Triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) conhecidos no Brasil como “barbeiros” são os vetores do flagelado Trypanosoma cruzi, o parasita causador da doença de Chagas, uma das mais importantes doenças parasitárias no continente americano. O estudo da microbiota intestinal dos triatomíneos tem ganhado relevância nos últimos anos dado seu papel potencial em modular a competência vetorial, além do uso de bactérias modificadas geneticamente para inibir o desenvolvimento do inseto ou do parasita. Porém, para um uso prospectivo em estratégias de controle, se requer um bom conhecimento da interação vetor-microbiota-parasita, incluindo a composição da microbiota, rotas de transmissão e a resposta a infecção com T. cruzi. Para responder estas perguntas, neste trabalho foi amostrada a microbiota intestinal de insetos criados em colônias de laboratório de seis espécies representativas dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, usando sequenciamento em larga escala de um fragmento do gene ribossomal 16S. Nosso estudo compara insetos desafiados experimentalmente contra T. cruzi e controles não desafiados, bem como amostras obtidas de intestino e gônadas. Nossos resultados demostram que a microbiota intestinal de triatomíneos tem uma baixa diversidade dentro de indivíduos, pode ser transmitida horizontal ou tanto vertical como horizontalmente, e é altamente variável na sua composição taxonômica dentro de uma mesma espécie de hospedeiro. No entanto, as espécies bacterianas da microbiota padrão são principalmente restritas a Enterobacteriales e Corynebacteriales. Nossos resultados sugerem que desafio com T. cruzi influencia a composição da microbiota de acordo com a susceptibilidade do vetor: nas espécies com infecção não detectável, ela é variável entre os grupo desafiado e o controle, mas nas espécies com infecção detectável, ela permanece em sua maioria sem mudanças. Nossas observações são discutidas à luz do nosso conhecimento sobre a resposta imune do inseto e sobre a capacidade do parasita de modulá-la. Nós consideramos que, embora a diversidade da microbiota ser altamente variável entre espécies e indivíduos, grupos taxonômicos-chave definem a microbiota padrão intestinal dos triatomíneos, permitindo-nos explorar o papel dos simbiontes na nutrição e defesa do hospedeiro. Finalmente, nós sugerimos caminhos através dos quais novas pesquisas sobre a regulação fisiológica dos triatomíneos pela microbiota intestinal podem ser realizados a fim de avaliar a sua resposta posterior contra T. cruzi e ser usada como indicador de susceptibilidade dos insetos à infecção pelo o parasita. / Triatomine bugs (Hemiptera: Reduviidae) known in Brazil as “barbeiros” are the vectors of flagellate Trypanosoma cruzi, the causative agent of the Chagas disease, one of the most important parasitic diseases in the American continent. The study of triatomine gut microbiota has gained relevance in the last years given its potential role to modulate vector competence, besides the use of genetically modified bacteria to inhibit the development of either insects or parasites. However, for a prospective use in control strategies, a good understanding of the vector-microbiota-parasite interactions is required, including microbiota composition, its transmission routes, and its responses to T. cruzi infection. To answer these questions, we sampled the gut microbiota of colony-reared insects of six representative species of the genera Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus, using high throughput sequencing of a fragment of the ribosomal gene 16S. Our study compares experimental T. cruzi-challenged and non-challenged control individuals, as well as samples obtained from guts and gonads. Our results demonstrate that the triatomine gut microbiota has a low intra-individual diversity, is either horizontally or both horizontally and vertically transmissible, and is highly variable in its taxonomic composition within the same host species. Nevertheless, bacterial species of the core microbiota are mostly restricted to Enterobacteriales and Corynebacteriales. T. cruzi-challenge seems to influence microbiota composition according to vector susceptibility: in species with non-detectable infection, it is variable between experimentally challenged and non-challenged vectors, while in species with detectable infection, the microbiota remains mostly undisturbed. This latter observation is discussed in the light of insect immune responses and the parasite capacity of modulating it. We consider that, although the microbiota diversity is highly variable between species and individuals, key taxonomic groups define the core triatomine gut microbiota, allowing us to explore their symbiotic role in host nutrition and defense. Finally, we suggest avenues through which new research on triatomine physiological regulation of gut microbiota could be conducted in order to evaluate its subsequent response to T. cruzi and be used as indicator of infection susceptibility to the parasite.

Triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) conhecidos no Brasil como “barbeiros” são os vetores do flagelado Trypanosoma cruzi, o parasita causador da doença de Chagas, uma das mais importantes doenças parasitárias no continente americano. O estudo da microbiota intestinal dos triatomíneos tem ganhado relevância nos últimos anos dado seu papel potencial em modular a competência vetorial, além do uso de bactérias modificadas geneticamente para inibir o desenvolvimento do inseto ou do parasita. Porém, para um uso prospectivo em estratégias de controle, se requer um bom conhecimento da interação vetor-microbiota-parasita, incluindo a composição da microbiota, rotas de transmissão e a resposta a infecção com T. cruzi. Para responder estas perguntas, neste trabalho foi amostrada a microbiota intestinal de insetos criados em colônias de laboratório de seis espécies representativas dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, usando sequenciamento em larga escala de um fragmento do gene ribossomal 16S. Nosso estudo compara insetos desafiados experimentalmente contra T. cruzi e controles não desafiados, bem como amostras obtidas de intestino e gônadas. Nossos resultados demostram que a microbiota intestinal de triatomíneos tem uma baixa diversidade dentro de indivíduos, pode ser transmitida horizontal ou tanto vertical como horizontalmente, e é altamente variável na sua composição taxonômica dentro de uma mesma espécie de hospedeiro. No entanto, as espécies bacterianas da microbiota padrão são principalmente restritas a Enterobacteriales e Corynebacteriales. Nossos resultados sugerem que desafio com T. cruzi influencia a composição da microbiota de acordo com a susceptibilidade do vetor: nas espécies com infecção não detectável, ela é variável entre os grupo desafiado e o controle, mas nas espécies com infecção detectável, ela permanece em sua maioria sem mudanças. Nossas observações são discutidas à luz do nosso conhecimento sobre a resposta imune do inseto e sobre a capacidade do parasita de modulá-la. Nós consideramos que, embora a diversidade da microbiota ser altamente variável entre espécies e indivíduos, grupos taxonômicos-chave definem a microbiota padrão intestinal dos triatomíneos, permitindo-nos explorar o papel dos simbiontes na nutrição e defesa do hospedeiro. Finalmente, nós sugerimos caminhos através dos quais novas pesquisas sobre a regulação fisiológica dos triatomíneos pela microbiota intestinal podem ser realizados a fim de avaliar a sua resposta