Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2016-08-22T20:44:34Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO LAÍS BENTES DE ALMEIDA.pdf: 1329940 bytes, checksum: a81526a00244527556b74aba58812323 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T20:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO LAÍS BENTES DE ALMEIDA.pdf: 1329940 bytes, checksum: a81526a00244527556b74aba58812323 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Colletotrichum species of the genus are widely distributed in temperate, tropical and subtrotropicais regions and cause a disease known as anthracnose in numerous genres of host plants. It is common to find several Colletotrichum species pathogenic to the same host, as it is a species common cause disease symptoms in various host plants. The cultivation of chillies and peppers are often attacked by several species of Colletotrichum and registers high losses in economic output due to damage caused by the disease. Thus, the correct identification of the causative agent is essential for defining control strategies and integrated management, so that the development of an effective management strategy depends, among other factors, the understanding of the etiology of disease, genetic diversity and structure the population of the pathogen. In order to identify the species of Colletotrichum responsible for causing anthracnose in the Capsicum plant fruits in the State of Amazonas, this study analyzed 94 isolates from fruits pepper, pepper and fragrant murupi pepper. The identification was based on multilocus sequencing and analysis of partial regions of the ACT gene, CHS, GAPDH, HIS and GS and allowed the identification of seven different species of Colletotrichum associated with anthracnose lesions in fruits of Capsicum plants (C. scovillei C. truncatum, C. brevisporum, C. siamense, C. fruticola, C. theobromicola and C. gloeosporioides). It was possible to confirm the predominance of C. scovillei in the municipalities of Presidente Figueiredo and Rio Preto da Eva, C. siamense in the city of Manacapuru, C. brevisporum in Manacapuru and C. truncatum exclusively in the municipality of Iranduba. The pathogenic species of Colletotrichum are widespread in the State of Amazonas affecting the health of plantations and causing economic losses to producers, confirming the cosmopolitan distribution, low pathogenic specificity and high evolutionary potential of the species belonging to this genre. / Espécies do gênero Colletotrichum são amplamente distribuídas por regiões temperadas, tropicais e subtrotropicais e causam uma doença conhecida como antracnose em numerosos gêneros de plantas hospedeiras. É comum encontrar várias espécies de Colletotrichum patogênicas a um mesmo hospedeiro, assim como é comum uma mesma espécie causar sintomas da doença em diversas plantas hospedeiras. O cultivo de pimentões e pimentas é frequentemente atacado por várias espécies de Colletotrichum e registra altas perdas no rendimento econômico devido aos danos gerados pela doença. Assim, a correta identificação do agente causal é primordial para definir as estratégias de controle e manejo integrado, de modo que o desenvolvimento de uma estratégia de gestão eficaz depende, entre outros fatores, do conhecimento sobre a etiologia da doença, da diversidade genética e estrutura da população do patógeno. Com o intuito de identificar as espécies de Colletotrichum responsáveis por causar antracnose em frutos de plantas do gênero Capsicum no Estado do Amazonas, neste trabalho foram analisados 94 isolados obtidos de frutos de pimentão, pimenta cheirosa e pimenta murupi. A identificação foi realizada com base no sequenciamento e análise multilocus de regiões parciais dos genes ACT, CHS, GAPDH, HIS e GS e permitiu a identificação de sete diferentes espécies de Colletotrichum associadas à lesões de antracnose em frutos de plantas de Capsicum (C. scovillei, C. truncatum, C. brevisporum, C. siamense, C. fruticola, C. theobromicola e C. gloeosporioides). Foi possível verificar a predominância de C. scovillei nos municípios de Presidente Figueiredo e Rio Preto da Eva, C. siamense no município de Manacapuru, C. brevisporum em Manacapuru e C. truncatum exclusivamente no município de Iranduba. As espécies patogênicas de Colletotrichum encontram-se amplamente difundidas no Estado do Amazonas afetando a sanidade dos plantios e causando prejuízos econômicos aos produtores, confirmando a distribuição cosmopolita, baixa especificidade patogênica e alto potencial evolutivo das espécies pertencentes a esse gênero.

