O presente trabalho teve por objetivo avaliar a atuação de biorreguladores (ANA, BAP, TDZ e 2iP) no desenvolvimento morfogenético de microplantas de pupunheiras. Para tanto, a cada 28 dias aferiram-se o número de propágulos, o desenvolvimento radicular, o comprimento e a taxa de crescimento da parte aérea, número de folhas, oxidação, número de centros meristemáticos na região basal dos explantes e nas bainhas e/ou nos primórdios foliares dos propágulos, número de complexos celulares pró-embriogênicos e as rotas e padrões morfogênicos. Todos os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado. Os dados qualitativos foram apresentados como porcentagens e médias gerais e os dados quantitativos foram submetidos à análise de regressão polinomial ou exponencial. As avaliações morfofisiológicas evidenciaram que o TDZ isoladamente favoreceu o desenvolvimento de gemas adventícias, embora curtas e por vezes, com acúleos. Embriões somáticos somente não se desenvolveram em tratamentos contendo a presença isolada de BAP, TDZ e 2iP, nos demais tratamentos observou-se um comportamento exponencial, cujo número foi reduzido e variou apenas em função do período de cultivo. Maior número de raízes foi observado no tratamento contendo ANA em associação ao BAP, embora o tratamento controle tenha induzido maior porcentagem de explantes enraizados e com maior comprimento, sendo o único a evidenciar ramificação. A presença isolada do TDZ promoveu maior comprimento da parte aérea e sua associação ao ANA promoveu a maior taxa de crescimento. O melhor desenvolvimento da parte aérea de microplantas e explantes de pupunheiras ocorreu em meio de cultura MS isento de biorreguladores ou em meio constituído pela associação entre ANA/TDZ aos 140 dias de cultivo, sendo que o acréscimo isolado das citocininas BAP, TDZ e 2iP no meio de cultura MS promoveu tardiamente a taxa máxima de crescimento. A adição isolada do 2iP no meio de cultura promoveu intensa oxidação nas primeiras folhas desenvolvidas das microplantas em explantes de pupunheiras e a aplicação isolada do TDZ ou associada à ANA promoveu anomalias como dobramento foliar e desenvolvimento de acúleos. O monitoramento das rotas e padrões morfogênicos evidenciou que embriões somáticos com origem multicelular originaramse diretamente na região central da base dos explantes nos tratamentos isentos de biorreguladores, na presença isolada de ANA e de TDZ ou na associação de ambos. Pró-embriões com origem unicelular foram induzidos também na presença isolada de ANA ou TDZ e nas associações ANA/BAP ou ANA/TDZ, sendo que pró-embriões com origem multicelular foram induzidos na presença isolada do TDZ a partir da atividade meristemática apical caulinar e a partir da (bi) polarização de elevado número de centros meristemáticos presentes na extremidade distal da base destes explantes. Gemas adventícias com origem multicelular diretamente da extremidade proximal da base dos explantes foram induzidas em maior freqüência no tratamento isento de biorreguladores e no tratamento contendo ANA/TDZ. Entre os primórdios foliares dos explantes, estas estruturas foram freqüentemente induzidas em tratamentos contendo a presença isolada de ANA. / This study aimed to evaluate the role of bioregulators (NAA, BAP, TDZ and 2iP) on the morphogenetic development of pejibaye microplants. For this, every 28 days, the number of propagules, the root development, the length and the growth rate of shoots, the number of leaves, the oxidation, the number of meristematic centers in the explants basal region and in the leaf sheaths and/or in the propagules leaf primordia, the number of pro-embryogenic cell complex and the morphogenic routes and patterns were measured. All experiments were conducted in a randomized design. Qualitative data were presented as percentages and general averages, and quantitative data were subjected to polynomial regression or exponential analysis. The morphophysiological evaluations showed that the TDZ alone favored the development of adventitious buds, although short, and sometimes with thorns. Only in the treatments with the isolated presence of BAP, TDZ and 2iP, somatic embryos were not developed. For the other treatments there was an exponential behavior, in which the number of somatic embryos was reduced and varied according only to the cultivation period. Although a greater number of roots was observed in the treatment, in which NAA was associated with BAP, the control treatment has induced the highest rate of rooted explants and with greater root length, and has been the single one that produced branches. The isolated presence of TDZ promoted the greater shoot length, and its association with ANA promoted the highest growth rate. The best shoot development of pejibaye microplants and explants occurred in the MS bioregulator-free culture medium of or in the medium with NAA/TDZ association, at140 days of cultivation. Moreover, the isolated addition of the cytokinins BAP, TDZ and 2iP in the medium, later promoted the highest growth rate. In pejibaye explants the addition of 2iP alone promoted intense oxidation of the first developed leaves and the application of TDZ alone or associated with ANA promoted anomalies such as folding leaf and thorn development. The monitoring of the morphogenetic routes and patterns showed that in the treatments that were bioregulator-free, or with the isolated presence of NAA and TDZ, or the association of both, somatic embryos, from multicellular origin, raised up directly in the central region of the explants base. Pro-embryos from unicellular origin were also induced in the isolated presence of NAA or in NAA/BAP and NAA/TDZ associations. Moreover, in the isolated presence of TDZ, pro-embryos from multicellular origin were induced from shoot apical meristem activity and from the (bi) polarization of a large number of meristematic centers in the distal extremity of the explants base. Adventitious buds with multicellular origin from the proximal extremity of the explants base were induced more frequently in the bioregulator-free treatment and in the treatment with NAA/TDZ. Between the leaf explants primordia, adventitious buds were often induced by the treatments with the isolated presence of ANA.

