Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pythiosis is a chronic disease that affects humans, other mammals and birds. It is caused by the aquatic oomycete Pythium insidiosum. Pythiosis progresses rapidly and can become life threatening if not treated in the early stages. The absence of ergosterol in the cell wall of this oomycete prevents the treatment of pythiosis with antifungal therapy because most antifungal drugs act by inhibiting the synthesis of ergosterol. Members of the genus Pythium are known to be susceptible to some antimicrobial of the tetracycline, macrolide, aminoglycoside and chloramphenicol classes. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of isolates of P. insidiosum to the aminoglycosides gentamicin, neomycin, paromomycin and streptomycin and to the minocycline derivative tigecycline. The susceptibility tests were carried out with 24 P. insidiosum isolates using the broth microdilution method in accordance with Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) document M38-A2. The minimum inhibitory concentration (MIC) values for gentamicin, neomycin, paromomycin and streptomycin ranged from 32 to 64 mg/L, and the minimal fungicidal concentration (MFC) values ranged from 32 to 128 mg/L. Tigecycline had a good inhibitory activity, with values of mic MIC (0.25-2 mg/L) and MFC (1-8 mg/L) values. The observed in vitro susceptibility to tigecycline makes this drug a good option for future in vivo assays investigating options of treatment of pythiosis. / Pitiose é uma doença crônica que afeta humanos, outros mamíferos e pássaros. O seu agente etiológico é um oomiceto aquático denominado Pythium insidiosum. A Pitiose evolui rapidamente e pode se tornar fatal se não tratada nos primeiros estágios. A ausência de ergosterol na parede da célula deste oomiceto impede o tratamento de pitiose com terapia antifúngica, pois a maioria das drogas antifúngicas atua sobre a síntese de ergosterol. Os membros do gênero Pythium são conhecidos por serem susceptíveis a alguns antimicrobianos do grupo das tetraciclinas, macrolídeos, aminoglicosídeos e cloranfenicol. Este estudo teve como objetivo avaliar a susceptibilidade in vitro de isolados de P. insidiosum frente aos aminoglicosídeos gentamicina, neomicina, paromomicina e estreptomicina e ao derivado da minociclina denominado de tigeciclina. Os testes de susceptibilidade foram realizados com 24 isolados de P. insidiosum, utilizando o método de microdiluição em caldo, de acordo com o documento M38- A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) de gentamicina, neomicina, paromomicina e estreptomicina variaram de 32 a 64 mg/L, e os valores de concentração fungicida mínima (CFM) variaram de 32 a 128 mg/l. Tigeciclina apresentou boa atividade inibitória, com valores de CIM (0,25-2 mg/L) e CFM (1-8 mg/L). A susceptibilidade à tigeciclina observada in vitro faz deste fármaco uma boa opção em futuros ensaios e in vivo, investigando o tratamento da pitiose.

A candidíase é uma infecção fúngica oportunista freqüente, causada por leveduras do gênero Candida. A utilização de anti-sépticos como medida complementar na higiene oral é cada vez mais difundida. Sendo assim, é de grande importância a avaliação das metodologias que são utilizadas para avaliação da atividade antifúngica. A avaliação in vitro da sensibilidade de leveduras a anti-sépticos tem sido pouco relatada e os resultados nem sempre são concordantes, pois as metodologias são divergentes. O objetivo desse estudo foi avaliar três metodologias: macro e microdiluição em caldo e difusão em ágar por meio de poços, com utilização dos meios de cultura RPMI 1640 e Mueller-Hinton para suscetibilidade dos anti-sépticos bucais Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® frente a C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. Em relação à comparação das concentrações inibitórias mínimas de cada meio de cultura, os índices kappa foram bons ou excelentes (0,73 a 1,00). Na metodologia da difusão em ágar o coeficiente de correlação de concordância entre os resultados dos meios de cultura também foi excelente (0,95 a 0,99). Concluímos que ambos os meios de cultura podem ser utilizados na avaliação da suscetibilidade de anti-sépticos bucais frente espécies de Candida, pois apresentaram índices de concordância