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Ausência de correlação entre a penetração do cimento AH Plus nos túbulos dentinários e a qualidade do selamento / Lack of correlation between AH Plus sealer penetration into dentinal tubules and sealability

Maria Cláudia Brandão de Souza 30 March 2010 (has links)
O presente estudo objetivou testar experimentalmente a existência da possível correlação entre a penetração de cimento nos túbulos dentinários e a qualidade do selamento. Foram utilizados 60 incisivos centrais superiores humanos que formaram um único grupo experimental. Após a eliminação das porções coronárias, as raízes foram padronizadas em 13 mm de comprimento. A instrumentação dos canais foi realizada no sentido coroa-ápice, e o comprimento de trabalho estabelecido a 1 mm aquém do forame apical. Como solução irrigadora foi empregado o NaOCl a 5,25% e ao final, EDTA a 17%. Em seguida, todos os canais foram obturados com guta-percha e cimento AH Plus marcado com um corante fluorescente. Para determinar a qualidade do selamento das obturações endodônticas, as amostras foram submetidas ao modelo de infiltração de glicose sob pressão. As raízes foram montadas em um dispositivo de dupla-câmara selada para permitir a infiltração da glicose. Como controle negativo foram utilizados 4 dentes hígidos, e como controle positivo, 2 dentes instrumentados porém, não obturados. Foram utilizados 0,75 mL de solução de glicose a 1 mol/L na câmara superior e 0,75 mL de água deionizada na câmara inferior. Os dispositivos foram conectados a um sistema de distribuição de pressão desenvolvido com o objetivo de permitir a infiltração de 32 amostras em uma mesma etapa. A solução de glicose foi forçada apicalmente sob uma pressão de 15 psi durante 1 hora. Uma alíquota de 50 L foi coletada da câmara inferior para quantificar a glicose infiltrada. A concentração de glicose foi determinada através de um método enzimático com o auxílio do Kit Glucose HK e de um espectrofotômetro em um comprimento de onda de 340 nm. Na sequência, as amostras foram desacopladas dos corpos de prova, embutidas em resina epóxi e cortadas em 3 secções transversais. Uma sequência de preparação metalográfica padrão foi realizada para permitir a observação da penetração de cimento nos túbulos dentinários por meio de microscopia confocal e óptica. Os dados obtidos nos 2 experimentos foram cruzados pelo teste de correlação de Spearman, o qual revelou a inexistência de qualquer possibilidade de correlação (r = 0,12). Com base nesses resultados, o presente trabalho concluiu que, dentro das condições experimentais usadas, a quantidade de cimento presente dentro dos túbulos dentinários não teve relação com a qualidade do selamento produzido. / The purpose of the present study was to experimentally test the potential correlation between tubular dentin sealer penetration and sealability. Sixty human maxillary central incisors were selected in order to compose a single experimental group. After removing of crowns, the roots were standardized at 13 mm in length. A crown-down root canal instrumentation was performed 1mm short of the apical foramen (working length). How irrigating solution was used 5.25% NaOCl and final, 17% EDTA. Then, all root canals were filled with gutta percha and AH Plus sealer labeled with a fluorescent dye. To determine the sealability pattern, samples were submitted to glucose leakage model under pressure. Four intact teeth were used as negative control while further 2 instrumented but nonfilled teeth was used as positive control. The roots were mounted in a double-chamber apparatus where 0,75 mL of 1 mol/L glucose solution was placed into the superior chamber and 0,75 mL of deionized water was placed into the inferior chamber. The devices were connected to a pressure distribution system that was developed in order to allow testing 32 specimens at the same experimental stage. The glucose solution was forced apically under a pressure of 15 psi during 1 hour. A sample of 50 L was taken from the inferior chamber and the glucose concentration was measured following an enzymatic reaction using a Glucose HK Kit readed under spectrophotometry (wave-length of 340 nm). After that, the samples were removed from the apparatus, embedded in epoxy resin and cut into 3 sections. Standard metallographic preparation was performed prior the observation of the sealer penetration into dentinal tubules by confocal and optical microscopy. Data provided by the evaluations were submitted to Spearman correlation test which revealed a lack of correlation between the two variables (r = 0.12). Therefore, the present study concluded that there was no correlation between tubular sealer penetration and sealability in non-bonding conventional root-fillings.
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Características morfológicas de vermes adultos de Schistosoma mansoni Sambon, 1907 recuperados de camundongos alimentados com dieta hiperlípidíca na fase crônica da infecção esquistossomótica. Análise por microscopia de campo claro e confocal / Morphological characteristics of adult worms of Schistosoma mansoni Sambon, 1907 recovered from mice fed high-fat diet in the chronic phase of schistosome infection. Analysis by bright field microscopy and confocal

Christiane Pezzi Gil de Souza 13 April 2015 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudos em animais experimentais evidenciaram associações significativas entre esquistossomose mansoni e hipercolesterolemia. Estudos in vitro e in vivo já demonstraram que o colesterol é essencial para Schistosoma mansoni, embora este não tenha capacidade de sintetizá-lo. A captação é realizada a partir do ambiente (cultivo ou hospedeiro) através do tegumento. O colesterol está envolvido nos mecanismos de evasão do helminto contra a resposta imunológica, além de poder participar na modulação da sinalização celular e reprodução, estimulando os órgãos reprodutores dos helmintos adultos como observado na fase aguda da infecção experimental. Este trabalho tem como objetivo avaliar se o mesmo fenômeno ocorre na fase crônica. Os helmintos foram recuperados de dez camundongos submetidos à dieta hiperlipídica ou padrão (controle) foram corados pelo carmin cloridrico e montados, individualmente, em lâmina histológica com bálsamo do Canadá. A preparação foi analisada por microscopia de campo claro nos seguintes caracteres: tegumento e o sistema reprodutor nos vermes machos (lobos testiculares, vesícula seminal, lobos testiculares supranumerários e canal ginecóforo) e, nas fêmeas (ovário, oótipo, útero, ovo, glândulas vitelínicas e espermateca). Posteriormente, algumas lâminas foram separadas para visualização pela microscopia confocal dos órgãos do sistema reprodutores acima descritos. Apesar de ter sido observado uma maior quantidade de espermatozoides, uma maior quantidade de oócitos sendo liberados no grupo da dieta, não houve diferença estatística significativa (p>0,05) entre os grupos analisados. Houve um aumento na oogênese como observado na fase aguda. Dessa forma, o colesterol pode estar relacionado com a estimulação na atividade dos órgãos reprodutores dos helmintos adultos na fase crônica da infecção. / Studies in experimental animals showed significant associations between with schistosomiasis and hypercholesterolemia. In vitro and in vivo studies have demonstrated that cholesterol is essential for Schistosoma mansoni, although this is not able to synthesize it. The capture is carried out from the environment (cultivation or host) through the tegument. The capture is carried out from the middle (cultivation or host) through the tegument. Cholesterol is involved in the helminth evasion mechanisms against the immune response, and can participate in the modulation of cell signaling and reproduction of worms by stimulating the reproductive organs of adult worms as observed in the acute phase of experimental infection. This study aims to evaluate whether the same phenomenon occurs in the chronic phase. Helminthes recovered from ten mice subjected to high fat diet or standard (control) were stained with hydrochloric carmine and mounted individually on histological slide with Canada balsam. The preparation was analyzed by bright field microscopy the following characteristics: oral sucker and ventral sucker, tubercles on tegument and the reproductive system in male worms (lobes testicular, seminal vesicles, supernumerary testicular lobes and gynaecophoric canal), and in females (ovary, ootype, uterus, egg, vitelline glands and spermatheca). Subsequently, some slides were separated for confocal microscopy for visualization of the organs of the reproductive system described above. Despite having been observed a higher amount of sperm, a larger number of oocytes are released in the diet group, there was no statistically significant difference (p> 0.05) between the groups. There was an increase in oogenesis as observed in the acute phase. Thus, cholesterol may be related to the stimulation of the activity of the reproductive organs of adult helminths in the chronic phase of infection.
