Par rapport à l’adulte, le nouveau-né présente une susceptibilité accrue aux agents infectieux et au développement d’allergies. Une polarisation de l’immunité acquise vers des réponses de type Th2, productrices d’IL-4, d’IL-5 et d’IL-13, et un défaut de réponses immunes de type Th1, sécrétant de l’IFN-γ, peuvent rendre compte de ce statut immunitaire particulier. De plus, un retard de production et de maturation des anticorps, caractéristiques de l’immunité humorale, s’observe en début de vie. <p>Récemment, de nouveaux lymphocytes T auxiliaires ont été décrits, les lymphocytes Th17, producteurs d’IL-17A, d’IL-17F et d’IL-22, d’une part, et les lymphocytes Tfh, sécrétant de l’IL-21 et exprimant CXCR5, ICOS et PD-1, d’autre part. La différenciation des lymphocytes Th17 dépend de la présence d’IL-6 ou d’IL-21 et de TGF-β, et est inhibée par l’IL-4 ;tandis que les lymphocytes Tfh sont induits en présence d’IL-21, d’IL-6 et du répresseur transcriptionnel Bcl6. Alors que les lymphocytes Th17 sont associés à des réponses inflammatoires par le recrutement de neutrophiles, les lymphocytes Tfh aident les lymphocytes B à produire des anticorps de haute affinité.<p><p>L’objectif principal de notre travail est l’étude du développement potentiel de réponses de type Th17 chez le nouveau-né de souris soumis à une stimulation allogénique et au manque d’IL-4. De plus, l’existence potentielle de lymphocytes Tfh induits chez le nouveau-né immunisé avec un vaccin constitué d’ovalbumine de poulet et d’Alum, sera investiguée.<p><p>Dans notre modèle de tolérance néonatale, l’immunisation de nouveau-nés BALB/c à l’aide de cellules spléniques semi-allogéniques F1 (AJAX x BALB/c) induit une polarisation de type Th2, associée à l’établissement d’un chimérisme lymphoïde et à l’acceptation d’une greffe de peau présentant les alloantigènes rencontrés à la naissance. Des nouveau-nés soumis à cette immunisation allogénique et à la privation d’IL-4, réalisée par l’utilisation d’anticorps monoclonaux ou de souris IL-4-/-, rejettent de façon aiguë les greffons de peau et présentent une proportion réduite de cellules chimériques. Cette rupture de la tolérance néonatale est associée à l’inhibition de la réponse allospécifique de type Th2 et au développement de lymphocytes Th17 alloréactifs, produisant de l’IL-17A. L’inhibition de la voie Th17 ne conduit toutefois pas à l’acceptation des allogreffes de peau. Par contre, la neutralisation de l’IL-6 ou de l’IL-17A et la réduction du nombre de neutrophiles restaurent la proportion de cellules chimériques présentes dans la rate, démontrant que la réponse de type Th17 allospécifique néonatale contrôle le chimérisme lymphoïde. <p><p>En réponse au vaccin OVA-Alum, les nouveau-nés présentent une proportion accrue de lymphocytes Tfh CXCR5+ PD-1+, bien que cette proportion lymphocytaire soit significativement diminuée par rapport aux adultes. Les lymphocytes Tfh néonataux expriment en outre des taux moindres des ARNm d’IL-21, d’IL-4 et de Bcl6, suggérant que la génération de lymphocytes Tfh est altérée en début de vie. En parallèle, les titres et la maturation des anticorps produits suite à la vaccination sont réduits chez les nouveau-nés, en comparaison avec les adultes. Cependant, qu’ils soient déficients en IL-4 ou non, des lymphocytes T CD4+ néonataux activés in vitro en présence d’IL-6 induisent une production d’anticorps par des lymphocytes B compétents, suggérant qu’il n’y a pas de défaut intrinsèque des lymphocytes T du nouveau-né à développer une capacité d’aide aux lymphocytes B.<p><p>En conclusion, nous avons montré que la polarisation de type Th2 néonatale inhibe la différenciation de lymphocytes Th17 alloréactifs contrôlant le rejet de cellules allogéniques, un mécanisme pouvant intervenir dans la relation immunitaire entre la mère et l’enfant. Nos résultats indiquent également que le nouveau-né est capable de différencier des lymphocytes Tfh, bien que le développement de ces derniers semble réduit. \ / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Bien que la plupart des études se focalisent sur les lymphocytes T CD4+ régulateurs, il a été observé que les lymphocytes T CD8+ régulateurs peuvent jouer un rôle important dans l’induction et le maintien de la tolérance immunitaire. Le transfert adoptif chez la souris et l’induction chez l’homme de lymphocytes T CD8+ régulateurs peuvent inhiber le rejet d’allogreffes et le développement de pathologies autoimmunes. Ces observations suggèrent que l’induction de ces populations peut avoir un potentiel thérapeutique. Des études supplémentaires sont encore nécessaires pour définir les conditions optimales de leur induction. <p>Tant les nouveaux nés humains que murins ont une plus forte capacité que l’adulte à développer des lymphocytes T CD4+ régulateurs induits par une reconnaissance antigénique. La période néonatale serait donc particulièrement appropriée à l’induction de circuits régulateurs.<p>Dans le cadre de ce travail, nous avons étudié le rôle des lymphocytes T CD8+, induits à la naissance, dans le contrôle de la réponse des lymphocytes T CD4+ de type Th2.<p>Des souris BALB/c sont immunisées à la naissance à l’aide de cellules spléniques semi-allogéniques hybrides F1 (AJAX x BALB/c). Ces cellules persistent dans l’animal, au sein des organes lymphoïdes et stimulent ainsi de manière chronique les lymphocytes T CD4+ et T CD8+ du receveur et induisent une réponse de type Th2. Suite à l’injection des cellules spléniques semi-allogéniques au nouveau né de souris, nous avons observé l’expansion d’une population de lymphocytes T CD8+CD25+, dont le phénotype se caractérise par l’expression de Foxp3 et la production conjointe d’IFN-&61543; et l’IL-10. Nous avons pu observer que ces cellules sont capables d’inhiber la production de cytokines Th2 produites par les lymphocytes T CD4+ allospécifiques activés. Par contre, ces cellules régulatrices aggravent des réponses Th2 non apparentées. En effet, suite à une sensibilisation à l’ovalbumine, à l’âge adulte, ces souris développent de plus fortes réponses asthmatiques.<p>D’autre part, les nouveaux nés de souris BALB/c ont été immunisés à la naissance à l’aide de cellules dendritiques semi-allogéniques hybrides F1 (AJAX x BALB/c) qui activent de manière aigüe leurs lymphocytes T. Ces souris présentent une forte réponse Th1 et Tc1/Tc2 spécifique de l’alloantigène et sont protégées contre le développement d’un asthme induit. Il a aussi été montré dans ce travail que suite à l’immunisation néonatale à l’aide de cellules dendritiques semi-allogéniques, le nombre de lymphocytes T CD8+CD44high, CD8+CD62Lhigh et CD8+CD25+ producteurs d’IFN-&61543; augmente significativement. L’IFN-& / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

