uno de los retos más importantes en el campo de la geriatría, tanto por el número creciente de pacientes como por las implicaciones socio-sanitarias que se derivan de esta enfermedad. En la presente tesis, la actividad inhibitoria de la enzima acetilcolinesterasa fue evaluada en forma preliminar mediante un método de bioautografía en cromatofolios. Con este método, se realizaron ensayos de actividad biológica sobre extractos de distinta polaridad y aceites esenciales obtenidos de 21 especies de plantas de la región de Bahía Blanca pertenecientes a las familias Quenopodiaceae, Anacardiaceae, Asteraceae, Solanaceae, Brassicaceae, Frankeniaceae, Boraginaceae, Plumbaginaceae, Fabaceae, y Aizoaceae. En base a los resultados obtenidos se decidió llevar a cabo el estudio de la especie Chuquiraga erinacea D. Donn. subsp. erinacea, especie endémica perteneciente a la familia Asteraceae. Para esto se procedió al fraccionamiento guiado por el bioensayo de inhibición de acetilcolinesterasa del extracto de esta especie a fin de aislar sus componentes activos. Estos compuestos fueron finalmente identificados como triterpenos pentacíclicos mono, di y trihidroxilados mediante técnicas de Resonancia Magnética Nuclear de 1H y 13C, con experimentos mono y bidimensionales y Espectrometría de Masas. La actividad inhibitoria enzimática de los compuestos puros fue evaluada in vitro mediante el empleo de un método cuantitativo de inhibición de acetilcolinesterasa por espectrofotometría UV-VIS. Buscando mejorar las características farmacológicas de los compuestos naturales, se generaron derivados fosfatados y sulfatados de los compuestos aislados y de compuestos afines. La sulfatación de ellos condujo a la obtención de derivados más solubles y activos que los productos naturales. Durante la evaluación preliminar de la actividad enzimática se detectó que los aceites esenciales de las especies Schinus areira L. (Anacardiaceae), Schinus longifolia (Lindl.) Speg. (Anacardiaceae) y Diplotaxis tenuifolia L. D.C. (Brassicaceae) eran capaces de inhibir la enzima acetilcolinesterasa. En particular, el aceite esencial de S. longifolia presentó actividad inhibitoria a concentraciones menores que el resto de los aceites estudiados. A diferencia de ellos, el aceite de S. longifolia posee un elevado porcentaje de sesquiterpenos. Si bien existen numerosas referencias de monoterpenos con actividad anticolinesterasa, muy pocos sesquiterpenos han sido estudiados en cuanto a esta actividad. Los resultados obtenidos con D. tenuifolia, cuyo aceite está compuesto mayoritariamente de 5- metiltiopentanonitrilo, constituyen el primer reporte sobre actividad antiacetilcolinesterasa para este tipo de compuestos.

Una fuente potencial de compuestos biológicamente activos son los líquenes, debido a que producen más de 800 metabolitos secundarios exclusivos de ellos. Dentro de su diversidad podemos mencionar al género Stereocaulon, el cual está distribuido alrededor del mundo y se cuenta con aproximadamente 130 especies. El Stereocaulon glareosum presenta un talo dimórfico, en su mayoría crecen en regiones montañosas. Se han realizado estudios de esta especie enfocados al tema botánico y relaciones filogenéticas del género Stereocaulon; sin embargo, no se ha reportado ningún estudio científico acerca de la composición química de esta especie. En el presente trabajo se realiza el estudio químico del extracto metanólico del liquen Stereocaulon glareosum (Sav.) H. Magn., recolectado en el Departamento de Junín, Provincia de Huancayo, camino al Nevado de Huaytapallana. El estudio comienza con el análisis cualitativo para determinar metabolitos y compuestos liquénicos presentes. Asimismo, se realiza el perfil metabolómico del extracto metanólico del liquen en modo negativo mediante UHPLCESI- Q-Orbitrap-MS-MS, de este modo se identifican por primera vez 36 compuestos entre aromáticos, dépsidos, depsidonas, difeniléteres, dibenzofuranos, lípidos y polioles y otros 12 se proponen en base a sus espectros característcos UV-vis y ESI-MS-MS. Además, se identifican 16 ácidos grasos como metilésteres mediante el uso de GC-FID al comparar los tiempos de retención obtenidos de los estándares. Por otro lado, el estudio químico permite aislar 9 compuestos, que se someten a procesos de separación y purificación por cromatografía en columna y/o cristalización. Estos son haematomato de metilo, ácido 2,4-dimetoxi-6-pentilbenzoico, ácido 2,4-dimetoxi-6-propilbenzoico, β- orcinol