Orientador: Marcelo Giannini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-18T10:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aguiar_ThaianeRodrigues_D.pdf: 24572936 bytes, checksum: 8141f58fcbce6835d1091f52127552a7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O emprego dos cimentos resinosos na fixação de peças protéticas têm sido avaliado em muitos estudos, entretanto, trabalhos que simulem os desafios presentes na cavidade bucal e o comportamento a longo prazo dos cimentos resinosos autoadesivos ainda são escassos na literatura. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo: 1) verificar a composição inorgânica das partículas de carga e caracterizá-las quanto ao tipo e morfologia; 2) analisar a ultramorfologia da interface de união dentina-cimento resinoso através da microscopia confocal por varredura a laser e da microscopia eletrônica de varredura (MEV); 3) avaliar o efeito do armazenamento por 1 ano ou da ciclagem mecânica (50.000 ciclos) na resistência de união dentina-cimento resinoso. Quatro cimentos resinosos foram avaliados: dois autoadesivos (RelyX Unicem, 3M ESPE e Clearfil SA Luting, Kuraray Medical Inc.) e dois convencionais (RelyX ARC/Adper Scotchbond Multi-Purpose Plus, 3M ESPE e Clearfil Esthetic Cement/Clearfil DC Bond, Kuraray Medical Inc.). Para analisar os principais componentes inorgânicos e avaliar as características das partículas de carga, o conteúdo orgânico dos cimentos resinosos foi removido por solventes orgânicos e as amostras analisadas em MEV/EDX (Espectroscopia de energia dispersiva por raios-X). Terceiros molares humanos foram utilizados na avaliação da ultramorfologia da interface dentina-cimento resinoso e no ensaio de resistência de união à dentina. Na análise da ultramorfologia da área de união, corantes (fluoresceína e rodamina) foram previamente adicionados aos materiais estudados para possibilitar a obtenção das imagens. Para o ensaio de resistência de união, discos de resina composta indireta foram confeccionados visando simular as restaurações indiretas. Após a cimentação, os dentes restaurados foram submetidos a três tratamentos e ao ensaio de microtração: 1- espécimes testados após 24 h (grupo controle); 2- ciclagem mecânica e em seguida testados; 3- armazenados em saliva artificial por 1 ano na forma de "palitos" e testados. Os dados obtidos a partir do ensaio de resistência de união foram analisados estatisticamente (ANOVA e teste Tukey, p<0,05). Nos outros dois estudos, a análise descritiva dos dados obtidos a partir das imagens microscópicas foi realizada. Na avaliação MEV/EDX notou-se elevado conteúdo de silício em todos os materiais. O cimento RelyX ARC apresentou partículas de carga esféricas e irregulares, enquanto os outros materiais demonstraram partículas com formato irregular. Nas fotomicrografias, a hibridização dentinária somente foi observada para os sistemas de cimentação convencional. No ensaio de resistência de união, os tratamentos não influenciaram a resistência de união dos cimentos resinosos à dentina. Os cimentos autoadesivos apresentaram médias de resistência de união significantemente superiores aos chamados convencionais. Embora os materiais avaliados apresentem partículas de carga com distintas composições inorgânicas e interagem com a dentina através de diferentes mecanismos, os tratamentos de envelhecimentos propostos não reduziram a resistência de união à dentina, quando comparados ao grupo controle. Os cimentos autoadesivos não formam camada híbrida na dentina intertubular, nem tags de resina nos túbulos dentinários, entretanto, apresentam partículas de carga com maior tamanho e demonstraram os maiores valores médios de resistência de união à dentina entre os cimentos estudados / Abstract: Resin luting materials to fixed prosthetic restorations have been evaluated in many studies, however, little is known about self-adhesive resin cements, mainly involving long-term durability and when these materials have been submitted to challenges of oral environment. Thus, the purpose of this study was: 1- to verify the filler particles components and to characterize them according to type and morphology; 2- to analyze the ultramorphology of the dentin-resin interfaces using confocal laser scanning microscopy and scanning electron microscopy (SEM) and 3- to evaluate the effect of the storage for 1 year or the mechanical cycling (50.000 cycles) on bond strength of resin cements to dentin. Four resin cements were used in this study: two self-adhesive resin cements (RelyX Unicem, 3M ESPE and Clearfil SA Luting, Kuraray Medical Inc.) and two conventional resin cements (RelyX ARC/Adper Scotchbond Multi- Purpose Plus, 3M ESPE and Clearfil Esthetic Cement/Clearfil DC Bond, Kuraray Medical Inc.). For indentifying the main inorganic components and to evaluate the filler particles characteristics, the organic phase of resin cements was removed using organic solvents and the sample was analyzed by SEM/EDX (Energy-dispersive X-ray spectroscopy). Human third molars were used for micromorphology analysis of resin-dentin interfaces and microtensile bond strength test. For micromorphology analyses of resin-dentin interfaces, two fluorescent dyes (fluorescein and rhodamine B) were incorporated into the materials previously. For microtensile bond strength, pre-polymerized resin discs were prepared to simulate indirect restorations. After bonding procedures, the restored teeth were submitted to three treatments: 1- control group (tested 24 h after specimen preparation); 2- tested after mechanical cycling; 3- beams were storage for one year in artificial saliva and tested. Bond strength data were statistically analyzed by two-way ANOVA and Tukey test (?<0.05). Qualitative analysis was performed for two other studies using microscopic images. For SEM/EDX measurements, high amount of silicon was identified for all cements. The resin cement RelyX ARC showed spherical and irregular particles, while other cements presented irregular shape fillers. Hybrid layer formation was observed only for conventional resin cements in micromorphology analyses. For microtensile test, the treatments did not reduce the bond strength between dentin-resin cement. Self-adhesive resin cements provide significantly higher bond strength than those conventional materials. Despite the resin cements showed filler particles with differences in the inorganic composition and different bonding mechanisms, the mechanical cycling and storage for one year did not affect the bond strength to dentin when it was compared to control group. The self-adhesive resin cements showed no hybrid layer formation in intertubular dentin and nor resin tags in the dentinal tubules were detected. However, these materials showed the biggest filler particles and higher bond strength to dentin than conventional resin cements studied / Doutorado / Dentística / Doutor em Clínica Odontológica