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Milena Araúz Viol / Resumo: Giardia duodenalis é um protozoário flagelado que coloniza o trato intestinal de hospedeiros vertebrados. A caracterização molecular de G. duodenalis revolucionou a compreensão da taxonomia, diversidade genética e epidemiologia da giardíase em seres humanos e animais. Em nosso estudo, realizamos a caracterização molecular de G. duodenalis em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil. Assim, foram colhidas 183 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. Estas amostras foram examinadas por meio da reação em cadeia pela polimerase tipo para amplificação da subunidade menor do gene do RNA ribossômico, todas as amostras positivas por esse gene, foram caracterizadas para amplificação parcial dos genes beta-giardina, glutamato desidrogenase e triosefosfato isomerase. G. duodenalis foi verificada em 6,56% das amostras fecais e por meio da análise das sequências, verificou-se 100% de similaridade genética com "assemblage" E. Esta foi a primeira detecção de G. duodenalis "assemblage" E em bezerros bubalinos no Brasil. / Abstract: Giardia duodenalis is a flagellated protozoan that colonizes the intestinal tract of vertebrate hosts. A molecular characterization of G. duodenalis revolutionized an understanding of the taxonomy, genetic diversity and epidemiology of giardiasis in humans and animals. In our stud, we performed the molecularly characterization of Giardia duodenalis in buffalo calves from State of São Paulo, Brazil. Then, 183 fecal samples of Murrah buffaloes were collected up to six months of age. These samples were examined by nested polymerase chain reaction for parcial amplification of the small subunit of the ribosomal RNA gene. All G. duodenalis-positive samples were characterized by beta-giardin, glutamate dehydrogenase and triosephosphate isomerase genes. G. duodenalis was detected in 6,56% of the faecal samples, and sequence analysis showed 100% genetic similarity with assemblage E. This was the first detection of G. duodenalis assemblage E in buffalo calves in Brazil. / Doutor

Submitted by MONALLY CONCEIÇÃO COSTA DE AQUINO null (monallyaquino@yahoo.com.br) on 2018-03-07T16:42:09Z No. of bitstreams: 1 Tese 28_02_18.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Isabel Pereira de Matos null (isabel@fmva.unesp.br) on 2018-03-08T14:08:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 aquino_mcc_dr_araca_int.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-08T14:08:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 aquino_mcc_dr_araca_int.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Outra / Giardia duodenalis é um protozoário flagelado que coloniza o trato intestinal de hospedeiros vertebrados. A caracterização molecular de G. duodenalis revolucionou a compreensão da taxonomia, diversidade genética e epidemiologia da giardíase em seres humanos e animais. Em nosso estudo, realizamos a caracterização molecular de G. duodenalis em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil. Assim, foram colhidas 183 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. Estas amostras foram examinadas por meio da reação em cadeia pela polimerase tipo para amplificação da subunidade menor do gene do RNA ribossômico, todas as amostras positivas por esse gene, foram caracterizadas para amplificação parcial dos genes beta-giardina, glutamato desidrogenase e triosefosfato isomerase. G. duodenalis foi verificada em 6,56% das amostras fecais e por meio da análise das sequências, verificou-se 100% de similaridade genética com “assemblage” E. Esta foi a primeira detecção de G. duodenalis “assemblage” E em bezerros bubalinos no Brasil. / Giardia duodenalis is a flagellated protozoan that colonizes the intestinal tract of vertebrate hosts. A molecular characterization of G. duodenalis revolutionized an understanding of the taxonomy, genetic diversity and epidemiology of giardiasis in humans and animals. In our stud, we performed the molecularly characterization of Giardia duodenalis in buffalo calves from State of São Paulo, Brazil. Then, 183 fecal samples of Murrah buffaloes were collected up to six months of age. These samples were examined by nested polymerase chain reaction for parcial amplification of the small subunit of the ribosomal RNA gene. All G. duodenalis-positive samples were characterized by beta-giardin, glutamate dehydrogenase and triosephosphate isomerase genes. G. duodenalis was detected in 6,56% of the faecal samples, and sequence analysis showed 100% genetic similarity with assemblage E. This was the first detection of G. duodenalis assemblage E in buffalo calves in Brazil.

