Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-15T15:33:27Z No. of bitstreams: 1 Luana Palma. Doença esteatotica...2012.pdf: 6491139 bytes, checksum: 17714fa9ab206495fbf5e1aa05890deb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T15:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luana Palma. Doença esteatotica...2012.pdf: 6491139 bytes, checksum: 17714fa9ab206495fbf5e1aa05890deb (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A Doença Esteatótica Não Alcoólica do Fígado (do inglês Nonalcoholic Fatty Liver Disease – NAFLD) é uma doença crônica hepática de caráter espectral, que vai desde a esteatose simples até a esteato-hepatite não alcoólica. A progressão para cirrose e carcinoma hepatocelular têm sido descrita. A NAFLD apresenta aspectos histológicos semelhantes à doença hepática relacionada ao álcool (esteatose, inflamação lobular, corpúsculos de Mallory e fibrose), mas acomete indivíduos com história negativa de consumo excessivo de álcool. A NAFLD é uma das principais doenças crônicas hepáticas mundiais, e os indivíduos obesos representam a maioria dos casos da doença. Os mecanismos envolvidos na progressão da esteatose para esteato-hepatite não são bem compreendidos. Neste aspecto, modelos murinos da NAFLD têm sido frequentemente utilizados para elucidação destes mecanismos. A maioria dos modelos disponíveis é resultante de modificações genéticas e/ou nutricionais e, em geral, não simulam as alterações metabólicas e histológicas comumente vistas em pacientes com NAFLD. Em nosso grupo, foi proposto um novo modelo de NAFLD. Camundongos C57BL/6 alimentados com dieta rica em gordura (High Fat - HF) demonstraram alterações metabólicas e histológicas sugestivas de NAFLD. O objetivo do presente trabalho foi comparar alterações histológicas hepáticas presentes nestes camundongos com as alterações observadas em pacientes obesos. Amostras de fígados de pacientes obesos e de camundongos alimentados com a dieta HF foram utilizadas. Os tecidos hepáticos foram corados em Hematoxilina & Eosina e Picrossírius Red para avaliação das alterações hepáticas (esteatose, balonização, inflamação, corpúsculos de Mallory-Denk e fibrose). Além disso, foi realizada imunoistoquímica para avaliação da presença de células estrelares ativadas e de células progenitoras hepáticas, células envolvidas na fibrose e no desenvolvimento de carcinoma hepatocelular, respectivamente. Os resultados demonstraram que os fígados de todos os pacientes obesos exibiram esteatose macrovacuolar, balonização hepatocelular, inflamação lobular e fibrose perissinusoidal, o que caracterizou estes pacientes como portadores da NAFLD. As mesmas alterações foram observadas em fígados de camundongos alimentados com a dieta HF. As células estrelares ativadas foram observadas em todos os pacientes obesos, assim como em camundongos de dieta HF. As células progenitoras hepáticas foram observadas na maioria dos pacientes obesos. O fígado de todos os camundongos alimentados com dieta HF exibiram células progenitoras hepáticas. A partir dos dados obtidos, pode-se concluir que fígados de camundongos alimentados com dieta HF exibem alterações histológicas hepáticas similares às observadas em pacientes obesos. Isto abre perspectivas para a utilização do modelo proposto em estudos que busquem elucidar os mecanismos envolvidos na patogênese da NAFLD. / Nonalcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) is a chronic liver disease ranging from simple steatosis to nonalcoholic steatohepatitis. The progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma has been reported. The NAFLD shows histological features similar to alcohol-related liver disease (steatosis, lobular inflammation, fibrosis and Mallory-Denk bodies), but affects individuals with no history of excessive alcohol consumption. The NAFLD is a major chronic hepatic disease in the world, and obese individuals represent the majority of cases of the disease. The mechanisms involved in the progression of steatosis to steatohepatitis are not well understood. In this regard, murine models of NAFLD have been frequently used for elucidation of these mechanisms. Most available models are the result of genetic or nutritional modifications, and generally do not mimic metabolic and histologic changes commonly seen in patients with NAFLD. In our group, we have proposed a new model of NAFLD. Mice fed high fat diet (HF diet) demonstrated metabolic and histological features suggestive of NAFLD. The aim of this study was to compare liver histological alterations present in these mice with the changes observed in obese patients. Samples of livers of obese patients and mice fed HF diet were used. For assessment of liver alterations, such as steatosis, ballooning, inflammation, Mallory- Denk bodies and fibrosis, tissues were stained with hematoxylin & eosin and picrossirius red. In addition, the presence of activated stellate and progenitor liver cells was estimated using immunohistochemistry. The results show that the livers of all obese patients exhibited macrovesicular steatosis, hepatocellular ballooning, perisinusoidal fibrosis, and lobular inflammation, which characterized these patients with NAFLD. Similar changes were observed in livers of mice that fed the HF diet. Activated stellate cells were observed in all obese patients as well as in mice HF. Hepatic progenitor cells were observed in most obese patients. The liver of all animals fed the HF diet exhibited liver progenitor cells. From the data obtained, it can be concluded that livers of mice fed with HF diet exhibit liver abnormalities similar to those observed in obese patients. This opens perspectives for the use of the proposed model in studies that seek to elucidate the mechanisms involved in the pathogenesis of NAFLD.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-23T14:45:38Z No. of bitstreams: 1 Rosemberg Ferreira Senhor.pdf: 389433 bytes, checksum: 9da1d8b1dade6ed260f4b412d613dbe3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T14:45:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosemberg Ferreira Senhor.pdf: 389433 bytes, checksum: 9da1d8b1dade6ed260f4b412d613dbe3 (MD5) Previous issue date: 2006-03-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The crater rot, caused by the fungus Myrothecium roridum, is an important disease of melon (Cucumis melo) fruits in the Northeast producing fields of Brazil. This work aimed to analyze the influence of the inoculation method (pulverization, drop deposition, pulverization with wound, drop deposition with wound, and sub-epidermal injection), wound intensity (0, 1, 3, 5, 7, 9 and 10 wounds), wound age (0, 3 and 6 hours), fruit age (12, 22 and 27 days), humidity (with and without moist chamber), temperature (15, 20, 25, 30, 35 and 40 °C) and inoculum concentration (101, 102, 103, 104, 105, 106 and 107 conidia.mL-1) of three M. roridum isolates (LE-609, LE-636 and LE-766) on the severity of the crater rot in melon fruits type Yellow (cv. AF-682) and Honeydew (cv. Orange Flesh). All inoculations were made in melon health fruits, after washing and superficial desinfestation. Each fruit was inoculated in six equidistant points and the cater rot severity was evaluated after