carboxilato de metilo, orselinato de metilo, atranorina, ácido lobárico, brasicasterol y ácido glucónico; cuyas estructuras se determinan en base a análisis espectroscópicos en comparación con referencias citadas. Finalmente, se realiza el análisis cuantitativo de ácido úsnico mediante la técnica de espectrofotometría UVVisible, que evidencia un contenido de 0,52 % de (+)-ácido úsnico. / Lichens are a potential source of bioactive substances because they produce more than 800 substances unique to them. According to its diversity, we can mention the genus Stereocaulon, which is a widely distributed around the world and comprise approximately 130 species. For instance, Stereocaulon glareosum presents a dimorphic thallus, it mostly grown in mountainous regions. Some biological studies of S. glareosum have been reported previously; however, no scientific study of the chemical composition of this species has not been reported. The aim of this work is to perform the chemical study of the methanolic extract from the lichen Stereocaulon glareosum (Sav.) H. Magn. It specimen was collected in the Department of Junín, Province of Huancayo, on the way to “Nevado de Huaytapallana”. The study begins with the qualitative analysis to determine metabolites and lichenic substances. To the best of our knowledge, this is the first time that forty-eight compounds are detected in the methanolic extract using UHPLC-ESI-Q-Orbitrap-MS-MS in mode negative. Thirty-six compounds identified were mainly aromatics, depsides, depsidones, diphenyl ethers, dibenzofurans, lipids and polyols and another twelve are proposed based on their UV-vis and ESI-MS-MS spectrums. In addition, sixteen fatty acids are identified as methyl esters by the use of GC-FID when comparing the retention times obtained from the standards. On the other hand, the chemical study allows isolating nine compounds, which are subjected to separation and purification processes by column chromatography and/or crystallization. These compounds are methyl haemmatomate, 2,4-dimethoxy-6-pentylbenzoic acid, 2,4- dimethoxy-6-propylbenzoic acid, methyl-β-orcinol carboxylate, methyl orsellinate, atranorin, lobaric acid, brassicasterol and gluconic acid; whose structures are determined based on the spectroscopic analysis in comparison with reported studies Finally, the quantitative analysis of usnic acid using the UV-Vis spectrophotometry evidences a content of 0.52 % of (+) - usnic acid. / Tesis

Tesis Magíster en Bioquímica en el área de especialización de Bioquímica Ambiental y Memoria para optar al Título de Bioquímico / Los líquenes son asociaciones simbióticas entre 2 o 3 organismos, entre los cuales hay siempre un hongo o micobionte y uno o dos fotobiontes. El fotobionte puede corresponder a un alga fotosintética o a una cianobacteria, y ambos están presentes en el caso de los líquenes tripartitos, donde el alga es el organismo fotosintético principal. En los cianolíquenes, la cianobacteria aporta los fotosintatos y además, con la fijación de nitrógeno atmosférico. Recientemente se ha descrito que los ensambles microbianos que se desarrollan formando biopelículas sobre el talo del liquen pueden ser considerados un componente adicional en estas simbiosis. Sin embargo, aún no se han definido el o los factores que determinan la estructura de dicha microbiota asociada. En general, los líquenes se caracterizan por poseer un metabolismo secundario muy activo, cuyos productos son principalmente compuestos fenólicos, obtenidos por diversas vías, como las del polimalonato, siquimato y mevalonato. Dada esta alta producción de metabolitos, se propone estudiar si la comunidad bacteriana asociada íntimamente al talo del cianoliquen Peltigera se relaciona con la diversidad de estos compuestos, aunque para este género de líquenes no se ha descrito una elevada producción de los mismos. Además, diversas actividades enzimáticas se han cuantificado en líquenes, y en el caso particular de Peltigera, las fenoloxidasas han sido las más estudiadas. Esta actividad podría estar relacionada con la estructuración de la comunidad bacteriana asociada al talo liquénico, ya que la generación de compuestos oxidantes se sugiere está asociada a defensa contra patógenos y propiedades antibióticas. Las 50 muestras de líquenes del género Peltigera y el sustrato asociado, provienen de dos bosques de la Reserva Nacional Coyhaique. Con el fin de identificar y agrupar filogenéticamente a los simbiontes muestreados, se