1 |
Caracterização de genes de virulência de Escherichia coli de adesão difusa (DAEC)Bove, Marina Heckmann 26 March 2010 (has links)
Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-03-16T19:35:34Z
No. of bitstreams: 1
2010_MarinaHeckmannBove.pdf: 14274068 bytes, checksum: 39c7fd2195ca55b34fee3168e4913b60 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-03-17T00:57:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2010_MarinaHeckmannBove.pdf: 14274068 bytes, checksum: 39c7fd2195ca55b34fee3168e4913b60 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-17T00:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2010_MarinaHeckmannBove.pdf: 14274068 bytes, checksum: 39c7fd2195ca55b34fee3168e4913b60 (MD5) / Embora as Escherichia coli de adesão difusa (DAEC) sejam classificadas como um dos seis grupos de E. coli diarreiogênicas, sua patogenicidade ainda é controversa. Diversas linhagens de bactérias intestinais, incluindo Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Shigella flexneri e Salmonella enterica, possuem em seu genoma uma ilha de patogenicidade (PAI) contendo genes que codificam um Sistema de Secreção do Tipo III (TTSS), responsável pela transferência de proteínas efetoras do citoplasma da bactéria diretamente para o citoplasma da célula hospedeira. A presença de genes TTSS é, portanto, um forte indicativo de virulência. Tendo em vista tais informações, este trabalho teve como objetivos a identificação e caracterização de potenciais genes TTSS de isolados de DAEC recuperados de crianças diarréicas. Experimentos de PCR utilizando iniciadores direcionados aos genes TTSS escD, espA, espD, espB e escF resultaram na detecção de sete prováveis genes em três isolados de DAEC. Dentre as sequências obtidas, detectou-se a presença dos genes espA, espB e escF completos em dois desses isolados de DAEC. Análises de identidade desses genes em relação aos homólogos de diversas linhagens de enteropatógenos sugerem que os isolados de DAEC são bastante heterogêneos. Além disso, as identidades dos genes TTSS de DAEC em relação aos homólogos de diferentes linhagens de E. coli enteropatogênicas e enterohemorrágicas são bastante elevadas, podendo atingir 100%. A construção de árvores filogenéticas empregando as sequências desses genes confirmou tais resultados e demonstrou que os isolados C39 e C74 são evolutivamente mais próximos entre si que em relação à DAEC C40, agrupada no mesmo clado da EPEC prototípica E2348/69. Ensaios de transcrição reversa utilizando RNA dos isolados C39 e C74 revelaram ainda que alguns dos possíveis genes consistem em genes de fato, uma vez que são transcritos sob indução. Com a finalidade de verificar a expressão dos genes TTSS de DAEC foram também realizados experimentos de microscopia eletrônica e de microscopia de força atômica, porém, as imagens obtidas por meio dessas técnicas foram inconclusivas. Conjuntamente, os resultados apresentados neste trabalho sugerem fortemente a presença de uma PAI contendo genes TTSS em DAEC, e constituem evidências a favor da patogenicidade desse grupo de E. coli. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Although diffusely adhering Escherichia coli (DAEC) are classified as one of the six pathotypes of diarrheiogenic E. coli, their pathogenicity is still controversial. Several strains of bacteria, including Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Shigella flexneri and Salmonella enterica, possess a pathogenicity island (PAI), containing genes that code for a Type III Secretion System (TTSS), dedicated to inject effector proteins directly from the bacterial cytoplasm into the host cell cytoplasm. Therefore, the presence of TTSS genes is considered a strong evidence of virulence of a given microorganism. This work describes the identification and characterization of potential TTSS genes in DAEC isolates recovered from diarrheic children. PCR experiments using primers targeted to the TTSS genes escD, espA, espD, espB and escF resulted in the detection of seven putative genes in three isolates of DAEC. Among the sequences obtained, it was possible to detect the presence of the complete espA, espB and escF genes in two of the DAEC isolates. Identity analyses of these genes with different strains suggest that DAEC isolates are quite heterogeneous. Moreover, the identities of TTSS genes of DAEC compared to enteropathogenic and enterohaemorrhagic E. coli are very high, sometimes reaching 100%. The construction of phylogenetic trees using the sequences of these genes confirmed these findings and showed that the isolates C39 and C74 are evolutionarily closer to each other than to the C40 DAEC isolate, which was grouped in the same clade of the prototypical EPEC E2348/69. Tests using reverse transcription of RNA isolated from C39 and C74 also revealed that some of the putative genes consist of true genes, since they were transcribed under induction conditions. In order to analyze the expression of TTSS genes in DAEC, electron microscopy and atomic force microscopy experiments were also carried out, however, the images obtained by these techniques were inconclusive. Together, the results obtained in this work strongly suggest the presence of a PAI containing TTSS genes in DAEC, and constitute evidence for the pathogenicity of this group of E. coli.