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Microscopia confocal a laser na avaliação in vivo da gengivite descamativa: padrões no penfigóide das membranas mucosas, pênfigo vulgar e líquen plano oral / Confocal microscopy in the in vivo evaluation of desquamative gingivitis: patterns in mucous membrane pemphigoid, pemphigus vulgaris and oral lichen planus

Sabrina Sisto Alessi Cesar 09 April 2015 (has links)
Introdução: Gengivite descamativa (GD) se refere a uma manifestação clínica associada com diversas doenças mucocutâneas. Suas causas mais comuns são penfigóide das membranas mucosas (PMM), pênfigo vulgar (PV) e líquen plano oral (LP). A diagnose específica é melhor estabelecida através de avaliação histopatológica e de imunofluorescência. Objetivos: Examinar casos de gengivite descamativa utilizando microscopia confocal a laser e comparar os achados com aqueles encontrados na gengiva normal. Além disso, comparar os achados de microscopia confocal da gengivite descamativa com os da histopatologia convencional das lesões biopsiadas a fim de estabelecer critérios para este método diagnóstico não invasivo. Método: Doentes com manifestações clínicas de gengivite descamativa foram incluídos, totalizando quarenta e três casos. A microscopia confocal foi realizada na gengiva de um indivíduo saudável e nas lesões gengivais. Todas as lesões sem exame histopatológico prévio foram biopsiadas a fim de permitir uma correlação entre a microscopia confocal e a histopatologia. Resultados: O exame de microscopia confocal das lesões suspeitas de penfigóide das membranas mucosas revelou uma separação ao nível da junção dermo-epidérmica, preenchida por pequenas estruturas brilhantes, interpretadas como hemáceas. Os aspectos histopatológicos e de imunofluorescência confirmaram o diagnose. Para os casos de pênfigo vulgar, os achados da microscopia confocal foram de fenda intraepitelial com células arredondadas interpretadas como queratinócitos acantolíticos. Hiperqueratose e espongiose, associadas com infiltrado inflamatório, caracterizado por células pequenas e brilhantes permeando a estrutura intraepitelial de queratinócitos conhecida como favo de mel foram vistos no líquen plano. Estruturas arredondadas pouco brilhantes, interpretadas como queratinócitos necróticos, e estruturas estelares também pouco brilhantes, interpretadas como melanófagos, foram encontrados na derme. Conclusões: Propõe-se o uso da microscopia confocal como uma ferramenta adicional no diagnose e avaliação da gengivite descamativa / Background: Desquamative gingivitis refers to a clinical manifestation associated with several mucocutaneous disorders. The most common are mucous membrane pemphigoid, pemphigus vulgaris and lichen planus. Their specific diagnosis is better established by histopathological and immunofluorescence evaluation. Objective: To examine cases of desquamative gingivitis using reflectance confocal microscopy and compare the findings with those of normal gingiva. Moreover, confocal microscopy findings in desquamative gingivitis were compared to conventional histopathology of the biopsied lesions, in order to establish criteria for this non-invasive diagnostic technique. Methods: Patients with clinical manifestations of desquamative gingivitis were included, totalizing forty-three cases. Reflectance confocal microscopy was performed the gingival of a healthy person and on gingival lesions. All lesions were biopsied in order to perform a reflectance confocal microscopy- histopathologic correlation. Results: Reflectance confocal microscopy exam of the gingival lesions suspected of mucous membrane pemphigoid revealed a separation at the level of dermal-epidermal junction, filled with small bright structures interpreted as blood cells. Histopathological and immunofluorescence aspects confirmed the diagnosis. For pemphigus vulgaris, reflectance confocal microscopy aspects were of intraepithelial cleft with round detached cells interpreted as acantholytic keratinocytes, similar to the histopathological features. Hyperkeratosis and spongiosis associated with infiltration of inflammatory cells, recognized as small bright cells intermingling the honeycomb keratinocyte epithelial structure, were seen in lichen planus. Mild bright round structures interpreted as necrotic keratinocytes and mild bright stellate structures, interpreted as melanophages in the dermis were also seen. These features were present in histopathology, confirming the diagnosis of lichen planus. Conclusion: We propose the use of reflectance confocal microscopy as an additional tool in diagnosis and evaluation of desquamative gingivitis
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Caracterização clínica e laboratorial do acometimento dos folículos velos e da epiderme da face, pescoço e região anterossuperior do tórax na alopecia frontal fibrosante / Clinical and laboratorial findings related to vellus follicle involvement and epidermal changes on the face, neck and antero-superior chest area in frontal fibrosing alopecia

Aline Roberta Campos Donati Jorge 25 September 2018 (has links)
INTRODUÇÃO: A alopecia frontal fibrosante (AFF) é uma alopecia cicatricial primária linfocítica descrita em 1994, cuja prevalência vem aumentando rapidamente em todo mundo. A participação de um fator desencadeante ambiental na patogênese da doença é aventada e uma pesquisa recente encontrou uma associação da doença com o uso de cosméticos faciais. Alterações da pele e dos pelos da face e do corpo têm sido descritas em pacientes com AFF nos últimos anos e alguns estudos sugerem que essas alterações possam preceder a perda dos cabelos, indicando o início da doença fora do couro cabeludo. OBJETIVO: Estudar o acometimento da pele e dos pelos na face, pescoço e região anterossuperior do tórax em uma série de pacientes com AFF. MATERIAL E MÉTODOS: A pesquisa constou de três partes. Na primeira parte foram investigadas evidências clínicas e dermatoscópicas do acometimento da pele e dos pelos fora do couro cabeludo em 37 pacientes. A segunda parte do estudo constou da avaliação da espessura epidérmica em biópsias realizadas na face, pescoço e região anterossuperior do tórax de 20 pacientes com AFF e 20 controles. Na terceira parte do estudo foi utilizada microscopia confocal de reflectância a laser \"in vivo\" para comparar a espessura epidérmica e a densidade folicular da pele da linha de implantação frontal de 21 pacientes a de 21 controles. RESULTADOS: O acometimento dos pelos velos da face não se restringiu a linha