Pteridine reductase 1 (PTR1) is an NADPH dependent reductase that catalyzes the reduction of several pterins and folates. The gene encoding this enzyme was originally identified in Leishmania based on its ability to provide resistance to the drug methotrexate (MTX). The DNA and amino acid sequences are known, and overproducing strains of Escherichia coli are available. PTR1 has been previously shown to be required for the salvage of oxidized pteridines (folate, biopterin, and others). Since Leishmaniaare folate and pterin auxotrophes, PTR1 is a possible target for novel anti-folate drugs for the treatment of leishmaniasis. PTR1 catalyzes the transfer of hydride from NADPH to the 2-amino-4-oxo-pteridine ring system yielding 7, 8-dihydropteridines, and to the pteridine ring system of 7, 8-dihydropteridines yielding 5,6, 7, 8-tetrahydropteridines. PTR1 shows a pH dependent substrate specificity. At pH 4.6 the specific activity of PTR1 is highest with pterins, while at pH 6.0 the specific activity of PTR1 was highest with folates. The sequence of PTR1 is only 20-30% homologous to the sequences of members of the short chain dehydrogenase/reductase enzyme family. Although this is typical for members of this enzyme family, it does not allow for unambiguous classification in this family. In fact, when the DNA sequence of PTR1was first determined, PTR1 was classified as an aldoketo reductase. To classify PTR1 definitively, further biochemical characterization was required. To provide this information, the work described here was undertaken: (i) the stereochemical and kinetic course of PTR1 was determined; (ii) residues important in catalysis and ligand binding were identified; and (iii) conditions for the crystallization of PTR1 were developed. The stereochemistry of hydride transfer The use of [3H]-folate, showed that the ultimate product of PTR1 was 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolate. 4R-[3H]-NADPH and 4S-[3H]-NADPH were synthesized enzymatically and used as the cofactor for the reduction of folate. PTR1 was coupled to thymidylate synthase (TS), and tritium from 4S-[3H]-NADPH was transferred to thymidylate. Therefore, the pro-S hydride of NADPH was transferred to the si face of dihydrofolate (DHF; see figure I-1). The transfer of the pro-Shydride indicates that PTR1 is a B-side dehydrogenase which is consistent with its membership in the short chain dehydrogenase (SDR) family. The kinetic mechanism of PTR1 When NADPH was varied at several fixed concentrations of folate (and vice-versa) V/K (Vmax/KM) showed a dependence upon concentration of the fixed substrate. This is consistent with a ternary complex mechanism, in contrast to a substituted enzyme mechanism that exhibits no dependence of V/K on fixed substrate. Product inhibition patterns using NADP+ and 5-deazatetrahydrofolate (5dTHF, a stable product analog) were consistent with an ordered ternary complex mechanism in which NADPH binds first and NADP+ dissociates last. However, an enzyme-DHF binary complex was detected by fluorescence. Isotope partitioning experiments showed that the enzyme-DHF binary complex was not catalytically competent whereas the enzyme-NADPH complex was. Measurement of the tritium isotope effect on V/K (T(V/K)) at high and low dihydrofolate confirmed that PTR1 proceeds via a steady state ordered mechanism. Rapid quench analysis showed that dihydrofolate was a transient intermediate during the reduction of folate to tetrahydrofolate and that folate reduction is biphasic. Catalytic Residues of PTR1 The amino acid sequences of dihydropteridine reductase and 3-α, 20-β, hydroxy steroid dehydrogenase were aligned to that of PTR1. Based on the results of the alignment, site directed mutagenesis was used to investigate the role of specific residues in the catalytic cycle of PTR1. Variant enzymes were screened based on their ability to rescue a dihydrofolate reductase (DHFR) deficient strain of E. coli. Selected PTR1 variants (some complementing and some non-complementing) were purified and further characterized. Tyrosine 193 of the wild type enzyme was found to be involved in the reduction of pteridines, but not in the reduction of 7, 8-dihydropteridines, and eliminated the substrate inhibition of 7, 8-dihydropteridines observed with the wild type enzyme. Both PTR1(K197Q) and PTR1(Y193F/K197Q) had decreased activity for all substrates and low affinity for NADPH. In contrast to the wild type enzyme, NADPH displayed substrate inhibition towards PTR1(K197Q). All PTR1(D180) variants that were purified were inactive except for PTR1(D180C), which showed 2.5% of wild type activity with DHF. The binary complexes of PTR1(D180A) and PTR1(D180S) with NADPH showed a decrease in affinity for folate. Based on the kinetic properties of the PTR1 variants, roles for Y193, K197, and D180 are proposed. In conjunction with D180, Y193 acts as a proton donor to N8 of folate. K197 forms hydrogen bonds with NADPH in the active site and lowers the pKaof Y193. D180 participates in the protonation of N8 of folate and N5 of DHF. Crystallization of PTR1 and PTR1-ligand complexes The crystallization of PTR1 from L. major and L. tarentolea as unliganded and as binary and ternary complexes was attempted. Several crystal forms were obtained including L. major PTR1-NADPH-MTX crystals that diffracted to ~ 3.2 Å resolution. It was not possible to collect a full data set of any of the crystals. At their current stage, none of the crystal forms is suitable for structural work.