Visando avaliar a atuação dos biorreguladores beta-NOA, AIB e GA3 na morfogênese de microplantas de abacaxi Ananas comosus L. (Merrill) cultivar IAC Gomo-de-Mel estabeleceu-se um experimento com a presença isolada e/ou combinada dos respectivos biorreguladores ao meio de cultura MS. As microplantas foram mantidas em condições de cultura in vitro, com temperatura, luminosidade e fotoperíodo controlados (25 ± 2 C, irradiância de 42 µmol.m-2s-1 e 16 horas, respectivamente) durante 3 meses. Os resultados obtidos com a análise de variância evidenciaram que houve interação do biorregulador de crescimento e o tempo de cultivo para a altura, número de raiz e número de folhas. O beta-NOA induziu a rizogênese foliar nas microplantas a partir de células da bainha do feixe vascular e não apresentou toxicidade nas concentrações utilizadas, ao passo que o AIB mostrou-se mais eficaz para a indução da rizogênese adventícia caulinar. Em relação ao crescimento das microplantas, a ação tanto isolada, como combinada em ambas as concentrações avaliadas de GA3 foram mais eficientes. As análises histológicas evidenciaram alterações no número de estratos da epiderme, hipoderme e mesofilo das folhas cultivadas nos tratamentos com biorreguladores, porém não se verificou alterações citológicas em nenhum dos tratamentos. Acredita-se que a utilização de pulsing seja uma alternativa eficaz para a rizogênese e crescimento em altura das microplantas de abacaxizeiro Gomo-de-mel. / In order to evaluate the action of bioregulators beta-NOA, IBA and GA3 in the pineapple Ananas comosus L. (Merril) cultivar IAC gomo-de-mel microplants morphogenesis an experiment was stablished in order to the presence of the bioregulator alone and in combinations. The microplants were kept in culture in vitro conditions, during 3 months under controlled temperature, light and photoperiod (25 ± 2 C, irradiance de 42 µmol.m- 2s-1 e 16 hours). The analysis of variance showed the interaction interaction between the use of bioregulator and the period of cultivation on hight, number of roots and leaves. The beta-NOA induced leaf rhizogensis in the microplants from the bundle sheath and there was no sign of toxicity with the used concentrations. The IBA showed to be more effective in the adventicious steam rhizogenesis. The isolated and combinated actions of GA3 were the most effective treatment to microplants growing. The histological analysis showed alterations on the epidermis, hypodermis and mesophyll number of layers of the cultivated leaves with this bioregulator, but neither of the treatments showed citological alterations. It is believed that the use of pulsing would be an effective alternative for the rhizogenesis and growing of the gomo de mel pineapple microplants.

A pupunha (Bactris gasipaes Kunth-Arecaceae) é uma palmeira de extrema importância ecológica e na agroindústria palmiteira, sendo essencialmente propagada por sementes, uma vez que, devido às sérias dificuldades na aclimatização, a micropropagação dessa espécie é prejudicada. Neste contexto, foram comparadas por meio de análises anatômicas e fisiológicas, folhas de pupunheiras cultivadas in vitro, ex vitro e in vivo, com o intuito de verificar as prováveis alterações, que possam influenciar na adaptação das microplantas às condições ex vitro, uma vez que a lâmina foliar é o órgão que mais se modifica em resposta as alterações ambientais. As plantas cultivadas in vitro e posteriormente transferidas para ambiente ex vitro, passaram por um processo de aclimatização constituído de três etapas de rustificação, onde na 1ª etapa as microplantas foram mantidas por três dias na sala de crescimento com os tubos de ensaio abertos, apresentando 100% de sobrevivência. Na 2ª etapa (50 dias de aclimatização) as microplantas permaneceram por quarenta e sete dias em sala de crescimento com temperatura e luminosidade controladas, apresentando 95% de sobrevivência. Na 3ª etapa (180 dias de aclimatização), onde as microplantas permaneceram por 130 dias no ripado sob condições de sombra (sombrite com malha 50%), com percentual de 70% de sobrevivência. Durante o processo de aclimatização foram coletadas amostras de folhas sob condição in vitro, ex vitro (aos 50, 90 e 180 dias de aclimatização) e in vivo, onde foram realizadas análises anatômicas por meio de microscopia eletrônica de varredura e de luz, e fisiológicas, pela taxa de condutância estomática, transpiração e fotossíntese, obtidas pelo IRGA (analisador de gás infravermelho), e o teor de clorofila, obtida pelo SPAD-502 (Soil and Plant Analysis Development). Os dados analisados foram comparados entre si, e suas médias submetidas à análise de variância e comparadas pelo teste de Tukey. As folhas das pupunheiras apresentaram as mesmas estruturas anatômicas básicas em todas as condições de cultivo, e como resposta a aclimatização observou-se o aumento na espessura do mesofilo e na quantidade fibras vasculares (área ocupada pelas fibras na lâmina foliar). Também foram observadas alterações fisiológicas, como a diminuição da condutância estomática, com conseqüente queda na taxa de transpiração e fotossíntese logo após o transplante das microplantas para as condições ex vitro; sendo que no decorrer do processo de aclimatização observou-se a recuperação destes fatores com a taxa de fotossíntese se igualando as das plantas in vivo. O mesmo verificou-se em relação ao teor de clorofila que apresentou um aumentou gradativo em relação ao tempo de aclimatização. As alterações anatômicas e fisiológicas não afetaram de forma significativa o processo de aclimatização, ao contrário evidenciaram um mecanismo de adaptação da espécie às condições de cultivo, permitindo considerar como fatores determinantes para o estabelecimento do protocolo de aclimatização, o ambiente com elevada umidade relativa do ar (ex vitro), o substrato composto de solo tipo latossolo vermelho-amarelo e o tratamento profilático com fungicidas. / The peach palm (Bactris gasipaes Kunth-Arecaceae) is a palm of extreme importance in ecological and palm tree agribusiness and is being mainly propagated by seed, once; due to serious difficulties in acclimatization, the micropropagation of this species is a hard process. In this context, pejibaye leaves from in vitro, ex vitro and in vivo cultivated plants were compared using anatomical and physiological analysis in order to detect probable alterations that would influence the microplants adaptation to ex vitro conditions, since the leaf blade is the plant organ that more is modifying in response to environmental changes. The in vitro cultivated plants that were subsequently transferred to ex vitro environment went through an acclimatization process that consisted of three rustification phases. In the first stage the microplants were maintained in the growth room for three days in opened test tubes, featuring 100 % of survival. In the second stage (50 days of acclimatization) the microplants remained for forty-seven days in the growth room with controlled lighting and temperature, resulting in 95% of survival. In the third stage (180 days of acclimatization) the microplants remained for 130 days covered with black shadow screen (\"sombrite\" mesh with 50%) on the sides, resulting in 70% of survival. During the acclimatization process leaves samples of in vitro, ex vitro (to 50, 90 and 180 days of acclimatization) and in vivo cultivated plants were collected and used for anatomical analyses using light and scanning electron microscopy and for physiological analyses using stomatal conductance, transpiration and photosynthesis rates, obtained by IRGA (infrared gas analyzer), and the content of chlorophyll, obtained by the SPAD-502 (Soil and Plant Analysis Development). The analyzed data were compared with each other, and their average subjected to analysis of variance and compared by Tukey test. The peach palm had the same basic anatomical structures in all conditions of cultivation, and in response to the acclimatization process there was an increase in the thickness of the mesophyll and in quantity of vascular fibers (area occupied by the fibers in leaf blade). Physiological changes were also observed, as the decrease in stomatal conductance, with a consequent fall in the photosynthesis and transpiration rates soon after the microplants transplant to ex vitro conditions. During the acclimatization process was the recovery of these factors with the photosynthesis rate equaling the rate of in vivo plants. The same occurred in relation to the level of chlorophyll which showed a gradual increase in relation to the period of acclimatization. These anatomical and physiological changes did not affect significantly the acclimatization process, on the contrary, showed a adaptation mechanism of the species to the cultivation conditions, allowing consider as determining factors for the establishment of a acclimatization protocol, the environment with high relative humidity (ex vitro), the substrate consisting of Red Yellow latosol and the fungicide prophylactic treatment.

