Escherichia coli patogênicas aviárias (APEC) causam infecções extraintestinais em aves, que podem ser localizadas ou sistêmicas, denominadas colibacilose. O patotipo de APEC não está definido, mas vários genes de virulência são associados a essas cepas, como os genes plasmidiais iroN, ompT, hlyF, iss e iutA, propostos, em 2008, como preditores da virulência de APEC. Além dos genes de virulência conhecidos, outros fatores podem estar associados à patogenicidade bacteriana, como as maquinarias de secreção protéica denominadas Sistemas de Secreção. O Sistema de Secreção do Tipo 6 (T6SS), descrito em 2006, tem sido associado à virulência de cepas APEC. Este trabalho divide-se em duas partes: a primeira teve como objetivo avaliar a frequência dos genes iroN, ompT, hlyF, iss e iutA em 401 cepas aviárias de E. coli e sua relação com a patogenicidade in vivo dessas cepas. A segunda parte teve como objetivos verificar a frequência de genes componentes do T6SS (clpV, vgrG, icmF e dotU), em uma coleção de 187 cepas APEC; e, em algumas cepas positivas para os genes, verificar a expressão de um fenótipo relacionado ao sistema, bem como a expressão do efetor vgrG e da ATPase do sistema clpV2, além da secreção de proteínas, no meio de cultura e durante contato com células eucarióticas. Os resultados da primeira parte indicam que cepas com dois ou mais dos genes analisados tem maior probabilidade de serem patogênicas do que cepas com apenas um ou nenhum dos genes. Já os da segunda parte mostram que várias cepas apresentaram duas cópias de pelo menos um dos genes testados, e algumas delas apresentaram resistência à predação por D. discoideum. Não foram encontradas diferenças entre a expressão dos genes vgrG (1 e 2) e clpV2 em cultura pura ou em contato com células eucarióticas. Este trabalho apresenta a triagem de genes plasmidiais em uma grande coleção de amostras de Escherichia coli, e a primeira triagem de genes do T6SS em uma coleção de isolados APEC. / Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) causes extraintestinal infections in birds, which can be localized or systemic, known as colibacillosis. The APEC pathotype is still undefined, but several virulence genes are associated with these strains, as the plasmid-linked genes iroN, ompT, hlyF, iss and iutA, proposed in 2008 as APEC virulence predictors. Besides the known virulence genes, other factors may be associated with bacterial pathogenicity, such as the protein secretion machineries called Secretion Systems. Described in 2006, Type 6 Secretion System (T6SS) has been associated with virulence of APEC strains. This work is divided in two parts: the first aimed to evaluate the frequency of iroN, ompT, hlyF, iss and iutA genes in 401 avian strains of E. coli and its relationship with in vivo pathogenicity of these strains. The second part aimed to verify the frequency of T6SS genes (clpV, vgrG, icmF and dotU) in a collection of 187 APEC strains; and verify, in some positive strains, the expression of a phenotype related to the system, as well as the gene expression of effector vgrG and ATPase clpV2, besides the secretion of proteins into the culture medium and during contact with eukaryotic cells. The results of the first part of this study indicate that isolates harboring two or more of the genes analyzed were most likely to be pathogenic than strains harboring only one or none of the genes. The results of the second part show that several strains harbored two copies of at least one of the genes tested, and some of them were resistant to predation by D. discoideum. No differences were found between the expression of genes vgrG (1 and 2) and clpV2 in pure culture or in contact with eukaryotic cells. This work presents the screening of plasmidial genes in a large collection of Escherichia coli isolates, and the first screening of T6SS genes in a collection of APEC isolates.

Escherichia coli patogênicas aviárias (APEC) causam infecções extraintestinais em frangos conhecidas como colibacilose. A APEC MT78, ao contrário de outras linhagens APEC, foi capaz de invadir células não-fagocitárias no modelo de fibroblastos aviários (CEC-32). Considerando que as interações patógeno-hospedeiro envolvem modificações na abundância de proteínas e padrões de expressão, principalmente nas proteínas de superfície, nosso objetivo foi comparar o proteoma da MT78 crescida em meio de cultura celular com o proteoma de MT78 isolada de fibroblastos aviários infectados (condição de co-cultura). Desenvolvemos aqui a padronização das etapas de extração de proteínas totais, isolamento de células bacterianas do co-cultivo e análise proteômica de modo a obtermos uma análise proteômica global reprodutível e de qualidade. A análise da interação APEC MT78 e células CEC-32 por microscopia óptica e eletrônica de varredura revelou que essa cepa se associa à célula-alvo em um padrão de adesão localizada. A internalização de APEC MT78 pareceu ocorrer como resultado de uma interação entre bactéria-célula que dispara rearranjos do citoesqueleto de actina da célula-alvo, formando estruturas filo e lamelipodiais que são dependentes da viabilidade bacteriana. O reisolamento de células bacterianas intactas, observadas por microscopia eletrônica de transmissão, após o co-cultivo com CEC-32 foi obtido através da técnica de solubilização diferencial de membranas. As células bacterianas foram sonicadas e as proteínas digeridas em solução seguida de uma etapa de purificação. Nós identificamos 69 proteínas, distribuídas em 9 classes funcionais, incluindo as proteínas de membrana FimA, OmpA and OmpC. A proteína OmpA já foi associada a invasão do patógeno humano NMEC (neonatal meningitis-associated E. coli) à células HBMEC. Esses experimentos representam a primeira investigação proteômica global em E. coli patogênica aviária. As proteínas identificadas representaram diferentes