five days, by assesment of the lesion area in each inoculated point. Crater rot severity was influenced by the interaction between inoculation methods, pathogen isolates and melon cultivars. Symptoms werenot observed in the fruits without wounds. The inoculations by pulverization or drop deposition lead to bigger lesions in wounded fruits. Sub-epidermal injection inoculation presented smaller lesions when compared with pulverization or drop deposition methods. The disease severity increased as the number of wounds rise, reaching the maximum with 10 wounds. A tendency of reduction of the disease severity was verified in fruits with the increase of the wound age. Lesions were significantly smaller in the fruits wounded six hours before the inoculation than in those wounded immediately before the inoculation. Fruit age was not decisive to increase or reduce the cater rot severity. The presence of free water in the surface of the fruits was unnecessary to initiate the infection process by M. roridum isolates, although the lesions were bigger in the fruits kept under moist chamber. In the absence of moist chamber, the biggest lesions were verified in cultivar Orange Flesh. All M. roridum isolates caused disease symptoms, being distinguished LE-639 which caused the biggest lesions with and without moist chamber. The temperature significantly influenced the severity of thedisease. The optimum estimates temperatures for disease development in the cultivars AF-682 and Orange Flesh were 26.1ºC and 26.2ºC, respectively. The smaller lesions were esteemed at 38.6 ºC in all interactions. Disease severity increased with theincrement in M. roridum inoculum concentration, reaching the maximum at 107 conidia.mL-1. In cultivar AF-682, the presence of symptoms were not observed in the fruits inoculated with the isolate LE-609 in the concentration of 101 conidia.mL-1, the same pattern was observed with the isolates LE-639 and LE-766 at concentrations of 102 and 103 conidia.mL-1, respectively. Considering the cultivar Orange Flesh, all isolated were able to induce disease symptoms beginning at a concentration of 103 conidia.mL-1. / A podridão-de-cratera, causada pelo fungo Myrothecium roridum, é uma importante doença dos frutos de meloeiro (Cucumis melo) nos pólos produtores do Nordeste brasileiro. Este trabalho teve como objetivos avaliar a influência dos métodos de inoculação (gota, pulverização, gota com ferimento, pulverização com ferimento e injeção subepidérmica), da intensidade do ferimento (0, 1, 3, 5, 7, 9 e 10 ferimentos), da idade do ferimento (0, 3 e 6 horas), da idade do fruto (12, 22 e 27 dias), da umidade (sem e com câmara úmida), da temperatura (15, 20, 25, 30, 35 e 40 °C) e da concentração de inóculo (101, 102, 103, 104, 105, 106 e 107 conídios.mL-1) de três isolados de M. roridum (LE-609, LE-636 e LE-766) na severidade da podridão-de-cratera em frutos de meloeiro dos tipos Amarelo (cv. AF-682) e Honeydew (cv. Orange Flesh). As inoculações foram realizadas em frutos sadios de meloeiro, após lavagem e desinfestação superficiais. Cada fruto foi inoculado em seis pontos eqüidistantes e a avaliação da severidade da podridão-de-cratera realizada cinco dias após, pela mensuração da área lesionada externa em cada ponto inoculado. A severidade da doença foi influenciada pela interação entre métodos de inoculação, isolados e cultivares. Nãohouve desenvolvimento de lesões nos frutos quando as inoculações foram realizadas sem ferimento. As inoculações por pulverização ou gota com a suspensão de conídios propiciaram as maiores lesões nos frutos submetidos a ferimentos. A inoculação por injeção subepidérmica propiciou lesões menores que os métodos de pulverização ou gota com ferimento. A severidade aumentou com o incremento do número de ferimentos, atingindo o máximo com 10 ferimentos. Verificou-se uma tendência de redução da severidade da doença nos frutos com o aumento da idade do ferimento. As lesões foram significativamente menores nos frutos feridos seis horas antes da inoculação do que naqueles feridos imediatamente antes da inoculação. A idade do fruto não foi determinante para elevação ou redução da severidade da podridão-de-cratera. A presença de água livre na superfície dos frutos foi desnecessária para o início do processo de infecção pelos isolados de M. roridum, embora as lesões tenham sido maiores nos frutos submetidos à câmara úmida. Na ausência da câmara úmida, as maiores lesões foram verificadas na cultivar Orange Flesh. Todos os isolados de M.roridum provocaram sintomas da doença, destacando-se LE-639 ao causar as maioreslesões com e sem a câmara úmida. A temperatura influenciou significativamente a severidade da doença. As temperaturas ótimas estimadas para o desenvolvimento da doença nas cultivares AF-682 e Orange Flesh foram 26,1 ºC e 26,2 ºC, respectivamente. As menores lesões foram estimadas a 38,6 ºC em todas as interações. A severidade da doença aumentou com o incremento na concentração de inóculo de M. roridum, atingindo o máximo com 107 conídios.mL-1. Na cultivar AF-682, não foi observada a presença de sintomas nos frutos inoculados com o isolado LE-609 na concentração de 101 conídios.mL-1, bem como com os isolados LE-639 e LE-766 nas concentrações de 103 e 102 conídios.mL-1, respectivamente. Na cultivar Orange Flesh, todos os isolados do patógeno induziram sintomas a partir da concentração de 103 conídios.mL-1.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane_Claudia_Meinerz.pdf: 1140657 bytes, checksum: 515f23cafb30196ea1e4641ed2debc7d (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Induced resistance involves the activation of latent defense mechanisms existing in plants in response to treatment with biotic or abiotic agents. The use of plant extracts in order to induce resistance mechanisms is an attractive alternative to chemical control, however, these extracts may occur the presence of inducer, as well ass the presence of suppressor. This study aimed to evaluate biochemical, physiological and growth of sorghum (Sorghum bicolor L.) treated with extracts of Rosmarinus officinalis, Curcuma longa and Pycnoporus sanguineus. It was evaluated the induction of phytoalexins deoxiantocianidinas, peroxidase, polyphenol oxidase, phenylalanine ammonia lyase, β-1,3 glucanase and chitinase, carbon metabolism (photosynthesis and respiration) and growth of sorghum plants. Mesocotyls sorghum were treated with the fungal and plant extracts, and acibenzolar-S-methyl (ASM) (125 mg L-1 elicitor would like reference) and distilled water. Sorghum seedlings were treated with the inducers and at 24, 48, 96 and 144 hours samples were taken for analyzes of defense enzymes. Evaluations of gas exchange were conducted periodically over 7 days with three days interval of application of foliar treatments. Were determined rate of net CO2 assimilation (A, CO2 mol m-2s-1), stomatal conductance (gs mmol H2O m-2s-1), sweating (E, H2O mmol m-2s-1) efficiency Water use (U.S. mol m-2s-1) and intrinsic efficiency of the use of water (EIUA, mol m-2s-1). For growth analysis, carried out 120 days after sowing, the parameters evaluated were: fresh leaves and roots, dry weight of leaves and roots and root volume. The parameters