La toxine de pertussis (PTX) est une A-B protéine considérée comme l’un des principaux facteurs de virulence de Bordetella pertussis, l’agent bactérien responsable de la coqueluche. Aujourd’hui, cette maladie représente encore un réel danger pour les nouveaux-nés et les<p>nourrissons non ou partiellement immunisés. Actuellement, la coqueluche provoque encore la<p>mort d’environ 350.000 individus par an. La toxicité de la PTX est liée à l’activité<p>enzymatique de sa sous-unité A capable d’inhiber les voies de signalisation associées aux<p>protéines Gi. La partie B, quant à elle, permet l’entrée de cette sous-unité A dans le<p>cytoplasme des cellules cibles en se liant spécifiquement à son ou ses récepteurs<p>membranaires toujours inconnus de nos jours.<p><p>Des études réalisées chez la souris et chez l’homme ont montré que les vaccins anticoquelucheux combinés à différents antigènes vaccinaux étaient capables de moduler<p>leurs réponses humorales spécifiques. Par ailleurs, la PTX est couramment qualifiée d’agent<p>immunostimulant. En effet, des modèles murins de vaccination permirent d’identifier des<p>propriétés adjuvantes de la PTX coadministrée avec des antigènes non relevants.<p><p>Le travail développé dans ce manuscrit étudie les effets de la PTX sur 2 types cellulaires<p>primordiaux sollicités lors d’une vaccination :la cellule dendritique (DC) et le lymphocyte T<p>CD4+ naïf.<p><p>Les DC sont les seules cellules présentatrices d’antigènes aptes à initier une réponse immune<p>primaire. Dans un premier temps, nous avons montré que la PTX était capable d’activer des<p>DC générées in vitro à partir de monocytes. En effet, elles acquièrent un phénotype mature<p>caractérisé par une augmentation de l’expression membranaire des molécules costimulatrices<p>et du CMH de classe II, démontrant un effet direct et spécifique de la PTX sur les DC<p>myéloïdes. Parallèlement, ces DC produisent du TNF-a, de l’IL-12p40 et de l’IL-12p70 et<p>activent NF-kappaB, un facteur de transcription essentiel au processus de maturation. Nous<p>avons obtenu des résultats similaires avec une toxine génétiquement modifiée qui est<p>enzymatiquement inactive. A partir de sang total incubé avec la PTX, nous avons par ailleurs<p>observé que les DC circulantes du nouveau-né étaient déficientes dans leur maturation et leur<p>sécrétion d’IL-12p70 comparées aux DC de l’adulte.<p><p>D’autre part, il a été décrit précédemment que la PTX exerçait des effets mitogènes sur les<p>lymphocytes T humains et murins. Cependant, le rôle qu’elle joue sur la population des<p>lymphocytes T CD4 naïfs reste peu connu. A l’issue de notre second travail, nous pouvons<p>dès lors affirmer que la PTX est également capable d’activer des lymphocytes T<p>CD4+CD45RA+ naïfs isolés à partir des cellules mononuclées du sang périphérique, et ce<p>indépendamment de son activité enzymatique. En effet, ces lymphocytes T CD4+ naïfs stimulés par la PTX prolifèrent, synthétisent des quantités non négligeables d'ARN messagers<p>codant pour l’IL-2 et le TNF-a, augmentent l’expression membranaire des molécules CD40L,<p>CD69 et CD25 et expriment la protéine Foxp3. Cette activation s’accompagne de la translocation nucléaire de NF-kappaB et NFAT. Parallèlement à l’adulte, la PTX active les lymphocytes T CD4 néonataux. Néanmoins, ceux-ci prolifèrent moins bien et expriment plus faiblement le CD40L à leur surface.<p><p>Enfin, la PTX induit la sécrétion de taux importants d’IFN-g par des T CD4+CD45RA+ naïfs<p>adultes mis en présence de DC autologues.<p><p>Nous terminerons en proposant l’hypothèse suivante :La PTX pourrait exercer ses propriétés<p>adjuvantes par l’intermédiaire de différents mécanismes comprenant notamment la maturation<p>des DC d’origine myéloïde et l’activation des lymphocytes T CD4+CD45RA+ naïfs. Ces 2 populations cellulaires sont en effet les principaux protagonistes impliqués dans la réponse<p>immune primaire. / Doctorat en sciences pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Le cadre neuroconstructiviste du développement cognitif, en considérant la variabilité des contraintes qui agissent dès la conception et façonnent le développement, apparaît pertinent pour considérer l’influence des expériences sensorielles précoces sur le développement neurocomportemental des nouveau-nés prématurés. Ils évoluent dans un environnement particulier et ont une vulnérabilité aux troubles neurodéveloppementaux, auxquels des atypies du traitement tactile et temporel sont associées. L’objectif de ce travail de thèse est d’étudier les compétences tactiles et temporelles des nouveaux nés prématurés, et d’évaluer l’effet de l’environnement précoce sur ces perceptions. La perception tactile passive et la cognition ont été étudié auprès de 61 nouveau-nés prématurés (nés entre 32 et 34SA) à 35 semaines d’âge corrigé. Les réponses d’orientation manuelle lors de stimulations tactiles passives du membre supérieur ont été mesurées lors d'un paradigme d’habituation et de déshabituation (changement de localisation ou pause dans la séquence de stimulation). Les prématurés montrent une réponse d'orientation manuelle aux stimuli, qui diminue lors de la répétition, indépendamment de son emplacement sur le bras. L'habituation est retardée chez les sujets nés le plus tôt, à un petit poids et ayant vécu davantage d’expériences douloureuses. Enfin, les prématurés perçoivent les changements de localisation du stimulus et l'intervalle interstimulus, ce qui suggère un développement prénatal des capacités de traitement temporel. Ces capacités de traitement temporel et leur utilisation pour générer une prédiction sensorielle ont été évaluées au cours d’une seconde étude. 