Asbestos é um termo geral usado comercialmente para descrever minerais fibrosos de silicato. A fibra mais utilizada até hoje é denominada crisotila, com uso considerado seguro. Embora, fragmentos menores podem permanecer por longo tempo em tecidos pulmonares. As fibras de crisotila, assim como as demais fibras de asbestos, possuem sílica na sua composição e podem ser fagocitadas com a participação de receptores scavenger. Este trabalho teve como objetivo o estudo de mecanismos de interação e de internalização das pequenas fibras de crisotila em duas linhagens celulares. Uma análise por microscopia confocal de varredura a laser e microscopia eletrônica de transmissão foi realizada e observou-se que ambas as linhagens são capazes de internalizar fibras, que apresentavam livres ou envoltas pela membrana plasmática. A presença de elementos do citoesqueleto próximos às fibras de crisotila foi verificada, assim como alterações no nível de expressão de alguns desses elementos. Dentro deste contexto, a participação de receptores no processo de internalização de fibras de crisotila também foi estudada e verificamos que esses receptores podem estar envolvidos de alguma forma com o processo de internalização de fibras de crisotila. / Asbestos is a term used commercially to describe silicate minerals. Chrysotile is the most used fiber until today and it is considered safe. However, smaller fragments can be found in lung tissues for a long period of time. Chrysotile fibers, as other asbestos fibers, are composed by silica and may be phagocyted with the participation of scavenger receptors. This studys goal was to study the interaction an internalization mechanisms of small chrysotile fibers in two cell lineages. Confocal laser scan microscopy analysis and electronic microscopy transmission analysis were conducted in both lineages, that showed capable of internalize fibers, that were involved or not by cell membrane. Cytoeskeleton elements presence near the fibers was verified and there were also changes in expression levels these elements. In this context, the participation of scavenger receptors in the internalization process of chrysotile fibers was also studied, and we verified that these receptors may be associated to the internalization process of chrysotile fibers.

A abfração, uma das causas das lesões cervicais não cariosas, caracteriza-se pela perda de tecido mineralizado, em forma de cunha, próxima à junção cementoesmalte. Hipoteticamente, é o resultado de forças oclusais excêntricas aplicadas sobre os dentes. Essas lesões são freqüentemente restauradas para impedir sua progressão, para proteger e aumentar a resistência do remanescente dental, reduzir a hiperestesia dentinária e manter a saúde periodontal. Entretanto, pouco se sabe quanto ao efeito dos fatores causadores da abfração na qualidade marginal de restaurações cervicais, quando da reabilitação dessas lesões. Este estudo in vitro propõe-se, portanto, a analisar o efeito da aplicação de carga oclusal na qualidade marginal de restaurações de cavidades cervicais em forma de cunha, utilizando microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 40 dentes prémolares superiores humanos hígidos, extraídos, nos quais foram preparadas cavidades padronizadas em forma de cunha, em sua região cervical vestibular, por meio da utilização de pontas diamantadas cilíndricas de topo plano nº 3100 (1,6 mm de diâmetro e 21 mm de comprimento), posicionadas em 45º com a superfície mais plana e próxima à junção amelo-cementária. As cavidades (1,3 mm de profundidade, 2,3 mm de abertura ocluso-cervical, 4,0 mm de abertura mésio-distal, 1,6 mm de extensão na parede oclusal e 1,9 mm de extensão na parede cervical) foram restauradas com resina composta (Z250®) em associação ao uso de um sistema adesivo (Single Bond®). Para possibilitar a análise ao microscópio confocal, o sistema adesivo foi marcado previamente com adição de rodamina B. Após imersão em água deionizada, por 7 dias e polimento das restaurações, os espécimes foram incluídos em uma matriz de resina acrílica. A porção radicular de cada dente foi revestida com uma camada de poliéter (Impregum®), de aproximadamente 1 mm, a fim de simular o ligamento periodontal. A porção coronária foi mantida totalmente exposta ao meio externo. Os dentes foram, então, submetidos à ciclagem mecânica, pela ação de uma ponta metálica em forma de torpedo, exercendo carga de 150 N, num total de 106 ciclos. Para tanto, a ponta foi posicionada de acordo com as seguintes condições experimentais: sobre a vertente triturante interna da cúspide vestibular (GI; n=10); sobre o sulco central (GII; n=10); e sobre a vertente triturante interna da cúspide lingual (GIII; n=10). O grupo controle (GIV; n=10) não foi submetido à ciclagem mecânica, permanecendo apenas armazenado em água deionizada, a 37ºC, durante todo o período experimental. Finalizada a ciclagem mecânica, as superfícies vestibulares dentárias foram, então, recobertas com duas camadas do sistema adesivo (Single Bond®), agora marcado com fluoresceína, para delimitação dos possíveis defeitos formados. Os dentes foram seccionados longitudinalmente em duas metades (mesial e distal) e submetidos à avaliação em microscopia confocal, para análise da qualidade da margem das restaurações. Foi aplicado o teste do qui-quadrado (p<0,05) para as variáveis qualitativas presença ou ausência de fendas marginais e localização das fendas em relação às paredes cavitárias (oclusal, cervical ou ambas). Para as variáveis quantitativas (amplitude e extensão das fendas) aplicou-se o teste de Kruskal-Wallis (p<0,05). Os espécimes submetidos ao carregamento