Title: Is maternal hypotension during pregnancy and/or posterior located placenta associated with increased risk of stillbirth? Design: A retrospective case-controlled study comparing a group of stillbirths with a live born control group matched for maternal age, baby gender, gestational age and year of birth. The purpose of this study was to ascertain whether hypotensive women or women with a posterior located placenta are at increased risk of stillbirth. Two Australian tertiary referral obstetric hospitals were chosen as participating hospitals for this study. All cases with a discharge diagnosis of stillbirth over a five year period at these hospitals were identified and considered as cases for inclusion in the study. An attempt was made to match each case with two controls. After exclusions there were 124 cases and 243 controls. Blood pressure (BP) readings throughout pregnancy were extracted from the medical record of each subject, and summary 'exposure' measures were created. These included: diastolic and systolic readings as well as mean arterial pressure taken at the initial (booking BP), minimum, calculated average, and final reading prior to the birth. Placental position, as determined by midtrimester ultrasound, was also collected. Results: This study found that low Diastolic Blood Pressure (DBP) readings (between 60-70mmHg) throughout pregnancy were associated with a statistically significant increased risk of stillbirth. This trend was seen from the initial reading at booking (OR 1.83 95% CI 1.0-3.2, p=0.03) through to the last taken before the birth (OR 1.53 95% CI 0.9-2.5, p=0.09) including the calculated average over the course of the pregnancy (OR 1.61 95% CI 1.0-2.6, p=0.05) and minimum observed during the pregnancy (OR 2.94 95% CI 0.98-8.8, p=0.05). In addition, this study found a minimum diastolic reading of less than 60mmHg carries a significant risk of stillbirth with a crude odds ratio of 3.5 (95% CI 1.18-10.41, p=0.02). This study did not show a statistically ignificant association of systolic hypotension with stillbirth. However, after combining both systolic and diastolic blood pressures to calculate the mean arterial blood pressure (MAP) the analysis did suggest that women with a minimum MAP between 73-83mmHg were at increased risk of stillbirth (OR 1.69 CI 1.02-2.81, p=0.04). Furthermore, this study found that three MAP readings of less than 83.3 during the course of the pregnancy carries almost twice the risk of stillbirth (adjusted OR 1.99) even after adjusting for race, gravidity, parity, BMI and SGA (and matching for maternal age, gestational age, gender and year of birth.) Women who have a posterior located placenta were statistically more likely to suffer a stillbirth than women who had a placenta in any other position (crude OR 1.64) and this estimate was largely unaffected by adjustment for blood pressure and other putative risk factors (adjusted OR 1.67) Conclusion: In conclusion, this is the first study which specifically examined a stillborn population in order to explore whether maternal hypotension and posterior located placenta impact negatively on stillbirth incidence and the results of this study suggest that both maternal hypotension and posterior located placenta are probably independent contributory risk factors for stillbirth. This means that maternity care providers should closely manage and monitor progress of women who are hypotensive during pregnancy or those whose placenta is posterior; and that effective management strategies need to be developed to care for these women. / Thesis (Ph.D.)--School of Population Health and Clinical Practice, 2007.

Title: Is maternal hypotension during pregnancy and/or posterior located placenta associated with increased risk of stillbirth? Design: A retrospective case-controlled study comparing a group of stillbirths with a live born control group matched for maternal age, baby gender, gestational age and year of birth. The purpose of this study was to ascertain whether hypotensive women or women with a posterior located placenta are at increased risk of stillbirth. Two Australian tertiary referral obstetric hospitals were chosen as participating hospitals for this study. All cases with a discharge diagnosis of stillbirth over a five year period at these hospitals were identified and considered as cases for inclusion in the study. An attempt was made to match each case with two controls. After exclusions there were 124 cases and 243 controls. Blood pressure (BP) readings throughout pregnancy were extracted from the medical record of each subject, and summary 'exposure' measures were created. These included: diastolic and systolic readings as well as mean arterial pressure taken at the initial (booking BP), minimum, calculated average, and final reading prior to the birth. Placental position, as determined by midtrimester ultrasound, was also collected. Results: This study found that low Diastolic Blood Pressure (DBP) readings (between 60-70mmHg) throughout pregnancy were associated with a statistically significant increased risk of stillbirth. This trend was seen from the initial reading at booking (OR 1.83 95% CI 1.0-3.2, p=0.03) through to the last taken before the birth (OR 1.53 95% CI 0.9-2.5, p=0.09) including the calculated average over the course of the pregnancy (OR 1.61 95% CI 1.0-2.6, p=0.05) and minimum observed during the pregnancy (OR 2.94 95% CI 0.98-8.8, p=0.05). In addition, this study found a minimum diastolic reading of less than 60mmHg carries a significant risk of stillbirth with a crude odds ratio of 3.5 (95% CI 1.18-10.41, p=0.02). This study did not show a statistically ignificant association of systolic hypotension with stillbirth. However, after combining both systolic and diastolic blood pressures to calculate the mean arterial blood pressure (MAP) the analysis did suggest that women with a minimum MAP between 73-83mmHg were at increased risk of stillbirth (OR 1.69 CI 1.02-2.81, p=0.04). Furthermore, this study found that three MAP readings of less than 83.3 during the course of the pregnancy carries almost twice the risk of stillbirth (adjusted OR 1.99) even after adjusting for race, gravidity, parity, BMI and SGA (and matching for maternal age, gestational age, gender and year of birth.) Women who have a posterior located placenta were statistically more likely to suffer a stillbirth than women who had a placenta in any other position (crude OR 1.64) and this estimate was largely unaffected by adjustment for blood pressure and other putative risk factors (adjusted OR 1.67) Conclusion: In conclusion, this is the first study which specifically examined a stillborn population in order to explore whether maternal hypotension and posterior located placenta impact negatively on stillbirth incidence and the results of this study suggest that both maternal hypotension and posterior located placenta are probably independent contributory risk factors for stillbirth. This means that maternity care providers should closely manage and monitor progress of women who are hypotensive during pregnancy or those whose placenta is posterior; and that effective management strategies need to be developed to care for these women. / Thesis (Ph.D.)--School of Population Health and Clinical Practice, 2007.