e correlação de bom à excelente. Quanto à correlação entre as metodologias de macro e microdiluição, o kappa foi excelente (1,00) para todas as cepas no meio Mueller-Hinton e variou de 0,42 a 0,72 (bom a excelente) no meio RPMI-1640. As CIMs geradas pela macro e microdiluição em caldo são concordantes possibilitando a utilização de ambas as metodologias na avaliação de anti-sépticos bucais, no entanto a microdiluição detectou a ação inibitória de anti-sépticos voláteis em menores concentrações. A utilização da difusão em ágar é discutível visto que os anti-sépticos voláteis Listerine® e Malvatricin® não apresentaram atividade inibitória nesta metodologia. Todos os anti-sépticos avaliados apresentaram atividade fungistática e fungicida in vitro pelas metodologias de diluição frente a cepas ATCC de Candida quando avaliado na formulação disponibilizada pelos fabricantes. Os anti-sépticos bucais Oral B® e Periogard® apresentaram ações inibitórias (CIM) e fungicidas (CFM) de 1,25% para todas as cepas, meios e metodologias. O Noplak® e o Plax®, CIM e CFM variando de 1,25% a 2,5% para todas as cepas, meios e metodologias. Os anti-sépticos Listerine® e Malvatricin® apresentaram CIM de 5% a 50% e CFM de 5% a 100% dependendo do meio e metodologia. O anti-séptico Reach® apresentou CIM e CFM variando de 1,25% a 50% dependendo da cepa avaliada. Estudos com maior número de isolados, maior diversidade de espécies, concentrações intermediárias de anti-séptico e resultados interlaboratoriais poderão contribuir na padronização de métodos para avaliação de anti-sépticos bucais. / Candidosis is a frequent opportunistic fungal infection caused by yeasts of the gender Candida. The use of mouthwashes as a preventive measure in oral hygiene has been more and more diffused. Therefore it is of great importance the evaluation of the methodologies that are used on the antifungal evaluation. The in vitro evaluation of yeast susceptibility to mouthwashes has been little reported and the results are not always in agreement. The goal of this study was to evaluate three methodologies: broth macro and microdilution and agar well diffusion, using the media RPMI 1640 and Mueller-Hinton on the susceptibility of the mouthwashes Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® against C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. The kappa indexes for the comparison between the minimal inhibitory concentrations obtained with each culture medium were good to excellent (0,73 to 1,00). On the agar well diffusion method, the concordance correlation coefficients between the results obtained with the different media were also excellent (0,95 to 0,99). We concluded that both culture media can be used to evaluate the susceptibility of mouthwashes against species of Candida because they have concordance and correlations that go from good to excellent. The kappa indexes for the correlation between the broth macro and microdilution methodologies were excellent (1,00) for all the isolates in the Mueller-Hinton media and varied from 0,42 to 0,72 (good to excellent) with RPMI 1640. The MICs generated by broth macro and microdilution agree which makes it possible to use both methodologies on the evaluation of mouthwashes; however the microdilution detects the inhibitory action of volatile mouthwashes at smaller concentrations. The use of the agar well diffusion method is not advised since the volatile mouthwashes Listerine® and Malvatricin® have not presented inhibitory action in that methodology. All the evaluated mouthwashes presented fungistatic and fungicide activity at the formulation available in the market. The mouthwashes Oral B® and Periogard® presented MICs and MFCs of 1,25% for all strains, methodologies and media. Noplak® and Plax®, MIC and MFC that ranged from 1,25% to 2,5% for all strains, methodologies and media. The mouthwashes Listerine® and Malvatricin® MICs ranged from 5% to 50% and MFCs from 5% to 100% depending on media and methodology. The mouthwash Reach® presented MICs and MFCs ranging from 1,25% to 50% depending on the strain evaluated. Studies with a higher number of strains, bigger variety of species, intermediary concentrations of mouthwashes and interlaboratory results can contribute to the standardization of methods to evaluate mouthwashes.

