Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-05T18:34:39Z No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T18:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Estudos anteriores de nosso grupo demonstraram que o Mycobacterium leprae induz apoptose de monócitos humanos por uma via dependente de proteasoma. No presente trabalho nós demonstramos que o M. leprae induz a produção de TNFa e induz apoptose de monócitos por uma via dependente de NF-?B. A talidomida, utilizada no tratamento do Eritema Nodoso Hansênico, possui atividade anti-TNF por um mecanismo ainda não completamente elucidado. Nós demonstramos que a Talidomida suprime a produção de TNF por uma via dependente de p38 MAPK e NF-?B. O papel da remoção de células apoptóticas também foi avaliado. Apesar de macrófagos ativados pela via alternativa ou Mf2 possuírem maior capacidade de associação com o M. leprae quando comparados a macrófagos ativados pela via clássica ou Mf1, o estímulo com células apoptóticas levou ao aumento na associação do M. leprae em macrófagos Mf1, mas não Mf2. Esse aumento na associação do M. leprae com macrófagos Mf1 estimulados com células apoptóticas está associado ao aumento da expressão gênica de COX-2 e elevados níveis de PGE2, IL-10 e TGF-ß, com redução dos níveis de IL-6 e IL-15. Em conjunto, tais dados sugerem que na presença de células apoptóticas, macrófagos pró-inflamatórios estimulados com o M. leprae, desviam para um fenótipo antiinflamatório o que pode explicar o estabelecimento da infecção em pacientes com a forma tuberculóide da doença / Previous studies o four group revealed that Mycobacterium. leprae induces apoptosis of human monocytes by a proteasome-dependent pathway. In the present work we demonstrated that M. leprae induces TNFa and apoptosis by a NF-?B-dependent pathway. Thalidomide, drug used in treatment of erithema nodosum leprosum, has been described by its anti-TNFa activity although the mechanism is not fully understood. We demonstrated that thalidomide suppress TNFa production by p38 MAPK and NF-?B – dependent pathways. The role of apoptotic cell clearance was also evaluated. Although macrophages activated by alternative pathway or Mf2 have increased phagocytic activity when compared to macrophages activated by classical pathway or Mf1, apoptotic cell uptake increased the association of M. leprae with Mf1 but not Mf2. The increase in M. leprae association with apoptotic cell stimulated Mf1 is associated with the increased COX-2 gene expression and higher levels of PGE2, IL-10 and TGF-ß, with reduced levels of IL-6 and IL-15. Together, these data suggest that in the presence of apoptotic cells, M. leprae stimulated pro-inflammatory macrophages deviates to an anti-inflammatory phenotype that could explain the establishment of M. leprae infection in patients with the tuberculoid form of the disease

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-26T14:15:02Z No. of bitstreams: 1 Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-26T14:16:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T14:16:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leptospirose é a zoonose mais disseminada mundialmente por infectar diversas espécies diferentes de animais mamíferos. Apresenta 22 espécies identificadas, sendo dez patogênicas, cinco intermediarias e sete saprofiticas, além de apresentar mais de 250 sorovares diferentes. Em Salvador, Leptospira interrogans sorovar Copenhageni é a causadora da epidemia urbana na cidade e apresenta ratos como seu hospedeiro reservatório. As formas clínicas da leptospirose podem variar de assintomática a formas graves. As manifestações clínicas mais graves envolve o desenvolvimento da síndrome Hemorrágica pulmonar severa, e óbito do paciente. Estudos para entender as diferenças genéticas entre as diferentes espécies e sorovares é de extrema importância para identificar fatores de virulência da bactéria, genes que possam está associado aos diferentes formas clinicas, e sua capacidade de se adaptar aos diferentes ambientes. Neste trabalho foi estudado o genoma de dois importantes serovares de L. interrogans, o sorovar Copenhageni e o serovar Icterohaemorrhagiae, e suas diferenças genéticas e associação com dados clínicos e epidemiológicos. Um total de 141 isolados tiveram seus genomas sequenciados. Foi construindo e validado um pipeline para a o mapeamento e construção dos genomas e a identificação de SNPs e Indels. Os resultados encontrados demostraram um alta similaridade entre os isolados dos dois serovares, de diferentes regiões geográficas e isolados em anos diferentes. As sequências deste estudo se