rotas metabólicas, funções fisiológicas e diferentes localizações subcelulares. / In poultry, Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) cause localized extra- intestinal infections that often become systemic. APEC strain MT78 was able to invade non-phagocytic avian fibroblasts in vitro, raising the possibility that some APEC strains may invade epithelial cells and gain systemic access. Using light microscopy and scanning electron microscopy, we observed that viable MT78 strain associated with CEC-32 fibroblasts cells in clusters, and following association, MT78 internalization appeared to result from cytoskeleton rearrangements, such as filopodia and lamellipodia, in the eukaryotic membrane. Considering that host-pathogen interactions involve modifications of protein abundance and expression, mainly in surface proteins, we compared the proteome of MT78 harvested from culture medium with the proteome of MT78 isolated from infected avian fibroblasts (co-culture condition). For this purpose, we developed standard analytical procedures for global protein extraction and isolation of bacterial cells from infected CEC-32. Judged by transmission electron microscopy, we successfully reisolated intact APEC MT78 cells from CEC-32 fibroblasts using the differential membrane solubilization method. Bacterial cells were then sonicated and proteins digested in solution following a clean up procedure. We identified 69 proteins, distributed in 9 functional classes, including the membrane proteins FimA, OmpA and OmpC. The OmpA protein was already associated to invasion of the human pathogen called NMEC (neonatal meningitis-associated E. coli) to endothelial cell line HBMEC. Our results represent the first global proteomic investigation in APEC. The proteome of MT78 infecting avian fibroblasts may allow us to identify key proteins linked to the successful adhesion and/or invasion of host cells by APEC and thus throw light into the pathogenesis of avian colibacillosis.

Escherichia coli patogênicas aviárias (APEC) causam infecções extraintestinais em aves, que podem ser localizadas ou sistêmicas, denominadas colibacilose. O patotipo de APEC não está definido, mas vários genes de virulência são associados a essas cepas, como os genes plasmidiais iroN, ompT, hlyF, iss e iutA, propostos, em 2008, como preditores da virulência de APEC. Além dos genes de virulência conhecidos, outros fatores podem estar associados à patogenicidade bacteriana, como as maquinarias de secreção protéica denominadas Sistemas de Secreção. O Sistema de Secreção do Tipo 6 (T6SS), descrito em 2006, tem sido associado à virulência de cepas APEC. Este trabalho divide-se em duas partes: a primeira teve como objetivo avaliar a frequência dos genes iroN, ompT, hlyF, iss e iutA em 401 cepas aviárias de E. coli e sua relação com a patogenicidade in vivo dessas cepas. A segunda parte teve como objetivos verificar a frequência de genes componentes do T6SS (clpV, vgrG, icmF e dotU), em uma coleção de 187 cepas APEC; e, em algumas cepas positivas para os genes, verificar a expressão de um fenótipo relacionado ao sistema, bem como a expressão do efetor vgrG e da ATPase do sistema clpV2, além da secreção de proteínas, no meio de cultura e durante contato com células eucarióticas. Os resultados da primeira parte indicam que cepas com dois ou mais dos genes analisados tem maior probabilidade de serem patogênicas do que cepas com apenas um ou nenhum dos genes. Já os da segunda parte mostram que várias cepas apresentaram duas cópias de pelo menos um dos genes testados, e algumas delas apresentaram resistência à predação por D. discoideum. Não foram encontradas diferenças entre a expressão dos genes vgrG (1 e 2) e clpV2 em cultura pura ou em contato com células eucarióticas. Este trabalho apresenta a triagem de genes plasmidiais em uma grande coleção de amostras de Escherichia coli, e a primeira triagem de genes do T6SS em uma coleção de isolados APEC. / Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) causes extraintestinal infections in birds, which can be localized or systemic, known as colibacillosis. The APEC pathotype is still undefined, but several virulence genes are associated with these strains, as the plasmid-linked genes iroN, ompT, hlyF, iss and iutA, proposed in 2008 as APEC virulence predictors. Besides the known virulence genes, other factors may be associated with bacterial pathogenicity, such as the protein secretion machineries called Secretion Systems. Described in 2006, Type 6 Secretion System (T6SS) has been associated with virulence of APEC strains. This work is divided in two parts: the first aimed to evaluate the frequency of iroN, ompT, hlyF, iss and iutA genes in 401 avian strains of E. coli and its relationship with in vivo pathogenicity of these strains. The second part aimed to verify the frequency of T6SS genes (clpV, vgrG, icmF and dotU) in a collection of 187 APEC strains; and verify, in some positive strains, the expression of a phenotype related to the system, as well as the gene expression of effector vgrG and ATPase clpV2, besides the secretion of proteins into the culture medium and during contact with eukaryotic cells. The results of the first part of this study indicate that isolates harboring two or more of the genes analyzed were most likely to be pathogenic than strains harboring only one or none of the genes. The results of the second part show that several strains harbored two copies of at least one of the genes tested, and some of them were resistant to predation by D. discoideum. No differences were found between the expression of genes vgrG (1 and 2) and clpV2 in pure culture or in contact with eukaryotic cells. This work presents the screening of plasmidial genes in a large collection of Escherichia coli isolates, and the first screening of T6SS genes in a collection of APEC isolates.