19 nouveau-nés prématurés (nés entre 31 et 32 SA) ont été soumis à une séquence tactile (régulière ou irrégulière) aux âges corrigés de 33 et 35 SA. Les variations de flux sanguin cérébral été mesurées. Aux deux âges corrigés, les stimuli tactiles sont associés à une réponse hémodynamique au sein du cortex somatosensoriel. À 33 semaines d’âge gestationnel corrigé les omissions dans la séquence sont associées à une augmentation du flux sanguin cérébral, qui indique que les prématurés forment des prédictions sensorielles, indépendamment du groupe expérimental. Ce travail de thèse permet de mieux caractériser les capacités de traitement tactile et temporel des nouveau-nés prématurés, qui manquent d’investigations récentes et approfondies. De plus, il apporte des arguments rationnels qui pourraient permettre de proposer des thérapies sensorielles à ces patients, basées sur leurs capacités de perception. / The neuroconstructivist theoretical framework of cognitive development, taking into account the variability of the constraints that act from the conception to shape development, is relevant to consider the early influence of sensory experiences on the neurobehavioral development of preterm neonates. They evolve in a particular environment and are vulnerable to neurodevelopmental disorders, to which atypical tactile and temporal processing are associated. The aim of the thesis is to study tactile and temporal abilities in preterm newborns and to evaluate the effect of the early environment on these perceptions. We included 61 preterm neonates (born between 32 and 34 weeks of gestational age (wGA)). At 35 weeks of corrected gestational age, we measured orienting responses (forearm, hand, and fingers movements) during vibrotactile stimulation of their hand and forearm, during a habituation and dishabituation paradigm, the dishabituation being either a location change or a pause in the stimulation sequence. Preterm newborns displayed a manual orienting response to vibrotactile stimuli which significantly decreased when the stimulus was repeated, regardless of the stimulated location on the limb. Habituation was delayed in subjects born at a younger gestational age, smaller birth weight, and having experienced more painful care procedures. Preterm neonates perceived changes in stimulus location and interstimulus time interval, suggesting a prenatal development of temporal processing capacities. These temporal processing abilities and their use to generate sensory prediction are being evaluated in a second study. 19 premature neonates (born between 31 and 32wGA) were presented with a tactile sequence (regular or irregular) at 33 and 35 weeks of corrected GA. Variations in cerebral blood flow were measured. At both corrected GA, tactile stimuli are associated with a hemodynamic response in the primary somatosensory cortex. At 33 weeks of corrected GA, omissions in the sequence are associated with an increase in cerebral blood flow, which indicates that premature neonates form sensory predictions, regardless of their experimental group. This thesis work allows to better characterize the tactile and temporal processing abilities in premature neonates, which lack recent and thorough investigation. In addition, it provides rational arguments that could help to propose sensory therapies to these patients, based on their perceptual abilities.

Le but de cette étude expérimentale à devis croisé avec randomisation était de comparer la stabilité́ physiologique de nouveau-nés prématurés âgés entre 24 à 316/7 semaines de gestation pendant et après une période incluant un regroupement de soins comparativement à une période où ils reçoivent des soins standards non regroupés à l’unité néonatale. Nous avons recruté dix nouveau-nés prématurés âgés entre 24,2 et 29,6 semaines de gestation à la naissance. Les analyses de covariance à mesures répétées contrôlant pour le bruit montrent qu’il n’y a pas de différence significative entre les scores SCRIP calculés lors de la période de regroupement de soins comparativement à celle du contrôle. À la lumière des résultats obtenus, les nouveau-nés prématurés devraient bénéficier d’un regroupement de soins lorsqu’ils séjournent à l’unité néonatale afin de diminuer la fréquence des manipulations auxquelles ils sont exposés, afin de leur offrir des périodes de sommeil plus longues et limiter leur dépense d’énergie. / The purpose of this study was to compare the physiological stability during and after clustered care of preterm infants between born between 24 and 316/7 weeks of gestational age and hospitalized in the Neonatal Intensive Care Unit (NICU) versus a non-clustered standard care. Ten preterm infants, between 24.2 and 29.6 weeks of gestational age at birth, were recruited for the study. The analysis of covariance with repeated measures controlling for noise showed no significant difference in SCRIP scores between the periods of clustered care and control. In light of these results, preterm infants should benefit from this intervention when hospitalized in the NICU, in order to reduce the frequency of manipulations, offer longer periods of sleep and limit their energy expenditure.