mostram conservadas ao longo do tempo sem apresentar nenhuma mutação associada as diferentes forma clínicas da doença, indicando que outros fatores, tais como os do hospedeiro, podem estar envolvidos na diversidade de sintomatologia. Na comparação do genoma dos isolados de L. interrogans, sorovar Copenhageni e sorovar Icterohaemorrhagiae foi identificado apenas uma mutação que as difere geneticamente. Essa mutação está presente no gene LIC12008 que produz uma proteína hipotética, e que a sua avaliação in silico demostrou estar envolvida na síntese de LPS, justificando assim as diferenças encontradas no teste serológico. Além disto, também foram avaliadas as diferenças entre 20 das 22 espécies de Leptospira, para identificar possíveis fatores de virulência e genes que possam estar envolvidos na patogênese e adaptação da bactéria ao ambiente. Estudos de fatores genéticos da Leptospira pode auxiliar ao manejo da doença, com uma melhor assistência e terapia para os pacientes, desenvolvimento de vacinas e diagnostico desta doença negligenciada. / There are 22 different species of Leptospira spp. in which 10 are pathogenic, 5 intermediate and 7 saprophytic species. In Salvador the Leptospira interrogans sorovar Copenhageni is the main serovar detected, responsible for the urban epidemics, and has rats as their main host. The clinical manifestations of leptospirosis can vary from asymptomatic form to severe disease like pulmonary hemorrhagic syndrome, and death. Studies to understand de genetic differences among the species and serovars are of great importance to identify virulence factors, genes that could be related to the different clinical manifestations and its capacity to adapt in different environments. Here, the genome of two epidemiologically important serovar of the L. interrogans, the serovar Copenhageni and serovar Icterohaemorrhagiae, and their genetic differences and the association of these differences with epidemiological and clinical data were studied. A total of 141 strains were genome sequenced. A pipeline for the genome mapping and variant call were constructed and validated. The results showed a high similarity among the strains from both serovars from different geographic locations and year of isolation. The sequences from this study showed to be very conserved, not presenting any mutation associated with the different clinical outcome, indicating that other factors, like host factors, could be related to the diversity of clinical outcome. Only one genetic mutation was detected in the genome comparison of the strains belonging to the L. interrogans sorovar Copenhageni and sorovar Icterohaemorrhagiae. This mutation was found in the gene LIC12008 that produce a hypothetical protein, in which its in silico analysis reviled that this protein could be related to the LPS synthesis, justifying the serological test differences between the two serovar. Besides that, the differences between 20 of the 22 species of Leptospira identified were evaluated to detect possibly virulence factors and genes that could be involved in the pathogenesis and adaptation. Studies of the Leptospira virulence factors can give support to the disease management, giving a better assistance and treatment to the patients and developing vaccines and better diagnostic for the neglected disease

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-24Bitstream added on 2014-06-13T19:23:18Z : No. of bitstreams: 1 schmitt_jv_dr_botfm.pdf: 670803 bytes, checksum: e064beb61d3329464bdd135484a6b5a3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Pro-Hansen / Queratoses actínicas são neoplasias formadas por proliferações atípicas de queratinócitos com potencial de transformação em carcinoma espinocelular que se desenvolvem em áreas fotoexpostas da pele, são induzidas principalmente pela radiação ultravioleta e constituem marcadores de exposição solar crônica. Danos nas vias de apoptose favorecem a proliferação celular e manutenção das lesões. Dentre as diversas vias de sinalização celular, moléculas envolvidas na resposta inflamatória mostraram-se relacionadas à carcinogênese. Além disso, estudos clínicos e laboratoriais verificaram efeito preventivo de anti-inflamatórios não hormonais no desenvolvimento de várias neoplasias. Com o objetivo de avaliar vias de proliferação, apoptose e inflamação, além da influência do uso regular de ácido acetilsalicílico no desenvolvimento de queratoses actínicas, este estudo foi composto de dois experimentos. O primeiro experimento avaliou a expressão de marcadores de proliferação, resistência a apoptose e inflamação nas lesões de queratoses actínicas, pele