oclusal, independentemente do local de aplicação da força, apresentaram maior porcentagem de fendas marginais (53,33%) quando comparados aos espécimes do grupo controle (10%; p=0,016). Não houve diferença estatisticamente significante entre o local de aplicação de força oclusal tanto para a presença ou ausência de fendas marginais (p=0,875); como para a localização das fendas em relação às paredes cavitárias (p=0,270) ou mesmo para a extensão (p=0,190) e amplitude das mesmas (p=0,070). Conclui-se, portanto, que a aplicação de carga oclusal prejudicou o comportamento marginal de restaurações cervicais, mas a variação do local de incidência de carga não interferiu no comportamento marginal das mesmas. / Tooth abfraction, one of the causes of non carious cervical lesions, is a wedgeshaped tissue loss, situated next to the cement-enamel junction, being, hypothetically, the result of eccentric occlusal loads applied to the teeth. These lesions are often restored to avoid their progression, to protect and increase remnant tooth resistance, to reduce dental hypersensitivity and to maintain periodontal health. However, there is little knowledge about the effect of abfraction etiology factors on the restoration marginal quality in the rehabilitation of these lesions. This in vitro study intends, therefore, to analyze the effect of the application of occlusal load on the marginal quality of cervical restorations in wedge-shaped cavities, by employing laser scanning confocal microscopy. Standardized wedge-shaped cavities were prepared in the cervical buccal region of 40 sound extracted upper human premolars, by the use of a cylindrical diamond bur #3100 (1.6 mm in diameter and 21 mm in length), positioned in 45º with the surface that is plainer and closer to the cementenamel junction. The cavities (1.3 mm in depth, 2.3 mm in occluso-cervical opening, 4.0 mm in mesio-distal opening, 1.6 mm in occlusal wall length and 1.9 mm in cervical wall length) were filled with a composite resin (Z250®) associated with the use of an adhesive system (Single Bond®). For the analysis at the confocal microscope to be possible, the adhesive system was previously modified by the addition of rodhamine B. After storage in deionized water for 7 days, and after the finishing and polishing of the restorations, specimens were included in acrylic resin matrixes. The radicular portion of each tooth was covered by an approximately 1 mm layer of a polyether (Impregum®), for the creation of an artificial periodontal ligament. The crown portion was kept totally exposed to the external environment. Teeth were, then, submitted to the mechanical cycling, by the action of a torpedo-shaped tip that exerted a 150 N load for a total of 106 cycles. The tip was positioned according to the following experimental conditions: over the internal triturant vertent of the buccal cusp GI; n=10); over the centre of the fissure (GII; n=10); and over the internal triturant vertent of the lingual cusp (GIII; n=10). The control group (GIV; n=10) was not submitted to the mechanical cycling, staying only stored in deionized water, at 37oC, during the whole experimental period. When the mechanical cycling was over, buccal dental surfaces were, then, covered with two layers of the adhesive system (Single Bond®), now modified by the addition of fluorescein, for delimitation of the possible formed defects. Teeth were longitudinally sectioned into two halves (mesial and distal ones), and submitted to evaluation through confocal microscopy, for analysis of the restorations marginal quality. Chi-square test (p<0.05) was applied for evaluation of qualitative variables (presence or absence of marginal defects and their location according to the cavity walls occlusal, cervical or both); and Kruskal-Wallis test (p<0.05) was applied for evaluation of quantitative variables (length and width of the defects). Specimens submitted to occlusal loading, independently of the location of the tip, presented a higher percentage of marginal defects (53.33%), when compared to the control group (10%; p=0.016). There was no significant statistical difference among the local of load placement for the presence or absence of marginal defects (p=0.875); for their localization according to the cavity walls (p=0.270); or even for their length (p=0.190) and width (p=0.070). It can be concluded, therefore, that occlusal loading was harmful for the margins of cervical restorations; but the different local of its incidence did not interfere with their marginal quality.

O objetivo deste estudo foi avaliar a resistência de união, a penetração e a adaptação à dentina radicular de cimentos obturadores à base de resina epóxica e de silicato de cálcio com e sem ativação sônica e ultrassônica. Raízes de caninos superiores com 16 mm de comprimento foram submetidas a preparo biomecânico com instrumentos rotatórios de níquel titânio sob irrigação constante com NaOCl 2,5% e irrigação final com EDTA 17%. As raízes foram distribuídas em grupos de acordo com os cimentos obturadores: AH Plus e MTA Fillapex. Cada grupo foi subdividido em função da ativação do cimento obturador (n=13): sem ativação; ativação sônica por 30 segundos; ativação ultrassônica por 30 segundos. Em cada subgrupo, a manipulação dos cimentos obturadores foi realizada de acordo com as instruções dos fabricantes para 10 espécimes, para os 3 espécimes restantes, o cimento foi acrescido de Rodamina B 0,1% previamente à manipulação. A obturação foi realizada de acordo com o protocolo de cada subgrupo em relação ao cimento e ativação, utilizando-se a técnica de condensação lateral. Após três vezes os tempos de endurecimento dos cimentos, os espécimes foram seccionados obtendo-se 3 slices de 1,0 mm de espessura de cada terço radicular. Dois slices de cada terço foram submetidos ao teste de push-out e o padrão de falha foi determinado. O terceiro slice de cada terço radicular foi submetido à análise qualitativa da adaptação do cimento à dentina radicular e presença de vazios, por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Nos espécimes em que o cimento foi acrescido de Rodamina B 0,1%, avaliou-se a penetração do cimento na dentina radicular por microscopia confocal de varredura a laser com fluorescência. Os dados