O gênero Stenotrophomonas inclui doze espécies de bactérias Gram- negativas, não fermentadoras, que podem ser encontradas no ambiente. Até o presente, S. maltophilia é a única espécie com linhagens que são patógenos oportunistas em seres humanos. Essa espécie tem ganhado importância clínica por estar envolvida em um crescente número de infecções em pacientes imunodeprimidos e em UTI neonatais, apresentando altas taxas de morbimortalidade. Isolados ambientais e clínicos de S. maltophilia compartilham 85% de homologia genômica, podendo ser a diferença uma consequência da adaptação da bactéria aos diferentes nichos ecológicos em que é encontrada. Embora infecções e/ou colonizações por S. maltophilia aconteçam principalmente em ambiente nosocomial, diversos estudos têm mostrado um aumento do número de infecções de origem comunitária. Neste estudo, isolados nosocomiais e linhagens clínicas de S. maltophilia foram fenotipados e comparados quanto ao seu perfil filogenético por Multilocus Sequence Typing (MLST). Na análise por MLST utilizaram-se os genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA e rpoA, por serem genes constitutivos. O perfil filogenético mostrou alta variabilidade clonal, provavelmente refletindo o processo de adaptação de S. maltophilia ambientais a outros habitats. Verificou-se que dois subgrupos de isolados clínicos de S. maltophilia com grande homogeneidade filogenética apresentam recombinação intergrupos, indicando alta permissividade à transferência horizontal de informação genética, envolvida na resistência a antibióticos e na expressão de fatores de virulência. Mais ainda, para a maioria das amostras clínicas aqui estudadas, inferências filogenéticas podem ser feitas apenas com o uso do gene ppsA. Portanto, o sequenciamento de apenas um fragmento específico para esse gene seria suficiente, em muitos casos, para determinar se a infecção por S. maltophilia foi causada por cepa já presente no ambiente nosocomial ou por bactérias de origem comunitária introduzidas nesse ambiente pela circulação de pessoas e materiais. Finalmente, foi possível mostrar que até mesmo isolados e linhagens clínicas filogeneticamente próximos não compartilham similaridade de perfil metabólico, o que indica sua origem comunitária / The genus Stenotrophomonas comprises twelve species of Gram- negative and non-fermentative bacteria, which can be found in the environment. The species S. maltophilia is the only one, until the present, that includes opportunistic pathogenic strains in humans. S. maltophilia gained clinical importance by being involved in an increasing number of infections in immunocompromissed patients and in NICUs, with high rates of morbidity and mortality. Environmental and clinical isolates of S. maltophilia share around 85% of genomic homology and this difference may be a consequence of adaptation to the different ecological niches where S. maltophilia can be found. Although infection and/or colonization by S. maltophilia occur mainly in the nosocomial environment, several studies have shown a growing number of community-acquired infections. In this study, nosocomial isolates and clinical strains of S. maltophilia were phenotyped and their phylogenetic profiles compared by using Multilocus Sequence Typing (MLST). In order to accomplish the MLST analysis the constitutive genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA and rpoA were used. The resultant global phylogenetic profile showed high clonal variability, what correlates with the adaptability process of environmental S. maltophilia to other habitats. It was found that two clinical isolates subgroups of S. maltophilia with great phylogenetic homogeneity present intergroup recombination indicating the high permittivity to horizontal gene transfer, a mechanism involved in the acquisition of antibiotic resistance and expression of virulence factors. Moreover, for most of the clinical samples studied here, phylogenetic inferences can be made with the use of the gene ppsA only. Therefore, the sequencing of just one specific fragment of this gene would allow, in many cases, to determine whether the infection with S. maltophilia ? ? was caused by a strain already present in the nosocomial environment, or by bacteria introduced from the community in this environmental through the movement of people and materials. Finally, phenotyping data showed that even closely phylogenetic related nosocomial isolates and clinical strains do not share the same metabolic profile, thus indicating their community- acquired origin

