Despite Neospora caninum being recognised as a major cause of bovine abortion, its pathogenesis is only partially understood. Evidence of immune mediated placental pathology has been reported as being responsible for compromising pregnancy probably due to an exacerbated Th1 immune response at the maternal-foetal interface. Different clinical outcomes are known to follow experimental infections at different stages of gestation, with foetal death being the most common finding during early gestation infections, and the birth of live congenitally infected calves following infection in mid or late gestation. The aim of the current study was to characterise the placental cellular immune responses and cytokine expression following experimental Neospora infection during pregnancy. Placentomes were collected from cattle experimentally inoculated with the tachyzoites of the Nc-1 strain during early, mid and late gestation. Inflammation in early gestation was generally moderate to severe. Differently in mid gestation, inflammation was mild to moderate and minimal to mild in late gestation. Generally cellular infiltrates were mainly characterised by the presence of CD3+, CD4+ and γδ T-cells; whereas CD8+ and NK cells were less numerous. Macrophages were detected in larger numbers during later time-points after infection. A moderate to severe infiltration of IL-12, IFN-γ and TNF-α expressing cells was observed in the placentas collected in early gestation. This infiltration was more pronounced in the samples of placentome collected from dams carrying a dead foetus or in those that had aborted, compared with mothers carrying live foetuses at the time of sampling. The distribution of the cellular subsets observed in the three studies was similar. However, cellular infiltrates were more severe following infection during the first trimester in comparison to the second and third trimester. Similarly, the infiltration of Th1 cytokine expressing-cells was more severe in early gestation compared with the milder and more minimal infiltrations observed following N. caninum infection in mid and late gestation, respectively. These results may explain the milder clinical outcome observed when animals are infected in later stages of pregnancy.

Fetal exposure to excess glucocorticoids has been proposed as a key determinant of pregnancy outcome, as well as a predictor of long term health of the offspring through a phenomenon known as ‘developmental programming’. Obesity and ‘stress’ during pregnancy are two potential sources of altered fetal exposure to glucocorticoids. One in five pregnant women is obese at antenatal booking, and maternal obesity increases risk of offspring complications including higher birth weight, potentially leading to long-term programming effects on the offspring. Likewise, maternal anxiety during pregnancy has been identified as a programming factor, increasing the risk of psychopathology in the offspring. This thesis tests the hypothesis that in humans this association is mediated by altered action of glucocorticoids, by examining circulating levels of maternal glucocorticoids during pregnancy and through measurement of key genes in the placenta regulating fetal glucocorticoid exposure. Serum cortisol levels were measured at 16, 28 and 36 weeks gestation in n=173 class III obese (BMI 44.0±4.5kg/m2) and n=107 lean (BMI 22.8±1.6kg/m2) pregnant women. Serial corticosteroid binding globulin (CBG) concentrations were measured in a subset (n=39 lean, 26 obese) and free cortisol levels calculated using Coolen’s equation. CRH concentrations were measured at the same time points in obese (n=20) and lean (n=22) pregnant women Salivary cortisol was measured in samples collected at bed-time, waking and 30 minutes after waking. mRNA levels of candidate genes regulating glucocorticoids and fetal/placental growth including 11-beta hydroxysteroid dehydrogenase type 2 (11βHSD2), which inactivates cortisol, insulin-like growth factor 2 (IGF2) and glucocorticoid receptor (GR) were measured in first trimester (n=32), second trimester (n=15) and term (n=60) placental samples. DNA methylation of key regions controlling the expression of the IGF2, GR and 11βHSD2 genes was measured by pyrosequencing in first trimester and term samples. Levels of mRNAs encoding 11βHSD1, 11βHSD2, GR and MR were measured in term placentas collected from women from Helsinki, Finland in whom anxiety during pregnancy had been prospectively assessed using validated questionnaires. Term placental samples from a subset of the obese and lean women who had also completed stress questionnaires during pregnancy were used to examine replication of findings. Cortisol levels rose similarly during pregnancy in obese and lean but were significantly lower throughout pregnancy in obese women (p<0.05). The diurnal rhythm of cortisol was maintained. CBG levels also increased, though this change was lower in obese (1.21-fold (±0.9) vs 1.56-fold (±0.07), p<0.01). In obese women, lower calculated free cortisol at 16 weeks gestation was associated with higher birth weight after adjustment for other factors (r=-0.46, p<0.05). Placental mRNA encoding 11βHSD2 increased in association with increasing obesity in early pregnancy (r=0.44, p<0.01) and was highest in term placenta in obese women with macrosomic (>4000g) offspring (p<0.05). Placental transcript abundance of GR also increased in association with increasing obesity in early pregnancy (r=0.38, p<0.05), but was lowest in term placenta from obese with macrosomic offspring (p<0.05). IGF2 mRNA abundance was lower in the placentas of obese women with macrosomic offspring at term compared to both lean women and obese women with normal weight offspring (p<0.01). Methylation results are reported. Placental mRNA levels encoding 11βHSD1 (which converts inactive cortisone to active cortisol) at term was found to positively associate with maternal anxiety measured in the first trimester of pregnancy in a group of pregnant Finnish women (β=0.3, p<0.05). Findings were similar in the replication sample in lean women only (β=4.6, p<0.05). Lower circulating and bioavailable cortisol levels in early pregnancy, together with a greater placental ‘barrier’ to maternal glucocorticoids represent key mechanisms contributing to higher birth weight in offspring of obese women. Regeneration of active glucocorticoids in placenta and increasing placental sensitivity to glucocorticoids increases fetal glucocorticoid exposure and offers insight into the biological mechanisms underlying adverse offspring effects of maternal prenatal anxiety.

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Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas congénita es una patología endémica en América Latina, la que se presenta con una menor frecuencia en otros países. Se asocia a partos prematuros, abortos y patología placentaria. Los mecanismos de infección e invasión tisular del parásito Trypanosoma cruzi (T. cruzi) son poco claros. Para estudiar parte de estos mecanismos, se incubaron ex vivo explantes de vellosidades coriónicas humanas sanas con el parásito. La infección exitosa de los explantes de vellosidades coriónicas humanas fue determinada por detección del parásito mediante inmunofluorescencia y PCR. Los efectos de la infección con el parásito se determino mediante métodos inmunohistoquímicos, histoquímicos, bioquímicos y de biología molecular. T. cruzi induce destrucción y desprendimiento del sinciciotrofoblasto, desorganización selectiva de las láminas basales y desorganización del colágeno I del tejido conectivo fetal. Estos resultados sugieren una actividad proteolítica del parásito sobre las láminas basales y tejido conectivo como mecanismo de infección al feto con T. cruzi. Adicionalmente, el parásito induce apoptosis en las vellosidades coriónicas. Los efectos observados son función del número de parásitos utilizados / Financiamiento: Proyectos Biecentenario Anillo ACT 29 y ACT 112 , Bicentenario Redes de Cooperación entre Anillos RED 07, Fondecyt 1180166

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Preñeces ovinas en condiciones de hipoxia hipobárica resultan en fetos de menor tamaño, además de una serie de modificaciones placentarias, tales como en su vascularización, número y tamaño de los placentomas, entre otras. La hipoxia hipobárica se manifiesta como un estado de estrés oxidativo en estos animales, lo cual es factible de atenuar con un tratamiento antioxidante. En este trabajo se determinó la expresión y actividad de la isoenzima endotelial de la óxido nítrico sintasa (eNOS), molécula involucrada en la angiogénesis y vasodilatación, eventos necesarios para que una gestación llegue a término. Se utilizaron ovejas criollas nativas de una condición de alta altitud, provenientes de Caquena, a 4.200 m.s.n.m. (HL) y ovejas criollas nativas de una condición cercana a nivel del mar (LL). Ambos grupos se mantienen en una condición de aproximadamente 500 m.s.n.m. donde cursan su gestación. La mitad de cada grupo fue suplementada, junto a la ración diaria de heno, con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E por animal, hasta la recolección de muestras. Al término de los 100 días de gestación se determinó la expresión y actividad de eNOS en placentomas, separando la porción materna de la fetal, en todos los grupos. Se detectó la presencia de eNOS en todas las muestras analizadas mediante la técnica de Dot blot; esta característica no presentó cambios significativos ni por origen de las ovejas ni por compartimento analizado, materno o fetal. La actividad de eNOS tuvo un comportamiento similar, ya que no varió significativamente entre los grupos en estudio. El tratamiento con vitaminas C+E, no generó un cambio considerable en la presencia y actividad de eNOS en ovejas que gestan a una altura cercana a nivel del mar, ya sean nativas de alta altitud o de una condición cercana a nivel del mar. Esto no excluye un efecto beneficioso de las vitaminas antioxidantes en ovejas que cursan su gestación en alta altitud / Proyecto FONDECYT 1070405

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los efectos de un ambiente hipóxico sobre la gestación son conocidos. Sin embargo, existe poca información sobre como el ambiente normóxico afectaría la gestación de individuos adaptados a la vida en altura. Este estudio se basa en la consideración que individuos adaptados a un ambiente hipóxico han desarrollado mecanismos que les permite transportar y utilizar el oxígeno más eficientemente en esas condiciones, por lo que frente a un aumento de la presión parcial de oxígeno ambiental éstos pueden desarrollar estrés oxidativo, tal como se observa en hiperoxia. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del ambiente normóxico y de la administración de vitaminas C y E sobre las características placentarias, en ovejas originarias de la altura que cursan su gestación a nivel del mar. Se utilizaron 10 ovejas provenientes de la altura (HL) y 10 del nivel del mar (LL), las que desarrollaron su gestación a 500 msnm. La mitad de cada grupo fue suplementado diariamente con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E. Entre los 96 y 100 días de gestación se evaluaron las características placentarias y la presencia de los factores angiogénicos VEGF y leptina, mediante la técnica de Western Blot. El peso de la placenta fue mayor en el grupo LL en comparación con HL. Las características número de placentomas y superficie de placentomas no mostraron diferencias significativas, mientras que la suplementación con antioxidantes no evidenció cambios significativos para las características antes mencionadas. La expresión de VEGF no reflejó cambios significativos entre los grupos, sin embargo en la porción fetal del placentoma, la expresión de VEGF en los animales LL, tiende a ser mayor. La terapia antioxidante pareció disminuir la expresión de VEGF, aunque esta diferencia no fue significativa. La expresión de leptina disminuyó en los grupos suplementados con vitaminas, siendo esta diferencia significativa en la porción fetal del placentoma. El HL muestra la mayor superficie vascular por placentoma, la que disminuyó al suplementar con vitaminas. De los resultados obtenidos se desprende que la exposición a la normoxia en ovejas gestantes adaptadas a la vida en altura, no produciría cambios placentarios compatibles con un estado de estrés oxidativo. Sin embargo, quedan muchas preguntas sin responder que requerirán estudios posteriores

A number of protein kinases have been shown to undergo autophosphorylation, but few have demonstrated a coordinate increase or decrease in enzymatic activity as a result. Described here is a novel S6 kinase isolated from human placenta which autoactivates through autophosphorylation in vitro. This S6/H4 kinase, purified in an inactive state, was shown to be a protein of Mr of 60,000 as estimated by SDS-PAGE and could catalyze the phosphorylation of the synthetic peptide S6-21, the histone H4, and myelin basic protein. Mild digestion of the inactive S6/H4 kinase with trypsin was necessary, but not sufficient, to activate the kinase fully

El objetivo del estudio fue determinar los principales factores asociados al desprendimiento prematuro de placenta y sus complicaciones materno perinatales en el Instituto Materno Perinatal de Lima – Perú durante el período comprendido entre enero y diciembre del 2003. Se realizó un estudio observacional analítico de tipo casos y controles comparando 110 gestantes que presentaron desprendimiento prematuro de placenta con 110 pacientes quienes no lo presentaron. La tasa de desprendimiento prematuro de placenta fue 0,6 por 100. procedimientos. El antecedente de haber tenido un recién nacido muerto (P < 0,0001) y el diagnóstico de hipertensión (P < 0,0001), el sangrado vía vaginal (P < 0,0001) y la disminución de movimientos fetales (P=0,002) durante la gestación actual se asociaron significativamente con desprendimiento prematuro de placenta. Los principales signos y síntomas al ingreso hospitalario fueron: sangrado vía vaginal, sensibilidad uterina, hipertonía uterina y presencia de coágulos retroplacentarios. La muerte perinatal ocurrió en el 28,1% de casos de desprendimiento prematuro de placenta, y su principal componente fue la muerte fetal intraútero. La rotura prematura de membranas (P=0,003), preeclampsia / eclampsia (P = 0,004) y parto pretérmino (P = 0,006) fueron las intercurrencias asociadas a desprendimiento prematuro de placenta, mientras que las principales complicaciones maternas y fetales fueron: histerectomía de emergencia (P = 0,02), necesidad de transfusión de hemoderivados (P = 0.001), atonía uterina postparto (P = 0,03) y distress fetal (P < 0,0001).

El objetivo del estudio fue determinar las principales diferencias en los resultados perinatales entre gestantes con embarazo prolongado y evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios en comparación con gestantes con embarazo prolongado sin evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios. En el Instituto Nacional Materno Perinatal de Lima – Perú se realizó un estudio observacional, retrospectivo y transversal comparando 50 gestantes con embarazo prolongado con evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios con 70 gestantes con embarazo prolongado sin evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios. El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS 14.0. La incidencia de embarazo prolonagado fue 0,73%. El 41,7% de gestantes con embarazo prolongado tuvo evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios. El 38,3% (n igual 46) de gestantes con embarazo prolongado presentó resultado perinatales adversos. Existió mayor riesgo de resultados perinatales adversos en embarazos prolongados con evidencia ultrasonográfica de calcificaciones placentarias y oligohidramnios (OR 4,58; 95% IC 2,74 – 7,65).