for production analysis were the number of panicle, seed number, mean grain mass and total production. Biotic inducers rosemary, turmeric and Pycnoporus sanguineus induced phytoalexins in mesocotyls and biochemical activities in different cultivars of sorghum, may note that the results reveal an important target for the action of elicitors in these extracts. Overall, rosemary extract caused increase in peroxidase, polyphenol oxidase and phenylalanine ammonia lyase activities, the turmeric extract induced phenylalanine ammonia-lyase activity and the extract of P. sanguineus polyphenol oxidase and β-1,3 glucanase activities. ASM interfere with the metabolism of BRS 610 sorghum in relation to the efficiency of water use (U.S.) and intrinsic efficiency of water use (EIUA), without interfering with productivity, improving the quality of production and improving markedly the number of panicle, panicle, grain number and grain weight. The fungal and plant extracts did not affect these parameters. It was possible to induce defense mechanisms in sorghum by application of extracts of rosemary, turmeric and P. sanguineus, which may allow the obtention of new molecules, and the development of alternative methods for controlling plant diseases / A indução de resistência envolve a ativação de mecanismos de defesa latentes existentes nas plantas em resposta ao tratamento com agentes bióticos ou abióticos. A aplicação de extratos vegetais visando à indução de mecanismos de resistência é uma alternativa interessante ao controle químico, entretanto, nestes extratos pode ocorrer além da presença de indutores, a presença de supressores. Este trabalho teve por objetivo avaliar aspectos bioquímicos, fisiológico e de crescimento de sorgo (Sorghum bicolor L.) tratado com extratos de Rosmarinus officinalis, Curcuma longa e Pycnoporus sanguineus. Foram avaliados a indução de fitoalexinas deoxiantocianidinas, enzimas peroxidase, polifenoloxidase, fenilalanina amônia-liase, β-1,3 glucanase e quitinase, metabolismo de carbono (fotossíntese e respiração) e crescimento de plantas de sorgo. Mesocótilos de sorgo foram tratados com os extratos vegetais e fúngico, além de acibenzolar-S-metil (ASM) (125 mg L-1 do i.a. como elicitor de referência) e água destilada. Plântulas de sorgo foram tratadas com os indutores e às 24, 48, 96 e 144 horas foram retiradas amostras para as análises das enzimas de defesa. As avaliações de trocas gasosas foram realizadas periodicamente no período de 7 dias, com três dias de intervalo da aplicação dos tratamentos via foliar. Foram determinados: taxas de assimilação líquida de CO2 (A, μmol CO2 m-2s-1), condutância estomática (gs, mmol H2O m-2s-1), transpiração (E, mmol H2O m-2s-1), eficiência do uso de água (EUA, mol m-2s-1) e eficiência intrínseca do uso de água (EIUA, mol m-2s-1). Para análise de crescimento, realizada 120 dias após a semeadura, os parâmetros avaliados foram: massa fresca das folhas e raízes; massa seca das folhas e raízes e volume de raiz. Os parâmetros avaliados na análise de produção foram: número de panícula, número de sementes; massa média de grão e produção total. Os indutores bióticos alecrim, cúrcuma e Pycnoporus sanguineus induziram fitoalexinas em mesocótilos e atividades bioquímicas nas diferentes cultivares de sorgo, podendo ressaltar que os resultados revelam um importante alvo de ação de elicitores presentes nesses extratos. De forma geral, o extrato de alecrim causou incremento na atididade de peroxidase, polifenoloxidase e fenilalanina amônia-liase; o extrato de cúrcuma induziu a atividade de fenilalanina amônia-liase e o extrato de P. sanguineus as atividades de polifenoloxidase e β-1,3 glucanase. O indutor ASM interferiu no metabolismo da cultivar BRS 610 de sorgo em relação à eficiência do uso da água (EUA) e eficiência intrínseca do uso da água (EIUA), sem interferir na produtividade, melhorando a qualidade da produção e melhorando acentuadamente o número de panícula, massa de panículas, número de grãos e massa de grãos. Os extratos vegetais e fúngico não interferiram nesses parâmetros. Foi possível induzir mecanismos de defesa em sorgo pela aplicação dos extratos de alecrim, cúrcuma e P. sanguineus, o que pode permitir a obtenção de novas moléculas e o desenvolvimento de métodos alternativos para controle de doenças em plantas

INTRODUÇÃO: A hanseníase é uma doença infectocontagiosa granulomatosa crônica, causada por Mycobacterium leprae e representa ainda um problema de saúde pública no Brasil. Em média 30-40% dos doentes tem risco de desenvolver reações hansênicas, que são considerados estados de exacerbação da resposta imunológica do hospedeiro a antígenos M. leprae. Está bem descrita a importância de células T reguladoras (Tregs) em infecções bacterianas crônicas. Estudos anteriores do nosso grupo demonstraram aumento da proporção de Tregs in situ e em sangue periférico de pacientes multibacilares (mas não em paucibacilares), assim como diminuição da proporção de Tregs na reação tipo 2 (porém não na reação tipo 1), sugerindo a participação deste subtipo celular na imunopatogênese da hanseníase. Entretanto, a baixa frequência de Tregs tem dificultado o estudo da sua capacidade funcional. OBJETIVO: Estabelecer protocolo de expansão de Tregs funcionais em pacientes com hanseníase e, posteriormente, avaliar a capacidade funcional das Tregs expandidas. METODOLOGIA: Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram separadas e cultivadas, com anti-CD3 e anti-CD28, acrescidos de IL-2 e rapamicina, por 21 dias. Para avaliar a capacidade funcional das Tregs expandidas, realizou-se um ensaio de co-cultivo das Tregs expandidas e PBMCs autólogas (marcadas com CFSE). Utilizou-se diferentes proporções de Tregs:PBMCs (1:1, 1:2 e 1:5). A casuística foi composta por 29 indivíduos diagnosticados com hanseníase, divididos em quatro grupos, de acordo com a classificação de Ridley e Jopling. Além disso, coletou-se material de 6 indivíduos saudáveis, com a finalidade de caracterizar o pool celular do protocolo de expansão. Para isso, culturas de expansão de indivíduos saudáveis foram submetidas a dois protocolos distintos de purificação celular (beads magnéticas e cell sorting), além de imunofenotipagem das moléculas CD39, PD-1 e LAG3. RESULTADOS: Tregs dos pacientes multibacilar sem reação, nas proporções 1:2 e 1:5, e no grupo reacional tipo 2, na proporção 1:5, mostraram maior capacidade supressora, quando comparados aos grupos pacubacilar sem reação e reacional tipo 2, respectivamente. No grupo de indivíduos saudáveis não houve diferenças na capacidade supressora das Tregs obtidas por separação por beads magnéticas e Tregs obtidas por cell sorting, e não houve expressão significativa de células PD-1+ e LAG-3+ nas culturas de expansão. CONCLUSÃO: Em todos os indivíduos testados, independente da classificação clínica da hanseníase, o protocolo proposto resultou em uma expansão exponencial de uma linhagem de Tregs com atividade supressora, porém com sugestão preliminar de maior eficiência supressora das Tregs na forma MB (com ou sem reação), corroborando a correlação entre atividade supressora de Tregs e maior carga bacilar. Além disso, o protocolo com beads magnéticas se mostrou tão eficaz