O uso concomitante da enzima hialuronidase (H) ao anestésico local (AL) é muito utilizado para melhorar a eficácia anestésica em oftalmologia; em odontologia, no entanto, não mostrou vantagens. Um novo protocolo foi testado com o objetivo de prolongar a anestesia local sem a realização de complementação anestésica. Esta possibilidade seria especialmente interessante para pacientes que apresentam restrição de dose máxima recomendada de AL ou vasoconstritor (ex. cardiopatas). Utilizou-se cloridrato de lidocaína 2% com epinefrina para bloqueio sensitivo, motor e proprioceptivo no nervo ciático em ratos (Truant,1958). Hialuronidase 75 UTR (unidade de turbidade reduzida) foi injetada no mesmo local 30 minutos após o início da analgesia (antes do término do efeito anestésico), utilizando-se a pata contralateral como controle (injeção de solução anestésica e veículo da hialuronidase solvente). A duração do bloqueio sensitivo foi avaliada através da ausência do reflexo de retirada da pata, utilizando-se um analgesímetro. O bloqueio motor foi avaliado pela duração da claudicação e da ausência do reflexo de estiramento da pata, enquanto o bloqueio proprioceptivo foi avaliado pela perda dos reflexos de salto e do reposicionamento da pata (Thalhammer et al., 1995). Foi também estudada a alteração tecidual induzida pela hialuronidase nos períodos de 1 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-injeção. Foram avaliados os grupos: (1) falso operado (Sham); (2) AL +H; (3) AL+ solvente (Solv) e (4) Solv+Solv. Concluiu-se que a hialuronidase prolonga a duração de ação anestésica local quando injetada isoladamente antes da regressão do bloqueio de condução do nervo ciático de rato. Em todos os grupos analisados, exceto o grupo falso-operado, observou-se reação inflamatória após as injeções. Esta inflamação foi mais acentuada no grupo hialuronidase, que mostrava sinais de regressão após 72 horas. É possível que o mecanismo de ação da hialuronidase envolva a desorganização do tecido conjuntivo na região da injeção, facilitando a difusão da solução anestésica residual até o nervo. / The concomitant use of the enzyme hyaluronidase (H) and local anesthetics (LA) is widely employed in ophthalmology in order to improve the effectiveness of anesthesia; in dentistry, however, this association did not seem advantageous. A new protocol was tested with the aim of drawing out local anesthesia without supplementary anesthesia. This possibility is especially interesting for patients with restriction of maximum recommended dose of LA or vasoconstrictor due to pathological conditions (e.g. heart disease). We used 2% lidocaine hydrochloride with epinephrine for sensitive, motor and proprioceptive blockade of the sciatic nerve in rats (Truant, 1958). Hyaluronidase 75 UTR was injected 30 minutes after the beginning of the anesthesia (before the recovery of the sensory function), using the contralateral limb as control (injection of LA plus the H vehicle solvent). The duration of the sensitive blockade was evaluated through the absence of the paw withdrawal reflex, using an analgesymeter. The motor blockade was evaluated by the duration of claudication (complete absence of extensor postural thrust) and by the absence of the paw stretching reflex, while the proprioceptive blockade was evaluated by the absence of hopping and tactile placing response (Thalhammer et al., 1995). Histological changes induced by H were analyzed 1h, 24h, 48h, and 72 h after the injection in the following groups: (1) Sham; (2) LA + H; (3) LA + H solvent (solv) and (4) Solv + Solv. We concluded that H draws out local anesthesia when injected before the recovery of the sciatic nerve blockade in the rat. In all groups studied, with the exception of the Sham, there was an inflammatory reaction after the injections. Inflammation was more intense after H injection, showing signs of regression after 72 hours. It is possible that the mechanism of action of H involves disorganization of the connective tissue, thus facilitating the diffusion of the residual anesthetic solution to the nerve.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-07-18T21:12:26Z No. of bitstreams: 1 Carla Bernardo Soldera.pdf: 1125219 bytes, checksum: a9bf43bd0d44898b4a48ec77b3f45001 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T21:12:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carla Bernardo Soldera.pdf: 1125219 bytes, checksum: a9bf43bd0d44898b4a48ec77b3f45001 (MD5) Previous issue date: 2017-12-15 / Peripheral nerve lesions (LNP) do not clinically present a risk of death to the individual but may result in motor and sensory disturbances altering the function of the affected limb. Phototherapy using low level laser has demonstrated positive effects for the nervous and muscle repair process after different types of injury and little is known about the effects of light emitting diode (LED) therapy. Objective: To analyze the effects of LED on the nervous and muscular repair of Wistar rats after sciatic nerve crush injury. Methodology: 85 Wistar rats, weighing 200-250g, in 5 groups: Control: without any procedure; Injury: carried out only the crushing of the Left Sciatic Nerve (LSN); Injury + LEDn: LSN crushing and LED irradiation in the area corresponding to the nerve injury; Injury + LEDmm: LSN and LED crushing in Tibial Anterior muscle; Injury + LEDn + LEDmm: NSE crushing and LED irradiation in the area corresponding to nerve injury and muscle. The application of the LED in the nervous region was performed with the following parameters: wavelength of 808nm, beam area 1 cm2, average power 40Mw, power density 0.04 W/cm2, energy density 0.8 J/cm2, energy per point 0.8J , total of points 4, time per point 20sec, total time 80sec, energy per point 3.2J and in muscle region was used wavelength of 808nm, beam area 1 cm2, average power 40Mw, power density 0.04 W/ cm2, density of energy 0.4 J/ cm2, energy per point 0.4J, total of points 8, time per point 10sec, total time 80sec, energy per point 3.2J. At the end of the experimental periods, the gait analysis and the mechanical hyperalgesia test were performed. At the end of the experimental periods, gait analysis was performed using the Sciatic Function Index (IFC), as well as the analysis of mechanical hyperalgesia using the von Frey test using the pressure analgesimeter with transducer. After the euthanasia of the animals, the tibial muscles, left and right, were removed and weighed in a semi-analytical balance to determine the degree of muscular atrophy and the muscle mass ratio was calculated. Result: After the IFC, within 7 days, all groups treated with LED showed an improvement in gait compared to the lesion group. The group LEDn was the one that presented the best result compared to the control group. After 14 days, the group LEDn and LEDnm presented similar values to the control group. Regarding the muscular atrophy index, in the 7-day period, all the groups treated with LED showed a decrease of the index in relation to the Control group. In 14 days, the LED groups showed an increase in relation to the Injury group. At 21 and 28 days, the injured groups showed a decrease in relation to the Control group. Only the LEDnm group showed a decrease compared to the Injury group. Regarding mechanical hyperalgesia, the results showed that in 7 days, the LEDn group was the one that presented the best result compared to the control group. At 14 days, the LEDn and LEDm groups showed an increase in the threshold, requiring a greater pressure to promote an allergic response compared to the control group, making them more resistant to the stimuli. At 28 days, all lesioned and treated groups showed an increase in hyperalgesia in relation to the control group. Conclusion: We can conclude that LED increased gait functionality assessed by IFC after 1 and 2 weeks post LNP, especially when it was used in the nerve region associated or not to the muscle region, induced an increase in muscle mass in relation to the animals that did not receive treatment in the period of 2 weeks post LNP and in the 2 week period post LNP provided an increase in the pain threshold compared to the control group, requiring a nociceptive stimulus of greater intensity to generate the pain stimulus indicating a better recovery. / As lesões nervosas periféricas (LNP) não apresentam clinicamente um risco de morte ao indivíduo, porém podem resultar em distúrbios motores e sensoriais alterando a funcionalidade do membro afetado. A fototerapia utilizando laser de baixa potência (LBP) tem demonstrado efeitos positivos para o processo de reparo nervoso e muscular após diferentes tipos de lesão e pouco se conhece a respeito dos efeitos da terapia com diodo emissor de luz (LED, do inglês light emitting diode). Objetivo: Analisar os efeitos do LED sobre o reparo nervoso e muscular de ratos Wistar pós lesão por esmagamento do nervo ciático. Metodologia: foram utilizados 85 ratos Wistar, pesando 200-250g, em 5 grupos: Controle: sem nenhum procedimento; Lesão: realizado apenas o esmagamento do Nervo Ciático Esquerdo (NCE); Lesão+LEDn: esmagamento do NCE e irradiação LED na área correspondente à lesão nervosa; Lesão+LEDm: esmagamento do NCE e LED no músculo Tibial Anterior; Lesão+LEDnm: esmagamento do NCE e irradiação LED na área correspondente à lesão nervosa e músculo. A aplicação do LED em região nervosa foi realizada com os seguintes parâmetros: comprimento de onda de 808nm, área do feixe 1cm2, potência média 40Mw, densidade de potência 0.04W/ cm2, densidade de energia 0.8 J/cm2, energia por ponto 0.8J, total de pontos 4, tempo por ponto 20seg, tempo total 80seg, energia por ponto 3.2J e em região muscular foi utilizado comprimento de onda de 808nm, área do feixe 1cm2, potência média 40Mw, densidade de potência 0.04W/ cm2, densidade de energia 0.4 J/cm2, energia por ponto 0.4J, total de pontos 8, tempo por ponto 10seg, tempo total 80seg, energia por ponto 3.2J. Ao término dos períodos experimentais, foi realizada a análise de marcha utilizando o Índice Funcional Ciático (IFC), bem como a análise da hiperalgesia mecânica através do teste de von Frey utilizando o analgesímetro de pressão com transdutor. Após a eutanásia dos animais os músculos Tibial Anterior direito e esquerdo foram removidos e pesados em uma balança semi-analítica para determinação do grau de atrofia muscular sendo calculada a relação de massa muscular. Resultado: Após a realização do IFC, no período de 7 dias, todos os grupos tratados com LED apresentaram uma melhora da marcha em relação ao grupo Lesão. O grupo LEDn foi o que apresentou o melhor resultado comparado ao grupo controle. Após 14 dias, o grupo LEDn e LEDnm apresentaram valores