posterior contra T. cruzi e ser usada como indicador de susceptibilidade dos insetos à infecção pelo o parasita. / Triatomine bugs (Hemiptera: Reduviidae) known in Brazil as “barbeiros” are the vectors of flagellate Trypanosoma cruzi, the causative agent of the Chagas disease, one of the most important parasitic diseases in the American continent. The study of triatomine gut microbiota has gained relevance in the last years given its potential role to modulate vector competence, besides the use of genetically modified bacteria to inhibit the development of either insects or parasites. However, for a prospective use in control strategies, a good understanding of the vector-microbiota-parasite interactions is required, including microbiota composition, its transmission routes, and its responses to T. cruzi infection. To answer these questions, we sampled the gut microbiota of colony-reared insects of six representative species of the genera Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus, using high throughput sequencing of a fragment of the ribosomal gene 16S. Our study compares experimental T. cruzi-challenged and non-challenged control individuals, as well as samples obtained from guts and gonads. Our results demonstrate that the triatomine gut microbiota has a low intra-individual diversity, is either horizontally or both horizontally and vertically transmissible, and is highly variable in its taxonomic composition within the same host species. Nevertheless, bacterial species of the core microbiota are mostly restricted to Enterobacteriales and Corynebacteriales. T. cruzi-challenge seems to influence microbiota composition according to vector susceptibility: in species with non-detectable infection, it is variable between experimentally challenged and non-challenged vectors, while in species with detectable infection, the microbiota remains mostly undisturbed. This latter observation is discussed in the light of insect immune responses and the parasite capacity of modulating it. We consider that, although the microbiota diversity is highly variable between species and individuals, key taxonomic groups define the core triatomine gut microbiota, allowing us to explore their symbiotic role in host nutrition and defense. Finally, we suggest avenues through which new research on triatomine physiological regulation of gut microbiota could be conducted in order to evaluate its subsequent response to T. cruzi and be used as indicator of infection susceptibility to the parasite.

Triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) conhecidos no Brasil como “barbeiros” são os vetores do flagelado Trypanosoma cruzi, o parasita causador da doença de Chagas, uma das mais importantes doenças parasitárias no continente americano. O estudo da microbiota intestinal dos triatomíneos tem ganhado relevância nos últimos anos dado seu papel potencial em modular a competência vetorial, além do uso de bactérias modificadas geneticamente para inibir o desenvolvimento do inseto ou do parasita. Porém, para um uso prospectivo em estratégias de controle, se requer um bom conhecimento da interação vetor-microbiota-parasita, incluindo a composição da microbiota, rotas de transmissão e a resposta a infecção com T. cruzi. Para responder estas perguntas, neste trabalho foi amostrada a microbiota intestinal de insetos criados em colônias de laboratório de seis espécies representativas dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, usando sequenciamento em larga escala de um fragmento do gene ribossomal 16S. Nosso estudo compara insetos desafiados experimentalmente contra T. cruzi e controles não desafiados, bem como amostras obtidas de intestino e gônadas. Nossos resultados demostram que a microbiota intestinal de triatomíneos tem uma baixa diversidade dentro de indivíduos, pode ser transmitida horizontal ou tanto vertical como horizontalmente, e é altamente variável na sua composição taxonômica dentro de uma mesma espécie de hospedeiro. No entanto, as espécies bacterianas da microbiota padrão são principalmente restritas a Enterobacteriales e Corynebacteriales. Nossos resultados sugerem que desafio com T. cruzi influencia a composição da microbiota de acordo com a susceptibilidade do vetor: nas espécies com infecção não detectável, ela é variável entre os grupo desafiado e o controle, mas nas espécies com infecção detectável, ela permanece em sua maioria sem mudanças. Nossas observações são discutidas à luz do nosso conhecimento sobre a resposta imune do inseto e sobre a capacidade do parasita de modulá-la. Nós consideramos que, embora a diversidade da microbiota ser altamente variável entre espécies e indivíduos, grupos taxonômicos-chave definem a microbiota padrão intestinal dos triatomíneos, permitindo-nos explorar o papel dos simbiontes na nutrição e defesa do hospedeiro. Finalmente, nós sugerimos caminhos através dos quais novas pesquisas sobre a regulação fisiológica dos triatomíneos pela microbiota intestinal podem ser realizados a fim de avaliar a sua resposta posterior contra T. cruzi e ser usada como indicador de susceptibilidade dos insetos à infecção pelo o parasita. / Triatomine bugs (Hemiptera: Reduviidae) known in Brazil as “barbeiros” are the vectors of flagellate Trypanosoma cruzi, the causative agent of the Chagas disease, one of the most important parasitic diseases in the American continent. The study of triatomine gut microbiota has gained relevance in the last years given its potential role to modulate vector competence, besides the use of genetically modified bacteria to inhibit the development of either insects or parasites. However, for a prospective use in control strategies, a good understanding of the vector-microbiota-parasite interactions is required, including microbiota composition, its transmission routes, and its responses to T. cruzi infection. To answer these questions, we sampled the gut microbiota of colony-reared insects of six representative species of the genera Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus, using high throughput sequencing of a fragment of the ribosomal gene 16S. Our study compares experimental T. cruzi-challenged and non-challenged control individuals, as well as samples obtained from guts and gonads. Our results demonstrate that the triatomine gut microbiota has a low intra-individual diversity, is either horizontally or both horizontally and vertically transmissible, and is highly variable in its taxonomic composition within the same host species. Nevertheless, bacterial species of the core microbiota are mostly restricted to Enterobacteriales and Corynebacteriales. T. cruzi-challenge seems to influence microbiota composition according to vector susceptibility: in species with non-detectable infection, it is variable between experimentally challenged and non-challenged vectors, while in species with detectable infection, the microbiota remains mostly undisturbed. This latter observation is discussed in the light of insect immune responses and the parasite capacity of modulating it. We consider that, although the microbiota diversity is highly variable between species and individuals, key taxonomic groups define the core triatomine gut microbiota, allowing us to explore their symbiotic role in host nutrition and defense. Finally, we suggest avenues through which new research on triatomine physiological regulation of gut microbiota could be conducted in order to evaluate its subsequent response to T. cruzi and be used as indicator of infection susceptibility to the parasite.