As atividades que envolvem a floricultura vêm se destacando positivamente no cenário econômico do agronegócio brasileiro. Dentre as espécies de plantas utilizadas para este fim ressaltam-se as espécies pertencentes à família botânica Asteraceae, principalmente as do gênero Chrysanthemum. A espécie C. cinerariaefolium Vis. (Piretro da Dalmácia) é mundialmente cultivada visando à produção de aleloquímicos que apresentam atividades de inseticidas naturais (piretrinas). No Brasil chegou a ser produzida para esse fim em larga escala, no município de Taquara-RS na década de 30 a 40. Recentemente o interesse de seu cultivo tem aumentado como uma alternativa natural de manejo de pragas como planta ornamental, principalmente para jardins. Contudo, o fato de não produzir sementes férteis limita sua capacidade de propagação massal. Visando aperfeiçoar sua micropropagação foram realizados dois experimentos. No experimento 1 foi avaliado aos 30 dias de cultivo a influência de cinco concentrações de hipoclorito de sódio (10, 20, 30, 40 e 50% do produto comercial Mazzarolo) e cinco tempos de permanência na solução durante a desinfestação dos explantes (5, 10, 15, 20, 25 min.). Ao todo foram isolados 125 meristemas totalizando 25 tratamentos com cinco repetições. Os explantes isolados foram inoculados no meio de isolamento, o qual foi constituído de MS + 1,0 mg.L-1 de BAP + 0,1 mg.L-1 de GA3 + 0,01 mg.L-1 ANA + 30 g.L-1 de Sacarose em 7,0 g.L-1 de Agar. No experimento 2 foi avaliado a influência das diferentes concentrações de hipoclorito e dois tempos de permanência na solução desinfetante sobre a porcentagem de necrose, estruturas amorfas, plântulas formadas e comprimento de brotos. As plântulas regeneradas do experimento 1 foram inoculadas no meio de multiplicação que constou do MS + 0,4 mg.L-1 de Thiamina HCl + 100 mg.L-1 de Mio-Inositol + 0,05 mg.L-1 de ANA + 1,0 mg.L-1 de BAP + 40 g.L-1 de Sacarose e 7,0 g.L-1 de Agar. O pH dos meios foi ajustado em 5,9 antes da autoclavagem. Os resultados obtidos no experimento 1 indicaram que quanto maior o tempo de permanência na solução, maior a porcentagem de necrose. Porém, quanto menor a permanência maior a taxa de contaminação microbiana. No experimento 2, observou-se que a porcentagem de necrose é maior na concentração de 50%. Não houve influência dos fatores analisados na produção de estruturas amorfas. Para o número de brotos/explante e comprimento de brotos, o melhor desempenho se deu na solução 30%. Porém, a taxa de brotos por explante diminuiu à medida que aumentou o tempo de permanência na solução. Com relação ao comprimento dos brotos, os melhores resultados foram observados até o tempo de 15 minutos de permanência. Assim conclui-se que C. cinerariaefolium Vis. responde positivamente ao cultivo in vitro. A taxa de necrose aumenta à medida que aumenta a concentração de hipoclorito. Por outro lado, a taxa de contaminação aumenta à medida que diminui a concentração da solução desinfetante. A concentração de hipoclorito de sódio e o tempo de permanência na solução desinfetante afetam o número e o comprimento de brotos produzidos nos subcultivos. / The activities that involve floriculture have distinguished positively in the economic scenario of the Brazilian agribusiness. Among the plant species used for that purpose it can be distinguished the species belonging to the botanical family Asteraceae, mainly from the genus Chrysanthemum. The species C. cinerariaefolium Vis. is worldwide cultivated in order to produce the alelochemicals, which have activities of natural insecticides (pyretrine). In Brazil it was produced in large scale, in the Taquara-RS County in the decade of 30 to 40. Recently the interest on its cultivation has increased as natural alternative of pest management as ornamental plant, mainly in yards. However, the fact of no seed is produced by the plant that limits its capacity of massal production. In order to optimize its micropropagation two experiments were developed. In the experiment 1 it was evaluated 30 days after cultivation the influence of five concentrations of sodium hipochlorine (10, 20, 30, 40 and 50% of the commercial product Mazzarolo), and five time lengths of the explants permanence in the disinfecting solution (5, 10, 15, 20 and 25 min.). It was isolated 125 meristems, 25 treatments with five replications. The isolated explants were inoculated in isolation media, that was constituted of MS + 1.0 mg.mL-1 of BAP + 0.1 mg.L-1 of GA3 + 0.01 mg.L-1 ANA + 30 g.L- 1 of sucrose in 7.0 g.L-1 of Agar. In the experiment 2 it was evaluated the influence of different concentrations of hipochlorine and two length of time in disinfection solution measuring the percentage of necrosis, amorphous structures, seedlings formed and length of the sprouts. The regenerated seedlings from experiment 1 were inoculate in a medium of multiplication that was of MS + 0.4 mg.L-1 of Thiamine HCl + 100 mg.L-1 of Mio-Inositol 0.05 mg.L-1 of ANA + 1.0 mg.L-1 of BAP + 40 g.L-1 of sucrose and 7.0 g.L-1 of Agar. The pH of the medium was adjusted to 5.9 before the autoclaving process. The results obtained in the experiment 1 indicated that the higher the time length in the solution, the higher is the percentage of necrosis. However, the higher is the permanence of higher rate of microbial contamination. In the experiment 2; it was observed that the percentage of necrosis is higher at the concentration of 50%. There was no influence of the analyzed factors in the yield of amorphous structures. For the number of sprouts/explants and length of sprouts, the better performance was in the solution of 30%. However, the rate of sprouts per explants diminished as the length of time in the solution increased. The best results for sprout length were obtained up to 15 minutes of permanence. Therefore, it can be concluded that C. cinerariaefolium Vis. responds positively to in vitro culture. The rate of necrosis increases as the hipochlorine concentration is higher. On the other hand, the contamination rate increases as the disinfection solution diminishes. The concentration o hipochlorine sodium as the length of time of permanence in the initial disinfecting solution used during the explants disinfection affects the number and the sprout length produced during the subculture.