quanto o protocolo de purificação por cell sorting. A imunofenotipagem das Tregs expandidas de indivíduos saudáveis indicou que não havia número significativo de células exaustas ao fim de nosso protocolo, assim como não houve crescimento concomitante de células T reguladoras do tipo 1 na cultura de expansão / INTRODUCTION: Leprosy is a chronic granulomatous infectious disease caused by Mycobacterium leprae and a public health problem in Brazil. On average, 30-40% of patients are at risk of developing leprosy reactions, which are considered as states of exacerbation of the host\'s immune response to M. leprae antigens. The importance of regulatory T cells (Tregs) in chronic bacterial infections has been well described, but their role in leprosy remains unclear. Previous studies from our group have shown increased proportions of Tregs in situ and in peripheral blood of multibacillary patients (but not in paucibacillary patients), and decrease in the proportion of Tregs in type 2 reaction (but not type 1 reaction), reinforcing the role played by these cells in the immunopathogenesis of leprosy. However, the low numbers of Tregs preclude further studies on their functional capabilities. OBJECTIVE: To establish a protocol for expansion of functional Tregs in patients with leprosy and evaluate the functional capacity of the expanded Tregs. METHOD: Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were separated and cultured under anti-CD3 and anti-CD28 stimulation, plus IL-2 and rapamycin for 21 days. To evaluate the functional capacity of the expanded Tregs, a co-culture assay of the expanded Tregs and autologous PBMCs (labeled with CFSE) was performed. Different ratios of Tregs: PBMCs (1: 1, 1: 2 and 1: 5) were used. The sample consisted of 29 individuals diagnosed with leprosy, divided into four groups, according to the Ridley and Jopling classification. In addition, samples from 6 healthy individuals were collected to characterize better the cellular characteristics of the expansion protocol. For this, cultures of healthy individuals PBMC were submitted to two distinct cell purification protocols (magnetic beads and cell sorting), as well as immunophenotyping of the molecules CD39, PD-1 and LAG3. RESULTS: Expanded Tregs from the multibacillary patients without reaction, at 1:2 and 1:5 ratios, and with type 2 reaction, at 1: 5 ratio, showed greater suppressive capacity that the respective paucibacillary groups. Tregs from healthy individuals obtained through magnetic beads separation and through cell sorting did not show differences in suppressor capacity, and there was no significant expression of PD-1 + and LAG-3 + on cells of the expansion cultures. CONCLUSION: In all individuals tested, irrespective of the leprosy classification, the proposed protocol resulted in an exponential expansion of Tregs with suppressive capacity; however, preliminary evidence indicated stronger suppressor activity of the Tregs from multibacillary patients (with or without reaction), suggesting a direct correlation between Tregs activity and bacillary load in leprosy. In addition, our protocol with magnetic beads proved to be as effective as the cell sorting protocol. Immunophenotyping of expanded Tregs from healthy subjects revealed that there was no significant number of exhausted cells at the end of our protocol, nor there was the concomitant outgrowth of type 1 regulatory T cells in the expansion protocol

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:36:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Omari_Dangelo_Forlin_Dildey.pdf: 1490554 bytes, checksum: d179837ea4985c559fc54f5e530aaca2 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Biotic inducing agents such as Trichoderma spp. are alternative uses for the resistance induction by activating plants mechanisms of defense. This work aimed to study the interaction of Trichoderma spp different isolates in bean plant on anthracnose control by evaluating the effects on the induction of resistance. Three experiments were conduced, one in vitro and two under greenhouse conditions. In vitro the aggressiveness of 21 Trichoderma isolates was evaluated by the culture direct confrontation method against C. lindemuthianum. In the greenhouse the bean plant was grown and treated with Trichoderma spp. (in vivo assay 1), which was inoculated via seed treatment in sterilized soil. A second assay was conducted which received inoculation from the 21 isolates inoculated via colonized rice deposition in the furrow and foliar spray of exudates of the same isolates. Leaves and roots collections for the enzyme activity determination before the exudates application, after the exudates application and collects after the inoculation were carried out. Analysis of defense enzymes (peroxidase (POX), polyphenol oxidase (PPO), fenilalanina ammonia-lyase (PAL), and β-1,3-glucanase (β-GASE)) was held. To check the endophytic colonization ability of the isolates, fragments of bean plant s roots were sanitized and placed in Petri dishes containing PDA media. The net rate of CO2 assimilation, chlorophyll content and anthracnose s severity on bean plants were also evaluated. The data were subjected to variance analysis and compared by the Scott-Knott test (p <0.05). The isolates TI2, TI4, TLB3, TLB12 (T. harzianum); TI3, TM2 (T. virens); TLB6 (T. asperellum); TLB14, TLB17 (T. koningiopsis) were considered as very efficient and the isolates TI1, TM4, TLB9, TLB15 (T. virens); TLB2, TLB4, TOD1, TOD3 (T. harzianum); TOD2A, TOD2B (T. longibrachiatum) were considered as efficient in direct confrontation against C. lindemuthianum. The isolates of Trichoderma spp, TI2 and TI4 (T. harzianum), TM4, TLB2, TLB9, TLB15, TOD1 (T. virens); TLB17 (T. koningiopsis) colonized the bean plant's roots, giving the microorganism endophytic ability on bean plant s roots. Trichoderma isolates interfere with the bean plant metabolism, acting endophytically. The isolates TI1, TM1, TLB15 (T. virens); TI2, TLB3, TLB4, TLB12, TOD1, TOD3 (T. harzianum); TLB6 (T. asperellum); TLB14, TLB17 (T. koningiopsis); TOD2B (T longibrachiatum) suppressed the β-1,3-glucanase activity in the leaf tissue, being considered as suppressors for the induction of defense on bean plants. The defense enzymes activity on the resistance induction of the bean plant treated with Trichoderma spp. for protection against C. lindemuthianum showed no major changes. The isolates did not affect the net rate of CO2 assimilation and did not change the chlorophyll content. The incidence of anthracnose's severity on bean plants, showed no significant difference by treatment via seed/soil and foliar spray of the exudates on the interaction of Trichoderma spp. evaluated. However the management with Trichoderma spp. cannot be ruled out and requires further studies in this pathossystem / Agentes indutores bióticos como Trichoderma spp. são alternativas de utilização para a indução de resistência ativando mecanismos de defesa das plantas. Este trabalho teve como objetivo estudar a interação dos diferentes isolados de Trichoderma spp. em feijoeiro no controle da antracnose, avaliando os efeitos na indução de resistência. Foram conduzidos 3 experimentos, sendo um