normal fotoexposta e fotoprotegida. Obtiveram-se fragmentos de queratoses actínicas, pele fotoexposta perilesional, e fotoprotegida axilar. As amostras foram submetidas à marcação imunoistoquímica para p53, survivina, Ki-67, p105/p50 e COX-2. Marcações nucleares foram mensuradas pelo HSCORE e as citoplasmáticas pela fração de campos marcados. O grau de atipia dos foi estimado pela classificação de neoplasia intraepitelial queratinocítica (NIQ). Foram avaliadas 38 queratoses actínicas em 13 pacientes. Os marcadores Ki-67, p53, COX-2 e survivina foram menos expressos na pele normal fotoprotegida em comparação com as lesões de QAs (p<0,05). Evidenciou-se expressão de... / Actinic keratosis are benign skin neoplasms constituted by atypical proliferation of keratinocytes that may evolve to squamous cell carcinoma. They rise at skin photoexposed areas, are induced mainly by ultraviolet radiation and depicit cutaneous markers of chronic sunlight exposition. Occurs specially in adults and elders, fair skinned individuals, and accounts for the fourth common diagnosis in dermatologic consultations in Brazil. Damage of apoptosis mechanisms at photoexposed epithelium favors cellular proliferation and the surveillance of the lesions. In this revision, authors assemble the main epidemiological data regarding this disease and suggest that strategies of identification of risky phenotypes, early diagnosis, adequate treatment, clinical follow-up, stimulus to autoexamination, photoeducation and photoprotection should be promoted with the aim to avoid malignancy development and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:44:12Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cg_dr_botfm.pdf: 3174897 bytes, checksum: e5fb345fc410749c0ccd81aa96d672fb (MD5) / Realizou-se o estudo da patogenia de uma genodermatose mecanobolhosa que acomete búfalos Murrah. Para tal, 5 amostras de pele (íntegra, submetida a 3 graus diferentes de lesão e pele cicatrizada) de cada um dos 5 animais experimentais (4 do rebanho experimental/EMBRAPA-CPACT para obtenção de doentes e um de outro rebanho). As amostras foram destinadas a estudos de Imunofluorescência Direta para a pesquisa das frações do complemento e de auto-anticorpos, de Imuno-histoquímica para desmoplaquinas I e II e de Microscopia Eletrônica de Transmissão. A imunofluorescência foi negativa para frações C1 e C3 do complemento e para IgG nas peles dos búfalos doentes e nos controles negativos. As desmoplaquinas I e II apresentaram marcação idêntica nos doentes e controles. Na Microscopia Eletrônica verificou-se que a perda da adesão célula-célula é o evento primário na doença e que as alterações nos complexos desmossomos-tonofilamentos são conseqüência do primeiro. Os resultados desse trabalho permitem então concluir que a Genodermatose Mecanobolhosa dos Búfalos Murrah não tem caráter auto-imune e é uma doença dos desmossomos, que se deve provavelmente a alterações na estrutura e/ou estabilidade e funcionamento das caderinas desmossômicas e não a defeitos nas proteínas da placa do desmossomo. / The pathogenesis of a Mechanobullous Genodermatosis of Murrah Water Buffalos was studied. Five skin samples (undamaged, mild to severe injured and healed skin) from each one of five animals (4 from an EMBRAPA-CPACT experimental herd and 1 from another one) were collected. In these samples were performed tests of direct immunofluorescence to C1 and C3 complement fractions and IgG autoantibody, of desmoplakin I/II immunohistochemistry and of transmission electron microscopy. The immunofluorescence was negative to C1, C3 and IgG autoantibodies in skin of affected and normal water buffalo. Desmoplakin I/II immunostaining was similar in skin of affected and health. Electron microscopy revealed that the loss of cell-cell adhesion was a primary event in this disease. Disruption of tonofilaments-desmosomes complexes was consequence of the former lesion. With these results was possible to conclude that the Mechanobullous Genodermatosis of Murrah Water Buffalos is not an autoimmune disease. Desmossomos are the key-point in this illness that occur, probably, due to defects on stability, structure or function of desmosomal cadherins and not owing to alterations in desmosomal plaque proteins.