Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-12-05T03:15:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349062.pdf: 2186530 bytes, checksum: e75b0e1a3978f841dbb9e4a7004b2658 (MD5) Previous issue date: 2017 / A Anfotericina B (AB) é o principal fármaco de escolha para o tratamento de infecções fúngicas. A alta incidência e gravidade destas infecções estão relacionadas principalmente a pacientes hospitalizados, que apresentam algum estado de imunossupressão, seja pelo uso de agentes quimioterápicos ou pacientes imunocomprometidos com HIV/AIDS. A formulação de AB em desoxicolato de sódio (AB-DOC), comercialmente disponível como Fungizone®, é a terapia comumente utilizada e considerada padrão-ouro, entretanto, sua administração em pacientes já debilitados provoca efeitos adversos graves, destacando-se a nefrotoxicidade. O aquecimento de AB foi avaliado quanto à formação de agregados e quanto à toxicidade em células de epitélio renal humano in vitro e eficácia em isolados clínicos de Candida spp. provenientes de amostras coletadas de pacientes atendidos no HU-UFSC. Para tal, a citotoxicidade das formulações de AB-DOC, AB-DOC aquecida e Ambisome® foi avaliada por citometria de fluxo, pela verificação da integridade da membrana celular em células de epitélio renal humano (HEK-293) marcadas com iodeto de propídeo. A identificação e caracterização dos isolados clínicos foram feitas através do subcultivo em ágar-sabouraud dextrose por 24 horas e posteriormente submetidas ao microcultivo em lamínula para identificação da espécie. A suscetibilidade antifúngica foi determinada através dos testes de microdiluição em caldo. Nos ensaios de citotoxicidade, a AB-DOC aquecida mostrou-se menos tóxica frente às células de epitélio renal. Observou-se ainda que a atividade antifúngica da AB-DOC aquecida foi tão eficaz quanto a AB-DOC convencional. Além disso, em isolados de Candida albicans, Candida parapsolis e Candida tropicalis, a AB-DOC aquecida foi mais ativa que a AB-DOC. Portanto, o pré-aquecimento de AB-DOC para uso intravenoso surge como futura alternativa não onerosa, conferindo perfil de seletividade a uma formulação já disponível no mercado, com baixo custo e considerado padrão ouro até os dias de hoje. / Abstract : Amphotericin B (AB) is the drug of choice for the treatment of fungal infections. The high incidence and severity of these infections are mainly related to hospitalized patients, who present immunosuppression, either by the use of chemotherapeutic agents or immunocompromised patients with HIV/AIDS. The formulation of AB in sodium deoxycholate (AB-DOC), commercially available as Fungizone®, is the commonly used therapy and is considered gold standard, however, its administration in already debilitated patients causes serious adverse effects, especially nephrotoxicity. Heated AB was evaluated regarding its aggregate state and for in vitro toxicity in human renal epithelial cells as well as its efficacy in clinical isolates of Candida spp. collected from samples patients at HU-UFSC. For that, the cytotoxicity of the AB-DOC, heated AB-DOC and Ambisome® formulations was assessed by flow cytometry, evaluating cell membrane integrity in human renal epithelium (HEK-293) cells labeled with propidium iodide. The identification and characterization of the clinical isolates were done through the subculture in agar-sabouraud dextrose for 24 hours and later submitted to the microculture in coverslip for identification of the species. Antifungal susceptibility was determined by broth microdilution tests. In cytotoxicity assays, heated AB-DOC was shown to be less toxic to renal epithelial cells. It was further observed that the antifungal activity of heated AB-DOC was as effective as conventional AB-DOC. In addition, in the isolates of Candida albicans, Candida parapsolis, and Candida tropicalis, h-AB-DOC was more active than AB-DOC. Therefore, heated AB-DOC for intravenous use appears as a future non-costly alternative, giving a selectivity profile to a formulation that is already available in the market, with low-cost and considered the gold standard nowadays.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-08-01T12:51:42Z No. of bitstreams: 2 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-02T19:47:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T19:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) 2016_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 6983724 bytes, checksum: 423c96221b6277cb355c442ef8e76cfe (MD5) / A cromoblastomicose (CBM) é uma micose subcutânea, crônica, de distribuição cosmopolita, causada por vários fungos demáceos, pigmentados e dimórficos. Pacientes com a doença ainda são tidos como desafio terapêutico, principalmente devido à sua natureza recalcitrante. Tendo em vista a persistência do fungo no tecido e a cronicidade das lesões, a ativação do sistema imunológico do hospedeiro apresenta grande relevância nessa micose. Após infecção com diferentes formas do fungo Fonsecaea pedrosoi (conídios, hifas e células muriformes) isoladamente foi observado manifestações distintas da CBM murina experimental de modo que infecção com células muriformes promoveu o estabelecimento de doença mais duradoura em comparação à infecção com as demais formas do fungo. Ademais, foi visto que a presença de hifas e, principalmente, de células muriformes na lesão, mas não de conídios, está relacionada com alta produção de citocinas pro-inflamatórias durante o estabelecimento da CBM experimental. Sequenciamento de alto desempenho do RNA (RNA-seq) de macrófagos recém-migrados para o peritônio em co-cultivo com conídios ou células muriformes do fungo mostraram que a interação com células muriformes, mas não com conídios, acarreta em intensa regulação positiva de genes relacionados com a resposta inflamatória do hospedeiro repercutindo em alta produção de citocinas pró-inflamatórias, de modo que o estabelecimento de inflamação exacerbada foi correlacionado com a persistência do fungo na lesão. Mecanismos efetores e a expressão de genes importantes na ativação da resposta imune adaptativa estão inibidos na