Les cellules T ɑβ conventionnelles expriment des récepteurs antigéniques qui peuvent reconnaître et répondre à une grande variété d’agents pathogènes. En parallèle, des mécanismes cruciaux sont en place pour empêcher les cellules T de réagir aux auto-antigènes afin de prévenir le développement d’auto-immunité. Dans le but d’assurer la génération d’un réservoir de cellules T fonctionnelles, diverses et tolérantes au soi, les récepteurs des cellules T (TCR) ɑβ appropriés sont sélectionnés dans le thymus en fonction de la quantité et de la qualité des interactions avec les peptides du soi présentés par le complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) sur les cellules présentatrice d’antigènes (CPA). Chez les nouveau-nés, des mécanismes intrinsèques et extrinsèques aux cellules influencent les interactions entre le TCR et le complexe CMH-peptide du soi, résultant en un répertoire de cellules T qui possèdent des propriétés distinctes par rapport à leurs homologues adultes. Par ailleurs, les souris diabétiques non-obèses (NOD), qui ont des cellules T auto-réactives qui attaquent les cellules β du pancréas, responsables de la production d’insuline, sont porteuses de polymorphismes génétiques qui peuvent influencer la sélection thymique. Ainsi, nous avons émis l’hypothèse que des facteurs intrinsèques et extrinsèques aux cellules modulent la sélection thymique tout au long de la vie et peuvent ultimement contribuer à la fonction et au dysfonctionnement de cellules T effectrices. La force globale de la signalisation TCR perçue lors du développement des lymphocytes T peut être mesurée en évaluant le niveau d’expression de différentes molécules, telles que CD5. Nous avons découvert que, tant chez la souris que l’humain, le répertoire des cellules T néonatales est composé de cellules T exprimant des niveaux plus élevés de CD5 que ceux des adultes. Cette augmentation des niveaux d’expression de CD5 n’est pas due à des défauts de tolérance centrale. En fait, nous avons plutôt démontré que les thymocytes exprimant un TCR de faible affinité pour les antigènes du soi ne sont pas sélectionnés efficacement chez les nouveau-nés et donc ne font pas partie du répertoire des cellules T néonatales, alors que ces thymocytes se développent adéquatement chez les adultes. Cette modification dans les seuils de sélection thymique biaise le niveau basal d’auto-réactivité du répertoire de cellules T néonatales et pourrait expliquer en partie les différences de réponse aux infections observées entre les nouveau-nés et les adultes. En comparant les niveaux de CD5 sur les thymocytes et les cellules T périphériques de souris NOD, prédisposées au diabète, avec ceux de souris C57BL/6 (B6), résistantes au développement du diabète auto-immun, nous avons découvert que les populations de cellules T des souris NOD ne perçoivent pas nécessairement des signaux TCR plus forts lorsqu’ils interagissent avec des antigènes du soi. Au contraire, une plus grande proportion de cellules T CD4+ et régulatrices avec un plus faible niveau de CD5 se différencient chez les souris NOD. Ce phénotype est fortement dépendant du locus du CMH des souris NOD. En revanche, les niveaux de CD5 sur les cellules T CD8+ périphériques des souris NOD sont plus élevés que ceux des souris B6, en raison d’un biais de survie intrinsèque aux cellules. Ces différences en niveau d’expression de CD5 sur le répertoire de cellules T des souris NOD ont des conséquences fonctionnelles directes et pourraient contribuer au développement ou à la progression du diabète auto-immun. Enfin, nous avons évalué si la sélection thymique était modulée par une molécule de co-signalisation, le co-stimulateur inductible de cellules T (ICOS). ICOS appartient à la famille des molécules de co-signalisation de type CD28 et se lie au ligand de ICOS (ICOSL). Alors que d’autres molécules de co-signalisation ont été démontré comme étant impliquées dans la tolérance centrale, le rôle joué par ICOS n’est pas clair. Nous avons démontré que ICOSL est exprimé par une variété de CPA thymiques importantes dans l’induction de la tolérance centrale et que ICOS est exprimé à la hausse durant la sélection thymique, en fonction de la force du signal TCR perçue par les thymocytes. Nous fournissons également, pour la première fois, une preuve que la voie ICOS-ICOSL pourrait avoir un rôle dans la régulation fine de la sélection négative. En conclusion, les résultats présentés dans cette thèse démontrent que la sélection thymique être altérés dans le contexte de l’ontogénie et du diabète auto-immun, conduisant au développement de cellules T avec une auto-réactivité basale relativement plus élevée ou plus faible en comparaison aux animaux adultes en bonne santé. Ces modulations pourraient avoir des conséquences importantes sur la fonction immunitaire et doivent être considérées pour le développement de futurs vaccins ou approches thérapeutiques chez ces populations. / Conventional ɑβ T cells express antigen receptors that can recognize and respond to a wide range of foreign pathogens. In parallel, critical mechanisms are in place to prevent T cells from reacting to self-antigens causing autoimmunity. To ensure the generation of a functional, diverse yet self-tolerant T cell pool, appropriate ɑβ T cell receptors (TCR) are selected in the thymus based on the quality and quantity of their interactions with self-peptides presented by the major histocompatibility complex (MHC) on thymic antigen presenting cells (APC). In neonates, cell-intrinsic and -extrinsic mechanisms influence TCR and self-peptide-MHC interactions resulting in a T cell pool that exhibits distinct functions as compared to their adult counterparts. Similarly, non-obese diabetic (NOD) mice, which contain autoreactive T cells that attack insulin-producing pancreatic β cells, carry genetic polymorphisms that can influence thymic selection. Therefore, we hypothesized that cell-intrinsic and -extrinsic factors modulate thymic selection throughout life and may ultimately contribute to the function and dysfunction of effector T cells. The overall perceived strength of TCR signaling during T cell development can be measured by several molecules, including CD5. We found that, in both mice and humans, the neonatal T cell pool is composed of T cells with higher CD5 levels than their adult counterparts. The increased CD5 levels are not due to defects in central tolerance. Instead, we demonstrated that thymic selection is altered in neonates. Thymocytes expressing a TCR with low affinity to self-antigen that develop in adults are not efficiently selected into the neonatal T cell pool. This shift in thymic selection thresholds skews the basal self-reactivity of the neonatal T cell repertoire and may explain, in part, differences in the neonatal versus adult response to infections. By comparing CD5 levels on thymocytes and peripheral T cells from diabetes-prone NOD mice with those from autoimmune-resistant C57BL/6 (B6) mice, we found that T cell populations in NOD mice do not necessarily perceive stronger TCR signals when interacting with self-antigens. Rather, NOD mice allow the differentiation of more CD4+ T cells and thymic Tregs with lower CD5 levels. This phenotype is strongly dependent on the NOD MHC locus. In contrast, CD5 levels on peripheral NOD CD8+ T cells are higher than those in the B6 mice that is likely due to a cell-intrinsic survival bias. These differences in CD5 levels in the NOD T cell pool have direct functional consequences and may contribute to the development or progression of autoimmune diabetes. Lastly, we investigated whether thymic selection is modulated by the co-signaling molecule, inducible T cell costimulator (ICOS). ICOS belongs to the CD28 family of co-signaling molecules and binds to the ICOS ligand (ICOSL). While other co-signaling molecules have been implicated in central tolerance, the role played by ICOS is unclear. We demonstrated that ICOSL is expressed by an array of thymic APCs important for central tolerance induction, and that ICOS is upregulated during thymic selection relative to the strength of TCR signaling the thymocytes perceive. We also provide, for the first time, evidence that the ICOS-ICOSL pathway may fine-tune negative selection. In conclusion, the results presented in this thesis demonstrate that thymic selection appears to be altered within the context of ontogeny and autoimmune diabetes, leading to the development of T cells with relatively higher or lower basal self-reactivity as compared to healthy adult animals. These modulations may have significant consequences on immune function and require careful consideration for future vaccination and therapeutic approaches within these populations.