La obesidad es un problema de salud a nivel mundial que incrementa el riesgo de sufrir un amplio rango de comorbilidades, incluyendo la diabetes tipo II y las enfermedades cardiovasculares. Debido a estos motivos, es necesario encontrar estrategias para reducir la obesidad y sus co-morbilidades y que puedan ser implementadas en los sistemas de salud públicos. El objetivo general de la tesis ha sido avanzar en el conocimiento de la influencia de la composición y funciones de la microbiota intestinal y su genoma (microbioma) en la obesidad y alteraciones metabólicas asociadas e identificar bacterias intestinales que, junto a cambios en la dieta, puedan contribuir a establecer estrategias de intervención más eficaces para controlar estos desórdenes. El capítulo primero de la tesis se centra en el estudio de la seguridad y habilidad para metabolizar distintas fuentes de fibra de Bacteroides uniformis CECT 7771. Para ello, hemos llevado a cabo la secuenciación del genoma y el análisis del transcriptoma de la bacteria en respuesta a diferentes fuentes de carbono. Se ha observado que B. uniformis CECT7771 es capaz de fermentar todos los sustratos evaluados y crecer más rápido en presencia de aquellas fuentes de carbono de estructura más sencilla (salvado de trigo rico en arabinoxilanos (AXOS) y glucosa). Además, B.uniformis CECT 7771 posee la capacidad de degradar los O-glicanos de la mucina y producir butirato y disminuir la producción de ácidos grasos de cadena larga y proteínas transportadoras de acilo (ACPs), implicados en la síntesis de lipopolisacárido (LPS) bacteriano causante de endotoxemia. Cuando crece en presencia de pectina, B. uniformis CECT 7771 incrementa la producción y secreción de GABA, lo cual podría tener un impacto en el eje intestino-cerebro. B. uniformis CECT 7771 no ha mostrado signos de toxicidad o patogenicidad tras el análisis exhaustivo de los genes codificados en su genoma, ni tras su administración por vía oral en un modelo de toxicidad sub-crónica en ratas. En este modelo, la bacteria produce un perfil de citocinas anti-inflamatorio comparado con el grupo placebo y muestra un efecto dosis-dependiente en la disminución de los valores de la alanina aminotransferasa (ALT), sugiriendo un efecto hepato-protector. En el segundo capítulo de la tesis se ha llevado a cabo un estudio de intervención en humanos con sobrepeso y síndrome metabólico en el que se evaluó, en un primer lugar, los efectos de la suplementación dietética con fibras enriquecidas en AXOS y ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) durante 4 semanas en la composición de la microbiota intestinal y en los parámetros bioquímicos. Los resultados demuestran que la ingesta de AXOS modifica la microbiota, ejerciendo un efecto bifidogénico y un aumento de especies bacterianas productoras de butirato, aunque no hemos visto una mejora en los parámetros bioquímicos analizados. En el caso de la intervención con PUFAs, no hemos detectado cambios en la composición de la microbiota ni en los parámetros bioquímicos evaluados. En segundo lugar, hemos llevado a cabo un estudio multi-ómico en un subgrupo de sujetos de la intervención con AXOS a fin de profundizar en los efectos de este tipo de fibra. El análisis metagenómico nos ha permitido identificar cambios en la configuración de la microbiota intestinal, incluyendo un aumento de Ruminococcus gnavus y Prevotella spp. así como una disminución de Parabacteroides, Paraprevotella y Rikenella. También hemos detectado un incremento de metagenes implicados en la producción de tetrahidrofolato y derivados del ácido fólico, los cuales llevan a cabo una función protectora frente a la hiperhomocisteinemia; la vitamina K2, implicada en la correcta absorción del calcio; y el GABA, cuya baja concentración en el organismo se asocia a estados de ansiedad y desbalance energético y que favorece la secreción de insulina y regula los niveles de ceramidas en plasma. / L'obesitat és un problema de salut a nivell mundial que incrementa el risc de patir un ampli rang de comorbilitats, incloent la diabetis tipus II i les malalties cardiovasculars. A causa d'estos motius, és necessari trobar estratègies per a reduir l'obesitat i les seues co-morbiditats i que puguen ser implementades en els sistemes de salut públics. L'objectiu general de la tesi ha sigut avançar en el coneixement de la influència de la composició i funcions de la microbiota intestinal i el seu genoma (microbioma) en l'obesitat i alteracions metabóliques associades i identificar bacteris intestinals que, junt amb canvis en la dieta, puguen contribuir a establir estratègies d'intervenció més eficaços per a controlar estos desordes. El capítol primer de la tesi es centra en l'estudi de la seguretat i habilitat per a metabolitzar distintes fonts de fibra de Bacteroides uniformis CECT 7771. Per a això, hem dut a terme la seqüenciació del genoma i l'anàlisi del transcriptoma del bacteri en resposta a diferents fonts de carboni. S'ha observat que B. uniformis CECT7771 és capaç de fermentar tots els substrats avaluats i créixer més ràpid en presència d'aquelles fonts de carboni d'estructura més senzilla (segó de blat ric en arabinoxilans (AXOS) i glucosa). A més, B.uniformis CECT 7771 posseïx la capacitat de degradar els O-glicans de la mucina i produir butirat i disminuir la producció d'àcids grassos de cadena llarga i proteïnes transportadores d'acil (ACPs), implicades en la síntesi de lipopolisacárid (LPS) bacterià causant d'endotoxemia. Quan creix en presència de pectina, B. uniformis CECT 7771 incrementa la producció i secreció de GABA, la qual cosa podria tindre un impacte en l'eix intestí-cervell. B. uniformis CECT 7771 no ha mostrat signes de toxicitat o patogenicidad després de l'anàlisi exhaustiva dels gens codificats en el seu genoma, ni després de la seua administració per via oral en un model de toxicitat subcrònica en rates. En este model, el bacteri produïx un perfil de citoquines antiinflamatori comparat amb el grup placebo i mostra un efecte dosi- dependent en la disminució dels valors de l'alanino aminotransferasa (ALT) , suggerint un efecte hepato-protector. En el segon capítol de la tesi s'ha dut a terme un estudi d'intervenció en humans amb sobrecàrrega i síndrome metabòlica en què es va avaluar, en un primer lloc, els efectes de la suplementació dietètica amb fibres enriquides en AXOS i àcids grassos poliinsaturats (PUFAs) durant 4 setmanes en la composició de la microbiota intestinal i en els paràmetres bioquímics (mesures antropomètriques, metabolisme de glucosa, perfil lipídic, marcadors d'inflamació, etc.). Els resultats demostren que la ingesta d'AXOS modifica la microbiota, exercint un efecte bifidogénic i un augment d'espècies