A candidíase é uma infecção fúngica oportunista freqüente, causada por leveduras do gênero Candida. A utilização de anti-sépticos como medida complementar na higiene oral é cada vez mais difundida. Sendo assim, é de grande importância a avaliação das metodologias que são utilizadas para avaliação da atividade antifúngica. A avaliação in vitro da sensibilidade de leveduras a anti-sépticos tem sido pouco relatada e os resultados nem sempre são concordantes, pois as metodologias são divergentes. O objetivo desse estudo foi avaliar três metodologias: macro e microdiluição em caldo e difusão em ágar por meio de poços, com utilização dos meios de cultura RPMI 1640 e Mueller-Hinton para suscetibilidade dos anti-sépticos bucais Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® frente a C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. Em relação à comparação das concentrações inibitórias mínimas de cada meio de cultura, os índices kappa foram bons ou excelentes (0,73 a 1,00). Na metodologia da difusão em ágar o coeficiente de correlação de concordância entre os resultados dos meios de cultura também foi excelente (0,95 a 0,99). Concluímos que ambos os meios de cultura podem ser utilizados na avaliação da suscetibilidade de anti-sépticos bucais frente espécies de Candida, pois apresentaram índices de concordância e correlação de bom à excelente. Quanto à correlação entre as metodologias de macro e microdiluição, o kappa foi excelente (1,00) para todas as cepas no meio Mueller-Hinton e variou de 0,42 a 0,72 (bom a excelente) no meio RPMI-1640. As CIMs geradas pela macro e microdiluição em caldo são concordantes possibilitando a utilização de ambas as metodologias na avaliação de anti-sépticos bucais, no entanto a microdiluição detectou a ação inibitória de anti-sépticos voláteis em menores concentrações. A utilização da difusão em ágar é discutível visto que os anti-sépticos voláteis Listerine® e Malvatricin® não apresentaram atividade inibitória nesta metodologia. Todos os anti-sépticos avaliados apresentaram atividade fungistática e fungicida in vitro pelas metodologias de diluição frente a cepas ATCC de Candida quando avaliado na formulação disponibilizada pelos fabricantes. Os anti-sépticos bucais Oral B® e Periogard® apresentaram ações inibitórias (CIM) e fungicidas (CFM) de 1,25% para todas as cepas, meios e metodologias. O Noplak® e o Plax®, CIM e CFM variando de 1,25% a 2,5% para todas as cepas, meios e metodologias. Os anti-sépticos Listerine® e Malvatricin® apresentaram CIM de 5% a 50% e CFM de 5% a 100% dependendo do meio e metodologia. O anti-séptico Reach® apresentou CIM e CFM variando de 1,25% a 50% dependendo da cepa avaliada. Estudos com maior número de isolados, maior diversidade de espécies, concentrações intermediárias de anti-séptico e resultados interlaboratoriais poderão contribuir na padronização de métodos para avaliação de anti-sépticos bucais. / Candidosis is a frequent opportunistic fungal infection caused by yeasts of the gender Candida. The use of mouthwashes as a preventive measure in oral hygiene has been more and more diffused. Therefore it is of great importance the evaluation of the methodologies that are used on the antifungal evaluation. The in vitro evaluation of yeast susceptibility to mouthwashes has been little reported and the results are not always in agreement. The goal of this study was to evaluate three methodologies: broth macro and microdilution and agar well diffusion, using the media RPMI 1640 and Mueller-Hinton on the susceptibility of the mouthwashes Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® against C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. The kappa indexes for the comparison between the minimal inhibitory concentrations obtained with each culture medium were good to excellent (0,73 to 1,00). On the agar well diffusion method, the concordance correlation coefficients between the results obtained with the different media were also excellent (0,95 to 0,99). We concluded that both culture media can be used to evaluate the susceptibility of mouthwashes against species of Candida because they have concordance and correlations that go from good to excellent. The kappa indexes for the correlation between the broth macro and microdilution methodologies were excellent (1,00) for all the isolates in the Mueller-Hinton media and varied from 0,42 to 0,72 (good to excellent) with RPMI 1640. The MICs generated by broth macro and microdilution agree which makes it possible to use both methodologies on the evaluation of mouthwashes; however the microdilution detects the inhibitory action of volatile mouthwashes at smaller concentrations. The use of the agar well diffusion method is not advised since the volatile mouthwashes Listerine® and Malvatricin® have not presented inhibitory action in that methodology. All the evaluated mouthwashes presented fungistatic and fungicide activity at the formulation available in the market. The mouthwashes Oral B® and Periogard® presented MICs and MFCs of 1,25% for all strains, methodologies and media. Noplak® and Plax®, MIC and MFC that ranged from 1,25% to 2,5% for all strains, methodologies and media. The mouthwashes Listerine® and Malvatricin® MICs ranged from 5% to 50% and MFCs from 5% to 100% depending on media and methodology. The mouthwash Reach® presented MICs and MFCs ranging from 1,25% to 50% depending on the strain evaluated. Studies with a higher number of strains, bigger variety of species, intermediary concentrations of mouthwashes and interlaboratory results can contribute to the standardization of methods to evaluate mouthwashes.