interação com as formas do fungo. Análise das subpopulações de linfócitos T no linfonodo drenante e no sítio de infecção no curso da CBM murina experimental por citometria de fluxo mostraram polarização de linfócitos T com perfil regulatório no linfonodo poplíteo ao passo que no coxim plantar foi observada a predominância de Th17 nos estágios iniciais da doença, sendo sucedida por uma polarização Th1 nos estágios mais tardios, relacionados com a remissão da doença. Ensaios in vivo de neutralização de IL-17A e IFN-γ obstaram o processo de eliminação do fungo no curso da doença. De modo semelhante, animais dectina-2 KO, os quais apresentaram redução na população de Th17 no curso da doença, mostrou redução da carga fúngica prejudicada nos primeiros 15 dias de infecção sem, contudo, afetar a resolução da doença. Por fim, depleção in vivo de células CD25+, a qual leva à redução de células Treg presentes no linfodo drenante, repercutiu em maior redução da carga fúngica nos primeiros 15 dias de infecção, todavia se opos ao processo de remissão da doença observada no modelo experimental murino. Assim, de modo geral, o presente trabalho traz novos elementos na compreensão da imunopatologia da doença, de forma que trabalhos futuros envolvendo a imunomodulação da resposta do hospedeiro para aquela mais efetiva pode representar uma estratégia promissora no tratamento, não só da CBM, como das demais micoses. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic worldwide subcutaneous mycosis, caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. Patients with the disease are still considered as therapeutic challenge, mainly because of its recalcitrant nature. Due to fungal persistence in the tissue and lesions chronicity, the immune system activation in the host is highly relevant in this mycosis. After infection with different Fonsecaea pedrosoi fungal forms alone (conidia, hyphae and muriform cells), it was observed distinct manifestations of experimental murine CBM so that infection with muriformes cells promoted the establishment of longer lasting disease compared to infection with other fungal forms. Moreover, the presence of hyphae and especially muriformes cells in skin lesions, but no conidia, is related with high production of pro-inflammatory cytokines during the establishment of experimental CBM. High throughput RNA sequencing (RNA-seq) of Thioglycollate-elicited peritoneal macrophages co-cultivated with conidia or muriformes fungal cells showed that the interaction with muriformes cells, but not with conidia, results in strong upregulation of genes related to inflammatory response leading to a high production of proinflammatory cytokines, while exacerbated inflammation was correlated with the persistence of the fungus on the lesion. Effector mechanisms and the expression of genes important to adaptive immune response activation are inhibited in the interaction with the fungal cells. Analysis of T lymphocyte subpopulations in draining lymph node and in the site of infection during the course of experimental CBM by flow cytometry showed polarization of T lymphocytes with regulatory status in the popliteal lymph node while in the footpad was observed predominance of Th17 in the early stages of disease, being succeeded by Th1 popularization in the later stages, which is associated with disease remission. In vivo analysis with IL-17A and IFN-γ neutralization hindered fungal cell elimination in the course of the disease. Similarly, dectin-2 KO animals, Th17 contraction in the course of the disease showed fungal burden impairment in the first 15 days of infection, but did not affected the disease resolution. Finally, in vivo depletion of CD25+ cells, which leads to reduction of Treg cells in the draining lymph node, reflected in greater reduction in fungal burden in the first 15 days of infection, however it opposes to disease remission observed in the experimental CBM. Thus, in general, this study brings new elements in the understanding of the immunopathology of CBM, so that future work involving immunomodulation of the host response to a more effective pattern can represent a promising strategy for the treatment, not only of CBM, but to other mycoses as well.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-18Bitstream added on 2014-06-13T20:17:32Z : No. of bitstreams: 1 yamashita_t_me_botfm.pdf: 463756 bytes, checksum: 4914cf7ff50426b39858d09d75ace099 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O diagnóstico preciso das lesões de micose fungoide (MF) em fases iniciais é difícil, pois uma variedade de doenças benignas se sobrepõem clínica e histologicamente. Foram selecionadas 101 biópsias que correspondiam a 67 pacientes cujas lesões se assemelhavam a MF clássica em fases iniciais, do período de 1999 a 2010, que estavam no arquivo do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu - Universidade Estadual Paulista. A proporção entre homens:mulheres foi de 2,6:1, com idades que variaram de 17 a 103 anos e idade média de 62,1 anos. O diagnóstico de MF foi confirmado pela correlação dos aspectos clínicos, histopatológicos e perfil imunoistoquímico. Os pacientes com diagnóstico de MF apresentaram-se com máculas e/ou placas correspondentes aos estágios T1 e T2, geralmente em áreas não expostas ao sol. Desses 67 pacientes analisados, 17 (25,5%) tiveram o diagnóstico de MF caracterizado pelos principais critérios histopatológicos: epidermotropismo desproporcional, microabscessos de Pautrier, alinhamento dos linfócitos e algum grau de atipia linfocitária. Em 3 (4,5%) dos pacientes cujo diagnóstico era MF, não apresentaram todos os principais critérios histopatológicos, porém o diagnóstico foi possível pela correlação com o perfil imunoistoquímico característico de CD3+, CD4+ e redução na expressão de CD8, CD7 e/ ou CD2 e CD5. Em 15 (22,5%) casos a suspeita para MF manteve-se, e, em 32 (47,5%) pacientes o diagnóstico de MF foi excluído e esses casos foram classificados como outras doenças. Portanto, mais de 47% dos pacientes foram falso-positivos se considerarmos apenas os aspectos clínicos. Embora o estudo imunoistoquímico