Neste trabalho foi estuda a interação da E. coli patogênica aviária (APEC), agente etiológico da colibacilose aviária, e células não fagocitárias. A APEC é uma ExPEC (E. coli extra-intestinais), grupo que também inclui a UPEC (E. coli uropatogênica) e a NMEC (E. coli de meningite neonatal). Foi analisado o comportamento de 8 cepas APEC - MT78, IMT2470, A2363, UEL31, UEL13, UEL17, IMT5155, UEL29 - frente a duas linhagens de células não-fagocitárias, fibroblastos aviários CEC-32 e células endoteliais humanas EAhy926. Foi realizada a genotipagem de 33 genes associados à virulência, verificou-se capacidade de associação (adesão e invasão), de invasão e de multiplicação intracelular, de citotoxicidade e de ativação das caspases 3/7 das cepas após infecção de fibroblastos aviários. Foi observado que enquanto todas as cepas foram capazes de aderir aos fibroblastos aviários, somente a cepa MT78 foi capaz de invadí-los em níveis comparáveis à bactéria invasiva Salmonella Typhymurium SL1344. As cepas APEC não induziram ativação de capases 3/7, nem foram citotóxicas aos fibroblastos. Uma vez que a cepa invasiva, MT78, e a não invasiva, IMT2470, apresentam genótipos de virulência muito similares, foi realizado o estudo da expressão por RT-PCR dos genes de virulência da bactéria crescida com e sem fibroblastos aviários, por 3 h. Os resultados mostraram a expressão de adesinas, sideróforos e protectinas/estruturas de resistência ao soro para ambas as cepas na ausência e presença de fibroblastos. A análise da expressão dos genes fimH, ompA, ibeA e gimB pela técnica RT-qPCR revelou a repressão do gene fimH na MT78, mas indução do mesmo na IMT2470. Já as invasinas, gimB e ibeA, estavam induzidas em MT78 e reprimidas em IMT2470, enquanto o gene ompA estava sendo expresso em ambas as cepas. A expressão das invasinas gimB e ibeA explica em parte o fenótipo invasivo da MT78. No presente estudo também foi analisado o comportamento das 8 cepas APEC em relação ao perfil de associação, invasão e multiplicação intracelular ao infectarem células EAhy926. As cepas não mostraram capacidade de invadir as células mas apresentaram um nível de associação muito superior ao dos fibroblastos aviários (até 14 vezes superior para algumas cepas). Este trabalho mostrou que o ensaio in vitro com CEC-32 é um modelo adequado para o estudo da interação celular entre APEC e células eucarióticas e agregou mais conhecimento sobre o patotipo. / In this work the interaction between avian pathogenic E. coli (APEC), the etiological agent of avian colibacillosis, and non-phagocytic cells was studied. APEC is an ExPEC (extraintestinal E. coli), a group that also includes UPEC (uropathogenic E. coli) and NMEC (E. coli neonatal meningitis). We analysed the behavior of 8 APEC strains - MT78, IMT2470, A2363, UEL31, UEL13, UEL17, IMT5155, UEL29 - against two non-phagocytic cell lines, avian fibroblasts (CEC-32) and human endothelial cells (Eahy926). Strains were genotyped for 33 virulence associated genes, and investigated the association capacity (adhesion and invasion), the invasion ability, intracellular multiplication, cytotoxicity and activation of caspases 3/7 of the strains after infecting avian fibroblasts. While all strains were able to adhere to avian fibroblasts, only the strain MT78 was able to invade them at levels comparable to the invasive bacterium Salmonella Typhymurium SL1344. APEC strains could not induce activation of caspases 3/7, nor were cytotoxic to fibroblasts. Since the invasive MT78 and the non-invasive IMT2470 strains presented very similar virulence genotypes, the expression of virulence genes of the bacteria grown in the absence and presence of avian fibroblasts by 3 h was analysed by RT-PCR. Results showed the expression of adhesins, siderophores and protectins/serum resistance structures for both strains in the two culture conditions, with and without fibroblasts. Analysis of the expression of fimH, ompA, ibeA and gimB by RT-qPCR revealed the repression of fimH in MT78, but the induction in IMT2470. In relation to ibeA and gimB invasins, they were induced in MT78 but repressed in IMT2470, while the ompA gene was expressed in both strains. The expression of invasins partly explains the invasive phenotype of MT78. It was also analysed the behaviour of the strains in relation to the association profile, invasion and intracellular multiplication when infecting EAhy926 human endothelial cells. The strains showed no ability to invade endothelial cells but showed a high level of association (up to 14 times higher than for fibroblasts cells for some strains). This study showed that the CEC-32 in vitro model is suitable for the study of cellular interaction between APEC and eukaryotic cells, and added more knowledge about the pathotype.