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-21T14:38:30Z No. of bitstreams: 1 Luiz Henrique Rocha Lopes.pdf: 2118185 bytes, checksum: 93ff9ca19a00eb532e526f9d4c773b3a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T14:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Henrique Rocha Lopes.pdf: 2118185 bytes, checksum: 93ff9ca19a00eb532e526f9d4c773b3a (MD5) Previous issue date: 2015-07-27 / One of the main onion crop diseases in Brazil is anthracnose, caused by especies of genus Colletotrichum. In this work it was used several Colletotrichum isolates obtained from plants do Allium genus with symptoms of anthracnose. The isolates were obtained from different regions of Brazil and characterized with the aid of morphological methods, molecular and cultural features. The Bayesian Analysis Method of inference was used for an initial analysis involving the genomic region β-tubulin (tub2). A representative group of isolates, selected in the first analysis, was sequenced for the partial region of actin (act) and ApMat. Two groups of haplotypes were generated and analyzed separately, one by concatenating tub2 and act and Other tub2, act and ApMat. The analysis revealed along with morphological analyzes that onion anthracnose is probably caused by several Colletotrichum species belonging to complexes acutatum and gloesporioides. All the representative isolates used in this study were pathogenic on onion, being able to cause of induce typical symptoms of anthracnose, especially on bulbs with variable aggressiveness range. All the results obtained in this work lead us to believe that onion anthracnose is caused by several species different of what has been reported so far. / Uma das principais doenças no cultivo de cebola no Brasil é a antracnose, causada por espécies do gênero Colletotrichum. Neste trabalho foram utilizados 42 isolados obtidos de plantas do gênero Allium com sintomas de antracnose de todas as regiões geográficas do Brasil e caracterizados com o auxílio de métodos morfológicos, moleculares e de características culturais. O método de análise de inferência Bayesiana foi utilizado para uma análise inicial envolvendo o gene β-tubulina (tub2). Um outro grupo, oriundo desta análise, foi seqüenciado para os genes parciais actina (act) e ApMat. Dois grupos de haplótipos foram gerados e analisados separadamente, um concatenando tub2 e act e outro tub2, act e ApMat. A análise revelou juntamente com análises morfológicas que a antracnose em cebola é causada, por várias espécies inseridas dentro dos complexos acutatum e gloesporioides. Todos os isolados representativos usados no estudo foram patogênicos sendo capazes de induzir sintomas típicos de antracnose, sobretudo em bulbos de cebola com variação de agressividade. Todas as informações deste trabalho levam a crer que, a antracnose em cebola é causada por um conjunto de espécies, diferente do que se tem relatado até o momento.

O gênero Stenotrophomonas inclui doze espécies de bactérias Gram- negativas, não fermentadoras, que podem ser encontradas no ambiente. Até o presente, S. maltophilia é a única espécie com linhagens que são patógenos oportunistas em seres humanos. Essa espécie tem ganhado importância clínica por estar envolvida em um crescente número de infecções em pacientes imunodeprimidos e em UTI neonatais, apresentando altas taxas de morbimortalidade. Isolados ambientais e clínicos de S. maltophilia compartilham 85% de homologia genômica, podendo ser a diferença uma consequência da adaptação da bactéria aos diferentes nichos ecológicos em que é encontrada. Embora infecções e/ou colonizações por S. maltophilia aconteçam principalmente em ambiente nosocomial, diversos estudos têm mostrado um aumento do número de infecções de origem comunitária. Neste estudo, isolados nosocomiais e linhagens clínicas de S. maltophilia foram fenotipados e comparados quanto ao seu perfil filogenético por Multilocus Sequence Typing (MLST). Na análise por MLST utilizaram-se os genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA e rpoA, por serem genes constitutivos. O perfil filogenético mostrou alta variabilidade clonal, provavelmente refletindo o processo de adaptação de S. maltophilia ambientais a outros habitats. Verificou-se que dois subgrupos de isolados clínicos de S. maltophilia com grande homogeneidade filogenética apresentam