bacterianes productores de butirat, encara que no hem vist una millora en els paràmetres bioquímics analitzats. En el cas de la intervenció amb PUFAs, no hem detectat canvis en la composició de la microbiota ni en els paràmetres bioquímics avaluats. En segon lloc, hem dut a terme un estudi multi-ómic en un subgrup de subjectes de la intervenció amb AXOS a fi d'aprofundir en els efectes d'este tipus de fibra. L'anàlisi metagenómic ens ha permés identificar canvis en la configuració de la microbiota intestinal, incloent un augment de Ruminococcus gnavus i Prevotella spp. així com una disminució de Parabacteroides, Paraprevotella i Rikenella. També hem detectat un increment de metagens implicats en la producció de tetrahidrofolat i derivats de l'àcid fòlic, els quals duen a terme una funció protectora enfront de l'hiperhomocisteinemia; la vitamina K2, implicada en la correcta absorció del calci; i el GABA, la baixa concentració del qual en l'organisme s'associa a estats d'ansietat i desbalanç energètic i que afavorix la secreció d'insulina i regula els nivells de ceramides en plasma. L'anàlisi conjunta / Obesity is a global health problem that increases the risk of suffering a wide range of comorbidities, including type II diabetes and cardiovascular diseases. Due to these reasons, it is necessary to find strategies to reduce obesity and its co-morbidities that can be implemented in public health systems. The general objective of the thesis has been to advance in the knowledge of the influence of the composition and functions of the intestinal microbiota and its genome (microbiome) in obesity and associated metabolic alterations and to identify intestinal bacteria that, together with changes in the diet, can help to establish more effective intervention strategies to control these disorders. The first chapter of the thesis focuses on the study of the safety and ability to metabolize different fiber sources of Bacteroides uniformis CECT 7771. For this, we have carried out the genome sequencing and the transcriptome analysis of the bacteria in response to different carbon sources. It has been observed that B. uniformis CECT7771 is able to ferment all evaluated substrates and grow faster in the presence of those carbon sources of simpler structure (wheat bran rich in arabinoxylans (AXOS) and glucose). In addition, B.uniformis CECT 7771 has the ability to degrade the mucin O-glycans, produce butyrate and decrease the production of long chain fatty acids and acyl transport proteins (ACPs), involved in the synthesis of bacterial lipopolysaccharide (LPS) that causes endotoxemia. When grown in the presence of pectin, B. uniformis CECT 7771 increases the production and secretion of GABA, which could have an impact on the gut-brain axis. B. uniformis CECT 7771 has shown no signs of toxicity or pathogenicity after exhaustive analysis of the genes encoded in its genome, or after oral administration in a model of sub-chronic toxicity in rats. In this model, the bacterium produces an anti-inflammatory cytokine profile compared to the placebo group and shows a dose-dependent effect in the decrease of the alanine aminotransferase (ALT) values, suggesting a hepato-protective effect. In the second chapter of the thesis it was done an intervention study in humans with overweight and metabolic syndrome to evaluate at first the effects of dietary supplementation with fibers enriched in AXOS and polyunsaturated fatty acids (PUFAs) during 4 weeks in the composition of the intestinal microbiota and in the biochemical parameters. The results show that the intake of AXOS modifies the microbiota, exerting a bifidogenic effect and an increase of bacterial species that produce butyrate, although we have not seen an improvement in the biochemical parameters analyzed. In the case of the intervention with PUFAs, we have not detected changes in the composition of the microbiota or in the biochemical parameters evaluated. Secondly, we have carried out a multi-omic study in a subgroup of subjects of the intervention with AXOS in order to delve into the effects of this type of fiber. The metagenomic analysis has allowed us to identify changes in the configuration of the intestinal microbiota, including an increase in Ruminococcus gnavus and Prevotella spp. as well as a decrease of Parabacteroides, Paraprevotella and Rikenella. We have also detected an increase in metagenes involved in the production of tetrahydrofolate and folic acid derivatives, which perform a protective function against hyperhomocysteinemia; vitamin K2, involved in the correct absorption of calcium; and GABA, whose low concentration in the body is associated with states of anxiety and energy imbalance and that favors the secretion of insulin and regulates plasma ceramide levels. The joint analysis of the metagenome and the metabolome has allowed us to establish positive correlations between the abundance of Prevotella and the concentrations of short chain fatty acids and succinate, as well as between increases of Eubacterium rectale and reductions in methylamines, which could be involved in t / Gómez Del Pulgar Villanueva, EM. (2018). Identificación de componentes de la microbiota intestinal potencialmente beneficiosos frente a la obesidad [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/114770 / TESIS

Cartas al editor / Revisión por pares / Revisón por pares

Submitted by Jaqueline Jarusevicius (jaquejaru@ibb.unesp.br) on 2018-08-10T12:31:45Z No. of bitstreams: 1 Manuscrito Defesa - Jaqueline Jarusevicius.pdf: 1898282 bytes, checksum: d3ff76c36419bc9f757606d4e8af71c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-08-10T16:49:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jarusevicius_j_dr_bot.pdf: 1898282 bytes, checksum: d3ff76c36419bc9f757606d4e8af71c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-10T16:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jarusevicius_j_dr_bot.pdf: 1898282 bytes, checksum: d3ff76c36419bc9f757606d4e8af71c7 (MD5) Previous issue date: 2018-07-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aedes aegypti (Ae. aegypti) é o principal vetor de dengue e é também responsável por transmitir outras arboviroses de importância em saúde pública, como as febres zika e chikungunya. Devido a falhas no controle da transmissão destas arboviroses, que tem como base a eliminação do mosquito vetor, o Brasil é um país endêmico para a dengue e a cada ano nos deparamos com epidemias cada vez mais graves. Ao se alimentar de sangue humano infectado o primeiro local de interação do vírus com o organismo do mosquito é o intestino. Além das respostas imunológicas antivirais para conter a infecção, neste ambiente também está presente a microbiota intestinal