foram analisados por testes estatísticos paramétricos e não-paramétricos. O cimento AH Plus (2,58±1,21) apresentou maior resistência de união comparado ao MTA Fillapex (1,45±0,71) (p<0,122). A ativação ultrassônica (2,64±1,44) propiciou maior resistência de união comparada aos grupos sem ativação (1,58±0,73) (p<0,0001) e com ativação sônica (1,83±0,85) (p<0,0001), não havendo diferença entre estes (p=0,3303). O terço cervical apresentou maior resistência de união (2,48±1,49) comparado ao médio (2,08±0,94) (p=0,0003) e apical (1,48±0,58) (p<0,001). Para o cimento MTA Fillapex houve predomínio de falhas adesivas mistas em todos os grupos, enquanto que para o cimento AH Plus houve predomínio de falhas adesivas mistas para os grupos sem ativação e ativação ultrassônica e falhas adesivas mistas e adesivas ao material obturador para o grupo de ativação sônica. A ativação ultrassônica promoveu, independente do cimento obturador, maior número, densidade e extensão de tags, com massa obturadora mais homogênea e adaptada às paredes do canal radicular. A ativação sônica, por sua vez, apresentou número, densidade e extensão de tags similares ao grupo sem ativação, no entanto a massa obturadora apresentou desadaptações e formação de bolhas. A ativação ultrassônica impactou na maior resistência de união, penetração, densidade e extensão de tags e melhor adaptação do cimento a dentina radicular, ao contrário da ativação sônica que não aumentou a resistência de união e penetração de tags e proporcionou maior desadaptação e inclusão de vazios na massa obturadora. / The aim of this study was to evaluate the bond strength, penetration and adaptation to the root dentin sealers based on epoxy resin and calcium silicate with and without sonic and ultrasonic activation. Maxillary canine roots with 16 mm length were submitted to biomechanical preparation with nickel titanium rotary files, under constant irrigation with 2.5% NaOCl and final irrigation with 17% EDTA. The roots were divided into groups according to the sealers: AH Plus and MTA Fillapex. Each group was subdivided based on sealer activation (n = 13): no activation; sonic activations (30 seconds); ultrasonic activation (30 seconds). In each subgroup, the sealer manipulation was performed according to the manufacturers instructions for 10 specimens, for the 3 remaining specimens, the Rhodamine B 0.1% was incorpored to the sealer prior to manipulation. The root canal filling was performed according to the protocol of each group relative to the sealer and activation, using the lateral condensation technique. After three times the sealer setting times, the specimens were sectioned and obtained 3 slices of 1.0 mm thickness of each root third. Two slices of each third were submitted to the push-out test and the failure pattern was determined. The third slice of each root third was submitted to qualitative analysis of sealer and root dentin adaptation and the presence of voids, by means of confocal laser scanning microscopy. In specimens in which Rhodamine B 0.1% was added in the sealer was evaluated the sealer penetration in root dentin by confocal laser scanning fluorescence. The data were analyzed using parametric and nonparametric statistical tests. The AH Plus (2.58 ± 1.21) showed higher bond strength compared to MTA Fillapex (1.45 ± 0.71) (p <0.122). The ultrasonic activation (2.64 ± 1.44) provided higher bond strength compared to no activation groups (1.58 ± 0.73) (p <0.0001) and sonic activation (1.83 ± 0.85) (p <0.0001), with no difference between them (p = 0.3303). The cervical third showed higher bond strength (2.48 ± 1.49) compared to the middle (2.08 ± 0.94) (p = 0.0003) and apical thirds (1.48 ± 0.58) (P < 0.001). For the MTA Fillapex there was a predominance of mixed adhesive failures in all groups, whereas for AH Plus there was a predominance of mixed adhesive failures for groups without activation and ultrasonic activation and mixed adhesive failures and adhesives to the filling material for the sonic activation group. Ultrasonic activation promoted, regardless of the sealer, the greater number, density and length tags with more homogenous and adapted root canal filling to the root canal walls. On the other hand, the sonic activation, presented number, density and length of tags similar to the group without activation, however the root canal filling showed mismatches and blistering. Ultrasonic activation impacted the highest bond strength, penetration, density and length tags and better adaptation of the sealer root dentin, unlike the sonic activation that not increased bond strength and penetration tags and provided greater mismatch and the inclusion of voids in the root canal filling.

Avaliou-se a influência do curativo intra-canal com pasta de hidróxido de cálcio na penetração do cimento EpiphanyTM no interior dos túbulos dentinários e na adaptação do cimento às paredes dos canais radiculares utilizando-se a microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). Foram utilizados 30 incisivos centrais inferiores humanos, extraídos, com apenas um canal radicular. O acesso ao canal foi realizado de forma convencional utilizando-se pontas diamantadas montadas em alta rotação, sob refrigeração. Os canais foram preparados pela técnica progressiva empregando-se instrumentos manuais e rotatórios de níquel-titânio, Protaper e Profile (conicidade 0.4). A irrigação foi realizada usando solução de hipoclorito de sódio a 1% e, ao final do preparo, o soro fisiológico. Após o preparo, os canais radiculares de todos os dentes receberam aplicação de EDTA a 17% por 3 minutos e irrigação final com soro fisiológico. A seguir, os dentes foram divididos em 3 grupos como segue: grupo 1 sem tratamento adicional (controle); grupo 2 curativo de Ca (OH)2 e grupo 3 - curativo de Ca (OH)2 e nova aplicação de EDTA. O curativo de Ca (OH)2 foi empregado na forma de pasta viscosa com propilenoglicol que foi inserida no canal com espiral de Lentulo. Após o curativo, os dentes foram armazenados a ± 37 °C por 14 dias. A remoção do curativo foi feita com irrigação com soro fisiológico e com instrumento manual. A seguir, os canais radiculares de todos os 30 espécimes foram obturados com o Sistema EpiphanyTM utilizando-se o primer, o cimento EpiphanyTM, cones principais de Resilon 40/0.4 e cones auxiliares fino-médio pela técnica da condensação lateral ativa. Antes da obturação, o cimento foi corado com Rodamina B. Foram feitas secções transversais a 3, 7 e 10 milímetros distantes do forame apical (terços apical, médio e cervical), cujas imagens foram analisadas em microscopia confocal por varredura a laser (MCVL). Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA) e teste Tukey, ambos com 5% de significância. Os resultados indicaram que a maior penetração de cimento no interior dos túbulos dentinários foi verificada nas secções dos terços cervical e médio do grupo II comparado aos grupos I e III. A penetração do cimento em todas as secções foi maior e estatisticamente significante nas faces vestibular e lingual. Em relação à adaptação do cimento às paredes dos canais radiculares, a fluorescência do cimento, considerando o perímetro total do canal mostrou regiões com falhas na interface dentina-cimento. A menor porcentagem de adaptação foi observada no grupo I (78%) comparado com os grupos II (93%) e III (86%) (p<0,05). Em canais obturados com o Sistema EpiphanyTM pela técnica da condensação lateral, o hidróxido de cálcio influenciou positivamente na profundidade de penetração do cimento no interior dos túbulos dentinários e na sua adaptação às paredes dos canais. / The aim of this study was to evaluate the influence of calcium hydroxide on the depth of dentinal tubule sealer penetration and the percentage of sealer-dentin interface in the coronal, middle and apical thirds teeth obturated with the EpiphanyTM Obturation System using 5 x and 40x confocal laser scanning microscopy. Thirty extracted single-rooted mandibular incisor human teeth were instrumented using 1.0 % NaOCl. The smear layer was removed using 17% EDTA for 3 minutes. The teeth were randomly assigned to 3 groups (n=10), according to the presence or absence of intracanal dressing and its removal: GI= non Ca(OH)2 dressing (control); G II= Ca(OH)2 + removal using saline solution and kfile # 40; and G3= Ca(OH)2 + removal using saline solution + kfile # 40 and 17% EDTA. One tooth from groups II and III were ramdomly selected for calcium hydroxide analysis. The calcium hidroxyde was labeled with fluorescent fluorescein and after 14 days of storage in 100% humidity at 37 degrees C, the dressings were removed from experimental groups. All root canals (control and experimental groups) were obturated with Resilon master points 40/0.4, Resilon points fine-medium and EpiphanyTM sealer labeled with fluorescent Rhodamine B dye. The sections cut from the coronal, middle and apical thirds of each root were viewed using 5x and 40x confocal laser scanning microscopy. Twoway ANOVA and Tukey test found significantly lower average depth of sealer penetration in apical sections than middle or coronal sections (p<0,05). The deepest sealer penetration was observed in the coronal and middle secctions of group II compared to the groups I and III. The sealer penetration in all sections was deeper and statistically different in the vestibular and lingual faces. A fluorescent sealer ring was seen around the canal wall in all sections presenting some gaps in the sealerdentin interface. Two-way ANOVA and Tukey tests showed significantly less percentage of sealer-dentin interface in the group I (78%) compared to groups II (93%) and III (86%) (p<0,05). Calcium hydroxide dressing affected positively the deep of sealer penetration and percentagem of sealer dentin interface in the root canals filled with EpiphanyTM resin based sealer.

O bagaço de cana-de-açúcar é um abundante coproduto obtido a partir da produção convencional de etanol. No entanto, o bagaço vem se mostrando como uma importante fonte para a produção de etanol de segunda geração. No primeiro capítulo da tese é apresentado um estudo referente à distribuição espacial dos compostos na matriz de bagaço de cana-de-açúcar. A investigação foi realizada utilizando microscopia de fluorescência confocal e espectroscopia por excitação com um e dois fótons. Imagens de autofluorescência em combinação com as medidas de fluorescência e tempos de vida forneceram uma gama de informações necessárias para a caracterização de amostras de bagaço. Além disso, a técnica permite o acompanhamento de processos relacionados com a remoção de lignina. A nanocelulose cristalina (NCC) é um material promissor devido as suas propriedades intrínsecas, tais como seu formato alongado, medindo de 1 a 100 nm de diâmetro e seu comprimento variando de algumas dezenas a centenas de nanômetros. No capítulo 2, a nanocelulose cristalina foi obtida através da hidrólise da celulose cristalina (de Avicel&reg;) com ácido sulfúrico. Em seguida, o material foi caracterizado por técnicas de microscopia SEM e TEM, confirmando a morfologia em forma de haste e a estrutura de tamanho nanométrico. A microscopia de campo largo convencional foi utilizada como ferramenta na caracterização da NCC dispersa em soluções poliméricas de PVA e PVP. A última parte do capítulo 2 descreve a caracterização de estruturas de NCC usando a microscopia de super-resolução de fluorescência STED (depleção de emissão estimulada). As imagens mostraram uma resolução de até 50 nm, permitindo a comparação com resultados de TEM e AFM. No capítulo 3, a nanocelulose cristalina foi covalentemente marcada com o corante ATTO-532, através da chamada reação \"click\". As propriedades relacionadas com o coeficiente de difusão da NCC foram determinadas por espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS). Em uma etapa posterior, a NCC foi colocada em diferentes soluções do polímero PEG, contendo quantidades diferentes. As propriedades dinâmicas foram analisadas por métodos de FCS e WFM. O uso de técnicas de espectroscopia e microscopia revelou detalhes relacionados à heterogeneidade das dispersões de NCC, as quais estão relacionadas com as propriedades hidrofílicas e hidrofóbicas das soluções poliméricas. / The sugarcane bagasse is an abundant co-product obtained from the conventional production of ethanol. However, sugarcane bagasse has been proving to be an important source to the production of second-generation ethanol. In the first chapter, the spatial distribution of compounds in the sugarcane bagasse matrix was