O objetivo deste trabalho foi avaliar o selamento apical em 7 e 30 dias de, obturações de canais radiculares com a técnica de cone único utilizando 4 cimentos endodônticos, AH Plus, MTA Fillapex, cimento Portland, e cimento experimental Sealepox, por meio do sistema de infiltração de fluidos FLODEC, e a qualidade de obturação, em microscopia confocal a laser, analisando o perímetro de penetração dos cimentos nos túbulos dentinários, e a porcentagem de fendas na interface cimento/dentina, e por meio de estereomicroscopia, a porcentagem de cimento, guta-percha e espaços vazios a 2,4 e 6mm do ápice radicular, dos cimentos. Sessenta e oito dentes unirradiculados, com canais únicos tiveram seus canais instrumentados e, então, obturados com os cimentos, previamente corados com Rodamina B. As amostras foram conservadas em meio úmido a 37º de temperatura. Após 7 dias, os dentes foram adaptados para os testes de infiltração de fluidos, fazendo-se as leituras durante 12 minutos constantes, para todos os espécimes. Trinta dias depois, as leituras foram realizadas novamente com os mesmos parâmetros anteriores. Todos os espécimes foram cortados em secções de 2mm de espessura nos níveis de 2,4 e 6mm do ápice radicular. Mediante estereomicroscopia, foram calculadas as porcentagens de cimento, guta-percha e espaços vazios, e em microscopia confocal, as porcentagens de fendas e o perímetro de penetração dos cimentos no interior dos túbulos dentinários, em todas as secções. Os resultados obtidos mostraram que, todos os cimentos permitiram a infiltração de fluidos em 7 dias, sendo que, o MTA Fillapex exibiu, significativamente, menor infiltração que os cimentos AH Plus e Portland. Em 30 dias não houve diferenças estatísticas entre os cimentos. Nas avaliações em microscopia confocal, observou-se a presença de fendas na interface dentina/cimento em todas as secções avaliadas. À estereomicroscopia observaram-se espaços vazios em todas as secções, bem como, variações nas porcentagens de cimento e guta-percha. / The aim of this study was to evaluate sealing-ability at 7 and 30 days of root canal obturations using a single cone obturation technique of 4 endodontic sealers, AH Plus, Mta Fillapex, Portland Cement and a experimental sealer Sealepox, using a fluid filtration recording device (FLODEC), to evaluate the obturation quality using confocal laser microscopy analyzing interfacial adaptation of sealer/dentin interface, perimeter of sealer penetration into dentinal tubules, and using stereomicroscopy, the percentage of sealer, guta-percha and voids at 2, 4 and 6mm from de apex. Sixtyeight single rooted teeth with one canal were instrumented and then, obturated, with the sealers, in which, Rodamine B was previously added. Samples were stored in 100% humidity and at 37º temperature. After 7 days, all the specimens were submitted to microleakage tests for a 12-minute period. Mta Fillapex showed the lowest leakage percentage when compared with AH Plus and Portland cement. 30 days after the first test, microleakage evaluations were repeated, and the results showed no statistical differences. Then, all samples were cut horizontally of 2mm of thickness at 2,4,6mm from the apex. Using estereomicrocopy, percentage of sealer, guta-percha and voids were measured, and using confocal laser microscopy percentages of interfacial adaptation and perimeter of sealer penetration into dentinal tubules were calculated. According to the results it was concluded that all sealers permitted fluid filtration at 7 and 30 days, being that, at 7 days, MTA Fillapex exhibited significantly, less fluid filtration than AH Plus and Portland Cement. At 30 days, no statistically differences were found. On confocal evaluations, it was observed the presence of gaps at the sealer/dentin interface in all evaluated sections. Stereomicroscopy assessments showed voids in all sections and as well variations on sealer and guta-percha percentages.

O presente trabalho tem por objetivo avaliar &ldquo;in vitro&rdquo; diferentes tratamentos na remineralização do esmalte desmineralizado em situação de alto desafio cariogênico. Foram obtidos 55 blocos de esmalte de dentes bovinos com dimensões de 4x4x2mm, que tiveram sua superfície planificada e polida. Metade da superfície foi protegida com resina, antes da formação de lesão de mancha branca, mantendo-a íntegra. Para a formação da lesão de desmineralização os blocos foram imersos em solução tampão de acetato por 43h. Os espécimes foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: controle (sem tratamento), Verniz Duraphat; Flúor gel; Mi Paste e Mi Paste Plus. Todas as superfícies desmineralizadas receberam tratamento, com os seus respectivos produtos, 1x/semana durante 3 semanas. Nos intervalos das aplicações os espécimes foram submetidos a ciclos de pH num total de 21 dias. Antes da desmineralização, após, em seguida à 1a aplicação e ao final dos 21 dias de ciclagem foram obtidas imagens da superfície e análise da rugosidade superficial, e morfologia por meio de Microscopia Confocal a Laser, ao final a resina que protegia a área controle foi removida e capturada uma nova imagem para análise do perfil de desgaste. Os dados foram analisados quanto a sua distribuição e verificada a normalidade e a homogeneidade da distribuição amostral, foi realizada Análise de Variância e teste de tukey (p<0,05). Pode-se observar que tanto para a rugosidade superficial como para o perfil de desgaste os grupos estudados apresentaram resultados similares entre si (p>0,05). Na rugosidade superficial observou-se que apenas no verniz ocorreu um aumento significante de rugosidade com o tempo (p<0,05). Na morfologia pode-se observar uma topografia irregular que foi mais evidenciada ao término da ciclagem, tendo o controle e os Mi Paste (convencional e plus) apresentado perda de estrutura mais evidente. Baseado nos resultados obtidos pode-se concluir que nenhum tratamento preventivo isolado foi efetivo para paralisação do desenvolvimento da lesão de cárie que foi agravado com o tempo de exposição ao processo DES-RE. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, different treatments in previously demineralized enamel in a high cariogenic challenge. 55 enamel slabs of bovine teeth with dimensions of 4x4x2mm were planned and polished surface. Half the surface was protected with resin before the formation of white spot lesions, and half stay sound. For the formation of the demineralization challenge the blocks were immersed in acetate buffer solution for 43h. The specimens were randomly divided into 5 groups: control (no treatment), Duraphat; Fluoride gel; Mi Paste and Mi Paste Plus. All demineralized surfaces were treated with their respective products, 1x/week for 3 weeks. During intervals among applications specimens were subjected to pH cycles in a total of 21 days. Before demineralization, after the first application and after 21 days of cycling were obtained images of surface and it was analyzed for surface roughness and morphology by 3D Confocal Laser microscope, the end the resin protecting the control area was removed and a new image captured for analysis of the wear profile. Data were analyzed for distribution and checked for normality and homogeneity of the sampling distribution, it was performed analysis of variance and Tukey test (p <0.05). It can be seen that both the surface roughness and profile for the wear groups had similar results (p> 0.05). Surface roughness was observed only in the duraphat showed a significant increase in roughness with time (p <0.05) occurred. Morphology can be observed an irregular topography that was more evident at the end of cycling, it had been control and Mi Paste (conventional and plus) presented more evident loss of structure. Based on the results obtained in vitro can be concluded that no preventive treatment alone was effective in paralyzed the development of caries lesion. The integrity of enamel surface was deteriorated with time of exposure in DES-RE process.