Cette étude se concentre sur l'administration de sucrose pour soulager la douleur chez les nouveau-nés prématurés en unité de soins intensifs néonatals (USIN). En utilisant la Théorie du Comportement Planifié (TCP) d'Ajzen, les chercheurs ont examiné le comportement, l'intention, les attitudes, les normes subjectives et la perception de contrôle des infirmières travaillant dans une USIN d'un centre hospitalier universitaire de niveau III. Les résultats ont révélé que la majorité des infirmières ont déclaré avoir administré du sucrose aux nouveau-nés prématurés au cours des deux dernières semaines de travail en USIN, et qu'elles avaient l'intention de continuer à le faire lors des prises de sang au talon. De plus, les attitudes, les normes subjectives et la perception de contrôle des participantes étaient favorables à l'utilisation du sucrose pour soulager la douleur des prématurés. Ces résultats soulignent l'importance de sensibiliser et de former les infirmières à l'utilisation appropriée des interventions non pharmacologiques, telles que l'administration de sucrose, pour soulager la douleur chez les nouveau-nés prématurés. Ils mettent en évidence le rôle crucial des infirmières dans la gestion de la douleur chez cette population vulnérable et suggèrent des pistes d'amélioration pour une prise en charge optimale. En conclusion, cette étude met en lumière les facteurs influençant le comportement des infirmières concernant l'administration de sucrose pour soulager la douleur des prématurés en USIN. Elle souligne l'importance de considérer les variables de la TCP dans la planification des stratégies visant à améliorer les soins et à réduire la douleur chez les prématurés en USIN. / This study focuses on the administration of sucrose for pain relief in preterm infants in the neonatal intensive care unit (NICU). Using Ajzen's Theory of Planned Behavior (TPB) as a theoretical framework, the researchers examined the behavior, intention, attitudes, subjective norms, and perceived control of nurses working in a level III university hospital NICU. The results revealed that the majority of nurses reported administering sucrose to preterm infants in the past two weeks of their work in the NICU, and they had the intention to continue doing so during heel-stick procedures. Furthermore, nurses' attitudes, subjective norms, and perceived control were favorable towards the use of sucrose for pain relief in preterm infants. These findings highlight the importance of raising awareness and providing training for nurses regarding the appropriate use of non-pharmacological interventions, such as sucrose administration, for pain relief in preterm infants. They underscore the crucial role of nurses in managing pain in this vulnerable population and suggest avenues for improvement in optimizing care. In conclusion, this study sheds light on the factors influencing nurses' behavior regarding the administration of sucrose for pain relief in preterm infants in the NICU. It underscores the importance of considering the variables of the TPB in planning strategies to enhance care and reduce pain in preterm infants in the NICU.

Cette thèse se compose de trois chapitres qui explorent le rôle des conditions de santé en début de vie, notamment les chocs de santé in utero et la santé à la naissance, dans la détermination des résultats économiques à long terme pour les enfants et leurs mères. Le premier chapitre examine l'impact de l'exposition aux particules fines (PM2.5) pendant la grossesse sur la santé des nouveau-nés. À partir de données exhaustives provenant de la province du Québec, au Canada, couvrant les naissances entre 2008 et 2015, ce chapitre évalue l'effet d'une unité supplémentaire d'exposition (marge intensive) ainsi que l'impact d'une journée supplémentaire à des niveaux de pollution dépassant les seuils recommandés (marge extensive). Nos résultats montrent qu'il n'y a pas d'effet détectable de l'exposition au niveau global, que ce soit à la marge intensive ou extensive. Toutefois, certains groupes spécifiques -- en particulier les nourrissons de sexe féminin et ceux nés de mères n'ayant pas atteint un niveau d'éducation universitaire -- présentent des résultats défavorables, tels qu'un faible poids à la naissance, une durée de gestation réduite et des naissances prématurées, en lien avec une exposition accrue à la pollution. Ces observations, dans un contexte où les niveaux de pollution sont relativement faibles, mettent en lumière la nécessité de renforcer les efforts pour améliorer la qualité de l'air afin d'obtenir des bénéfices substantiels en matière de santé publique. Le deuxième chapitre analyse l'impact de la santé à la naissance sur les trajectoires de revenus des mères. Plus précisément, il évalue les conséquences d'avoir un enfant de faible poids à la naissance ou prématuré. En exploitant un couplage unique entre certificats de naissance et données fiscales parentales au Canada, et à l'aide d'une méthodologie qui compare des mères suivant des trajectoires similaires avant la naissance de leur enfant, ce chapitre révèle une pénalité de revenu persistante et croissante pour les mères d'enfants nés en mauvaise santé, s'étendant de l'année de naissance jusqu'à sept ans après. Cette pénalité aggrave les écarts salariaux entre les sexes au sein des ménages et accentue les inégalités de revenus parmi les mères. Deux mécanismes sous-jacents sont identifiés : d'une part, les enfants nés avec une mauvaise santé nécessitent des soins accrus en raison de complications pendant l'enfance ; d'autre part, la mauvaise santé de l'enfant a des répercussions négatives sur la santé physique et mentale de la mère. Ces résultats soulignent le rôle déterminant de la santé néonatale dans l'amplification des écarts de revenus entre hommes et femmes et appellent à des politiques de soutien visant à aider les mères à équilibrer leurs responsabilités professionnelles et familiales. Le troisième chapitre explore les effets intergénérationnels de la santé à la naissance sur la mobilité socioéconomique. Il se concentre sur l'impact du faible poids à la naissance, en exploitant des données couplées de deux cohortes de naissances canadiennes (1983-1996 et 2006-2015). Nos analyses montrent que les mères ayant un faible poids à la naissance sont moins susceptibles d'atteindre un niveau d'éducation élevé ou des revenus élevés, et ont une probabilité réduite de vivre dans un environnement socioéconomique plus favorisé que celui dans lequel elles sont nées. En conséquence, ces mères sont également plus susceptibles d'avoir un enfant présentant un faible poids à la naissance. En s'appuyant sur la richesse des données, nous montrons en outre que le faible poids à la naissance diminue les chances d'améliorer son rang de revenu par rapport à celui de ses parents à l'âge adulte. Ces résultats, robustes même dans des comparaisons entre enfants issus d'une même mère, mettent en évidence l'importance cruciale d'interventions prénatales pour réduire les désavantages intergénérationnels liés à la santé. / This dissertation consists of three chapters that explore the role of early-life health conditions, particularly in utero health shocks and health at birth, in determining long-term economic