O Brasil é um dos três maiores produtores mundiais de frutas, com uma produção que supera os 39 milhões de toneladas, com grande participação no mercado externo e crescente participação no mercado interno. Entretanto, não basta apenas ter quantidade, a qualidade e inocuidade do alimento são quesitos cada vez mais exigidos pelos consumidores. Tem-se conhecimento que produtos in natura podem apresentar contaminantes microbiológicos e a refrigeração é tipicamente utilizada para retardar o desenvolvimento microbiano nos produtos frescos. Microrganismos psicrotróficos, como Listeria monocytogenes, são capazes de se desenvolverem sob refrigeração. Esta bactéria é um importante patógeno causador de doenças transmitidas por alimentos e, devido a gravidade da doença e a elevada taxa de mortalidade em indivíduos suscetíveis, vem merecendo a atenção de microbiologistas de alimentos e profissionais da área da saúde. Nas frutas de baixa acidez, dentre as quais está o caqui (Diospyros kaki), L. monocytogenes pode ainda ter condições para sobreviver e se multiplicar, pois esta fruta não é submetida a tratamentos fitossanitários pós-colheita. Em muitos países, incluindo o Brasil, o caqui é consumido com a casca, logo, uma provável contaminação externa torna a situação ainda mais crítica com relação a inocuidade do produto. Assim sendo, este estudo teve como objetivos: (1) verificar a incidência de L. monocytogenes na casca de caquis (Diospyros kaki) \'Fuyu\' e \'Rama Forte\'; (2) estudar a sobrevivência e multiplicação daquele patógeno na casca e na polpa dessa fruta em diferentes tempos e temperaturas de incubação; (3) e obter parâmetros de crescimento (a duração da fase lag, o tempo de geração e a taxa de crescimento exponencial). A pesquisa de incidência de L. monocytogenes na superfície dos caquis foi realizada durante os meses de março a julho nos anos de 2005 e 2006. As amostras foram coletadas no comércio varejista na região de Campinas, interior do Estado de São Paulo, e no atacado, sendo o CEAGESP o local escolhido para esse último tipo de coleta. Um total de 582 frutos foram analisados pelo sistema Bax®, que é um método baseado na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A habilidade desse patógeno se desenvolver nas duas variedades de caqui estudadas também foi verificada na polpa e na casca das frutas em diferentes tempos de incubação e a temperaturas de 10ºC, 20ºC e 30ºC. Os parâmetros de crescimento de L. monocytogenes (duração da fase lag, taxa de crescimento exponencial e tempo de geração) foram obtidos a partir dos dados experimentais. A pesquisa de incidência revelou ausência de L. monocytogenes nas cascas das frutas. Os dados de crescimento obtidos para o patógeno indicam que este pode sobreviver e se multiplicar tanto na polpa quanto na casca dos caquis \'Fuyu\' e \'Rama Forte\', e que a baixa temperatura pode retardar o seu crescimento, mas não evitá-lo. / Brazil is among of the three biggest fruit producer in the world, with a production that is over 39 million tons, a relevant participation in the international market and an increasing participation in the domestic market. However, beyond quantity the quality and safety of food are issues equally demanded by consumers. It has been known that in natura products can contain microbiological contaminants and cooling is normally used to retard microbial development in fresh produce. Psychotrophic microorganisms, such as Listeria monocytogenes, are able to develop under refrigeration. This bacterium has been recognized as an important foodborne pathogen and, due to the severity of the disease and the high mortality in susceptible individuals, it has been deserving the attention of food microbiologists and health professionals. In fruits of low acidity, in which persimmon fruit is included, L. monocytogenes can have conditions to survive and to multiply, because it is not submitted to post harvest treatments. In many countries, including Brazil, persimmon is consumed with its skin, so an external contamination may make the situation even more critical with respect to the product safety. So the objectives of the present study were: (1) to verify the incidence of L. monocytogenes on the skin of \'Fuyu\' and \'Rama Forte\' persimmons (Diospyros kaki) fruits; (2) to study the survival and multiplication of that pathogen on the skin and in the pulp of this fruit at different times and temperatures of incubation; (3) to obtain kinetic values (lag phase duration, generation time and exponential growth). The incidence of L. monocytogenes on the skin of persimmon was verified from March to July in the years of 2005 and 2006. Samples were collected from retail in the city of Campinas, State of Sao Paulo, and from wholesale CEAGESP. A total of 582 fruits were analyzed using the Bax® System, which is a method based on Polymerase Chain Reaction (PCR). The ability of this pathogen to develop in both varieties of persimmons studied was also verified on the surface and in the pulp of the fruits at different times of incubation and at 10ºC, 20ºC and 30ºC. Kinetic values of L. monocytogenes (lag phase duration, generation time and exponential growth) were obtained from experimental data. The incidence survey showed the absence of L. monocytogenes on the skin of the fruit. The growth data showed that this pathogen can grow on the surface as well in the pulp of the \'Fuyu\' and \'Rama Forte\' persimmon fruits and that low temperatures can reduce the generation rate but does not inhibit its growth.