in vitro e dois em condições de casa de vegetação. In vitro foi avaliada a agressividade de 21 isolados de Trichoderma pelo método do confronto direto de cultura contra o C. lindemuthianum. Em casa de vegetação o feijoeiro foi cultivado e tratado com isolados de Trichoderma spp. (ensaio in vivo 1), os quais foram inoculados via tratamento de semente em solo esterilizado. Um segundo ensaio foi conduzido o qual recebeu inoculação dos 21 isolados inoculados via deposição de arroz colonizado no sulco e pulverização de exsudato via foliar dos mesmos isolados. Foram realizadas coletas de folhas e raízes para determinação da atividade enzimática antes da aplicação dos exsudatos, depois da aplicação dos exsudatos e coleta após a inoculação do patógeno. Foi realizada análise das enzimas de defesa (peroxidase (POX), polifenoloxidase (PFO), fenilalanina amônia-liase (FAL) e β-1,3-glucanase (β-GASE)). Para verificar a capacidade de colonização endofítica dos isolados, fragmentos de raízes do feijoeiro foram sanitizadas e dispostas em placas de Petri contendo meio BDA. Foi avaliada também a taxa de assimilação líquida de CO2, teor de clorofila e severidade de antracnose nas plantas de feijoeiro. Os dados foram submetidos à análise de variância e comparados pelo teste de Scott-Knott (p<0,05). Os isolados TI2, TI4, TLB3, TLB12 (T. harzianum); TI3, TM2 (T. virens); TLB6 (T. asperellum); TLB14, TLB17 (T. koningiopsis) foram considerados como muito eficientes e os isolados TI1, TM4, TLB9, TLB15 (T. virens); TLB2, TLB4, TOD1, TOD3 (T. harzianum); TOD2A, TOD2B (T longibrachiatum) foram considerado como eficientes no confronto direto contra C. lindemuthianum. Os isolados de Trichoderma spp., TI2 e TI4 (T. harzianum), TM4, TLB2, TLB9, TLB15, TOD1 (T. virens); TLB17 (T. koningiopsis) colonizaram as raízes de feijoeiro, conferindo a capacidade endofítica do microrganismo nas raízes do feijoeiro. Isolados de Trichoderma interferem no metabolismo do feijoeiro, atuando endofiticamente. Os isolados TI1, TM1, TLB15 (T. virens); TI2, TLB3, TLB4, TLB12, TOD1, TOD3 (T. harzianum); TLB6 (T. asperellum); TLB14, TLB17 (T. koningiopsis); TOD2B (T longibrachiatum) suprimiram a atividade de β-1,3-glucanase no tecido foliar, sendo considerados supressores para indução da defesa das plantas de feijoeiro. A atividade das enzimas de defesa na indução de resistência de feijoeiro tratado com Trichoderma spp. para proteção a C. lindemuthianum não demonstraram grandes alterações. Os isolados não interferiram na taxa de assimilação líquida de CO2 e não alteraram o teor de clorofila. A incidência de severidade de antracnose em plantas de feijoeiro, não apresentou diferença significativa por meio do tratamento via semente/solo e pulverização dos exsudato via foliar na interação dos isolados de Trichoderma spp. avaliados. Contudo o manejo com Trichoderma spp. não pode ser descartado e requer maiores estudos nesse patossitema

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane_Claudia_Meinerz.pdf: 977726 bytes, checksum: 47602589d307d4398cc6061bcd0d1eeb (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Induction of resistance involves the activation of plant defense mechanisms in response to treatment with biotic or abiotic elicitors. The application of plant extracts in order to induce resistance mechanisms is an interesting alternative to chemical control, however, besides the presence of inducers, can occur the presence of suppressors. This study aimed to partially purificate through gel filtration chromatography (GFC) and precipitation with ammonium sulfate (SA), compounds present in decoct of Adiantum capillus-veneris, capable to induce defense mechanisms in sorghum mesocotyls, including phytoalexins and peroxidase, polyphenoloxidase (PPO), phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and chitinase. The decoct 1% was fractionated with concentrations of ammonium sulfate, 0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80% and 80-100% of SA and those fractions were subjected to GFC. We obtained nine protein peaks and one glucosic peak for decoct with molecular weights ranging from 0.61 to 0.01 KDa; to fraction 0-20% were obtained two protein and two glucosic peaks, with molecular weights lower than 0.01 KDa, and concentration of sugars ranging from 4.1 to 17.5 mg mL-1; to fraction 20-40% were obtained three protein peaks (0.98 to 111.5 KDa) and five glucosic peaks (11.3 to 73.7 mg mL-1); to fraction 40-60% were obtained two protein peaks (0.09 to 111.5 KDa) and two glucosic peaks (5.6 to 7.5 mg mL-1); to fraction 60-80% were obtained six protein peaks (lower than 0.02 KDa) and two glucosic peaks (16.5 to 51.3 mg mL-1); and to fraction 80-100% were obtained three protein peaks (lower than 0.09 KDa). Sorghum mesocotyl were treated with fractions from the GFC, and decoct, acibenzolar-S-methyl (ASM) (125 mg L-1 of a. i. as elicitor of reference) and sodium phosphate buffer 10 mM pH 6.0. After incubation of 96 h were measured the levels of phytoalexins in mesocotyls and the activity of defense-related enzymes in leaves. Treatment with peak II (0,09 KDa) induced phytoalexin 6.68% more than. Among the fractionn, 60-80% increased 76% compared to ASM. To peroxidase the peak IV (lower than 0,01 KDa) increased 21% the activity compared to control water, and 44% compared to ASM. For the fraction 0-20% the protein peak II (lower than 0,01 KDa) increased 39% the activity in relation to the fraction 0-20% and 19% in relation to decoct. The fraction, 80-100% increased 89% compared to, ASM. For the PPO the peak VI (lower than 0,01 KDa) from decoct decreased 88% the activity compared to ASM. For PAL the peak II (lower than 0,01 KDa) from fraction 0-20% was 91% higher than decoct. For chitinase 1% peak IV (lower than 0,01 KDa) from decoct was 68% higher than the ASM. It was possible to induce defense mechanisms in sorghum by the application of partially purified fractions from A. capillus-veneris, which can allow to obtain new molecules and development alternative methods to control plant diseases / A indução de resistência envolve a ativação de mecanismos de defesa latentes existentes nas plantas em resposta ao tratamento com agentes bióticos ou abióticos. A aplicação de extratos vegetais visando à indução de mecanismos de resistência é uma alternativa interessante ao controle químico, entretanto, nestes extratos pode ocorrer além da presença de indutores, a presença de supressores. Este trabalho teve por objetivo a purificação parcial, por meio de cromatografia de filtração em gel (CFG) e precipitação com sulfato de amônio (SA), de compostos presentes em decocto de avenca (Adiantum capillus-veneris), eficientes na indução de mecanismos de defesa em mesocótilos de sorgo, incluindo as fitoalexina deoxiantocianidinas e as proteínas peroxidase, polifenoloxidase, fenilalanina amônia-liase e quitinase, buscando selecionar frações potencialmente eficientes na indução de resistência em plantas. Decocto (EA 1%) de A. capillus-veneris foi fracionado com concentrações de sulfato de amônio de 0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80% e 80-100% e esses cortes foram submetidos à cromatografia de filtração em gel (CFG). Foram obtidos nove picos