Graduation date: 2000

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Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AnaCarolinaMascarenhas_D.pdf: 14871773 bytes, checksum: 0b983ce8eb1e0c8e89f22b1467508d1e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a efetividade de substâncias químicas auxiliares (SQA) e medicações intracanais (MIC) sobre microrganismos e endotoxina em canais radiculares. Dentes humanos extraídos unirradiculares (n=520) foram raspados e seccionados, tendo suas coroas descartadas e as raízes padronizadas no comprimento de 15 mm. As raízes foram armazenadas em solução fisiológica (NaCl 0,9%) (SF) estéril e congeladas em freezer a -20ºC até sua utilização. As 520 raízes foram impermeabilizadas, instrumentadas, incluídas em placas de poliestireno, esterilizadas por gás de óxido de etileno e inoculadas com E. faecalis, E. coli e C. albicans durante 28 dias. Dentre as 520 raízes, 400 foram utilizadas para análise microbiológica (identificação fenotípica/molecular) e quantificação de endotoxinas pelo teste LAL (Lisado do amebócito de Limulus). Para tanto, coletas foram realizadas em diferentes momentos da fase de PQM e do uso de MIC: 7, 14 e 30 dias. As quatrocentas raízes foram divididas aleatoriamente em grupos e instrumentadas de acordo com a SQA utilizada durante o preparo químicomecânico (PQM) com (n=360) ou sem (n=40) o uso de EDTA 17%, respectivamente: hipoclorito de sódio (NaOCl) 5,25% (n=90/10), clorexidina 2% gel (CLG 2%) (n=90/10), NaOCl 5,25% e irrigação com CLL 2% (clorexidina líquida) (n=90/10) e SF (controle) (n=90/10). Em seguida, as raízes irrigadas com EDTA 17% foram divididas em grupos de acordo com a MIC utilizada: CLG 2% (n=90), hidróxido de cálcio (HC) + CLG 2% (n=90), HC + SF (9:1) (n=90) e SF (controle) (n=90). Demais raízes (n=120) foram submetidas a diferentes SQA e MIC, sendo analisadas por meio de microscopia confocal quanto à viabilidade microbiana. Os dados foram submetidos à análise estatística em nível de significância de 5%. Observou-se que PQM com CLG 2%, NaOCl 5,25% e NaOCl 5,25% seguido de irrigação final com CLL 2% promoveu redução de E. coli, E. faecalis, C. albicans e endotoxina de E. coli. Após sete dias do PQM, observou-se reinfecção do canal radicular. CLG 2%, NaOCl 5,25%, NaOCl 5,25% seguido de irrigação com CLL 2%, HC + SF, e HC + CLG 2% não demonstraram capacidade de eliminar endotoxina de E. coli. Concluiu-se que CLG 2%, NaOCl 5,25%, NaOCl 5,25% seguido de irrigação com CLL 2%, HC + SF, e HC + CLG 2% foram efetivos na redução de E. coli, E. faecalis e C. albicans. Menor redução microbiana ocorreu nos túbulos dentinários comparada à luz do canal radicular. Nenhuma substância foi capaz de eliminar endotoxina de E. coli / Abstract: The aim of this study was to evaluate in vitro the effectiveness of the auxiliary chemical substances and intracanal medications on microorganisms and endotoxins in root canals. Single-rooted extracted human teeth (n=520) were scraped and sectioned, and their crowns discarded. The roots were standarded at 15 mm and stored in sterile saline at -20ºC until use. They (n=520) were externally waterproof, endodontically instrumented, included in microtiter plates, sterilized by ethylene oxide gas and inoculated with E. faecalis, E. coli, and C. albicans for 28 days. Among the 520 roots, 400 were used for microbiological assay (phenotypic/molecular identification) and endotoxin assay by LAL test (Limulus amebocyte Lysate). Samples were collected at different times on CMP and intracanal medication: 7, 14 and 30 days. Four hundred roots were randomly divided into groups and instrumented according to the auxiliary chemical substances used during chemomechanical preparation (CMP) with (n=360) or without (n=40) 17% EDTA, respectively: 5.25% sodium hypochlorite (NaOCl) (n=90/10); 2% chlorhexidine gel (CLG) (n=90/10); 5.25% NaOCl and final irrigation with 2% CLL (n=90/10); and saline (control) (n=90/10). The roots irrigated with 17% EDTA were divided into subgroups according to intracanal medication: 2% CLG (n=90); calcium hydroxide (CH) plus 2% CLG (n=90); CH plus saline (9:1) (n=90); and saline (control) (n=90). Another roots (n=120) were submitted to different auxiliary chemical substances and intracanal medications and analyzed by confocal microscopy regarding microbial viability. The results were statistically analyzed at 5% significance level. CMP with 2% CLG, 5.25% NaOCl, and 5.25% NaOCl plus 2% CLL promoted reduction of E. coli, E. faecalis, C. albicans and endotoxin levels. Seven days after CMP, the root canals were re-infected. 2% CLG, 5.25% NaOCl, 5.25% NaOCl plus 2% CLL, CH, and CH plus 2% CLG showed no ability on endotoxin elimination. It was concluded that 2% CLG, 5.25% NaOCl, 5.25% NaOCl plus 2% CLL, CH, and CH plus 2% CLG was effective on reducing E. coli, E. faecalis, and C. albicans. Lower microbial reduction occurred in the dentinal tubules compared to the root canal. No substance was able to eliminate endotoxin / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica

O objetivo da pesquisa foi avaliar a viabilidade da levedura probiótica Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 em sorvete e barra de cereais, quantificando a população da levedura ao longo do armazenamento (log10 UFC/g) e verificar a aceitação sensorial de possíveis consumidores. Os produtos desenvolvidos foram analisados quanto à composição centesimal, pH, overrun e presença ou ausência de micro-organismos contaminantes. Todas as análises foram realizadas em triplicata. O teste de aceitação sensorial foi conduzido com 70 provadores não treinados utilizando uma escada hedônica estruturada de nove pontos, variando entre gostei muitíssimo e desgostei muitíssimo. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste para comparação de médias (Tukey, p < 0,05). O sorvete mantevese com contagem de células superior a 6 log UFC/g por 240 dias e a barra de cereais por 30 dias. O sorvete apresentou valores de gordura (3,9%), proteínas (4,2%) e sólidos totais (35,4%) dentro dos limites preconizados pela legislação brasileira, e semelhantes a outras pesquisas envolvendo bactérias probióticas. A barra de cereais apresentou teor de umidade (8,9%) abaixo do máximo permitido (15%), além de apresentar teores de lipídios (10,2%), proteínas (5,4%) e cinzas (1,2%) semelhantes a outras pesquisas. Não se verificou variação do pH do sorvete por 120 dias, sendo detectado ligeiro aumento (5,6 para 5,7) aos 150 dias. Após esse período, manteve-se constante até o fim do armazenamento. A taxa de incorporação de ar (overrun) no sorvete foi de 44%. Não foi detectada presença de Salmonella sp. e Estafilococos coagulase positiva, além de apresentar quantidades de coliformes termotolerantes dentro dos limites aceitáveis. Os sorvetes probiótico e controle não apresentaram diferença significativa entre si e foram mais apreciados que o sorvete comercial, onde foi observada diferença significativa em relação aos demais. Dentre todas as barras de cereais oferecidas (probiótica, controle e comercial), não se detectou diferença significativa. As notas dos produtos desenvolvidos variaram entre gostei muito e gostei moderadamente, apresentando índice de aceitabilidade superior a 80% em todos os parâmetros avaliados no sorvete e na barra de cereais probiótica. A aplicação da levedura não comprometeu as características dos produtos estudados, porém são necessárias outras formas de aplicação na barra de cereais a fim de se obter maior tempo de permanência do micro-organismo. / The objective of the research was to evaluate the viability of probiotic yeast Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 in ice cream and cereal bar, quantifying the yeast population along the storage (log10 CFU/g) and the sensorial acceptation by probable consumers. The products developed were analyzed for centesimal composition, pH, overrun, presence or absence of contaminating microorganisms and sensorial acceptance. All analyzes were performed in triplicate. The sensory acceptance test was conducted with 70 untrained tasters using a structured nine point hedonic ladder, varying between I liked very much and disliked very much. The results were submitted to analysis of variance and test for comparison of means (Tukey, p <0.05). The ice cream remained with a cell count over 6 log CFU/g for 240 days and the cereal bar for 30 days. The ice cream presented values of fat (3.9%), proteins (4.2%) and total solids (35.4%) within the limits recommended by brazilian legislation, and similar to other studies involving probiotic bacteria. The cereal bar had a moisture content (8.9%) below the maximum allowed (15%), besides presenting lipids (10.2%), proteins (5.4%) and ash (1.2%) similar to other researches. There was no alteration in the pH of the ice cream for 120 days, and a slight increase (5.6 to 5.7) was detected at 150 days. After this period, it remained constant until the end of storage. The rate of air incorporation (overrun) in ice cream was 44%. It was not detected