Orientador: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Resumo: As infecções intestinais parasitárias são um problema mundial. Parasitas veiculados em água e alimentos como podem ser provenientes da falta de higiene durante o manuseio dos alimentos, contaminação ambiental por material fecal, irrigação de cultivos agrícolas com águas poluídas ou fossas sépticas precárias, situações comuns em países como o Brasil. Tais questões, colaboram para ocorrência de surtos por água e alimentos na população. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de parasitas importantes em saúde pública em hortaliças e água de irrigação de propriedades do município de Bauru, São Paulo; bem como, nas fezes e nas mãos de manipuladores dos cultivos. As amostras foram coletadas de cinco propriedades do município de Bauru, sendo uma localizada em área urbana e quatro em área rural. Foram obtidas 33 amostras de água de irrigação, 62 de hortaliças, 31 das mãos e dez fecais dos manipuladores. Todas as amostras foram submetidas a análise molecular e as águas de irrigação submetidas ainda a análise microbiológica. Na análise microbiológica foi detectado coliformes totais e E. coli em três propriedades. Na análise molecular, o parasita mais prevalente em água de irrigação e hortaliça foi Cyclospora cayetanensis. Taenia spp. foi detectada em uma hortaliça e Giardia spp. foi mais prevalente nas amostras humanas. Não foi detectado Toxoplasma gondii. As amostras de água de irrigação apresentaram maior quantidade de amostras positivas. Atividades de educação em ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Parasitic intestinal infections are a worldwide problem. Parasites carried in water and food as they may come from the lack of hygiene during food handling, environmental contamination by fecal material, irrigation of agricultural crops with polluted water or precarious septic tanks, common situations in countries like Brazil. Such issues contribute to the occurrence of outbreaks by water and food in the population. Thus, the objective of this work was to investigate the presence of important parasites in public health in vegetables and irrigation water on rural properties in the municipality of Bauru, São Paulo; as well as in the feces and in the hands of crop handlers. The samples were collected from five rural properties in the municipality of Bauru, one of them located in an urban area and another four in a rural area. Were collected 33 samples of irrigation water, 62 of vegetables, 31 of hands and 10 fecal samples from handlers. All samples were subjected to molecular analysis and irrigation water was also subjected to microbiological analysis. In this microbiological analysis, total coliforms were detected at high rates and E. coli in three of the properties. In molecular analysis, the parasite most prevalent in the analysis and most common in irrigation water and vegetables was Cyclospora cayetanensis. Taenia spp. was detected in one greenery. Giardia spp. was most detected in human samples. Toxoplasma gondii was not detected. The samples of irrigation water had a grea... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A prevalência de patógenos intestinais foi estudada entre os índios da etnia Tapirapé, da Amazônia mato-grossense, por meio de técnicas coproparasitológicas, imunológicas e moleculares. Do total de 1526 amostras, 83,35% apresentaram ao menos um parasito intestinal e 65% tinham mais de um parasito (poliparasitismo). Entamoeba coli foi o mais prevalente (827/1526 - 54,19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38,07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18,81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16,84%) e Ancylostoma spp. (293/1526 - 19,20%) também foram freqüentes. Cistos de Giardia intestinalis foram seqüenciados utilizando os genes <font face=\"Symbol\">b-Giardina e gdh. Apenas os assemblages A e B foram encontrados, sendo que o assemblage A foi o mais prevalente. Análise molecular de Blastocystis spp. demonstrou que, por meio do gene SSU-rNA, o subtipo 1 foi o mais dominante entre os Tapirapé, seguido pelos subtipos 2 e 3. Com base nisso, G. intestinalis e Blastocystis spp. são potencialmente zoonóticos. Os resultados corroboram com outros estudos realizados na Amazônia brasileira. / The prevalence of intestinal pathogens was studied in indigenous of the Tapirapé ethnic from Amazon region of Mato Grosso State, using the coproparasitological, immunological and molecular. Of the total 1,526 fecal samples 83.35% had at least one intestinal parasite and 65% had more than one parasite (poliparasitism). The most prevalent parasite was Entamoeba coli (827/1526 - 54.19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38, 07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18.81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16.84%) and Ancylostoma spp. (293/1526 -19.20%) were found too. Cysts of G. intestinalis were sequence by <font face=\"Symbol\">b-Giardina and GDH gene. Only assemblages A and B were found and assemblage A was the most prevalent. The molecular characterization of Blastocystis spp. by SSU-rRNA demonstrated that subtype 1 was dominant followed by subtypes 2 and 3. So, G. intestinalis and Blastocystis spp. are potentially zoonotic. The results are in agreement with previous studies conducted in the Brazilian Amazon.

A caracterização de sequências codificadoras presentes nas vizinhanças do gene META 1 permitiu a identificação de alguns genes expressos preferencialmente em estágios infectivos de L. (L.) amazonensis. Um dos genes presentes é regulado de forma distinta, observando-se maior abundância do RNA em formas amastigotas. Este gene foi denominado LaLRR17 por codificar uma proteína contendo em sua região central 6 repetições ricas em leucina (LRR). As LRR são motivos presentes em diversas famílias de proteínas e são responsáveis pela formação de uma estrutura capaz de estabelecer interações protéicas. A região central da proteína LRR17 apresentou similaridade com a porção carboxi-terminal da proteína NOD 3 humana. A proteína LRR17 foi localizada no citosol de macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis. Para caracterizar a função da proteína LRR17 foram obtidas linhagens de L. (L.) amazonensis expressoras do gene LmjLRR17. Essas linhagens mutantes foram mais infectivas em macrófagos in vitro quando comparadas com a linhagem selvagem. Avaliamos também o papel das proteínas NOD 1 e NOD 2 na infecção por L. (L.) amazonensis e L. (L.) major para estabelecer a possível relação da proteína LRR17 na interação com essas vias de defesa celular do macrófago. / The characterization of coding sequences in the vicinity of the META 1 gene allowed the identification of some genes preferentially expressed in L. (L.) amazonensis infective stages. One of the identified transcripts presents a distinct pattern of expression with higher levels of mRNA in amastigotes. This gene was named LaLRR17 since it encodes a 72 kDa protein with 6 leucine-rich repeats (LRR) in its central region. Leucine-rich repeats (LRR) are present in several families of proteins and are responsible for the formation of a structure capable of establishing protein interactions. The central region of the LRR17 protein showed similarity with the carboxyl-terminal portion of the NOD 3 human protein. The LaLRR17 protein is secreted to the cytoplasm of L. (L.) amazonensis-infected macrophages. To characterize the function of the LRR17 protein we obtained strains of L. (L.) amazonensis expressing the LmjLRR17 gene. These mutant strains were more infective to macrophages in vitro when compared with the wild type strain. We also evaluated the role of NOD 1 and NOD 2 proteins in infections with L. (L.) amazonensis and L. (L.) major to investigate a possible role of the LRR17 protein in the interaction with these defense pathways in macrophages.

A prevalência de patógenos intestinais foi estudada entre os índios da etnia Tapirapé, da Amazônia mato-grossense, por meio de técnicas coproparasitológicas, imunológicas e moleculares. Do total de 1526 amostras, 83,35% apresentaram ao menos um parasito intestinal e 65% tinham mais de um parasito (poliparasitismo). Entamoeba coli foi o mais prevalente (827/1526 - 54,19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38,07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18,81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16,84%) e Ancylostoma spp. (293/1526 - 19,20%) também foram freqüentes. Cistos de Giardia intestinalis foram seqüenciados utilizando os genes <font face=\"Symbol\">b-Giardina e gdh. Apenas os assemblages A e B foram encontrados, sendo que o assemblage A foi o mais prevalente. Análise molecular de Blastocystis spp. demonstrou que, por meio do gene SSU-rNA, o subtipo 1 foi o mais dominante entre os Tapirapé, seguido pelos subtipos 2 e 3. Com base nisso, G. intestinalis e Blastocystis spp. são potencialmente zoonóticos. Os resultados corroboram com outros estudos realizados na Amazônia brasileira. / The prevalence of intestinal pathogens was studied in indigenous of the Tapirapé ethnic from Amazon region of Mato Grosso State, using the coproparasitological, immunological and molecular. Of the total 1,526 fecal samples 83.35% had at least one intestinal parasite and 65% had more than one parasite (poliparasitism). The most prevalent parasite was Entamoeba coli (827/1526 - 54.19%). Entamoeba histolytica/dispar (581/1526 - 38, 07%), Giardia intestinalis (287/1526 - 18.81%), Blastocystis spp. (257/1526 - 16.84%) and Ancylostoma spp. (293/1526 -19.20%) were found too. Cysts of G. intestinalis were sequence by <font face=\"Symbol\">b-Giardina and GDH gene. Only assemblages A and B were found and assemblage A was the most prevalent. The molecular characterization of Blastocystis spp. by SSU-rRNA demonstrated that subtype 1 was dominant followed by subtypes 2 and 3. So, G. intestinalis and Blastocystis spp. are potentially zoonotic. The results are in agreement with previous studies conducted in the Brazilian Amazon.