|
2 |
Caracterização bioquímica de uma Leucil-aminopeptidase de Trypanosoma cruzi (LAPTc)Gastardelo, Thiago Santana 24 September 2010 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:43:41Z
No. of bitstreams: 1
2010_ThiagoSantanaGastardelo.pdf: 3617049 bytes, checksum: ba7950b62a74d73fc6c8c0c9c54ba43a (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-06T13:41:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2010_ThiagoSantanaGastardelo.pdf: 3617049 bytes, checksum: ba7950b62a74d73fc6c8c0c9c54ba43a (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-06T13:41:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2010_ThiagoSantanaGastardelo.pdf: 3617049 bytes, checksum: ba7950b62a74d73fc6c8c0c9c54ba43a (MD5) / Os patógenos dependem de atividades de peptidases para desempenhar muitos processos fisiológicos, tão bem quanto interagir com seus hospedeiros, destacando peptidases de parasitos como fatores de virulência e, então, potenciais alvos de drogas. O sequenciamento do genoma do cinetoplastídeo Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, revelou 28 genes que codificam aminopeptidases putativas, dentre as quais estão três metionina-aminopeptidases, duas aspártico-aminopeptidases, duas aminopeptidases sensíveis a puromicina e três leucil-aminopeptidases da família M17. Neste estudo, uma atividade leucil-aminopeptidolítica principal foi identificada em T. cruzi usando Leu-AMC como substrato. Ela foi isolada de formas epimastigotas do parasito por um procedimento cromatográfico de dois passos e associou-se com uma única proteína hexamérica de 320 kDa como determinado por experimentos de velocidade de sedimentação e de dispersão de luz. Ligações dissulfeto intercadeias não participam da organização oligomérica da peptidase ativa. Espectrometria de massa por Peptide mass fingerprint revelou a identidade molecular da enzima como a aminopeptidase EAN97960 predita de T. cruzi, o produto do gene Tc00.1047053508799.240. Análises enzimáticas e moleculares indicaram que esta leucil-aminopeptidase de T. cruzi (LAPTc) pertence à família M17 de peptidases ou família da leucil-aminopeptidase. LAPTc tem uma forte dependência de pH neutro, é mesofílica e conserva sua forma oligomérica até 80 °C. Ao contrário, sua forma recombinante produzida em E. coli, assim como outras LAPs, é termofílica e requer pH alcalino. A atividade desta metalo-aminopeptidase é inibida por bestatina e quelantes de metais tais como 1,10-fenantrolina, é restabelecida por Zn2+, e potencializada por Mn2+ ou Ca2+. A enzima é expressa por todas as formas do T. cruzi e localiza-se no interior de vesículas no citoplasma do parasito. Uma vez que vias de aminoácidos essenciais, incluindo leucina, estão desprovidas em T. cruzi, a LAPTc poderia ter uma função no suprimento nutricional. Além disso, a atividade da peptidase também poderia ter uma função no processamento de peptídeos e proteínas. Nós postulamos que a LAPTc poderia ser um alvo potencial para o desenvolvimento de novas drogas para tratar a infecção de T. cruzi. / Pathogens depend on peptidase activities to accomplish many physiological processes, as well as to interact with their hosts, highlighting parasitic peptidases as virulence factors and, thus, potential drug targets. The kinetoplastid Trypanosoma cruzi genome sequencing, the aetiological agent of Chagas disease, has revealed 28 genes encoding putative aminopeptidases, among which there are three methionine, two aspartic, two puramycin-sensitive and three leucyl aminopeptidases of the M17 family. In this study, a major leucyl aminopeptidolytic activity was identified in the T. cruzi by using leu-AMC as substrate. It was isolated from epimastigote forms of the parasite by a two-step chromatographic procedure and associated with a single 320-kDa homohexameric protein as determined by sedimentation velocity and light scattering experiments. Interchain disulfide bonds do not take part in the oligomeric assembly of the active peptidase. Peptide mass fingerprinting revealed the molecular identity of the enzyme as the predicted T. cruzi aminopeptidase EAN97960, the product of the Tc00.1047053508799.240 gene. Molecular and enzymatic analysis indicated that this leucyl aminopeptidase of T. cruzi (LAPTc) belongs to the peptidase family M17 or leucyl aminopeptidase family. LAPTc has a strong dependence on neutral pH, is mesophilic and retains its oligomeric form up to 80 °C. Conversely, its recombinant form produced in E. coli, like other LAPs, is thermophilic and requires alkaline pH. The activity of this metalloaminopeptidase is inhibited by bestatin and metal chelants such as 1,10-phenanthroline, is restored by Zn2+, and potentiated by Mn2+ or Ca2+. The enzyme is expressed by all T. cruzi forms and localizes within vesicles in the cytoplasm of the parasite. Since biosynthetic pathways for essential amino acids, including leucine, are lacking in T. cruzi, LAPTc could have a function in nutritional supply. Furthermore, the peptidase activity could also play a role in peptide and protein processing. We postulate that the LAPTc might be a potential target for the development of new drugs to treat T. cruzi infection.