Malassezia pachydermatis is an opportunistic fungus associated to dermatomycoses and otopathies in domestic and wild animals. The aim of this study was to compare the susceptibility profile of clinical isolates of M. pachydermatis against topic and systemic antifungals, through two standardized CLSI techniques: broth microdilution (M27-A3, 2008) and disk diffusion (M44-A, 2004). A standard Candida albicans strain (ATCC 28367) was used as quality control. M. pachydermatis isolates assayed through the broth microdilution method showed susceptibility to anfotericina-B (100%), fluconazole (97,83%), ketoconazole (95.66%), itraconazole (93,48%), followed by clotrimazole and miconazole (86.96%). The disk diffusion method showed susceptibility of 97,83% to nystatin, 95,66% to itraconazole and to amphotericin B, 91,32% to ketoconazole, 89,14% to fluconazole and of 86.96% to miconazole and clotrimazole. Through the in vitro induction of resistance to fluconazole (100%), cross-resistance was observed through the broth microdilution method among the 30 M. pachydermatis isolates against the azoles itraconazole (93%), ketoconazole (97%) and voriconazole (100%). The study of the activities of the essential oils obtained through the broth microdilution, based on geometric means of the minimum fungicidal concentration, showed that concentrations above 195.42 μg/mL, 332.49 μg/mL and 448.8 μg/mL of oregano, Mexican oregano and cinnamon essential oils, respectively, have fungicidal action against M. pachydermatis, independently of the sensitivity or resistance to fluconazole. The fungicidal activity of the essential oils against fluconazole-resistant M. pachydermatis strains is important for further therapeutic studies of this mycosis. Despite the susceptibility observed among sensitive M. pachydermatis strains suggesting fluconazole as a safe drug for the treatment of most cases of superficial and invasive malasseziosis, it is essential continuous surveillance studies to detect changes in the microbiological profile due to therapeutic practices. / Malassezia pachydermatis é um fungo oportunista, associado à dermatomicoses e otopatias em animais domésticos e selvagens. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de M. pachydermatis frente antifúngicos tópicos e sistêmicos, através de duas técnicas padronizadas pelo CLSI: microdiluição em caldo (M27- A3, 2008) e disco-difusão (M44-A, 2004). Para todos os testes foi utilizada uma cepa padrão de Candida albicans (ATCC 28367) como controle de qualidade. Isolados de M. pachydermatis testados através do método de microdiluição em caldo apresentaram em ordem decrescente de susceptibilidade: anfotericina-B (100%), fluconazol (97,83%), cetoconazol (95,66%), itraconazol (93.48%), seguido de clotrimazol e miconazol (86,96%). Pelo método de disco-difusão 97,83% dos isolados foram suscetíveis a nistatina, 95,66% ao itraconazol e a anfotericina-B; 91,32% ao cetoconazol, 89,14% ao fluconazol; e 86,96% ao miconazol e clotrimazol. Através da indução de resistência in vitro, de 30 isolados de M. pachydermatis, ao fluconazol (100%) foi possível evidenciar resistência cruzada pelo método de microdiluição em caldo frente aos antifúngicos azólicos, itraconazol (93%), cetoconazol (97%) e voriconazol (100%). O estudo da atividade de óleos essenciais gerados pelo método de microdiluição em caldo, baseado nas médias geométricas das CFMs, evidenciou-se que concentrações acima de 195.42 μg/mL de óleo essencial de orégano, 332.49 μg/mL de óleo essencial de orégano mexicano e 448.8 μg/mL de óleo essencial de canela, possuem ação fungicida in vitro sobre M. pachydermatis, independente da sensibilidade ou resistência ao fluconazol. A atividade de óleos essenciais frente M. pachydermatis fluconazol resistente, é um achado que consolida a importância destes para estudos futuros voltados a terapêutica desta micose. Apesar dos dados de susceptibilidade apresentados pelas cepas sensíveis de M. pachydermatis sugerirem que o fluconazol ainda é uma droga segura para terapêutica da maioria dos casos de malasseziose superficial ou invasiva, é fundamental que estudos de vigilância epidemiológica sejam realizados continuamente para evidenciar mudanças no perfil microbiológico em função de práticas terapêuticas.