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-22T14:19:17Z No. of bitstreams: 1 2012_ AlexAntoniodeOliveira.pdf: 2099790 bytes, checksum: 04fa8deaf0ee58665be9bcae03d0e824 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T13:36:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ AlexAntoniodeOliveira.pdf: 2099790 bytes, checksum: 04fa8deaf0ee58665be9bcae03d0e824 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T13:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ AlexAntoniodeOliveira.pdf: 2099790 bytes, checksum: 04fa8deaf0ee58665be9bcae03d0e824 (MD5) / O desenvolvimento de resistência de organismos patogênicos (vírus, fungos, bactérias e protozoários) aos fármacos atuais tem estimulado a busca e o desenvolvimento constante por novos fármacos. Uma estratégia possível de elaboração desses compostos tem sido o procedimento de hibridização molecular que busca reunir em um mesmo composto, através de formação de ligações moleculares, diferentes grupos farmacofóricos, com a perspectiva de potencializar suas atividades. No presente trabalho, a hibridização molecular surge como estratégia de agregar em um mesmo composto três importantes núcleos farmacofóricos: quinônico, triazólico e chalcônico. Estes núcleos em separado apresentam atividades biológicas no controle de bactérias, fungos, vírus e protozoários. A literatura não apresenta até o momento relato dos três núcleos em um mesmo composto, podendo-se encontrar dois destes núcleos unidos. O procedimento experimental se pautou em agregar gradativamente cada núcleo, iniciando a síntese com o núcleo naftoquinônico, em seguida o triazólico, permitindo a geração de compostos com estes dois núcleos farmacofóricos em três etapas. A inclusão do terceiro núcleo, chalcônico, inicialmente proposta, ainda não foi alcançada pelas rotas sintéticas investigadas. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The development of resistance of pathogenic organisms (viruses, fungi, bacteria and protozoa) to current drugs has stimulated the search and constant development of new drugs. A possible strategy for preparation of these compounds has been the molecular hybridization protocol that seeks to gather in the same compound, by formation of molecular bonds, different pharmacophoric groups, with the aim of enhancing their activities. In this study, the molecular hybridization appears as a strategy to aggregate in the same compound three important nuclei pharmacophoric: quinone, triazole and chalcone. These cores have separate biological activities in the control of bacteria, fungi, viruses and protozoa. There are no reports in the literature of these three cores within the same compound. One can find two of them together. The experimental procedure is guided to gradually adding each core by starting the synthesis with the naphthoquinone core then the triazole, allowing the generation of compounds with the two pharmacophoric cores in three steps. The inclusion of the third core, chalcona, initially proposed, has not yet been reached by the synthetic rontes investigated

Orientador: Hélio Amante Miot / Banca: Mauro Y. Enokihara / Banca: Hamilton Ometto Stolf / Banca: Ediléia Bagatin / Banca: Sílvio Alencar Marques / Resumo: Queratoses actínicas são neoplasias formadas por proliferações atípicas de queratinócitos com potencial de transformação em carcinoma espinocelular que se desenvolvem em áreas fotoexpostas da pele, são induzidas principalmente pela radiação ultravioleta e constituem marcadores de exposição solar crônica. Danos nas vias de apoptose favorecem a proliferação celular e manutenção das lesões. Dentre as diversas vias de sinalização celular, moléculas envolvidas na resposta inflamatória mostraram-se relacionadas à carcinogênese. Além disso, estudos clínicos e laboratoriais verificaram efeito preventivo de anti-inflamatórios não hormonais no desenvolvimento de várias neoplasias. Com o objetivo de avaliar vias de proliferação, apoptose e inflamação, além da influência do uso regular de ácido acetilsalicílico no desenvolvimento de queratoses actínicas, este estudo foi composto de dois experimentos. O primeiro experimento avaliou a expressão de marcadores de proliferação, resistência a apoptose e inflamação nas lesões de queratoses actínicas, pele normal fotoexposta e fotoprotegida. Obtiveram-se fragmentos de queratoses actínicas, pele fotoexposta perilesional, e fotoprotegida axilar. As amostras foram submetidas à marcação imunoistoquímica para p53, survivina, Ki-67, p105/p50 e COX-2. Marcações nucleares foram mensuradas pelo HSCORE e as citoplasmáticas pela fração de campos marcados. O grau de atipia dos foi estimado pela classificação de neoplasia intraepitelial queratinocítica (NIQ). Foram avaliadas 38 queratoses actínicas em 13 pacientes. Os marcadores Ki-67, p53, COX-2 e survivina foram menos expressos na pele normal fotoprotegida em comparação com as lesões de QAs (p<0,05). Evidenciou-se expressão de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Actinic