recombinação intergrupos, indicando alta permissividade à transferência horizontal de informação genética, envolvida na resistência a antibióticos e na expressão de fatores de virulência. Mais ainda, para a maioria das amostras clínicas aqui estudadas, inferências filogenéticas podem ser feitas apenas com o uso do gene ppsA. Portanto, o sequenciamento de apenas um fragmento específico para esse gene seria suficiente, em muitos casos, para determinar se a infecção por S. maltophilia foi causada por cepa já presente no ambiente nosocomial ou por bactérias de origem comunitária introduzidas nesse ambiente pela circulação de pessoas e materiais. Finalmente, foi possível mostrar que até mesmo isolados e linhagens clínicas filogeneticamente próximos não compartilham similaridade de perfil metabólico, o que indica sua origem comunitária / The genus Stenotrophomonas comprises twelve species of Gram- negative and non-fermentative bacteria, which can be found in the environment. The species S. maltophilia is the only one, until the present, that includes opportunistic pathogenic strains in humans. S. maltophilia gained clinical importance by being involved in an increasing number of infections in immunocompromissed patients and in NICUs, with high rates of morbidity and mortality. Environmental and clinical isolates of S. maltophilia share around 85% of genomic homology and this difference may be a consequence of adaptation to the different ecological niches where S. maltophilia can be found. Although infection and/or colonization by S. maltophilia occur mainly in the nosocomial environment, several studies have shown a growing number of community-acquired infections. In this study, nosocomial isolates and clinical strains of S. maltophilia were phenotyped and their phylogenetic profiles compared by using Multilocus Sequence Typing (MLST). In order to accomplish the MLST analysis the constitutive genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA and rpoA were used. The resultant global phylogenetic profile showed high clonal variability, what correlates with the adaptability process of environmental S. maltophilia to other habitats. It was found that two clinical isolates subgroups of S. maltophilia with great phylogenetic homogeneity present intergroup recombination indicating the high permittivity to horizontal gene transfer, a mechanism involved in the acquisition of antibiotic resistance and expression of virulence factors. Moreover, for most of the clinical samples studied here, phylogenetic inferences can be made with the use of the gene ppsA only. Therefore, the sequencing of just one specific fragment of this gene would allow, in many cases, to determine whether the infection with S. maltophilia ? ? was caused by a strain already present in the nosocomial environment, or by bacteria introduced from the community in this environmental through the movement of people and materials. Finally, phenotyping data showed that even closely phylogenetic related nosocomial isolates and clinical strains do not share the same metabolic profile, thus indicating their community- acquired origin

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A metodologia do “Multilocus Sequence Typing (MLST)” tornou-se uma ferramenta importante para tipagem molecular para C. albicans porque esta metodologia pode caracterizar grande número de isolados rapidamente e está isenta da interpretação subjetiva de padrões de bandas em géis de eletroforese. Este método é muito útil no entendimento da filogenia e epidemiologia de cepas de C. albicans recuperadas de infecções fúngicas invasivas. Objetivos: 1) aplicar as metodologias de MLST e Tipagem ABC para isolados de C. albicans recuperados de infecções de corrente sanguínea em hospitais terciários no Brasil e 2) determinar se cepas indistinguíveis ou diferentes foram responsáveis pelos episódios de candidemia persistente ou candidemia recorrente em isolados sequenciais de mesmo paciente. Material e Métodos: Nós aplicamos a metodologia do MLST e Tipagem ABC em isolados de C. albicans de 61 pacientes com candidemia coletados durante um estudo multicêntrico realizado em 11 hospitais públicos terciários de 9 cidades brasileiras. Também foram avaliados os isolados sequenciais de 8 pacientes com candemia persistente ou recorrente. Candidemia persistente foi definido como um episódio de fungemia com duas ou mais culturas positivas para C. albicans, em 2 ou mais dias diferentes, a