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2017-07-06T16:17:04Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1926127 bytes, checksum: 38d2757ec02b5452569f43cdc449354f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T16:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1926127 bytes, checksum: 38d2757ec02b5452569f43cdc449354f (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Quality of Life (QOL) has become understood as subjective quality of life or quality of life perceived by the people, influenced mostly by the World Health Organization (WHO) states that health is not restricted to the absence of disease, but encompasses the individual perception of a complete physical, mental and social well-being. Thus, the concept of QOL has been described as something dynamic, multidimensional and how it is perceived is different for everyone. Thus, the intestinal parasitism influence on QoL, as it constitutes a serious public health problem and contributes to economic, social, and health, especially in developing countries, one of the main factors debilitating the population. The objective of this study was to evaluate the quality of life of patients with intestinal parasites treated at a Joao Pessoa Public Service. This is an observational cross-sectional study and descriptive analysis, conducted with a sample of 135 patients treated at the Clinical Laboratory of the University Hospital Lauro Wanderley, in the city of João Pessoa - PB. The statistical method of logistic regression was used to explain what categorical variables become relevant for intestinal parasites and to support decision making. The sample showed 94 (69.6%) women and 41 (30.4%) men, 73 (54%) brown / brown over the age of 54 50 (37%). The most common species of parasite was Ascaris lumbricoides (28.75%), followed by Giardia lamblia (25.0%), Endolimax nana (18.75%) and Entamoeba coli (12.5%). The analysis of variables related to the SF-36 instrument, which assesses QoL, it was observed that the domains general health and physical aspects had lower averages, being the most affected in the opinion of patients, with an average of 46.77 and 48 , 76, respectively. In the selection of the first model the dependent variable is parasitic and non-parasitized, the variables that showed statistical significance (α = 10%) were type of animal, marital status, constipation, functional capacity domain, domain pain, mental health domain, vomiting and abdominal cramping. In the second model, only positive patients, the response variable was the presence or absence of pathogenic parasite. The significant variables were: decreased work / activities, comorbidity, abdominal colic, moderate activities, physical aspect domain, vomiting, sanitation and animal type. The logistic regression model developed showed that the selected models can be used as a reference for assessing the quality of life of patients and enteroparasitados identify the domains of the SF-36 questionnaire that affect the quality of life of these individuals. It was identified some risk factors for parasitic infections that can be prevented or controlled through planning actions aimed at the prevention and control of intestinal parasites. / A Qualidade de Vida (QV) passou a ser entendida como qualidade de vida subjetiva ou qualidade de vida percebida pelas pessoas, influenciada em sua maioria pela Organização Mundial da Saúde (OMS), que declara que a saúde não se restringe à ausência de doença, mas engloba a percepção individual de um completo bem-estar físico, mental e social. Com isso, o conceito de QV tem sido descrito como algo dinâmico, multidimensional e a forma como é percebida é diferente para todas as pessoas. Assim, o parasitismo intestinal influencia na QV, pois constitui-se num grave problema de saúde pública e contribui para problemas econômicos, sociais e médicos, sobretudo nos países em desenvolvimento, sendo um dos principais fatores debilitantes da população. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade de vida de pacientes com enteroparasitoses atendidos em um Serviço Público de João Pessoa. Trata-se de um estudo observacional com delineamento transversal e análise descritiva, realizado com uma amostra de 135 pacientes atendidos no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário Lauro Wanderley, no município de João Pessoa - PB. Foi utilizado o modelo estatístico de regressão logística para explicar quais variáveis categóricas tornam-se relevantes para a ocorrência de enteroparasitoses e subsidiar a tomada de decisão. A amostra apresentou 94 (69,6%) mulheres e 41 (30,4%) homens, 73 (54%) pardos/morenos com idade acima de 54 anos 50 (37%). A espécie de parasito mais frequente foi a Ascaris lumbricoides (28,75%), seguido de Giardia lamblia (25,0%), Endolimax nana (18,75%) e Entamoeba coli (12,5%). Nas análises das variáveis relacionadas ao instrumento SF-36, que avalia a QV, observou-se que os domínios estado geral de saúde e aspectos físicos apresentaram menores médias, sendo os mais afetados na opinião dos pacientes, com médias de 46,77 e 48,76, respectivamente. Foram ajustados dois modelos de regressão logística. Na seleção do primeiro modelo a variável resposta era parasitado e não-parasitado, as variáveis que apresentaram significância estatística (α= 10%) foram: tipo de animal, estado civil, constipação, domínio capacidade funcional, domínio dor, domínio saúde mental, vômitos e cólica abdominal. No segundo modelo, apenas com os pacientes positivos, a variável resposta era presença ou ausência de parasito patogênico. As variáveis com significância foram: diminuição do trabalho/atividades, comorbidade, cólica abdominal, atividades moderadas, domínio aspecto físico, vômitos, saneamento básico e tipo de animal. O modelo de regressão logística desenvolvido mostrou que os modelos selecionados podem ser utilizados como referência para avaliar a qualidade de vida dos pacientes enteroparasitados e identificar os domínios do questionário SF-36 que afetam a qualidade de vida desses indivíduos. Identificou-se alguns fatores de risco para a enteroparasitose, que podem ser prevenidos ou controlados por meio do planejamento de ações voltadas para a prevenção e controle das parasitoses intestinais.

Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2017-10-27T12:46:47Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-10-27T12:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Leishmaniose é uma zoonose desenvolvida por protozoários do gênero Leishmania. A doença se manifesta sob a forma visceral e cutânea cujo tratamento apresenta diversas limitações como alto custo, elevada toxicidade dos fármacos e altos índices de recidiva. A leishmaniose cutânea abrange lesões destrutivas e ulceradas que podem evoluir para condições mais graves culminando em óbito dos hospedeiros acometidos. Tratamentos alternativos tem sido implementados com a finalidade de proporcionar acessibilidade financeira e menores efeitos colaterais aos pacientes. A terapia fotodinâmica se insere nesse contexto devido à praticidade, custo reduzido, mínima toxicidade e sem relatos de resistência descritos na literatura. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica em leishmaniose cutânea induzida em camundongos BALB/c infectados com leishmaniose cutânea. A otimização da PDT também foi avaliada pela administração de doadores de óxido nítrico (S-nitroso-MSA) encapsulados em nanopartículas de quitosana (CSNPs), já que esse composto é altamente reativo e potencialmente tóxico para o parasito. Camundongos BALB/c foram infectados no membro posterior esquerdo com 1.106 promastigotas de Leishmania (L) amazonensis que expressam o gene da luciferase e acompanhados por 4 semanas até o surgimento da lesão. Após esse período, os animais foram distribuídos em 6 grupos (n=4): Controle (não tratado), PDT1 (submetidos à uma sessão de PDT), PDT2 (duas sessões ), PDT1NPNO e PDT2NPNO (uma sessão e duas sessões de PDT em associação com S-nitroso-MSACPNPS, respectivamente), e NPNO (somente S-nitroso-MSA-CP NPS). A segunda sessão foi realizada 24 h após a primeira. A PDT foi efetuada usando um diodo emissor de luz (LED, &lambda;=660 &plusmn; 22 nm) e azul de metileno (100 &mu;M), com densidade de energia de 150 J/cm2. O progresso da doença foi avaliado por meio do tamanho da lesão e escala de dor utilizando um paquímetro e filamentos von Frey, respectivamente. A carga parasitária foi quantificada por intermédio do bioimageamento nas primeiras 96 h após o tratamento e nas 4 semanas seguintes. Os resultados obtidos demonstraram redução na carga parasitária durante o período experimental, com exceção do grupo PDT1NPNO. Houve redução parasitária significante em 72 h e 96 h para os grupos PDT2, PDT2NPNO e NPNO. A maior redução da lesão foi observada para o grupo PDT2 bem como menor sensibilidade ao estímulo doloroso. Nossos resultados indicam efeitos benéficos da PDT em duas sessões, sugerindo que pode ter ocorrido modulação do processo inflamatório. Entretanto, o uso das nanopartículas nas condições utilizadas nesse experimento não foi capaz de otimizar a eficiência da PDT nos animais infectados com Leishmania (L) amazonensis. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Miriam Lucas (miriam.lucas@unioeste.br) on 2018-04-18T16:58:28Z No. of bitstreams: 2 Fernanda_Ferreira_de_Carvalho_2017.pdf: 1245761 bytes, checksum: f7d305fe3b4c55009b31a1ca0fd7ec70 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T16:58:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Fernanda_Ferreira_de_Carvalho_2017.pdf: 1245761 bytes, checksum: f7d305fe3b4c55009b31a1ca0fd7ec70 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-08-10 / Foz do Iguaçu has today more than 81 ethnicities, associated to a wide cultural diversity they contribute to the divergence of hygienic habits, resulting in precarious sanitary conditions. Fir this reason, the city government has been presenting several changes in public health area. The city is also located on a tri-border border area, about 7 km from Ciudad Del Este (Paraguay) and 10 km from Puerto Iguazu (Argentina). Its main economic product is Tourism, due to the relevance of the Iguazu Falls, considered one of the seven wonders of nature and Itaipu Hydroelectric Power Plant, which is on the border of Brazil and Paraguay. Because of the construction of the Hydroelectric Power Plant, in just 20 years, Foz do Iguaçu has grown by 383% in the total population of the city, generating a great job offer. Due to the increasing number of women entering the labor market, the Municipal Early Childhood Centers (CMEIs) have been a reality in the life of families, as this is the place where many children spend most of their time while mothers are at work. These institutions play an important role in the development of children as a whole, mainly referring to the intellectual, physical, social and psychological aspects. Children attending CMEIs are more susceptible to infections than those who are kept in their homes, which can be explained by the large interpersonal contact provided by the collective environments. To verify the prevalence of parasitic diseases among children attending CMEIs in Foz do Iguaçu and to analyze the possible relationship with the socioeconomic, environmental and hygienic scenario of children, parents and caregivers. This is a field research, with descriptive and quantitative approaches. The studied population consisted of all pre-school children aged from 3 to 5 years old, enrolled in CMEIs A and B, and parents and/or guardians working with sampling by convenience. The feces of the children were collected and then sent for analysis in the Environmental Laboratory of the Itaipu Hydroelectric Power Plant. In addition, a questionnaire was applied to the parents or guardians of the children, containing 19 closed questions, regarding the factors that contribute to the merge of parasitic diseases. Data were analyzed by the BioEstat 5.3® program and, the level of significance was considered at 5%. Results: A total of 82 fecal samples were analyzed from February to June 2016. Positive results for parasites were found in 38.8% of them. The following etiological agents were found: Giardia duodenalis (28,0%), Hymenolepis nana (3,6%), Ascaris lumbricoides (2,4%), Entamoeba coli (2,4%) and Enterobius