investigated by confocal fluorescence microscopy and spectroscopy with one and two-photon excitation. Autofluorescence images in combination to spectral emission and lifetime measurements provided a tool for the characterization of natural bagasse samples. Moreover, the technique allows the following of processes related to the lignin removal. Nanocrystalline cellulose (NCC) is a promisor material because of its properties, such as rod-shape with 1-100 nm in diameter, and tens to hundreds of nanometres in length. In the Chapter 2, NCC was obtained via sulphuric acid hydrolysis from Avicel&reg;. Afterwards, the material was characterized by classic electronic microscopy SEM and TEM, confirming the rod-shaped morphology and the nano-sized structure. Conventional wide field microscopy was used as fluorescence microscopy tool in the characterization of NCC, when dispersed in polymeric solutions of PVA and PVP. The last part of the chapter 2 describes the characterization of NCC structures by using the super-resolution fluorescence microscopy STED (Stimulated Emission Depletion). The STED images showed a resolution down to 50 nm, allowing the comparison with TEM and AFM microscopy results. In the Chapter 3, the NCC was covalently labelled, by a click-chemistry reaction, with the ATTO-532 dye. Properties related to diffusion coefficient of NCC were determined by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) method. Afterwards, NCC was placed into a solution of PEG, containing different amounts polymer. The dynamic properties were evaluated by FCS and WFM methods. The use of spectroscopy and microscopy imaging techniques revealed heterogeneity details of NCC dispersions, which are related to the hydrophilic and hydrophobic properties of the polymer solution. A better understanding of polymer systems is achieved by investigation of diffusion properties, that allows the comprehension of rheological parameters, and, consequently, in polymer processing and assembly of plastics, films, and fibres. In the Chapter 4 is presented a study where fluorescence correlation spectroscopy (FCS) and wide-field fluorescence microscopy (WFM) were used to follow changes in the diffusion coefficients of growing polymer chains, during the controlled radical polymerization process. Linear and star-shaped polystyrene were grown via nitroxide-mediated polymerization (NMP) from alkoxyamine-based initiators containing a highly fluorescent perylene diimide moiety. This study demonstrates that direct investigation of heterogeneity emerging during a controlled radical polymerization process by means of fluorescence of single-molecule chain initiator allows unravelling information related to the diffusion processes of the growing polymer chain.

Introdução: Gengivite descamativa (GD) se refere a uma manifestação clínica associada com diversas doenças mucocutâneas. Suas causas mais comuns são penfigóide das membranas mucosas (PMM), pênfigo vulgar (PV) e líquen plano oral (LP). A diagnose específica é melhor estabelecida através de avaliação histopatológica e de imunofluorescência. Objetivos: Examinar casos de gengivite descamativa utilizando microscopia confocal a laser e comparar os achados com aqueles encontrados na gengiva normal. Além disso, comparar os achados de microscopia confocal da gengivite descamativa com os da histopatologia convencional das lesões biopsiadas a fim de estabelecer critérios para este método diagnóstico não invasivo. Método: Doentes com manifestações clínicas de gengivite descamativa foram incluídos, totalizando quarenta e três casos. A microscopia confocal foi realizada na gengiva de um indivíduo saudável e nas lesões gengivais. Todas as lesões sem exame histopatológico prévio foram biopsiadas a fim de permitir uma correlação entre a microscopia confocal e a histopatologia. Resultados: O exame de microscopia confocal das lesões suspeitas de penfigóide das membranas mucosas revelou uma separação ao nível da junção dermo-epidérmica, preenchida por pequenas estruturas brilhantes, interpretadas como hemáceas. Os aspectos histopatológicos e de imunofluorescência confirmaram o diagnose. Para os casos de pênfigo vulgar, os achados da microscopia confocal foram de fenda intraepitelial com células arredondadas interpretadas como queratinócitos acantolíticos. Hiperqueratose e espongiose, associadas com infiltrado inflamatório, caracterizado por células pequenas e brilhantes permeando a estrutura intraepitelial de queratinócitos conhecida como favo de mel foram vistos no líquen plano. Estruturas arredondadas pouco brilhantes, interpretadas como queratinócitos necróticos, e estruturas estelares também pouco brilhantes, interpretadas como melanófagos, foram encontrados na derme. Conclusões: Propõe-se o uso da microscopia confocal como uma ferramenta adicional no diagnose e avaliação da gengivite descamativa / Background: Desquamative gingivitis refers to a clinical manifestation associated with several mucocutaneous disorders. The most common are mucous membrane pemphigoid, pemphigus vulgaris and lichen planus. Their specific diagnosis is better established by histopathological and immunofluorescence evaluation. Objective: To examine cases of desquamative gingivitis using reflectance confocal microscopy and compare the findings with those of normal gingiva. Moreover, confocal microscopy findings in desquamative gingivitis were compared to conventional histopathology of the biopsied lesions, in order to establish criteria for this non-invasive diagnostic technique. Methods: Patients with clinical manifestations of desquamative gingivitis were included, totalizing forty-three cases. Reflectance confocal microscopy was performed the gingival of a healthy person and on gingival lesions. All lesions were biopsied in order to perform a reflectance confocal microscopy- histopathologic correlation. Results: Reflectance confocal microscopy exam of the gingival lesions suspected of mucous membrane pemphigoid revealed a separation at the level of dermal-epidermal junction, filled with small bright structures interpreted as blood cells. Histopathological and immunofluorescence aspects confirmed the diagnosis. For pemphigus vulgaris, reflectance confocal microscopy aspects were of intraepithelial cleft with round detached cells interpreted as acantholytic keratinocytes, similar to the histopathological features. Hyperkeratosis and spongiosis associated with infiltration of inflammatory cells, recognized as small bright cells intermingling the honeycomb keratinocyte epithelial structure, were seen in lichen planus. Mild bright round structures interpreted as necrotic keratinocytes and mild bright stellate structures, interpreted as melanophages in the dermis were also seen. These features were present in histopathology, confirming the diagnosis of lichen planus. Conclusion: We propose the use of reflectance confocal microscopy as an additional tool in diagnosis and evaluation of desquamative gingivitis