de implantação fronto-temporal e variou de 30 a 97% dependendo da região estudada, sendo mais frequente quanto mais próximo da linha de implantação frontal do couro cabeludo. Pápulas da face foram encontradas em 60% dos pacientes estudados, localizadas principalmente na região temporal (11/37 casos), seguida pela região malar (10/37 casos) e mento (6/37 casos). Metade dos pacientes (51%) apresentaram lesões hipercrômicas compatíveis com o diagnóstico de líquen plano pigmentoso associado a AFF, acometendo face (18/19 casos), pescoço (7/19 casos) e região anterossuperior do tórax (4/19 casos). As lesões hipercrômicas mostraram-se mais raras em pacientes com fototipo baixo (p=0,022). A espessura da epiderme dos pacientes de AFF não apresentou diferença quando comparada com a dos controles independente da metodologia utilizada. Densidade folicular menor que 3,56 folículos/mm2 na linha de implantação frontal ao exame de microscopia confocal apresentou 90,5% de sensibilidade e 90,5% de especificidade para o diagnóstico de AFF e implicou num risco 90,24 (IC95% 9,5-1132; p < 0,001) vezes maior de ter a doença. CONCLUSÕES: O acometimento dos pelos velos da face é frequente e pode ser detectado de forma rápida e não invasiva pela dermatoscopia. As pápulas da face estão presentes em 60% dos pacientes. As lesões de liquen plano pigmentoso são menos frequentes em pacientes com fototipos baixos. A epiderme dos pacientes de AFF não apresenta uma menor espessura quando comparada com controles pareados por gênero, idade, fototipo e local examinado. A densidade folicular da linha de implantação frontal \"in vivo\" medida através do exame de MCRL apresenta ótima acurácia para o diagnóstico de AFF / INTRODUCTION: Frontal fibrosing alopecia (FFA) is a lymphocytic primary cicatricial alopecia first described in 1994. Its incidence has been rapidly rising worldwide, possibly related to an environmental trigger. The use of facial leave-on creams has been associated with the disease in a recent publication. Vellus follicles involvement and epidermal changes outside the scalp region have been described in FFA patients in the past few years and seem to be an early event in the disease course. OBJECTIVES: To evaluate vellus follicle and epidermal involvement over the facial, neck and upper chest skin in a series of FFA patients. METHODS: This study consisted of three parts. In the first part, prevalence of clinical and dermoscopic findings related to vellus follicle and epidermal involvement in 37 FFA patients was investigated. In part two, epidermal thickness in skin biopsies from 20 FFA patients was compared with 20 control biopsies from the same body site. In the last part, epidermal thickness and follicular density over the frontal hairline were investigated in a group of 21 FFA patients and 21 gender, age and phototype matched controls through \"in vivo\" reflectance confocal microscopy. RESULTS: Vellus follicle involvement in FFA is not restricted to frontal hairline and varies from 30 to 97% according to facial region, with greater frequencies observed on the upper face region. Facial papules were detected in 60% of our patients, most frequently over the temples (11/37 patients), malar (10/37 patients) or chin (6/37 patients) area. Half of our patients (51%) presented hyperchromic lesions compatible with FFA associated lichen planus pigmentosus. Hyperchromic lesions were observed over the face (18/19 patients), but also over the neck (7/19 patients) and upper chest (4/19 patients) skin. Hyperchromic lesions were less frequent in patients with lighter phototypes (p=0.022). Epidermal thickness of FFA patients did not differ from controls both in histology and \"in vivo\" evaluation. Frontal hairline follicular density lower than 3.56 follicles/mm2 on confocal microscopy examination presented 90.5% sensitivity, 90.5% specificity and OR = 90.24 (CI95% 9.5-1132; p < 0.001) for FFA diagnosis. CONCLUSIONS: Facial vellus follicle involvement is frequent and can be easily detected through dermoscopy in most patients. Facial papules are observed in 60% of our patients. Lichen planus pigmentosus lesions are less frequently observed in fair skin patients. Epidermal thinning is not observed in FFA patients when adequate control group is included. Frontal hairline follicular density measured by confocal microscopy has high accuracy for FFA diagnosis
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Interação do Paracoccidioides brasiliensis com células dendríticas e queratinócitos em biopsias de lesões de pele e mucosa oral / Paracoccidioides brasiliensis interacts with dermal dendritic cells and keratinocytes in human skin and oral mucosa lesions

Wellington Luiz Ferreira da Silva 25 May 2016 (has links)
A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica causada pelos fungos Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioideslutzii. O comprometimento da pele e mucosa oral são frequentes na PCM. As células dendríticas e queratinócitos do tegumento, devido à sua função como células apresentadoras de antígenos, atuam na resposta imune inata e adaptativa contra agentes patogênicos. Com o objetivo de verificar a interação do P. brasiliensis com essas células, estudamos 47 biopsias de mucosa oral e 52 de pele de lesões de doentes com diagnóstico comprovado de PCM. As biopsias foram submetidas à técnica de imuno-histoquímica de dupla-marcação com os anticorpos anti-fator XIIIa (marcador de dendrócitos dérmicos), anti-CD207 (marcador de células de Langerhans maduras), anti-pancitoqueratinas (AE1-AE3) e anti-P. brasiliensis. Fez-se também a reação de dupla marcação por técnica de imunofluorescência, com análise por microscopia confocal a laser, para a melhor visualização da interação entre queratinócitos e os fungos. Quarenta e dois por cento das amostras de mucosa oral exibiram formas fúngicas no citoplasma de dendrócitos dérmicos. As células de Langerhans, tanto nas biopsias de mucosa oral como de pele, não mostraram leveduras ou antígenos do fungo no seu citoplasma. Cinquenta e quatro por cento das biopsias de pele e sessenta por cento das amostras de mucosa exibiram leveduras no citoplasma de queratinócitos. Os resultados obtidos permitem concluir que o parasitismo de queratinócitos pode representar possível mecanismo de evasão do fungo aos mecanismos imunes locais. Os dendrócitos dérmicos fator XIIIa positivos e queratinócitos podem estar a atuar como células apresentadoras de antígenos para suprir a função, provavelmente prejudicada, das células de Langerhans