Os objetivos desta pesquisa foram observar a incidência de E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteropatogênica clásssica (EPEC) e E. coli invasora (EIEC) em alimentos e estudar algumas de suas propriedades. Foram estudadas 360 amostras de alimentos, de origem animal e vegetal, das quais foram isoladas 1351 cepas diferentes de E.coli. Todas foram sorotipadas para investigação daquelas pertencentes aos sorogrupos enteropatogênicos clássicos, e as cepas imóveis e lisinadescarboxilase negativas sorotipadas para identificação daquelas pertencentes aos sorogrupos invasores. A capacidade de produção das enterotoxinas LT e ST de todas as cepas de E. coli foi também investigada. As amostras patogênicas isoladas corresponderam a 1,6 do total de cepas de E.coli estudado. Os alimentos de onde foram isolados representaram 4,2% do total de amostras de alimentos estudados e 5,2% das amostras de alimentos contendo E. coli. Não foram isoladas amostras de EIEC nas amostras de alimentos estudadas. As amostras de EPEC isoladas pertenceram aos sorogrupos 026 e 0125. Entre as amostras de ETEC isoladas predominaram aquelas produtoras somente da toxina LT, não tendo sido isoladas amostras capazes de produzir as toxinas LT e ST simultaneamente. Nenhuma das amostras de ETEC pertenceu aos sorogrupos enterotoxigênicos mais frequentes, nem possuiu os fatôres de colonização CFA/I e CFA/II. No teste de resistência a drogas, a maioria das amostras enteropatogênicas mostrou-se sensível às drogas utilizadas. O modelo de fermentação de açúcares foi relativamente uniforme entre estas amostras, e bastante semelhante ao apresentado pelo gênero Escherichia. / The objectives of this research work were to study the incidence of enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteropathogenic. E.coli (EPEC) and invasive E. coli (EIEC) in foods, and to study some of their properties. 360 food samples, both of animal and plant origin, were studied and 1351 different E. coli strains were isolated. All of them were serotyped in order to identify those belonging to the serogroups enteropathogenic for children (EPEC). The strains which were non-motile and lysine descarboxylase negative were serotyped for the identification of those belonging to invasive serogroups. The capacity of all strains in producing enterotoxins ST and LT was also investigated. The isolated pathogenic strains corresponded to 1,6% of the E. coli strains tested. The foods from which they were isolated represented 4,2% of the total of food samples tested, and 5,2% of the food samples showing contamination with E. coli. No invasive strain was observed in the food samples tested. The isolated EPEC strains belonged to serogroups 026 and 0125. There was a prevalence of enterotoxin LT only producing strains among the ETEC ones, and no strain able to produce both enterotoxins LT and ST simultaneously was observed. None of them belonged to the usual enterotoxigenic serogroups, nor had colonization factors CFA/I and CFA/II. The antibiotic resistence test showed that the majority of pathogenic strains were sensitive to the drugs employed. The sugar fermentation model was relatively uniform among these strains, and very smilar to the one showed by the genus Escherichia.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T14:11:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 484351 bytes, checksum: 312994cb64033039a832571f86cbf2a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T14:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 484351 bytes, checksum: 312994cb64033039a832571f86cbf2a3 (MD5) Previous issue date: 2001-07-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Trinta e três isolados de Xanthomonas campestris pv. campestris, obtidos de oito diferentes brássicas, provenientes de diferentes regiões do Brasil e do exterior, foram analisados com base em caracterizações bioquímica, patogênica, sorológica e genética, objetivando verificar a existência ou não de relacionamentos quanto à origem geográfica e ao hospedeiro. No estudo bioquímico, foram realizados 22 testes, além da avaliação da atividade de esterase, em que com base no tamanho do halo e utilizando o teste de Scott Knott no nível de 5% de probabilidade, obtiveram-se cinco grupos de similaridade. Avaliando a capacidade de produção de bacteriocina, verificou-se que três isolados apresentaram antibiose contra sete outros. Avaliou-se, também, a sensibilidade dos isolados a alguns antibióticos e, com base na análise de agrupamento, foi possível a observação de três grupos distintos: o primeiro constituído por quatro isolados resistentes a 11 ou mais antibióticos; o segundo grupo composto por um isolado resistente somente a três antibióticos; e o terceiro grupo composto pelos demais isolados. Na caracterização patogênica, foi realizada a inoculação cruzada, de forma que os 33 isolados foram inoculados artificialmente em sete diferentes brássicas. Desses, 14 não mostraram especificidade quanto aos hospedeiros, enquanto os 19 isolados restantes apresentaram relativo grau de especificidade, uma vez que não causaram doença em uma ou mais das brássicas inoculadas. Para a análise sorológica, foram obtidos sete antissoros, pelos quais se reconheceram, no teste de imunodifusão dupla, 32 dos 33 isolados estudados, além de mostrarem especificidade quanto ao reconhecimento dos isolados de X. campestris pv. campestris. Na caracterização molecular, realizou-se a extração do DNA total de todos os isolados, seguida de amplificação pela técnica do RAPD. Procedeu-se, também, à extração do DNA plasmidial. Para avaliação do comportamento dos 33 isolados de X. campestris pv. campestris de diferentes origens e hospedeiros, com relação às diferentes análises realizadas, foram efetuadas análises estatísticas univariadas, para a avaliação da atividade de esterase, e multivariadas, para as demais, bem como a análise conjunta de todos os resultados. Com base nos resultados das caracterizações bioquímica, patogênica e sorológica, não se observou correlação da variabilidade dos isolados estudados com a origem geográfica e o hospedeiro do qual foram obtidos. Isso pode ter sido devido à constante introdução de novos isolados de X. campestris pv. campestris nas áreas de plantio, por meio de sementes contaminadas. / Thirty-three isolates of Xanthomonas campestris pv. campestris, obtained from eight different Brassica species and originated from distinct geographic regions in Brazil and other countries, were analyzed in terms of their biochemical, pathogenic, serological and molecular properties, in order to determine whether there is a relationship between isolate variability and host or geographic origin. Twenty-two biochemical tests, besides the determination of sterase activity, were carried out for the biochemical characterization. Five similarity groups were identified using Scott- Knot s test at 5% probability. The analysis of bacteriocin production indicated that three isolates displayed antibiosis against seven other isolates. Sensitivity to several antibiotics was also evaluated. Using cluster analysis, three distinct groups were identified: the first group consisted of four isolates which were resistant to 11 or more antibiotics; the second group consisted of one isolate which was resistant to only one antibiotic; the third group consisted of all the other remaining isolates. For the pathogenic characterization, all 33 isolates were cross-inoculated onto seven different Brassica species. Fourteen isolates did not display host specificity. The remaining 19 isolates displayed a relative degree of host specificity, since they did not induce disease in one or more of the inoculated species. Seven polyclonal antisera were raised for the serological analysis. In immunodiffusion tests, 32 out of the 33 isolates tested were recognized by these antisera. The antisera specifically recognized isolates of X. campestris pv. campestris. For the molecular characterization, total DNA was extracted from each isolate and used as a template for RAPD reactions. Plasmid DNA was also extracted. Together, the data from the biochemical, pathogenic, serological and molecular analyses failed to indicate a relationship among the isolates, hosts and geographic origin. This could be due to the repeated introduction of new isolates of X. campestris pv. campestris into different geographic regions, via contaminated seeds.