outcomes for children and their mothers. The first chapter investigates the impact of exposure to fine particulate matter (PM2.5) during pregnancy on newborn health. Using comprehensive data from Quebec, Canada, covering births between 2008 and 2015, this chapter evaluates both the effect of an additional unit of exposure (intensive margin) and the impact of an additional day of exposure to pollution levels above recommended thresholds (extensive margin). Our results indicate no detectable effects of exposure at the population level, either on the intensive or extensive margin. However, specific groups -- particularly female infants and those born to mothers with less than a university education -- exhibit adverse outcomes, such as low birth weight, shorter gestation, and preterm birth, when exposed to high pollution levels. These findings, observed in a context of relatively low pollution levels, underscore the importance of further efforts to improve air quality to achieve significant public health benefits. The second chapter examines the impact of neonatal health on maternal income trajectories. Specifically, it explores the consequences of having a child born with low birth weight or prematurely. Leveraging a unique linkage of birth certificates and parental tax records in Canada, and using a methodology that compares mothers who followed similar income and life cycle trajectories before childbirth, this chapter reveals a persistent and growing income penalty for mothers of children born in poor health, extending from the year of birth to seven years thereafter. This penalty exacerbates gender income disparities within households and widens income inequality among mothers. The richness of the data allows us to identify two key mechanisms: first, children born in poor health are more likely to experience health complications during childhood, requiring increased caregiving time; second, the poor health of the child negatively affects the mother's physical and mental health. These findings highlight the significant role of neonatal health in explaining gender income gaps and call for policies supporting mothers in balancing work and caregiving responsibilities. The third chapter explores the intergenerational impact of birth health on socioeconomic mobility. It focuses on the effects of low birth weight, using linked data from two cohorts of Canadian births (1983-1996 and 2006-2015). Our findings reveal that mothers born with low birth weight are less likely to achieve higher levels of education or income and have a reduced probability of living in a more favorable socioeconomic environment compared to the one in which they were born. Consequently, these mothers are also more likely to have children with low birth weight. Drawing on the richness of the data, we further demonstrate that low birth weight reduces the likelihood of surpassing one's parents' income rank in adulthood. These results, which remain robust when comparing siblings, underscore the importance of prenatal health interventions in reducing intergenerational disadvantages linked to health.

La Communauté française décide en concertation avec la Région bruxelloise et la Région wallonne, de financer un Centre d’Epidémiologie Périnatale (CEpiP). Les Communautés et Régions chargent le CEpiP de les assister dans la vérification, le remplissage et la correction des certificats concernant les naissances à partir du 1er janvier 2008. Le CEpiP est également chargé d’encoder les certificats bruxellois, les certificats wallons étant toujours encodés par un sous-traitant.<p>Un problème souvent rencontré dans l’analyse des certificats de naissance est la présence de données manquantes. Des informations manquaient sur 64.0% des certificats bruxellois de janvier 2008 (situation de base). Le renforcement de l’enregistrement par le CEpiP durant l’année 2008 est lié à une diminution des informations manquantes sur les certificats initiaux (à la sortie des maternités et services d’état civil) après la première et la deuxième année d’enregistrement :20,8% et 19,5% des naissances en décembre 2008 et 2009 respectivement. Le taux résiduel de données manquantes après correction grâce aux listes envoyées aux maternités et services d’Etat civil est faible. En particulier, la nationalité d’origine des parents était souvent manquante, jusqu’à 35% à Bruxelles (données non publiées), et ce taux est passé à 2.6% en 2008 et 0.1% en 2009. Certaines données manquantes ne sont pas distribuées de façon équivalente selon la nationalité de la mère, même après correction. Les mères d’origine sub-saharienne ont les taux de remplissage les moins élevés. Enfin, le taux de mort-nés a augmenté par rapport aux données de 2007, au profit des mort-nés avant l’âge de 28 semaines, et suggère une amélioration de l’enregistrement suite au renforcement de l’information.<p>Les données concernant l’indice de masse corporelle des patientes sont donc relevées depuis 2009 pour l’ensemble des mères qui accouchent en Belgique. L’obésité maternelle et l’immigration sont en augmentation en Belgique, et ont été rarement étudiées au travers d’études de population sur les certificats de naissance. Des études ont pourtant montré que ces mères étaient à risque de complications périnatales, comme la césarienne ou la mortalité périnatale. L’obésité et l’immigration ont en commun le fait qu’elles recouvrent des réalités médicales, sociales et relationnelles face au personnel soignant, qui les mettent à risque de complications périnatales.<p>Des différences en termes de complications obstétricales et néonatales entre populations immigrantes et autochtones ont été observées en Belgique et dans d’autres pays, mais elles sont encore mal comprises. <p>Dans un premier travail d’analyse, nous avons évalué les taux de mortalité périnatale chez les mères immigrantes, en fonction du fait qu’elles étaient naturalisées ou non.<p>Le taux de mortalité périnatale est globalement plus élevé chez les mères immigrantes (8.6‰) que non-immigrantes (6.4‰).<p>Le taux de mortalité périnatale est globalement plus élevé chez les mères non naturalisées (10.3‰) que chez les mères naturalisées (6.1‰).<p>Le taux de mortalité périnatale varie selon l’origine des mères, mais dans chaque sous-groupe étudié, les mères non naturalisées ont un taux plus élevé de mortalité périnatale.<p><p>Des études ont successivement montré davantage, ou moins de césariennes chez les mères immigrantes. Peu de facteurs confondants étaient généralement pris en compte. Dans un second travail d’analyse, nous avons comparé les taux de césarienne dans plusieurs sous-groupes de nationalités.<p>Les taux de césarienne varient selon les sous-groupes de nationalités. Les mères originaires d’Afrique sub-saharienne ont un odds ratio ajusté pour la césarienne de 2.06 (1.62-2.63) en comparaison aux mères belges. L’odds ratio ajusté n’est plus statistiquement significatif après introduction des variables anthropométriques dans le modèle multivariable pour les mères d’Europe de l’Est, et après introduction des interventions médicales pour les mères du Maghreb.