nas lesões de pele e mucosa oral da PCM humana / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic disease caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis, which compromises various organs, mainly the lungs. The skin and oral mucosa are often affected. Dendritic cells and keratinocytes of the integument play a role in innate and adaptive immune response against pathogens, due to their function as antigen presenting cells. Aiming to verify the interaction of P. brasiliensis with these cell populations, we studied 52 biopsies of skin and 47 oral mucosa samples taken from patients with proven diagnosis of PCM. The biopsies were subjected to double immune staining technique with anti-factor XIIIa (marker of dermal dendrocytes), anti- CD207 (marker of mature Langerhans cells), anti-pan cytokeratins (AE1-AE3) and anti P. brasiliensis antibodies. Analyses with confocal laser microscopy were also performed to better visualization of the interaction between keratinocytes and the fungi. Factor XIIIa + dermal dendrocytes of 42% samples of oral mucosa displayed yeast forms in their cytoplasm. We did not observe yeast cells in the cytoplasm of Langerhans cells in both skin and oral mucosa samples. Fifty -four percent of skin and 60% of mucosal samples displayed yeast cells in the cytoplasm of keratinocytes. The parasitism of keratinocytes may represent a possible mechanism of evasion of the fungus to local immune mechanisms, or even as a result of keratinocytes ability to antigen presentation in PCM. Factor XIIIa dendrocytes and keratinocytes may be acting as antigenpresenting cells to fulfill the function of Langerhans cells, probably impaired, in skin and mucosa of human PCM
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Análise histopatológica de lesões leucoqueratósicas da mucosa oral avaliadas pelos exames de luminescência, cromoscopia e microscopia confocal reflectante / Histological analysis identified and assessed by tests of luminescence, chromoendoscopy and confocal reflectance leukokeratosis lesions

Ana Patricia Carneiro Gonçalves Bezerra 12 August 2014 (has links)
O câncer de mucosa oral é um problema de saúde pública, com maior incidência em homens acima de 50 anos. Uma das manifestações clínicas mais precoces do câncer da mucosa oral são as lesões leucoqueratósica. O aspecto clínico não homogêneo e o tamanho maior de 200mm2, em mucosa não queratinizada como a do assoalho da boca e ventre da língua, são aspectos que implicam na possibilidade de evolução da lesão. A dificuldade do diagnóstico das lesões precoces está na seleção do local a ser biopsiado principalmente frente a lesões extensas e heterogêneas. O objetivo desta pesquisa é avaliar se a utilização do exame clínico juntamente com os métodos auxiliares de diagnóstico das lesões leucoqueratósica da mucosa oral (VELscope®, Azul de toluidina e Solução de lugol) contribui para uma maior precisão do diagnóstico de displasias nestas lesões quando comparado ao histopatológico. E, identificar os padrões morfológicos destas lesões quando avaliadas por meio da microscopia confocal reflectante. Foram selecionados 30 pacientes, maiores de 18 anos, portadores de lesão clínica compatível com leucoplasia oral triados no ambulatório da disciplina de Estomatologia Clínica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo e que precisavam ser submetidos à biópsia para o estabelecimento do diagnóstico final. Foram realizados os testes de Azul de Toluidina, Solução de Lugol, VELscope®, microscopia confocal reflectante e posteriormente, a biópsia incisional para obtenção do diagnóstico final. Os pacientes incluídos possuíam média de idade 60,66 anos, sendo 70% (21/30) do gênero feminino e 30% (9/30) do gênero masculino. O tabagismo foi relatado por 16,7% (5/30) dos pacientes, sendo 60% (3/5) homens. A associação do tabagismo e etilismo foi relatada em 10% (3/30) dos pacientes, o tabagismo isoladamente por 6,6% (2/30) e o de etilismo por 3,3%(1/30). A associação dos hábitos e o etilismo isolado foram relatados somente por homens. Enquanto que o hábito de tabagismo isolado foi relatado somente por mulheres. Com o uso do VELscope® todas as lesões apresentaram perda da fluorescência tecidual sendo, portanto todas positivas para este método. Com a Solução de Lugol, 100% das lesões não coraram, sendo portanto positivas para este método. O exame histopatológico permitiu o diagnóstico de 30% (9/30) casos de carcinoma epidermoide, 10% (3/30) de neoplasia intraepitelial, 20% (6/30) de líquen plano oral e 40% (12/30) de líquen simple crônico oral. Para o uso do VELscope® e do Lugol foi observada uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 50%.Para o Azul de Toluidina foi observada uma sensibilidade de 63,15%- 66,66% e especificidade de 75,67%-82,35%.Na Microscopia Confocal Reflectante foram definidos padrões para os quatro diferentes diagnósticos observados. Os métodos auxiliares de diagnóstico por cromoscopia e fluorescência de mucosa se mostraram eficientes no auxílio da delimitação da extensão da lesão e a Microscopia Confocal Reflectante permitiu a visualização de padrões morfológicos das lesões brancas de forma não invasiva. A utilização da Microscopia Confocal Reflectante permitiu também a determinação de padrões morfológicos para o carcinoma epidermoide, a neoplasia intraepitelial, o líquen plano oral e o líquen simples crônico oral e se mostrou eficiente quando comparada ao exame histopatológico. / Cancer of the oral mucosa is a public health problem, with higher incidence in men above 50 years. One of the earliest manifestations of cancer of the oral mucosa lesions are leukokeratosis. The inhomogeneous clinical aspect and the larger size of 200mm2 in non-keratinized mucosa as the floor of the mouth and constipation of the tongue, are aspects that imply the possibility of evolution of the lesion. The difficulty of diagnosis of early lesions is in the selection of the site to be biopsied primarily against large and heterogeneous lesions. The objective of this research is to evaluate the use of clinical examination along with diagnostic aids leucoqueratósica of oral lesions (VELscope ®, Toluidine blue and Lugol solution) methods contributes to greater accuracy of diagnosis of dysplasia in these lesions when compared the histopathological. And identify the morphological patterns of these lesions when evaluated by reflectance confocal microscopy. 