seja uma importante técnica diagnóstica auxiliar, a maioria dos diagnósticos das lesões iniciais de MF dependem principalmente da correlação do histórico clínico e achados histopatológicos / Accurate diagnosis of early lesions of mycosis fungoides (MF) is difficult because of the varied clinical and histological patterns that may mimic other benign conditions. Data from 101 biopsies from 67 patients with lesions that seemed classical early MF registered between 1999 and 2010 were retrieved from the Department of Pathology at Botucatu Medical School - Sao Paulo State University. The male:female ratio = 2.6:1, age range17-103 years and mean age, 62.1 years. The diagnosis of MF was confirmed by correlation with clinical features, histopathology and immunohistochemistry technique. All MF patients presented patch and/or plaques corresponding the T1 and T2 disease staging, usually in non-exposed areas. Out of 67 patients analysed, 17 (25,5%) had the diagnosis of early MF histopathologically characterized by the main diagnostic criteria which are disproportionate epidermotropism, Pautrier’s microabscesses, linear arrangement distribution of lymphocytes and some degree of lymphocyte atypia. In 3 (4,5%) patients the diagnosis of MF did not have all the main histopathological criteria, but was also supported by CD3+, CD4+ and reduction of expression of CD8, CD7 and/ or CD2 and CD5, 15 (22,5%) cases remain suspicious for MF and 32 (47,5%) patients were ruled out as other diseases. Indeed, more than 47% were false positive for MF considering only the clinical aspects. Although immunohistochemistry may help, the majority of the diagnosis of early MF still rests upon clinical features and histopathological findings

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-12-07T14:22:53Z No. of bitstreams: 1 2012_AnaCamilaOliveiraSouza.pdf: 9707081 bytes, checksum: f668245bede41d667195b70bc7cc3cbe (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-12-10T10:11:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AnaCamilaOliveiraSouza.pdf: 9707081 bytes, checksum: f668245bede41d667195b70bc7cc3cbe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-10T10:11:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AnaCamilaOliveiraSouza.pdf: 9707081 bytes, checksum: f668245bede41d667195b70bc7cc3cbe (MD5) / O desenvolvimento de nanopartículas poliméricas tem se tornado uma importante estratégia para otimização da eficácia terapêutica de inúmeros fármacos, podendo ampliar sua atividade e reduzir sua toxicidade. A nanoestruturação da Anfotericina B (NANO-D-AMB), importante antifúngico usado no tratamento de algumas micoses sistêmicas, como a paracoccidioidomicose e a candidíase, apresentou eficácia no tratamento da paracoccidoidomicose (PCM) experimental, com atividade antifúngica similar à da anfotericina B deoxicolato (D-AMB) e possibilitando um menor número de aplicações. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi determinar a capacidade antifúngica e biocompatibilidade desta nova formulação in vitro, bem como comparar a eficácia terapêutica de diferentes doses de NANO-D-AMB com D-AMB e Ambisome® no combate a PCM murina. Para isso, determinou se in vitro a concentração mínima inibitória de NANO-D-AMB em leveduras de Paracoccidioides brasiliensis e avaliou-se sua capacidade hemolítica e citotóxica em macrófagos peritoniais. Realizou se também a infecção de camundongos BALB/c e posteriormente o tratamento com as nanopartículas em diferentes doses, D- AMB e Ambisome®. Foi observado que NANO-D-AMB apresentou eficácia antifúngica in vitro similar a Ambisome®, bem como menor indução de hemólise e menor citotoxicidade em comparação a D-AMB. Além disso, foi observada similar capacidade antifúngica in vivo em relação à D-AMB e Ambisome®, sem indução de alterações histológicas e nas funções renais e hepáticas, com a vantagem de permitir uma diminuição em 25% na quantidade de anfotericina B injetada. O tratamento com NANO-D-AMB e Ambisome® ajudaram a modular positivamente a resposta imunológica em favor do hospedeiro. Além disso, verificou-se que o uso de sobredoses não provocou toxicidade aguda. Juntos esses resultados sugerem NANO-D-AMB como uma alternativa ao uso de D-AMB e Ambisome®. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The development of polymeric nanoparticles has become an important strategy for optimizing the therapeutic efficacy of many drugs, as it may expand their activities and reduce their toxicity.- The nanostructuring of Amphotericin B (NANO-D-AMB), an important antifungal agent used to treat some systemic mycoses such as paracoccidioidomycosis and candidiasis, showed efficacy in treating experimental paracoccidoidomicose (PCM), with antifungal activity similar to that of amphotericin B deoxycholate (D-AMB) and allowing a fewer number of applications. In this context, the aim of this study was to determine the antifungal activity of this new formulation and its biocompatibility in vitro and to compare the efficacy of different doses of NANO-D-AMB between D-AMB and Ambisome® in combating murine PCM. For this, it was determined in vitro minimum inhibitory concentration of NANO-D-AMB in Paracoccidioides brasiliensis yeasts, and it was evaluated its hemolytic and cytotoxic activities in peritoneal macrophages. Also, BALB/c mice were infected and then treated with the nanoparticles in different doses, D-AMB and Ambisome®. It was observed that NANO-D-AMB exhibited in vitro antifungal efficacy similarly to Ambisome® and induced lower hemolysis and cytotoxicity compared to D-AMB. Moreover, it was observed similar in vivo antifungal capacity in relation to D-AMB and Ambisome® without inducing changes in renal and hepatic histology and function, with the advantage of a 25% decrease in the amount of amphotericin B injected. Treatment with NANO-D-AMB and Ambisome® helped to positively modulate the immune response in favor of the host. Furthermore, it was found that the use of overdoses did not cause acute toxicity. Together, these results suggest NANO-D-AMB as an alternative to the use of D-AMB and Ambisome®.