keratosis are benign skin neoplasms constituted by atypical proliferation of keratinocytes that may evolve to squamous cell carcinoma. They rise at skin photoexposed areas, are induced mainly by ultraviolet radiation and depicit cutaneous markers of chronic sunlight exposition. Occurs specially in adults and elders, fair skinned individuals, and accounts for the fourth common diagnosis in dermatologic consultations in Brazil. Damage of apoptosis mechanisms at photoexposed epithelium favors cellular proliferation and the surveillance of the lesions. In this revision, authors assemble the main epidemiological data regarding this disease and suggest that strategies of identification of risky phenotypes, early diagnosis, adequate treatment, clinical follow-up, stimulus to autoexamination, photoeducation and photoprotection should be promoted with the aim to avoid malignancy development and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Adolfo José da Mota / Banca: Ricardo Sérgio Couto de Almeida / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Resumo: Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Abstract: Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / Doutor

O vírus Oropouche pertence à família Bunyaviridae, gênero Orthobunyavirus, sorogrupo Simbu, e é segunda causa mais freqüente de arbovirose febril no Brasil. Estima-se que mais de meio milhão de casos de febre do Oropouche tenham ocorrido no Brasil nos últimos 30 anos, havendo também ocorrências no Panamá, Peru, Suriname e Trinidad. Epidemias de febre do Oropouche têm sido registradas quase que exclusivamente na Amazônia. Porém, com o aquecimento global do planeta, desmatamentos e conseqüente redistribuição de insetos vetores e animais reservatórios, há risco de disseminação de vírus Oropouche para outras regiões do Brasil e da América do Sul. A patogenia da infecção por Oropouche não é bem entendida. Modelo em roedores, usando inoculação intracerebral, tem sido descrito, mas não com uso da via subcutânea, que mais se assemelha à rota natural da infecção. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar um modelo experimental de infecção com Oropouche, usando inoculação subcutânea em hamster, a fim de contribuir para o entendimento da patogenia do mesmo. Oropouche da linhagem BeAn19991, passado em cérebro de camundongo recém-nascido, foi inoculado (106,25 TCID50/100?L) por via subcutânea na coxa de hamsters sírios com 2-3 semanas de idade. Em torno de 3 dias alguns animais desenvolveram doença com sinais clínicos brandos caracterizados por: eriçamento dos pêlos e agressividade, outros com características mais graves: perda de peso, tremores sugestivos de calafrios, letargia e paralisia. Os animais foram sacrificados 1, 3, 5, 8 e 11 dias pós-inoculação ou quando eram encontrados em estado agônico. Baço, cérebro, coração, fígado, músculo e sangue foram colhidos para titulação viral, histologia e imunohistoquímica. Infiltrado inflamatório estava presente no cérebro, principalmente em torno dos vasos, meninges e discretamente no coração. O vírus Oropouche foi detectado no tecido cerebral (107,23 TCID50/g), no fígado (106,67TCID50/g) e no sangue (106 TCID50/g). Antígeno de Oropouche foi encontrado, difusamente no fígado, associado com hepatócitos e em neurônios de diversos locais do cérebro. Este modelo reproduz uma infecção sistêmica por Oropouche e pode tornar-se útil no estudo da patogênese, bem como para testar drogas antivirais e possíveis candidatos à vacina. / Oropouche virus belongs to the family Bunyaviridae, genus Orthobunyavirus, serogroup Simbu and is the second most frequent arboviral febrile illness in Brazil. There are estimates of more than half million cases of Oropouche fever in Brazil in the past 30 years, with cases registered in Panama, Peru, Suriname and Trinidad. Oropouche fever has been registered almost exclusively in the Amazon, but with the global warming, deforestation and the consequent redistribution of vectors and reservoir animals, the risk of Oropouche virus dissemination to others areas of Brazil and South America increases. However, the pathogenesis of Oropouche infection is not well understood. Rodent models using intracerebral inoculation have been described, but no attempts to use a route that more closely resembles the natural route of infection have been published. This study was conducted to establish and characterize an experimental model of infection with Oropouche, using subcutaneous inoculation of hamsters, in order to contribute to the understanding of Oropouche pathogenesis. We have established an experimental model through subcutaneous