Orientador: Regina Maria Puppin Rontani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T19:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_FabiolaGalbiattide_D.pdf: 3340202 bytes, checksum: 3dfefda6770edf12e25a625fcffd516d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O monômero antibacteriano 12-metacriloxidodecilpiridinio de brometo (MDPB) foi incorporado, juntamente com o flúor, ao sistema adesivo Clearfil Protect Bond (CPB) para auxiliar na prevenção de cárie secundária. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar em três experimentos in vitro o efeito desses componentes na desinfecção de cavidade, durabilidade da união à dentina afetada por cárie (DAC) e prevenção de cárie secundária. No Capítulo 1, o efeito antibacteriano do MDPB foi avaliado em biofilme de S. mutans presentes na superfície de dentina a partir de quatro tempos de aplicação do primer contendo MDPB (20s, 90s, 300s e 590s). A viabilidade celular foi avaliada utilizando microscópio confocal de varredura a laser (CLSM) e contagem de unidades formadoras de colônias. Somente a partir de 300s de aplicação do primer foi verificado o efeito bactericida do MDPB contra biofilme de S. mutans na dentina. No Capítulo 2, a degradação à DAC artificial foi avaliada utilizando teste de microtração (µTB) após a aplicação dos sistemas adesivos CPB e Adper Scotchbond Multi-Purpose (SBM) e armazenamento em cultura de S. mutans por três dias e água deionizada por três meses. A presença do flúor e MDPB no sistema adesivo CPB não preveniu a degradação da união à DAC, pois não houve diferença nos valores de µTB entre CPB e SBM nos dois métodos de degradação. Assim, o meio de armazenamento dos espécimes com S. mutans por 3 dias foi tão eficaz na degradação à DAC quanto o armazenamento em água por 3 meses. No Capítulo 3, a inibição da cárie secundária por CPB e SBM foi avaliada após 5 dias de desafio cariogênico com métodos químico (gel ácido) e biológico (meio com S. mutans). A formação da zona de inibição à cárie (IZ) pelos sistemas adesivos foi avaliada por CSLM e a distribuição de cálcio e fósforo para investigar a perda mineral na dentina ao longo da interface dentina/restauração foi avaliada por análise de fluorescência por raios-x (µ-EDX). O sistema adesivo CPB produziu IZ mais espessa e menor perda mineral quando submetido ao desafio químico, mas produziu a menor espessura de IZ e a maior perda mineral quando submetido ao desafio biológico. O sistema adesivo SBM induziu valores intermediários de perda mineral e IZ frente aos dois desafios. Desta forma, o método de desenvolvimento de cárie secundária artificial e a camada híbrida criada por CPB e SBM influenciaram na inibição de cárie secundária por sistemas adesivos. Dentro das limitações deste trabalho pode-se concluir que o monômero MDPB presente no sistema adesivo CPB possuiu efeito bactericida contra biolfime de S. mutans na superfície de dentina após 300 s de sua aplicação. Além disso, este monômero não preveniu a degradação da união após armazenamento em cultura de S. mutans e água deionizada, bem como a desmineralização da dentina na interface dente/restauração após desafio cariogênico químico e biológico. / Abstract: The antibacterial monomer 12-methacryloyloxydodecylpyridinium bromide (MDPB) was incorporated with fluoride component in Clearfil Protect Bond adhesive system to help in secondary caries prevention. Thus, the present study conducted three in vitro experiments with the aim to evaluate the fluoride and MDPB effects in cavity disinfection, bonding durability on caries-affected dentin (CAD) and secondary caries prevention. In Chapter 1, the MDPB antibacterial effect was evaluate against S. mutans biofilm on dentin surface after four application times of MDPB primer (20s, 90s, 300s e 590s). The cellular viability was evaluated by confocal laser scanning microcopy (CLSM) and viable count test. MDPB had bactericidal effect against S. mutans biofilm on dentin after 300s of primer application. In Chapter 2, the artificial CAD bonding degradation was evaluated using microtensile bonding strength test (µTB) after CPB and Adper Scotchbond Multi-Purpose (SBM) adhesive systems application and storage in S. mutans culture for three days and deionized water for three months. The fluoride and MDPB in CPB adhesive system did not prevent the CAD bonding degradation because there was no statistical difference between µTB values of CPB and SBM in both degradation methods. Therefore, S. mutans culture was an effective method to produce degradation in vitro in a short period of time as 3 months of water storage. In Chapter 3, the secondary caries inhibition by CPB and SBM was evaluated after chemical (acidic gel) and biological (S. mutans culture) challenges during 5 days. The inhibition zone formation (IZ) by adhesive systems used was evaluated by CLSM. The calcium and phosphorus distribution was evaluate by X-Ray fluorescence analysis (µ-EDX) to investigate the mineral loss on dentin along dentin/restoration interface. CPB adhesive system produced the thickest IZ and lowest mineral loss when it was submitted to chemical challenge; however the same adhesive system produced the lowest value of IZ thickness and the highest mineral loss in the biological challenge. SBM adhesive system showed intermediate mineral loss and IZ thickness values in both cariogenic challenges. Thus, the artificial caries method and the hybrid layer quality of CPB and SBM affected the secondary caries inhibition by adhesive systems. Based on the findings of this study, and within the limitation of this investigation, could be concluded that the MDPB monomer in CPB adhesive system had bactericidal effect after 300 s of its application. Furthermore, this monomer did not prevent the bonding degradation after S. mutans culture and water storage, as well as the dentin demineralization at tooth/restoration interface after chemical and biological cariogenic challenges. / Doutorado / Doutor em Materiais Dentários

Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia dos cimentos obturadores do sistema de canais radiculares quando submetidos ao desafio ácido em ambiente bucal. Foram utilizadas 55 raízes de incisivos centrais inferiores humanos com comprimento padronizado em 10 mm. Realizou-se o preparo biomecânico dos canais até o instrumento #40.02 e as raízes foram esterilizadas em autoclave. Quarenta e quatro raízes foram obturadas pela técnica de condensação lateral com um dos quatro cimentos de diferentes bases: AH Plus, MTA Fillapex, Sealapex ou Endofill. Nas 11 raízes remanescentes, apenas foi executado o preparo biomecânico dos canais e esterilização (controle negativo). Foram selecionados 11 participantes que atenderam aos critérios de inclusão na pesquisa. Foi realizada a moldagem das arcadas dentais e confecção dos dispositivos acrílicos intra-bucais palatinos com 5 nichos, sendo 4 deles para as raízes correspondentes a cada cimento experimental e 1 nicho para a raiz controle. As raízes foram fixadas com cera e tela para favorecer o acúmulo de biofilme. Durante 14 dias, 11 participantes utilizaram o dispositivo o dia todo e foram orientados a gotejar solução de sacarose 20% sobre as amostras, seis vezes ao dia, simulando alto desafio cariogênico. Após os 14 dias, as raízes foram removidas dos dispositivos, seccionadas em slices e foram realizadas as seguintes análises: perfil de desgaste do material obturador e superfície dentinária antes e após a exposição ao ambiente ácido bucal por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL); resistência adesiva (MPa) do material obturador à dentina radicular por teste de push-out e análise qualitativa da morfologia da interface adesiva e desmineralização ao redor do material obturador por MCVL. Os dados do perfil de desgaste foram avaliados pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis e teste t (&alpha;=0,05), os dados da resistência adesiva foram avaliados por Análise de Variância a dois critérios (cimentos e terços radiculares) e teste de Tukey (&alpha;=0,05). Verificou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os cimentos (p=0,6190), porém todas as amostras apresentaram desgaste da dentina e material obturador após exposição ao ambiente bucal (p<0,05). As raízes obturadas com o cimento AH Plus apresentaram maior resistência adesiva à dentina (11,40 ± 7,74 a) (p<0,05). Resultados intermediários foram encontrados nas raízes obturadas com o MTA Fillapex (7,22 ± 5,88 ab) e Endofill (7,37 ± 6,75 ab). As raízes obturadas com o Sealapex apresentaram menores valores de resistência adesiva (5,18 ± 4,34 b). Não houve diferença significante para os terços radiculares, nem na interação dos fatores (p>0,05). Houve predomínio de falhas adesivas em dentina nas raízes obturadas com os cimentos AH Plus, MTA Fillapex e Endofill (respectivamente 66%, 75% e 54,2%). Nas raízes obturadas com o Sealapex houve predomínio de falhas mistas (54,2%). Todos os cimentos apresentaram degradação do material obturador e superfície dentinária, além da desmineralização ao redor da obturação, sendo esta última mais intensa nas raízes obturadas com os cimentos Sealapex e Endofill. Nas raízes não obturadas, houve acúmulo intenso de biofilme bacteriano e desmineralização da dentina intrarradicular. Nenhum cimento foi capaz de evitar a degradação da interface adesiva e da dentina. No entanto, nestas situações de alto desafio ácido, os cimentos AH Plus e MTA Fillapex demonstraram desempenho superior aos demais cimentos testados, por apresentarem melhor resistência adesiva do material obturador à dentina, além de degradação e desmineralização ao redor da obturação menos intensa. / This study has the purpose to evaluate the efficacy of root canal sealers following in situ acid challenge. The root canals of 55 human mandibular central incisors with standardized root canals length 10 mm were used. Roots were as submitted to biomechanical preparation up to #40.02 instrument and canals were sterilized in an autoclave. Forty-four roots were filled with one of the four sealers using the lateral condensation technique: AH Plus, Endofill, MTA Fillapex e Sealapex. The remaining 11 roots were only submitted to biomechanical preparation and were sterilized (negative control). Eleven 11 participants that fulfill the inclusion criteria were selected. The impressions of dental arcs were performed and intraoral acrylic devices were done with 5 spaces, being 4 for roots with experimental sealers and 1 for control root. The roots were fixed with wax and screen to promote the accumulation of biofilm. During 14 days, 11 participants were instructed to use the devices every day. Dental biofilm was allowed to accumulate on root and drops of 20% sucrose solution were dripped onto them, simulating a high acidic challenge. After 14 days, the roots were removed from the intraoral devices sectioned in slices and the following analyses were conducted: degradation (wear profile) in the dentin-sealer interface subjected to confocal laser scanning microscope (CLSM); bond strength of filling material (MPa) to root canal (push-out test) and qualitative analysis of adhesive interface morphology and demineralization around filling material by CLSM. The wear profile data were assessed by non-parametric Kruskal-Wallis and t-test (&alpha;=0.05), the bond strength were evaluated by two-way ANOVA (cements and root thirds) and Tukey test (&alpha;=0.05). Statistical analyses were set at 5% significance level. Regarding the surface of the wear profile, it was found that there was no significant statistical difference between sealers (p=0.6190), but all samples showed wear of dentine and filling material after exposure to the oral environment (p <0.05). Roots filled with AH Plus sealer showed the higher bond strength to dentin (11.40 ± 7.74 a) (p<0.05). Intermediate results were found in roots with MTA Fillapex (7.22 ± 5.88 ab) and Endofill (7.37 ± 6.75 ab). The worst result was found in roots with Sealapex (5.18 ± 4.34 b). There were no significant differences in root thirds, neither in the interaction of factors (p>0.05). Adhesive failure were predominant in root canals with AH Plus, MTA Fillapex and Endofill (respectively, 66%, 75% e 54.2%). Root canals with Sealapex presented more mixed failure (54.2%). Qualitative morphological analysis showed that all sealers presented dentin demineralization around root canal filling, being greater when using to Sealapex and Endofill sealers. In unfilled roots, there was intense accumulation of bacterial biofilm and demineralization of intraradicular dentin. After the exposure of roots to oral environment for 14 days, it may be concluded that no sealer was able to prevent degradation of the adhesive interface and dentin. However, in these situations of high acid challenge, AH Plus and MTA Fillapex sealers have shown superior performance than other tested sealers for their high adhesive strength of the filling material to dentin, and less intense degradation and demineralization around the root canal filling.