30 patients older than 18 years, with clinical lesion compatible with oral leukoplakia screened in the outpatient discipline of Clinical Dentistry, Faculty of Dentistry, University of São Paulo and that needed to be biopsied to establish the final diagnosis were selected. Tests toluidine blue, Lugol\'s solution, VELscope ®, reflectance confocal microscopy (RCM) and subsequently, incisional biopsy to obtain the final diagnosis were performed. Patients enrolled had a mean age 60.66 years, 70% (21/30) were female and 30% (9/30) were male. Smoking was reported by 16.7% (5/30) of patients, 60% (3/5) homens.A association of smoking and alcohol use was reported in 10% (3/30) of patients, smoking alone by 6.6% (2/30) and of alcoholism by 3.3% (1/30). The association of habits and alcoholism alone were reported by men only. While the habit of smoking alone was reported by women only. Using the VELscope ® all lesions showed loss of tissue fluorescence, so being all positive for this method. With Lugol\'s solution, 100% of the lesions did not stain, thus being positive for this method. Histopathological examination allowed the diagnosis of 30% (9/30) cases of squamous cell carcinoma, 10% (3/30) of intraepithelial neoplasia, 20% (6/30) of oral lichen planus and 40% (12/30) chronic oral lichen simple. For the use of Lugol VELscope ® and a sensitivity of 100% and a specificity of 50% was observed for the toluidine blue a sensitivity of 63.15%- 66.66% was observed and a specificity of 75.67% - 82.35%. Confocal Microscopy In reflective patterns observed for the four different diagnoses were defined. Auxiliary diagnostic methods chromoscopy and fluorescence mucosa were effective in aiding the delimitation of the extent of injury and Reflectance Confocal Microscopy allowed the visualization of morphological patterns of white lesions noninvasively. Use the Reflectance Confocal Microscopy also allowed the determination of morphological patterns to epidermoid carcinoma, intraepithelial neoplasia, oral lichen planus and lichen simplex chronic oral and proved efficient when compared to histopathology.
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Impacto da ativação sônica e ultrassônica do cimento obturador dos canais radiculares na adaptação e resistência de união à dentina / Impact of sonic and ultrasonic activation of root canal sealer in the adaptation and bond strength to dentin

Paúl Ernesto Baca Wiesse 07 April 2016 (has links)
O objetivo deste estudo foi avaliar a resistência de união, a penetração e a adaptação à dentina radicular de cimentos obturadores à base de resina epóxica e de silicato de cálcio com e sem ativação sônica e ultrassônica. Raízes de caninos superiores com 16 mm de comprimento foram submetidas a preparo biomecânico com instrumentos rotatórios de níquel titânio sob irrigação constante com NaOCl 2,5% e irrigação final com EDTA 17%. As raízes foram distribuídas em grupos de acordo com os cimentos obturadores: AH Plus e MTA Fillapex. Cada grupo foi subdividido em função da ativação do cimento obturador (n=13): sem ativação; ativação sônica por 30 segundos; ativação ultrassônica por 30 segundos. Em cada subgrupo, a manipulação dos cimentos obturadores foi realizada de acordo com as instruções dos fabricantes para 10 espécimes, para os 3 espécimes restantes, o cimento foi acrescido de Rodamina B 0,1% previamente à manipulação. A obturação foi realizada de acordo com o protocolo de cada subgrupo em relação ao cimento e ativação, utilizando-se a técnica de condensação lateral. Após três vezes os tempos de endurecimento dos cimentos, os espécimes foram seccionados obtendo-se 3 slices de 1,0 mm de espessura de cada terço radicular. Dois slices de cada terço foram submetidos ao teste de push-out e o padrão de falha foi determinado. O terceiro slice de cada terço radicular foi submetido à análise qualitativa da adaptação do cimento à dentina radicular e presença de vazios, por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Nos espécimes em que o cimento foi acrescido de Rodamina B 0,1%, avaliou-se a penetração do cimento na dentina radicular por microscopia confocal de varredura a laser com fluorescência. Os dados foram analisados por testes estatísticos paramétricos e não-paramétricos. O cimento AH Plus (2,58±1,21) apresentou maior resistência de união comparado ao MTA Fillapex (1,45±0,71) (p<0,122). A ativação ultrassônica (2,64±1,44) propiciou maior resistência de união comparada aos grupos sem ativação (1,58±0,73) (p<0,0001) e com ativação sônica (1,83±0,85) (p<0,0001), não havendo diferença entre estes (p=0,3303). O terço cervical apresentou maior resistência de união (2,48±1,49) comparado ao médio (2,08±0,94) (p=0,0003) e apical (1,48±0,58) (p<0,001). Para o cimento MTA Fillapex houve predomínio de falhas adesivas mistas em todos os grupos, enquanto que para o cimento AH Plus houve predomínio de falhas adesivas mistas para os grupos sem ativação e ativação ultrassônica e falhas adesivas mistas e adesivas ao material obturador para o grupo de ativação sônica. A ativação ultrassônica promoveu, independente do cimento obturador, maior número, densidade e extensão de tags, com massa obturadora mais homogênea e adaptada às paredes do canal radicular. A ativação sônica, por sua vez, apresentou número, densidade e extensão de tags similares ao grupo sem ativação, no entanto a massa obturadora apresentou desadaptações e formação de bolhas. A ativação ultrassônica impactou na maior resistência de união, penetração, densidade e extensão de tags e melhor adaptação do cimento a dentina radicular, ao contrário da ativação sônica que não aumentou a resistência de união e penetração de tags e proporcionou maior desadaptação e inclusão de vazios na massa obturadora. / The aim of this study was to evaluate the bond strength, penetration and adaptation to the root dentin sealers based on epoxy resin and calcium silicate with and without sonic and ultrasonic activation. Maxillary canine roots with 16 mm length were submitted to biomechanical preparation with nickel titanium rotary files, under constant irrigation with 2.5% NaOCl and final irrigation with 17% EDTA. The roots were divided into groups according to the sealers: AH Plus and MTA Fillapex. Each group was subdivided based on sealer activation (n = 13): no activation; sonic activations (30 seconds); ultrasonic activation (30 seconds). In each subgroup, the sealer manipulation was performed according to the manufacturers instructions for 10 specimens, for the 3 remaining specimens, the Rhodamine B 0.1% was incorpored to the sealer prior to manipulation. The root canal filling was performed according to the