Introdução - O estado de portador assintomático ocorre quando o hospedeiro alberga o agente etiológico sem apresentar doença. Os fatores associados ao estado de portador de Neisseria não patogênica (NNP) e Neisseria meningitidis (Nm) diferem entre si, no entanto, as características epidemiológicas de ambas ainda são pouco exploradas. Objetivos - Estimar a prevalência, analisar possíveis diferenças em distintos estratos sociais, identificar o genótipo das cepas isoladas, assim como, investigar fatores associados ao estado de portador de Nm e de NNP em núcleos familiares residentes em Cuiabá-MT. Método - Estudo transversal de base populacional, desenvolvido de 07/2016 a 07/2017, incluindo todos os moradores de uma amostra probabilística estratificada composta de 243 núcleos familiares (domicílios) de área urbana, em bairros de alta e baixa renda do município de Cuiabá. Foram incluídos os domicílios com ao menos uma criança de 12 e 60 meses de idade. Todos os residentes nos domicílios selecionados foram submetidos a coleta de swab de orofaringe para o isolamento de Neisseria spp. Para a comparação de proporções utilizou-se o teste do qui-quadrado. Foram estimadas as razões de prevalências (RP) com seus respectivos intervalos de confiança 95% (IC95%) e para a investigação de fatores associados ao estado de portador de Nm e de NNP foram utilizados modelos de regressão de Poisson. O ajuste das variáveis no modelo final foi avaliado pelo teste de Hosmer e Lemeshow. Resultados: Foram estudados 1.050 indivíduos residentes em 233 núcleos familiares. A prevalência de portadores de Neisseria spp. foi de 10,6% (111/1.050), a de Nm de 2,4% (25/1.050) e de NNP de 8,2% (86/1.050). Dentre 111 portadores, 62 (56,0%) foram por N. lactamica, 25 (22,0%) por Nm, 21 (19,0%) por N. subflava., duas (2,0%) por N. mucosa e uma (1,0%) por N. polysaccharea. Das Nm, 76% (19/25) eram não grupáveis, 16% (4/25) eram do sorogrupo B, 4% (1/25) do sorogrupo C e 4% (1/25) do sorogrupo W. A prevalência de Nm em bairros de baixa renda foi de 2,8% (23/816) e nos de alta renda de 0,8% (2/234) (p=0,058), com uma razão de prevalência (RP) de 3,3 (IC95%:0,8-13,9). A prevalência de NNP em bairros de baixa renda foi de 8,2% (67/816) e em bairros de alta renda de 8,1% (19/234), com uma RP de 1,0 (IC95%:0,6-1,6). Permaneceram independentemente associados ao estado de portador de Nm após ajuste para conviver com tabagista no domicílio e por número de pessoas por dormitório: i) residir em bairro de baixa renda (RPajustada=2,6); ii) faixa etária de 5 a 14 anos (RPajustada=2,7); iii) faixa etária de 15 a 29 anos (RPajustada=2,4) e faixa etária de 30 e anos e mais (RPajustada=1,4). Após o ajuste para a infecção respiratória nos últimos cinco dias, apresentar asma, três ou mais pessoas por dormitório e sexo masculino, mostraram-se independentemente associados ao estado de portador de NNP: i) pertencer a faixa etária de cinco a 14 anos de idade (RPajustada=2,8) e de menores de cinco anos de idade (RPajustada=7,2); ii) residir em casa precária/quitinete (RPajustada=2,1). Conclusões - O contexto social influencia o estado de portador de Nm e NNP. As vacinas conjugadas meningocócicas podem prevenir doenças direta e indiretamente e tais resultados podem subsidiar a elaboração de estratégias de intervenção, especialmente para a identificação de grupos alvo de programas de vacinação. / Introduction - The asymptomatic carrier state occurs when the host harbors the etiologic agent without presenting disease. The associated factors with the carrier state of non-pathogenic Neisseria (NNP) and Neisseria meningitidis (Nm) differ among them, however, the epidemiological characteristics of both are still poorly explored. Objectives - To estimate the prevalence, to analyze possible differences in different social strata, to identify the genotype of the isolated strains, as well as to investigate associated factors with the Nm and NNP carrier state in family\'s households living in Cuiabá-MT. Methods - A cross-sectional study was conducted in 07/2016 a 07/2017, in the city of Cuiabá, including all residents of a stratified probabilistic sample which was composed by 243 urban households (families nucleus) with high and low income neighborhoods of the city of Cuiabá. Households with at least one child between 12 and 60 months age were included. All residents in the selected households were submitted to oropharynx swab collection for the isolation of Neisseria spp. To compare proportions the chi-square test was used. For the estimates of prevalence ratios (PR) and the respective 95% confidence intervals (95% CIs), for the analysis of the associated factors with Nm and NNP carrier state Poisson regression models were used. The adjustment of the variables in the final model was evaluated by the Hosmer e Lemeshow test. Results - A total