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-03-04T12:17:39Z No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2013-03-06T14:00:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-06T14:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LuanaCastroOliveira.pdf: 2841384 bytes, checksum: 0632b4b2ba99fc494aa9ce5971604fd2 (MD5) / O fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica humana mais comum na América Latina. O local de contato inicial entre o fungo P. brasiliensis e o hospedeiro é o epitélio respiratório. A resistência do hospedeiro à PCM está associada à ativação de células fagocíticas ao longo da infecção. Os antifúngicos atualmente utilizados no combate à PCM apresentam desvantagens como a alta incidência de efeitos colaterais e o aumento de casos de resistência. A epigenética refere-se a modificações nos padrões de expressão gênica herdáveis ao longo de sucessivas divisões celulares ou de sucessivas gerações de um indivíduo, e que não envolvem mudanças na sequência de nucleotídeos do DNA. As principais marcas epigenéticas envolvem a metilação de citosinas em ilhas CpG no DNA e as modificações pós-traducionais de histonas. Drogas como a 5-aza-2’-deoxi-citidina (5-AZA, inibidor de DNA metiltransferases), tricostatina A (TSA) e butirato de sódio (BS, inibidores de histona desacetilases) vêm sendo empregadas para modular estados epigenéticos. Em fungos patogênicos como C. albicans e C. neoformans, a administração de moduladores epigenéticos levou a uma diminuição no crescimento e viabilidade das leveduras. No presente estudo, avaliamos os efeitos biológicos de 5-AZA, TSA e BS sobre leveduras de P. brasiliensis e sobre uma linhagem de macrófagos murinos. As mais altas concentrações de drogas que não interferiram no crescimento celular foram definidas como BS 1 mM, TSA 20 nM e 5-AZA 1 µM, para macrófagos J774, e BS 10 mM, TSA 1,5 µM e 5-AZA 2 µM para leveduras de P. brasiliensis. 5-AZA provocou um aumento do índice de internalização das leveduras pelas células J774 com 2h e 6h de infecção, enquanto BS provocou aumento em 2h e TSA não afetou esse índice. A análise do acúmulo de mensageiros de genes relacionados à resposta imune revelou uma diminuição dos níveis de transcritos de MyD88 em macrófagos tratados com BS, ao passo que 5-AZA elevou os níveis de transcritos desse adaptador. O acúmulo de transcritos NF-κB diminuiu quando os macrófagos foram infectados e tratados com 5-AZA e BS, enquanto TSA não teve efeito. O mensageiro de TNF-α, em macrófagos infectados tratados com 5-AZA, também teve aumento significativo de acúmulo, o que não aconteceu no tratamento com TSA ou BS. Os níveis do transcrito de IL-6 foram afetados apenas pela administração de TSA, que elevou o acúmulo dos mensageiros dessa interleucina. Nas culturas infectadas e tratadas com TSA observou-se uma diminuição do nível de TNF-α secretado, enquanto o tratamento com BS provocou um aumento dessa citocina no sobrenadante. Nossos dados indicam que alterações epigenéticas possam participar da regulação da resposta de fagócitos quando em contato com células fúngicas, e que mais de uma via de sinalização pode estar relacionada a essa resposta. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiologic agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent deep mycosis in Latin America. The first contact between the fungus and the host is the respiratory epithelium. The host resistance to PCM is related to the activation of phagocytic cells during the course of the infection. The antifungals used against PCM show many disadvantages, as high incidence of side effects and increasing fungal resistance. The term epigenetic refers to modifications in the genetic expression patterns, heritable through cell divisions or individuals generations, which do not implicate in changes in the sequence of nucleotides of the DNA. The main epigenetic marks are the cytosine methylation in DNA CpG islands and histones post-translational modifications. Drugs such as 5-aza-2’-deoxy-cytidine (5-AZA, methyltransferase inhibitor), trichostatin A (TSA) and sodium butyrate (SB, histone desacetylase inhibitors) have been used to modulate epigenetic states. In pathogenic fungi such as C. albicans and C. neoformans, the use of epigenetic modulators led to a lower growth rate and yeasts viability. In the present work we evaluated the biological effects of 5-AZA, TSA and SB on P. brasiliensis yeast cells and on a lineage of murine macrophages. The highest drug concentrations that did not affect cell growth were SB 1 mM, TSA 20 nM and 5-AZA 1 µM, to the macrophages, and SB 10 mM, TSA 1,5 µM and 5-AZA 2 µM, to P. brasiliensis yeast cells. 5-AZA induced a higher internalization yeasts index by the macrophages within 2h and 4h of infection, while SB had the same effect with 2h of infection and TSA did not affect this index. The transcripts accumulation analysis of genes related to the immune response showed a down modulation of the MyD88 transcript levels in macrophages treated with SB, whilst 5-AZA up regulated the transcript levels of this gene. The NF-κB transcript level was lower when macrophages were infected and treated with 5-AZA and SB, while TSA did not show any effect. TNF-α transcripts accumulation was also upregulated in macrophages infected and treated with 5-AZA, what was not observed with TSA or SB. IL-6 transcripts level was only affected by the TSA administration, which upregulated it. In cultures infected and treated with TSA, there was a lower level of secreted TNF-α, while SB had the opposite effect, increasing this cytokine in the supernatant. Our data indicate that epigenetic modifications can participate in the regulation of the phagocytes response to fungal cells and that alternative signaling pathway can be related to this answer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-13T15:57:01Z No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:53:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_FabianafreireMendesOliveira.pdf: 3550004 bytes, checksum: 479e0f87b52423d1bb6907da07bbdbdc (MD5) / O advento de pacientes portadores do HIV e de pacientes imunocomprometidos