protocol of each group relative to the sealer and activation, using the lateral condensation technique. After three times the sealer setting times, the specimens were sectioned and obtained 3 slices of 1.0 mm thickness of each root third. Two slices of each third were submitted to the push-out test and the failure pattern was determined. The third slice of each root third was submitted to qualitative analysis of sealer and root dentin adaptation and the presence of voids, by means of confocal laser scanning microscopy. In specimens in which Rhodamine B 0.1% was added in the sealer was evaluated the sealer penetration in root dentin by confocal laser scanning fluorescence. The data were analyzed using parametric and nonparametric statistical tests. The AH Plus (2.58 ± 1.21) showed higher bond strength compared to MTA Fillapex (1.45 ± 0.71) (p <0.122). The ultrasonic activation (2.64 ± 1.44) provided higher bond strength compared to no activation groups (1.58 ± 0.73) (p <0.0001) and sonic activation (1.83 ± 0.85) (p <0.0001), with no difference between them (p = 0.3303). The cervical third showed higher bond strength (2.48 ± 1.49) compared to the middle (2.08 ± 0.94) (p = 0.0003) and apical thirds (1.48 ± 0.58) (P < 0.001). For the MTA Fillapex there was a predominance of mixed adhesive failures in all groups, whereas for AH Plus there was a predominance of mixed adhesive failures for groups without activation and ultrasonic activation and mixed adhesive failures and adhesives to the filling material for the sonic activation group. Ultrasonic activation promoted, regardless of the sealer, the greater number, density and length tags with more homogenous and adapted root canal filling to the root canal walls. On the other hand, the sonic activation, presented number, density and length of tags similar to the group without activation, however the root canal filling showed mismatches and blistering. Ultrasonic activation impacted the highest bond strength, penetration, density and length tags and better adaptation of the sealer root dentin, unlike the sonic activation that not increased bond strength and penetration tags and provided greater mismatch and the inclusion of voids in the root canal filling.
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Efeito da largura temporal de pulso do Laser de Er:YAG em zircônia pré-sinterizada / Effect of Er:YAG laser pulse widths on pre-sintered zirconia

Silva, Beatriz Togoro Ferreira da 19 October 2015 (has links)
Este estudo se propôs a analisar os efeitos das diferentes larguras temporais de pulso do laser de Er:YAG na rugosidade superficial, na perda de volume do material e na altura do degrau formado em uma Y-TZP (Yttrium-stabilized Tetragonal Zirconia Polycrystal) pré-sinterizada. Foram utilizados 5 blocos de Y-TZP pré-sinterizados destinados ao uso CAD/CAM que foram seccionados, obtendo-se 63 espécimes padronizados. Em seguida, esses espécimes foram lixados com uma sequência decrescente de lixas para padronização da superfície. Os grupos experimentais foram compostos a partir de 1 fator de variação - o tratamento de superfície. Os espécimes foram irradiados com o laser de Er:YAG (Fidelis III Fotona, Eslovênia) - 2,94 ?m, 100 mJ, 15,87J/cm2, 10 Hz, 1W, 7 mm, 60% água/40% ar. Assim formaram-se 7 grupos experimentais (n=9): G1 (50 ?s); G2 (100 ?s); G3 (300 ?s); G4 (600 ?s); G5 (1000 ?s); G6 (Abrasão triboquímica com partículas de 30 ?m); G7 (Sem tratamento). Após os tratamentos de superfície, os espécimes foram sinterizados em forno específico, de acordo com as recomendações do fabricante. Foram capturadas imagens em Microscópio Confocal a Laser 3D de cada espécime e avaliadas por meio de um software. A análise dos grupos irradiados revelou um aumento da rugosidade nos grupos G1, G2, G3 e G4 quando comparados aos grupos G6 e G7. O grupo G5 apresentou superfície totalmente plana e desfavorável para retenção. No que se refere à perda de volume e formação de degrau, os grupos G1, G2 e G3 demonstraram grande perda de volume e grande altura de degrau formado, o que pode levar a uma desadaptação da peça protética. No grupo G4 foram observados valores de rugosidade satisfatórios com pouca perda de volume e pequena altura de degrau formado, semelhante ao que foi notado para a abrasão trioboquímica (G6), podendo ser indicada para tratamento de superfície de Y-TZP pré-sinterizada. A irradiação com o laser de Er:YAG promoveu um padrão morfológico com muitas irregularidades, característico de ablação para os grupos G1, G2, G3 e G4 e, para todos os protocolos utilizados, não foi observada a presença de trincas ou carbonização. Sugere-se que a largura temporal de 600 ?s (G4) seja a mais indicada como alternativa para tratamento de superfície, objetivando a criação de micro-retenções superficiais, com pouca perda de volume de material e que, ao mesmo tempo, não provoque danos à estrutura da cerâmica policristalina. / This study evaluated the effects of different Er:YAG laser pulse width protocols on surface roughness, loss of volume of the material and the step height formed of pre-sintered Yttrium-stabilized tetragonal Zirconia Polycrystal (Y-TZP) by three-dimensional profilometric assessment. Blocks of pre-sintered Y-TZP were cut providing 63 standard 5mm thick samples which were divided by surface treatment, as follows (n=9): G1 (50?s); G2 (100?s); G3 (300?s); G4 (600?s); G5 (1000?s); G6 (tribochemical silica coating); G7 (Untreated). Laser settings: The Er:YAG laser (Fidelis III; Fotona, Ljubljana, Slovenia) 100mJ, 15,87J/cm2, 10Hz, 1W, (60%) and air (40%) cooling. After treated or not, samples were sintered according to the manufacturer\'s recommendations. Roughness, volume loss and step and were analyzed by 3D profilometric assessment with confocal laser microscopy. Irradiated groups showed an increased roughness in the groups G1, G2, G3 and G4 when compared to G6 and G7 groups. The G5 group showed a completely flat and unfavorable surface for retention. The groups G1, G2 and G3 shown great loss of volume and the step height formed, which can lead to a gap on the crowns. In G4 were observed satisfactory roughness with little loss of volume and the step height formed similar to G6. Irrespective of laser protocol, any of the specimens showed presence of cracks and carbonization. It is suggested that the pulse width 600?s (G4) is the most suitable pulse width protocol as an alternative surface treatment, promoting micro-retention, with little loss of volume of material, comparable to gold standard treatment.