despeito da contínua terapia antifúngica adotada. Candidemia recorrente foi definida como um episódio de candidemia ocorrendo ao menos 1 mês após o episódio incidente e a negativação de duas hemoculturas sequenciais após introdução da terapia antifúngica, envolvendo a mesma espécie de Candida. Resultados: Um total de 48 únicos “diploid sequence types (DSTs)” foram observados, incluindo 10 novos genótipos e 32 novos DSTs. DST 69 foi o mais comum entre os nossos isolados. Isolados clado 1 responderam a 56% da nossa coleção. O clado 3 e clado 8 foram os clados com maior número de isolados depois de clado 1, ambos respondendo por 10% das amostras. O clado 9 e clado 17 foram responsáveis por 6,5% dos isolados cada um. Isolados clado 12 responderam por 5%. Foi isolada uma única cepa (1,5%) do clado 2, clado 4, clado 16 e um isolado categorizado como “solitário”. Para Tipagem ABC, 82% dos isolados foram classificados como tipo A, seguido por tipo B com 16,5% e tipo C com 1,5%. Quanto aos pacientes com candidemia persistente ou recorrente, para todos os pacientes exceto um, verificou-se a permanência dos mesmos DSTs encontrados entre a primeira e última amostra coletada. Um único paciente com coletas sequenciais pelo período de 10 dias apresentou 3 cepas distintas discriminadas pelo MLST. Uma destas 3 cepas foi a única representante do clado 2 em nosso estudo. Conclusão: Mais de 50% dos isolados deste estudo apresentaram novos DSTs, predominando o clado 1 em 56% das amostras. Para a Tipagem ABC, 82% dos isolados foram do tipo A. Este é o primeiro estudo de nosso conhecimento a descrever infecção de corrente sanguínea por 3 cepas distintas de C. albicans documentadas no período de 10 dias. / The DNA sequence-based genotyping technique multilocus sequence typing (MLST) has emerged as an alternative typing tool for C. albicans because can characterize large numbers of isolates rapidly, and does not require the subjective interpretation of banding patterns. This methodology is a very useful tool in understanding the phylogenetics and epidemiology of C. albicans strains from invasive candidiasis. Objective: Our goal was 1) to apply MLST and ABC typing to C. albicans strains recovered from bloodstream infection from public tertiary care hospitals in Brazil and 2) determine whether indistinguishable or different strains were responsible for persistent or recurrent fungemia by performing MLST and ABC typing on sequential C. albicans isolates from the same patient. Methods: We applied MLST and ABC typing, which is based on the presence or absence of an intron in the 25S rDNA region, to C. albicans strains from 61 patients with candidemia collected during a multicenter surveillance study in 11 public tertiary care hospitals, representative of the public health system of 9 of the largest cities in Brazil. We also analyzed C. albicans strains from 8 patients with persistent or recurrent candidemia. Persistent candidemia was defined as two or more blood cultures positive for C. albicans on 2 or more separate days. Recurrent candidemia was defined as an episode of candidemia occurring at least 1 month after the apparent complete resolution of an infectious episode caused by the same Candida species. Results: A total of 48 unique profiles or diploid sequence types (DST) were observed, with 10 new sequence types (STs) and 32 new DSTs. DST 69 was the most common DST isolated. C. albicans clade 1 accounted for 56% of the collection, clade 3 and clade 8 for 10% each, clades 9 and 17 for 6.5% each, and clade 12 for 5%. Clade 2, clade 4, clade 16 and a singleton strain had 1 isolate each (1.5%). For ABC typing, 82% of the isolates were classified as type A, followed for 16.5% type B and 1.5% type C. All the patients’ strains related to persistent or recurrent candidemia but one showed the same MLST diploid sequence type (DST), ABC type and susceptibility profile to antifungals in the first and second samples. One patient with 7 samples collected sequentially over 10 days showed 3 distinct strains, well discriminated by MLST. One of the 3 strains recovered from this patient showed a single C. albicans isolate found in our total collection classified as clade 2, although clade 2 is commonly found worldwide. Conclusion: More than 50% of isolates from this study form a unique set of DSTs and clade 1 was responsible for 56% of the isolates. For ABC typing, 82% of the isolates were type A. To the best of our knowledge, this