vermicularis (2,4%). Regarding the degree of parasitism, 35.0% of the children presented monoparasitism and only 4% presented biparasitism, and there were no cases of polyparasitism. The parents and guardians of the parasitized children (32/82) received the antiparasitic medication prescription (metronidazole) and the medicament for the treatment of the children. In addition, they received guidance in order to prevent the emergence of new cases. The most affected gender by parasites was the male (20/41), followed by the female (12/41), (p<0.05) in the age range of 3 to 4 years (84.3%). The socioeconomic profile revealed that the level of schooling of mothers, complete secondary education (15/29 - p<0.05), and incomplete high school parents (13/24 - p>0.05), family income up to one Minimum wage (19/47 - p<0.05), residential structure with piped water and treated with chlorine (32/80 - p<0.05), waste disposal by means of cesspool (12/36 - p<0.05), may have influenced the average incidence of parasitism, as well as the aspects related to the habit of washing hands after diaper change (21/47 - p<0.05) and the health of the child, the taking of feces exams (19/45), abdominal pain (25/65), nausea (31/79), vomiting (31/78), weight loss (28/71) and presence of formed faeces (17/43) ) (P<0.05). However, the prevalence of parasitoses was related to the form of cleaning foods (fruits, and vegetables), only with water (23/60 - p<0.05), with children who do not have the habit of washing their hands with soap before meals and after using the toilet (6/15 - p>0.05). Conclusion: The results indicate an important prevalence of intestinal parasitoses in children who live on the border area, in the age range of 3 to 5 years old, mainly giardiasis. The presence of parasitic diseases in this population provides an epidemiological profile that can help in the construction of public health policies which are more appropriate to this social reality, in order to contribute to the improvement of health education of the population, especially the family members responsible for the children who are the most affected by the to intestinal parasites. Keywords: parasitic / Foz do Iguaçu presenta 81 etnias, con una amplia diversidad cultural, contribuyendo a la divergencia de hábitos higiénicos, resultando en precarias condiciones sanitarias. Como consecuencia, el municipio viene presentando diversas transformaciones en el área de la salud. Además, se encuentra en la triple frontera, aproximadamente siete kilómetros de Ciudad Del Este (Paraguay) y a 10 km de Puerto Iguazu (Argentina). Su economía se basa principalmente en el turismo, debido a las Cataratas del Iguazú, la cual es considerada como una de las siete maravillas de la naturaleza y la Usina Hidroeléctrica de Itaipú. En los últimos 20 años, debido a la construcción de la Usina Hidroeléctrica Itaipú, el municipio de Foz do Iguaçu tuvo un crecimiento poblacional del 383%, convirtiéndose además en unas de las principales fuente de empleo. En razón del número cada vez mayor de mujeres insertas en el mercado de trabajo, los Centros Municipales de Educación Infantil (CMEIs) han sido una realidad en la vida de las familias, por ser este el lugar donde muchos niños pasan la mayor parte de su tiempo. Estas instituciones desempeñan un papel importantísimo en el desarrollo integral de los niños, principalmente relacionados con los aspectos intelectual, físico, social y psicológico. Los niños que frecuentan los CMEIs son más susceptibles a las infecciones que las que se mantienen en sus hogares, lo que puede ser explicado por el gran contacto interpersonal propiciado por los ambientes colectivos. Verificar la prevalencia de parasitosis en niños matriculadas en los CMEIs de Foz do Iguaçu y analizar la posible relación con el escenario socioeconómico, ambiental e higiénico de los niños, de los padres y/o responsables. Materiales y Métodos: Se trata de una investigación de campo, descriptiva y de abordaje cuantitativo. La población del estudio se constituyó de todos los niños con edad preescolar comprendida entre los 3 y 5 años, matriculados en los CMEIs A y B, y de los padres y / o responsables donde se trabajó con el muestreo de conveniencia. Se realizó la recolección de examen parasitológico de heces en los niños matriculados en los CMEIs y posteriormente procesados en el Laboratorio Ambiental de la Usina Hidroeléctrica de Itaipú. Además, se aplicó un cuestionario a los padres o responsables de los niños, conteniendo 19 preguntas cerradas, referentes a los factores contribuyentes para el surgimiento de enfermedades parasitarias. Los datos fueron analizados por el programa BioEstat 5.3® y, considerado el nivel de significancia en el 5%. Se analizaron 82 muestras fecales en el período de febrero a junio de 2016, obteniéndose positividad para parásitos en (38,8%), siendo encontrados los siguientes agentes etiológicos: Giardia duodenalis (28,0%), Hymenolepis nana (3,6%), Ascaris lumbricoides (2,4%), Entamoeba coli (2,4%) y Enterobius vermicular (2,4%). En cuanto al grado de parasitismo, el 35,0% de los niños presentaron monoparasitismo y sólo el 4% presentó biparasitismo, no habiendo casos de poliparasitismo. Los padres y/o los responsables de los niños parásitos (32/82), recibieron la prescripción medicamentosa de antiparasitario (metronidazol) y el medicamento para el tratamiento de los niños. Además, recibieron orientaciones para prevenir el surgimiento de nuevos casos. El género, más propicio por parasitosis fue el masculino (20/41), seguido del femenino (12/41), (P<0,05) con rango de edad de 3 a 4 años (84,3%). El perfil socioeconómico reveló que el grado de escolaridad de las madres, enseñanza media completa (15/29 - p<0,05), y de los padres de secundaria incompleta (13/24 - p>0,05), ingreso familiar de hasta un año Salario mínimo (19/47 - p<0,05), estructura residencial con agua potable y tratada con cloro (32/80 - p<0,05), eliminación de los desechos por medio de fosa (12/36 - p<0,5), puede haber influido en la incidencia media de parasitismo, así como los aspectos