provocou um aumento na incidência de micoses fúngicas, como a criptococcose. Existem várias classes de antifúngicos disponíveis comercialmente para o tratamento dessas infecções que são utilizadas de acordo com a patologia e o patógeno. No entanto, são relatados casos de resistência a essas drogas e existe uma grande preocupação em relação aos efeitos adversos que elas podem causar nos pacientes. Nesse contexto, o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas poderia ser uma solução para a problemática atual das drogas disponíveis e isso requer o estudo de novos alvos moleculares. O gene ERG6 codifica a enzima esterol C-24 metiltransferase que atua na conversão de zimosterol em fecosterol. Constitui uma etapa que ocorre em fungos para a biossíntese do ergosterol, mas não ocorre nos hospedeiros animais, que possuem enzimas específicas para a conversão do zimosterol até colesterol. No presente trabalho, a função do gene ERG6 foi investigada e caracterizada no fungo Cryptococcus neoformans demonstrando que a ausência desse gene gera diversas alterações fenotípicas, tais como sensibilidade ao estresse osmótico, ao estresse oxidativo e maior susceptibilidade a diferentes drogas antifúngicas. Além disso, foi ainda observado que a capacidade de crescer em meios contento diferentes estressores de parede se mostra alterada. Em relação aos fatores de virulência conhecidos para C. neoformans, o fungo foi incapaz de crescer a temperatura de 37°C, porém não teve sua produção de cápsula ou melanina afetadas. No entanto, em testes para observação da sua capacidade de virulência in vitro utilizando macrófagos e in vivo com lagartas da espécie Galleria mellonella mostraram uma redução na virulência em mutantes de ERG6. Por fim a análise dos esteróis de membrana mostrou que ocorre uma alteração em toda a composição de esteróis da membrana celular. Dessa forma, por ser uma enzima encontrada principalmente em fungos, a Erg6 pode ser um alvo molecular potencial para drogas antifúngicas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The advent of HIV patients and immunocompromised patients caused an increase in the incidence of fungal mycoses, such as cryptococcosis. There are several antifungal agents commercially available for the treatment of such infections that are chosen based on the disease and the pathogen. However, cases of resistance are reported to these drugs and there is great concern about the adverse effects that they can cause on patients. In this context, the development of new antifungal drugs could be a solution to the current problem of the available drugs and it requires the study of potential molecular targets. The gene ERG6 encodes the sterol C-24 methyltransferase, an enzyme that acts on the conversion zimosterol in fecosterol. This is a step that occurs in fungi in the ergosterol biosynthesis, but does not occur in the animal hosts which have specific enzymes for the conversion of zymosterol to cholesterol. In this study, gene function of ERG6 was investigated and characterized in the Cryptococcus neoformans demonstrating the absence of this gene generates several phenotypic changes, such as sensitivity to osmotic stress, oxidative stress and increased susceptibility to different antifungal drugs. Furthermore, it was also observed that the ability to grow on media with different cell wall stressors was also altered. It was observed that the lack of ERG6 greatly affects the permeabillity of the membrane resulting in osmotic and oxidative stress sensitivity and changing antifungal drugs susceptibility. Furthermore, it was also observed that the ability to grow in medium with cell wall stressor was altered. About the virulence factor, C. neoformans was unable to grow at 37°C, but it had not affected the production of melanin or capsule. However, virulence tests in vitro with macrophages and in vivo with Galleria mellonella caterpillars showed a decrease in the virulence of ERG6 mutants. Finally, the membrane sterols analysis demonstrated a change in the membrane sterol composition. Thus, being an enzyme found especially fungi, the Erg6 may be a potential molecular target for antifungal drugs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-18T12:27:25Z No. of bitstreams: 1 2013_OrlandoOliveiradeMorais.pdf: 1490652 bytes, checksum: eb9ccafba25ed9aa4538da493fdd9221 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-19T12:49:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_OrlandoOliveiradeMorais.pdf: 1490652 bytes, checksum: eb9ccafba25ed9aa4538da493fdd9221 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-19T12:49:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_OrlandoOliveiradeMorais.pdf: 1490652 bytes, checksum: eb9ccafba25ed9aa4538da493fdd9221 (MD5) / Introdução: A onicomicose acomete cerca de 10% da população global, sendo desafiador seu manejo, já que o tratamento é prolongado, tem alto custo e apresenta risco de toxicidade sistêmica. Ainda, o diagnóstico da doença é dificultado pela baixa sensibilidade e acurácia dos exames. As altas taxas de falência terapêutica, recidiva e reinfecção são fatores diretamente ligados à baixa penetração e à dificuldade de manutenção de níveis adequados da droga no sítio da infecção. Por conseguinte, métodos diagnósticos mais acessíveis e de fácil execução, bem como, novas técnicas, instrumentos ou tecnologias que colaborem para a melhoria do tratamento são desejáveis. Objetivos: Avaliar o uso da dermatoscopia no diagnóstico da DSLO, através da análise da frequência dos sinais dermatoscópicos; e sobretudo, avaliar a eficácia do uso do LASER (Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation)de Er:YAG em associação ao esmalte de amorolfina a 5% no tratamento da onicomicose subungueal distal lateral (DSLO). Metodologia: Trata-se de estudo transversal descritivo da frequência dos sinais dermatoscópicos em casos de DSLO; e de ensaio clínico aberto, controlado e randomizado, visando o estudo da associação do LASER de Er:YAG com o esmalte de amorolfina 5% no tratamento de casos de DSLO. Pacientes com diagnóstico clínico e micológico de DSLO, por fungos