is the first study describing a blood stream infection with 3 distinct C. albicans strains in the same patient within a short period of time. / CNPq: GM/GD 142025-2005-4 / CNPq: SWE 200669/2007-9 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Visando contribuir para a compreensão dos processos que originaram e mantiveram a biodiversidade na Mata Atlântica (MA), o presente estudo teve como objetivo inferir a história evolutiva - bem como os processos biogeográficos envolvidos - de duas espécies de aves da MA, P. atra (120 indivíduols) e P. leucoptera (434 indivíduos). Realizamos uma análise filogeográfica envolvendo marcadores com diferentes tipos de herança: materna (gene mitocondrial da subunidade II da NADH desidrogenase), biparental (três marcadores anônimos VIDY, GK439 e 55J7) e ligada ao cromossomo Z (íntron 18 da helicase com cromo-domínio de ligação ao DNA, íntron 15 da helicase Brahma dependente de ATP e íntron 1 da fosfolipase A2). Duas questões principais foram abordadas: (i) Qual hipótese de diversificação é mais congruente com os resultados do presente estudo? (ii) Os resultados baseados em marcadores com diferentes tipos de herança são congruentes? Para responder a primeira questão, algumas das previsões de cada hipótese foram testadas. Foi encontrada evidência de que as mudanças climáticas no final do Pleistoceno parecem ter sido importantes na estrutura filogeográfica de Pyriglena atra e Pyriglena leucoptera na MA. Os resultados encontrados foram congruentes com a Hipótese dos Isolados de Montanha, mas aparentemente refutam outras hipóteses, tais como: a Hipótese dos Refúgios do Pleistoceno no contexto do modelo paleoclimático proposto por Carnaval & Moritz (2008), Hipótese de estruturas fisiográficas (rios ou montanhas) como barreiras, e a Hipótese de Gradientes Ecológicos. Além disso, os rios Doce e Contas parecem ser barreiras secundárias interrompendo parcialmente o gênico. Finalmente, os marcadores revelaram diferentes níveis de estrutura geográfica e sinais nem sempre totalmente congruentes. Assim, embora os marcadores mitocondriais sejam muito informativos em reconstruções filogeográficas, é importante usar vários tipos de marcadores para recuperar de forma mais completa a história dos processos evolutivos dos organismos e os possíveis fatores que geraram essa biodiversidade / To contribute to the understanding of the processes that originated and maintained biodiversity in the Atlantic Forest (AF), the present study aimed to infer the evolutionary history - as well as the biogeographic processes involved - of two AF bird species, P. atra (120 individuals) and P. leucoptera (434 individuals). We performed a phylogeographic analysis based on markers with different types of inheritance: maternal (mitochondrial gene of the NADH dehydrogenase subunit II), biparental (three annonymous markers: VIDY, GK439, 55J7) and Z-linked (intron 18 of the chromo-DNA-binding domain helicase, intron 15 of the ATP-dependent Brahma helicase and intron 1 of the Phospholipase A2). Two major questions were addressed: (i) Which diversification hypothesis best fits the results of the present study? (ii) Are the results based on markers with different types of inheritance congruent? In order to answer the first question, some of the predictions of each hypothesis were tested. We found evidence that climate changes in the late Pleistocene seem to have been important for shaping the phylogeographic structure of Pyriglena atra and Pyriglena leucoptera in the AF. The results are congruent with the Montane Isolation Hypothesis but apparently refute other hypotheses, such as: The Pleistocene Refuge Hypothesis in the context of the paleoclimatic model proposed by Carnaval & Moritz (2008), Hypothesis of physiographic structures (i.e. rivers or mountains) as barriers, and the Ecological Gradients Hypothesis. Additionaly, the Doce and Contas rivers seem to act as secondary barriers partially disrupting gene flow. Finally, the markers revealed varying levels of geographical structure that were not totally congruent. Thus, although mitochondrial markers are very informative for phylogeographic reconstructions, it is important to use several types of markers in order to recover the history of the evolutionary processes of organisms and the possible factors that generate this biodiversity