A bioengenharia de tecidos baseia-se no uso de moléculas bioativas, células-tronco e biomateriais para reparação de tecidos e/ou órgãos. Biomateriais podem ser classificados de acordo com sua origem em sintéticos ou biológicos. Biomateriais biológicos podem ser produzidos por decelularização, que visa a remoção de células da matriz extracelular (MEC), a qual deve manter sua integridade química e física. Placentas são órgãos de grande interesse na bioengenharia de tecidos visto que são descartadas após o parto e possuem grande volume de matriz extracelular. Métodos de decelularização podem ser classificados em químicos, físicos e enzimáticos. Todos conhecidamente causam alterações na MEC, sendo que a associação deles é comumente utilizada. Este trabalho comparou diferentes protocolos e estabeleceu um método mais favorável para a decelularização de placentas caninas, visando a produção de um biomaterial para futuras aplicações clínicas. Inicialmente ambas as porções - materna e fetal - das placentas foram submetidas à 10 protocolos, que avaliaram variáveis como concentração e tempo de incubação em detergentes, diferentes gradientes de temperatura e a influência da perfusão versus imersão das soluções, na MEC remanescente. Com base na transparência do tecido e na ausência de núcleo celular em cortes histológicos, dois protocolos foram selecionados (I e II). Além dos critérios já mencionados, ambos os protocolos foram comparados quanto à quantidade de DNA remanescente na MEC decelularizada e à permanência e distribuição de algumas das proteínas da matriz. O detergente SDS foi o mais eficaz na remoção de células, embora não tenha sido suficiente para promover uma decelularização tecidual completa. O congelamento prévio das placentas requereu um maior tempo de incubação posterior das amostras nos distintos detergentes. Ambos métodos de perfusão e imersão foram eficazes na remoção das células, embora grande concentração de proteínas do citoesqueleto tenham permanecido retidas na matriz. As amostras processadas pelo protocolo I (SDS 1%, 5mM EDTA + 50mM TRIS + 0,5% antibiótico, e Triton X-100 1%) apresentaram maior preservação da organização estrutural da MEC quando comparadas àquelas processadas de acordo com o protocolo II (que diferiu do anterior pela utilização de solução contendo 0,05% tripsina ao invés de 50mM TRIS), esse último método entretanto foi o que melhor removeu as células das placentas, conforme observado em lâminas histológicas e demonstrado pela menor concentração de DNA. Tanto as porções materna quanto fetal submetidas à ambos protocolos, mantiveram as proteínas laminina, fibronectina e colágeno tipo I. O colágeno tipo III foi observado somente na porção fetal. Conclui-se que o protocolo II foi o mais eficaz no processo de decelularização de placentas caninas tendo promovido a remoção do conteúdo celular e diminuição da concentração de DNA na MEC remanescente. No entanto é necessário otimizar o tempo de incubação das placentas em soluções enzimáticas visando maior conservação do arranjo da matriz decelularizada. A análise da capacidade da MEC decelularizada por tal método para ser utilizada em bioengenharia de tecidos ainda deve ser avaliada in vitro e in vivo / Tissue engineering is based on the use of bioactive molecules, stem cells and biomaterials to repair tissues and/organs. Biomaterials can be classified according to their origin in synthetic or biological. Biological biomaterials can be produced by decellularization wich aims at removing cells from the extracellular matrix (ECM), while maintain its chemical and physical integrity. Placentas are organs of great interest in tissue engineering due to the fact that they are discarded after birth and present large amount of ECM. Decellularization methods can be classified into chemical, physical and enzymatic. All of them are known to cause changes on ECM; thus their association has been commonly used. This study compared different protocols and established a more favorable method for decellularization of canine placentas, aiming at the production of a biomaterial for clinical applications. Initially both placental portions maternal and fetal were subjected to ten different protocols that evaluated variables such as concentration and time of incubation in detergents, different temperatures and the influence of perfusion versus immersion of solutions in the remaining ECM were analysed. The analysis of tissue transparence and absence of cellular nuclei in histological slices stained with HE, led to selection of two protocols (I and II). Besides the before mentioned criteria, both protocols were compared according to the amount of DNA that remained in the ECM decelullarized and the distribution of some ECM proteins. SDS was the most effective detergent for cell removal although it was not enough to complete decellularization. The freezing of placentas led to larger periods of samples incubation in different detergents. Both perfusion and immersion methods were capable of removing cells, although large concentration of cytoskeletal proteins remained entrapped in the matrix. Samples subjected to protocol I (1% SDS, 5 mM EDTA + 50 mM TRIS + 0,5% antibiotic, and 1% Triton X-100) better preserved the structural organization of ECM when compared to those subjected to protocol II (wich differed from the first by the use of 0,05% trypsin instead of 50mM TRIS). However, protocol II optimized cell removal as observed in histological slices and decreased the DNA concentration. Both maternal and fetal portions, subjected to both protocols, retained the laminin, fibronectin and collagen type I proteins. Collagen type III was identified only in fetal portion. In conclusion, protocol II was more effective in the decellularization of canine placentas than protocol I; it removed cellular content and decrease the concentration of remaining DNA in remaining ECM. The ability of ECM decellularized by such method to be applied in tissue engineering strategies still need to be evaluated in vitro and in vivo

O habitat natural da capivara é a América Central e do Sul, em áreas que vão desde o Panamá até a Argentina, o que inclui a região Andina. Estes animais são herbívoros, diurnos, semi-aquáticos, gregários e dóceis; eles formam grandes rebanhos e são potencialmente importantes para: a produção de carne de ótima qualidade, couro e óleo, amplamente utilizado na medicina popular. Apesar de seu presuntivo valor econômico, estes animais foram até o momento pobremente estudados, mesmo no que tange às suas características reprodutivas. Neste trabalho, foi dada especial atenção ao estudo macro e microscópico da placenta de termo destes animais, órgão de fundamental importância para o sucesso do desenvolvimento fetal, manutenção da gestação e garantia de expansão dos rebanhos. Foram utilizadas 11 placentas de termo de capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris). Nossos resultados mostraram uma placenta vitelina e uma placenta corioalantoidiana coexistindo juntas até o final da gestação, exibindo uma forma discóide irregular e fixada à região mesometrial do útero pelo pedúnculo da placenta. A placenta corioalantoidiana é formada por estruturas irregulares que caracterizam os lobos e lóbulos placentários; à microscopia eletrônica de transmissão a barreira placentária é do tipo hemomonocorial. O principal componente celular da placenta, o trofoblasto, está em grande parte representado pelo sinciciotrofoblasto, tanto nas regiões de trocas, o labirinto que constitui a região lobular, como nos interlóbulos. Na região de trocas o trofoblasto é polarizado, apresenta uma composição de organelas semelhante à encontrada em células com intensa atividade de síntese protéica e endocitose. A análise geral dos componentes vasculares e sanguíneos, materno e fetal da placenta, também sugere que a circulação placentária é do tipo contracorrente. Em todos os aspectos morfológicos estudados, a placenta da capivara foi bastante semelhante à observada em cobaias por outros autores. / South and Central America are the natural habitat of the capybara, in the areas that go from Panama to Argentina, including the Andes region. These animals are herbivorous, diurnal, semi-aquatic, gregarious and docile; they live in large groups and are potentially important for the production of high quality meat, skin and oils, largely utilized in popular medicine. In spite of their economical value for the South and Central America populations, capybaras have not yet been properly studied, not even regarding their reproductive features. In this study, special attention has been given to the macroscopic and microscopic analyses of the mature placenta, an organ of fundamental importance to the fetal development and the maintenance of the gestation. Eleven mature placentas of capybara (Hydrochaeris hydrochaeris) were used. Our results show a vitelline and a chorio - allantoic placenta, coexisting until the end of the gestation, and exhibiting an irregular discoidal shape, fixed to the mesometrial region of the uterus by the stem placenta. The chorio - allantoic placenta is formed by irregular structures that characterize the placental lobes and lobules and, under electron microscopy, the materno - fetal barrier is hemomonochorial. The main cellular placental component is largely represented by the syncytiotrophoblast in the exchange areas of the labyrinth, which form the lobular region, as well as in the interlobular area. In the labyrinthic region the trophoblast is polarized and presents typical organelles of cells, which express intense protein synthesis activity and endocytosis. The general analysis of the vascular and blood components of the placenta was suggestive of a countercurrent placental circulation. Our morphological results also show that the capybara placenta has a similar structure to that found in the guinea pig by other authors.

Integrinas são glicoproteínas transmembrânicas envolvidas na adesão célula-célula e célula-proteina da matriz extracellular (ECM) que participam da migração e fusão de células trofoblásticas gigantes (TGC) com células do epitélio materno no placentoma bovino e interagem com inibidores teciduais de metalloproteinases (TIMPs), considerados importantes reguladores das metaloproteinases de matriz (MMPs), que são reconhecidas como passo limitande para ação de enzimas que atuam no remodelamento da ECM na implantação e na gestação. Uma vez que as integrinas são consideradas responsáveis pela manutenção da arquitetura tecidual e que as MMPs podem regular a degradação e a reconstituição da ECM necessária para a invasão do trofoblasto, temos como objetivo verificar uma possível relação das integrinas com alterações placentárias comumente observadas em gestações de animais clonados (SCNT). Para avaliar a funcionalidade placentária, a expressão do lactogênio placentário (PL) e do antígeno Ki-67 foram também verificadas. Placentomas bovinos foram coletados e divididos em 3 grupos: 1) início (n = 6) e 2) final (n = 3) da gestação de animais derivados de monta natural (n=9) e final da gestação de animais clonados (n=8), clones machos (n=4) e clones fêmeas (n=4). As proteínas foram localizadas por imuno-histoquímica indireta, exceto as subunidades de integrina &alpha;6, &beta;1, &alpha;V e &beta;3 que foram localizadas por imunofluorescência. A especificidade dos anticorpos e expressão protéica foi confirmada por Western blot e a expressão do RNAm foi avaliada por meio de RT-PCR e PCR em tempo real quantitativo. As células positivas para a laminina, TIMP-2, Ki-67 e lactogênio placentário (PL) foram quantificadas e para comparação entre os grupos. A proteína das subunidades &alpha;6 do receptor de integrina e &beta;1 foi observada nos animais clonados e não clonados nos estromas materno e fetal e porção basal dos epitélios materno e fetal e foi co-localizada com a laminina. A proteína das subunidades &alpha;V e &beta;3 do receptor de integrina foi observado nos estromas materno e fetal e foi co-localizado com a fibronectina. O TIMP-2 foi exclusivamente e especificamente localizado nas TGCs no início e final da gestação de animais clonados e não clonados, mas não houve diferença significativa em sua expressão. O PL apresentou a mesma localização do TIMP-2 em todos os grupos analisados. Houve diferença significativa (p<0,05) entre 270d e clones ao se comprar a expressão relativa do RNAm da subunidade de integrina &beta;1 e do lactogênio placentário e ao se comparar a expressão protéica por western blot da laminina e do TIMP-2. Foi possível observar diferença significativa (p<0,05) entre o grupo controle e o grupo de animais clonados ao se quantificar o número de TGCs positivas para a laminina e para o lactogênio placentário. Apesar de algumas diferenças terem sido observadas na expressão de integrinas e de proteínas da ECM, sugere-se que a interação das integrinas com seus ligantes da ECM a termo não é um determinante da sobrevivência neonatal de bovinos clonados. Contudo, outros estudos são necessários para esclarecer se estas proteínas representam elementos chave na placentação de bovinos clonados em início de gestação. As diferenças observadas na expressão de integrinas e principalmente do PL entre clones fêmeas e machos sugerem possível influência de genes associados ao cromossomo sexual ou imprinting. / Integrins are transmembrane glycoproteins involved in cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion and signal transduction. They participate in the migration and fusion of trophoblast giant cells (TGC) with uterine epithelial cells in bovine placentomes, and interact with tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs), considered important regulators of matrix metalloproteinases (MMPs). MMPs are rate-limiting enzymes degrading ECM proteins during tissue remodeling around embryo implantation, pregnancy and parturition. Since integrins are considered to be responsible for the maintenance of the architecture within tissues and MMPs may also regulate degradation and reconstitution of ECM required for trophoblast invasion, we aimed to verify a potential relation of integrins with common placental alterations observed in cloned animals (SCNT). To verify the placental functionality, expression of placental lactogen (PL) and Ki-67 antigen was also assessed. Bovine placentomes were collected and divided into 3 groups: 1) early and 2) late gestation derived from natural mating (n=9) and 3) late gestational bovine clones (n=8), also divided into male clones (n=4) and female clones (n=4). All proteins were localized by indirect immunohistochemistry except for integrin subunits &alpha;6, &beta;1, &alpha;V and &beta;3 that were shown by immunofluorescence. The antibody specificity and protein expression were confirmed by Western blot. Expression of mRNA was evaluated using RT-PCR and quantitative Real Time PCR. Positive cells for laminin, TIMP-2, Ki-67 and placental lactogen were quantified for comparisons among groups. The protein of integrin receptor subunits &alpha;6 and &beta;1 was observed in both cloned and non-cloned animals in the fetal and maternal stroma and at the basal membrane of maternal and fetal epithelial cells, co-localized with laminin and with collagen IV. The integrin receptor subunits &alpha;V and &beta;3 were observed in the fetal and maternal stroma, co-localized with fibronectin. TIMP-2 was specifically and exclusively localized in TGC in the early and term gestation in both cloned and non-cloned animals. PL has shown the same localization of TIMP-2 in all analyzed samples. Statistically significant differences (p<0,05) between term gestation of non-cloned and cloned animals were observed comparing the mRNA expression of integrin &beta;1 subunit and placental lactogen and the protein expression of laminin and TIMP-2. There were also statistically significant differences (p<0,05) between non-cloned and cloned animals in the number of laminin and placental lactogen positive cells. Despite some differences in integrin and ECM proteins expression, our results suggest that the interaction between integrins and their ECM ligands in term gestation is not a determinant for the survival rate of newborn cloned calves. However further studies are necessary to elucidate if integrins represent key elements in the early placentation of SCNT bovines. The differences found in the integrin and principally in the placental lactogen expression between female and male cloned calves suggests the influence of sex-chromosome associated genes or imprinting.