O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar a influência da interação entre o nitrato de amônio e nitrato de potássio sobre as respostas morfogênicas de embriões somáticos de pupunheiras in vitro a fim de otimizar o protocolo de micropropagação da espécie. As concentrações utilizadas foram 0, 825, 1650, 2475 e 3300 mg L-1 de nitrato e amônio e 0, 950 , 1900, 2850 e 3800 mg L-1 de nitrato de potássio, combinadas entre si, perfazendo um total de 25 tratamentos. Os tratamentos foram preparados a partir da solução completa de Murashige e Skoog, devidamente modificado para as proporções desses íons no suprimento de nitrogênio. Utilizaram-se duzentos e cinqüenta embriões somáticos com características morfológicas homogêneas, isentos de raízes e folhas, obtidos a partir de microplantas mantidas em sala de crescimento com temperatura e luminosidade controladas. Foram aferidos dados do comprimento da parte aérea e da raiz, o número de raízes, brotações e folhas, a porcentagem de ramificação da raiz, a porcentagem de raízes finas, medianas e grossas, em quatro períodos de cultura, a cada 60 dias, totalizando 240 dias de cultivo. Ao final desse período, avaliou-se também o teor de proteínas totais solúveis, o teor de clorofila pelo índice SPAD e os teores de macro e micronutrientes nas microplantas. Utilizou-se delineamento estatístico inteiramente casualizado e os dados foram submetidos ao teste de Bartlett a 5% e análise de variância (ANOVA) a 1% e 5% de probabilidade de erro ou foi elaborada uma matriz de correlação de Pearson a 1% e 5% de probabilidade de erro, conforme o caso. Os resultados permitiram inferir que aos 240 dias de cultivo as microplantas passam a investir mais em formação de parte aérea e aumentam a porcentagem de raízes finas, e funcionais. Os tratamentos que melhor favoreceram a formação de proteínas foram aqueles com concentração de 2475 mg L-1 de NH4NO3 ou com 2850 mg L-1 de KNO3. Os maiores índices SPAD ocorreram nos tratamentos com até 1650 mg L-1 de NH4NO3 combinado com até 1900 mg L-1 de KNO3. Diferentes combinações dos sais de NH4NO3 e KNO3 podem favorecer a absorção de cada nutriente. Conclui-se que os resultados obtidos no trabalho podem contribuir com a melhoria do protocolo de micropropagação de B. gasipaes, na medida em que permitem estabelecer o melhor tratamento para maximização de uma resposta específica desejada para cada momento do processo de cultivo dos embriões somáticos de pupunheiras, como enraizamento, crescimento da parte aérea, formação de proteínas e formação de brotações, facilitando dessa forma a otimização da produção de microplantas com características desejáveis e, conseqüentemente, sua aclimatização e desenvolvimento ex vitro. / This study aimed to evaluate the influence of the interaction between ammonium nitrate and potassium nitrate on the morphogenetic responses of peach palm somatic embryos in vitro cultivated, to optimize the micropropagation protocol for this species. The concentrations used were 0, 825, 1650, 2475 and 3300 mg L-1 of ammonium nitrate and 0, 950 , 1900, 2850 and 3800 mg L-1 of potassium nitrate, in all possible associations, totalizing 25 treatments. The treatments were prepared with the complete solution of Murashige and Skoog, with modified proportions of these ions in relation to the nitrogen supply. Two hundred and fifty somatic embryos with homogeneous morphological characteristics, without roots and leaves, obtained from microplants from a controlled temperature and luminosity room, were used in the experiment. Every 60 days, during 240 days, the length of shoot and root, the number of roots, propagules and leaves and the root architecture were measured. At the end of 240 days of cultivation, it was also analyzed the total soluble proteins, the foliar chlorophyll by a chlorophyll meter equipment (SPAD-502) and the macronutrients and micronutrients concentrations in the microplants. The experiment was conducted in a randomized design. The data were subjected to Bartlett´s test at 5% and variance analysis (ANOVA) at 1% and 5% of probability of error, or it was made a correlation matrix at 1% and 5% of probability of error, according to each analysis. The results showed that at 240 days of cultivation the microplants spent more energy building the shoot part and raised the percentage of thin, functional root. The best treatments for proteins formation were those with 2475 mg L-1 of NH4NO3 or with 2850 mg L-1 of KNO3. The highest SPAD index occurred in the treatments with at most 1650 mg L-1 of NH4NO3 associated with at most 1900 mg L-1 of KNO3. Different associations of NH4NO3 e KNO3 may favor the absorption of each nutrient. We conclude that the results obtained may contribute to the optimization of the B. gasipaes micropropagation protocol, as it is possible to establish the best treatment for maximization of a specific answer for each moment of the somatic embryos cultivations process, such as rooting, shoot growth, propagules and protein formation, and thus increase the optimization of microplants production with wanted characteristics and hence its acclimatization and ex vitro development.