of 1,050 individuals residing in 233 families nucleus were studied. The prevalence of Neisseria spp. was of 10.6% (111/1,050), Nm of 2.4% (25/1,050) and NNP of 8.2% (86/1,050). Among 111 carriers, 62 (56.0%) were by N. lactamica, 25 (22.0%) by Nm, 21 (19.0%) by N. subflava, two (2.0%) by N. mucosa and one (1.0%) by N. polysaccharea. Of the Nm, 76% (19/25) were non-grouping, 16% (4/25) were serogroup B, 4% (1/25) serogroup C and 4% (1/25) serogroup W. Prevalence of Nm in low-income neighborhoods was 2.8% (23/816) and high-income (0.8%) (2/234) (p=0.058), with a prevalence ratio of 3.3 (95% CI:0.8-13.9). The prevalence of NNP in low-income neighborhoods was 8.2% (67/816) and in high-income neighborhoods of 8.1% (19/234), with a PR of 1.0 (95% CI:0,6-1,6). They remained independently associated with Nm state after adjusting to live with a smoker at home and by number of people per dormitory: i) living in a low-income neighborhood (PRadjusted=2.6); ii) age group of 5 to 14 years (PRadjusted=2.7); iii) age range of 15 to 29 years (PRadjusted=2.4) and age group of 30 years and over (PRadjusted=1.4). After adjusting for respiratory infection in the last five days, presenting asthma, three or more people per dormitory and male sex, were independently associated with NNP status: i) belonging to the age group of five to 14 years of age (PRadjusted=2.8) and of children under five years of age (RPadjusted=7.2); ii) residing in a precarious home/kitchenette (PRadjusted= 2.1). Conclusions - The social context influences the carrier state of Nm and NNP. Meningococcal conjugate vaccines can prevent diseases directly and indirectly and such results may support the development of intervention strategies, especially for the identification of target groups of vaccination programs.

Pela utilização de métodos bioquímicos, biofísicos, de tipagem sorológica e de visualização das proteínas totais bacterianas, isolados de surubim Pseudoplatystoma corruscans, tilápia Oreochromis niloticus e pacu Piaractus mesopotamicus, foram caracterizados, identificados e sua virulência determinada. Dentre as linhagens de referência, o isolado de surubim caracterizou-se como sendo Plesiomonas shiguelloides e os demais isolados de tilápia e pacu foram identificados como Aeromonas hydrophila, todos pertencentes à família Vibrionaceae. Os isolados de tilápia e pacu caracterizaram-se como linhagens virulentas, resistentes aos antibióticos ampicilina, amoxicilina, lincomicina, novobiocina, oxacilina, penicilina, rifampicina e trimetoprim+sulfametoxazol, em ensaios de antibiograma realizados em meio YEA que evidenciaram que as linhagens isoladas de peixes são resistentes a oito das dezessete substâncias antimicrobianas testadas pelo método de difusão em disco. Essas características são compatíveis com as apresentadas pelo espécime tipo de A. hydrophila. Ambas as linhagens quando cultivadas em meio YEA compartilharam a mesma banda de aproximadamente 33,61kDa com o espécime tipo para A. hydrophila. Em meio enriquecido com glucose, a banda compartilhada entre elas teve peso molecular aproximado de 144,28kDa. Os testes de aglutinação sorológica evidenciaram nestas duas linhagens a presença de antígenos estáveis ao calor do tipo O. A técnica de dupla imunodifusão de Ouchterlony demonstrou que o antígeno preparado a partir do isolado de tilápia é a linhagem de A. hydrophila mais indicada para ser utilizada em estudos visando o desenvolvimento de uma vacina polivalente. / Bacteria isolated from surubim Pseudoplatystoma corruscans, tilapia Oreochromis niloticus e pacu Piaractus mesopotamicus, were characterized and identified by biochemical, biophysical, serology, and SDS-PAGE, and their virulence observed. The strain isolated from surubim was characterized as Plesiomonas shigelloides. The other strains isolated from tilapia and pacu were Aeromonas hydrophila. The isolated A. hydrophila strains presented virulence and resistance against the follow antibacterial substances: ampicillin, amoxicillin, lincomicin, novobiocin, oxacillin, penicillin, rifampin and trimetoprim+sulfametoxazole. Both strains when cultivated in YEA medium shared with the A. hydrophila type strain a similar protein band of 33,61kDa. In a medium supplemented with glucose, only one protein exhibiting relative molecular mass of 144.28 kDa, was shared by the type strains isolated from fish and the type strain. The serology tests revealed that all isolated strains presented heat-stable O-antigens. The Ouchterlony double-immunodiffusion showed that the antigen prepared from the tilapia strain possessed surface antigens similar to A. hydrophila type strain and the strains isolated from pacu. This suggested the possibility of development and usage of a common or polyvalent vaccine for A. hydrophila among tilapia and pacu or other freshwater fish species.