semelhantes ao grupo controle. Já em relação ao índice de atrofia muscular, no período de 7 dias, todos os grupos tratados com LED demonstraram uma diminuição do índice em relação ao grupo Controle. Em 14 dias, os grupos LED demonstraram um aumento em relação ao grupo Lesão. Em 21 e 28 dias, os grupos lesionados demonstraram uma diminuição em relação ao grupo Controle. Apenas o grupo LEDnm apresentou uma diminuição em relação ao grupo Lesão. No que diz respeito a hiperalgesia mecânica, os resultados obtidos demonstraram que em 7 dias, o grupo LEDn foi o que apresentou o melhor resultado comparado ao grupo controle. Em 14 dias, os grupos LEDn e LEDm apresentaram um aumento no limiar sendo necessário uma pressão maior para promover uma resposta álgica comparados ao grupo controle, tornando-os mais resistentes aos estímulos. Em 28 dias todos os grupos lesionados e tratados apresentaram um aumento da hiperalgesia em relação ao grupo controle. Conclusão: O LED aumentou a funcionalidade da marcha avaliada pelo IFC após 1 e 2 semanas pós LNP, especialmente quando foi usado na região nervosa associada ou não à região muscular, induziu um aumento na massa muscular em relação aos animais que não receberam tratamento no período de 2 semanas pós LNP e proporcionou um aumento no limiar álgico comparado ao grupo controle no período de 2 semanas pós LNP, sendo necessário um estímulo nociceptivo de maior intensidade para gerar o estímulo doloroso indicando uma melhor recuperação.

Uma investigação experimental sobre a influência da estimulação elétrica direta na regeneração do nervo usando uma lesão por esmagamento do nervo ciático de ratos como modelo foi realizada. Quarenta e dois ratos foram utilizados e divididos em quatro grupos, de acordo com o procedimento: 1) Sem lesão e sem estimulação; 2) lesão por esmagamento, sem estimulação; 3) sem lesão, com estimulação; 4) lesão por esmagamento, com estimulação. O nervo ciático foi exposto através de uma incisão lateral na coxa direita e submetido à lesão por esmagamento numa máquina universal de testes com uma carga de 15.000 g concentrada em um segmento de 5 mm por 10 minutos, nos grupos 2 e 4. Um estimulador elétrico foi desenvolvido para liberar uma corrente elétrica contínua de baixa intensidade (1 &#956A). O mesmo foi implantado no espaço subcutâneo próximo a coluna lombar, o ânodo foi colocado proximalmente e o catôdo distalmente ao esmagamento. A recuperação funcional foi avaliada em intervalos semanais até o 21º dia pós-operatório, através do Índice Funcional do Ciático (IFC) e calculada por um programa específico, apresentando melhora progressiva em ambos os grupos com lesão por esmagamento, porém mais acentuada naqueles com estimulação elétrica. Os animais foram sacrificados no 21º dia pós-operatório para análise histológica e morfométrica dos nervos, onde os resultados mostraram aumento da densidade das fibras nervosas mas decréscimo do diâmetro das fibras nervosas, assim como um aumento no número e diâmetro dos vasos sangüíneos intra e extra~fasciculares no grupo estimulado. Similar, mas um menos evidente fenômeno foi observado no grupo sem lesão por esmagamento mas com estimulação elétrica. Concluiu-se que a estimulação elétrica direta de baixa intensidade provoca a regeneração nervosa após lesão por esmagamento em condições controladas e que o IFC é um método confiável para avaliar a recuperação nervosa uma vez que seus resultados aproximam-se do estudo morfométrico. / An experimental investigation of the influence of direct electrical stimulation on nerve regeneration using a crush injury of the sciatic nerve of rats as model was undertaken. Forty two rats were used and divided into four groups according to the procedure carried out: 1) no injury, no stimulation; 2) crush injury, no stimulation; 3) no injury, stimulation; 4) crush injury, stimulation. The sciatic nerve was exposed through a lateral incision on the Iight thigh and submitted to a crush injury in an universal testing machine with a 15000 g load concentrated on a 5 mm-long segment for 10 minutes, in groups 2 and 4. An electrical stimulator was developed to deliver a continuous direct low intensity electrical current (1 &#956A). The device was implanted into the subcutaneous space near the lumbar spine, the anode placed proximally and the cathode distally to the crush injury. Functional recovery was checked at weekly intervals up to the 21st postoperative day, by means of the Sciatic Functional Index (SFI) as calculated by a specific software and showed progressive improvement in both groups with crush injury but more marked in that with electrical stimulation (4). The animals were killed on the 21st post operative day for morphometric and histological examination of the nerves, whose results showed an increased nerve fiber density but decreased nerve fíber diameter, as well as increased number and diameter of intra and extrafascicular blood vessels in the stimulated group. Similar but less marked phenomena were observed in the group without crush injury but with electrical stimulation. It was concluded that low intensity direct electrical stimulation enhances nerve regeneration followíng a crush injury in controlled conditions and that the SFI is a reliable method to evaluate the nerve recovery since its results closely matched those of the morphometric study.