presence of Salmonella sp. and Staphylococcus coagulase positive, in addition to presenting quantity of thermotolerant coliforms inside acceptable limits. The probiotic and control ice creams did not present the significant difference between them and were more appreciated than the commercial ice cream, where a significant difference was observed in relation to the others. Among all the cereal bars offered (probiotics, control and commercial), no significant difference was detected. The notes of the products developed ranged between from I liked very and I liked moderately enjoyed, with an acceptability index over 80% in all parameters evaluated in the ice cream and probiotic cereal bar. The application of yeast does not compromise the characteristics of the products studied, but other forms of application in the cereal bar are necessary in order to obtain a longer time of permanency of the microorganism.

Pseudomonas aeruginosa is a common and important pathogen in people with cystic fibrosis (CF). Recently epidemic strains of P. aeruginosa associated with increased morbidity, have been identified. The method of transmission is not clear, but there is evidence of a potential airborne route. The aim of this study was to determine whether different strains of P. aeruginosa isolated from people with CF were able to survive within artificially generated aerosols in an aerobiological chamber. Viable P. aeruginosa could still be detected up to 45min after halting generation of the aerosols. All of the strains of P. aeruginosa expressing a non-mucoid phenotype isolated from people with CF had a reduced ability to survive within aerosols compared to an environmental strain. Expression of a mucoid phenotype by the strains of P. aeruginosa isolated from people with CF promoted survival in the aerosol model compared to strains expressing a non-mucoid phenotype.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-12Bitstream added on 2014-06-13T20:35:37Z : No. of bitstreams: 1 lopes_mc_me_araca.pdf: 187442 bytes, checksum: e5c382aecfe4bb38f157a656bfad5f2a (MD5) / As análises antigênica e genética são ferramentas importantes para o estudo da epidemiologia da raiva em uma região. A recuperação e reisolamento viral a partir de amostras conservadas por longos períodos em temperatura de congelamento é essencial para estudos retrospectivos. Porém, o tempo de conservação, associado a repetidos ciclos de congelamento e descongelamento, promove uma perda significativa na viabilidade do vírus, condição esta que pode ser contornada com a utilização de técnicas de biologia molecular, como a RT-PCR. Com o objetivo de verificar a viabilidade e detectar o RNA do vírus rábico, 95 amostras com diagnóstico positivo e armazenadas por 4 a 13 anos a –20 e –80ºC foram avaliadas por inoculação intracerebral em camundongos e RT-PCR. Apenas 33,6% (32/95) das amostras inoculadas em camundongos foram positivas, enquanto que a RTPCR detectou o genoma viral em 65,3% (62/95). Houve diferença estatisticamente significativa (p<0,0001) na viabilidade das amostras e na detecção do genoma viral na amostras armazenadas por mais de 10 anos, sendo a porcentagem de positividade de 22,1% e 59,7%, respectivamente. O presente estudo confirma a importância da RT-PCR na detecção do genoma viral em amostras conservadas por longo período de tempo, incluindo aquelas em estado visível de decomposição. / The antigenic and genetic analyses are important tools for retrospective study of rabies epidemiology in a region. The recovery and viral re-isolation from samples conserved for long periods in freezing temperature are essential for these studies. However, time conservation, associated with temperature variations, causes a significative virus viability loss. On the other hand, molecular tools, such as RT-PCR, can overcome this condition. For this purpose, 95 positive samples stored for 4 to 13 years at -20 and -80ºC were evaluated by intracerebral inoculation in mice and RT-PCR. Of this total, only 33,6% (32/95) had been positive in the intracerebral inoculation, while RT-PCR detected the viral genoma in 65.3% (62/95). It had a significant difference (p>0,0001) in the viability of the samples and the detention of the viral genoma from those samples store for more than 10 years and the percentage of positivity reached 22,1% and 59,7%, respectively. The present study confirms the importance of the RT-PCR technique for detection of viral genoma in old samples, including those in apparent state of decomposition.