As espécies Cattleya labiata Lindley e a Cattleya eldorado Linden, nativas da Mata Atlântica e Amazônia, respectivamente, encontram-se sob forte risco de desaparecimento na natureza, sendo, portanto, necessário o desenvolvimento de métodos eficientes de propagação de suas mudas, dentre os quais se destaca a micropropagação. A eficiência do cultivo in vitro de orquídeas está associada aos meios de cultura utilizados e, principalmente, aos reguladores de crescimento. O trabalho teve como objetivo avaliar a influência de paclobutrazol (PBZ) no desenvolvimento das microplântulas cultivadas in vitro. Plântulas provenientes de germinação in vitro, com 1,0 ± 0,2 cm de comprimento, foram utilizadas no estudo. No primeiro experimento, utilizou-se como controle o meio de cultura MS isento de reguladores de crescimento vegetal. Nos tratamentos, o meio MS foi suplementado com quatro concentrações de PBZ 1,0; 2,0; 4,0 e 6,0 mg.L-1; com ácido naftalenoacético (ANA) 1,0 mg.L-1 associado a 6-benzilaminopurina (BAP) 1,0 mg.L-1 e com a combinação de 4,0 mg.L-1 PBZ, com 1,0 mg.L-1 ANA e 1,0 mg.L-1 BAP. As avaliações morfológicas, número de brotos, comprimento da parte aérea (CPA), comprimento da maior raiz (CMR) e comprimento da lâmina foliar (CLF), foram realizadas no início do experimento e nos subcultivos a cada 40 dias, durante 160 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo trifatorial com parcelas subdivididas no tempo, com seis repetições por tratamento. Um segundo experimento foi realizado utilizando a técnica de pulse. Como controle foi utilizado meio de cultura MS, e para os tratamentos foi utilizado o mesmo meio acrescido de concentrações crescentes de PBZ com diferentes tempos de exposição, sendo: T0= controle (MS); T1= 1,0 mg.L-1 PBZ por 40 dias; T2= 10,0 mg.L-1 PBZ por 4 dias e T3= 100,0 mg.L-1 PBZ por 4 horas. Foram feitas as avaliações de CPA, CLF, CMR, número de raízes, massa fresca e massa seca da parte aérea, massa fresca e massa seca de raiz, massa fresca e massa seca total, contagem e caracterização estomática e avaliação anatômica do tecido radicular. O experimento foi conduzido no delineamento inteiramente casualizado totalizando quatorze repetições por tratamento. O tratamento com 1,0 mg.L-1 de PBZ por 40 dias promoveu maior desenvolvimento e vigor do sistema radicular, aumentando a espessura das raízes, podendo contribuir para a fase de aclimatização das microplântulas. Os tratamentos com pulse reduziram significativamente a parte aérea das microplântulas, não sendo recomendado na micropropagação da C. labiata. / The Species Cattleya labiata Lindley and Cattleya eldorado Linden, native to the Atlantic Forest and Amazon, respectively, are under high risk of extinction in nature, therefore, necessary to develop efficient methods of spreading their seedlings, among which highlights micropropagation. The efficiency of in vitro cultivation of orchids is associated with culture media, and especially the growth regulators. The study aimed to evaluate the influence of paclobutrazol (PBZ) in the development of in vitro microplantlets. Seedlings from germination in vitro, with 1.0 ± 0.2 cm in length, were used in the study. In the first experiment, we used to control the MS culture medium free of plant growth regulators. In the treatments, MS medium was supplemented with four concentrations of PBZ 1.0, 2.0, 4.0 and 6.0 mg L-1, with naphthaleneacetic acid (NAA) 1.0 mg L-1 associated with 6-benzylaminopurine (BAP) 1.0 mg L-1 and with the combination of 4.0 mg L-1 PBZ with 1.0 mg.L-1 NAA and 1.0 mg L-1 BAP. The morphological evaluations, number of shoots, shoot length (CPA), longest root length (CMR) and leaf blade length (CLF) were performed at the beginning of the experiment and in subcultures every 40 days during 160 days. The experimental design was completely randomized in three-factor split-plot arrangement in time, with six replicates per treatment. A second experiment was performed using the technique of \"pulse\". It was used as control MS medium, and the treatments we used the same medium plus increasing concentrations of PBZ with different exposure times, as follows: T0 = control (MS), T1 = 1.0 mg L-1 PBZ for 40 days, T2 = 10.0 mg L-1 PBZ for 4 days and T3 = 100.0 mg L-1 PBZ for 4 hours. Assessments were made CPA, CLF, CMR, number of roots, fresh and dry mass of shoots, fresh weight and dry weight of root, fresh weight and total dry matter, stomatal counting and characterization and evaluation of the anatomic root tissue. The experiment was conducted in a completely randomized a total of fourteen replicates per treatment. Treatment with 1.0 mg L-1 of PBZ for 40 days promoted further development and vigor of the root system, increasing the thickness of the roots and may contribute to the acclimatization phase of microplantlets. Treatments with \"pulse\" significantly reduced the shoot microplantlets and Its not recommended to the micropropagation of C. labiata.