do mosquito, um importante modulador na infecção de patógenos. Compreender como a microbiota intestinal de mosquitos é definida e se modifica em uma determinada população é de grande interesse uma vez que isso pode elucidar a relação entre mosquitos e seus organismos simbiontes, e consequentemente auxiliar em processos de paratransgênese. A principal forma de aquisição das bactérias intestinais é através do contato com o ambiente, mas outros mecanismos como transmissão transestadial e vertical também devem influenciar no estabelecimento da microbiota intestinal. Neste estudo, nós analisamos a composição da microbiota intestinal de mosquitos Ae. aegypti de uma população de campo, coletados na cidade de Botucatu, SP, através do sequenciamento em larga escala da região hipervariavel V4 do gene 16S rRNA, e acompanhamos como esta composição é alterada durante colonização em insetário. Nossos resultados revelaram uma transição da composição da microbiota intestinal, principalmente pela diminuição progressiva da diversidade de bactérias como efeito da colonização. Os gêneros mais abundantes encontrados, como Pantoea, Burkholderia e Enterobacter, permaneceram em proporções similares ao longo destas gerações. Estes dados sugerem que existe transmissão de bactérias entre as gerações e que o ambiente intestinal possui mecanismos para manter a composição original de sua microbiota. / 2016/16952-9

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-01T18:55:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4472828 bytes, checksum: d2fd2fd1046d39d3ef7808a44e343110 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-01T18:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4472828 bytes, checksum: d2fd2fd1046d39d3ef7808a44e343110 (MD5) Previous issue date: 2003-03-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho teve como objetivos verificar o efeito de prebiótico (Raftilose® P95 - FOS), (1 e 5%), probiótico (Bifidobacterium longum - 108 UFC/dia) e simbiótico (5% FOS + B. longum) na biodisponibilidade de ferro, cálcio e magnésio em ratos e na modulação da microbiota murina (aeróbios totais, anaeróbios totais, bifidobactérias e coliformes); o efeito de cálcio (2,5, 5,0 e 10,0g/kg) sobre a biodisponibilidade de ferro e magnésio, em 2 estudos in vivo: biodisponibilidade de ferro (12 grupos experimentais, n=8) com duração de 35 dias, sendo um período de repleção de 14 dias (AOAC, 1994, modificado) e biodisponibilidade de minerais (7 grupos experimentais, n=10). Foram verificados os efeitos in vitro (culturas em série e modelos intestinais) de diferentes níveis de sulfato ferroso (11, 22 e 33 mg/Kg, correspondentes a 50, 100 e 150% dos níveis utilizados na composição do meio de cultura) sobre a microbiota colônica humana e sua utilização de FOS, por meio de análise da contagem celular total, bacteróides, bifidobactérias, clostridios e bactérias sulfato redutoras pela técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH), e contagem microbiológica de enterobactérias, lactobacilos, anaeróbios totais e bifidobactérias; a produção de ácidos orgânicos de cadeia curta: acético, propiônico, isobutírico, n-butírico, isovalérico, n-valérico, capróico, D- e L-lactato, determinados por meio de cromatografia gasosa. Os resultados indicaram que a suplementação com FOS (1%) não afetou a biodisponibilidade de ferro em animais submetidos a dietas deficientes em ferro, porém aumentou a absorção de magnésio (p<0,05) e cálcio (p<0,05). Foi demonstrada interação negativa entre cálcio e ferro (p<0,01) e entre cálcio e magnésio (p<0,05). Doses de 5% de FOS resultaram em diarréia nos animais e não aumentaram (p>0,05) a biodisponibilidade de ferro de animais anêmicos. A suplementação com B. longum tampouco influenciou (p>0,05) a recuperação da anemia dos animais nem alterou (p>0,05) as contagens dos diferentes grupos bacterianos intestinais. Em dietas controle verificou-se diminuição do grupo dos coliformes cecais com aumento do teor de ferro da dieta (p<0,01). O efeito de FOS sobre a microbiota humana e produção de ácidos orgânicos depende do teor de ferro e do segmento intestinal estudado. Baixo teor de sulfato ferroso (11 mg/L) resultou em diminuição (p<0,01) de enterobactérias, em experimentos em modelo intestinal. A incorporação de FOS estimulou esse grupo bacteriano (p<0,01) em dietas com baixo teor de ferro, bem como bifidobactérias e lactobacilos em todos os segmentos e dietas. Dietas com alto teor de sulfato ferroso (33 mg/kg) e FOS estimularam o grupo dos clostrídios. A incorporação de FOS a dietas com 11mg FeSO4/L resultou em aumento da produção de acetato (p<0,01), isobutirato (p<0,05), n-butirato (p<0,05) e isovalerato (p<0,01) no recipiente que simula o cólon ascendente; acetato (p<0,05) no cólon transverso e isobutirato (p<0,05) e caproato (p<0,01) no cólon descendente. A incorporação de FOS a dietas com 33mg FeSO4/L resultou na diminuição de n-valerato (p<0,05) no cólon ascendente; aumento de propionato (p<0,05) e isobutirato (p<0,05) no cólon transverso e diminuição de acetato (p<0,05), propionato (p<0,05), n-butirato (p<0,01), isovalerato (p<0,05) e n-valerato (p<0,05) no cólon descendente. Dietas com baixo teor de sulfato ferroso + FOS resultaram em maior produção de n-valerato (p<0,05) no cólon ascendente; menor produção de propionato (p<0,05), isovalerato (p<0,05) e n-valerato (p<0,05) no cólon transverso; e maiores concentrações de acetato (p<0,05), isobutirato (p<0,05), n-butirato (p<0,05), n-valerato (p<0,01) e caproato (p<0,05) no cólon descendente, quando comparadas com dietas com alto teor de sulfato ferroso + FOS. Os experimentos indicam que a concentração mineral presente em uma dieta pode vir a influenciar a saúde do hospedeiro, não apenas devido à biodisponibilidade per si, mas por também influenciar a ecologia microbiana. Sugere-se um cuidadoso estudo das doses de prebióticos a serem utilizadas, para evitar efeitos colaterais, como diarréia, que possam vir a influenciar nos resultados fisiológicos e novos estudos na área, com outros microorganismos probióticos, como Lactobacillus sp. ou outras espécies de bifidobactérias, devido a diferenças de metabolismo e adaptação dos mesmos à condições experimentais, outras substâncias prebióticas, que possam influenciar diferentes grupos microbianos e,ou, fontes dietéticas de minerais, como dietas baseadas em arroz/feijão, multimisturas, mais próximas da realidade populacional, em vez de suplementação com minerais inorgânicos. / The aim of this work is to verify prebiotic (Raftilose® P95 - FOS), (1 e 5%), probiotic (Bifidobacterium longum - 108 UFC/day) and synbiotic (5% FOS + B. longum) effects on rats ́ iron, calcium and magnesium bioavailability and on their microflora