Orientador: Luzia Helena Queiroz da Silva / Banca: Avelino Albas / Banca: Silvana Regina Favaretto Lazarini / Resumo: As análises antigênica e genética são ferramentas importantes para o estudo da epidemiologia da raiva em uma região. A recuperação e reisolamento viral a partir de amostras conservadas por longos períodos em temperatura de congelamento é essencial para estudos retrospectivos. Porém, o tempo de conservação, associado a repetidos ciclos de congelamento e descongelamento, promove uma perda significativa na viabilidade do vírus, condição esta que pode ser contornada com a utilização de técnicas de biologia molecular, como a RT-PCR. Com o objetivo de verificar a viabilidade e detectar o RNA do vírus rábico, 95 amostras com diagnóstico positivo e armazenadas por 4 a 13 anos a -20 e -80ºC foram avaliadas por inoculação intracerebral em camundongos e RT-PCR. Apenas 33,6% (32/95) das amostras inoculadas em camundongos foram positivas, enquanto que a RTPCR detectou o genoma viral em 65,3% (62/95). Houve diferença estatisticamente significativa (p<0,0001) na viabilidade das amostras e na detecção do genoma viral na amostras armazenadas por mais de 10 anos, sendo a porcentagem de positividade de 22,1% e 59,7%, respectivamente. O presente estudo confirma a importância da RT-PCR na detecção do genoma viral em amostras conservadas por longo período de tempo, incluindo aquelas em estado visível de decomposição. / Abstract: The antigenic and genetic analyses are important tools for retrospective study of rabies epidemiology in a region. The recovery and viral re-isolation from samples conserved for long periods in freezing temperature are essential for these studies. However, time conservation, associated with temperature variations, causes a significative virus viability loss. On the other hand, molecular tools, such as RT-PCR, can overcome this condition. For this purpose, 95 positive samples stored for 4 to 13 years at -20 and -80ºC were evaluated by intracerebral inoculation in mice and RT-PCR. Of this total, only 33,6% (32/95) had been positive in the intracerebral inoculation, while RT-PCR detected the viral genoma in 65.3% (62/95). It had a significant difference (p>0,0001) in the viability of the samples and the detention of the viral genoma from those samples store for more than 10 years and the percentage of positivity reached 22,1% and 59,7%, respectively. The present study confirms the importance of the RT-PCR technique for detection of viral genoma in old samples, including those in apparent state of decomposition. / Mestre

Uma infecção pulpar pode resultar na colonização microbiana de todo sistema de canais radiculares incluindo os túbulos dentinários. Estes microorganismos e seus produtos tóxicos são responsáveis pelo desenvolvimento e persistência da periodontite apical de origem endodôntica. O presente estudo objetivou avaliar a viabilidade de E. faecalis e C. albicans em túbulos dentinários após a aplicação de hidróxido de cálcio, clorexidina gel 2%, hidróxido de cálcio associado à clorexidina gel 2% e soro fisiológico, através da análise por cultura microbiológica e microscopia de fluorescência. Para tanto 120 raízes de dentes humanos foram padronizadas e autoclavadas, sendo posteriormente divididas em 2 grupos (n= 60) para contaminação com E. faecalis e C. albicans por 21 dias. Em seguida, foram divididas em 8 grupos (n= 15) para aplicação das substâncias antimicrobianas nos canais radiculares e posterior incubação em estufa por 14 dias. Amostras da dentina radicular na extensão de 0 - 100 µm e de 100 - 200 µm foram coletadas e submetidas à cultura microbiológica através do plaqueamento em meios de cultura. Após 48 horas de incubação promoveu-se a avaliação das UFC. Paralelamente, as amostras foram processadas para análise em microscopia de fluorescência com auxílio de