relacionados con la higienización de las manos de los responsables de los niños después del cambio de pañales (21/47 - p<0,05) y de la salud del niño, realización De examen parasitológico de heces (19/45), dolor abdominal (25/65), náuseas (31/79), vómitos (31/78), pérdida de peso (28/71) y presencia de heces formadas (17/43) (P<0,05). Sin embargo, la prevalencia de parasitosis fue relacionada con la forma de higienización de alimentos (frutas, verduras y legumbres), solamente con agua (23/60 - p<0,05), con los niños que no tienen el hábito de lavarse las manos Con uso de jabón antes de las comidas y después del uso del sanitario (6/15 - p>0,05). Conclusión: Los resultados apuntan a una prevalencia importante de parasitosis intestinal en niños de la región de frontera con edad comprendida entre los 3 a 5 años, principalmente de giardiasis. La presencia de enfermedades parasitarias en esta población proporciona un perfil epidemiológico que puede ayudar en la construcción de políticas públicas de salud más adecuadas a esa realidad social, para contribuir a mejorar la educación en salud de la población, en especial a los familiares responsables por los niños afectados por parasitosis intestinales. / Foz do Iguaçu apresenta mais de 81 etnias, associadas a uma ampla diversidade cultural, contribuindo para a divergência de hábitos higiênicos, resultando em precárias condições sanitárias. Como decorrência, o município vem apresentando diversas transformações na área da saúde. Além disso, encontra-se na tríplice fronteira, a cerca de sete km de Ciudad Del Este (Paraguai) e 10 km de Puerto Iguazu (Argentina). Tem como principal base de economia o turismo, devido a Cataratas do Iguaçu, considerada umas das sete maravilhas da natureza e a Usina Hidrelétrica de Itaipu, que fica na divisa do Brasil com o Paraguai. Devido a construção da Usina Hidrelétrica, em apenas 20 anos, Foz do Iguaçu apresentou um crescimento de 383% de habitantes no total da população do município, gerando grande oferta de emprego. Em razão do número cada vez maior de mulheres inseridas no mercado de trabalho, os Centros Municipais de Educação Infantil (CMEIs) tem sido uma realidade na vida das famílias, por ser este o local onde muitas crianças passam a maior parte do seu tempo. Estas instituições têm um papel importantíssimo no desenvolvimento integral das crianças, principalmente relacionados aos aspectos intelectual, físico, social e psicológico. As crianças que frequentam os CMEIs são mais suscetíveis às infecções do que aquelas que são mantidas em suas residências, o que pode ser explicado pelo grande contato interpessoal propiciado pelos ambientes coletivos. Objetivou-se verificar a prevalência de parasitoses em crianças atendidas em CMEIs de Foz do Iguaçu e analisar a possível relação com o cenário socioeconômico, sanitário e higiênico das crianças, dos pais e ou responsáveis. Trata-se de uma pesquisa de campo, descritiva e de abordagem quantitativa. A população do estudo foi constituída de todas as crianças com idade pré-escolar de 3 a 5 anos, matriculadas nos CMEIs A e B, e dos pais e ou responsáveis onde se trabalhou com amostragem de conveniência. Foi realizada a coleta de exame parasitológico de fezes nas crianças matriculadas nos CMEIs e, posteriormente processadas no Laboratório Ambiental da Usina Hidrelétrica de Itaipu. Além disso, foi aplicado um questionário aos pais ou responsáveis das crianças, contendo 19 questões perguntas fechadas, referentes aos fatores contribuintes para o surgimento de doenças parasitárias. Os dados foram analisados pelo programa BioEstat 5.3® e, considerado o nível de significância em 5%. Foram analisadas 82 amostras fecais no período de fevereiro a junho de 2016, obtendo-se positividade para parasitos em 38,8%, sendo encontrados os seguintes agentes etiológicos: Giardia duodenalis (28,0%), Hymenolepis nana (3,6%), Ascaris lumbricoides (2,4%), Entamoeba coli (2,4%) e Enterobius vermicularis (2,4%). Em relação ao grau de parasitismos, 35,0% das crianças apresentaram monoparasitismo e apenas 4% apresentaram biparasitismo, não havendo casos de poliparasitismo. Os pais e ou responsáveis das crianças parasitadas (32/82), receberam a prescrição medicamentosa de antiparasitário (metronidazol) e o medicamento para o tratamento das crianças. Além disso, receberam orientações no intuito de se prevenir o surgimento de novos casos. O gênero, mais acometido por parasitoses foi o masculino (20/41), seguido do feminino (12/41), (p<0,05) com faixa etária de 3 a 4 anos (84,3%). O perfil socioeconômico revelou que o grau de escolaridade das mães, ensino médio completo (15/29 - p<0,05), e dos pais ensino médio incompleto (13/24 - p>0,05), renda familiar de até um salário mínimo (19/47 – p<0,05), estrutura residencial com água encanada e tratada com cloro (32/80 – p<0,05), eliminação dos dejetos por meio de fossa (12/36 - p<0,05), pode ter influenciado para a incidência média de parasitismo, assim como os aspectos relacionados a higienização das mãos dos responsáveis das crianças após a troca de fraldas (21/47 - p<0,05) e da saúde da criança, realização de exame parasitológico de fezes (19/45), dor abdominal (25/65), náuseas (31/79), vômitos (31/78), perda de peso (28/71) e presença de fezes formadas (17/43) (p<0,05). No entanto, a prevalência de parasitoses foi relacionada à forma de higienização de alimentos (frutas, verduras e legumes), somente com água (23/60 - p<0,05), com as crianças que não tem o hábito de lavar as mãos com uso de sabão antes das refeições e após o uso do sanitário (6/15 – p>0,05). Os resultados apontam uma prevalência importante de parasitoses intestinais em crianças fronteiriças na faixa etária de 3 a 5 anos, principalmente de giardíase. A presença de doenças parasitárias nesta população fornece um perfil epidemiológico que pode auxiliar na construção de políticas públicas de saúde mais adequadas a essa realidade social, de forma a contribuir na melhoria da educação em saúde da população, em especial dos familiares responsáveis das crianças atingidas pelas parasitoses intestinais.