A ferrugem alaranjada da cana-de-açúcar, causada pelo fungo Puccinia kuehnii, apesar de ser centenária, foi detectada no Brasil apenas no final de 2009, após causar uma grande epidemia na Austrália em 2000. Pela recente detecção, não há estudos que comparam as populações brasileiras de P. kuehnii e a reação, em condições controladas, de importantes variedades de cana-de-açúcar ao patógeno. Assim, este trabalho analisou e comparou o comportamento de variedades de cana-de-açúcar inoculadas com seis diferentes populações de P. kuehnii coletadas em diferentes locais no Brasil, além de verificar a variabilidade patogênica e genética destas populações. Para isso, inoculou-se populações de P. kuehnii coletadas em Piracicaba (SP), Araras (SP), Ribeirão Preto (SP), Paranacity (PR), Nova Alvorada do Sul (MS) e Dourados (MS). As variedades de cana-deaçúcar utilizadas foram: SP89-1115, SP81-3250, RB85-5156, RB86-7515, RB92- 5211, RB96-6928, CTC 3, CTC 6, CTC 8, CTC 9, CTC 13, CTC 15 e CTC 18. Em todas as inoculações avaliaram-se os períodos de incubação e de latência da doença, a severidade, o número total de pústulas e a porcentagem de pústulas abertas. Além disso, as regiões ITS e IGS de todas as populações de P. kuehnii foram sequenciadas e comparadas entre si e com sequências do patógeno da Austrália, Papua Nova Guiné, Indonésia, Filipinas, Japão, China, Guatemala, Panamá, Jamaica, Costa Rica, Nicaraguá, México e Estados Unidos. Os resultados mostraram que a porcentagem de pústulas abertas é o melhor parâmetro para separar e classificar as variedades de cana-de-açúcar quanto ao grau de resistência ao patógeno. O período de incubação da doença variou de 7 a 10 dias e o período de latência, de 9 a 19 dias. As populações de P. kuehnii não constituem diferentes raças virulentas e a população coletada em Araras (SP) é uma raça mais agressiva do patógeno. Para as regiões IGS e ITS, as seis populações de P. kuehnii utilizadas apresentam sequências idênticas entre si e entre todas as sequências de P. kuehnii do continente americano depositadas no \"GenBank\". Para estas duas regiões, as populações utilizadas no trabalho diferem de sequências da Austrália, China, Filipinas, Havaí (EUA), Indonésia, Japão, Papua Nova Guiné e Samoa. A disseminação do patógeno além da Ásia e Austrália parece ter ocorrido após a epidemia da doença na Austrália em 2000. No entanto ainda não se sabe ao certo como o patógeno teria chegado à América em 2007 e à África em 2011. / Despite being a century disease, sugarcane orange rust, caused by the Puccinia kuehnii, was only reported in 2009 Brazil, after having caused an epidemic in Australia in 2000. Because it was recently detected in Brazil, there are no studies that compare P. kuehnii populations in Brazil and the reaction, under controlled conditions, of important sugarcane varieties to the pathogen. This study compared the performance of sugarcane varieties inoculated with six different populations of P. kuehnii collected in different sites in Brazil. We also studied the pathogenic and genetic variability of these pathogens populations. In order to carry out this study, P. kuehnii populations were collected in the municipalities of Piracicaba (SP), Araras (SP), Ribeirao Preto (SP), Paranacity (PR), Nova Alvorada do Sul (MS), and Dourados (MS). The sugarcane varieties used were: SP89-1115, SP81-3250, RB85- 5156, RB86-7515, RB92-5211 RB96-6928, CTC 3, CTC 6, CTC 8, CTC 9, CTC 13, CTC 15, and CTC 18. For all inoculations, we evaluated the incubation period, latent period, disease severity, total number of pustules, and percentage of open pustules. Furthermore, the ITS and IGS rDNA regions of all P. kuehnii populations were sequenced and compared with sequences from Australia, China, Costa Rica, Guatemala, Indonesia, Jamaica, Japan, Mexico, Nicaragua, Papua New Guinea, the Philippines, Panama, and the United States. The results showed that the percentage of open pustules is the best parameter to separate and classify the resistance of sugarcane varieties to the pathogen. The incubation period of the disease ranged from 7 to 10 days and the latent period from 9 to 19 days. There are no P. kuhenii virulent races and the population collected in Araras (SP) is a more aggressive race. For the IGS and ITS regions, the six P. kuehnii populations have identical sequences which were identical to all P. kuehnii sequences found in the American continent deposited at the GenBank accession. The P. kuehnii used in this study is different from populations found in Australia, China, Hawaii (USA), Indonesia, Japan, Papua New Guinea, the Philippines, and Samoa. The pathogen dissemination over Asia and Australia seems have occurred after the 2000 epidemic in Australia. However, it is unknown still how the pathogen reached America in 2007 and Africa in 2011.