|
3 |
Contribuição ao estudo da patogenia de uma genodermatose mecanobolhosa em búfalos Murrah /Fernandes, Cristina Gevehr. January 2001 (has links)
Orientador: Viciany Erique Fabris / Resumo: Realizou-se o estudo da patogenia de uma genodermatose mecanobolhosa que acomete búfalos Murrah. Para tal, 5 amostras de pele (íntegra, submetida a 3 graus diferentes de lesão e pele cicatrizada) de cada um dos 5 animais experimentais (4 do rebanho experimental/EMBRAPA-CPACT para obtenção de doentes e um de outro rebanho). As amostras foram destinadas a estudos de Imunofluorescência Direta para a pesquisa das frações do complemento e de auto-anticorpos, de Imuno-histoquímica para desmoplaquinas I e II e de Microscopia Eletrônica de Transmissão. A imunofluorescência foi negativa para frações C1 e C3 do complemento e para IgG nas peles dos búfalos doentes e nos controles negativos. As desmoplaquinas I e II apresentaram marcação idêntica nos doentes e controles. Na Microscopia Eletrônica verificou-se que a perda da adesão célula-célula é o evento primário na doença e que as alterações nos complexos desmossomos-tonofilamentos são conseqüência do primeiro. Os resultados desse trabalho permitem então concluir que a Genodermatose Mecanobolhosa dos Búfalos Murrah não tem caráter auto-imune e é uma doença dos desmossomos, que se deve provavelmente a alterações na estrutura e/ou estabilidade e funcionamento das caderinas desmossômicas e não a defeitos nas proteínas da placa do desmossomo. / Abstract: The pathogenesis of a Mechanobullous Genodermatosis of Murrah Water Buffalos was studied. Five skin samples (undamaged, mild to severe injured and healed skin) from each one of five animals (4 from an EMBRAPA-CPACT experimental herd and 1 from another one) were collected. In these samples were performed tests of direct immunofluorescence to C1 and C3 complement fractions and IgG autoantibody, of desmoplakin I/II immunohistochemistry and of transmission electron microscopy. The immunofluorescence was negative to C1, C3 and IgG autoantibodies in skin of affected and normal water buffalo. Desmoplakin I/II immunostaining was similar in skin of affected and health. Electron microscopy revealed that the loss of cell-cell adhesion was a primary event in this disease. Disruption of tonofilaments-desmosomes complexes was consequence of the former lesion. With these results was possible to conclude that the Mechanobullous Genodermatosis of Murrah Water Buffalos is not an autoimmune disease. Desmossomos are the key-point in this illness that occur, probably, due to defects on stability, structure or function of desmosomal cadherins and not owing to alterations in desmosomal plaque proteins. / Doutor
|
4 |
Avaliação Fenótipica dos Linfócitos nos diferentes graus de fibrose periportal secundária a esquistossomose mansoni Salvador – BABarreto, Andréia de Sousa Rocha 22 September 2013 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T20:35:20Z
No. of bitstreams: 1
Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES. / A esquistossomose assume o segundo lugar em importância clínica e epidemiológica dentre as doenças parasitárias no mundo. A resposta imune do hospedeiro é considerada essencial na proteção e na patogênese da doença. A fase crônica é caracterizada pela produção de citocinas Th2, sendo as mesmas associadas ao desenvolvimento de fibrose periportal. Pouco se sabe sobre o fenotipo e o grau de ativação dos diferentes subtipos de células T no processo de fibrose. Objetivo: avaliar o fenótipo e o grau de ativação dos linfócitos T em pacientes esquistossomóticos com fibrose periportal. Método: Estudo de corte transversal, realizado no povoado de Água Preta, Gandu-Bahia, incluindo 37 indivíduos com fibrose periportal determinado por ultrassonografia. Quinze deles apresentavam fibrose incipiente, sete apresentavam fibrose moderada a grave e quinze não apresentavam fibrose. Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas por gradiente de Ficcol-hypaque e a frequência de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e a expressão dos marcadores de superfície CD28, CD69, CD25 e CTLA-4 foram determinadas por citometria de fluxo. Resultados: Não houve diferença significativa na frequência das células TCD4+ entre os pacientes com diferentes graus de fibrose periportal, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada e grave apresentaram uma frequência menor de células TCD8+, comparados aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de células TCD8+CD28+, bem como de células TCD4+CD69+ foi maior no grupo de pacientes com fibrose incipiente, em comparação com aqueles sem fibrose. Em relação à frequência das células TCD4+CD25Low, não houve diferença significativa entre os grupos de pacientes, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada a grave apresentaram uma menor frequência de células TCD4+CD25High comparados àqueles sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de linfócitos TCD4+CTLA-4+ em indivíduos com fibrose moderada a grave foi também menor em relação aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Conclusão: A alta frequência de células T ativadas nos pacientes com fibrose indica que estas células devem participar do processo de formação da fibrose periportal. Adicionalmente, a menor frequência de células T com o perfil regulatório nos pacientes com fibrose moderada a grave reforça a hipótese de uma falta de regulação da resposta imune nestes pacientes. / Salvador
|
5 |
Caracterização do papel do sistema de secreção do tipo VI bacteriano sobre a resposta imunológica inata de células de mamíferos infectados por Escherichia coliAlmeida, Raquel das Neves 22 February 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-04-12T18:40:09Z
No. of bitstreams: 1
2016_RaqueldasNevesAlmeida.pdf: 5871531 bytes, checksum: 817a3eeba4a2d271c0ed8541f9fac71c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-19T21:34:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2016_RaqueldasNevesAlmeida.pdf: 5871531 bytes, checksum: 817a3eeba4a2d271c0ed8541f9fac71c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-19T21:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2016_RaqueldasNevesAlmeida.pdf: 5871531 bytes, checksum: 817a3eeba4a2d271c0ed8541f9fac71c (MD5) / Escherichia coli é uma bactéria gram-negativa, que apresenta uma alta diversidade genética e fenotípica. Muitas linhagens de E. coli são inofensivas, mas algumas apresentam fatores de patogenicidade. Muitos produtos, estruturas e propriedades bacterianas podem ser utilizadas para evadir as defesas do hospedeiro através de sistemas de secreção. O sistema de secreção de tipo VI (SST6) é considerado como um potencial fator de virulência que tem a capacidade de translocar substratos efetores para o interior de vários tipos de células, tanto procarióticas quanto eucarióticas. O SST6 tem sido descrito como uma importante maquinaria celular envolvido principalmente na competição entre células procarióticas. No entanto, o papel do SST6 na imunidade da célula hospedeira eucariótica é pouco compreendida. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar o papel do SST6 bacteriano na apresentação de antígenos e sobre a indução da ativação da resposta inflamatória em células de mamíferos infectados por E. coli. Nós avaliamos a modulação de alguns mecanismos da imunidade inata durante a infecção causada pela bactéria E coli SEPT362 e a linhagem mutante para o gene IcmF. Aqui demonstramos que SST6 beneficia a E. coli, promovendo sua sobrevivência no interior das células do hospedeiro participando da adesão, internalização e viabilidade da bactéria no interior de macrófagos. Nossos resultados mostraram que E. coli selvagem inibe a expressão das moléculas CD1 dos grupos I e II e consequentemente, a apresentação de antígenos lipídicos. Diferentemente, a linhagem mutante para IcmF desencadeou uma regulação positiva dessas moléculas, mostrando a participação do SST6 nesse processo. Além disso, SST6 está associada à inibição da expressão de moléculas de MHC II, indicando provável bloqueio na apresentação de antígenos peptídicos e uma possível forma de escape imunológico pelo patógeno. Ademais, os nossos resultados mostraram que, SST6 participa na modulação negativa da expressão de moléculas co-estimulatórias CD40 e CD80 em macrófagos. Também verificamos que, E. coli SEPT362 induz a expressão aumentada do receptor nuclear PPARɣ dependente de SST6 em macrófagos e não induz a translocação do fator de transcrição NF- kB durante a infecção. A infecção por E. coli também induziu o aumento da biogênese de corpúsculos lipídicos de forma dependente de SST6. Nós identificamos que SST6 participa na redução da viabilidade das células de macrófagos, recrutamento de macrófagos para a cavidade peritoneal e favorece o estabelecimento do patógeno no fígado. Finalmente, observamos que SST6 participa na indução da secreção de óxido nítrico e a da citocina IL-6 em macrófagos, no entanto, a regulação positiva da secreção de IL-10 é independente do SST6. Todos estes resultados mostram um novo papel para o papel do SST6 na imunidade inata dos hospedeiros e no progresso da patogênese. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Escherichia coli i¬¬s Gram-negative bacteria that exhibit a high genetic and phenotypic diversity. Many products, structures and bacterial properties can be used to overcome host defenses, mainly through a mechanism mediated by secretion systems. The type VI secretion system (T6SS) is considered a potential virulence factor capable of translocating substrate effectors into largest cell types, both prokaryotic and eukaryotic cells. T6SS has been described as important cell machinery involved mainly in competition among prokaryotic cells. However, the role of T6SS in eukaryotic host cell immunity is poorly understood. Therefore, the aim of this study was investigate the role of bacterial T6SS on the antigen presentation and modulation of inflammatory response in mammalian cells infected by E. coli. We evaluated the modulation of different mechanisms involved in innate immune during the infection caused by E. coli wild type strain (SEPT362) and the knockout strains IcmF-deficient (delta IcmF). Here we demonstrate that, T6SS is beneficial to survival advantage of E. coli into host cells, since it participates in adherence, internalization and viability of E. coli bacteria within macrophages. Our results showed that E. coli wild type inhibits the expression of CD1 group I and group II molecules, and consequently the lipids antigens presentation. In contrast, the knockout strain delta IcmF triggered an upregulation of these molecules, showing the participation of T6SS in this process. Moreover, T6SS is associated with inhibition of expression of MHC II molecules, indicating participation in peptide antigen presentation and a possible form of immune escape by the pathogen. Furthermore, our results showed that T6SS participates in the modulation of expression of co-stimulatory molecules CD40 and CD80 on macrophages. In addition, we also found that E. coli SEPT362 induces an increased expression of the nuclear receptor PPARɣ in macrophage dependent of T6SS and did not induce the translocation of the transcription factor NF-kB during the infection. The infection by E. coli SEPT362 also induced a T6SS dependent increase of lipid droplets biogenesis. Moreover, we identified that T6SS participates in the reduction of macrophage cell viability, macrophages recruitment to mice peritoneal cavity and establishment of the pathogen in the liver. Finally we observed that T6SS participates in the induction of secretion of nitric oxide and IL-6 cytokine in macrophage, however the upregulation of IL-10 secretion is T6SS independent. Taken together, our results present a new T6SS role in innate immune host response and progress of E. coli pathogenesis.
|
6 |
Alterações da estrutura e função respiratórias durante a vigília e o sono na agromegaliaRodrigues, Marcelo Palmeira January 2006 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2009-11-06T09:47:13Z
No. of bitstreams: 1
2006_Marcelo Palmeira Rodrigues.pdf: 1231857 bytes, checksum: dea0cbcc1a7e28555156aca517017d4b (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-27T12:39:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2006_Marcelo Palmeira Rodrigues.pdf: 1231857 bytes, checksum: dea0cbcc1a7e28555156aca517017d4b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-27T12:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2006_Marcelo Palmeira Rodrigues.pdf: 1231857 bytes, checksum: dea0cbcc1a7e28555156aca517017d4b (MD5)
Previous issue date: 2006 / Introdução: Pacientes com acromegalia apresentam índice de mortalidade respiratória mais elevados que os encontrados na população. A hipoxemia secundária a apnéia do sono é comumente encontrada na acromegalia e parece ser a alteração sobre a qual se estabelece considerável morbidade e mortalidade. Este estudo pretende reconhecer sua presença a partir de dados clínicos, avaliar o peso relativo de fatores patogênicos na sua determinação e observar possíveis alterações da estrutura pulmonar, relacionando-as a testes funcionais respiratórios. Métodos: Foram estudados transversalmente 36 pacientes com acromegalia, os quais foram submetidos a oximetria durante o sono e avaliados quanto à presença de roncos, a medida do índice de massa corporal (IMC), da circunferência do pescoço, da sonolência pela escala de Epworth. A hipoxemia durante o sono foi definida como mais de 5 episódios de dessaturação por hora. Também foram submetidos à tomografia do canal rinolaríngeo e do tórax, oximetria de esforço, espirometria e medidas dos volumes pulmonares, capacidade de difusão pelo monóxido de carbono (DLCO) e pressões inspiratórias e expiratórias máximas. Foi constituído um grupo controle de 24 pacientes para comparações de achados na tomografia de tórax. Dosagens de GH e IGF-I e valores de ULNV foram obtidos de todos os pacientes. O índice de parâmetros lineares (IPL) foi criado para expressar o conjunto de anormalidades do aspecto crânio-facial. Foi construído um modelo de regressão logística para predição de hipoxemia durante o sono com variáveis indicadoras de obesidade, anormalidade crânio facial e de alteração hormonal, sendo seus coeficientes padronizados para observação de suas magnitudes relativas frente ao desfecho. Resultados: A sensibilidade e especificidade para predizer hipoxemia durante o sono foram respectivamente: IMC > 28,5 Kg/m2 (71,4% e 60%); circunferência do pescoço >44 cm (28,6% e 95%); Epworth > 10 pontos (42,9% e 70%); roncos (92,9% e 35%). Se presente circunferência do pescoço maior que 44 cm, a probabilidade de hipoxemia aumenta de 41% (pré-teste) para 80% (pós-teste). Se ausente este dado, a presença de dois ou três dos demais (ronco, Epworth > 10, IMC > 28,5 Kg/m2) eleva a probabilidade pósteste para 62%, enquanto a presença de no máximo um deles é capaz de reduzir para 8%. O modelo construído se mostrou significativo (p<0,01) e compreendeu as variáveis sexo, idade, IPL, IMC e ULNV. Na ausência das variáveis idade e sexo, a razão de chances do IPL (1,60) se mostrou pouco superior ao IMC (1,49) e a ULNV (1,40). Quando os dados foram controlados pela idade, a ULNV apresentou pouca alteração (1,49), porém o IPL (1,21) diminuiu muito e o IMC (2,18) aumentou muito. O peso relativo do IPL foi dependente da idade. A variável sexo não introduziu alterações de relevância nas demais. Comparado ao controle, não houve achados à tomografia em proporção significativa. Sete pacientes (21%) apresentaram hipoxemia, dos quais 6 apresentavam outras doenças pulmonares, 8 (22%) apresentaram distúrbio ventilatório, 5 dos quais com diagnósticos de outras doenças, 3 (8%) redução de pressão inspiratória e 5 (14%) de pressão expiratória máxima. Todos apresentaram DLCO normal Conclusões: Os achados clínicos avaliados permitem com alta probabilidade predizer ou não hipoxemia durante o sono na acromegalia. O aspecto crânio-facial, a obesidade e as alterações hormonais contribuem em magnitude similar para a hipoxemia durante o sono. As alterações funcionais pulmonares são explicáveis em grande parte por diagnósticos alternativos, não apresentando relação plausível com o aspecto da estrutura pulmonar. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Purposes: Patients with acromegaly have increased mortality due to respiratory disease when compared to whole population. Hypoxemia secondary to sleep apnea is commonly seen in patients with acromegaly, and this alteration apparently leads to considerable morbidity and mortality among such patients. This research has the objective of identifying hypoxemia based on clinical data, of knowing pathogenic factors proportion in its establishment and to realize pulmonary structure, connecting it to respiratory function tests. Methods: We conducted a cross-sectional study of 36 patients with acromegaly, all of whom were submitted to nocturnal oximetry and evaluation of snoring, as well as to the determination of body mass index (BMI) and neck circumference. In addition, daytime sleepiness was evaluated using the Epworth Sleepiness Scale (ESS). In this study, sleep hypoxemia was defined as five or more episodes of desaturation per hour. They also were submitted to an upper airway and chest computerized tomography, spirometry, lung volumes measure, oximetry during exercise, diffusion capacity (DLCO) and maximal inspiratory and expiratory pressure. A control group of 24 patients were used to compare chest tomography. Serum levels of GH, IGF-I and ULNV were obtained from all patients. An index that measure craniofacial abnormalities (CAI) was created, as well as a logistic regression model with standardized coefficients to predict hypoxemia using variables which represent obesity, craniofacial abnormalities and hormone dysfunction. Results: The sensitivity and specificity of the various parameters in predicting such hypoxemia were, respectively, as follows: snoring (92.9% and 35%); BMI > 28.5 kg/m2 (71.4% and 60%); neck circumference > 44 cm (28.6% and 95%); ESS score > 10 (42.9% and 70%). For patients with a neck circumference of more than 44 cm, the probability of sleep hypoxemia was found to increase from 41% (pre-test) to 80% (post-test). For patients with a neck circumference of less than 44 cm, positivity for two or three of the other parameters (snoring, ESS score > 10 and BMI > 28.5 kg/m2) increased the post-test probability to 62%, whereas positivity for only one (or none) reduced post-test probability to 8%. A logistic model was shown to be significant (p<0,01) and was created with age, sex, BMI, CAI and ULNV. In the absence of age and sex, the CAI odds ratio (1,60) was a bit higher than BMI (1,49) and ULNV (1,40). When the data were controlled by age, ULNV remained almost the same (1,49), but the CAI decreased (1,21) and the BMI increased (2,18). The CAI`s influence in sleeping hypoxemia was age dependent. Control by sex variable didn’t change other variables significantly. There weren’t any change in the chest tomography, when compared to control group. Seven patients (21%) showed awakening hypoxemia, although six of whom had another respiratory disease. Eight (22%) showed obstructive dysfunction, but five of whom had another respiratory disease. Three (8%) showed low inspiratory and five (14%) low maximal expiratory pressure. No one had an abnormal DLCO. Conclusions: We can conclude that the clinical parameters evaluated allowed us to predict, with considerable accuracy, whether or not sleep hypoxemia would occur in patients with acromegaly. Craniofacial abnormalities, obesity and hormone dysfunction contribute in a similar way to produce sleep hypoxemia. The majority of respiratory function disorders founded in these patients were explained by another disease than acromegaly and there isn’t any relationship with lung structure. with a neck circumference of less than 44 cm, positivity for two or three of the other parameters (snoring, ESS score > 10 and BMI > 28.5 kg/m2) increased the post-test probability to 62%, whereas positivity for only one (or none) reduced post-test probability to 8%. A logistic model was shown to be significant (p<0,01) and was created with age, sex, BMI, CAI and ULNV. In the absence of age and sex, the CAI odds ratio (1,60) was a bit higher than BMI (1,49) and ULNV (1,40). When the data were controlled by age, ULNV remained almost the same (1,49), but the CAI decreased (1,21) and the BMI increased (2,18). The CAI`s influence in sleeping hypoxemia was age dependent. Control by sex variable didn’t change other variables significantly. There weren’t any change in the chest tomography, when compared to control group. Seven patients (21%) showed awakening hypoxemia, although six of whom had another respiratory disease. Eight (22%) showed obstructive dysfunction, but five of whom had another respiratory disease. Three (8%) showed low inspiratory and five (14%) low maximal expiratory pressure. No one had an abnormal DLCO. Conclusions: We can conclude that the clinical parameters evaluated allowed us to predict, with considerable accuracy, whether or not sleep hypoxemia would occur in patients with acromegaly. Craniofacial abnormalities, obesity and hormone dysfunction contribute in a similar way to produce sleep hypoxemia. The majority of respiratory function disorders founded in these patients were explained by another disease than acromegaly and there isn’t any relationship with lung structure.
|
7 |
Avaliação do papel funcional de duas proteínas de Leptospira interrogans no processo de adesão do patógeno ao hospedeiro / Evaluation of the functional role of two Leptospira interrogans proteins in the adhesion process of the pathogen to the host.Kochi, Leandro Toshio 11 May 2018 (has links)
A leptospirose é uma zoonose de distribuição global causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. A doença possui um quadro de manifestações clínicas muito variadas em humanos, que pode apresentar febre, dores de cabeça e muscular, até um quadro clínico mais severo, conhecido como síndrome de Weil, caracterizado por hemorragias, icterícia, falência renal e hepática. Até o presente momento, os mecanismos de patogenicidade da leptospira não são totalmente claros e não existe uma vacina eficaz contra a doença. O sequenciamento de genomas de leptospiras patogênicas possibilitou a identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre cepas patogênicas, que são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade e possivelmente o desenvolvimento de uma vacina. Nesse sentido, foram selecionados por bioinformática os genes LIC11711 e LIC12587 a partir do genoma sequenciado de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, os quais codificam para duas preditas lipoproteínas hipotéticas de funções desconhecidas. Os genes foram amplificados por PCR a partir do DNA genômico da bactéria e clonados no vetor de expressão pAE. As proteínas recombinantes foram expressas em E. coli BL21 DE3 Star pLysS e purificadas por cromatografia de afinidade a metal. As proteínas recombinantes foram inoculadas em camundongos para avaliação da sua atividade imunogênica e obtenção de soros imunes. Ambas as proteínas recombinantes se mostraram reativas com anticorpos em soros de pacientes diagnosticados com a doença, apresentando uma sensibilidade maior em relação ao teste de aglutinação microscópica (MAT), e alta especificidade, diferenciando anticorpos presentes em soros de pacientes diagnosticados com outras doenças não relacionadas. Os resultados de ELISA de bactéria intacta, proteólise por proteinase K e imunofluorescência sugerem que ambas as proteínas estão localizadas na membrana externa bactéria. Com base no ensaio de conservação por western blotting, as proteínas nativas estão presentes em diferentes cepas patogênicas de Leptospira, e ausentes na espécie saprófita L. biflexa. Em ensaios de adesão in vitro, as proteínas recombinantes interagiram com os componentes humanos laminina, e-caderina, plasminogênio, fibrinogênio, fibronectina plasmática, vitronectina, C7, C8 e C9 de forma dose-dependentes, porém com valores de afinidade baixos. Estes resultados sugerem que as proteínas codificadas pelos genes LIC11711 e LIC12587 são expressas durante a patogênese e podem desempenhar múltiplas funções a partir da interação com diferentes componentes, e deste modo auxiliam nas etapas de invasão, disseminação e evasão do sistema imune, auxiliando as leptospiras no processo de infecção. / Leptospirosis is a zoonosis of global distribution caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira. The disease has a wide range of clinical manifestations in humans, which can present with fever, headaches and muscular pain, to a more severe clinical condition, known as Weil\'s syndrome, characterized by hemorrhages, jaundice, renal and hepatic failure. So far, the pathogenicity mechanisms of leptospira are not entirely clear and there is no effective vaccine against a disease. Sequencing of pathogenic leptospires genomes has enabled the identification of conserved outer membrane proteins among pathogenic strains, which are the main research focus to understand the mechanism of pathogenicity and possibly identify a vaccine candidate. In this sense, the genes LIC11711 and LIC12587 were selected from the genome sequence of Leptospira interrogans serovar Copenhageni by bioinformatics, which encode two hypothetical predicted lipoproteins of unknown functions. The genes were amplified by PCR from the genomic DNA of the bacteria and cloned into pAE expression vector. The recombinant proteins were expressed in E. coli BL21 DE3 Star pLysS and purified by metal affinity chromatography. Recombinant proteins were inoculated in mice to evaluate their immunogenic activity and to obtain immune sera. Both recombinant proteins are reactive with antibodies in sera from patients diagnosed with a disease, presenting higher sensitivity than the microscopic agglutination test (MAT), high specificity, differentiating antibodies present in sera from patients diagnosed with other non-specific diseases related. The results of intact bacterial ELISA, proteinase K proteolysis and Immunofluorescence suggest that both proteins are located in the surface of the bacteria. Based on western blotting conservation assay, the coding sequences are present in different pathogenic strains of Leptospira, and absent in the nom-pathogenic L. biflexa. In in vitro adhesion assays, recombinant proteins showed interaction with the human components laminina, e-cadherin, plasminogen, fibrinogen, plasma fibronectina, vitronectin, C7, C8 and C9, in dose-dependent manner, but with low affinity values. These results suggest that the proteins encoded by the genes LIC11711 and LIC12587 are expressed during the infection and may perform multiple tasks and thus assist in the steps of invasion, dissemination and evasion of the immune system, helping leptospires during the establishment of the disease.