dermatófitos, foram objetos dos estudos. Para o estudo transversal, achados/sinais dermatoscópicos de unidades ungueais com a doença foram categorizados e analisados quanto sua sensibilidade. Para o ensaio clínico, unidades ungueais foram agrupadas aos pares, quanto à similaridade de alterações patológicas, e então randomizadas para o grupo de intervenção (L+A) ou grupo controle (A), para receber sessão única de ablação fracionada com o LASER de Er:YAG e posterior aplicação semanal do esmalte de amorolfina 5% (L+A) ou apenas ao uso semanal do esmalte de amorolfina 5% (A). Ao final de 6 meses, as variáveis cura micológica, melhora clínica/dermatoscópica e cura global foram avaliadas através do teste exato de Liddell. Resultados: Nove pacientes do sexo feminino (idade, 54,6±10,6 anos) participaram do estudo, com um total de 46 unidades acometidas por DSLO. A avaliação dermatoscópica das unidades ungueais demostrou a onicólise (n=46, 100%), borda espiculada proximal à área de onicólise (n=42, 91,3%), hiperceratose subungueal (n=41, 89,1%), opacidades ungueais e discromias (n=40, 86,9%), descamação periungueal (n=34,73,9%) e estrias longitudinais (n=30, 65,2%) como os achados mais frequentes na DSLO. Quando aos achados do ensaio clínico, não houve diferença estatística nos índices de cura micológica (p>0,99), ou cura global (p=0,68) entre os grupos de intervenção (L+A) e o grupo controle (A). Conclusões: Os sinais dermatoscópicos foram de fácil identificação na DSLO usando magnificações convencionais (10X), e devem ter seus valores, nos diversos tipos de onicomicose, melhor determinados. Por outro lado, para a presente amostra e período de segmento de 6 meses, o LASER de Er:YAG não se mostrou efetivo no aumento da eficácia do tratamento tópico com esmalte de amorolfina 5%. Entretanto, o grande número de unidades ungueais com melhora clínica e avaliação micológica negativa, porém sem alcançar critérios de cura, aponta para a necessidade de estudos mais longos, visando excluir a interferência da baixa velocidade de crescimento das unhas na análise das variáveis. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Background: Onychomycosis affects about 10% of the population around the world. It presents a challenging management given its long-term and expansive treatment. The diagnosis is often difficult due to the low sensibility and accuracy of the widely available tests. Otherwise, high rates of failure regarding treatment, relapses and reinfection, seem to be closely linked to the low penetration of drugs to the nail plate, as well as, to the difficulty in keeping effective drug concentration on infection site. Thereby, new tests, more accessible and effective, and also new techniques, instruments or technologies which could enhance therapeutic success are willing.Objectives: To evaluate the value of onychoscopy in the diagnosis of DSLO, by means of the frequency of dermoscopic finds; and specially,to evaluate the use of Er:YAGLASER(Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation) in association with 5% amorolfine nail lacquer in the treatment of subungual distal lateral type onychomycosis (DSLO).Patients and Methods: Both a transversal descriptive study, about the frequency of dermoscopic finds in DSLO, and an opened, controlled and randomized clinical trial, aimed at evaluating the combination of Er:YAGLASER plus amorolfine nail lacquer in the treatment of DSLO, have been developed. Patients with clinical diagnosis of DSLO, caused by dermatophyteswere recruited to the study. A transversal evaluation involved the analysisof dermoscopic findsin ungual units with DSLO, by means of its sensibility on disease diagnosis. The clinical trial required ungual units with DSLO to be grouped in pairs, in accordance with damage grades. Nails were then randomized into one of study groups, in which the L+A group (investigation) was submitted to a single session of Er:YAG fractionated ablation of affected area, followed by weekly use of 5% amorolfine nail lacquer, and the A group (control) received only weekly application of amorolfine. After 6 months follow-up, ungual units were tested for micologycal cure, clinical and dermoscopic improvement and global cure, being pair-matched data analyzed by Liddell’s exact test. Results: Nine female patients with mean age of 54,6±10,6 years with a total of 46 ungual units with DSLO were studied. Dermoscopic exam of nails showed onycholysis (n=46, 100%), “spikes” signal (n=42, 91,3%), subungual hyperkeratosis (n=41, 89.1%), discoloration/ungual opacities (n=40, 84.5%), perungual desquamation (n=34, 73.9%) and longitudinal streaks (n=30, 65,2%) as the main signs found in DSLO. On the other hand, results from clinical trial did not show statistical differences regarding mycological cure (p>0,99) or global cure (p=0,68) between L+A or A groups. Conclusions: Dermoscopic signs were of easy identification in DSLO using regular magnification (10X), although their role in the diagnosis of different types of onychomycosis must be better determined. On the other hand, assuming the sample studied and the follow-up period of 6 months, Er:YAG LASER did not show to improve the efficacy provided by topical treatment with 5% amorolfine nail lacquer in cases of DLSO. Although, the great number of nails which reached mycological cure and also showed at least partial improvementpoints out to the possibility of bias effect of slowly growing nails on the results of global cure analysis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:12:46Z No. of bitstreams: 1 2006_MariaVitoriaSilvaCampos.pdf: 12681874 bytes, checksum: 98c4647a99eb0f2f236684b926c404ea (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:13:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_MariaVitoriaSilvaCampos.pdf: 12681874 bytes, checksum: 98c4647a99eb0f2f236684b926c404ea (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-24T14:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_MariaVitoriaSilvaCampos.pdf: 12681874 bytes, checksum: 98c4647a99eb0f2f236684b926c404ea (MD5) / A paracoccidioidomicose é a micose sistêmica mais importante no