obtuvieron las secuencias de los genes rRNA 18S y 28S de hongos y del gen del rRNA 16S de cianobacterias, a partir de los cuales se encontraron 6 haplotipos de micobionte y 5 de cianobionte, con los que se definieron las OTUs y 11 muestras compuestas. Por otra parte, los metabolitos de las muestras compuestas se analizaron usando técnicas de cromatografía en placa fina en dos dimensiones (TLC-2D), la actividad fenoloxidasa asociada a cada muestra liquénica compuesta se determinó espectrofotométricamente mediante el monitoreo de la oxidación del ácido 2'2-azino-bis-[3-etilbenzotiazol-6-sulfónico] (ABTS) a 436 nm. Finalmente, la estructura genética de la comunidad bacteriana relacionada a los líquenes y a los sustratos, se determinó mediante el uso de la técnica del polimorfismo en el largo de los fragmentos terminales de restricción (TRFLP), mientras que la estructura metabólica se determinó mediante los perfiles fisiológicos a nivel comunitario (CLPP) a través del uso de placas EcoPlate (BioLog®). Los perfiles genéticos y metabólicos fueron diferentes en su estructura dependiendo de la identidad de los simbiontes y el bosque del que provenían. Se encontraron correlaciones de la diversidad de metabolitos de los líquenes con la estructura genética de las comunidades asociadas a éstos y las presentes en el sustrato, y de la actividad fenoloxidasa de las muestras de líquenes con la estructura metabólica de la comunidad bacteriana obtenida desde el talo. Los resultados de esta tesis sugieren que tanto la producción de metabolitos como la actividad fenoloxidasa, ambos factores atribuibles al liquen, cumplirían un papel en determinar la diversidad genética y metabólica de la comunidad bacteriana asociada al talo de líquenes del género Peltigera y al sustrato donde ellos crecen / Lichens are symbiotic associations between 2 or 3 organisms, including a fungus and one or two photobionts. A photosynthetic algae or a cyanobacterium can be the photobiont in these associations, and both are present in tripartite lichens, where the algae is the main photosynthetic organism. In cyanolichens, the cyanobacterium provides with photosynthates and with atmospheric nitrogen fixation. Recently, it has been described that microbial assembles, that develop forming biofilms upon the lichen thallus, can be considered an additional component in these symbioses. However, the factors determining the structure of this associated microbiota have not yet been defined. In general, lichens are characterized by their very active secondary metabolism, whose products are mainly phenolic compounds obtained by different metabolic pathways, such as the polymalonate, shikimic acid and mevalonate ones. Given this high production of metabolites, it is propose to study if the bacterial community intimately associated to Peltigera cyanolichens thallus is related to the diversity of these compounds, even though this particular lichen genera has not been associated with a high production of these compounds. Moreover, different enzymatic activities have been quantified in lichens, and in the Peltigera particular case, phenoloxidases have been the more studied enzymes. This activity could be related with the structuration of lichen thallus associated bacterial community, because the production of oxidant compounds has been related to defense against pathogens and to antibiotic activities. The 50 lichen samples of the genus Peltigera and their corresponding associated substrates derived from two forests of the Coyhaique National Reserve. With the aim of identifying and phylogenetically grouping the sampled symbionts, sequences of fungal 18S and 28S rRNA and cyanobacterial 16S rRNA genes were obtained, from which 6 mycobiont and 5 cyanobiont haplotypes were found, defining the corresponding OTUs and 11 composite samples. On the other hand, metabolites of composite samples were analyzed using bi-dimensional thin layer chromatography (TLC-2D), whilst phenoloxidase activity of each lichen composite sample was spectrophotometrically determined by monitoring the oxidation of 2,2'-azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid] (ABTS) at 436 nm. Finally, genetic structures of the bacterial communities, related to lichens and substrates, were determined by terminal restriction fragment length polymorphism (TRFLP), while metabolic structures were determined by community-level physiological profiling, using EcoPlates (Biolog®). Genetic and metabolic profiles were different in structure, depending on the symbiont identity and the forest from where they derived. Correlations were founded between diversity of lichen metabolites and genetic structures of bacterial communities associated to both lichen and substrate, and between lichen