protéicos e um pico glicídico para EA 1% com massas moleculares variando de 0,61 à 0,01 KDa; no corte 0-20% foram obtidos dois picos protéicos e dois glicídicos, com massas moleculares menores que 0,01 KDa, e concentração de açúcares redutores variando de 4,1 a 17,5 µg mL-1; no corte 20-40% três picos protéicos (111,5 à 0,98 KDa) e cinco glicídicos (11,3 a 73,7 µg mL-1 de açúcares); no corte 40-60% dois picos protéicos (111,5 à 0,09 KDa) e dois glicídicos (5,6 a 7,5 µg mL-1); no corte 60-80% seis picos protéicos (menor que 0,02 KDa) e dois glicídicos (16,5 a 51,3 µg mL-1); e no corte 80-100% três picos protéicos (menor que 0,09 KDa). Mesocótilos de sorgo foram tratados com as frações provenientes da CFG, além do decocto a 1%, acibenzolar-S-metil (ASM) (125 mg. L-1 do i.a. como elicitor de referência) e tampão fosfato de sódio 10 mM pH 6,0, totalizando 42 tratamentos. Após incubação por um período de 96 h, avaliou-se dos teores de fitoalexinas nos mesocótilos e análises bioquímicas dos folíolos. O tratamento pico II (0,09 KDa) do EA 1% mostrou-se eficiente na indução de fitoalexinas, sendo superior em 6,68% ao ASM. Entre os cortes, 60-80% permitiu incremento de 76% em relação ao ASM. Para peroxidase o pico IV (menor que 0,01 KDa) do EA 1% incrementou 21% a atividade em relação a testemunha água e 44% ao ASM. Para os precipitados 0-20% o pico protéico II (menor que 0,01 KDa) promoveu incremento de 39% na atividade em relação ao corte 0-20% e 19% para o EA 1%. O precipitado 80-100% foi superior 89% ao ASM. Para polifenoloxidase o pico protéico VI (menor que 0,01 KDa) do EA1% reduziu 88% a atividade em relação ao ASM. Para fenilalanina amônia-liase o pico protéico II (menor que 0,01 KDa) do corte 0-20% foi 91% superior ao EA 1%. Para quitinase o pico protéico IV (menor que 0,01 KDa) do EA 1% foi 68% superior ao ASM. Foi possível induzir mecanismos de defesa em sorgo pela aplicação de frações parcialmente purificadas de A. capillus-veneris, o que pode permitir a obtenção de novas moléculas e o desenvolvimento de métodos alternativos para controle de doenças em plantas

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T13:41:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProteinaPr4Pimenteira.pdf: 1646990 bytes, checksum: 1e96ba54fdcdb21bc7aa6c3c948a6055 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-03T15:02:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProteinaPr4Pimenteira.pdf: 1646990 bytes, checksum: 1e96ba54fdcdb21bc7aa6c3c948a6055 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T15:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProteinaPr4Pimenteira.pdf: 1646990 bytes, checksum: 1e96ba54fdcdb21bc7aa6c3c948a6055 (MD5) Previous issue date: 2015-02-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Proteínas Relacionadas à Patogênese (PR) são induzidas em resposta ao ataque de patôgenos. Proteínas PR são agrupadas em 17 famílias, PR-1 a PR-17. Atividades antifúngicas e enzimáticas foram descritas para algumas dessas proteínas. Entre elas, a família PR-4 compõe as classes I e II de quitinases de plantas. Um clone de cDNA que codifica uma PR-4 da classe II, nomeada PnPR-4, foi isolado, em estudos anteriores, de Piper nigrum L. (pimenteira do reino). Esta é uma importante cultura para Brasil, principalmente no estado do Pará, no entanto sua produção tem diminuído devido à doença conhecida como podridão da raiz (Fusariose) causada pelo fungo Fusarium solani f. sp. Piperis. Neste trabalho, o cDNA da PnPR-4 foi usado para a produção da proteína recombinante, chamada de PnPR-4. O quadro de leitura aberta (ORF) da PnPR-4, foi amplificado por meio de ensaio de PCR e, em seguida a ORF foi ligada ao vetor de expressão pET-29(a) e introduzido, por eletroporação, em E. coli Rosetta (DE3). Nas células transformadas, a produção da proteína de interesse foi induzida por IPTG 1mM à 37°C por 5h. Após a produção, a atividade enzimática da proteina recombinante PnPR-4 foi avaliada pela detecção da atividade enzimática de quitinase em gel de poliacrilamida após eletroforese. A atividade foi avaliada em pH: 5.0 e pH:7.8 para demonstra a estabilidade da proteína recombinante. A massa molecular da PnPR-4 foi de 13.5 kDa, estando de acordo com outras PR-4 produzidas pelo sistema de expressão heterologa em sistema bacteriano. No ensaio de atividade enzimática, a PnPR-4 apresentou atividade quitinolitica, tanto em pH:5.0 ou pH:7.8. Esta é uma característica de chitinases de plantas, atividade em uma ampla faixa de pHs. Onde, a atividade ótima ocorre entre pH: 3.0 e 5.0. Na proteína recombianante, o pH ótimo foi 5.0, no entato ela teve atividade em pH 7.8, demonstrando a estabilidade da enzima. Estes resultados mostram que o sistema bacteriano de expressão heteróloga é eficaz para a produção da proteína recombinante PnPR-4, que é uma enzima com atividade quitinolitica e altamente estável. Assim, a PnPR-4 é uma nova enzima que pode ser usado em biotecnologia vegetal no combate contra fungos patogênicos da planta. / Pathogenesis-related (PR) proteins are plant proteins that are induced in response to pathogen attack. PR proteins are grouped into 17 independent families, PR-1 to PR-17. Antifungal and enzymatic activities have been described for some of these proteins. Among them, the PR-4 family comprises class I and II of plant chitinases. cDNA clone that encode a PR-4 of the class II, designated as PnPR-4, was previously isolated, in others studies, from Piper nigrum L. (black pepper). This is an important crop for Brazil, mainly in Pará state, however its production has decreased because root rot (Fusariose) disease caused by fungus Fusarium solani f. sp. Piperis. In this study, PnPR-4 cDNA clone was used for production of the recombinant protein, named PnPR-4, by bacterial expression system. Open Read Frame (ORF) of the PnPR-4 protein, was amplified from the cDNA clone by PCR assays, then ORF was linked in the expression vector pET-29(a) and introduced, by eletroporation, into E. coli Rosetta (DE3). The production of target protein, in transformed cells, was induced by 1 mM IPTG, at 37°C for 5h. After production, enzymatic activity of recombinant PnPR-4 was evaluated by Detection of Chitinase Activity after Gel Electrophoresis Polyacrylamide. Activity was evaluated in pH: 5.0 and pH: 7.8 for showing the stability of the recombinant protein. Molecular mass of Recombinant protein, PnPR-4, was 13.5kDa, according with others PR-4 produced by heterologous expression in bacterial system. In assay of enzymatic activity, PnPR-4 presented chitinolytic activity, both in pH: 5.0 or 7.8. This is a characteristic of plant quitinases, activity in a broad range of pHs. Where, optimal activity occurs between pH: 3.0 and 5.0. For PnPR-4, the optimal pH was 5.0, however in pH: 7.8 the recombinant protein had activity, demonstrating the stability of enzyme. These results showing that bacterial system of heterologous expression is effective for production of the recombinant protein PnPR-4, that it is an enzyme with chitinolytic activity and highly stable. Thus, PnPR-4, is now, a new enzyme which can be used in plant biotechnology in the combat against plant's pathogenic fungi.