O objetivo deste estudo foi otimizar a multiplicação de brotações de Eucalyptus globulus Labill., por meio da definição do tamanho de explantes iniciais e de ajustes de nutrientes minerais do meio de cultura. Os meios de cultura utilizados foram o JADS (CORREIA et al., 1995), JADS modificado e o MS. Os tamanhos dos explantes foram definidos por suas massas frescas iniciais e classificados em T1 (0,1430g), T2 (0,2685g) e T3 (0,5180g). Inicialmente, os ajustes dos nutrientes minerais foram realizados de forma individual para cada nutriente e concentração utilizados: nitrogênio (NH4NO3), com suplementação de 45,0 (N1) e 65,0 (N2) mmol L-1; fósforo (KH2PO4), com suplementação de 1,0 (P1) e 2,0 (P2) mmol L-1; cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação 7,5 (Ca1) e 10,0 (Ca2) mmol L-1; e Magnésio (MgSO4.7H2O), com suplementação de 1,5 (Mg1) e 4,5 (Mg2) mmol L-1. Com base nos resultados iniciais, novos ajustes para nitrogênio e cálcio foram realizados: nitrogênio (NH4NO3) e cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação de 45,0 e 7,5 mmol L-1 (N1Ca1), respectivamente, e suplementação de 60,0 e 7,5 mmol L-1 (N2Ca1), respectivamente. Todos os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente aleatorizado (DIA); com 3 tratamentos e 4 repetições (tamanho do explante); 10 tratamentos e 3 repetições (ajuste inicial de nutrientes minerais) e 4 tratamentos e 6 repetições (ajuste final de nutrientes minerais). As características de crescimento, massas fresca e seca, porcentagem de massa seca e taxa de crescimento relativo (%) das brotações foram avaliadas semanalmente, durante os 28 dias de cultivo in vitro. As características de crescimento das brotações foram pouco afetadas pelo tamanho do explante inicial; no entanto, apresentaram deformações morfológicas em altas concentrações de nitrogênio. Todos os tratamentos apresentaram incrementos de massas seca e fresca. As porcentagens de massa seca foram menores nos tratamentos com maiores concentrações de nitrogênio (MS, N2 e N2Ca1). As maiores taxas de crescimento relativo foram observadas aos 7 dias de cultivo, e decresceram ao longo do período estudado. O meio de cultura JADS, apresentou crescimento das brotações considerado ótimo, porém não máximo. O meio de cultura MS apresentou crescimento das brotações fora dos padrões considerados ótimo e máximo. O meio de cultura JADS modificado, contendo 45,0 (N), 3,0 (P), 7,5 (Ca) e 3,0 (Mg), apresentou crescimento máximo das brotações e próximo ao ótimo. / The aim of this work was to optimize Eucalyptus globulus Labill. shoot multiplication in vitro through the definition of the initial explant size and the adjustment of mineral nutrients in the culture media. The culture media utilized were JADS (CORREIA et al., 1995), modified JADS and MS. The explants fresh weight were 0.1430 g (T1); 0.2685 g (T2) and 0.5180 g (T3). Initially, the mineral nutrient and concentrations utilized were: nitrogen (NH4NO3) with 45.0 (N1) and 60.0 (N2) mmol L-1; phosphate (KH2PO4) with 1.0 (P1) and 2.0 (P2) mmol L-1; calcium (CaCl2.2H2O) with 7.5 (Ca1) and 10.0 (Ca2) mmol L-1 and magnesium (MgSO4.7H2O) with 1.5 (Mg1) and 4.5 (Mg2) mmol L-1. Based on the initials results, new adjustments were made for nitrogen and calcium, and the concentrations utilized were (NH4NO3) and (CaCl2.2H2O) with 45.0 and 7.5 mmol L-1 (N1Ca1) and 60.0 and 7.5 mmol L-1 respectively. All the tests were carried out in a completely randomized design; with 3 treatments and 4 replicates (explant size); 10 treatments and 3 replicates (initial adjustment of mineral nutrients) and 4 treatments and 6 replicates (final mineral nutrient adjustment). The shoot growth characteristics, fresh and oven dry weight, oven dry weight percentage and relative growth rate were evaluated weekly for 28 day culture period. The explant initial size had little effect on the shoot growth characteristics. All the treatments with mineral nutrient adjustments showed fresh and oven dry weight increase. The oven dry weight percentage were lower in the treatments with high nitrogen concentrations (MS, N2 and N2Ca1). The highest relative growth rates were observed at the 7th day evaluation and lowered along the culture period. The JADS culture medium showed shoot growths considered optimum but not maximum. The MS culture medium showed shoot growths not considered optimum or maximum. The adjusted culture media with 45.0 (N), 3.0 (P), 7.5 (Ca) and 3.0 (Mg) showed shoot growth considered maximum and almost optimum.

O objetivo deste estudo foi otimizar a multiplicação de brotações de Eucalyptus globulus Labill., por meio da definição do tamanho de explantes iniciais e de ajustes de nutrientes minerais do meio de cultura. Os meios de cultura utilizados foram o JADS (CORREIA et al., 1995), JADS modificado e o MS. Os tamanhos dos explantes foram definidos por suas massas frescas iniciais e classificados em T1 (0,1430g), T2 (0,2685g) e T3 (0,5180g). Inicialmente, os ajustes dos nutrientes minerais foram realizados de forma individual para cada nutriente e concentração utilizados: nitrogênio (NH4NO3), com suplementação de 45,0 (N1) e 65,0 (N2) mmol L-1; fósforo (KH2PO4), com suplementação de 1,0 (P1) e 2,0 (P2) mmol L-1; cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação 7,5 (Ca1) e 10,0 (Ca2) mmol L-1; e Magnésio (MgSO4.7H2O), com suplementação de 1,5 (Mg1) e 4,5 (Mg2) mmol L-1. Com base nos resultados iniciais, novos ajustes para nitrogênio e cálcio foram realizados: nitrogênio (NH4NO3) e cálcio (CaCl2.2H2O), com suplementação de 45,0 e 7,5 mmol L-1 (N1Ca1), respectivamente, e suplementação de 60,0 e 7,5 mmol L-1 (N2Ca1), respectivamente. Todos os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente aleatorizado (DIA); com 3 tratamentos e 4 repetições (tamanho do explante); 10 tratamentos e 3 repetições (ajuste inicial de nutrientes minerais) e 4 tratamentos e 6 repetições (ajuste final de nutrientes minerais). As características de crescimento, massas fresca e seca, porcentagem de massa seca e taxa de crescimento relativo (%) das brotações foram avaliadas semanalmente, durante os 28 dias de cultivo in vitro. As características de crescimento das brotações foram pouco afetadas pelo tamanho do explante inicial; no entanto, apresentaram deformações morfológicas em altas concentrações de nitrogênio. Todos os tratamentos apresentaram incrementos de massas seca e fresca. As porcentagens de massa seca foram menores nos tratamentos com maiores concentrações de nitrogênio (MS, N2 e N2Ca1). As maiores taxas de crescimento relativo foram observadas aos 7 dias de cultivo, e decresceram ao longo do período estudado. O meio de cultura JADS, apresentou crescimento das brotações considerado ótimo, porém não máximo. O meio de cultura MS apresentou crescimento das brotações fora dos padrões considerados ótimo e máximo. O meio de cultura JADS modificado, contendo 45,0 (N), 3,0 (P), 7,5 (Ca) e 3,0 (Mg), apresentou crescimento máximo das brotações e próximo ao ótimo. / The aim of this work was to optimize Eucalyptus globulus Labill. shoot multiplication in vitro through the definition of the initial explant size and the adjustment of mineral nutrients in the culture media. The culture media utilized were JADS (CORREIA et al., 1995), modified JADS and MS. The explants fresh weight were 0.1430 g (T1); 0.2685 g (T2) and 0.5180 g (T3). Initially, the mineral nutrient and concentrations utilized were: nitrogen (NH4NO3) with 45.0 (N1) and 60.0 (N2) mmol L-1; phosphate (KH2PO4) with 1.0 (P1) and 2.0 (P2) mmol L-1; calcium (CaCl2.2H2O) with 7.5 (Ca1) and 10.0 (Ca2) mmol L-1 and magnesium (MgSO4.7H2O) with 1.5 (Mg1) and 4.5 (Mg2) mmol L-1. Based on the initials results, new adjustments were made for nitrogen and calcium, and the concentrations utilized were (NH4NO3) and (CaCl2.2H2O) with 45.0 and 7.5 mmol L-1 (N1Ca1) and 60.0 and 7.5 mmol L-1 respectively. All the tests were carried out in a completely randomized design; with 3 treatments and 4 replicates (explant size); 10 treatments and 3 replicates (initial adjustment of mineral nutrients) and 4 treatments and 6 replicates (final mineral nutrient adjustment). The shoot growth characteristics, fresh and oven dry weight, oven dry weight percentage and relative growth rate were evaluated weekly for 28 day culture period. The explant initial size had little effect on the shoot growth characteristics. All the treatments with mineral nutrient adjustments showed fresh and oven dry weight increase. The oven dry weight percentage were lower in the treatments with high nitrogen concentrations (MS, N2 and N2Ca1). The highest relative growth rates were observed at the 7th day evaluation and lowered along the culture period. The JADS culture medium showed shoot growths considered optimum but not maximum. The MS culture medium showed shoot growths not considered optimum or maximum. The adjusted culture media with 45.0 (N), 3.0 (P), 7.5 (Ca) and 3.0 (Mg) showed shoot growth considered maximum and almost optimum.

O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar a influência da interação entre o nitrato de amônio e nitrato de potássio sobre as respostas morfogênicas de embriões somáticos de pupunheiras in vitro a fim de otimizar o protocolo de micropropagação da espécie. As concentrações utilizadas foram 0, 825, 1650, 2475 e 3300 mg L-1 de nitrato e amônio e 0, 950 , 1900, 2850 e 3800 mg L-1 de nitrato de potássio, combinadas entre si, perfazendo um total de 25 tratamentos. Os tratamentos foram preparados a partir da solução completa de Murashige e Skoog, devidamente modificado para as proporções desses íons no suprimento de nitrogênio. Utilizaram-se duzentos e cinqüenta embriões somáticos com características morfológicas homogêneas, isentos de raízes e folhas, obtidos a partir de microplantas mantidas em sala de crescimento com temperatura e luminosidade controladas. Foram aferidos dados do comprimento da parte aérea e da raiz, o número de raízes, brotações e folhas, a porcentagem de ramificação da raiz, a porcentagem de raízes finas, medianas e grossas, em quatro períodos de cultura, a cada 60 dias, totalizando 240 dias de cultivo. Ao final desse período, avaliou-se também o teor de proteínas totais solúveis, o teor de clorofila pelo índice SPAD e os teores de macro e micronutrientes nas microplantas. Utilizou-se delineamento estatístico inteiramente casualizado e os dados foram submetidos ao teste de Bartlett a 5% e análise de variância (ANOVA) a 1% e 5% de probabilidade de erro ou foi elaborada uma matriz de correlação de Pearson a 1% e 5% de probabilidade de erro, conforme o caso. Os resultados permitiram inferir que aos 240 dias de cultivo as microplantas passam a investir mais em formação de parte aérea e aumentam a porcentagem de raízes finas, e funcionais. Os tratamentos que melhor favoreceram a formação de proteínas foram aqueles com concentração de 2475 mg L-1 de NH4NO3 ou com 2850 mg L-1 de KNO3. Os maiores índices SPAD ocorreram nos tratamentos com até 1650 mg L-1 de NH4NO3 combinado com até 1900 mg L-1 de KNO3. Diferentes combinações dos sais de NH4NO3 e KNO3 podem favorecer a absorção de cada nutriente. Conclui-se que os resultados obtidos no trabalho podem contribuir com a melhoria do protocolo de micropropagação de B. gasipaes, na medida em que permitem estabelecer o melhor tratamento para maximização de uma resposta específica desejada para cada momento do processo de cultivo dos embriões somáticos de pupunheiras, como enraizamento, crescimento da parte aérea, formação de proteínas e formação de brotações, facilitando dessa forma a otimização da produção de microplantas com características desejáveis e, conseqüentemente, sua aclimatização e desenvolvimento ex vitro. / This study aimed to evaluate the influence of the interaction between ammonium nitrate and potassium nitrate on the morphogenetic responses of peach palm somatic embryos in vitro cultivated, to optimize the micropropagation protocol for this species. The concentrations used were 0, 825, 1650, 2475 and 3300 mg L-1 of ammonium nitrate and 0, 950 , 1900, 2850 and 3800 mg L-1 of potassium nitrate, in all possible associations, totalizing 25 treatments. The treatments were prepared with the complete solution of Murashige and Skoog, with modified proportions of these ions in relation to the nitrogen supply. Two hundred and fifty somatic embryos with homogeneous morphological characteristics, without roots and leaves, obtained from microplants from a controlled temperature and luminosity room, were used in the experiment. Every 60 days, during 240 days, the length of shoot and root, the number of roots, propagules and leaves and the root architecture were measured. At the end of 240 days of cultivation, it was also analyzed the total soluble proteins, the foliar chlorophyll by a chlorophyll meter equipment (SPAD-502) and the macronutrients and micronutrients concentrations in the microplants. The experiment was conducted in a randomized design. The data were subjected to Bartlett´s test at 5% and variance analysis (ANOVA) at 1% and 5% of probability of error, or it was made a correlation matrix at 1% and 5% of probability of error, according to each analysis. The results showed that at 240 days of cultivation the microplants spent more energy building the shoot part and raised the percentage of thin, functional root. The best treatments for proteins formation were those with 2475 mg L-1 of NH4NO3 or with 2850 mg L-1 of KNO3. The highest SPAD index occurred in the treatments with at most 1650 mg L-1 of NH4NO3 associated with at most 1900 mg L-1 of KNO3. Different associations of NH4NO3 e KNO3 may favor the absorption of each nutrient. We conclude that the results obtained may contribute to the optimization of the B. gasipaes micropropagation protocol, as it is possible to establish the best treatment for maximization of a specific answer for each moment of the somatic embryos cultivations process, such as rooting, shoot growth, propagules and protein formation, and thus increase the optimization of microplants production with wanted characteristics and hence its acclimatization and ex vitro development.