Surveys for entomopathogenic bacteria and their associated nematode hosts were conducted locally (University of Bath campus) and across southern England. Sampling involved trialing a novel Android app. (Epicollect) to manage sample collection data. Galleria larvae were used to bait UK soil samples. Insects which became infected were placed on White traps to collect any emerging nematodes, from which bacteria were isolated. Bacteria were also isolated from the haemolymph of any infected larvae. Bacterial isolates were classified on the basis of 16s rDNA and recA gene sequences. Serratia proteamaculans-like strains dominated the samples, and Multilocus sequence analysis (MLSA) was developed for the characterization of these Serratia isolates. We determined the sequences of (350-450-bp) fragments from five housekeeping genes of 84 isolates of Serratia proteamaculans. MLSA was shown to be effective for distinguishing closely related strains found in the insects’ haemolymph and from different nematodes. goeBURST was used to visualize the relationships between the STs, and the data showed a high level of discrimination, resolving 69 STs from the 84 isolates. In addition, the data derived from this study were represented in a phylogenetic network using the Splits Tree-network methods, to show the rate of recombination within and between the genes. From a total of 256 infected Galleria 23.04% were nematode positive. The nematodes were identified based on 18S rDNA 19 isolates were close relatives of the species Pristionchus entomophaga and Diplogasteriodes magnus (Diplogastridae). A further 16 isolates were more closely related to Steinernema glaseri (Steinernematidae). All three nematode types were isolated from diverse habitats and soil types, but were isolated more frequently in cold seasonal conditions. The bacterial sequence data suggest that the nematode- associated strains of bacteria belong to specific clades, distinct from the free living infective strains, which hints at ecological diversity within the S. proteamaculans population. Two of the Serratia proteamaculans-like strains had been chromosomally labeled with GFP to confirm the specifics of their association with the nematode hosts. The associated S. proteamaculans-like isolates isolated from Bath and Chepstow soils were examined further for their pathogenicity to Galleria mellonella and Manduca sexta larvae. Serratia Bath isolates, isolated from Pristionchus were more virulent toward both insect hosts than the Serratia from the Chepstow isolates associated with Steinernema nematodes. This suggests that host specificity may play important role in the virulence of the strain.

The extant medically and socially important cobras have been the subject to several comparative taxonomic studies since the 1940s, but still lack an inclusive and thorough phylogenetic tree. With recent major advancements in phylogenetic analysis, it is now common to use multiple independent loci for studying the phylogenetic relationships within groups. For the first time, 27 from the 29 identified Naja species, alongside 5 putative new or elevated species had 4426 base pairs across 1701 sequences of mitochondrial and nuclear DNA sequence data analysed. The results continue to support the monophyletic core cobra clade encompassing the genera Walterinnesia, Aspidelaps, Hemachatus, Pseudohaje and Naja (1.0 Bayesian posterior probability (BPP)), in addition to the grouping of four monophyletic subgenera within Naja. The group of African spitting cobras, Afronaja, is positioned as the sister group to the rest of the genus. Moderate support (0.8 BPP) is found for the grouping of the Asian cobras, Naja, with the African non-spitting cobras, Ureaus. The closest relative to the genus Naja is Pseudohaje goldii, a genus and species never before included in phylogenetic analysis, followed by the sister taxa Hemachatus haemachatus. The king cobra continues to be positioned outside the core cobra group, sister to Hemibungarus calligaster. The results support the hypothesis of three independent origins of spitting, once in the monotypic Hemachatus haemachatus, once within the subgenus Afronaja, and the final origin within the Asian cobras, subgenus Naja. The relationships found were broadly consistent with previous studies, with the additional inclusion of more species creating the most comprehensive cobra phylogeny to date. Further molecular analysis, specifically species delimitation, must be undertaken to ascertain the position of the 5 putative new species included in this study.