A proposta desse trabalho foi verificar através de microscopia confocal de varredura a laser, se a utilização de uma resina fotopolimerizável de baixa viscosidade (Biscover®) e do etil-cianoacrilato (Super Bonder®) seriam eficientes em prevenir ou reduzir a formação de biofilme de Candida albicans. Cinqüenta e seis corpos de prova em resina acrílica para reembasamento (New Truliner) foram divididos aleatoriamente em 7 grupos: G1 (C)- Controle; G2 (SBAE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície antes de esterilizar; G3 (SBDE)- Recebeu uma camada de Super Bonder® em sua superfície depois de esterilizar; G4 (SB3G)- 3 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G5 (SB4G)- 4 gotas de Super Bonder® incorporadas na resina; G6 (BCDE)- Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície depois de esterilizar e G7 (BCAE) Recebeu uma camada de Biscover® em sua superfície antes de esterilizar. Todos os corpos de prova foram inoculados com Candida albicans para formação de biofilme. Os biofilmes remanescentes sobre os corpos de prova foram corados através dos fluorocromos SYTO-9 e iodeto de propídeo para análise no microscópio confocal. Os dados foram analisados através dos testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Dunn, a um nível de significância de 5%. Os resultados obtidos pelo microscópio confocal mostraram que, de todos os corpos de prova modificados, os que receberam a Super Bonder® em sua superfície, G2(SBAE) e G3(SBDE) foram os únicos que significativamente reduziram a formação de biofilme de Candida albicans. Através da análise das imagens geradas pelo microscópio confocal, pôde-se observar que nos grupos G2(SBAE) e G3(SBDE) os campos apresentaram um reduzido número de células fúngicas e a maioria se encontrava na forma de levedura (inócua), enquanto que, para os demais grupos, além de observado um elevado número de células, a maioria destas se apresentava em forma de hifa (patogênica). Desse modo, a partir das condições experimentais desse estudo pôde-se concluir que as modificações do material testado com a Super Bonder® aplicada em sua superfície podem ser uma abordagem potencialmente útil para reduzir ou controlar a formação do biofilme em resinas acrílicas. / The purpose of this study was to verify, using the confocal laser scanning microscopy (CLSM), if the use of a photoactivated resin of low viscosity (Biscover®) and a ethyl-cyanoacrylate (Super Bonder®) could be efficient in the prevention or reduction of Candida albicans biofilms. Fifty six reline resin specimens (New Truliner) were fabricated and randomly divided into 7 groups: G1 (C)- Control; G2 (SBAE)- a Super Bonder® layer was applied on the surface before sterilization; G3 (SBDE)- the surface received a Super Bonder® layer after sterilization; G4 (SB3G)- 3 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G5 (SB4G)- 4 drops of Super Bonder® were incorporated in the structure of the resin; G6 (BCDE)- a Biscover® layer was applied on the surface after sterilization; G7 (BCAE) the surface received a Biscover® layer before sterilization. All the specimens were inoculated with Candida albicans for biofilm dvelopment. The remaining biofilms on the specimens were stained with fluorochromes SYTO-9 and propidium iodide to be analyzed by CLSM. The data were statistically analyzed using the Kruskal-Wallis and Dunn test, considering a significance level of 5%. The data obtained by CLSM revealed that of all specimens modified, those that received a Super Bonder® layer on their surface, G2(SBAE) e G3(SBDE), presented the better results, reducing Candida albicans biofilm formation. Analyzing the images produced by CLSM it was possible to see that groups G2(SBAE) e G3(SBDE) showed a reduced number of cells, and they were in a less phatogenetic form (Yeast), while the other groups showed a high number of cells in a more pathogenetic form (Hyphae). Considering the experimental conditions of this study we can conclude that the material modifications done with Super Bonder® on the surface could be an interesting way to prevent or control biofilm formation on acrylic resin.

O aumento da resistência aos antifúngicos convencionais e os possíveis efeitos colaterais destes fármacos têm estimulado pesquisas sobre produtos naturais com potencial antimicrobiano e baixa toxicidade. Assim, o objetivo desta pesquisa foi realizar uma avaliação clínica e laboratorial do tratamento da estomatite protética (EP) através de produtos naturais, por meio de cultura micológica quantitativa, de microscopia confocal e de análise das propriedades superficiais de uma resina acrílica. Em todas as avaliações, os grupos experimentais foram divididos de acordo com as seguintes substâncias: G1 - água destilada estéril; G2 - nistatina; G3 - extrato alcoólico de própolis a 20%; G4 - gel de Punica granatum Linné; G5 - gel de Uncaria tomentosa (Imuno-Max Gel). Para a cultura micológica quantitativa, 30 pacientes diagnosticados com EP utilizaram os seus respectivos medicamentos três vezes por dia, durante 14 dias, associados à escovação das próteses com dentifrício. Nas avaliações, foram coletados materiais das áreas eritematosas da mucosa palatina e das áreas correspondentes na prótese total superior. Este procedimento foi realizado antes do tratamento (T0), após 14 dias do início do tratamento (T1) e 30 dias após a suspensão do uso dos medicamentos (T2). Os dados obtidos foram submetidos ao teste não-paramétrico de Friedman para comparações intragrupos e ao teste de Kruskal-Wallis para comparações intergrupos. Para análise através de microscopia confocal, 30 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram inoculados com C. albicans para a formação do biofilme e, em seguida, imersos em sua respectiva droga. Os biofilmes remanescentes sobre os espécimes foram corados através de fluorocromos indicadores de viabilidade celular. Os dados obtidos foram analisados através do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e do pós-teste de comparação múltipla de Dunn. Para análise das propriedades superficiais, 50 espécimes de uma resina acrílica termopolimerizável foram fabricados, polidos e testados para a verificação inicial da rugosidade e da microdureza (T0). A seguir, cada espécime foi imerso na sua correspondente substância por 24 horas. Após 14 dias de imersão (T1), as propriedades superficiais dos espécimes foram novamente mensuradas. A variação intragrupos na rugosidade e na microdureza foi avaliada através do teste t pareado. A avaliação intergrupos, quanto ao efeito dos produtos testados na rugosidade e na microdureza, foi realizada através da análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Para todos os testes deste estudo foi considerado um nível de significância de 5% (p<0,05). De acordo com os resultados, foi possível concluir que o gel de P. granatum Linné exibiu propriedades superiores em relação aos produtos naturais testados. Esta substância apresentou um efeito mais completo, uma vez que, associada à escovação manual, proporcionou a maior redução da contaminação fúngica da mucosa palatina de pacientes com EP em longo prazo, além de