As espécies Cattleya labiata Lindley e a Cattleya eldorado Linden, nativas da Mata Atlântica e Amazônia, respectivamente, encontram-se sob forte risco de desaparecimento na natureza, sendo, portanto, necessário o desenvolvimento de métodos eficientes de propagação de suas mudas, dentre os quais se destaca a micropropagação. A eficiência do cultivo in vitro de orquídeas está associada aos meios de cultura utilizados e, principalmente, aos reguladores de crescimento. O trabalho teve como objetivo avaliar a influência de paclobutrazol (PBZ) no desenvolvimento das microplântulas cultivadas in vitro. Plântulas provenientes de germinação in vitro, com 1,0 ± 0,2 cm de comprimento, foram utilizadas no estudo. No primeiro experimento, utilizou-se como controle o meio de cultura MS isento de reguladores de crescimento vegetal. Nos tratamentos, o meio MS foi suplementado com quatro concentrações de PBZ 1,0; 2,0; 4,0 e 6,0 mg.L-1; com ácido naftalenoacético (ANA) 1,0 mg.L-1 associado a 6-benzilaminopurina (BAP) 1,0 mg.L-1 e com a combinação de 4,0 mg.L-1 PBZ, com 1,0 mg.L-1 ANA e 1,0 mg.L-1 BAP. As avaliações morfológicas, número de brotos, comprimento da parte aérea (CPA), comprimento da maior raiz (CMR) e comprimento da lâmina foliar (CLF), foram realizadas no início do experimento e nos subcultivos a cada 40 dias, durante 160 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo trifatorial com parcelas subdivididas no tempo, com seis repetições por tratamento. Um segundo experimento foi realizado utilizando a técnica de pulse. Como controle foi utilizado meio de cultura MS, e para os tratamentos foi utilizado o mesmo meio acrescido de concentrações crescentes de PBZ com diferentes tempos de exposição, sendo: T0= controle (MS); T1= 1,0 mg.L-1 PBZ por 40 dias; T2= 10,0 mg.L-1 PBZ por 4 dias e T3= 100,0 mg.L-1 PBZ por 4 horas. Foram feitas as avaliações de CPA, CLF, CMR, número de raízes, massa fresca e massa seca da parte aérea, massa fresca e massa seca de raiz, massa fresca e massa seca total, contagem e caracterização estomática e avaliação anatômica do tecido radicular. O experimento foi conduzido no delineamento inteiramente casualizado totalizando quatorze repetições por tratamento. O tratamento com 1,0 mg.L-1 de PBZ por 40 dias promoveu maior desenvolvimento e vigor do sistema radicular, aumentando a espessura das raízes, podendo contribuir para a fase de aclimatização das microplântulas. Os tratamentos com pulse reduziram significativamente a parte aérea das microplântulas, não sendo recomendado na micropropagação da C. labiata. / The Species Cattleya labiata Lindley and Cattleya eldorado Linden, native to the Atlantic Forest and Amazon, respectively, are under high risk of extinction in nature, therefore, necessary to develop efficient methods of spreading their seedlings, among which highlights micropropagation. The efficiency of in vitro cultivation of orchids is associated with culture media, and especially the growth regulators. The study aimed to evaluate the influence of paclobutrazol (PBZ) in the development of in vitro microplantlets. Seedlings from germination in vitro, with 1.0 ± 0.2 cm in length, were used in the study. In the first experiment, we used to control the MS culture medium free of plant growth regulators. In the treatments, MS medium was supplemented with four concentrations of PBZ 1.0, 2.0, 4.0 and 6.0 mg L-1, with naphthaleneacetic acid (NAA) 1.0 mg L-1 associated with 6-benzylaminopurine (BAP) 1.0 mg L-1 and with the combination of 4.0 mg L-1 PBZ with 1.0 mg.L-1 NAA and 1.0 mg L-1 BAP. The morphological evaluations, number of shoots, shoot length (CPA), longest root length (CMR) and leaf blade length (CLF) were performed at the beginning of the experiment and in subcultures every 40 days during 160 days. The experimental design was completely randomized in three-factor split-plot arrangement in time, with six replicates per treatment. A second experiment was performed using the technique of \"pulse\". It was used as control MS medium, and the treatments we used the same medium plus increasing concentrations of PBZ with different exposure times, as follows: T0 = control (MS), T1 = 1.0 mg L-1 PBZ for 40 days, T2 = 10.0 mg L-1 PBZ for 4 days and T3 = 100.0 mg L-1 PBZ for 4 hours. Assessments were made CPA, CLF, CMR, number of roots, fresh and dry mass of shoots, fresh weight and dry weight of root, fresh weight and total dry matter, stomatal counting and characterization and evaluation of the anatomic root tissue. The experiment was conducted in a completely randomized a total of fourteen replicates per treatment. Treatment with 1.0 mg L-1 of PBZ for 40 days promoted further development and vigor of the root system, increasing the thickness of the roots and may contribute to the acclimatization phase of microplantlets. Treatments with \"pulse\" significantly reduced the shoot microplantlets and Its not recommended to the micropropagation of C. labiata.