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 204.pdf: 1337649 bytes, checksum: 244b0e0500a3148923b324ca08b898bf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O lúpus eritematoso sistêmico juvenil (LESJ) é uma doença inflamatória crônica causada pela produção de autoanticorpos, que reconhecem como estranhos antígenos próprios do organismo, e possuem alta morbidade e mortalidade em relação à doença no adulto. Em sua patogênese estão envolvidos fatores ambientais, hormonais, imunológicos e genéticos. Estudos de associação genética demonstraram que a susceptibilidade ao lúpus é poligênica, e entre os genes envolvidos está o HLA-G que é responsável pela regulação da resposta imune. No estudo, foi analisada a expressão de isoforma da molécula HLA-G e observamos o perfil de resposta imune em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico juvenil. Os pacientes que participaram do estudo foram selecionados no serviço de Reumatologia do Hospital das Clínicas e foi coletado sangue periférico de 10 pacientes no momento ativo e inativo do LESJ. O estudo comparou a expressão do mRNA do HLA-G5, IL-10 e TNF, os níveis plasmáticos de sHLA-G e citocinas Th1, Th2 e Th17 entre os grupos com a doença ativa, inativa e o grupo de crianças saudáveis aplicando os testes de Mann-Whitney U e Kruskal-Wallis. Os resultados mostraram que pacientes com LESJ ativo apresentaram níveis elevados das citocinas IL-10 (p=0,004) e IL-6 (p=0,011), além de apresentarem expressão de mRNA do TNF mais elevada em relação ao grupo inativo (p0,05). Mesmo com número reduzido, foi possível caracterizar que houve mudança do perfil de citocinas durante a ativação do LESJ, e a relação dessa ativação com a expressão de HLA-G solúvel, além de servir como base para proposta de um modelo de regulação imunológica, que poderá ser validado em futuros experimentos

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-10-28T14:51:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T14:53:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T14:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Martins Pinheiro - 2011.pdf: 7792502 bytes, checksum: 0ce0321b227c4468c3f23f00f407370d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Blast (Magnaporthe oryzae) is considered the most important disease of rice fields. Due to the high variability of the pathogen's population, rice cultivars quickly have its race-specific resistance to blast broken. The identification for incorporating different resistance genes in improved and adapted cultivars, utilizing molecular tools, is one breeding strategy to find stable resistance in short period. The goal of this research was to identify the number of resistance genes and SRR molecular markers to the pathotypes IB-1 and IB-9 of M. oryzae, and characterize some enzymes related to the expression of resistance. The experiments were conducted under controlled conditions of green house and laboratories. After crossing cultivar Cica-8 and cultivar Metica-1, the populations F1, F2, BC1:1 and BC2:2 were sown in plastic trays containing five kg of soil fertilized. Each tray contained eight lines with ten plants per row. Each pathotype of M. oryzae inoculated thirty plants of resistant parents, thirty plants of susceptible parents, two hundred plants of F2 population, one hundred plants of BC1:1 population and one hundred plants of BC1:2 population. The isolates 1049 (IB-1) and 435 (IB-9) were cultivated on oat medium to produce the inoculum solution (3.105 conidia.mL-1). The inoculated plants were kept under high humidity condition at 28°C, during seven days. Evaluations were made identifying the number of resistant and susceptible plants. Eleven microsatellite markers were tested by PCR strategies, utilizing DNA of each parent (resistance and susceptible), F1 and F2 populations. PCR reactions were assembled according to the characteristic of each SSR prime. The fragments were separated by denature polyacrylamide (6%) gel to identify polymorphism. Linkage analysis of the RM7102 microssatelite marker was estimated using the MAP MAKER III software. The enzymatic characterization was studied through the extraction of proteins, before and after inoculation, during five consecutive days for the determination of the activity of β-1,3-glucanase (PR1) and peroxidase. Segregation in populations F2 resistant and susceptible presented ratio of 3 plants resistant to 1 plant susceptible. An SSR marker has been identified, RM7102, and linked to the resistance gene of cultivar Cica-8 to the pathotype IB-1. Peroxidase had little activity in all populations. The F2 populations, susceptible to both isolates, presented high β-1,3- glucanase activity. / A brusone (Magnaporthe oryzae) é considerada a doença mais importante dos arrozais. Devido à alta variabilidade da população do patógeno, cultivares de arroz rapidamente tem sua resistência à brusone sucumbida. A identificação e incorporação de diferentes genes de resistência em cultivares melhoradas e adaptadas, com o auxílio de técnicas moleculares, constitui-se em uma das estratégias na busca de resistência estável a serem adotadas. Tendo em vista o desafio acima colocado, este trabalho teve como objetivo determinar o número de alelos envolvidos na expressão de resistência do arroz a brusone, identificar marcadores microssatélites ligados a estes alelos e caracterizar a ação de duas enzimas relacionadas à patogênese. Os experimentos foram conduzidos sob condições controladas de casa de vegetação e laboratório. As gerações F1, F2, RC1:1 e RC1:2 foram semeadas em bandejas plásticas. Cada bandeja continha oito linhas, sendo dez plantas por linha. Cada patótipo de M. oryzae foi inoculado em trinta plantas do genitor resistente, trinta plantas do genitor suscetível, duzentas plantas da população F2, cem plantas da população RC1:1 e cem plantas da população RC1:2. Os isolados 1049, patótipo IB-1 e 435, patótipo IB-9, foram cultivados em meio de cultura aveia-dextrose-ágar para produção de solução de inóculo, à concentração de 3.105 conídios.mL-1. As plantas inoculadas foram mantidas sob alta condição de umidade e temperatura média de 28ºC, durante sete dias. As avaliações foram feitas identificando a proporção de plantas resistentes e suscetíveis. Para testar onze marcadores microssatélites selecionados, foram feitas extrações de DNA de cada genitor e das populações F1 e F2. As reações de PCR assim como os ciclos de amplificação foram montadas de acordo com a característica de cada microssatélite. As reações foram submetidas a gel poliacrilamida desnaturante (6%) para identificação de polimorfismo entre os genitores e as populações F1 e F2. A caracterização enzimática foi estudada através da extração de proteínas, antes e depois da inoculação, durante cinco dias consecutivos para a determinação da atividade enzimática de β-1,3-glucanase (PR1) e peroxidase. A segregação em ambas as populações F2 apresentou proporção de três plantas resistentes para uma planta suscetível. Foi identificado um marcador microssatélite, RM7102, ligado ao alelo de resistência da cultivar Cica-8 ao patótipo IB-1. Não foi possível detectar diferenças entre as populações F2 resistentes e F2 suscetível quanto atividade de peroxidase. A população F2 suscetível, para ambos os patótipos, apresentou alta atividade de β-1,3-glucanase, enquanto a atividade da mesma enzima nos genitores e população F2 resistente não mostrou aumento significativo.