<p><p>Peu d’études ont analysé la relation entre l’obésité maternelle et les complications néonatales, et la plupart de ces études n’ont pas ajusté leurs résultats pour plusieurs variables confondantes. Nous avons eu pour but dans un troisième travail d’analyse d’étudier la relation entre l’obésité maternelle et les paramètres néonatals, en tenant compte du type de travail (induit ou spontané) et du type d’accouchement (césarienne ou voie basse). Les enfants de mères obèses ont un excès de 38% d’admission en centre néonatal après ajustement pour toutes les caractéristiques du modèle multivariable (intervalle de confiance à 95% :1.22-1.56) ;les enfants de mères obèses en travail spontané et induit ont également un excès de risque de 45% (1.21-1.73) et 34% (1.10-1.63) respectivement, alors qu’après une césarienne programmée l’excès de risque est de 18% (0.86-1.63) et non statistiquement significatif.<p>Les enfants de mères obèses ont un excès de 31% de taux d’Apgar à 1 minute inférieur à 7, après ajustement pour toutes les caractéristiques du modèle mutivariable (1.15-1.49) ;les enfants de mères obèses en travail spontané et induit ont également un excès de risque de 26% (1.04-1.52) et 38% (1.12-1.69) respectivement, alors qu’après une césarienne programmée l’excès de risque est de 50% (0.96-2.36) et non statistiquement significatif.<p><p>In 2008, a Centre for Perinatal Epidemiology was created inter alia to assist the Health Departments of Brussels-Capital City Region and the French Community to check birth certificates. A problem repeatedly reported in birth certificate data is the presence of missing data. The purpose of this study is to assess the changes brought by the Centre in terms of completeness of data registration for the entire population and according to immigration status. Reinforcement of data collection was associated with a decrease of missing information. The residual missing data rate was very low. Education level and employment status were missing more often in immigrant mothers compared to Belgian natives both in 2008 and 2009. Mothers from Sub-Saharan Africa had the highest missing rate of socio-economic data. The stillbirth rate increased from 4.6‰ in 2007 to 8.2‰ in 2009. All twin pairs were identified, but early loss of a co-twin before 22 weeks was rarely reported.<p>Differences in neonatal mortality among immigrants have been documented in Belgium and elsewhere, and these disparities are poorly understood. Our objective was to compare perinatal mortality rates in immigrant mothers according to citizenship status. Perinatal mortality rate varied according to the origin of the mother and her naturalization status: among immigrants, non-naturalized immigrants had a higher incidence of perinatal mortality (10.3‰) than their naturalized counterparts (6.1‰). In a country with a high frequency of naturalization, and universal access to health care, naturalized immigrant mothers experience less perinatal mortality than their not naturalized counterparts. <p>Our second objective was to provide insight into the differential effect of immigration on cesarean section rates, using Robson classification. Cesarean section rates currently vary between Robson categories in immigrant subgroups. Immigrant mothers from Sub-Saharan Africa with a term, singleton infant in cephalic position, without previous cesarean section, appear to carry the highest burden.<p>If it is well known that obesity increases morbidity for both mother and fetus and is associated with a variety of adverse reproductive outcomes, few studies have assessed the relation between obesity and neonatal outcomes. This is the aim of the last study, after taking into account type of labor and delivery, as well as social, medical and hospital characteristics in a population-based analysis. Neonatal admission to intensive care and low Apgar scores were more likely to occur in infants from obese mothers, both after spontaneous and <p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Du fait de son impact sur la morbidité et la mortalité infantile, ainsi que de ses implications sur la santé à l’âge adulte, le petit poids de naissance constitue un problème majeur de santé publique. Le Burkina Faso, pays sahélien enclavé au cœur de l’Afrique occidentale est classé dans le groupe des pays pauvres très endettés et présente une forte prévalence de petit poids de naissance, imputable dans la majorité des cas au retard de croissance intra-utérine. Le contexte de ce travail, réalisé en milieu rural, se caractérise par une situation socioéconomique précaire se traduisant par un faible niveau des indicateurs de l’état de santé et une faible accessibilité aux services sociaux de base.<p><p>Objectifs, hypothèses<p>Ce travail repose sur les hypothèses que les facteurs socioéconomiques influencent la survenue du petit poids de naissance et que le petit poids de naissance a un impact négatif sur la croissance et la survie au cours de la première année de vie. <p>Ce travail s’est fixé pour objectifs de :<p>•connaître l’importance du petit poids de naissance à terme ;<p>•analyser les déterminants du petit poids de naissance ;<p>•proposer un score pour l’identification des femmes enceintes à risque de mise au monde d’un enfant de petit poids ;<p>•identifier les facteurs influençant la croissance des enfants nés de petit poids ;<p>•étudier l'impact du déficit pondéral à la naissance sur la morbidité et la mortalité infantile ;<p>•formuler des recommandations pour la prévention et la prise en charge du petit poids de naissance en milieu défavorisé dans le but d’orienter les stratégies de réduction de la mortalité infantile.<p><p>Méthodologie<p>Trois types d’études ont été réalisés:<p>•une étude de cohorte rétrospective portant sur 435 enfants dans le but d’explorer les facteurs de risque, la croissance, le statut nutritionnel et la mortalité des enfants nés de petit poids de naissance à terme.<p>•Une étude transversale portant sur 1013 naissances vivantes à terme qui a permis de déterminer la fréquence du petit poids de naissance et d’analyser les facteurs associés qui lui étaient associés.<p>•Une étude de cohorte prospective au cours de laquelle les 1013 enfants enrôlés dans l’étude transversale ont été suivis afin d’analyser leur croissance et leur survie au cours des 12 premiers mois de vie.<p><p>Principaux résultats <p>•Le petit poids de naissance représente 15,8% des naissances à terme. <p>•Le sexe féminin est prédominant chez les enfants de petit poids.<p>•Les facteurs sociodémographiques associés au petit poids de naissance sont essentiellement des caractéristiques sociodémographiques maternelles :le jeune âge de la mère (moins de 20 ans), le faible niveau d’instruction, le mauvais état nutritionnel et la faible accessibilité géographique aux structures de santé.<p>•Les facteurs obstétricaux associés au petit poids sont :la primiparité, la survenue de vomissements gravidiques, l’exécution de travaux champêtres et une charge de travail plus importante en cours de grossesse.<p>•Le score proposé pour l’identification des femmes à risque a un pouvoir de discrimination acceptable et présente une bonne stabilité et une faible marge d’erreur de prédiction.<p>•Indépendamment de la catégorie de poids à la naissance, tous les enfants demeurent en dessous des médianes des courbes de référence internationales pour l’ensemble des indices nutritionnels entre 0 et 12 mois. <p>•Malgré des gains plus importants mais de façon non significative, les enfants de PPN montrent une incapacité à combler leur retard en taille et en poids.