inoculation of hamsters in order to study pathogenesis. Suckling mouse brain passaged Oropouche strain BeAn19991 was inoculated (106,25 TCID50/100?L) subcutaneously in the thigh of syrian hamsters 2-3 weeks old. Around day 3 animals developed disease characterized by lethargy, paralysis, chill-like shaking and ruffled fur. Animals were sacrificed on days 1, 3, 5, 8 and 11 post-inoculation or whenever found to be agonic. Brain, heart, liver, spleen, muscle and blood were harvested for virus titration, histology and Oropouche immunohistochemistry. Inflammatory infiltrate was present in the brain, mostly as perivascular cuffs, meninges and some in the heart. Oropouche titers were 107,23 TCID50/g of tissue in brain 106,67 TCID50/g in liver, and 106 TCID50/g in blood. Oropouche antigen was detected diffusely distributed in the liver in association with hepatocytes, and in neurons in several regions of the brain. This model reproduces systemic Oropouche infection and may become useful in pathogenesis studies, as well as to test antiviral drugs and possible vaccine candidates.

O sequenciamento da L. interrogans sorovar Copenhageni e as análises bioinformáticas permitiram a identificação de candidatos vacinais e fatores de virulência. Foram selecionados dois genes, LIC11834 e LIC12253, que foram submetidos a ensaios de presença do DNA genômico e RNA mensageiro em diferentes sorovares de Leptospira. Observamos que o gene LIC12253 foi o mais presente entre os sorovares testados. Os genes foram clonados em vetor de expressão pAE e expressos em E. coli BL21 SI. As proteínas recombinantes foram purificadas e submetidas a ensaio de dicroísmo circular, o qual confirmou que ambas as proteínas estavam estruturadas. Por meio de testes de imunogenicidade em camundongos, ambas as proteínas mostraram-se imunogênicas, apresentando altos títulos de anticorpos, porém não foram capazes de promover resposta imune celular. Em ensaios de localização das proteínas nativas podemos observar a presença destas proteínas na membrana externa de Leptospira. Ensaios de reatividade com soros de pacientes diagnosticados com leptospirose mostraram que há reconhecimento das proteínas por anticorpos presentes nesses soros, sugerindo que as proteínas são expressas durante a infecção. Em ensaios de adesão a componentes de matriz extracelular e componentes do soro e plasma humano, rLIC11834 apresentou ligação à laminina, sendo nomeada de Lsa33, além de ligação ao plasminogênio, ao C4bp e ao fibrinogênio de forma dose-dependente; rLIC12253 apresentou ligação à laminina, sendo chamada de Lsa25, e ao C4bp de forma dose-dependente. Ensaios de desafio demonstraram que as proteínas não apresentam proteção contra infecção letal em hamsters. Assim, acreditamos que estas proteínas multifuncionais possam interagir com proteínas do hospedeiro e ter participação na patogênese da doença. / The genomic sequencing and the advances of bioinformatics analysis allowed the identification of new vaccine candidates and new virulence factors. Therefore, two genes from L. interrogans serovar Copenhageni, LIC11834 and LIC12253 were selected and subjected to assays for the presence of genomic DNA and mRNA in different serovars of Leptospira. These assays found that the gene LIC12253 was the most present among the tested serovars. The genes were then cloned in the expression vector pAE and expressed in E. coli BL21 SI. The recombinant proteins were purified and subjected to circular dichroism, which confirmed that both proteins presented secondary structures. Immunogenicity tests in mice showed that both proteins are immunogenic, with high antibodies titers, but don\'t induce cellular immune response. Localization assays of the native proteins on the leptospiras demonstrated the presence of the proteins on the surface of Leptospira. Reactivity assays with sera of patients diagnosed with leptospirosis showed that the recombinant proteins could be recognized by their antibodies, suggesting that they are expressed during infection. Adhesion assays to the extracellular matrix components, human serum and plasma components, showed that the protein rLIC11834 binds to laminin and was called Lsa33. In addition, Lsa33 interacts to plasminogen, to C4bp and to fibrinogen in a dose-dependent manner. The protein rLIC12253 showed binding to laminina, named Lsa25, and to C4bp in a dose-dependent manner. Challenge assays showed that both recombinant proteins don\'t afford protection against lethal infection in hamsters. Thus, we believe that these multifunctional proteins may interact with host proteins and may play a role in leptospiral pathogenesis.