Brasil, apresentando morbidade relacionada à atividade da doença e às possíveis seqüelas. É a oitava causa de óbito por doenças infecto-parasitárias crônicas no país. A pandemia da infecção pelo HIV / aids tem modificado o perfil de várias doenças infecciosas, entre as quais possivelmente a paracoccidioidomicose. Essa série de casos avaliou as características clínico-epidemiológicas dos pacientes com paracoccidioidomicose e a co-infecção paracoccidioidomicose HIV / aids, assistidos no Hospital Universitário de Brasília, no período entre 1984 e 2005. Foram estudados 76 pacientes com paracoccidioidomicose, dos quais cinco apresentavam a co-infecção pelo HIV / aids. O gênero masculino representou 82,89% dos pacientes (p<0,0001). A média de idade foi 42 anos e a mediana foi 43,5 anos (DP: 15,25). O sistema pulmonar e a mucosa orofaríngea foram comprometidos na mesma freqüência, 55,26%, predominando nas formas crônicas (p=0,0005 e p<0,0001, respectivamente). O comprometimento linfonodal ocorreu em 42,11% dos pacientes, predominando nas formas agudas ou subagudas (p=0,0002). A frequência de lesões laríngeas foi 19,74% e de lesões cutâneas 21,05%. O comprometimento intra-abdominal ocorreu em 57,9% e 7,02% das formas agudas ou subagudas e crônicas, respectivamente. A adenomegalia mediastinal com aspecto tumoral foi observada em 4 pacientes. A forma aguda ou subaguda representou 22,54% dos 71 pacientes sem co-infecção pelo HIV / aids. As formas graves, moderadas e leves da paracoccidioidomicose representaram, respectivamente, 68,42%, 26,32% e 5,26% dos pacientes com a forma aguda ou subaguda. Considerando-se a forma crônica, as formas graves, moderadas e leves corresponderam a 7,08%, 52,63% e 40,35% dos pacientes, respectivamente. Os pacientes não procedentes do Distrito Federal corresponderam a 57,33% da população estudada. Houve casos de paracoccidioidomicose provavelmente autóctones do Distrito Federal, a julgar pelos dados epidemiológicos. Atividade agrária atual ou pregressa foi relatada por 54,93% de 71 pacientes. O tabagismo (87,04%) e etilismo (55,32%) foram freqüentes entre os pacientes com a forma crônica para os quais dispúnhamos dessas informações. 27,63% dos pacientes apresentaram paracoccidioidomicose recidivante. O exame sorológico para o HIV foi realizado em 34,21% dos pacientes. Dos cinco pacientes com a co-infecção pelo HIV / aids quatro eram do gênero masculino. Os três pacientes com a forma aguda ou subaguda da paracoccidioidomicose (dois homens e uma mulher) apresentaram a forma disseminada da doença, imunodepressão acentuada e outras co-morbidades relacionadas à aids, tendo evoluído para o óbito. Os dois pacientes com a forma crônica da paracoccidioidomicose evoluíram com aumento da contagem de linfócitos CD4 e apresentaram boa resposta ao tratamento da paracoccidioidomicose e das infecções oportunistas associadas. É necessário manter a atenção para a possibilidade do diagnóstico da paracoccidioidomicose, entre pacientes imunocompetentes e deprimidos. Os casos de co-infecção paracoccidioidomicose HIV / aids devem ser relatados, a fim de se avaliar a real magnitude e as características dessa condição. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioidomycosis is the most important deep mycosis in Brazil. It's morbidity is related to the disease´s activity and to possible sequelae. It's the eighth most common cause of death through chronic infectious and parasitic diseases. Human immunodeficiency virus infection and aids have modified the behavior of other infectious diseases – maybe this is true for paracoccidioidomycosis. This study analyzed clinical and epidemiologic characteristics of paracoccidioidomycosis and paracoccidioidomycosis associated to HIV / aids patients, admitted to the University Hospital of Brasília, from 1984 to 2005. 76 patients with paracoccidioidomycosis were studied, of whom five presented the co-infection by HIV / aids. Male gender represented 82,89% of patients (p<0,0001). The average age was 42 years and median was 43,5 years (SD = 15,25). Lung and oral mucous membrane involvement were found in similar frequency (55,26%), and were more common in chronic forms (p=0,0005 and p<0,0001, respectively). Lymph node involvement was verified in 42,11% of patients, being more prevalent in acute or subacute forms (p=0,0002). Laryngeal lesions were observed in 19,74% and cutaneous lesions in 21,05%. Intraabdominal lesions were observed in 57,9% and 7,02% of patients of acute or subacute and chronic forms, respectively. Tumoral form of hilar adenopathy was seen in four patients. 22,53% of 71 patients (without co-infection with HIV / aids) belonged to acute or subacute form of paracoccidioidomycosis. Severe, moderate and mild forms of paracoccidioidomycosis accounted for 68,42%, 26,32% and 5,26% of acute or subacute form patients. In respect to chronic form, severe, moderate and mild forms represented 7,08%, 52,63% and 40,35% of patients. Patients that do not proceed from Distrito Federal accounted for 57,33% of studied population. Some cases of paracoccidioidomycosis were probably autochthonous from Distrito Federal, according to epidemiologic data. Engagement in rural activities (54,93%), tobacco (87,04%) and alcohol (55,32%) consumption were frequent in those patients whose data were available. Paracoccidioidomycosis was recurrent in 27,63% of patients. Sorologic testing for HIV was performed in 34,21% of patients. Paracoccidioidomycosis was associated with HIV infection / aids in five patients, and four of them were men. The three patients with acute or subacute form (two men and one woman) had the disseminated disease and pronounced immunosuppression, besides other morbidities commonly related to aids, and evolved to death. The two patients with chronic 112 form of paracoccidioidomycosis improved after paracoccidioidomycosis and opportunistc infections treatment, and accomplished higher CD4 values. It is necessary to be aware of diagnosis of paracoccidioidomycosis, when considering immunocompetent and immunocompromised patients. Paracoccidioidomycosis HIV / aids association must be reported, in order to better understand it's magnitude and features.