<p>•Le PPN est associé à un risque significativement plus élevé de retard de croissance et d’insuffisance pondérale au cours de la première année de vie.<p>•Le petit poids de naissance et la non-complétude de la consultation prénatale étaient associés à un risque deux fois plus important de décès. <p>•L’état nutritionnel à l’âge de 3 mois ainsi qu’à l’âge de 6 mois joue un rôle plus important dans la survie chez les enfants de PPN que chez les enfants nés de poids normal.<p><p> <p>Conclusions<p>Les solutions au problème du petit poids de naissance impliquent un paquet d’interventions intégrant des stratégies avant, pendant et après la grossesse et des programmes de prise en charge ciblant les enfants de petit poids après leur naissance. Il s’agit prioritairement de :<p>•l’information et de la sensibilisation des populations pour un meilleur suivi de la grossesse et une complétude de la consultation prénatale ;<p>•l’adoption de pratiques et d’habitudes en faveur d’une alimentation équilibrée des femmes enceintes ;<p>•un plaidoyer pour un allègement de la charge de travail des femmes enceintes ;<p>•l’utilisation de méthodes opérationnelles pour l’identification des femmes à risque ;<p>•l’amélioration de la qualité des prestations de surveillance de la grossesse ;<p>•la redéfinition du contenu et des protocoles des programmes de suivi et de promotion de la croissance des jeunes enfants avec une attention particulière pour les enfants nés de petit poids ;<p>•la lutte contre certaines pratiques sociales comme les mariages précoces et les grossesses chez les adolescentes et les femmes de moins de 20 ans ;<p>•la promotion de la scolarisation des jeunes filles et l’alphabétisation des mères ;<p>•l’amélioration de l’état nutritionnel de la population ;<p>•la réalisation d’études pour évaluer l’impact de certains déterminants et interventions sur l’incidence du petit poids et le devenir des enfants nés avec un handicap pondéral :rôle de l’infection palustre, interventions nutritionnelles ciblant les enfants de petit poids, apports nutritionnels pendant la grossesse.<p><p>Summary<p><p>Due to its impact on infant morbidity and mortality, and its effects on adult’s health, low birth weight (LBW) is a major issue in the public health sector. Burkina Faso, a Sahelian country land-locked in the heart of West Africa is listed among the heavily indebted poor countries, with a high prevalence of Low Birth Weight, caused in most cases by intra uterine growth retardation. The context of the current study, conducted in urban area, is characterised by a poor socio-economic situation resulting in weak health indicators and difficult access to the basic social services.<p><p>Objectives, assumptions<p><p>The study is based o the assumptions that socio-economic factors have an influence on the occurrence of Low Birth Weight and that Low Birth Weight has a negative impact on growth and survival during the first year of the infant.<p>The study has the following objectives:<p>•To assess the importance of low birth weight a term;<p>•To analyse the determinant factors of low birth weight;<p>•To suggest a classification for the identification of pregnant women at risk of giving birth to low birth weight infants ;<p>•To identify factors which have an impact on the growth of low birth weight children ;<p>•To look at the impact of body weight deficiency at birth on infant morbidity and mortality ;<p>•To give recommendations on the prevention and treatment of low birth weight children from underprivileged background with the aim to orientate strategies for infant mortality reduction.<p><p>Methodology<p>Three types of studies were conducted:<p>•A retrospective cohort study of 435 children aiming at exploring risk factors, growth, nutritional status, and mortality of low birth weight infants in the long run.<p>•A cross-sectional study of 1013 live full-term births, which led to determining the frequency of low birth weight and at analysing associated factors which are linked to low birth weight.<p>•A prospective cohort study during which the 1013 children taken into consideration for the cross-sectional study were followed up so as to analyse their growth and survival all along the first 12 months of their life.<p><p>Main results<p>•Low birth weight represents 15.8% of full-term births.<p>•Female babies are predominant among low birth weight babies.<p>•Socio-demographic factors linked to low birth weight are mainly maternal socio-demographic characteristics: young mother (below 20 years old), low educational level, poor nutritional status and limited geographical access to health infrastructures.<p>•Obstetrical factors linked to low birth weight are the following: primiparity, occurrence of vomiting during pregnancy, field work and a heavier workload during pregnancy.<p>•The suggested classification for the identification of women at risk proves to have an acceptable power of discrimination and shows good stability and limited margin of error for prediction.<p>•Regardless of weight categories at birth, all children remain below medians of international reference curves for all nutritional indicators between 0 and 12 months. <p>•In spite of more important but not significant weight gains, LBW children prove not to be able to catch up on height and weight.<p>•LBW is linked to a significantly higher risk in growth retardation and weight deficiency during the newborn’s first year of life.<p>•LBW and non-complete antenatal visits are linked to a death risk multiplied by two.<p>•The nutritional status at the age of 3 months and 6 months old plays a more important role in the survival in LBW children than in children born with normal weight.<p><p>Conclusions<p>Solutions to LBW imply a package of interventions which should integrate strategies before, during and after pregnancy, together with treatment programmes targeting LBW children after their birth. In priority, these are:<p>•Information and awareness given to population for a better follow-up of pregnancies and complete cycles antenatal visits ;<p>•New practices and habits to be taken on favouring a balanced diet of pregnant women ;<p>•Advocacy actions aiming at reducing the workload of pregnant women ;<p>•The use of operational methods to identify women at risk ;<p>•Improving the quality of monitoring of pregnancy; <p>•Redefined content and procedures of monitoring programs and promoting young children growth, with particular focus on LBW children ;<p>•The fight against some social practices such as early marriages and pregnancies of teenagers and women below 20 years;<p>•The promotion of school education for young girls and literacy for mothers ;<p>•Improving the nutritional status of the population;<p>•The realisation of studies to assess the impact of some determinant factors and interventions on the occurrence of low birth weight and on the future of children born with weight deficiency: role of malaria, nutritional interventions targeting LBW children, nutritional intakes during pregnancy<p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished