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Avaliação da patogenicidade e do mecanismo de resistência à meticilina em amostras de Staphylococcus sppOLIVEIRA, Wagner Luis Mendes de 26 February 2013 (has links)
Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:34:56Z
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Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE; CNPq / Os estafilococos fazem parte da microflora da pele e mucosa humana e podem se
comportam como patógenos oportunistas. Staphylococcus aureus é a espécie
responsável por grande número de infecções principalmente em ambiente hospitalar
devido à diversidade de fatores de virulência que abriga. Staphylococcus Coagulase
Negativo (SCN) vem se destacando como patógeno principalmente associado a
colonização de biomateriais utilizados em procedimentos médicos. Como agravante
essas bactérias têm capacidade de adquirir mecanismos de resistência aos
antimicrobianos. Neste trabalho analisamos mecanismos de patogenicidade (produção
de biofilme e presença de genes toxigênicos) e resistência à meticilina (classificação do
cassete SCCmec e produção de PBP2a) em Staphylococcus spp. de infecções
nosocomiais de um hospital universitário da cidade de Recife, Pernambuco, Brasil. A
maioria das amostras de S. aureus e SCN revelaram-se icaAD positivas e produtoras de
biofilme no meio Agar Vermelho Congo-AVC. O loco hlgCB que codifica a γ-toxina
foi encontrado em 42/45 (93,9%) S. aureus e 24/49 (49%) SCN; lukSF que codifica a
leucocidina de Panton-Valentine-PVL, em 13/45 (28,9%) S. aureus e 06/49 (12%)
SCN; e tst que codifica a toxina da síndrome do choque tóxico-TSST-1, foi encontrada
em três das 45 amostras de S. aureus e uma das 49 amostras de SCN analisadas.
Sessenta e oito dos 84 isolados analisados foram classificados nos seguintes tipos de
SCCmec: SCCmec tipo II (17%), SCCmec tipo III (26%), SCCmec tipo IV (34,5%) e
SCCmec tipo V (3,5%); em 19% dos isolados o tipo do SCCmec não foi determinado e
nomeados como SCCmec Não Definido (ND). 61% da população estudada revelou-se
resistente à oxacilina e 39% sensível nos testes de Concentração Inibitória Mínima
(CIM) e MHA suplementado com oxacilina e a presença da PBP2a foi detectada por
Western blot com antissoro anti-PBP2a em 76% dos isolados. Em conclusão foram
encontrados os genes da γ-toxina e da leucocidina de Panton-Valentine e do gene do
choque tóxico em SCN. A presença de genes toxigênicos e genes associados
epidemiologicamente com cepas da comunidade, em cepas nosocomiais de SCN, sugere
transferência horizontal de genes e representa um importante incremento do potencial
patogênico dos SCN no ambiente hospitalar. Foi demonstrado que a presença dos genes
icaAD não está diretamente associada a formação de biofilme em testes fenotípicos
(AVC e PCT), embora o meio AVC seja mais eficaz nessa determinação que o teste em
PCT, principalmente se otimizado pela substituição de componentes na sua formulação
(meios básicos e fonte de açúcar) e no inóculo (suplementação com glicose e NaCl). A
diversidade de elementos SCCmec e a ocorrência de linhagens clonais associadas
epidemiologicamente com a comunidade em ambiente hospitalar sugere que isolados de
SCN podem atuar como reservatórios de elementos SCCmec contribuindo para
emergência de novos clones meticilina resistentes e corrobora com a dissolução da
classificação de cepas comunitárias e nosocomiais.
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Regulace penicilin vazebného proteinu Pbp2a u Streptococcus pneumoniae / Regulation of penicillin-binding protein Pbp2a in Streptococcus penumoniaeKubeša, Bohumil January 2021 (has links)
Regulation of penicillin-binding protein Pbp2a in Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae is an extracellular human pathogen that encodes a unique eukaryotic-type Ser/Thr protein kinase StkP in its genome. This enzyme is involved in other cellular processes, such as cell division and cell wall synthesis, through phosphorylation with its substrates. A transmembrane protein MacP has been identified as a substrate of StkP. It is an activator of penicillin-binding protein PBP2a, which is involved in the synthesis of peptidoglycan with its transpeptidase and transglycosylase activities. We found that MacP is phosphorylated by the protein kinase StkP at positions T32 and T56. We confirmed that proteins MacP and PBP2a interact with each other and that phosphoablative and phosphomimetic mutations of the major phosphorylated residues of the MacP protein do not affect the interaction with PBP2a and do not fundamentally affect the function of MacP in vivo. Furthermore, we showed that the ∆macP mutation is synthethically lethal with the ∆pbp1a mutation, confirming that MacP is an activator of the PBP2a protein. MacP is located in the cell septum and interacts with a number of S. pneumoniae cell division proteins. Keywords: Streptococcus pneumoniae, cell division, MacP, PBP2a, phosphorylation
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Desenvolvimento de kit diagnóstico rápido para detecção de resistência à meticilina em cepas de estafilococosChagas, Marne Coimbra Batalha January 2011 (has links)
Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-13T12:38:59Z
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O surgimento de resistência a antimicrobianos em bactérias está se agravando ano
após ano, constituindo-se um problema de saúde pública em hospitais e centros de
tratamento ao redor do mundo. No Brasil, a resistência a meticilina em
Staphylococcus aureus(MRSA) chega a 29 % dos casos detectados anualmente.
Atualmente, a metodologia convencional para a identificação de MRSA pode levar
48 horas, portanto, este trabalho tem por objetivo o desenvolvimento de um teste
para diagnóstico rápido baseado na tecnologia de imunocromatografia de fluxo
lateral usando um anticorpo específico contra a proteína PBP2a, a qual confere
resistência ao Staphylococcus aureus, permitindo a identificação em minutos, a
partir de colônias isoladas. O anticorpo monoclonalanti-PBP2a foi purificado e
empregado em um processo de conjugação a microesferas de látex coloridas para a
implementação do teste rápido. Os resultados iniciais demonstraram a capacidade
do anticorpo de reconhecer a PBP2a em amostras de MRSA, porém foram
observados problemas de inespecificidade que deverão ser solucionados para dar
confiabilidade ao teste proposto. / The emergence of antibiotic resistance in bacteria is getting worse year after year,
becoming a public health problem in hospitals and treatment centers around the
world. In Brazil, methicillin resistance in Staphylococcus aureus(MRSA) reaches
29% of cases detected annually. Currently, the conventional methodology for
identification of MRSA may take 48 hours of lengthyphenotypical tests, so this work
aims at developing a rapid diagnostic test based onthe lateral flow
immunochromatography protocol using a specific antibody against the protein
PBP2a, which confers the methicillin-resistance phenotype to Staphylococcus
aureus, allowing a prompt identification from isolated colonies. The monoclonal
antibody anti-PBP2a was purified and used in a process of conjugation to colored
latex microspheres for the implementation of the rapid test. Initial results
demonstrated the ability of the antibody to recognize the PBP2a in samples of
MRSA, but inespecificity issues will have to be solved to improve reliability of the test
proposed.
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Vývoj imunologických testů pro detekci nebezpečných bakteriálních patogenůŠmídová, Lada January 2017 (has links)
The aim of the thesis was to develop an immunoassay for the detection of dangerous bacterial pathogen, methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). MRSA infections cause global problems in health facilities which provide acute and follow-up care in inpatient and outpatient parts. That is why early and rapid diagnosis and targeted thereapies are very important for the subjects. E. coli was purified using the QIAquick PCR kit Purificatin isolated bacterial constructs, which were subsequently purified and dialyzed. The recombinant protein PBP2a in different concentrations was applied to a nitrocellulose membrane in the form of lines. Furthermore was performed optimized blot-line method for the detection of specific antibodies against the recombinant antigen PBP2a in the classes IgG, IgA and IgM. Several different concentrations of the conjugate Goat Anti-human IgG-AP, Goat Anti-human IgA-AP or Goat anti-Human IgM-AP were used for the detection. The color intensity of each line of the strip was evaluated with Immunoblot software. The measured values were used to determine diagnostic sensitivity, specificity and overall diagnostic match. Further testing of precision was carried out under repeatability conditions (intra-assay) and reproducibility (inter-assay). Precision of the method was expressed by coefficient of variation. As the most suitable for the manufacture of a IgG kit was determined the concentration of the antigen PBP2a from 0.30 mg/ml to 0.45 mg/ml and the concentration of IgG conjugate from 1:1500 to 1:1800. For class IgA as the most appropriate antigen was determined concentration PBP2a from 0.40 mg/ml to 0.52 mg/ml and conjugate concentrations of IgA from 1:500 to 1:1000. The coefficient of variation under repeatability conditions for the entire range of the IgG class is 10.09 %, and for IgA is 8.91 %. Variation coefficient reproducibility conditions for the entire range of the IgG class is 9.23 % and for IgA is 9.60 %. Precision of the method under conditions of repeatability and reproducibility for classes IgG and IgA meets the criteria for the manufacture of a diagnostic kit. Titration results showed that particular batch of cards made of nitrocellulose membrane coated with antigen PBP2a must always be verified on the panel of reference samples and the values of concentrations (for both antigen and conjugate) should be set according to the needs, but differently for the class of immunoglobulins IgG and IgA.
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Pesquisa de anticorpos anti-PBP2a em pacientes colonizados por Staphylococcus Aureus resistente à meticilina (MRSA)Müller, Rodrigo January 2009 (has links)
Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-28T19:21:24Z
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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As infecções causadas por Staphylococcus aureusresistentes à meticilina (MRSA) são
temidas em virtude da dificuldade de seu tratamentoe da elevada morbidade associada.
A PBP2a (penicillin binding protein 2a), enzima responsável pela síntese da parede
celular em MRSA, apresenta baixíssima afinidade porbeta-lactâmicos. Pelo fato de a
PBP2a estar localizada na superfície externa, a mesma seria acessível ao sistema imune.
Durante as infecções causadas por MRSA, pouco se sabe se o hospedeiro infectado ou
colonizado desenvolve anticorpos anti-PBP2a e se osmesmos seriam protetores ou não.
O presente projeto tem por finalidade avaliar a presença e níveis de anticorpos anti-PBP2a em um grupo de 56 pacientes colonizados por MRSA e investigar se estes
anticorpos seriam protetores ou não. Os resultados gerados permitiram observar que
71% das amostras analisadas apresentaram anticorposanti-PBP2a pelo teste ELISA.
Estas amostras foram submetidas à Western blot paraconfirmação, demonstrando que
46% das amostras possuíram anticorpos anti-PBP2a. Após estes resultados, as amostras
positivas foram submetidas à purificação para avaliar a cinética de crescimento de
MRSA. Foi observado que houve ligeira redução do crescimento bacteriano entre
amostras de soro com anticorpos MRSA comparadas comas de soro com anticorpos
anti-MSSA (PBP2a negativos). Por conseguinte avaliamos a curva de crescimento de
MRSA em presença de imunoglobulinas purificadas de soro de pacientes colonizados
por MRSA, (quantificação bacteriana). Observamos que houve uma redução drástica do
crescimento bacteriano em presença destas imunoglobulinas. Os resultados obtidos
indicaram que: (i) pacientes colonizados por MRSA podem produzir anticorpos anti-PBP2a e (ii) estes anticorpos podem conferir proteção contra MRSA. Estes dados
parecem indicar que uma potencial vacina anti-PBP2apoderia ser efetiva para
prevenção de infecções causadas por MRSA, como também para o emprego de
imunoterapia passiva para o tratamento de pacientesinfectados por este patógeno. / Infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are feared
because of the difficulty of their treatment and the high associated morbidity. The
PBP2a (penicillin binding protein 2a), the enzyme responsible for cell wall synthesis in
MRSA, presents low affinity for beta-lactams. Because of the PBP2a is located on the
external surface, it would be accessible to the immune system. During the MRSA
infections, little is known whether the infected orcolonized host can produce antibodies
anti-PBP2a and whether these antibodies would be protective or not. This project aims
to assess the presence and levels of anti-PBP2a in a group of 56 patients colonized by
MRSA and investigate whether these antibodies wouldbe protective or not. The results showed that 71% of the samples presented anti-PBP2aantibodies in ELISA. These samples which were subjected to Western blot for confirmation, it was demonstrated
that 46% of the samples presented antibodies anti-PBP2a. After these results, the
positive samples were subjected to purification to assess the MRSA growth kinetics. It was observed that there was a slight reduction in bacterial growth between serum samples with antibodies and MRSA compared to those of the serum with anti-MSSA (PBP2a negative). Therefore, the curve of growth ofMRSA was evaluated in the
presence of purified immunoglobulins from the serumof patients colonized by MRSA
(bacterial quantification). We observed that there was a drastic reduction in bacterial
growth in the presence of immunoglobulins, thus demonstrating that these antibodies
could have a protective action. These results indicated that: (i) MRSA colonized
patients can produce antibodies against PBP2a and (ii) these antibodies can be
protective against MRSA. These data suggest that a potential vaccine anti-PBP2a could
be effective for prevention of infections caused byMRSA and for the use of passive
immunotherapy in the treatment of patients infectedby this pathogen.
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