|
8 |
Caracterização de duas proteínas de Leptospira interrogans na patogênese da leptospirose. / Characterization of two proteins of Leptospira interrogans in the pathogenesis of leptospirosis.Domingos, Renan Francisco 21 August 2014 (has links)
O sequenciamento da L. interrogans sorovar Copenhageni e as análises bioinformáticas permitiram a identificação de candidatos vacinais e fatores de virulência. Foram selecionados dois genes, LIC11834 e LIC12253, que foram submetidos a ensaios de presença do DNA genômico e RNA mensageiro em diferentes sorovares de Leptospira. Observamos que o gene LIC12253 foi o mais presente entre os sorovares testados. Os genes foram clonados em vetor de expressão pAE e expressos em E. coli BL21 SI. As proteínas recombinantes foram purificadas e submetidas a ensaio de dicroísmo circular, o qual confirmou que ambas as proteínas estavam estruturadas. Por meio de testes de imunogenicidade em camundongos, ambas as proteínas mostraram-se imunogênicas, apresentando altos títulos de anticorpos, porém não foram capazes de promover resposta imune celular. Em ensaios de localização das proteínas nativas podemos observar a presença destas proteínas na membrana externa de Leptospira. Ensaios de reatividade com soros de pacientes diagnosticados com leptospirose mostraram que há reconhecimento das proteínas por anticorpos presentes nesses soros, sugerindo que as proteínas são expressas durante a infecção. Em ensaios de adesão a componentes de matriz extracelular e componentes do soro e plasma humano, rLIC11834 apresentou ligação à laminina, sendo nomeada de Lsa33, além de ligação ao plasminogênio, ao C4bp e ao fibrinogênio de forma dose-dependente; rLIC12253 apresentou ligação à laminina, sendo chamada de Lsa25, e ao C4bp de forma dose-dependente. Ensaios de desafio demonstraram que as proteínas não apresentam proteção contra infecção letal em hamsters. Assim, acreditamos que estas proteínas multifuncionais possam interagir com proteínas do hospedeiro e ter participação na patogênese da doença. / The genomic sequencing and the advances of bioinformatics analysis allowed the identification of new vaccine candidates and new virulence factors. Therefore, two genes from L. interrogans serovar Copenhageni, LIC11834 and LIC12253 were selected and subjected to assays for the presence of genomic DNA and mRNA in different serovars of Leptospira. These assays found that the gene LIC12253 was the most present among the tested serovars. The genes were then cloned in the expression vector pAE and expressed in E. coli BL21 SI. The recombinant proteins were purified and subjected to circular dichroism, which confirmed that both proteins presented secondary structures. Immunogenicity tests in mice showed that both proteins are immunogenic, with high antibodies titers, but don\'t induce cellular immune response. Localization assays of the native proteins on the leptospiras demonstrated the presence of the proteins on the surface of Leptospira. Reactivity assays with sera of patients diagnosed with leptospirosis showed that the recombinant proteins could be recognized by their antibodies, suggesting that they are expressed during infection. Adhesion assays to the extracellular matrix components, human serum and plasma components, showed that the protein rLIC11834 binds to laminin and was called Lsa33. In addition, Lsa33 interacts to plasminogen, to C4bp and to fibrinogen in a dose-dependent manner. The protein rLIC12253 showed binding to laminina, named Lsa25, and to C4bp in a dose-dependent manner. Challenge assays showed that both recombinant proteins don\'t afford protection against lethal infection in hamsters. Thus, we believe that these multifunctional proteins may interact with host proteins and may play a role in leptospiral pathogenesis.