A caracterização de sequências codificadoras presentes nas vizinhanças do gene META 1 permitiu a identificação de alguns genes expressos preferencialmente em estágios infectivos de L. (L.) amazonensis. Um dos genes presentes é regulado de forma distinta, observando-se maior abundância do RNA em formas amastigotas. Este gene foi denominado LaLRR17 por codificar uma proteína contendo em sua região central 6 repetições ricas em leucina (LRR). As LRR são motivos presentes em diversas famílias de proteínas e são responsáveis pela formação de uma estrutura capaz de estabelecer interações protéicas. A região central da proteína LRR17 apresentou similaridade com a porção carboxi-terminal da proteína NOD 3 humana. A proteína LRR17 foi localizada no citosol de macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis. Para caracterizar a função da proteína LRR17 foram obtidas linhagens de L. (L.) amazonensis expressoras do gene LmjLRR17. Essas linhagens mutantes foram mais infectivas em macrófagos in vitro quando comparadas com a linhagem selvagem. Avaliamos também o papel das proteínas NOD 1 e NOD 2 na infecção por L. (L.) amazonensis e L. (L.) major para estabelecer a possível relação da proteína LRR17 na interação com essas vias de defesa celular do macrófago. / The characterization of coding sequences in the vicinity of the META 1 gene allowed the identification of some genes preferentially expressed in L. (L.) amazonensis infective stages. One of the identified transcripts presents a distinct pattern of expression with higher levels of mRNA in amastigotes. This gene was named LaLRR17 since it encodes a 72 kDa protein with 6 leucine-rich repeats (LRR) in its central region. Leucine-rich repeats (LRR) are present in several families of proteins and are responsible for the formation of a structure capable of establishing protein interactions. The central region of the LRR17 protein showed similarity with the carboxyl-terminal portion of the NOD 3 human protein. The LaLRR17 protein is secreted to the cytoplasm of L. (L.) amazonensis-infected macrophages. To characterize the function of the LRR17 protein we obtained strains of L. (L.) amazonensis expressing the LmjLRR17 gene. These mutant strains were more infective to macrophages in vitro when compared with the wild type strain. We also evaluated the role of NOD 1 and NOD 2 proteins in infections with L. (L.) amazonensis and L. (L.) major to investigate a possible role of the LRR17 protein in the interaction with these defense pathways in macrophages.

Malaria continues to be a challenging problem in the developing world, and the burden of this life threatening disease continues to be borne by young children living in Sub Saharan Africa. One of the biggest challenges to the prevention and control of this problem lies in accurately diagnosing malaria, and distinguishing it from the many other febrile illnesses which present in children in this age group. Liberia is a West African country with a high burden of malaria. Very little is known about the presentation of severe malaria in children aged 5 years old and younger in Liberia. We undertook a prospective, hospital -based study of children 5 and under presenting to JKF Medical Center, the national referral hospital, with fever and signs and symptoms consistent with malaria. The aims of our study were to determine: 1) the frequency of confirmed malaria cases, 2) the frequency of non-malaria diagnoses, 3) the prevalence of anti-malarial drug resistance mutations, 4) the presence of other life threatening etiologies of febrile illness such as S. typhii and Dengue virus and 5) immunological profiling associated with severe malaria. We analyzed clinical and laboratory data from 462 children age 5 and under who presented to the national referral hospital in Monrovia, Liberia with signs and symptoms consistent with malaria over a one year period. Key findings included determining the demographic factors most closely associated with severe malaria in this population (age > 1yr and urban environment) and those that were negatively associated with the development of severe malaria (prior episodes of malaria, use of bednets and use of anti malarial medications prior to presentation). The clinical symptoms most closely associated with severe malaria in this population were found to be headache and vomiting. We found that 33% of children admitted and treated for severe malaria did not test positive for malaria by rapid diagnostic testing (RDT) or blood smear. These children had a case fatality rate that was 5 times higher than their RDT positive counter parts. Of the RDT negative children, 2 tested positive for salmonella typhii, but were not treated for this pathogen. Upon discharge from the hospital, 11% of children had resolved their symptoms, but had not cleared their malaria parasites. These findings will help to identify the children who present with true severe malaria in Liberia. They also underscore the need to expand diagnostic capabilities to determine which other types of pathogens cause febrile illness in this population, so that adequate treatment can be extended to these patients. The immunoprofiles of these children revealed 3 IgM antibodies (AMA-1, CSP and LSA-1) that were associated with the development of severe malaria. These antibodies also appear to be associated with initial infection with malaria. Such data will help to identify antigens could be potential targets for malaria vaccines, and which can play an important role in the development of new malaria diagnostics for this population.