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Análise histopatológica de lesões leucoqueratósicas da mucosa oral avaliadas pelos exames de luminescência, cromoscopia e microscopia confocal reflectante / Histological analysis identified and assessed by tests of luminescence, chromoendoscopy and confocal reflectance leukokeratosis lesions

Bezerra, Ana Patricia Carneiro Gonçalves 12 August 2014 (has links)
O câncer de mucosa oral é um problema de saúde pública, com maior incidência em homens acima de 50 anos. Uma das manifestações clínicas mais precoces do câncer da mucosa oral são as lesões leucoqueratósica. O aspecto clínico não homogêneo e o tamanho maior de 200mm2, em mucosa não queratinizada como a do assoalho da boca e ventre da língua, são aspectos que implicam na possibilidade de evolução da lesão. A dificuldade do diagnóstico das lesões precoces está na seleção do local a ser biopsiado principalmente frente a lesões extensas e heterogêneas. O objetivo desta pesquisa é avaliar se a utilização do exame clínico juntamente com os métodos auxiliares de diagnóstico das lesões leucoqueratósica da mucosa oral (VELscope®, Azul de toluidina e Solução de lugol) contribui para uma maior precisão do diagnóstico de displasias nestas lesões quando comparado ao histopatológico. E, identificar os padrões morfológicos destas lesões quando avaliadas por meio da microscopia confocal reflectante. Foram selecionados 30 pacientes, maiores de 18 anos, portadores de lesão clínica compatível com leucoplasia oral triados no ambulatório da disciplina de Estomatologia Clínica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo e que precisavam ser submetidos à biópsia para o estabelecimento do diagnóstico final. Foram realizados os testes de Azul de Toluidina, Solução de Lugol, VELscope®, microscopia confocal reflectante e posteriormente, a biópsia incisional para obtenção do diagnóstico final. Os pacientes incluídos possuíam média de idade 60,66 anos, sendo 70% (21/30) do gênero feminino e 30% (9/30) do gênero masculino. O tabagismo foi relatado por 16,7% (5/30) dos pacientes, sendo 60% (3/5) homens. A associação do tabagismo e etilismo foi relatada em 10% (3/30) dos pacientes, o tabagismo isoladamente por 6,6% (2/30) e o de etilismo por 3,3%(1/30). A associação dos hábitos e o etilismo isolado foram relatados somente por homens. Enquanto que o hábito de tabagismo isolado foi relatado somente por mulheres. Com o uso do VELscope® todas as lesões apresentaram perda da fluorescência tecidual sendo, portanto todas positivas para este método. Com a Solução de Lugol, 100% das lesões não coraram, sendo portanto positivas para este método. O exame histopatológico permitiu o diagnóstico de 30% (9/30) casos de carcinoma epidermoide, 10% (3/30) de neoplasia intraepitelial, 20% (6/30) de líquen plano oral e 40% (12/30) de líquen simple crônico oral. Para o uso do VELscope® e do Lugol foi observada uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 50%.Para o Azul de Toluidina foi observada uma sensibilidade de 63,15%- 66,66% e especificidade de 75,67%-82,35%.Na Microscopia Confocal Reflectante foram definidos padrões para os quatro diferentes diagnósticos observados. Os métodos auxiliares de diagnóstico por cromoscopia e fluorescência de mucosa se mostraram eficientes no auxílio da delimitação da extensão da lesão e a Microscopia Confocal Reflectante permitiu a visualização de padrões morfológicos das lesões brancas de forma não invasiva. A utilização da Microscopia Confocal Reflectante permitiu também a determinação de padrões morfológicos para o carcinoma epidermoide, a neoplasia intraepitelial, o líquen plano oral e o líquen simples crônico oral e se mostrou eficiente quando comparada ao exame histopatológico. / Cancer of the oral mucosa is a public health problem, with higher incidence in men above 50 years. One of the earliest manifestations of cancer of the oral mucosa lesions are leukokeratosis. The inhomogeneous clinical aspect and the larger size of 200mm2 in non-keratinized mucosa as the floor of the mouth and constipation of the tongue, are aspects that imply the possibility of evolution of the lesion. The difficulty of diagnosis of early lesions is in the selection of the site to be biopsied primarily against large and heterogeneous lesions. The objective of this research is to evaluate the use of clinical examination along with diagnostic aids leucoqueratósica of oral lesions (VELscope ®, Toluidine blue and Lugol solution) methods contributes to greater accuracy of diagnosis of dysplasia in these lesions when compared the histopathological. And identify the morphological patterns of these lesions when evaluated by reflectance confocal microscopy. 30 patients older than 18 years, with clinical lesion compatible with oral leukoplakia screened in the outpatient discipline of Clinical Dentistry, Faculty of Dentistry, University of São Paulo and that needed to be biopsied to establish the final diagnosis were selected. Tests toluidine blue, Lugol\'s solution, VELscope ®, reflectance confocal microscopy (RCM) and subsequently, incisional biopsy to obtain the final diagnosis were performed. Patients enrolled had a mean age 60.66 years, 70% (21/30) were female and 30% (9/30) were male. Smoking was reported by 16.7% (5/30) of patients, 60% (3/5) homens.A association of smoking and alcohol use was reported in 10% (3/30) of patients, smoking alone by 6.6% (2/30) and of alcoholism by 3.3% (1/30). The association of habits and alcoholism alone were reported by men only. While the habit of smoking alone was reported by women only. Using the VELscope ® all lesions showed loss of tissue fluorescence, so being all positive for this method. With Lugol\'s solution, 100% of the lesions did not stain, thus being positive for this method. Histopathological examination allowed the diagnosis of 30% (9/30) cases of squamous cell carcinoma, 10% (3/30) of intraepithelial neoplasia, 20% (6/30) of oral lichen planus and 40% (12/30) chronic oral lichen simple. For the use of Lugol VELscope ® and a sensitivity of 100% and a specificity of 50% was observed for the toluidine blue a sensitivity of 63.15%- 66.66% was observed and a specificity of 75.67% - 82.35%. Confocal Microscopy In reflective patterns observed for the four different diagnoses were defined. Auxiliary diagnostic methods chromoscopy and fluorescence mucosa were effective in aiding the delimitation of the extent of injury and Reflectance Confocal Microscopy allowed the visualization of morphological patterns of white lesions noninvasively. Use the Reflectance Confocal Microscopy also allowed the determination of morphological patterns to epidermoid carcinoma, intraepithelial neoplasia, oral lichen planus and lichen simplex chronic oral and proved efficient when compared to histopathology.