O presente estudo avaliou a ação precoce do laser terapêutico de baixa potência de Arsenieto de Gálio (AsGa) no processo de regeneração de uma lesão experimental por esmagamento de nervo ciático de ratos. Foram utilizados vinte ratos, da linhagem Wistar, divididos em dois grupos: grupo nãoirradiado (controle, n=10) e grupo irradiado (tratado com laser AsGa, n=10). O nervo ciático dos animais de ambos os grupos foi devidamente exposto, e, uma área de 5mm foi submetida a carga estática de 15000g, aplicada por meio de um dispositivo portátil de esmagamento, durante dez minutos. A irradiação transcutânea de laser de AsGa, com dose pontual de 4J/cm2, teve seu início no 1º dia pós-operatório, sendo a aplicação realizada diariamente, por um período de dez dias consecutivos. A recuperação funcional foi avaliada nos períodos préoperatório, 7º, 14º e 21º dias, através de valores fornecidos por um programa de cálculo do Índice Funcional do Ciático (IFC), apresentando uma melhora progressiva em ambos os grupos, porém, com valores mais expressivos para o grupo irradiado com laser a partir do 14º dia. Os animais foram sacrificados no 21º dia pós-operatório para a análise histológica e morfometria dos nervos. Os resultados demonstram um aumento de densidade média de fibras nervosas em grupo de animais irradiados com laser de baixa potência e uma melhora do aspecto morfológico em comparação ao grupo não-irradiado . A conclusão aponta que o laser de arsenieto de gálio (AsGa), na dose utilizada, possui efeito benéfico temporário sobre o nervo ciático de ratos submetido a lesão por esmagamento, contribuindo para a melhora do aspecto morfológico nervoso, evidenciando um processo regenerativo acentuado, em comparação com o grupo não tratado, segundo avaliação funcional e morfológica. / The present study has investigated the earlier influence of low power laser irradiation (GaAs) on nerve regeneration process after experimental crush injury of the sciatic nerve of rats . Twenty Wistar's rats were used and divided into two groups: non irradiated group (control, n=10) and irradiated group (laser treatement, n=10). The sciatic nerves were exposed, for both groups, and an area of 5mm was crushed with 15000g static load for ten minutes, in a portable crushing device. Low power irradiation (4J/cm2) were aplied transcutaneously for ten consecutive days, after the first day post-operative. Functional recovery was checked before crushing procedure, 7º , 14º and 21º days after crush damage and was evaluated by means of the Sciatic Functional Index (SFI) calculated by a specific software. Values showed a progressive improvement in both groups but more marked in that with laser irradiation, begining at 14º day. Animals were killed on the 21º postoperative day for morphometric and histological examination of the nerves. Results showed an increased nerve fiber density in the laser irradiated group, as well as an improvement in the morphological aspects. In conclusion, low power laser irradiation GaAs , with a dose of 4J/cm2, has a temporary beneficial effect on the sciatic nerve of rats submitted a crush injury, improving morphological nerve aspects and showing an increase regenerative process, according to functional and histologic evaluation.

Uma investigação experimental sobre a influência da estimulação elétrica direta na regeneração do nervo usando uma lesão por esmagamento do nervo ciático de ratos como modelo foi realizada. Quarenta e dois ratos foram utilizados e divididos em quatro grupos, de acordo com o procedimento: 1) Sem lesão e sem estimulação; 2) lesão por esmagamento, sem estimulação; 3) sem lesão, com estimulação; 4) lesão por esmagamento, com estimulação. O nervo ciático foi exposto através de uma incisão lateral na coxa direita e submetido à lesão por esmagamento numa máquina universal de testes com uma carga de 15.000 g concentrada em um segmento de 5 mm por 10 minutos, nos grupos 2 e 4. Um estimulador elétrico foi desenvolvido para liberar uma corrente elétrica contínua de baixa intensidade (1 &#956A). O mesmo foi implantado no espaço subcutâneo próximo a coluna lombar, o ânodo foi colocado proximalmente e o catôdo distalmente ao esmagamento. A recuperação funcional foi avaliada em intervalos semanais até o 21º dia pós-operatório, através do Índice Funcional do Ciático (IFC) e calculada por um programa específico, apresentando melhora progressiva em ambos os grupos com lesão por esmagamento, porém mais acentuada naqueles com estimulação elétrica. Os animais foram sacrificados no 21º dia pós-operatório para análise histológica e morfométrica dos nervos, onde os resultados mostraram aumento da densidade das fibras nervosas mas decréscimo do diâmetro das fibras nervosas, assim como um aumento no número e diâmetro dos vasos sangüíneos intra e extra~fasciculares no grupo estimulado. Similar, mas um menos evidente fenômeno foi observado no grupo sem lesão por esmagamento mas com estimulação elétrica. Concluiu-se que a estimulação elétrica direta de baixa intensidade provoca a regeneração nervosa após lesão por esmagamento em condições controladas e que o IFC é um método confiável para avaliar a recuperação nervosa uma vez que seus resultados aproximam-se do estudo morfométrico. / An experimental investigation of the influence of direct electrical stimulation on nerve regeneration using a crush injury of the sciatic nerve of rats as model was undertaken. Forty two rats were used and divided into four groups according to the procedure carried out: 1) no injury, no stimulation; 2) crush injury, no stimulation; 3) no injury, stimulation; 4) crush injury, stimulation. The sciatic nerve was exposed through a lateral incision on the Iight thigh and submitted to a crush injury in an universal testing machine with a 15000 g load concentrated on a 5 mm-long segment for 10 minutes, in groups 2 and 4. An electrical stimulator was developed to deliver a continuous direct low intensity electrical current (1 &#956A). The device was implanted into the subcutaneous space near the lumbar spine, the anode placed proximally and the cathode distally to the crush injury. Functional recovery was checked at weekly intervals up to the 21st postoperative day, by means of the Sciatic Functional Index (SFI) as calculated by a specific software and showed progressive improvement in both groups with crush injury but more marked in that with electrical stimulation (4). The animals were killed on the 21st post operative day for morphometric and histological examination of the nerves, whose results showed an increased nerve fiber density but decreased nerve fíber diameter, as well as increased number and diameter of intra and extrafascicular blood vessels in the stimulated group. Similar but less marked phenomena were observed in the group without crush injury but with electrical stimulation. It was concluded that low intensity direct electrical stimulation enhances nerve regeneration followíng a crush injury in controlled conditions and that the SFI is a reliable method to evaluate the nerve recovery since its results closely matched those of the morphometric study.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Some forms of neuropathic pain are maintained by sympathetic fibers, but the underlying mechanisms are poorly understood. Thus, the aim of this study was to investigate the possible involvement of the TRPA1 receptor as well as the role of the sympathetic nervous system (involved in sympathetically maintained neuropathic pain) in a model of neuropathic pain induced by chronic sciatic nerve constriction injury (CCI) in mice. The systemic injection of the selective TRPA1 antagonist HC-030031 reversed both mechanical and cold allodynia induced by chronic sciatic nerve constriction injury. Nerve injury also sensitizes mice to the nociception induced by the intraplantar injection of a low dose of the TRPA1 agonist allyl isothiocyanate without changing TRPA1 immunoreactivity in the injected paw. Furthermore, the chemical sympathectomy produced by guanethidine largely prevented CCI-induced mechanical and cold allodynia. CCI also induced a norepinephrine-trigged nociception that was inhibited by α-adrenoceptor antagonism and norepinephrine transporter and monoamine oxidase inhibition. Finally, the peripheral injection of HC-030031 also largely reduced CCI-induced nociception by norepinephrine and mechanical or cold allodynia. Taken together, the present findings reveal the critical role of TRPA1 in mechanical and cold hypersensitivity as well as in hypersensitivity to norepinephrine following nerve injury. This article presents the role of TRPA1 receptor on the sympathetically-maintained nociception induced by nerve injury in mice. Our results suggest that TRPA1 antagonists may be useful to treat neuropathic patients that present sympathetically maintained pain. / Algumas formas de dor neuropática são mantidos por fibras simpáticas, contudo os mecanismos subjacentes são pouco compreendidos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o possível envolvimento do receptor TRPA1, bem como o papel do sistema nervoso simpático num modelo de dor neuropática induzido pela constrição crônica do nervo ciático (CCI) em camundongos. A administração sistêmica do antagonista seletivo do receptor TRPA1, HC-030031, reverteu a alodinia mecânica e ao frio induzida pela CCI. A injeção de uma baixa dose do agonista do receptor TRPA1, isotiocianato de alila, induziu uma resposta nociceptiva nos animais que sofreram a lesão no nervo, sem alterar a imunorreatividade do TRPA1 na pata injetada. Além disso, a simpatectomia química produzida pela guanetidina amplamente previniu a alodínia mecânica e ao frio induzida pela CCI. Ainda, a injeção intraplantar de norepinefrina induziu nocicepção espontânea, a qual foi reduzida pelo antagonista α-adrenérgico, inibidor do transportador de norepinefrina e inibidor da enzima monoamina oxidase. Finalmente, a administração periférica do HC-030031 reduziu a nocicepção espontânea induzida pela norepinefrina e também a alodínia mecânica e térmica de animais neuropáticos. Assim, nossos resultados revelam o papel crítico do receptor TRPA1 na alodínia mecânica e ao frio, bem como na hipersensibilidade à norepinefrina após lesão do nervo em um modelo de dor neuropática mantida pelo simpático. Dessa forma, o receptor TRPA1 poderá ser um alvo para o desenvolvimento de novos tratamentos para esse tipo de dor.

Submitted by Livia Mello (liviacmello@yahoo.com.br) on 2016-09-21T11:59:44Z No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:32:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:32:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T18:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Pain, according to the International Association for the Study of Pain (IASP) can be defined as "an unpleasant sensory and emotional experience that is associated with actual or potential damage or described in terms of such damage". Lesions of the central or peripheral nervous system can lead to a special type of pain, called neuropathic pain. The methods used for the treatment of neuropathic pain injuries include medications, physical therapy, psychotherapy and anesthetics and neurosurgical procedures. Among the resources used by physiotherapists to low intensity laser therapy (LLLT) has been showing good results in controlling neuropathic pain. Because few studies and controversial data on the laser dosimetry in neuropathic pain judges is of great importance to research in establishing appropriate parameters for the application of this therapeutic resource. 50 mice of Swiss-albino strain were used, males weighing 25-30 grams. The experimental model of neuropathy was used by the partial sciatic nerve injury by chronic constriction surgery sciatic nerve (CCI). The animals were divided randomly into 5 groups: sham (GS) Group: Simulation of chronic constriction surgery sciatic nerve (CCI); control group (CG): induction of neuropathy by CCI surgery with application of laser off; laser therapy group 10 J / cm2 (GL10): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808 nm), with fluency of 10 J / cm2; Laser therapy group 20 J / cm2 (GL20): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808nm), with fluency of 20J / cm2; gupo laser therapy 40 J / cm2 (GL40): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808nm), with fluency of 40J / cm2. Pain treatment was performed by LLLT 3 times a week, every other day, in a ninety days period with different dosimetry (10 J / cm2, 20 J / cm2, 40J / cm). For nociceptive evaluations were used the Hot Plate Test for the thermal hyperalgesia and mechanical hyperalgesia and the Ralndall Selitto test. ELISA assay was used to quantify β-endorphin. The results showed that LLLT induced a significant increase in nociceptive threshold mainly in the groups using LLLT with higher fluence (20 J / cm2, 40 J / cm2), and demonstrate an increase in β-endorphin levels in the same groups. Thus we can conclude that LLLT significantly reduces neuropathic pain, being a mechanism of stimulation of β-endorphin. / A dor, segundo a Associação Internacional para o Estudo da Dor (IASP), pode ser definida como “uma experiência sensorial e emocional desagradável que está associada com lesões reais ou potenciais ou descrita em termos de tais lesões”. Lesões do sistema nervoso central ou periférico podem levar a um tipo especial de dor, denominado dor neuropática. Os métodos utilizados para o tratamento da dor por lesões neuropáticas incluem medicamentos, fisioterapia, psicoterapia e procedimentos anestésicos e neurocirúrgicos. Dentre os recursos utilizados pelos fisioterapeutas a terapia laser de baixa intensidade (LLLT) vem apresentando bons resultados no controle da dor neuropática. Devido a poucos estudos e dados controversos sobre a dosimetria do laser em dor neuropática julga-se de grande importância a investigação no estabelecimento de parâmetros adequados para a aplicação deste recurso terapêutico. Foram utilizados 50 camundongos da cepa Suíço-albino, machos, pesando 25-30 gramas. O modelo experimental de neuropatia utilizado foi através da lesão parcial do nervo ciático através da cirurgia de constrição crônica do nervo ciático (CCI). Os animais foram distribuídos de forma aleatória em 5 grupos: grupo sham (GS): simulação da cirurgia de constrição crônica do nervo isquiático (CCI); grupo controle (GC): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação do laser desligado; grupo terapia laser 10 J/cm2 (GL10): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808 nm), com fluência de 10J/cm2; Grupo terapia laser 20 J/cm2 (GL20): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808nm), com fluência de 20J/cm2; gupo terapia laser 40 J/cm2 (GL40): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808nm), com fluência de 40J/cm2. O tratamento da dor foi realizado através da LLLT 3 vezes por semana, em dias alternados, em uma período de noventa dias com diferentes dosimetrias (10J/cm2, 20J/cm2, 40J/cm2). Para as avaliações nociceptivas foram utilizados o Teste de Placa Quente para hiperalgesia ao térmica e para hiperalgesia mecânica o teste de Ralndall e Selitto. Foi utilizado o ensaio ELISA para quantificação de β-endorfina. Os resultados demonstraram que a LLLT induziu um aumento significativo no limiar nociceptivo principalmente nos grupos que utilizaram a LLLT com maiores fluências (20 J/cm2, 40 J/cm2), além de demonstrar um aumento nos níveis de β-endorfina nos mesmos grupos. Assim podemos concluir que a LLLT reduz significativamente a dor neuropática, sendo um dos mecanismo a estimulação de β-endorfina.

Submitted by DIEGO NOE RODRIGUEZ SANCHEZ null (dnr_51@hotmail.com) on 2016-06-22T16:49:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Diego_Final.pdf: 62116504 bytes, checksum: c5a01fb03474d162a65b0ca8041e5d46 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-23T19:11:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sanchez_dnr_me_bot.pdf: 62116504 bytes, checksum: c5a01fb03474d162a65b0ca8041e5d46 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T19:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sanchez_dnr_me_bot.pdf: 62116504 bytes, checksum: c5a01fb03474d162a65b0ca8041e5d46 (MD5) Previous issue date: 2016-05-12 / As lesões de nervos periféricos por neurotmese apresentam resultados paradoxais na recuperação pela ausência na regeneração. Assim, manter o ambiente permissivo de crescimento no coto distal após a lesão é essencial, sendo as células de Schwann chaves neste processo. A terapia celular apresenta potencial para a regeneração nervosa, baseado na substituição celular e promoção do crescimento axonal. As células tronco mesenquimais multipotentes de tecido adiposo (CTMM-TA) são uma fonte promissora pela fácil obtenção, expansão in vitro e por apresentarem propriedades imunomoduladoras e antinflamatórias. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do transplante de CTMM caninas e murinas em combinação com a técnica de tubulação com veia descelularizada, na regerenaração do nervo ciático em modelo experimental de neurotmese em ratos. Ratos Wistar submetidos a neurotmese do nervo ciático foram divididos em 5 grupos: Grupo controle (GC), Grupo denervado (GD), Grupo Transplante de Veia descelularizada (GV), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes caninas (GCTMMc), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes murinas (GCTMMm). Após a marcação com nanocristais fluorescentes e viabilidade celular, 1 x 106 CTMM caninas e murinas foram injetadas depois da realização da lesão experimental por neurotmese com 10mm por tubulação com veia descelularizada nos grupos GCTMMc e GCTMMm, e solução tampão salina de Hank's (HBSS) no grupo veia (GV). Durante o período de 35 dias, o índice de funcionalidade do nervo ciático (IFNC) e a eletroneuromiografia (ENMG) foram realizadas para avaliar a recuperação funcional. Análises histológicas e imunohistoquímicas foram efetuadas para revelar a mielinização, a produção de fatores neurtróficos e a persistencia das CTMM. Observaram-se resultados positivos funcionais nos dias 27 e 35 no grupo tratado com GCTMMm. Os resultados eletrofisiológicos de latência (m/s) e amplitude (mV) no nervo ciático foram superiores nos grupos GCTMMc e GCTMMm. Na avaliação do número e a densidade de fibras nervosas, os grupos GCTMMm e GCTMMc, mostraram melhores resultados. Foi observado uma expressão significativamente alta de BDNF no grupo GCTMMc, associado com o incremento na expressão da proteína S-100 nos grupos GCTMMc e GCTMMm, comparado com o GD. Demonstrou-se, também, que as CTMM derivadas do tecido adiposo canino e murino apresentaram efeitos positivos na regeneração do nervo ciático após neurotmese em ratos. / The peripheral nerves injury by neurotmesis presents confusing results in the recovery by the lack of regeneration. Thus, it is essential to maintain a growth permissive microenvironment in the distal stump following injury for Schwann cells. The cell therapy has therapeutic potential for nerve regenertion, based on cell replacement and promotion of axonal growth. Adipose-derived multipotent mesenchymal stem cells (AdMSC) are a promising source for easy retrieval and expansion in vitro and have immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The objective of this study was to compare the effects of canine and murine MSC transplantation in combination with the tubulization of decellularized vein in sciatic nerve regeneration. Wistar rats were divided into 5 groups: control group (CG), denervated group (DG), decellularized vein transplantation group (VG), vein + canine MSC group (cMSC) and vein + murine MSC group (mMSC). After labeling with fluorescent nanocrystals and cell viability, 1 x 106 canine and murine MSC were injected after experimental injury for neurotmesis with 10mm and tubulization with decellularized vein in the cMSC and mMSC groups. During a period of 35 days the sciatic nerve functional index (SFI) and electroneuromyography (EMG) were performed to access functional recovery. Histological analysis and immunohistochemistry were performed to evaluate myelination, neurotrophic factor production and persistence of MSC. It was observed functional postive results at 27th and 35th days in the group treated with mMSC. The electrophysiologycal results of latency (m/s) and amplitude (mV) in the sciatic nerve, they were higher in groups cMSC and mMSC. In assessing the number and density of nerve fibers, mMSC and cMSC groups showed better results. It was observed a significantly higher BDNF expression than the cMSC group, associated with increased xvi expression of S-100 protein in the cMSC and mMSC groups compared to the GD. Also, it has been shown that MSC canine and murine derived of adipose tissue (AdMSC) showed positive effects on the sciatic nerve regeneration in the rat model neurotmesis.

Orientador: Rogerio Martins Amorim / Resumo: As lesões de nervos periféricos por neurotmese apresentam resultados paradoxais na recuperação pela ausência na regeneração. Assim, manter o ambiente permissivo de crescimento no coto distal após a lesão é essencial, sendo as células de Schwann chaves neste processo. A terapia celular apresenta potencial para a regeneração nervosa, baseado na substituição celular e promoção do crescimento axonal. As células tronco mesenquimais multipotentes de tecido adiposo (CTMM-TA) são uma fonte promissora pela fácil obtenção, expansão in vitro e por apresentarem propriedades imunomoduladoras e antinflamatórias. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do transplante de CTMM caninas e murinas em combinação com a técnica de tubulação com veia descelularizada, na regerenaração do nervo ciático em modelo experimental de neurotmese em ratos. Ratos Wistar submetidos a neurotmese do nervo ciático foram divididos em 5 grupos: Grupo controle (GC), Grupo denervado (GD), Grupo Transplante de Veia descelularizada (GV), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes caninas (GCTMMc), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes murinas (GCTMMm). Após a marcação com nanocristais fluorescentes e viabilidade celular, 1 x 106 CTMM caninas e murinas foram injetadas depois da realização da lesão experimental por neurotmese com 10mm por tubulação com veia descelularizada nos grupos GCTMMc e GCTMMm, e solução tampão salina de Hank's (HBSS) no grupo veia (GV). Durante o ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The peripheral nerves injury by neurotmesis presents confusing results in the recovery by the lack of regeneration. Thus, it is essential to maintain a growth permissive microenvironment in the distal stump following injury for Schwann cells. The cell therapy has therapeutic potential for nerve regenertion, based on cell replacement and promotion of axonal growth. Adipose-derived multipotent mesenchymal stem cells (AdMSC) are a promising source for easy retrieval and expansion in vitro and have immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The objective of this study was to compare the effects of canine and murine MSC transplantation in combination with the tubulization of decellularized vein in sciatic nerve regeneration. Wistar rats were divided into 5 groups: control group (CG), denervated group (DG), decellularized vein transplantation group (VG), vein + canine MSC group (cMSC) and vein + murine MSC group (mMSC). After labeling with fluorescent nanocrystals and cell viability, 1 x 106 canine and murine MSC were injected after experimental injury for neurotmesis with 10mm and tubulization with decellularized vein in the cMSC and mMSC groups. During a period of 35 days the sciatic nerve functional index (SFI) and electroneuromyography (EMG) were performed to access functional recovery. Histological analysis and immunohistochemistry were performed to evaluate myelination, neurotrophic factor production and persistence of MSC. It was observed functional postive results a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O presente estudo avaliou a ação precoce do laser terapêutico de baixa potência de Arsenieto de Gálio (AsGa) no processo de regeneração de uma lesão experimental por esmagamento de nervo ciático de ratos. Foram utilizados vinte ratos, da linhagem Wistar, divididos em dois grupos: grupo nãoirradiado (controle, n=10) e grupo irradiado (tratado com laser AsGa, n=10). O nervo ciático dos animais de ambos os grupos foi devidamente exposto, e, uma área de 5mm foi submetida a carga estática de 15000g, aplicada por meio de um dispositivo portátil de esmagamento, durante dez minutos. A irradiação transcutânea de laser de AsGa, com dose pontual de 4J/cm2, teve seu início no 1º dia pós-operatório, sendo a aplicação realizada diariamente, por um período de dez dias consecutivos. A recuperação funcional foi avaliada nos períodos préoperatório, 7º, 14º e 21º dias, através de valores fornecidos por um programa de cálculo do Índice Funcional do Ciático (IFC), apresentando uma melhora progressiva em ambos os grupos, porém, com valores mais expressivos para o grupo irradiado com laser a partir do 14º dia. Os animais foram sacrificados no 21º dia pós-operatório para a análise histológica e morfometria dos nervos. Os resultados demonstram um aumento de densidade média de fibras nervosas em grupo de animais irradiados com laser de baixa potência e uma melhora do aspecto morfológico em comparação ao grupo não-irradiado . A conclusão aponta que o laser de arsenieto de gálio (AsGa), na dose utilizada, possui efeito benéfico temporário sobre o nervo ciático de ratos submetido a lesão por esmagamento, contribuindo para a melhora do aspecto morfológico nervoso, evidenciando um processo regenerativo acentuado, em comparação com o grupo não tratado, segundo avaliação funcional e morfológica. / The present study has investigated the earlier influence of low power laser irradiation (GaAs) on nerve regeneration process after experimental crush injury of the sciatic nerve of rats . Twenty Wistar's rats were used and divided into two groups: non irradiated group (control, n=10) and irradiated group (laser treatement, n=10). The sciatic nerves were exposed, for both groups, and an area of 5mm was crushed with 15000g static load for ten minutes, in a portable crushing device. Low power irradiation (4J/cm2) were aplied transcutaneously for ten consecutive days, after the first day post-operative. Functional recovery was checked before crushing procedure, 7º , 14º and 21º days after crush damage and was evaluated by means of the Sciatic Functional Index (SFI) calculated by a specific software. Values showed a progressive improvement in both groups but more marked in that with laser irradiation, begining at 14º day. Animals were killed on the 21º postoperative day for morphometric and histological examination of the nerves. Results showed an increased nerve fiber density in the laser irradiated group, as well as an improvement in the morphological aspects. In conclusion, low power laser irradiation GaAs , with a dose of 4J/cm2, has a temporary beneficial effect on the sciatic nerve of rats submitted a crush injury, improving morphological nerve aspects and showing an increase regenerative process, according to functional and histologic evaluation.