modulation (total aerobes, anaerobes, bifidbacteria and coliforms); calcium effect (2,5, 5,0 and10,0g/kg) on iron and magnesium bioavailability, through 2 in vivo studies: iron bioavailability (12 experimental groups, n=8) during 35 days, with repletion period of 14 days (AOAC, 1994, modified) and mineral bioavailability (7 experimental groups, n=10). The effects of In vitro experiments (batch cultures and gut models) using different iron sulphate levels (11, 22 and 33 mg/Kg, corresponding to 50, 100 and 150% of levels used in composition of culture medium) on human colonic microflora and its FOS supplementation were evaluated. Microflora modulation was analysed through total cellular count analysis, bacteroides, bifid bacteria, clostridia and reducing sulphate bacteria through fluorescent in situ hybridization (FISH), and microbiological count of enterobacteria, lactobacilli, total anaerobes and bifid bacteria. Short-chain fatty acids production – SCFA (acetic, propionic, isobutyric, n-butyric, isovaleric, n-valeric, caproic, D- and L-lactate) was determined through gas-chromatography. Results have shown that FOS supplementation (1%) did not affect iron bioavailability in animals on low iron content diets, but magnesium (p<0.05) and calcium (p<0.05) absorption increased. Negative interaction between calcium and iron (p<0.01) and between calcium and magnesium (p<0.05) was proved. FOS (5%) resulted in diarrhoea in anaemic animals and did not increase (p>0.05) iron bioavailability. B. longum supplementation (p>0.05) did not influence anaemia recovery of animals nor changed (p>0.05) counts of different intestinal bacterial groups. On control diets coliforms group was reduced with increase of dietetic iron level (p<0.01). FOS effect on human microbiota and SCFA production depends on iron content and on gut segment analysed. Low content of iron sulphate (11 mg/L) resulted in enterobacteria decrease (p<0.01), in gut model experiments. FOS addition stimulated this bacterial group (p<0.01) on low iron content diets as well as bifid bacteria and lactobacilli on all segments and diets. High iron sulphate diets (33 mg/kg) and FOS stimulated clostridia group. FOS addition to 11mg FeSO4/L diets resulted in increase in acetate (p<0.01), isobutyrate (p<0.05), n-butyrate (p<0.05) and isovalerate (p<0.01) productions in recipients that simulate ascendant colon; acetate (p<0.05) in transversal colon and isobutyrate (p<0.05) and caproate (p<0.01) in descendant no colon. FOS addition to 33mg FeSO4/L diets resulted in n-valerate (p<0.05) decrease in ascendant colon; propionate (p<0.05) and isobutyrate (p<0.05) increase in transversal colon and acetate (p<0.05), propionate (p<0.05), n-butyrate (p<0.01), isovalerate (p<0.05) and n- valerato (p<0.05) decrease in descendant colon. Low iron sulphate content diets supplemented with FOS resulted in higher n-valerate production (p<0.05) in ascendant colon; lower propionate (p<0.05), isovalerate (p<0.05) and n-valerate (p<0.05) production in transversal colon; higher acetate (p<0.05), isobutyrate (p<0.05), n-butyrate (p<0.05), n- valerate (p<0.01) and caproate (p<0.05) concentration in descendant colon, when compared to high iron sulphate content supplemented with FOS diets. Experiences have shown that dietetic mineral can not only influence host’s health because of their bioavailability but that they can also influence microbial ecology. We suggest detailed studies of prebiotic doses to avoid collateral effects such as diarrhoea, which could influence physiologic results. We also suggest new studies on this area with other probiotic microorganisms, such as Lactobacillus sp or with other species of bifidbacteria, due to strains ́ metabolic differences and adaptation’s to experimental conditions; other prebiotic substances, that could influence different microbial groups and/ or mineral sources such as rice/beans, multi mixtures that could be closer to population dietetic base instead of such inorganic minerals. / Não foi localizado o cpf do autor.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-23Bitstream added on 2014-06-13T21:02:33Z : No. of bitstreams: 1 silva_amp_me_botfm.pdf: 250136 bytes, checksum: f99e12385d4a9d89890a24ca11329cf8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O trato gastrointestinal é um complexo ecossistema que associa uma microbiota residente e células de vários fenótipos alinhadas na parede epitelial que expressam complexa atividade metabólica. A microbiota pode ser alterada durante o processo infeccioso e/ou a utilização de medicamentos, o que pode interferir com a digestão e absorção de nutrientes, a rápida resposta imune contra patógenos, a estimulação e a maturação do sistema imune. O desequilíbrio deste ecossistema altera a população de microrganismos, principalmente os dos gêneros Bacteroides, Bifidobacterium e Lactobacillus da microbiota intestinal, ocasionando diversos prejuízos para o hospedeiro. Assim, este estudo teve como objetivo verificar a influência da pneumonia adquirida na comunidade e a monoterapia com levofloxacina, por via oral, sobre a microbiota intestinal normal do paciente. Por meio de análises microbiológicas das fezes de 15 pacientes estudados, verificou-se que a pneumonia adquirida na comunidade afetou a microbiota intestinal reduzindo a população de Lactobacillus e Bacteroides. O tratamento com levofloxacina alterou a população de Bifidobacterium e Lactobacillus que, no entanto, 30 dias após o término do antimicrobiano a microbiota intestinal dos pacientes retornou ao normal. Uma vez que a incidência de pneumonia adquirida na comunidade é alta e que o antimicrobiano mais utilizado para o seu tratamento é a levofloxacina, é importante que se conheçam as alterações impostas pelo antimicrobiano na microbiota intestinal dos indivíduos doentes, para que se tomem medidas que minimizem os efeitos prejudiciais decorrentes dessas alterações. / The gastrointestinal tract is a complex ecosystem that associates resident microbiota and differents phenotypes cells aligned in epithelial wall that means complex metabolic activity. The microbiota can be changed during the infectious process and/or medicines use, it can be interfered with foods digestion and nutrients absorption, the quick answer immune against pathogens, the stimulation and the immune maturation system. The imbalance of this ecosystem alters the microorganisms population, mostly the Bacteroides, Bifidobacterium and Lactobacillus genus of intestinal microbiota can represent many damages for host. So, this study has a target to verify the influence of community acquired pneumonia in the and monotherapy with levofloxacin, by oral administration, on normal intestinal microbiota of the patient. Through microbiological analysis of 15 patients stool, it could be verified that community acquired pneumonia affected a intestinal microbiota leading to decreasing Lactobacillus and Bacteroides population. The treatment with levofloxacin changed the Bifidobacterium and Lactobacillus population that, however, 30 days after the end of the antimicrobial the intestinal microbiota returned to normal. Once that the incidence of community acquired pneumonia is high and the most used antimicrobial for its treatments is levofloxacin it is important that you have knowledge of imposed changes by antimicrobial in intestinal microbiota of ill patients, and the right decisions should be made to minimize harmful effects of this changes.