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4610_1.pdf: 16316273 bytes, checksum: cdccee6ebd0be741750929d4ca90d8c2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pacientes imunodeprimidos são susceptíveis a infecções fúngicas. A patogênese e conseqüência das micoses oportunistas dependem dos fatores de virulência das espécies e da habilidade de sobrepor os sistemas de defesa do hospedeiro e danificar os tecidos. Atividade proteásica contribui para esta patogênese. Novos agentes antifúngicos precisam ser testados para o tratamento das micoses mais resistentes, tais como iturina-A, um peptidolipídio extraído do Bacillus subtilis. O objetivo desta pesquisa foi detectar micoses oportunistas em imunodeprimidos, determinar a atividade proteásica e o perfil antifúngico de iturina-A frente aos agentes etiológicos. Diferentes amostras clínicas foram investigadas incluindo escamas epidérmicas, esputo, fezes, urina, lavado broncoalveolar, sangue e fragmentos de tecidos. Soro de albumina bovina (BSA), caseína e gelatina foram os substratos testados para atividade proteásica. O teste de susceptibilidade foi desenvolvido utilizando-se iturina-A em três concentrações diferentes. Trinta e cinco isolados foram obtidos incluindo as espécies: Candida albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. guilliermondii, Trichosporon cutaneum; Paracoccidioides brasiliensis, Fusarium verticilioides, F. solani, Aspergillus fumigatus, Trichophyton rubrum, Microsporum gypseum e Engyodontium album (patógeno emergente). Produção de protease foi demonstrada em vinte e sete isolados com melhores resultados evidenciados em BSA, especialmente com as espécies de Candida. Os isolados de leveduras foram sensíveis a iturina-A apenas na concentração testada mais alta (7,7mg/mL) e o perfil de susceptibilidade dos fungos filamentosos variaram entre as espécies. P. brasiliensis apresentou os melhores resultados, sendo susceptível nas três concentrações testadas

Submitted by Aline Chiodi Borges null (aline.borges@ict.unesp.br) on 2017-02-01T12:59:00Z No. of bitstreams: 1 TESE Aline Chiodi Borges.pdf: 2538445 bytes, checksum: b94b3366c29227ee5a2e026711c63088 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-03T19:27:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_ac_dr_sjc.pdf: 2538445 bytes, checksum: b94b3366c29227ee5a2e026711c63088 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T19:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_ac_dr_sjc.pdf: 2538445 bytes, checksum: b94b3366c29227ee5a2e026711c63088 (MD5) Previous issue date: 2016-12-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As doenças fúngicas representam grande desafio para a área médica e odontológica devido à crescente prevalência e aumento da resistência aos antifúngicos. O plasma frio sob pressão atmosférica (PFPA) é uma mistura gasosa contendo partículas carregadas, radicais livres e radiação. Sua potencial aplicação em doenças infecciosas foi relatada, contudo a literatura carece de estudo sistemático sobre o efeito antifúngico, mecanismos de ação e potencial citotóxico. Neste trabalho foi avaliado o efeito antifúngico do PFPA sobre Candida albicans através de ensaios em células planctônicas e biofilmes, efeitos sobre a integridade de parede celular e membrana plasmática, morfogênese, produção de exoenzimas, aderência às células epiteliais e efeito no tratamento in vivo de lesões de candidose oral induzida em modelo murino. Ainda, avaliou-se o efeito do PFPA sobre culturas de Trichophyton rubrum, além de efeitos sobre capacidade de adesão de conídios. Ainda, o potencial citotóxico foi investigado usando células epiteliais. PFPA em modo de tensão contínuo (MC) foi capaz de reduzir a aderência de C. albicans às células epiteliais, modular a transição levedura-hifa na cepa SC 5314 e comprometer a viabilidade de biofilmes. PFPA-MC se mostrou citotóxico em parâmetros efetivos frente a biofilmes de C. albicans. Porém, não foi observado efeito citotóxico quando o PFPA foi utilizado em modo de tensão pulsada (MP). A exposição ao PFPA-MP reduziu a invasão de C. albicans no epitélio in vivo. O PFPA-MP foi capaz de afetar o crescimento de T. rubrum a partir de 10 minutos e de afetar a sua capacidade de aderência. Assim, conclui-se que PFPA apresenta efeito antifúngico contra C. albicans e T. rubrum e é capaz de interferir em fatores de virulência de ambos os micro-organismos. / Fungal diseases represent a great challenge to the medical and dental areas, due to the increasing prevalence and antifungal resistance. Atmospheric pressure plasma jet (APPJ) is a gaseous mixture containing charged particles, free radicals and radiation. Its potential application in infectious disease has been reported, however there is still a lack of a systematic study on the antifungal effect, mechanism of action and citotoxicc potential. The general aim of this project was to evaluate the antifungal effect of APPJ on Candida albicans in planktonic and biofilm cultures, effects on cell wall and cell membrane integrity, morphogenesis, exoenzymes production, adherence to epithelial cells and in vivo effect in the treatment of oral candidosis in murine model will be performed. The effect of APPJ on Trichophyton rubrum cultures and on adherence capability were also evaluated. The cytotoxic potential was evaluated in vitro. APPJ in continuous tension mode (CM) was able to reduce the adherence and yeast-hyphae transition in C. albicans SC 5314 and to decrease biofilm viability. APPJ-CM showed cytotoxic effect in the parameters effective to C. albicans biofilm. Conversely, no cytotoxic effect on epithelial cells were observed when pulsed (PM) plasma jet was used. In vivo tests showed that APPJ-PM was able to prevent C. albicans invasion to the epithelium. T. rubrum cultures were affectd by APPJ-PM after 15 minutes of exposure and conidia adherence was impaired by 10 minutes exposure. In conclusion, APPJ showed antifungal effect against C. albicans and T. rubrum and can also impair virulence factors in both microorganisms. / FAPESP: 2014/02354-7