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Evalúa e identifica nuevos poliquétidos de la clase de compuestos de piranonaftoquinonas (PNQs), de las especies de Streptomyces, con potencial contra biopelículas de Staphylococcus aureus. Determina el potencial antimicrobiano de los compuestos contra las células planctónicas y biopelículas a través de la tinción de viabilidad con base de tinte redox. La eficacia anti-biopelícula es confirmada por el recuento de viabilidad (Logaritmo de reducción). La alnumicina D resulta ser el más potente poliquétido de PNQ anti-biopelícula dentro del grupo de las alnumicinas. Es importante resaltar que la alnumicina D es un compuesto derivado de la ruta biosintética de las PNQs y que el producto final, alnumicina A, no muestra actividad significativa anti-biopelícula; así también, se observa que la presencia de la poco frecuente unidad C-ribosil en la forma de piranosa es esencial para presentar elevado potencial en el grupo de las alnumicinas. Por otro lado, la medermicina, compuesto glicosilado con una unidad de aminoazúcar cargada y derivada de glucosa, no presenta elevada actividad anti-biopelícula en comparación con su unidad de aglicona kalafungina. La granaticina B exhibe similar potencial anti-biopelícula que la alnumicina D y además ambas comparten características estructurales como el de no poseer carga, ser glicosilados y mostrar similar patrón de oxigenación. En consecuencia, estos hallazgos resaltan la ruta biosintética de los antibióticos como potencial fuente de efectivos compuestos anti-biopelículas. / Tesis

Lepidium meyenii (Walpers), conocida como maca, es una planta perenne de la familia de las Brasicaceae que crece entre los 3800 y 4500 m.s.n.m. en regiones de puna, generalmente en los departamentos de Junín y Pasco (Perú). Se han identificado principios activos de interés y ha sido reconocida por su alto valor nutricional, energizante y afrodisiaco. Por otro lado, se ha evaluado el perfil químico y la composición de maca fresca y la secada de manera tradicional, y se han encontrado diferencias debidas a procesos bioquímicos post-cosecha que resultan en la formación de compuestos bioactivos adicionales (macamidas). En el presente trabajo se estudió la variación del perfil de compuestos de maca durante su proceso de secado tradicional e industrial. Se ha demostrado que el procesamiento tradicional, el cual consiste en exponer en el campo a los hipocotilos a ciclos diarios variables en temperatura y a radiación ultravioleta (UV) intensa, durante ocho a doce semanas, es esencial para la generación de distintos metabolitos bioactivos, en comparación con otros procesos de secado directo, como la liofilización, que no conducen a los mismos resultados. Por tanto, se optimizaron métodos cuantitativos de análisis para los diferentes compuestos existentes de la maca con el fin de reducir tiempos de análisis y minimizar varianzas. Asimismo, se identificaron algunos compuestos o variables que pueden servir como indicadores de control de calidad para la comercialización y exportación de este producto andino. Finalmente, se evaluó el efecto de procesos post-cosecha de secado tradicional e industrial sobre el perfil y rendimiento de compuestos bioactivos en maca, y se compararon las cinéticas de conversión para analizar la influencia de las variables ambientales sobre la producción de compuestos indicadores de este producto andino. / Tesis

As actinobactérias endofíticas estão presentes nos tecidos das plantas e, por meio da produção de metabólitos ativos, às protegem e auxiliam em condições de estresse. Esses microrganismos tem sido amplamente estudados no controle de doenças fitopatogênicas, como a mancha marrom causada por Bipolaris sorokiniana. Este fungo é o agente causal da podridão comum da raiz, manchas foliares, morte de plântulas e ponto preto das sementes de trigo e cevada, causando redução significativa na produtividade. Neste contexto, os objetivos do presente estudo foram avaliar a virulência de isolados de B. sorokiniana e a atividade antifúngica de actinobactérias contra este fitopatógeno. Os antagonistas com elevada atividade contra o fitopatógeno foram caracterizados