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-04T19:26:47Z No. of bitstreams: 1 2018_BrunaTelesSoaresBeserra.pdf: 3183640 bytes, checksum: 08b77beb878a43136e8485ff6b3ba3ae (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T17:44:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_BrunaTelesSoaresBeserra.pdf: 3183640 bytes, checksum: 08b77beb878a43136e8485ff6b3ba3ae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T17:44:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_BrunaTelesSoaresBeserra.pdf: 3183640 bytes, checksum: 08b77beb878a43136e8485ff6b3ba3ae (MD5) Previous issue date: 2018-07-04 / Introdução: A microbiota intestinal pode estar relacionada com a patogênese e progressão da obesidade, por meio da sua influência sobre processos metabólicos do hospedeiro, dentre eles o gasto energético. Este tem como um de seus componentes a termogênese adaptativa no tecido adiposo (TA) termogênico. Os principais estímulos à termogênese adaptativa são a sinalização 3-adrenérgica e o hormônio tireoidiano (HT). Objetivo: Avaliar o efeito da modulação da microbiota intestinal sobre o efeito da sinalização β3-adrenérgica ou pelo HT no TA. Métodos: Camundongos machos C57BL/6 foram alimentados com dieta normolipídica ou hiperlipídica e divididos aleatoriamente em seis grupos contento cinco animais cada: controle, antibióticos (ATB), agonista 3-adrenérgico (CL316,243), triiodotironina (T3), antibióticos + CL316,243 e antibióticos + T3. Os animais foram tratados com ATB na água de beber (vancomicina 0,5 g/L e ciprofloxacina 0,2 g/L por 5 semanas), CL316,243 por via intraperitoneal (1 mg/kg/dia, 5 dias) e T3 por via intraperitoneal (10 g/dia, 3 dias). Foram avaliados ganho de peso corporal, ingestão hídrica, ingestão de energia, eficiência calórica, massa dos depósitos de TA e do fígado, expressão de genes relacionados à termogênese e à ação do HT no TA, concentração sérica de TSH e atividade da desiodinase tipo 2 (DIO2) no tecido adiposo branco (TAB) subcutâneo axilar. Resultados: No cenário de dieta normolipídica, o CL316,243 reduziu a massa do TAB visceral e, na presença de ATB, reduziu a massa do TAB subcutâneo. O T3 reduziu a massa do TAB epididimal e, na presença de ATB, aumentou a massa do TA marrom (TAM). O CL316,243 ou T3 aumentaram a expressão de Ucp1 no TAB e, na presença de ATB, houve acentuação da indução de Ucp1 em resposta ao CL316,243. A modulação da microbiota reduziu a atividade da DIO2 e não modificou a concentração sérica de TSH. No cenário de dieta hiperlipídica, o uso CL316,243 e o T3, isoladamente e com ATB, não modificaram a massa de TAB. O T3 aumentou a massa do TAM. O CL316,243 e T3, isoladamente, aumentaram a expressão de Ucp1 no TAB; o co-tratamento com ATB acentuou a indução de Ucp1 pelo CL316,243 e diminuiu a indução deste transcrito pelo T3. No TAB inguinal, o uso de ATB acentuou a indução de Ppargc1a e Dio2 pelo CL316,243 e pelo T3. No TAB epididimal, o tratamento com ATB diminuiu a indução de Prmd16 pelo T3. A modulação da microbiota resultou em tendência de redução da atividade da DIO2 e não modificou a concentração sérica de TSH. Conclusão: Em condições basais, a microbiota intestinal não apresenta efeito significativo sobre a transcrição do gene que codifica a UCP-1 no TAB e no TAM, porém pode reduzir a ação do HT por diminuir sua ativação intracelular no TAB. Além disso, a resposta do TAB aos estímulos termogênicos clássicos parece ser influenciada de forma distinta pela microbiota intestinal. / Background: Gut microbiota composition is associated with the pathogenesis and progression of obesity, possibly due to its major role in regulating components of the host’s metabolic homeostasis, such energy expenditure. The latter comprises adaptive thermogenesis in adipose tissue (AT), which is classically stimulated by β3-adrenergic signaling and thyroid hormone (TH). Objective: To evaluate the effect of gut microbiota modulation on the action of β3-adrenergic signaling and TH on AT. Methods: Male C57BL/6 mice were fed a control or high fat diet and randomly assigned into six groups containing five animals each: control, antibiotics (ATB), β3-adrenergic agonist (CL316,243), triiodothyronine (T3), antibiotics + CL316,243 and antibiotics + T3. The animals were treated with ATB in drinking water (vancomycin 0.5 g/L and ciprofloxacin 0.2 g/L for 5 weeks), CL316,243 intraperitoneally (1 mg/kg/day, 5 days) and T3 intraperitoneally (10 μg/day, 3 days). Body weight gain, water intake, energy intake, caloric efficiency, AT and liver mass, expression of genes related to thermogenesis and to the action of TH in TA, serum TSH concentration and type 2 deiodinase (DIO2) activity in axillary subcutaneous white adipose tissue (WAT) were evaluated. Results: In the control diet scenario, CL316,243 reduced visceral WAT mass and, in the presence of ATB, reduced the mass of subcutaneous WAT. T3 reduced visceral (epididymal) WAT mass and, in the presence of ATB, increased brown AT (BAT) mass. Treatment with CL316,243 or T3 increased Ucp1 expression in WAT and, in the presence of ATB, there was an enhancement of Ucp1 induction in response to CL316,243. Modulation of gut microbiota reduced the activity of DIO2 in WAT and did not modify the serum TSH concentration. In the high fat diet scenario, CL316,243 and T3, alone or with ATB, did not modify the WAT mass, and T3 increased BAT mass. Both treatment with CL316,243 or T3 alone increased Ucp1 expression in WAT; co-treatment with ATB enhanced the induction of Ucp1 by CL316,243 and decreased the induction of this transcript by T3. In inguinal WAT, ATB treatment enhanced the induction of Ppargc1a and Dio2 by CL316,243 and T3. In epididymal WAT, treatment with ATB decreased the induction of Prmd16 by T3. Modulation of gut microbiota resulted in a trend towards reduction of DIO2 activity in WAT and did not modify the serum TSH concentration. Conclusion: Under basal conditions, the gut microbiota has no significant effect on the transcription of the gene encoding UCP-1 in TAB and TAM, but may reduce TH action in WAT by decreasing its intracellular activation. Moreover, WAT response to classical thermogenic stimuli seems to be influenced differently by the gut microbiota.