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Modificação superficial de fibras e microfibrilas de celulose em suspensão aquosa via automontagem com polissacarídeos iônicos e por meio da enxertia de grupos furânicos / Surface modification of cellulose fibers and microfibrilated cellulose in aqueous suspension via self-assembly with ionic polysaccharides and by grafting furanic groups

Kramer, Ricardo Klaus 26 June 2019 (has links)
A celulose é o principal polímero derivado de fonte renovável de uso industrial tanto em termos de volume como em número de aplicações. A celulose é comercializada na forma de polpa, que se trata de uma commodity cuja principal aplicação é a indústria de papel e de derivados de celulose, tais como os seus éteres e ésteres. Com o advento das nanoceluloses, que podem ser obtidas diretamente da polpa química, se observa um expressivo aumento no interesse por esses materiais. A modificação superficial tanto das fibras (polpa) como das microfibrilas é de grande interesse, pois podem permitir a ampliação do uso desses materiais uma vez que suas propriedades poderiam ser modificadas. O desenvolvimento de métodos de modificação em meio aquoso da celulose em suspensão é de grande interesse em especial se realizado com o uso de agentes sustentáveis em contexto de química verde. Este trabalho visou a modificação da polpa de celulose por duas vias: química e física, realizadas inteiramente em meio aquoso e utilizando materiais de caráter renováveis. A modificação física da fibra de celulose \"never-dried\" foi feita pelo método de auto-montagem (Layer-by-Layer) com o par de polieletrólito quitosana / carboximetilcelulose (CH / CMC) em meio aquoso. Fibras modificadas foram submetidas à analise morfológica (MEV e microscopia confocal no método de absorção de dois fótons e EDS), propriedade mecânica (módulo elástico e limite de resistência à tração) e potencial zeta. O complexo CH / CMC depositado sobre as fibras apresentou uma espessura de aproximadamente 50 nm por camada e um aumento de aproximadamente 170% no limite de resistência a tração das folhas produzidos a partir das fibras, demonstrando uma forte interação fibra/polieletrólitos. Através da técnica de absorção de dois fótons foi possível identificar a deposição das camadas fora e dentro das fibras sem o uso de cromóforo. A modificação química da nanofibra de celulose foi feita pela enxertia de grupamentos furânicos na superfície da fibra, oxidada. Em seguida de uma reação com uma bismaleimida através da reação de \"click\" de Diels-Alder em meio aquoso. Os géis foram caracterizados por meio da técnica de calorimetria diferencial de varredura (DSC) e viscosimetria, com os quais pode-se verificar o efeito da termorreversibilidade uma vez que a 65°C ocorre gelificação do sistema e 95°C ocorre reversão do gel como resultado das reações DA e retro Diels-Alder. As modificações das fibras e nanofibras de celulose em meio aquoso foram bem-sucedidas, o que pode impulsionar o uso da polpa de celulose em novas aplicações originais como artefatos de papel fortes e géis biocompatíveis, visando a estratégia green chemistry. / Cellulose is the main polymer derived from renewable sources of industrial use, in terms of volume and number of applications. Cellulose is marketed in the pulp form, which is a commodity whose main application is the paper industry and derived from pulp, such as its ethers and esters. The advent of nanocelluloses, which can be obtained directly from the chemical pulp, there is an expressive increase in these materials. The superficial modification in fibers (pulp) and microfibrils is great interest, since they can allow the amplification of the use of these materials since their properties could be modified. The development of methods for modification of cellulose in aqueous suspension is of particular interest especially if carried out with sustainable agents in the context of green chemistry. This work aimed at the modification of the cellulose pulp by two routes: chemistry and physics, performed entirely in aqueous medium and using renewable character materials. The physical modification of the \"never-dried\" cellulose fiber was done by the self-assembly method (Layer-by-Layer) with the polyelectrolyte pair chitosan / carboxymethylcellulose (CH / CMC) in aqueous medium. Modified fibers were subjected to morphological analysis (SEM and confocal microscopy in two-photon absorption technique and EDS), mechanical properties (elastic modulus and tensile strength) and zeta potential. The CH / CMC complex deposited under the fibers had a thickness of approximately 50 nm per layer and an increase of approximately 170% in the tensile strength of the sheets in compare of unmodified fibers sheets, showing a strong interaction between fiber and polyelectrolyte. Through the technique of two-photon adsorption, it was possible to identify the layers deposition outside and inside the fibers without the use of chromophore. The chemical modification of the cellulose nanofiber was made by the grafting of furanic groups on the surface of the oxidized fiber. Following by reaction with a bismaleimide through the \"click\" reaction of Diels-Alder in aqueous medium. The thermoreversible hydrogels were characterized by differential scanning calorimetry (DSC) and viscosimetry, which the effect of thermoreversibility can be verified at 65 °C when the gelation of the system occurs and 95 °C gel reversion occurs because of DA and retro Diels-Alder reactions. Modifications of cellulose fibers and nanofibers in aqueous media have been successful, which may increase the use of cellulose pulp in novel applications such as strong paper artifacts and biocompatible gels, targeting the green chemistry strategy.

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