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao CrystianeAraujo.pdf: 881195 bytes, checksum: da026b75ed78f3c38d78f44f6a15271e (MD5) Previous issue date: 2007-05-31 / Dermatophytes are keratinophilic fungi that colonize and invade the stratum corneum of the skin, hair and nails causing the dermatophytosis. An increasing number of antifungal agents has become available for the treatment of dermatophytosis, however not all species have the same susceptibility pattern and may occur relative or absolute resistance of some dermatophytes. The document M38-A developed by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) for determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of different antifungal agents against filamentous fungi, has not included the dermatophytes. The broth microdilution method has been evaluated by various researchers, and some parameters as inoculum size, temperature and duration of incubation and endpoint determination has been investigated. In this study, the in vitro activity of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine against 60 dermatophyte isolates, belong to three species, using the broth microdilution technique, with modifications at temperature and incubation time was used. Additionally, the MIC values obtained by broth microdilution method were compared with those obtained by the agar dilution technique. The results obtained by broth microdilution method showed that all isolates produced clearly detectable growth at 28oC and the MIC values could be determined after 4 days of incubation for the isolates of Trichophyton mentagrophytes and 5 days for T. rubrum and Microsporum canis isolates. Itraconazole, ketoconazole and terbinafine had the lowest MIC values (0.03 μg/ml) for 33.3%, 31.6% and 15% of the isolates, respectively. A good concordance was observed between the agar dilution and broth microdilution methods. The levels of agreement were 91.6% with ketoconazole and griseofulvin, 83.3% with itraconazole, 81.6% with terbinafine and 73.3% with fluconazole for all the tested isolates. In summary, the results of this study suggest that an incubation time of 5 days and temperature at 28oC used in broth microdilution and agar dilution methods can contribute to define and to better interpret the MIC values. Beside, until a reference method for testing the susceptibilities of dermatophytes is standardized, the similar results with broth microdilution method become the agar dilution useful for testing the susceptibility of these fungi. / Os dermatófitos são fungos filamentosos queratinofílicos capazes de colonizar e invadir o extrato córneo da pele, pêlo e unhas produzindo as dermatofitoses. Há vários agentes antifúngicos disponíveis para o tratamento das dermatofitoses, entretanto as espécies de dermatófitos possuem perfis de suscetibilidade diferentes, podendo ocorrer resistência relativa ou absoluta. O documento M38-A desenvolvido pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de diferentes agentes antifúngicos para fungos filamentosos, não inclui os dermatófitos. O método de microdiluição em caldo tem sido avaliado por vários pesquisadores, e alguns parâmetros como tamanho do inóculo, temperatura e tempo de incubação e determinação das leituras de CIM são investigados. Neste trabalho, foi avaliada a atividade in vitro de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 isolados de dermatófitos, pertencentes a três espécies, através da técnica de microdiluição em caldo, com modificações na temperatura e tempo de incubação. Adicionalmente, os valores de CIM obtidos pelo método de microdiluição em caldo foram comparados com aqueles obtidos pela técnica de diluição em ágar. Os resultados encontrados através do método de microdiluição em caldo mostraram que todos os isolados produziram crescimento claramente detectável a temperatura de 28oC e os valores de CIMs foram determinados após 4 dias de incubação para os isolados de Trichophyton mentagrophytes e 5 dias para os isolados de T. rubrum e Microsporum canis. Itraconazol, cetoconazol e terbinafina mostraram os menores valores de CIM (0,03 μg/ml) para 33,3%, 31,6% e 15% dos isolados, respectivamente. Uma boa concordância foi observada entre os métodos de diluição em ágar e microdiluição em caldo. A concordância entre os dois métodos foi de 91,6% para cetoconazol e griseofulvina, 83,3% para itraconazol, 81,6% para terbinafina e 73,3% para fluconazol para todos os isolados analisados. Em conclusão, os resultados deste estudo sugerem que uma incubação de 5 dias e temperatura de 28oC, utilizados no método de microdiluição em caldo e diluição em ágar, podem contribuir para definir e melhor interpretar os valores de CIM. Além disso, até que um método de referência de teste de suscetibilidade para dermatófitos seja padronizado, os resultados similares entre os métodos de microdiluição em caldo e diluição em ágar tornam este último útil para testar a suscetibilidade in vitro destes fungos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Mycobacterium genus includes M. tuberculosis complex (CMTB) species and others called nontuberculous mycobacteria (MNT). The CMTB bacilli cause tuberculosis (TB), a bacterial infectious disease, which commonly affects the lungs. Since the MNT cause other mycobacterial infections. The correct diagnosis of diseases caused by mycobacteria is essential for determining treatment. The tuberculosis treatment regimen in Brazil is recommended by the National Tuberculosis Control/Ministry of Health (PNCT/MS) and was recently modified. The main changes proposed by the Technical Advisory Committee of PNCT/MS were: to introduce a fourth drug, ethambutol, during the attack and take the combination of drugs in tablet form, with fixed-dose combinations (FDC) 4 in 1, for intensive treatment phase, and 2 in 1 for the maintenance phase. Due to the high incidence of tuberculosis in Brazil and worldwide, the emergence of resistant strains and the deployment of new therapies by the Ministry of Health, this study aimed to evaluate the susceptibility to antituberculosis or individually associated clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from the University Hospital Mary. The antimicrobial susceptibility alone or associated (rifampicin, isoniazid, pyrazinamide and ethambutol) was evaluated using the microdilution method (MMC) and compared to the proportion method (MP), gold standard method for susceptibility to mycobacteria. The MMC has proven to be a rapid, easily performed and well correlated with the MP. We have found various clinical isolates of M. tuberculosis resistant to one, two or three drug when tested against four drugs alone. However, when they were tested against four drugs associated with the FDC no strain was considered resistant. This fact is against the concept of FDC which aims to unite the four anti-TB drugs to combat the resistance of the bacilli. / O gênero Mycobacterium é constituído por espécies do Complexo M. tuberculosis (CMTB) e outras denominadas de micobactérias não tuberculosas (MNT). Os bacilos do CMTB causam a tuberculose (TB), uma doença infecciosa bacteriana, a qual comumente afeta os pulmões. Já as MNT causam outras micobacterioses. O diagnostico correto das doenças causadas pelas micobactérias é essencial para a definição do tratamento. O esquema de tratamento para a tuberculose no Brasil é preconizado pelo Programa Nacional de Controle da Tuberculose/Ministério da Saúde (PNCT/MS) e foi recentemente modificado. As principais mudanças propostas pelo Comitê Técnico Assessor do PNCT/MS foram: introduzir um quarto fármaco, o etambutol, na fase de ataque e adotar a associação dos fármacos em forma de comprimidos, com doses fixas combinadas (DFC) 4 em 1, para a fase de tratamento intensivo, e, 2 em 1, para fase de manutenção. Devido à grande incidência da tuberculose no Brasil e no mundo, à emergência de cepas resistentes e à implantação de novas terapias pelo Ministério da Saúde, este trabalho objetivou avaliar a suscetibilidade aos tuberculostáticos associados ou individualmente dos isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis do Hospital Universitário de Santa Maria. A suscetibilidade aos antimicrobianos isolados ou associados (rifampicina, isoniazida, pirazinamida e etambutol) foi avaliada através do método de microdiluição em caldo (MMC) e comparados ao método das proporções (MP), método padrão ouro para suscetibilidade de micobactérias. O MMC mostrou-se ser um método rápido, de fácil realização e boa correlação com o MP. Foram encontrados vários isolados clínicos de M. tuberculosis resistentes a um, dois ou três fármacos quando testados frente aos quatro fármacos isoladamente. Porem, quando estes foram, testados contra os quatro fármacos da DFC associados nenhuma cepa foi considerada resistente. Este fato vem de encontro ao conceito da DFC a qual pretende unir os quatro medicamentos anti-TB para combater a resistência dos bacilos.