O objetivo deste estudo foi comparar os ensaios de microtração (MI), ?push-out? (PS), ?push-out? modificado (PSM) e ?pull-out? (PL) na habilidade de mensurar a resistência de união (RU) entre pino de fibra e dentina radicular. Para tanto, além dos resultados de cada ensaio mecânico foram analisados fatores como: sensibilidade quanto às diferentes regiões radiculares, quantidade de falhas prematuras (FP), coeficiente de variação (CV), padrão de fratura (PF) pela microscopia confocal de varredura e distribuição das tensões pela análise de elementos finitos (AEF). Foram utilizados 40 dentes anteriores superiores endodonticamente tratados, divididos em quatro grupos de acordo com o tipo de ensaio realizado. Para os ensaios de PS e MI foi feita a cimentação do pino e posteriormente os cortes para a obtenção dos corpos-de-prova (cps). Para os outros ensaios (PSM e PL), a cimentação antecedeu aos cortes tanto das fatias de dentina como dos pinos. O sistema adesivo Scotbond Multi Uso Plus e o cimento Variolink II foram usados para a cimentação do pino de fibra de vidro FRC Postec Plus em todos os casos. Os cps do ensaio de PS foram obtidos pelos cortes seriados da raiz em fatias de 1±0,1mm, para os cps do ensaio de MI estas fatias sofreram ainda a confecção de entalhes laterais diametralmente opostos, que proporcionando um formato final de ampulheta. Para os testes de PL e PSM foram feitos cortes de fatias de dentina de 1±0,1mm e o pino foi dividido em três partes iguais para, então, cada fatia de uma região ser cimentada com o pino correspondente. Os cps do ensaio de PSM tinham 1mm de pino sobressalente para cima e para baixo da fatia de dentina, enquanto que os cps do PL o pino sobressalente estava apenas para cima da dentina. Todos os cps foram submetidos aos testes de RU, à velocidade de 0,5mm/min em máquina de ensaios universais. O PF foi avaliado em um aumento de cem vezes e foi feita uma distribuição de freqüência. Já a AEF obteve modelos tridimensionais de todos os ensaios, e estes foram analisados quanto à tensão de Von Mises. Para os resultados dos testes mecânicos foram feitas análises de variância de cada ensaio variando o fator região, com ou sem as FP, e análise comparando todos os ensaios. O teste Tukey foi feito quando necessário e as FP foram submetidas ao teste estatístico de Fisher. A inclusão ou não destas falhas mostra alteração dos resultados no ensaio de MI, uma vez que possui um maior número delas neste ensaio. O ensaio de PL mostrou as maiores médias de RU, seguido pelo ensaio de PSM, e ambos também tiveram o PF com maior quantidade de fraturas adesivas. O ensaio de PS conseguiu apontar diferença estatística entre as três regiões, mas mostrou a maior freqüência de falhas coesivas, e maior CV. O menor CV foi encontrado para o PSM que também mostrou uma adequada distribuição das tensões. A MI apresentou concentração de tensões nas bordas dos entalhes. Concluiu-se que o tipo de ensaio influencia diretamente nos resultados obtidos. / The aim of this study was to compare microtensile (MI), \"push-out\" (PS), modified \"push-out\" (PSM) and \"pull-out\" (PL) tests in the ability to accurately measure the bond strength of fiber posts luted inside root canals, at different root dentin levels, cervical, middle and apical. The evaluated parameters were: amount of premature failure (PF), coefficient of variation (CV), failure patterns (FP) and the stress distribution by finite elements analysis (FEA). Forty human intact single-rooted and endodontically treated teeth were divided into four groups according to the type test used. For PS and MI specimens, first the post was luted and then the cuts were done, for PSM and PL, first was done the cuts and then fiber post?s pices were luted. Scotbond Multi Use Plus adhesive system and Variolink II cement had been used for luting FRC Postec Plus glass fiber post, in all cases. PS samples were disc shaped of 1±0,1mm. Bond strength between post and dentin was measured in the root slice and the force applied on the center of the specimen. For the Mi test hourglass-shaped samples were obtained by trimming the proximal surfaces of each slice using a diamond bur until it touched the post. For PL and PSM tests cuts of 1±0,1mm of dentine slices were made and the fiber was divided into three parts, and then each slice were luted with a fiber post?s piece. Specimens for PSM had 1mm of post up and down the dentin slice and for PL all of the post was up the dentine slice. All specimens were submitted to a bond strength test at 0.5 mm/minute crosshead speed in a universal testing machine. For FP, each sample was examined under confocal microscopy at 100 times and a frequency distribution was made. For the AEF, three-dimensional models of each tests had been made and analyzed by Von Mises stress. Bond strength data were analyzed by ANOVA and when necessary was used Tukey?s test. For PF data the Fisher test was made. The inclusion of PF, only shows variation on MI, since these test showed the greater number of them. PL provided higher values of bond strength for root dentin and fiber post, followed by PSM. Both of them had also FP with greater amount of adhesive failures. The PS test was able to point statistically differences between root regions, but it showed the highest frequency of cohesive failure, and greater CV. Minor CV was found for the PSM that also showed adequate stress distribution. The MI showed concentration of tensions in the edges of the trimming area. One concluded that the type of test influences directly in the results obtained.