quanto à produção enzimática, fisiologia, condições de crescimento e produção de metabólitos, bem como sequenciamento do 16S rRNA para identificação dos antagonistas. A caracterização parcial dos metabólitos foi realizada por meio de sistemas de Cromatografia de Camada delgada (CCD) contendo diferentes solventes. Os resultados mostraram que os isolados de B. sorokiniana apresentaram elevada virulência às plântulas e sementes de trigo, sendo que a maior agressividade foi relatada à semente. Por outro lado, 69,6% das actinobactérias apresentaram elevada atividade antifúngica contra isolados de B. sorokiniana em meio sólido, e 17% a mantiveram em cultura submersa. A maior produção ocorreu a 30°C após 72h de incubação, para a maioria dos isolados. A detecção da produção de catalase, amilase, pectinase, lipase e esterase foi observada para a maioria das actinobactérias (100, 95,6, 91,30, 95,6, 100%, respectivamente). Enquanto que a degradação de caseína, carboximetilcelulose e gelatina foi realizada por 60,8, 34,78 e 47,82% dos isolados, respectivamente. Os isolados 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selecionados devido à elevada atividade antifúngica e enzimática, apresentaram reação positiva para produção de compostos voláteis, quitinase e glucanase, sideróforos, fixação de nitrogêno, AIA e colonização de raizes. Somente isolado R18(6) não apresentou capacidade de solubilizar fosfatos. A caracterização molecular determinou que estes isolados pertencem ao gênero Streptomyces. Os metabólitos produzidos pelo isolado R18(6) foram mais estáveis a mudanças de temperatura e pH, bem como para a ação das proteases e EDTA, quando comparado aos demais. Os solventes acetato de etila e hexano foram mais eficientes na extração de metabólitos do extrato bruto, porém a melhor separação de metabólitos em CCD foi obtida com misturas de solventes. / Endophitic actinobacterias are present in plant tissues and by means of active metabolites they protect and help them in stress conditions. These microorganisms have been widely used in the control of phytopathogenic diseases, such as the spot blotch caused by Bipolaris sorokiniana. This fungus is a causal agent of common root rot, leaf spots, death of seedlings and black point of the seeds of wheat and barley, causing significant reduction in productivity. In this context, the aim of this study was to evaluate the virulence of the B. sorokiniana isolates and the antifungal activity of actinobacterias against this phytopathogen. The antagonists with the higher activity against the phytopatogen were characterize taking in consideration their physiology, enzyme production, growth conditions and metabolites production and 16S rRNA sequencing for identification of the antagonists. Partial characterization (nós não purificamos) of the metabolites was performed using thin layer chromatography (TLC) systems containing different solvents. The results showed that the isolates of B. sorokiniana have a high virulence on wheat seed and seedlings, however the greater aggressiveness was observed to seed. On the other hand, 69.6% of actinomycetes showed high antifungal activity against of B. sorokiniana isolates on solid medium, and 17% maintained this behavior in submerged culture. The highest yield happened, for most isolates, when grown at 30°C with agitation after 72h of incubation. The detection of catalase, starch, pectin, lipase and esterase production was observed for most of the actinomycetes (100, 95.6, 91.30, 95.6, 100%, respectively). While the hydrolysis of casein, carboxymethylcellulase and gelatin was performed by 60.8, 34.78 and 47.82% of the isolates, respectively. Isolates 6(2), 6(4), 16(3) e R18(6), selected due to the high antifungal and enzyme activity, showed a positive reaction for the production of volatile compounds, chitinase and glucanase, siderophores, nitrogen fixation, AIA and colonization of the roots. Only the isolated R18(6) showed no ability to solubilize phosphates. Molecular characterization of the isolates determined that they belong to the genus Streptomyces. The metabolites produced by isolate R18 (6) were more stable to temperature and pH changes, as well to the action of proteases and EDTA, when compared to the others. The solvents ethyl acetate and hexane were more efficient for the extraction of the metabolites from the crude extract, however a better separation of the metabolites in the TLC was obtained with mixture of solvents.