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / It is believed that papilloma formation is critical to pathogenesis of the upper digestive tract (UDT) squamous cell carcinomas (SCCs) in cattle, the so called papilloma-carcinoma syndrome. Due to the maintenance of papillomas for long periods of time in the UDT, due to immunosuppressive agents in bracken fern (Pteridium aquilinum), the keratinocytes of papilloma become target for carcinogens to promote carcinomatous transformation. Many evidences of the papilloma-carcinoma syndrome were observed in vitro. However, they have not been totally proved in vivo. The objectives of this study were therefore to assess key aspects of the pathogenesis of SCCs of the UDT in cattle naturally grazing in Pteridium aquilinum for long periods of time. For this, 168 initial epithelial lesions of the UDT were evaluated in 60 cattle with alimentary SCCs from areas with bracken fern. Developed papillomas had yielded more than 50% of the studied papillomas, with some in the growing phase (18.5%) and some carcinomatous transformation of papillomas (18.5%). A few papillomas were in regression (9%). The carcinomatous transformation of papillomas may represent morphological evidence of the need for papilloma formation in the development of alimentary SCCs. However, 72 squamous intraepithelial lesions (SILs) were also present in these bovines. Most SILs (70%) were moderate to severe dysplastic lesions and carcinomas in situ, with a significant amount of SCCs in an early stage of development. In humans, similar lesions are found in patients who chronically abuse of alcohol/tobacco. The SILs in the aerodigestive tract of humans are potentially malignant and can evolve to SCCs. The SILs of cattle in this study may therefore represent an alternative pathway for the development of SCCs in the UDT, without the necessity of carcinomatous transformation of papilloma to SCCs. The papillomatous origin of alimentary SCCs was also assessed by immunohistochemistry. Thirty SCCs of the cranial region of the UDT (including the base of tongue, pharynx/oropharynx and epiglottis) were evaluated about the acinar or ductal salivary origin using an anticytokeratin 7/8 antibody specific for simple epithelium. From the 30 SCCs examined, nine had morphological evidences of neoplastic transformation from a salivary duct. One of them was confirmed by immunohistochemistry to be of salivary origin. As papillomavirus requires a stratified epithelium for the formation of the papilloma, a confirmative SCCs from a simple salivary duct suggests that there is also no need of a papilloma to the development of SCCs of the UDT in cattle chronically grazing on bracken fern. In parallel, the degree of immunosuppression by lymphopenia, supposedly necessary for the maintenance of papillomas in the UDT, was evaluated in spontaneous cases of SCCs in the UDT of cattle. Alimentary papillomatosis was observed in all 40 cases studied. However, immunosuppression by lymphopenia was uncommon (three cases) and was not related to the degree of papillomatosis. The absence of lymphopenia in cattle with alimentary papillomatosis indicates that the mechanisms for maintenance of papilloma are not related to the amount of circulating lymphocytes. In conclusion, this study demonstrated an alternative route for the pathogenesis of SCCs in the UDT of cattle chronically poisoned by bracken fern and that the alimentary papillomatosis, observed in such cases, is not associated with lymphopenia. / Segundo a teoria da patogênese da síndrome papiloma-carcinoma, a formação do papiloma é o ponto crucial para o desenvolvimento dos carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS) de bovinos. A partir da sua manutenção por longos períodos no TAS, devido aos imunossupressores presentes na samambaia (Pteridium aquilinum), os ceratinócitos do papiloma em constante multiplicação se tornariam alvos para os carcinógenos da planta promoverem a transformação carcinomatosa. Muitas evidências da síndrome papiloma-carcinoma foram observadas in vitro. No entanto, elas ainda não foram totalmente comprovadas in vivo. Os objetivos deste estudo foram, portanto, avaliar aspectos fundamentais da patogênese da formação dos CCEs no TAS em bovinos que pastoreiam naturalmente por longos períodos áreas altamente infestadas por Pteridium aquilinum. Para isso, 168 lesões epiteliais iniciais foram avaliadas no TAS de 60 bovinos com CCEs alimentares provenientes de áreas com samambaia. Papilomas desenvolvidos perfizeram mais de 50% dos papilomas estudados, com alguns em crescimento (18,5%), em transformação carcinomatosa (18,5%) e poucos em regressão (9%). A transformação carcinomatosa de papilomas pode representar a evidência morfológica da necessidade do papiloma para a formação de CCEs. No entanto, 72 lesões intra-epiteliais escamosas (SILs) também estavam presentes no TAS desses bovinos. A maior parte das SILs (70%) representava lesões displásicas moderadas, acentuadas e CCEs in situ, com quantidade significativa de CCEs em estágio inicial. Em humanos, lesões semelhantes estão presentes em pacientes que abusam cronicamente do álcool/tabaco. As SILs no trato aerodigestivo de humanos são potencialmente malignas e podem evoluir para CCEs. As SILs nos bovinos do presente estudo podem, portanto, representar uma via alternativa de formação de CCEs no TAS, sem a necessidade da transformação do papiloma em carcinoma. A necessidade do papiloma para a formação de CCEs alimentares em bovinos também foi avaliada através da imuno-histoquímica. Trinta CCEs da região cranial do TAS (incluindo base da lingual, faringe/orofaringe e epiglote) foram avaliados quanto à origem acinar ou ductal salivar utilizando-se o anticorpo anti-citoceratinas 7/8 para epitélio simples. Dos 30 CCEs analisados, nove tinham evidências morfológicas de transformação neoplásica proveniente de ducto salivar. Destes, um foi confirmado pela imuno-histoquímica. Como o papilomavírus necessita de estratificação epitelial para a formação do papiloma, a confirmação de CCE de origem ductal salivar simples sugere que também não haja a necessidade do papiloma para o desenvolvimento de CCEs no TAS de bovinos que pastoreiam em samambaia. Paralelamente, o grau de imunossupressão por linfopenia, supostamente necessária para a manutenção dos papilomas, também foi avaliada nos casos espontâneos de CCE no TAS de bovinos de áreas com samambaia. Papilomatose alimentar foi observada em todos os 40 casos estudados. No entanto, imunossupressão por linfopenia foi incomum (três casos) e não estava relacionada com o grau de papilomatose. A ausência de linfopenia em bovinos com papilomatose alimentar indica que os mecanismos para a manutenção dos papilomas não estejam relacionados com a quantidade de linfócitos circulantes. Em conclusão, o presente estudo demonstrou haver uma via alternativa para a patogênese dos CCEs do TAS de bovinos intoxicados cronicamente por samambaia e que a papilomatose alimentar, vista nesses casos, não está associada com linfopenia.