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-19T13:51:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_RayanaLuna_2016 (1).pdf: 8156604 bytes, checksum: 38605ef2e80adea3732612e363d4a7d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T13:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_RayanaLuna_2016 (1).pdf: 8156604 bytes, checksum: 38605ef2e80adea3732612e363d4a7d2 (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / FACEPE / O desenvolvimento de uma gestação saudável depende de uma adequada circulação uteroplacentária. Abortos recorrentes (AR), óbito fetal, partos prematuros, pré-eclâmpsia (PE) e trombofilia materna (TM) são algumas das patologias que interferem nessa rede vascular. São muitos os fatores que podem influenciar na tênue interface entre o parto de um feto saudável, um parto prematuro ou até mesmo um aborto. Uma variedade de moléculas como citocinas, proteínas de adesão e fatores de crescimento podem ter um papel importante durante o desenvolvimento fetal assim como em todo processo gestacional. Desta forma, desequilíbrio entre vias de sinalização assim como as vias inflamatórias têm sido relacionadas com o desencadeamento do processo abortivo. O fator de crescimento placentário (PGF) é um marcador importante para identificar deficiência placentária que pode ser ligada a PE. Mulheres com PE tendem a ter níveis inferiores de PGF circulantes quando comparadas a mulheres com gestações saudáveis. A inflamação aguda é comumente associada com injúria fetal assim como a inflamação crônica tem sido associada com a morte fetal e aborto. Estudos epigenéticos e epidemiológicos têm demostrado que indivíduos nascidos de mães que tiveram complicações durante a gravidez possuem maior risco de desenvolverem patologias diversas na vida adulta como acidente vascular cerebral, cardiopatias, obesidade e infertilidade. O Sildenafil, um inibidor de fosfodiesterase tipo-5 com características vasodilatadoras tem ajudado na terapia de restrição de crescimento fetal (RCF). Recentemente Sildenafil, tem sido demostrado por apresentar-se como anti-inflamatório em diversos modelos animais de patologias humanas como esclerose múltipla, hiperplasia prostática, doenças cardiovasculares, pulmonares entre outras. Por outro lado a Heparina de baixo peso molecular tem sido utilizada como tratamento para casos de AR quando o diagnóstico é associado ou não com TM, apesar deste tipo de esquema terapêutico não ser considerado eficaz em muitos casos. O presente estudo se propôs a investigar alvosterapêuticos em modelos animais de AR e PE, através da avaliação do tratamento com Sidenafil ou/com Heparina para a prevenção do processo abortivo assim como a investigação da influência da sinalização via-PGF na formação da vascularização cerebral fetal. Tratamento com Sildenafil sozinho ou tratamento conjunto com Heparina protegeu contra a mortalidade fetal, diminuiu a sinalização inflamatória na placenta assim como melhorou a saúde dos fetos de camundongo expostos a altas doses de Lipopolissacarídeos (LPS) como modelo para perda gestacional. PGF foi identificado em áreas importantes do cérebro de fetos geneticamente normais, no período de gestação média assim como também foram identificados níveis compatíveis do receptor 1 para fator de crescimento vascular endotelial (VEGF): Flt-1. A via que envolve o PGF mostrou-se essencial para o desenvolvimento vascular cerebral saudável. A proteção placentária e por consequência manutenção da saúde do feto é de suma importância para que a gestação chegue a termo e resulte no parto de um indivíduo saudável e sem riscos à saúde da mãe. Esse trabalho traz informações detalhadas de como acontece a modulação durante a vascularização cerebral durante o desenvolvimento em animais geneticamente normais assim como em camundongos PGF-/-. Adicionalmente, demostra como a terapia utilizando Sildenafil isoladamente ou em combinação com Heparina pode diminuir o perfil inflamatório e/ou trombótico do sistema fisiológico gravídico e desta forma prevenir o processo abortivo, mantendo a saúde fetal. / The development of a healthy pregnancy depends on proper uteroplacental circulation. Recurrent miscarriages (RM), fetal death, pre-term labour, preeclampsia (PE) and maternal thrombophilia (MT) are some of the pathologies that may affect with arrangements of this circulation network. There are many factors that can influence the maternal-fetal interface and aberrant gene expression at the site of this interface can result in premature birth or even miscarriage. A variety of molecules including a variety of cytokines, adhesion proteins and growth factors play an important role during fetal development as well as throughout gestation. Indeed, an imbalance of signaling and inflammatory signaling pathways have been associated with the initiation of the abortive process, regardless of the origin of this event. Placental growth factor (PGF) is an important marker to identify placental defects that can be linked to PE. Women with PE tend to have lower levels of circulating PGF when compared to women with healthy pregnancies. Acute inflammation is often associated with fetal injury and chronic inflammation has been associated with abortion and fetal death. Additionally, epigenetic and epidemiological studies have shown that individuals born to mothers who have complications during pregnancy have a higher risk of developing various diseases in adulthood such as: stroke, heart disease, obesity and infertility. Sildenafil, a phosphodiesterase type-5 inhibitor with vasodilating characteristics has proved beneficial in fetal growth restriction (FGR) pathologies. Recent studies have shown that Sildenafil plays an anti-inflammatory agent in a wide range of pathologies in animal models of human diseases such as: multiple sclerosis, prostatic hyperplasia, cardiovascular, and pulmonary diseases among others. Low molecular weight heparin (LMWH) has been used as a treatment for RM cases when diagnosis is associated or not with MT. Despite these facts, recently published meta-analyses have demonstrated that treatments using LMWH are not superior. This study proposed to investigate new therapeutic approaches in animal models of RM and PE. This was accomplished by evaluation of the effectiveness of Sildenafil and/or Heparin in the prevention of fetal mortality/abortion as well as the investigation of the influence of PGF signaling pathway in the formation of fetal brain vasculature. Treatment with sildenafil; alone or in combination with heparin protected against fetal mortality and decreased inflammatory signaling in the placenta, as well as improved the health of the mouse fetuses exposed to high doses of lipopolysaccharide (LPS). PGF was detected in important areas of the brain in genetically normal fetuses and the average period of gestation was also identified as compatible to vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor: Flt-1. The pathway involving PGF was found to be essential for healthy vascular development in the brain. Therefore, early placental protection and therefore maintaining the fetus' health is of paramount importance if the pregnancy comes to term and results in the birth of a healthy individual and without risks to health of the mother. This work provides detailed information into critical events that occur during the development of the cerebral vasculature both in genetically normal as well as in PGF -/- mice. Additionally, this work demonstrates how therapies with sildenafil alone or in combination with heparin can reduce the inflammatory status and/or thrombotic physiological systems of pregnancy and thereby prevent fetal mortality, thus maintaining fetal health.

A placenta de ruminantes possui uma estrutura macroscópica uniforme, baseada em áreas especializadas de aposição e proliferação das membranas materno-fetais: os placentônios. Mostrando um papel fundamental para o desenvolvimento da prenhez, estasestruturas tem sido muito estudadas em várias espécies domésticas de interesse comercial. Particularmente no búfalo, entretanto, não há dados consistentes quanto à sua capacidade funcional desta estrutura , ou até mesmo, a arquitetura dos vilosem um placentônio individual e sua troca eficaz de metabólitos que caracteriza o processo de placentação. Um estudo macroscópico prévio da placenta do búfalo (Bubalus bubalis bubalis) mostrou que o número de placentônios é de 92 aproximadamentedurante a prenhez, mas a morfologia microscópica e o desenvolvimento de tais estruturas não foram estudadas em todas as fases da prenhez. Neste trabalho, estudou-se os placentônios de búfalos prenhez nos meses 4-5, 7-8, 9-10, os quais forammorfologicamente caracterizados. Os espécimes foram seccionados e fixados por imersão em paraformoldeído à 4% ou em glutaraldeído à 2,5% em tampão fosfato tamponado 0,1M para microscopia de luz e eletrônica, respectivamente. Após 24 horas, osplacentônios foram recortados e processados para inclusão em paraplast, historesina ou em resina Spurr. As secções foram coradas por HE, Azul de Toluidina, Tricrômicos de Gomori e Mallory, Azul de Metileno com Fucsina Básica e submetidos àreação de PAS. Em todos períodos da prenhez encontrou-se placentônios de diferentes tipos e tamanhos, com uma estrutura macroscópica similar à do placentônio bovino, porém mais achatado. Aparentemente, durante o progresso da prenhez, osplacentônios mantiveram a mesma morfologia macroscópica mas com dimensões aumentadas. À microscopia de luz, a interface entre o trofoblasto e o epitélio uterino é extremamente irregular, formando uma árvore fetal vilosa que se conecta com o epitélio materno. O trofoblasto consiste em uma camada simples de células individuais onde células binucleadas estão interpostas com as células trofoblásticas. O eixo da árvore vilosa é formado fundamentalmente por tecido conjuntivofrouxo, considerando que o eixo interno das pregas epiteliais apresentam um tecido conjuntivo rico em fibras colágenas. Quando comparadas às fases precoces de prenhez, as árvores vilosas dos meses 9-10, são mais ramificadas e a aposição dainterface materno-fetal é mais próxima. Ainda, na junção materno-fetal no final da prenhez, encontrou-se regiões de hematomas e eritrofagocitose o que sugere transferência de ferro para o feto. À microscopia eletrônica de transmissão pudemosobservar uma intensa vascularização do vilo fetal, as células binucleadas apresentaram REG (retículo endoplasmático granular) e Complexo de Golgi bem desenvolvidos, indicando comprometimento com síntese protéica e vesículas eram abundantes. Ascélulas epiteliais trofoblásticas mostraram-se unidas por complexos juncionais, principalmente desmossomas, núcleos de contorno esférico e até dois nucléolos bastante evidentes. Superfícies celulares com microvilos também foram observadas. / The ruminant placenta has an uniform gross structure based on specialized areas of feto-maternal membrane apposition and proliferation: the placentons. By exerting a fundamental role for the development of the pregnancy, these structures have been very well studied in several domestic species of commercial interest. Particularly in the buffalo, however, there is no consistent data with relationship the functional capabilities of this structure or even, the villus architeture in the individual placenton and their metabolic exchange efficacy that characterize the placentation process. One previous macroscopy study on the placenta of buffalo (Bubalus bubalis bubalis) has shown that the number of the placentons is 92 aproximately during pregnancy, but the fine morphology and development of such structures were not studied in all phases of pregnancy. So, in this work, the placentons of pregnant buffaloes on months 4-5, 7-8 and 9-10 were morphologically characterized. The specimens were sectioned and fixed by immersion in either a 4 % paraformaldehyde or in 2.5 % glutaraldehyde in 0.1 M phosphate buffer for light and electron microscopy, respectively. After 24 h, the placentons were cut and processed for embedding in paraplast, historesin or Spurr\'s resin. Sections were stained by HE, Toluidine Blue, Gomori\'s and Mallory\'s trichromes, Methilene Blue and Basic Fucsin and submitted to PAS reaction. In all periods of the pregnancy, we found placentons of different shapes and sizes, with a gross structure similar to the bovine placenton, but more flattened. Apparently, during the progress of the pregnancy, the placentons maintained the same gross morphology but with increased dimensions. At light microscopy, the interface between the trophoblast and the uterine epithelium is extremely irregular forming a fetal villous tree that indents the endometrium. The trophoblast consists of a simple layer of individual cells where binucleated cells are interposed into the remaining trophoblast cells. The axis of the villous tree is fundamentally formed by loose connective tissue, whereas the internal axis of the epithelial folds presented a connective tissue rich in collagen fibers. When compared to early phases of the pregnancy, the villus tree on months 9-10 is much more branched and the materno-fetal interface closely appositioned. Still, in the feto-maternal junction in late pregnancy were found regions of hematomes and erythrophagocytosis. Ultrastructurally, we also observed: the intense vascularization of the fetal villous, binucleated cells presenting a much developed GER (granular endoplasmic reticulum) and Golgi complex, indicating intense secretory activity. The trophoblastic cells showed junctions (desmossomes), euchromatic nuclei and 2 evident nucleoli. The trophoblast and the uterine epithelium were close associated by interdigitated microvilli.