promover, in vitro, a perda total da viabilidade celular e maior remoção das células fúngicas em biofilmes. Por fim, este produto não alterou significantemente, in vitro, a rugosidade e a microdureza da resina acrílica testada. / The increased resistance to conventional antifungal drugs and their possible side effects have stimulated research on natural products with antimicrobial activity and low toxicity. This study comprised a clinical and laboratory evaluation of the treatment of denture stomatitis (DS) using natural products by quantitative mycological culture, confocal microscopy and analysis of surface properties of an acrylic resin. In all evaluations, the experimental groups were divided according to the following substances: G1 - sterile distilled water; G2 - nystatin (Micostatin); G3 - 20% propolis alcoholic extract; G4 - P. granatum Linné gel; G5 - Uncaria tomentosa gel (Imuno-Max Gel). For quantitative mycological culture, 30 patients diagnosed with DS used their respective medicines three times a day for 14 days, associated with denture brushing with dentifrice. For the analysis, material was collected from erythematous areas of the palatal mucosa and from corresponding areas on the maxillary denture. This procedure was performed before treatment (T0), at 14 days after treatment onset (T1) and 30 days after interrupting the use of drugs (T2). Data were analyzed by the non-parametric Friedman test for intragroup comparisons and Kruskal-Wallis test for intergroup comparisons. For analysis by confocal microscopy, 30 specimens of a polymerized acrylic resin were inoculated with C. albicans for biofilm development and then immersed in the respective drugs. The remaining biofilms on the specimens were stained using fluorochrome indicators of cell viability. Data were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis test and Dunn\'s multiple comparison post-hoc test. For the analysis of surface properties, 50 specimens of polymerized acrylic resin were fabricated, polished and tested for initial verification of roughness and microhardness (T0). Then, the specimens were individually immersed in the respective drugs for 24 hours. After 14 days of immersion (T1), the surface properties of the specimens were measured again. The intragroup variation in roughness and microhardness was evaluated by the paired t-test. The intergroup evaluation as to the effect of tested products on roughness and microhardness was performed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test. All tests in this study considered a significance level of 5% (p<0.05). According to the results, it was concluded that P. granatum Linné gel exhibited superior properties compared to the natural products tested. This substance showed a more thorough effect, since it provided the greatest long-term reduction of fungal contamination of the palatal mucosa of patients with DS when associated with manual brushing, besides promoting total loss of cell viability and increased removal of fungal cells in biofilms in vitro. Finally, in vitro, this drug did not significantly change the roughness and hardness of the acrylic resin tested.

A proposta deste trabalho foi analisar um produto experimental (VIPI LTDA, Pirassununga, SP), que através da tecnologia sol-gel, modifica a superfície de resinas acrílicas para base de próteses e forma uma camada de nanopartículas de sílica (NPS) visando diminuir o acúmulo e facilitar a remoção de microrganismos. Dessa forma, inicialmente, confirmou-se a deposição de NPS e formação do revestimento cerâmico em polimetilmetacrilato (PMMA) através de espectroscopia no infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR); e posteriormente, quantificou-se o biofilme de Candida albicans nesta superfície através da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) e microscopia confocal (MC). Um total de 51 espécimes (10x10x3mm) de PMMA foi confeccionado e distribuído aos experimentos designados. Para a análise da composição dos espécimes em FTIR, foram avaliados 3 grupos (n=1): CN- espécime que não recebeu tratamento algum; CP- espécime que recebeu a aplicação do primer do produto; CL- espécime que passou tanto pela aplicação do primer como pelo processo sol-gel. Na etapa seguinte, foram utilizados 48 espécimes divididos em 3 grupos (n=16), de acordo com o tipo de polimento: PM3- mecanicamente polido com 3&#x3BC;m de rugosidade média; PM03- mecanicamente polido com 0,3&#x3BC;m de rugosidade; PL- polido quimicamente pelo líquido conforme instruções do fabricante. Anteriormente aos experimentos, os espécimes foram esterilizados por óxido de etileno e, então, imersos em saliva artificial por 2hs para a formação da película adquirida. Em seguida, foram secos e inoculados com 2mL de suspensão de C. albicans (1.107 cel/mL) para adesão das células fúngicas durante 90min. Após esta fase, as amostras foram lavadas em solução salina e imersas em meio estéril (RPMI) para crescimento do biofilme em estufa sob agitação (12hs a 37oC). Metade do número das amostras de cada grupo (n=8) foi destinada a contagem de UFC/mL e a outra metade dos espécimes (n=8), foi designada ao método de MC, que com o auxílio de um software (BioImageL v.2), permitiu a determinação do biovolume total (&#x3BC;m3), biovolume de células viáveis (&#x3BC;m3), biovolume de células não-viáveis (&#x3BC;m3) e área de cobertura do campo pelo biofilme (%). Os dados obtidos pelo FTIR foram analisados através da estatística descritiva. Os resultados obtidos pelos experimentos de quantificação após teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov foram analisados através do teste paramétrico ANOVA, seguido do teste de Tukey para comparações entre grupos (p<0,05). Através do FTIR, observou-se a deposição satisfatória da camada de NPS, permitindo assim, o desempenho dos experimentos de quantificação. Os resultados do UFC/ml e MC demonstraram semelhança na quantificação do biofilme entre os grupos PL e PM3, e diferença quando comparados ao grupo de superfícies mais lisas, PM03. Dessa forma, observou-se que o polimento líquido experimental não foi efetivo para a diminuição da colonização de biofilme deC. albicans em superfícies de PMMA. Entretanto, maiores investigações sobre as propriedades de superfície deste revestimento devem ser realizadas, já que o processo sol-gel permite uma facilidade na modificação dessas características, podendo levar ao desenvolvimento de um material de revestimento ideal. / This study investigates an experimental coating (VIPI LTDA, Pirassununga, SP) by sol-gel process that modifies acrylic resin denture base with silicon dioxide nanoparticles (SNP) to decrease C. albicans biofilm growth. Therefore, it was first investigated the presence of sol-gel ceramic coating on polymethylmethacrylate (PMMA) by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). Then C. albicans biofilms were quantified by colony forming units (CFU/mL) and confocal scanning laser microscopy (CSLM). Fifty-one PMMA specimens were manufactured (10x10x3mm) and assigned to the experiments. To evaluate specimens composition, it was analyzed three groups (n=1): CN- the specimen