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-05T18:22:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 484616 bytes, checksum: 6c45e2219cc7bd2806a434b40d7bad33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-05T18:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 484616 bytes, checksum: 6c45e2219cc7bd2806a434b40d7bad33 (MD5) Previous issue date: 2001-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O leite humano é reconhecidamente superior para a alimentação do recém-nascido. Alguns de seus componentes promovem o estabelecimento de uma microbiota intestinal balanceada, particularmente pela colonização das bactérias bífidas, que confere proteção contra infecções e manutenção da saúde. Os bancos de leite humano atendem os recém-nascidos impossibilitados de receberem o leite de suas próprias mães. O leite nos bancos é pasteurizado, e os efeitos desse processo nas substâncias promotoras do crescimento de bactérias bífidas são praticamente desconhecidos. O objetivo desse estudo foi determinar a qualidade microbiológica de leite humano obtido por diferentes técnicas de coleta; verificar o estímulo ou inibição do leite humano pasteurizado no crescimento de estirpes de bactérias bífidas, de origem humana; e acompanhar a viabilidade dessas bactérias em leite humano pasteurizado congelado. A qualidade microbiológica do leite humano coletado por expressão manual, bomba manual ou no gotejamento da mama foi analisada para os grupos de coliformes totais, enterococos, clostrídios, mesófilos aeróbios totais, e bolores e leveduras. Os resultados indicaram que os níveis para cada grupo microbiano não apresentaram diferença significativa (p ≤ 0,05) em relação à técnica de coleta empregada. O estímulo ou inibição do leite pasteurizado no crescimento de Bifidobacterium bifidum ATCC 29521, Bifidobacterium breve ATCC 15700, Bifidobacterium longum ATCC 15707, e Bifidobacterium breve AJ 32 foram avaliados pela inoculação (5%) das culturas ativas em leite humano pasteurizado adicionado do filtrado do leite humano não pasteurizado, ou do filtrado do leite humano pasteurizado, ou do leite humano pasteurizado desnatado, e em leite humano integral pasteurizado. O leite humano pasteurizado adicionado do filtrado do leite humano não pasteurizado promoveu o crescimento das quatro estirpes de bactérias bífidas. Entretanto, os tratamentos leite humano pasteurizado adicionado de filtrado de leite humano pasteurizado, ou de leite humano pasteurizado desnatado, e leite humano integral pasteurizado inibiram o crescimento das quatro estirpes avaliadas. Conclui-se que a pasteurização inibe algum fator que estimula, ou produz algum fator que inibe, o crescimento das estirpes estudadas. A viabilidade das mesmas bactérias adicionadas ao leite humano pasteurizado e congelado foi acompanhada por 15 dias, e após descongelamento e refrigeração por 9 horas. As células permaneceram viáveis durante o congelamento, e após descongelamento e refrigeração, em níveis próximos aos da inoculação, em condições similares às empregadas em um banco de leite. A adição de culturas de bactérias bífidas, de origem humana, ao leite humano pasteurizado nos bancos é uma alternativa para o enriquecimento desse alimento. As culturas podem ser adicionadas na forma de culturas congeladas concentradas, em quantidades previamente determinadas. O produto poderá ser administrado aos bebês, em situações especiais e controladas, como uma contribuição para a colonização do trato intestinal por esse gênero de microrganismos benéficos. / Human milk is recognized superior for newborn feeding. Some of its components promote the establishment of a balanced intestinal microbiota, particularly the bifidobacteria colonization, that confer protection against infections and the health maintenance. The human milk banks assist the newborn that can’t receive its own mothers' milk. The milk in the banks is pasteurized, and the effects of that process in the substances that promotes the growth of bifidobacteria are practically unknown. The objective of this study was to determine the microbiological quality of human milk collected by different techniques; investigate the stimulation or inhibition of pasteurized human milk upon the growth of bifidobacteria of human origin; and follow the viability of a bifidobacteria concentrate added to pasteurized human milk, frozen for 15 days. The microbiological quality of human milk, collected by manual expression, manual pump or dripping milk was analyzed for total coliform, enterococci, clostridia, total aerobic mesophile, and molds and yeasts. The results indicated that microorganisms levels don’t show significative difference regarding the collection technique. The stimulation or inhibition on the growth of Bifidobacterium bifidum ATCC 29521, Bifidobacterium breve ATCC 15700, Bifidobacterium longum . ATCC 15707, and Bifidobacterium breve AJ 32 was eva luate by inoculation of the active cultures in pasteurized human milk added of the filtrate of the human milk unpasteurized, or of the filtrate of the pasteurized human milk, or of the skimmed pasteurized human milk, and in pasteurized whole human milk. The pasteurized human milk added of the filtrate of the human milk unpasteurized promoted the growth of the four strains of bifidobacteria. However, pasteurized human milk containing the filtrate of the pasteurized human milk, or skimmed pasteurized human milk, and pasteurized whole human milk inhibited the growth of the four strains. It suggests that the pasteurization inhibits some factor that stimulates, or it produces some factor that inhibits, the growth of the strains studied. The viability of Bifidobac terium added to pasteurized and frozen human milk was followed during 15 days, and after thawing and refrigeration for 9 hours. The results showed that the cells remain viable during the storage period under freezing, and after thawing and refrigeration, n i the same levels inoculated. This conditions are similar to those found in a human milk bank. The addition of cultures of bifidobacteria, human origin, to human milk pasteurized in the banks is an alternative for the enrichment of that food. The cultures can be added in the form of concentrated frozen cultures, in amounts previously determinated. The product can be administered to the newborns, in special and controlled situations, as a contribution to colonization of the intestinal tract for that genera of beneficial microorganisms. / Tese importada do Alexandria