Influência dos sistemas de Quorum Sensing AI-1/AI-2/AI-3 nos fatores de virulência de EPEC atípica de origem animal. A secreção de moléculas sinalizadoras de baixo peso molecular que se acumulam no meio extracelular até atingir um limite crítico de concentração para sua detecção, acarretando em sinalizações intracelulares e respostas efetoras, define o sistema de comunicação bacteriano chamado Quorum Sensing. Este sistema, que regula comportamentos coletivos mostrou-se um mecanismo disseminado em diversas espécies bacterianas. Diversos estudos descreveram a existência de pelo menos 3 sistemas relacionados ao Quorum Sensing em bactérias Gram-negativas, LuxIR/AI-1, LuxS/AI-2 e QseBC/AI-3/Epinefrina/Norepinefrina. Fatores de virulência como formação de biofilme, motilidade e adesão ao epitélio do hospedeiro devem ser controlados de maneira adequada para tirar o melhor proveito da situação em que a bactéria se encontra. Este trabalho teve como objetivo analisar a influência e a correlação dos genes luxS, qseC e sdiA, relacionados ao sistema de comunicação bacteriana Quorum Sensing, nos principais fatores de virulência de uma amostra de EPEC atípica de origem animal. Foram construídos mutantes pela metodologia baseada na recombinação homóloga mediada pelo sistema Lambda Red, que foram submetidos a ensaios fenotípicos. A sinalização por AI-2 e luxS desempenham papéis na motilidade, formação de biofilme e adesão a células epiteliais. QseC influencia a produção de biofilme pela regulação de componentes da matriz extracelular, e participa de processos de motilidade e adesão. O hormônio epinefrina contribui na alteração de processos de motilidade, formação de biofilme e desenvolvimento da lesão A/E. O gene sdiA também tem um papel importante na regulação de fatores de virulência, mesmo na ausência de AHL. Uma interação antagônica parece existir entre os genes qseC e luxS. A ausência de sistemas de Quorum Sensing promove a produção de um biofilme robusto na amostra AP155. / The secretion of low molecular weight signaling molecules that accumulate in the extracellular medium until reaching a critical concentration limit for its detection, leading to intracellular signaling and effector responses, defines the bacterial communication system called Quorum Sensing. This system regulates collective behaviors and has been proven to be a widespread mechanism in several bacterial species. Several studies have described the existence of at least 3 Quorum Sensing-related systems in Gram-negative bacteria, LuxIR/AI-1, LuxS/AI-2 and QseBC/AI-3/Epinephrine/Norepinephrine. Virulence factors such as biofilm formation, motility and adhesion to the host epithelium should be adequately regulated to make the most of the situation in which the bacterium is found. The aim of this work was to analyze the influence and correlation of luxS, qseC and sdiA genes, related to the bacterial communication system Quorum Sensing, on the main virulence factors of an atypical EPEC strain isolated from an animal. Mutants were obtained through homologous recombination mediated by the Lambda Red system, and then were submitted to phenotypic assays. AI-2 signaling and luxS play roles in motility, biofilm formation, and adhesion to epithelial cells. QseC influences the production of biofilm by the regulation of components of the extracellular matrix, and participates in the processes of motility and adhesion as well. The epinephrine hormone alters the processes of motility, biofilm formation and development of the A/E lesion. The sdiA gene also plays an important role in the regulation of virulence factors, even in the absence of AHL. An antagonistic interaction seems to exist between the qseC and luxS genes. The absence of Quorum Sensing systems promotes the production of a robust biofilm in the AP155 strain.