did not receive any surface treatment; CP- it was applied the coating primer on the specimen surface CL- the specimen was treated with the whole sol-gel process. In the following stage, 48 samples were divided into 3 groups (n=16) according to the polish type: PM3- 3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PM03- 0,3&#x3BC;m of roughness mechanical polish; PL- liquid polish. Samples of experimental group were coated according to manufacturers instructions and all the samples were sterilized with ethylene oxide. After that, they were dipped in artificial saliva for 2hs to acquire the salivary pellicle, and then, dried and inoculated with 2 mL suspension of C.albicans (1.107 cel/mL) for 90 min. Then, specimens were washed and immersed in sterile RPMI solution (37oC for 12h). Half of the samples of each group (n=8) was assigned to each quantification test (UFC/mL and CSLM). By CSLM and software (BioImageL v.2) analysis was possible to obtain the total biovolume (&#x3BC;m3), viable biovolume (&#x3BC;m3), non-viable biovolume (&#x3BC;m3), and covered area (%) by C. albicans biofilm. The data obtained by FTIR were analyzed by descriptive statistic. Whereas the records acquired by the quantification experiments were first analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test and then by one way ANOVA followed by Tukeys test to assess difference between groups (p<0,05). FTIR results showed an adequate SNP deposition, allowing the quantification tests to be performed. UFC/mL and CLSM records showed similarity between PL and PM3 groups and difference when comparing these groups to smoother surfaces group (PM03). Therefore, in this study, the experimental coating was not effective to reduce colonization by C. albicans biofilm on PMMA surfaces. Nevertheless, further investigations are required since sol-gel ceramic coating process eases the features modification of the material, possibly leading to an ideal coating development.

As soluções desinfetantes têm sido empregadas como um dos principais métodos no controle de biofilmes microbianos, tais como os formados sobre a superfície de próteses totais. O objetivo desta pesquisa foi analisar o efeito antimicrobiano das soluções desinfetantes sobre biofilmes de C. albicans em resina acrílica termopolimerizável, por meio de microscopia confocal de varredura a laser, de cultura microbiológica e de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Sessenta corpos-de-prova (5 x 5 x 1 mm) foram confeccionados, esterilizados e inoculados individualmente com C. albicans (1.107 cel/mL), aguardando-se 24 horas a 37°C para a formação do biofilme. A seguir, 24 corpos-de-prova foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (n=6), de acordo com as soluções testadas: G1 (controle) água destilada por 10 minutos; G2 gluconato de clorexidina a 4% por 10 minutos; G3 hipoclorito de sódio a 1% por 10 minutos; G4 hipoclorito de sódio a 2% por 5 minutos. Após a desinfecção, os biofilmes remanescentes sobre os corpos-de-prova foram corados através dos fluorocromos SYTO-9 e iodeto de propídeo para análise no microscópio confocal. Ademais, 24 novos corpos-de-prova foram submetidos ao mesmo processo de desinfecção e destinados à análise através de cultura microbiológica. Após 48 horas de incubação, foi feita a contagem das unidades formadoras de colônia (UFC). Ainda, o mesmo processo de desinfecção foi utilizado para 12 novos corpos-de-prova para análise em MEV. Os dados foram analisados através do teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste Student-Newman-Keuls, considerando um nível de significância de 5%. Os resultados obtidos pelo microscópio confocal demonstraram que todas as soluções desinfetantes promoveram a morte de todas as células fúngicas remanescentes sobre os corpos-de-prova. Resultado semelhante foi obtido através da análise por meio de cultura microbiológica, pois todas as soluções desinfetantes foram capazes de impedir o crescimento fúngico em cultura. Através da análise em microscópio confocal e em MEV, não foi observada remoção das células do biofilme fúngico sobre os corpos-de-prova pela solução de gluconato de clorexidina a 4%. Por outro lado, as soluções de hipoclorito a 1% e 2% promoveram uma remoção quase completa do biofilme fúngico da superfície dos corpos-de-prova. Além disso, através do MEV, alterações morfológicas foram observadas nas poucas células fúngicas remanescentes da desinfecção através de hipoclorito de sódio a 1%. Desse modo, a partir das condições experimentais deste estudo, pode-se considerar que as soluções de hipoclorito de sódio a 1% e 2% apresentaram um efeito antimicrobiano superior, quando comparados com a solução de gluconato de clorexidina a 4%. / Disinfectant solutions have been used as one of the principal methods to control microbial biofilms such as those formed on the complete denture surface. The aim of this study was to analyze the antimicrobial effect of disinfectant solutions on C. albicans biofilms on heat-polymerized acrylic resin by microbiological culture analysis, confocal laser scanning microscopy (CLSM) and scanning electron microscopy (SEM). Sixty specimens (5 x 5 x 1 mm) were fabricated, sterilized and individually inoculated with C. albicans (1.107 cells/mL) during 24 hours at 37°C to allow the biofilm formation. After that, these 24 specimens were randomly divided into 4 groups (n=6) according to the disinfection solutions tested: G1 (control) distilled water for 10 minutes; G2 4% chlorhexidine gluconate for 10 minutes; G3 1% sodium hypochlorite for 10 minutes; G4 2% sodium hypochlorite for 5 minutes. After disinfection, the remaining biofilms on the specimens were stained with fluorochromes SYTO-9 and propidium iodide to be analyzed by CLSM. Furthermore, the same disinfection process was applied to another 24 specimens which were submitted to microbiological culture analysis. After 48 hours of incubation, quantification of colony-forming units (CFU/mL) was performed. Also, the same disinfection process was applied to the remaining 12 specimens for the SEM analysis. The data were statistically analyzed using the Kruskal-Wallis and Student- Newman-Keuls tests, considering a significance level of 5%. The data obtained by CLSM revealed that all disinfectant solutions killed all remaining fungal cells on the specimens. Similar results were obtained by microbiological culture analysis, where all disinfectant solutions were able to avoid fungal growth in culture. CLSM and SEM analyses of specimens indicated that the 4% chlorhexidine gluconate solution did not remove the C. albicans cells from the resin acrylic surface. On the other hand, the 1% and 2% sodium hypochlorite solutions provided an almost complete biofilm removal from the acrylic surface. Furthermore, by SEM examination, morphologic damages became evident in the few residual Candida cells after 1% sodium hypochlorite disinfection. Thus, such findings suggest that, under the experimental conditions of this study, the 1% and 2% sodium hypochlorite solutions showed superior antimicrobials effect when compared with the 4% chlorhexidine gluconate solution.