marcadores fluorescentes específicos, a fim de se determinar a proporção de microorganismos viáveis e não viáveis. Outros 6 espécimes foram preparados para análise em MEV. Os resultados mostraram uma maior capacidade de penetração intratubular para E. faecalis quando comparado a C. albicans. A aplicação de medicação intracanal resultou em significativa redução da viabilidade dos microorganismos quando comparado ao grupo controle independente da medicação aplicada e em ambas as porções da dentina radicular avaliadas. Entretanto, ao compararmos individualmente as medicações, observamos o melhor desempenho da clorexidina gel 2 % e da associação de hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% sem diferença significante entre elas. O hidróxido de cálcio apresentou os piores resultados para desinfecção dos canais radiculares contaminados com E. faecalis e C. albicans. Estes achados foram confirmados tanto pela cultura microbiológica quanto pela microscopia de fluorescência. A cultura microbiológica e a microscopia de fluorescência são métodos adequados e complementares para avaliação da viabilidade de E. faecalis e C. albicans e a eficácia da clorexidina gel 2% e da associação hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% justificam seu uso em endodontia como medicação intracanal. / A pulp infection can result in a microbial colonization of the entire root canals system, including dentinal tubules. These microorganisms and their toxic product are responsible for the development and persistence of apical periondontitis from endodontic source. The present study aimed to evaluate E. faecalis and C. albicans viability in dentinal tubules after the application of calcium hydroxide, chlorhexidine gel 2%, calcium hydroxide associated to chlorhexidine gel 2% and physiological solution, through the analysis by microbiological culture and fluorescence microscopy. For that, 120 human teeth root were standardized and submitted to autoclave, and after ere divided into 2 groups (n=60) for E. faecalis and C. albicans contamination for 21 days. Following this, they were divided into 8 groups (n=15) for application of antimicrobial substances in the root canals and subsequent incubation for 14 days. Samples from root dentin with 0 - 100 µm and 100 - 200 µm of extension were collected and submitted to microbiological culture.After 48 hours of incubation, it was performed the evaluation of colony-forming units (CFU). At the same time, the samples were processed for fluorescence microscopic analysis with the assistance of specific fluorescent markers, in order to determine the proportion of viable and non-viable microorganisms. Other 6 specimens were prepared for the analysis of scanning electron microscopy. Results demonstrated a higher capacity of penetration in the tubules for E. faecalis than for C. albicans. The application of intracanal medication resulted in significant reduction of microorganisms viability when compared to the control groups independently of the medication used and in both evaluated portions of root dentin. However, when one compares individually the medications, it was observed a better performance of chlorhexidine gel 2% and the association of calcium hydroxide with chlorhexidine gel 2% without a significant difference between them. Calcium hydroxide had the worst results for disinfection of root canal contaminated with E. faecalis and C. albicans. These findings were confirmed for the microbiological culture as well as for the fluorescence microscopy. The microbiological culture and the fluorescence microscopy are adequate methods and complementary for the evaluation of E. faecalis and C. albicans viability and the efficacy of chlorhexidine gel 2% and the association of calcium hydroxide with chlorhexidine gel 2% warrant their use in Endodontics as an intracanal medication.

Uma infecção pulpar pode resultar na colonização microbiana de todo sistema de canais radiculares incluindo os túbulos dentinários. Estes microorganismos e seus produtos tóxicos são responsáveis pelo desenvolvimento e persistência da periodontite apical de origem endodôntica. O presente estudo objetivou avaliar a viabilidade de E. faecalis e C. albicans em túbulos dentinários após a aplicação de hidróxido de cálcio, clorexidina gel 2%, hidróxido de cálcio associado à clorexidina gel 2% e soro fisiológico, através da análise por cultura microbiológica e microscopia de fluorescência. Para tanto 120 raízes de dentes humanos foram padronizadas e autoclavadas, sendo posteriormente divididas em 2 grupos (n= 60) para contaminação com E. faecalis e C. albicans por 21 dias. Em seguida, foram divididas em 8 grupos (n= 15) para aplicação das substâncias antimicrobianas nos canais radiculares e posterior incubação em estufa por 14 dias. Amostras da dentina radicular na extensão de 0 - 100 µm e de 100 - 200 µm foram coletadas e submetidas à cultura microbiológica através do plaqueamento em meios de cultura. Após 48 horas de incubação promoveu-se a avaliação das UFC. Paralelamente, as amostras foram processadas para análise em microscopia de fluorescência com auxílio de marcadores fluorescentes específicos, a fim de se determinar a proporção de microorganismos viáveis e não viáveis. Outros 6 espécimes foram preparados para análise em MEV. Os resultados mostraram uma maior capacidade de penetração intratubular para E. faecalis quando comparado a C. albicans. A aplicação de medicação intracanal resultou em significativa redução da viabilidade dos microorganismos quando comparado ao grupo controle independente da medicação aplicada e em ambas as porções da dentina radicular avaliadas. Entretanto, ao compararmos individualmente as medicações, observamos o melhor desempenho da clorexidina gel 2 % e da associação de hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% sem diferença significante entre elas. O hidróxido de cálcio apresentou os piores resultados para desinfecção dos canais radiculares contaminados com E. faecalis e C. albicans. Estes achados foram confirmados tanto pela cultura microbiológica quanto pela microscopia de fluorescência. A cultura microbiológica e a microscopia de fluorescência são métodos adequados e complementares para avaliação da viabilidade de E. faecalis e C. albicans e a eficácia da clorexidina gel 2% e da associação hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% justificam seu uso em endodontia como medicação intracanal. / A pulp infection can result in a microbial colonization of the entire root canals system, including dentinal tubules. These microorganisms and their toxic product are responsible for the development and persistence of apical periondontitis from endodontic source. The present study aimed to evaluate E. faecalis and C. albicans viability in dentinal tubules after the application of calcium hydroxide, chlorhexidine gel 2%, calcium hydroxide associated to chlorhexidine gel 2% and physiological solution, through the analysis by microbiological culture and fluorescence microscopy. For that, 120 human teeth root were standardized and submitted to autoclave, and after ere divided into 2 groups (n=60) for E. faecalis and C. albicans contamination for 21 days. Following this, they were divided into 8 groups (n=15) for application of antimicrobial substances in the root canals and subsequent incubation for 14 days. Samples from root dentin with 0 - 100 µm and 100 - 200 µm of extension were collected and submitted to microbiological culture.After 48 hours of incubation, it was performed the evaluation of colony-forming units (CFU). At the same time, the samples were processed for fluorescence microscopic analysis with the assistance of specific fluorescent markers, in order to determine the proportion of viable and non-viable microorganisms. Other 6 specimens were prepared for the analysis of scanning electron microscopy. Results demonstrated a higher capacity of penetration in the tubules for E. faecalis than for C. albicans. The application of intracanal medication resulted in significant reduction of microorganisms viability when compared to the control groups independently of the medication used and in both evaluated portions of root dentin. However, when one compares individually the medications, it was observed a better performance of chlorhexidine gel 2% and the association of calcium hydroxide with chlorhexidine gel 2% without a significant difference between them. Calcium hydroxide had the worst results for disinfection of root canal contaminated with E. faecalis and C. albicans. These findings were confirmed for the microbiological culture as well as for the fluorescence microscopy. The microbiological culture and the fluorescence microscopy are adequate methods and complementary for the evaluation of E. faecalis and C. albicans viability and the efficacy of chlorhexidine gel 2% and the association of calcium hydroxide with chlorhexidine gel 2% warrant their use in Endodontics as an intracanal medication.