A lesão pulmonar é a principal causa de morte da Esclerose Sistêmica (ES), e as alterações principais são: o acometimento intersticial e o vascular. No presente estudo analisamos através do microscópio confocal a laser 40 artérias pulmonares de pequeno e médio calibre de pacientes com ES e 16 controles. Medimos a área do lúmen, a área total do vaso e fizemos a subtração da área total do vaso menos a do lúmen, e a porcentagem da área do lúmen em relação à área total do vaso. Observou-se que a área do lúmen e a porcentagem da área do lúmen em relação a área total do vaso são significativamente menores na ES em relação ao controle, e que a diferença entre a área total do vaso e a área do lúmen foi maior no grupo ES. Os achados confirmaram a hipótese inicial de acometimento das artérias pulmonares na ES, que se encontram espessadas devido à inflamação, infiltração celular em suas camadas e ativação endotelial / Lung injury is the leading cause of death in Systemic Sclerosis (SSc), and the main changes are: the vascular and interstitial involvement. In this study we analyzed through the confocal laser microscope 40 lung arteries of small and medium-sized of patients with SSc and 16 arteries of control group. We measured the lumen area, the total vessel area, made the subtracting the total vessel area minus the lumen area and the percentage between the lumen area and total vessel area. It was observed that the lumen area and the percentage between the lumen area and total vessel area were significantly lower in SSc group compared to control group, and the difference between the total vessel and the lumen area was higher in SSc. The findings confirmed the initial hypothesis of pulmonary arterial injury in SSc, wich are thickened due to inflammation, cellular infiltration into its layers and endothelial activation

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria Enterococcus faecalis em induzir periodontite apical no modelo experimental canino; verificar se o preparo químico-mecânico afeta a sobrevivência dessa bactéria no sistema de canais radiculares e avaliar o reparo desses dentes por meio de radiografia periapical e tomografia computadorizada cone beam. Dentes com e sem tratamento endodôntico foram avaliados por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 2 cães. A bactéria Enterococcus faecalis foi inoculada nos canais de 4 pré-molares superiores, 11 prémolares inferiores e 9 incisivos superiores. As câmaras pulpares foram seladas e, após 60 dias, os canais das raízes distais dos pré-molares e de 7 incisivos superiores foram submetidos a tratamento endodôntico em sessão única e os canais das raízes mesiais dos pré-molares e 2 incisivos superiores foram deixados sem tratamento (controle). Amostras microbiológicas foram feitas antes e após o preparo químico-mecânico. O reparo foi avaliado após 6 meses do tratamento mediante radiografias periapicais e por tomografia computadorizada cone beam. A comparação entre as imagens obtidas após o período experimental pelos 2 métodos foi feita por medições da área em mm2 de cada lesão encontrada, utilizando o software ImageTool Os resultados mostraram que a presença de periodontite apical crônica foi verificada em todos os dentes inoculados, independentemente da colonização pela bactéria Enterococcus faecalis ou pela flora mista. O preparo químico-mecânico reduziu significativamente o número de bactérias no interior dos canais radiculares (p<0.05). Os resultados radiográficos e tomográficos demonstraram lesões de menor diâmetro nos dentes tratados endodonticamente em comparação ao grupo controle (p<0.05). A comparação entre os métodos demonstrou diferença estatística entre eles sendo evidenciada áreas radiolúcidas maiores utilizando a tomografia cone beam em comparação com a radiografia periapical (p<0.05). Concluiu-se que a bactéria Enterococcus faecalis induziu periodontite apical crônica similarmente à flora mista; o tratamento endodôntico reduziu o número de bactérias cultiváveis significativamente embora sem relação com o reparo radiográfico. Os dentes tratados em sessão única apresentavam lesões menores em comparação aos não-tratados e as áreas das lesões observadas na TC cone beam foram maiores do que as áreas encontradas nas radiografias periapicais. A microscopia confocal e o método proposto neste estudo se mostraram eficazes para determinar, qualitativamente, a viabilidade bacteriana e a distribuição de ácidos nucléicos bacterianos dentro dos túbulos dentinários. Houve diferença entre a dentina infectada in vitro com o padrão de infecção in vivo, caracterizada pela presença de biofilmes aderidos à parede do canal radicular. / The aims of this study were to evaluate the Enterococcus faecalis ability to induce apical periodontitis in dogs root canals, to verify the bacterias ability to survive to the cleaning and shaping procedures and to assess the healing of the induced apical periodontitis by periapical radiograph and cone beam computed tomography. Also, endodontically treated and non-treated teeth were evaluated by confocal laser scanning microscope. Two mongrel dogs were used in the experiment. Enterococcus faecalis strain was inoculated into the root canals of 4 maxillary premolars, 11 mandibular premolars and 9 maxillary incisors. After 60 days the root canals of the distal roots of the mandibular and maxillary pre-molars and 7 maxillary incisors were endodontically treated. The premolars mesial root canal and 2 maxillary incisors were used as control (no treatment). Microbiologic samples were done after and before the cleaning and shaping procedure. The healing was evaluated after 6 months by periapical radiographs and cone beam computed tomography. The comparison between obtained images after the experimental period by the two methods was done using measures of the lesion area in mm2 with ImageTool software. The results showed the presence of chronic apical periodontitis in every inoculated teeth, with Enterococcus faecalis or mixed infection. The cleaning and shaping procedures reduced the number of bacteria of the root canals (p<0.05). The radiographic and tomographic results showed the lower diameter lesion in endodontically treated teeth than in the control group (p<0.05). The comparison between the methods showed statistical difference and greater radiolucent areas were evident in cone beam computed tomography images (p<0.05). It is possible to conclude that the bacteria Enterococcus faecalis induced chronic apical periodontitis as well as the mixed microflora; the endodontic treatment reduced the number of cultivable bacteria in a significant way, but with no relation to the radiographic healing. The treated teeth in only one session presented smaller lesions in comparison to the non-treated teeth and the lesions area in cone beam computed tomography were bigger than the areas found in periapical radiograph. The confocal microscopy and the proposed method of this study showed to be efficient to determine the bacterial ability and the distribution of bacterial nucleic acids inside the dentin tubules. There was difference between in vitro infected dentin with the in vivo infection pattern, which presents biofilm attached to the root canal walls.