A administração tópica de colírios é a maneira mais conveniente de se tratar doenças oculares. O grande desafio para a tecnologia farmacêutica é garantir que o fármaco administrado nessa forma farmacêutica chegue ao local de ação em concentrações adequadas, com efeitos adversos reduzidos, tempo de ação prolongado e dose única. Para tanto, o desenvolvimento de sistemas de liberação e de estratégias adequadas de administração tornam-se necessários. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da iontoforese na penetração ocular de dendrímeros de poliamidoamina (PAMAM) de geração 4, com diferentes grupos superficiais (PAMAM G4, catiônico e PAMAM G3.5, aniônico), preparar complexos desses dendrímeros com um anti-inflamatório modelo, a dexametasona (Dexa), e avaliar a influência da associação de dendrímeros e iontoforese na penetração corneal da Dexa em modelos ex vivo e in vivo. Complexos Dexa-PAMAM foram obtidos e caracterizados por espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear (H1-RMN, 13C-RMN e DOSY), espalhamento dinâmico de luz e espectroscopia UV/vis para avaliar a formação dos complexos, seu tamanho e potencial zeta, além de alterações na solubilidade da Dexa. A velocidade de liberação da Dexa dos complexos foi verificada por estudos de liberação in vitro utilizando membrana sintética. A penetração e distribuição dos PAMAMs na córnea e sua influência na penetração da Dexa foi avaliada ex vivo utilizando córnea de porco, microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) e cromatografia de ultra performance aliada a um detector de massas para quantificação do fármaco permeado. A citotoxicidade dos PAMAMs foi avaliada em cultura de células epiteliais da retina e células epiteliais da córnea. Por fim, verificou-se in vivo a influência da iontoforese e dos PAMAMs sobre a quantidade de Dexa no humor aquoso de olhos de coelhos. Os estudos de caracterização indicaram que a Dexa foi incorporada aos PAMAMs e que esses complexos apresentaram cerca de 50 nm de tamanho médio pela técnica de NTA, com a presença de partículas pequenas e agregadas quando dispersos em meio fisiológico e potencial zeta de + 6,4 mV e -18,5 mV para Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. A solubilidade aparente da Dexa aumentou 3,9 e 10,3 vezes nos complexos com PAMAM G4 e PAMAM G3.5, respectivamente. O PAMAM G3.5 e PAMAM G4 diminuiram 82 e 1,7 vezes, respectivamente, o coeficiente de difusão da Dexa. Os estudos ex vivo indicaram que a iontoforese foi capaz de direcionar os dendrímeros para dentro da córnea, além de aumentar 2,9, 5,6 e 3,0 vezes a quantidade de Dexa permeada a partir das formulações que continham Dexa livre, Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. Aumentou também a quantidade de Dexa retida na córnea em aproximadamente 2 vezes para todas as formulações. Os experimentos de citotoxicidade evidenciaram a maior toxicidade do PAMAM G4 e sua dependência da concentração e tempo de incubação. Por fim, os experimentos in vivo mostraram que a iontoforese aumentou a concentração de Dexa no humor aquoso cerca de 2, 2,5 e 6,6 para a Dexa livre, Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. Portanto, a associação de dendrímeros PAMAM com a iontoforese representa uma estratégia promissora para a administração tópica direcionada e sustentada de fármacos na córnea. / Topical administration of eye drops is the most convenient way for treatment of eye diseases. The challenge for the pharmaceutical technology is to ensure that the drug administered in the eye drops reaches the site of action in appropriate concentrations with reduced side effects, prolonged effect and single dose. Therefore, the development of drug delivery systems and appropriate strategies become necessary. The objective of this work was to evaluate the influence of iontophoresis in the ocular penetration of generation 4 polyamidoamine dendrimers (PAMAM) with different surface groups (PAMAM G4, cationic, and PAMAM G3.5, anionic), prepare complexes of these dendrimers with an anti-inflammatory drug model, dexamethasone (Dexa), and evaluate the influence of dendrimers and iontophoresis association on Dexa cornea penetration using ex vivo and in vivo models. Dexa-PAMAM complexes were obtained and characterized by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance (H1-NMR, 13C-NMR and DOSY), dynamic light scattering and UV/VIS spectroscopy to evaluate the formation of the complexes, their size and zeta potential, as well as changes in drug solubility. Dexa release rate from complexes was determined from the in vitro release studies using synthetic membrane. The penetration and distribution of PAMAMs into the cornea and their influence in the ex vivo Dexa penetration was assessed using pig\'s cornea, confocal scanning laser microscopy (CSLM) and ultra performance chromatography coupled to a mass spectrometer for quantification of the drug permeated. PAMAMs cytotoxicity was assessed in culture of retina epithelial cells and cornea epithelial cells. Finally, the influence of iontophoresis and PAMAMs on Dexa concentration in the aqueous humor of rabbit eyes was evaluated in vivo. The characterization results showed that Dexa was incorporated to PAMAMs and that these complexes had an average size of approximately 50 nm using the NTA technique, with the distribution of small particles and aggregates when dispersed in physiological medium. The zeta potential of Dexa-PAMAM G4 and Dexa PAMAM G3.5 complexes were +6.4 mV and -18.5 mV, respectively. PAMAM G4 and G3.5 PAMAM enhanced Dexa solubility by 3.9 and 10.3-fold, respectively. PAMAM G3.5 and PAMAM G4 decreased by 82 and 1.7-fold Dexa diffusion coefficient. The ex vivo studies indicated that iontophoresis directed dendrimers into the cornea, increasing the amount of Dexa permeated by 2.9, 5.6 and 3.0-fold for the formulations containing free Dexa, Dexa-PAMAM G4 and Dexa-PAMAM G3.5, respectively. Iontophoresis also increased approximately 2-fold the amount of drug retained into the cornea for all formulations. The cytotoxicity experiments revealed that PAMAM G4 toxicity was dependent on the concentration and incubation time. Finally, the in vivo experiments showed that iontophoresis increased Dexa concentration in the aqueous humor by 2, 2.5 and 6.6-fold for free Dexa, Dexa-PAMAM G4 and Dexa-PAMAM-G3.5, respectively. Therefore, the combination of iontophoresis with PAMAM dendrimers represents a promising strategy for targeted and sustained topical drug delivery to the cornea.