Estudaram-se a morfologia macroscópica e microscópica da placenta de 12 fêmeas adultas prenhes de cateto (Tayassu pecari) e 03 de queixada (Tayassu pecari). Os animais foram obtidos em criatórios autorizados pelo IBAMA e no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres, Mossoró,RN. Fragmentos da placenta e do cordão umbilical foram colhidos imediatamente após a morte do animal e fixados por imersão em paraformoldeído 4% e glutaraldeído 2,5%, ambos em tampão fosfato 0,1M, para microscopia de luz, de transmissão e de reflexão, e para análise macroscópica o conjunto dos órgãos genitais foi fixado em solução aquosa de formol 10%. Para microscopia de luz, o material foi embebido em paraplast e historesina e para a microscopia eletrônica em resina Araldite&reg;. A arquitetura microvascular foi estudada com moldes vasculares preparados a partir da combinação dos lados materno e fetal, e destes isoladamente, obtidos pela injeção de Mercox&reg; na artéria umbilical e na artéria uterina. O cordão umbilical está composto por três vasos do tipo muscular, duas artérias e uma veia umbilical, e por um ducto alantóide. A placenta dos Taiassuídeos é corioalantóide, difusa e pregueada. O saco coriônico é fusiforme e possui superfície recoberta por pequenas pregas e aréolas. Os cortes transversais evidenciaram o epitélio uterino íntegro e o trofoblasto, caracterizando a placenta epiteliocorial. O trofoblasto é cilíndrico na base das rugas coriônicas, com células polarizadas, núcleos esféricos e citoplasma contendo numerosos vacúolos PAS+ no pólo basal, enquanto que no topo das rugas são cubóides, como o epitélio materno. Os capilares fetais possuem alta capacidade de entremearem-se no trofoblasto no topo e paredes das rugas fetais. A interface materno-fetal é PAS+, bem como o epitélio glandular e a sua secreção. As glândulas uterinas secretam na cavidade areolar material PAS+ e as células glandulares são Perls+. A barreira placentária possui todas as camadas e pode chegar a 3 micrômetros de espessura ou menos. A análise dos moldes vasculares demonstra que a relação entre sangue materno-fetal desenvolve-se de contra-corrente para corrente-cruzada. Os capilares fetais formam fileiras de protrusões bulbosas, que se encaixam nos cestos maternos formados por rugas e depressões. A placenta dos pecaris pode ainda ser classificada como adeciduada. / Macro and microscopic morphology in placenta of the twelve collared peccary (Tayassu pecari) and three white-lipped peccary (Tayassu pecari) were studied. The animals were obtained from authorized farms by IBAMA and from CEMAS, Mossoró, RN. Fragments from placenta and from umbilical cord were obtained immediately after slaughter and fixed by immersion in 4% paraformoldehyde and 2.5% glutaraldehyde in 0.1M phosphate buffer, to light, transmission and scanning electron microscopy analysis and the genital organs were fixed in aqueous solution of formaldehyde 10% to macroscopic analysis. For light microscopy, the pieces of organs were embedded in paraplast or historesin and to transmission electron microscopic were embedded in Araldit&reg; resin. The microvascular architecture was studied with blood vessels casts prepared from de maternal, fetal and combined maternal and fetal sides, by Mercox&reg; injection into the umbilical artery and uterine artery. The umbilical cord has three muscular vessels, two arteries and one umbilical vein, and one alantoic duct. The placenta of Tayassuidae is chorioalantoid, diffuse and folded. The chorionic sac is fusiform and its surface is covered with folds and small areolas. The transversal sections show the presence of the trophoblast and maternal epithelium, characterizing the epitheliochorial placenta. The trophoblast is columnar on the base of fetal rugae and contains polarized cells, spherical nucleus and cytoplasm with many vacuoles with material PAS + in the basal polo, while on the top of rugae the trophoblast is cuboid as the uterine epithelium. The capillaries have characteristics of the indentation between trophoblast cells on the top and side of the fetal rugae. The materno-fetal interface is PAS+, as well as the glandular epithelium and their secretion. The uterine glands secreted in the areolar cavity PAS+ material and their cells are Perls+. The interhemal barrier has all layers and may have three micrometers or less. The analysis of the vessels casts shows that materno-fetal blood interrelationship develops into a crosscurrent to countercurrent. The fetals capillaries form rows of bulbous protrusions fitting into the complementary maternal baskets formed by ridges and troughs. The placenta of peccaries still may be classified as adeciduade.

A literatura sustenta que os Xenarthras com sua longa e isolada existência podem ser a luz para entender a evolução dos mamíferos placentários. O tatu Euphractus sexcinctus é endêmico da América do Sul e têm sido pouco estudado. A morfologia e a relação entre tecidos moles e duros do aparelho genital, pelve e períneo de nove animais adultos foi descrita utilizando-se as técnicas de mesoscopia, microscopia (eletrônica e luz) e tomografia computadorizada. O desenho anatômico da pelve e períneo do Euphractus sexcinctus apresentou características basais, conferindo um excelente modelo de estudo para desvendar o desenvolvimento dos tetrápodes. A região perineal conteve os trígonos (anal e urogenital) e a região pubiana exibiu a genitália externa com o clitóris pronunciado pela ausência dos lábios vulvares, sendo diferente dos mamíferos recentes, apresentando característica semelhante ao cliteropênis de crocodilos, isto possibilita questionamentos interessantes acerca da importância da manutenção desta genitália tão protusida. Os ossos da pelve no animal adulto apresentaram-se fundidos, constituindo o sinsacro. Com relação ao aparelho genital interno, o extenso comprimento da cérvix em relação ao corpo do útero chamou a atenção, provavelmente, porque o grande volume dos músculos coccígeos na pelve menor empurraram o útero para a pelve maior. Os ovários, a tuba uterina e a vagina assemelharam-se aos órgãos de mamíferos recentes, portanto não surgiram novidades evolutivas. A placenta nos animais estudados (Chaetophractus villosus, Chaetophractus vellerosus e Euphractus sexcinctus) foi classificada como hemocorial e altamente invasiva, diferindo entre as espécies na disposição do córion viloso em contato com o útero. / The literature maintains that Xenarthra and isolated with its long existence may be the light to understand the evolution of placental mammals. The armadillo Euphractus sexcinctus is endemic in South America and has been poorly search. The morphology and the relationship between hard and soft tissues of the female genital, pelvis and perineum of nine adult animals has been described using techniques: mesoscopy, microscopy (electron and light) and computed tomography. The anatomical design of the pelvis and perineum of the Euphractus sexcinctus presented baseline characteristics, being an excellent study model to understand the development of tetrapods. The perineal region contained the trines (anal and urogenital) and pubic area exhibited the external genital with clitoral pronounced by the absence of labia, with different mammalian recent cliteropenis presenting feature similar to that of crocodiles, this enables interesting questions about the importance of maintenance of such protruding genitalia. The bones of the pelvis in the adult animal had cast up, constituting the sinsacrum. Regarding the internal genital tract, the extensive length of the cervix in relation to the uterus called the attention, probably because the bulk of the pelvis minor has been filled by coccygeal muscles. Than this muscles pushed the uterus to the pelvis higher. The ovaries, oviducts and vagina resembled recent mammalian organs, so there appeared no evolutionary novelties. The placenta in animal studies (Chaetophractus villosus, Chaetophractus vellerosus and Euphractus sexcinctus) were classified as highly invasive and hemochorial, differing between species in the layout of the chorionic villi in contact with the uterus.

Em diferentes mopdelos, o aumento dos níveis séricos de glicose pode ativar cascatas de sinalização envolvendo receptores semelhantes a Toll, o fator de transcrição NF-kB, moléculas da familia NLRP, ASC e caspase-1, que culminam na produção, ativação e liberação de moléculas inflamatórias. Investigamos o perfil inflamatório sérico e placentário em gestantes com distúrbios glicêmicos e a possível participação da via do inflamassoma NLRP1 e NRLP3 para o estabelecimento desse perfil. Para avaliar o papel da hiperglicemia no estabelecimento desse perfil, a via do inflamassoma foi também estudada em explantes de vilos coriônicos tratados com 100, 200, 300 e 400 mg/dL de glicose. Nossos resultados mostraram aumento na ativação de NF-kB e da expressão de NLRP1, NLRP3, ASC e Caspase-1 nas placentas de gestantes hiperglicemicas e nas culturas tratadas com doses de 300 r 400 mg/dL de glicose. Esses dados sugerem que a ativação da via do inflamassoma na porção fetal da placenta contribui para o processo inflamatório nessas pacientes. / In different models, the increase in serum glucose levels can activate signaling cascades involving Toll-like receptors, the transcription factor NF-kB, NLRP proteins, ASC and caspase-1, which culminate in the production, activation and release of inflammatory molecules . We investigated the serum and placental inflammatory profile in pregnant women with glucose disorders and the possible participation of via the NLRP1 and NRLP3 inflammasome to establish this profile. To evaluate the role of hyperglycemia, molecules of the inflammasome pathway was also studied in explants of chorionic villi treated with 100, 200, 300 and 400 mg / dL glucose. Our results showed an increase in NF-kB activation and expression of NLRP1, NLRP3, ASC and Caspase-1 in placentas of pregnant hyperglycemic women and in cultures treated with 300 and 400 mg / dL glucose. These data suggest that the inflammasome activation of the fetal portion of the placenta contributes to the inflammatory process in these patients.