|
9 |
Desenvolvimento de um modelo experimental de infecção subcutânea por vírus oropouche em hamster / Development of an experimental hamster model of subcutaneous infection by oropouche virusRodrigues, Alcir Humberto 22 October 2004 (has links)
O vírus Oropouche pertence à família Bunyaviridae, gênero Orthobunyavirus, sorogrupo Simbu, e é segunda causa mais freqüente de arbovirose febril no Brasil. Estima-se que mais de meio milhão de casos de febre do Oropouche tenham ocorrido no Brasil nos últimos 30 anos, havendo também ocorrências no Panamá, Peru, Suriname e Trinidad. Epidemias de febre do Oropouche têm sido registradas quase que exclusivamente na Amazônia. Porém, com o aquecimento global do planeta, desmatamentos e conseqüente redistribuição de insetos vetores e animais reservatórios, há risco de disseminação de vírus Oropouche para outras regiões do Brasil e da América do Sul. A patogenia da infecção por Oropouche não é bem entendida. Modelo em roedores, usando inoculação intracerebral, tem sido descrito, mas não com uso da via subcutânea, que mais se assemelha à rota natural da infecção. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar um modelo experimental de infecção com Oropouche, usando inoculação subcutânea em hamster, a fim de contribuir para o entendimento da patogenia do mesmo. Oropouche da linhagem BeAn19991, passado em cérebro de camundongo recém-nascido, foi inoculado (106,25 TCID50/100?L) por via subcutânea na coxa de hamsters sírios com 2-3 semanas de idade. Em torno de 3 dias alguns animais desenvolveram doença com sinais clínicos brandos caracterizados por: eriçamento dos pêlos e agressividade, outros com características mais graves: perda de peso, tremores sugestivos de calafrios, letargia e paralisia. Os animais foram sacrificados 1, 3, 5, 8 e 11 dias pós-inoculação ou quando eram encontrados em estado agônico. Baço, cérebro, coração, fígado, músculo e sangue foram colhidos para titulação viral, histologia e imunohistoquímica. Infiltrado inflamatório estava presente no cérebro, principalmente em torno dos vasos, meninges e discretamente no coração. O vírus Oropouche foi detectado no tecido cerebral (107,23 TCID50/g), no fígado (106,67TCID50/g) e no sangue (106 TCID50/g). Antígeno de Oropouche foi encontrado, difusamente no fígado, associado com hepatócitos e em neurônios de diversos locais do cérebro. Este modelo reproduz uma infecção sistêmica por Oropouche e pode tornar-se útil no estudo da patogênese, bem como para testar drogas antivirais e possíveis candidatos à vacina. / Oropouche virus belongs to the family Bunyaviridae, genus Orthobunyavirus, serogroup Simbu and is the second most frequent arboviral febrile illness in Brazil. There are estimates of more than half million cases of Oropouche fever in Brazil in the past 30 years, with cases registered in Panama, Peru, Suriname and Trinidad. Oropouche fever has been registered almost exclusively in the Amazon, but with the global warming, deforestation and the consequent redistribution of vectors and reservoir animals, the risk of Oropouche virus dissemination to others areas of Brazil and South America increases. However, the pathogenesis of Oropouche infection is not well understood. Rodent models using intracerebral inoculation have been described, but no attempts to use a route that more closely resembles the natural route of infection have been published. This study was conducted to establish and characterize an experimental model of infection with Oropouche, using subcutaneous inoculation of hamsters, in order to contribute to the understanding of Oropouche pathogenesis. We have established an experimental model through subcutaneous inoculation of hamsters in order to study pathogenesis. Suckling mouse brain passaged Oropouche strain BeAn19991 was inoculated (106,25 TCID50/100?L) subcutaneously in the thigh of syrian hamsters 2-3 weeks old. Around day 3 animals developed disease characterized by lethargy, paralysis, chill-like shaking and ruffled fur. Animals were sacrificed on days 1, 3, 5, 8 and 11 post-inoculation or whenever found to be agonic. Brain, heart, liver, spleen, muscle and blood were harvested for virus titration, histology and Oropouche immunohistochemistry. Inflammatory infiltrate was present in the brain, mostly as perivascular cuffs, meninges and some in the heart. Oropouche titers were 107,23 TCID50/g of tissue in brain 106,67 TCID50/g in liver, and 106 TCID50/g in blood. Oropouche antigen was detected diffusely distributed in the liver in association with hepatocytes, and in neurons in several regions of the brain. This model reproduces systemic Oropouche infection and may become useful in pathogenesis studies, as well as to test antiviral drugs and possible vaccine candidates.
|
10 |
Papel de quimiocinas e moléculas de adesão na patogênese da infecção pelo HTLV-1Silva, Mariele Guerra Lemos da January 2016 (has links)
Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T18:26:27Z
No. of bitstreams: 1
DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:13:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1
DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1
DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Capes / O vírus linfotrópico de células T humana tipo 1 (HTLV-1) é encontrado no mundo todo. A infecção pelo HTLV-1 é caracterizada por uma resposta imune exacerbada, com produção espontânea de IFN- e TNF. Estas citocinas são responsáveis por aumentar a expressão de quimiocinas e moléculas de adesão e facilitar a entrada de linfócitos ativados para o sistema nervoso central (SNC). O objetivo deste estudo foi avaliar o papel de quimiocinas e moléculas de adesão na patogênese da infecção pelo HTLV-1. Quimiocinas pró-inflamatórias (CXCL9 e CXCL10) e moléculas de adesão solúveis (sICAM-1 e sVCAM-1) foram determinadas por ELISA, no soro e líquor de diferentes grupos de indivíduos infectados pelo HTLV-1 (portador assintomático, indivíduos com bexiga hiperativa e HAM/TSP). Frequência e mediana de intensidade de fluorescência (MIF) de linfócitos e de monócitos expressando ligantes das moléculas de adesão (CD11a e CD49d) e receptor de quimiocinas (CXCR3) foram analisadas por citometria de fluxo. CXCL9 e CXCL10 estavam mais elevados tanto no soro quanto no líquor dos pacientes com HAM/TSP (p>0,05). As moléculas de adesão não diferiram entre os grupos, apesar da tendência de maior produção de sVCAM-1 na HAM/TSP. sVCAM-1 correlacionou-se positivamente com quimiocinas no soro dos indivíduos infectados pelo HTLV-1 (p>0,05). De modo geral, a MIF de células CD4+, CD8+ e CD14+ expressando CD11a e CXCR3 foi menor na HAM/TSP. Estes achados confirmam a participação das quimiocinas na migração das células infectadas pelo HTLV-1 para o SNC e sugerem, porém não são suficientes para atestar a participação das moléculas de adesão na patogênese da HAM/TSP.
|
Page generated in 0.0572 seconds