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AnaCarolinaMascarenhas_D.pdf: 14871773 bytes, checksum: 0b983ce8eb1e0c8e89f22b1467508d1e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a efetividade de substâncias químicas auxiliares (SQA) e medicações intracanais (MIC) sobre microrganismos e endotoxina em canais radiculares. Dentes humanos extraídos unirradiculares (n=520) foram raspados e seccionados, tendo suas coroas descartadas e as raízes padronizadas no comprimento de 15 mm. As raízes foram armazenadas em solução fisiológica (NaCl 0,9%) (SF) estéril e congeladas em freezer a -20ºC até sua utilização. As 520 raízes foram impermeabilizadas, instrumentadas, incluídas em placas de poliestireno, esterilizadas por gás de óxido de etileno e inoculadas com E. faecalis, E. coli e C. albicans durante 28 dias. Dentre as 520 raízes, 400 foram utilizadas para análise microbiológica (identificação fenotípica/molecular) e quantificação de endotoxinas pelo teste LAL (Lisado do amebócito de Limulus). Para tanto, coletas foram realizadas em diferentes momentos da fase de PQM e do uso de MIC: 7, 14 e 30 dias. As quatrocentas raízes foram divididas aleatoriamente em grupos e instrumentadas de acordo com a SQA utilizada durante o preparo químicomecânico (PQM) com (n=360) ou sem (n=40) o uso de EDTA 17%, respectivamente: hipoclorito de sódio (NaOCl) 5,25% (n=90/10), clorexidina 2% gel (CLG 2%) (n=90/10), NaOCl 5,25% e irrigação com CLL 2% (clorexidina líquida) (n=90/10) e SF (controle) (n=90/10). Em seguida, as raízes irrigadas com EDTA 17% foram divididas em grupos de acordo com a MIC utilizada: CLG 2% (n=90), hidróxido de cálcio (HC) + CLG 2% (n=90), HC + SF (9:1) (n=90) e SF (controle) (n=90). Demais raízes (n=120) foram submetidas a diferentes SQA e MIC, sendo analisadas por meio de microscopia confocal quanto à viabilidade microbiana. Os dados foram submetidos à análise estatística em nível de significância de 5%. Observou-se que PQM com CLG 2%, NaOCl 5,25% e NaOCl 5,25% seguido de irrigação final com CLL 2% promoveu redução de E. coli, E. faecalis, C. albicans e endotoxina de E. coli. Após sete dias do PQM, observou-se reinfecção do canal radicular. CLG 2%, NaOCl 5,25%, NaOCl 5,25% seguido de irrigação com CLL 2%, HC + SF, e HC + CLG 2% não demonstraram capacidade de eliminar endotoxina de E. coli. Concluiu-se que CLG 2%, NaOCl 5,25%, NaOCl 5,25% seguido de irrigação com CLL 2%, HC + SF, e HC + CLG 2% foram efetivos na redução de E. coli, E. faecalis e C. albicans. Menor redução microbiana ocorreu nos túbulos dentinários comparada à luz do canal radicular. Nenhuma substância foi capaz de eliminar endotoxina de E. coli / Abstract: The aim of this study was to evaluate in vitro the effectiveness of the auxiliary chemical substances and intracanal medications on microorganisms and endotoxins in root canals. Single-rooted extracted human teeth (n=520) were scraped and sectioned, and their crowns discarded. The roots were standarded at 15 mm and stored in sterile saline at -20ºC until use. They (n=520) were externally waterproof, endodontically instrumented, included in microtiter plates, sterilized by ethylene oxide gas and inoculated with E. faecalis, E. coli, and C. albicans for 28 days. Among the 520 roots, 400 were used for microbiological assay (phenotypic/molecular identification) and endotoxin assay by LAL test (Limulus amebocyte Lysate). Samples were collected at different times on CMP and intracanal medication: 7, 14 and 30 days. Four hundred roots were randomly divided into groups and instrumented according to the auxiliary chemical substances used during chemomechanical preparation (CMP) with (n=360) or without (n=40) 17% EDTA, respectively: 5.25% sodium hypochlorite (NaOCl) (n=90/10); 2% chlorhexidine gel (CLG) (n=90/10); 5.25% NaOCl and final irrigation with 2% CLL (n=90/10); and saline (control) (n=90/10). The roots irrigated with 17% EDTA were divided into subgroups according to intracanal medication: 2% CLG (n=90); calcium hydroxide (CH) plus 2% CLG (n=90); CH plus saline (9:1) (n=90); and saline (control) (n=90). Another roots (n=120) were submitted to different auxiliary chemical substances and intracanal medications and analyzed by confocal microscopy regarding microbial viability. The results were statistically analyzed at 5% significance level. CMP with 2% CLG, 5.25% NaOCl, and 5.25% NaOCl plus 2% CLL promoted reduction of E. coli, E. faecalis, C. albicans and endotoxin levels. Seven days after CMP, the root canals were re-infected. 2% CLG, 5.25% NaOCl, 5.25% NaOCl plus 2% CLL, CH, and CH plus 2% CLG showed no ability on endotoxin elimination. It was concluded that 2% CLG, 5.25% NaOCl, 5.25% NaOCl plus 2% CLL, CH, and CH plus 2% CLG was effective on reducing E. coli, E. faecalis, and C. albicans. Lower microbial reduction occurred in the dentinal tubules compared to the root canal. No substance was able to eliminate endotoxin / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica