Os óleos essenciais são metabólitos secundários extraídos de plantas e apresentam diversas propriedades para fins medicinais. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana, verificar sua atividade antimicrobiana e antibiofilme frente a bactérias gram-positivas e gram-negativas e avaliar a expressão dos genes de virulência e resistência em Listeria monocytogenes e Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (VRE) na ausência e presença de concentração sub-inibitória do óleo essencial, por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A caracterização do óleo foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a massa (GC-MS) verificou-se a presença de 21 compostos, sendo os constituintes majoritários o geranial (28,67 %), neral (19,68 %) e limoneno (17,29 %). A ação antimicrobiana foi avaliada e observou-se que o óleo apresentou atividade frente a bactérias gram-positivas, com diâmetros de halos de inibição de 0 a >45 mm. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para bactérias gram-positivas, sensíveis e resistentes a agentes antimicrobianos como VRE, e variou de 0,19 a 6,25 %. Ação antibiofilme do óleo foi avaliada tanto na formação, quanto sob um biofilme pré-estabelecido. O óleo essencial apresentou capacidade de inibir a formação do biofilme de todas as cepas testadas, mas pouca ou nenhuma capacidade de remoção do biofilme pré-formado. Na análise de expressão gênica por qPCR para L. monocytogenes, verificou-se que três dos genes de estresse celular (sufS, sod e degU) apresentaram uma diferença significativa na presença do óleo. Para a cepa de E. faecalis VRE, nenhum gene selecionado apresentou alteração na expressão gênica. Como conclusão, este estudo demonstrou que o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana possui atividade antimicrobiana do frente a bactérias gram-positivas e sem atividade em gram-negativas. / Essential oils are secondary metabolites extracted from plants and they have been showing several medicinal properties. The aim of this study was to characterize the essential oil extracted from dry leaf of E. staigeriana, as well as to verify the antimicrobial and anti-biofilm activities against gram-positive and gram-negative bacteria, and to evaluate the expression of virulence and resistance genes in Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis vancomycin resistant (VRE) in the absence and presence of sub-inhibitory concentration of the essential oil by quantitative real time PCR (qPCR). The oil characterization was performed by CG-MS and it was verified the presence of 21 compounds, being the geranial (28.67 %), neral (19.68 %) and limonene (17.29 %) the major compounds. The antimicrobial activity was evaluated and it was observed that the essential oil has effect against gram-positive, with inhibition zone diameter ranges from 0 to 45 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined, to sensible and resistant gram-positive bacteria to antimicrobial agents, such as VRE, and varied between 0.19 to 6.25 %. The anti-biofilm action of the oil was verified on formation, and under a pre-established biofilm. The essential oil showed capacity to inhibit the biofilm formation for all tested strains, but few or no ability to remove the pre-established biofilm. In the analysis of gene expression by qPCR for L. monocytogenes, three cell stress genes (sufS, sod and degU) with significant difference in the presence of the oil. For E. faecalis VRE strain no one of the selected genes showed alteration in the gene expression. In conclusion, this study demonstrates the potential of essential oil from dry leaf of E. staigeriana for future use in the control of gram-positive bacteria.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-11Bitstream added on 2014-06-13T21:01:50Z : No. of bitstreams: 1 carmo_ed_dr_sjc.pdf: 829575 bytes, checksum: 0c2043d64a287ab40cca1df3836a8e42 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito da administração sistêmica de extrato liofilizado de Pfaffia glomerata em modelo de carcinogênese química em pele de camundongos hairless, bem como investigar a toxicidade hepática e renal das doses administradas. Foram utilizados 32 camundongos hairless, fêmeas com 5 semanas de vida, distribuídos em grupos controle (C) e experimentais (E1, E2 e E3). Os grupos E1, E2 e E3 receberam a administração sistêmica de extrato liofilizado de P. glomerata nas doses de 200, 400 e 1000 mg/Kg/dia, respectivamente, via oral, durante 15 semanas. O grupo C recebeu somente água filtrada. Duas semanas após o início da administração de extrato liofilizado de P. glomerata, os animais foram submetidos à carcinogênese química induzida pelo DMBA a 0,5% na região do dorso. Na 15ª semana foi realizada a avaliação clínica, biópsia das lesões de pele, coletada amostra de sangue e removidos fígado e rins dos animais. As lesões de pele seguiram para avaliação histopatológica e imunoistoquímica, os órgãos para análise histopatológica e as amostras de sangue para toxicológica. Nesta última, foram realizadas as análises da atividade enzimática de fosfatase alcalina, aspartato aminotransferase e da concentração de uréia. Comparados os grupos C e E o teste estatístico de Kruskal-Wallis não mostrou diferença estatística significativa em relação ao tipo, tamanho e graduação de malignidade das lesões. Não foi observada significância nas análises de fosfatase alcalina, aspartato aminotransferase e uréia. O teste de correlação de Spearman mostrou relação significativa para VEGF e PCNA e o qui-quadrado para infiltrado inflamatório em fígado e rins. Conclui-se que o tratamento com as doses de 200, 400 e 1000mg/kg/dia de extrato liofilizado de P. glomerata não apresentou ação quimiopreventiva e revelou indícios de toxicidade hepática e renal neste modelo experimental. / The goals of this study were both to evaluate the effect of systemic administration of the extract of Pfaffia glomerata in the chemical carcinogenesis model on the skin of hairless mice, as well as to investigate the hepatic and renal toxicity of the administered doses. For that we have used 32 hairless mice, female, aged 5 weeks, distributed in control group (C) and experimental groups (E1, E2 e E3). The experimental groups E1, E2 e E3 received systemic administration of the lyofilized extract of P. glomerata in 200, 400 and 1000 mg/Kg/day doses, respectively, by oral means, during 15 weeks. Group C received only filtered water. Two weeks after the beginning of the lyophilized extract of P. glomerata administration, the animals were submitted to chemical carcinogenesis induced by the 0,5% DMBA brushed in the dorsal region. At the 15th week a clinical evaluation was conducted, skin biopsy made, blood sample collected and liver and kidneys of the animals removed. After that the following evaluation were conducted: histopathological and immunohistochemical evaluation of the skin lesions, histopatological evaluation of the organs, and toxicological evaluation of the blood samples. The blood samples went also thorough the following analysis: enzimatic activity of alkaline phosphatase, aspartate aminotransferase and urea concentration. When comparing C and E groups, the Kruskal-Wallis statistical analysis has not shown any statistically significant difference of type, size and malignancy grading. It has not been observed statistically significant difference in the alkaline phosphatase, aspartate aminotransferase and urea analysis. The Spearman correlation test showed significant relation for VEGF and PCNA and the c2 test for inflammatory infiltrate in the liver and kidneys. We therefore concluded that the treatment using 200, 400 and 1000mg/Kg/day of the lyophilized... (Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Iêda Maria Begnini. / Dissertação (Mestrado em Química) - Programa de Pós-Graduação em Química, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

O uso de plantas com propósito medicinal é bastante recorrente na espécie humana. Em países onde grande parte da população tem pouco acesso à assistência médica, seu uso é bastante difundido, aliado à crença de que o uso de plantas medicinais é totalmente seguro. Assim, o estudo dessas plantas é muito importante, uma vez que muitas delas podem apresentar efeitos indesejáveis, como toxidez aguda ou crônica ou ainda retardar ou desestimular a adoção do método de tratamento apropriado e eficaz. Apesar disso, muitas vezes o metabolismo vegetal apresenta substâncias bioativas que podem ser usadas diretamente como medicamento ou ainda servir como modelo para a síntese ou semi-síntese de moléculas farmacologicamente ativas e resultando em drogas terapeuticamente úteis. Este trabalho consiste na execução do levantamento das espécies utilizadas popularmente no Estado para diabetes melito. Para tanto, foram consultados 16 levantamentos etnobotânicos realizados no Estado e selecionadas as espécies utilizadas para tratar diabetes. Para as espécies citadas em ao menos dois estudos consultados, foram buscados dados científicos relacionados à atividade antidiabética na base de dados ISI Knowledge. Usou-se como palavras-chave o binômio científico de cada espécie e, além disso, dados presentes em revisões foram considerados. Foram citadas 83 espécies, distribuídas em 42 famílias, sendo as mais representativas Asteraceae e Myrtaceae, com 16 e oito espécies respectivamente. Vinte e oito espécies apresentaram ao menos duas citações de uso para diabetes no Estado. Onze destas não possuem estudos visando sua atividade antidiabética. A maioria das plantas que foram estudadas buscando atividade antidiabética apresentou resultados promissores. / The use of plants with medicinal purposes is fairly applied in human species. In countries where large part of population has limited access to health care, its use is widespread, allied to the belief that the use of medical plants is totally secure. Therefore, the study of these plants is very important once that many of them may present undesirable effects, such as acute or chronic toxicity or even delay or discourage the adoption of the proper and effective treatment method. Besides that, the plant metabolism show bioactive substances that can be used directly as a drug or even serve as a model for the synthesis or semi-synthesis of pharmacologically active molecules, resulting in therapeutically useful drugs. This work consists in the execution of the survey of the species popularly used for diabetes mellitus in the State. To achieve this, 16 ethnobotanical surveys performed in Rio Grande do Sul State were consulted and the species used to treat diabetes were selected as well. For species cited at least in two consulted studies, were searched scientific data related to antidiabetic activity in ISI Knowledge database. It was used as keywords the scientific binomial of each species and data found on revisions were also considered. Where mentioned 83 species in 42 families and the most important were Asteraceae and Myrtaceae, with 16 and 8 species respectively. Twenty eight species showed at least two quotations to use for diabetes in the State. Eleven of these have no scientific data regarding the antidiabetic activity. The majority of these plants which have been studied for antidiabetic activity showed promising results.

Orientador: Lin Chau Ming / Coorientador: Leonardo de Barros Pinto / Banca: Sandra Maria Pereira da Silva / Banca: Osmar Delmanto Junior / Banca: Gabriela Granghelli Gonçalves / Banca Fátima Chechetto / Resumo: O município de Botucatu é reconhecido por ser importante fornecedor de produtos orgânicos e por possuir diversos sistemas de produção ligados à horticultura. A ausência de dados oficiais sobre a produção no município tem impedido o planejamento adequado de ações que visem o seu desenvolvimento, o que justifica o olhar científico sobre este tema. Propõe-se analisar o sistema de produção de plantas hortícolas, caracterizar o desenvolvimento de técnicas culturais e as condições socioeconômicas destes produtores rurais do interior paulista. Realizaram-se entrevistas com o planejamento amostral totalizando 89 agricultores familiares e não familiares. Utilizou-se o método estatístico multivariado. Os horticultores pesquisados caracterizam-se por níveis tecnológicos de produção como tradicionais (70%), em transição (11%) e modernos (19%). Houve a definição de classes econômicas (A, B, C, D, E) com base na análise da renda agrícola obtida com a horticultura, que referiu a seguinte porcentagem de distribuição por faixa de renda: Classe E (63%), D (24%), C (11%) e a A/B com (2%). Por meio da análise multivariada com o uso de dendrogramas identificaram-se quatro grupos principais: o agrupamento de horticultores tradicionais e diversificados (63%), dos horticultores em transição tecnológica e especializados (24%), dos produtores rurais modernos e orgânicos (5%) e, por último, o grupo de modernos e convencionais (2%). Conclui-se que a renda agrícola obtida com as produções de hortaliças, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The municipality of Botucatu is recognized for being an important supplier of organic agricultural products and for having several production systems linked to horticulture. The lack of official data on horticultural production in the municipality has prevented adequate planning of actions aimed at its development, which justifies the scientific view on this theme. The main cropping systems of the municipality are linked to the horticulture, fruit growing, cultivation of medicinal plants, cultivation of edible mushrooms and unconventional food plants. It is proposed to analyze the system of vegetable production, to characterize the development of cultural techniques and the socioeconomic conditions of these rural producers of the interior of São Paulo. Sampling planning interviews were carried out totalizing 89 family and nonfamily farmers since, recognized farmers of the horticulture. The multivariate statistical method was used to analyze the behavior of several qualitative and quantitative variables. The researched horticulturists are characterized by technological levels of production as traditional (70%), in transition (11%) and modern (19%). There was the definition of economic classes (A, B, C, D, E) based on the analysis of the agricultural income obtained with horticulture, which referred to the following distribution percentage by income range: Class E (63%), D (24%), C (11%) and A/B with (2%). Multivariate analysis with the use of dendrograms identified four main groups: the grouping of traditional and diversified horticulturists (63%), horticulturists in technological and specialized transition (24%), modern and organic farmers (5%), and, finally, the group of modern and conventional (2%). Finally, it can be concluded that the agricultural income obtained from the production of vegetables, medicinal plants and organic fruit in the open field, as well as tomatoes and peppers in protected ... / Doutor

Mestrado em Controlo de Qualidade / MSc in Quality Control

Mestrado em Controlo de Qualidade / MSc in Quality Control / A 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA; ecstasy ), tal como outras anfetaminas, tem sido considerada por muitos como sendo uma droga segura . No entanto estão descritas na literatura muitas respostas de toxicidade, reacções adversas e mortes relacionadas com a sua ingestão recreativa. Um dos seus efeitos adversos, potencialmente fatal, é a hiponatrémia. Este efeito foi relacionado com alterações na secreção da hormona antidiurética (ADH, AVP ou arginina-vasopressina) desencadeadas pela MDMA. A hiponatrémia foi apontada como causa possível para numerosas intoxicações severas e por vezes fatais decorrentes da ingestão desta droga. Estudos recentes in vivo, em humanos saudáveis do sexo masculino, e in vitro, em hipotálamo isolado de rato, demonstraram que a bioactivação metabólica da MDMA, nomeadamente a desmetilenação seguida pela O-metilação do catecol resultante, é crucial para a libertação da AVP quer in vivo quer in vitro. Para a avaliação da contribuição desta via metabólica para a expressão in vivo do efeito de hiponatrémia causado pela ingestão da MDMA, é crucial quantificar estes metabolitos e relacionar o perfil metabólico com a magnitude do efeito hiponatrémico. Com este objectivo, foi desenvolvido e validado um método de GC-MS/MS para a quantificação da MDMA e dos seus principais metabolitos, metilenodioxianfetamina (MDA), 4-hidroxi-3-metoxianfetamina (HMA) e 4-hidroxi-3-metoximetanfetamina (HMMA), no plasma e na urina. Para melhor compreender a influência da MDMA e da sua bioactivação na secreção da AVP foram realizados estudos in vivo em ratos Wistar machos e fêmeas, aos quais foi administrada MDMA na dose 20 mg/kg. Nos estudos realizados 1 hora após a administração de MDMA foram avaliados os níveis plasmáticos de AVP e as concentrações plasmáticas da MDMA e dos metabolitos MDA, HMA e HMMA. Com estas quantificações foi possível observar, nos ratos de ambos os géneros, o aumento estatisticamente significativo dos níveis de AVP em relação aos animais controlo, ao mesmo tempo que não se detectaram correlações estatisticamente significativas entre os níveis de AVP a MDMA e os metabolitos MDA, HMA e HMMA. Nos estudos realizados 24 horas após a administração de MDMA foram avaliados os níveis plasmáticos e urinários de AVP e as concentrações urinárias de MDMA, MDA, HMA e HMMA. Os resultados destas determinações demonstraram que apesar de não se detectarem diferenças significativas nas concentrações plasmáticas de AVP entre os animais tratados e os animais controlo, existem diferenças estatisticamente significativas para as concentrações urinárias de AVP, verificando-se que os animais tratados com MDMA apresentam concentrações urinárias de AVP superiores. Além disso verificou-se também que os animais tratados excretaram menos urina relativamente à água ingerida, mostrando o efeito anti-diurético desencadeado pela AVP. Neste estudo foram também estabelecidas correlações positivas e estatisticamente significativas entre os níveis de AVP e as concentrações de MDMA, MDA, HMA e HMMA. A correlação com maior significado estatístico foi estabelecida com o metabolito HMMA. Estes resultados permitiram pela primeira vez demonstrar a secreção da AVP em ratos após a administração da MDMA. Com estes estudos foi possível observar, in vivo, não só as alterações da secreção da AVP induzidas pela MDMA mas também as consequências dessas alterações nomeadamente na resposta antidiurética e o envolvimento desta resposta no efeito de hiponatrémia. Finalmente foi possível observar a contribuição da bioactivação metabólica para a secreção de AVP. Estes resultados permitem assim compreender melhor o envolvimento da MDMA e do seu metabolismo na resposta hiponatrémica. / Although considered as safe drugs by many, exaggerated responses and deaths have been reported due to 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) abuse. One of the adverse effects associated with ecstasy intoxications is hyponatremia that has been related with a disruption on the release of the antidiuretic hormone (ADH or arginine-vasopressin) and pointed out as the possible cause of numerous severe and fatal intoxications after intake of this drug. Recent in vivo studies with human healthy volunteers and also in vitro studies performed with rat isolated hypothalamus have shown that the metabolic bioactivation of MDMA, namely its demethylenation followed by O-methylation of the resulting cathecol metabolite are crucial for the release of ADH both in vivo and in vitro. For the evaluation of the contribution of this metabolic pathway to the in vivo expression of the hyponatremic effect of MDMA it is crucial to quantify these metabolites, and to relate the metabolic profile with the magnitude of the hyponatremic effect. For this purpose, a GC-MS/MS method was developed to quantify MDMA and its main metabolites: methylenedioxyamphetamine (MDA), 4-hydroxy-3- methoxyamphetamine (HMA) and 4-hydroxy-3-methoxymethamphetamine (HMMA), in plasma and urine. To better understand the influence of MDMA and its metabolic bioactivation in the secretion of AVP in vivo studies were performed with male and female Wistar rats, the MDMA dose tested was 20 mg/kg. In the studies preformed 1 hour after the MDMA administration the plasmatic levels of AVP and the plasmatic concentrations of MDMA, MDA, HMA and HMMA were evaluated. The plasmatic concentrations of AVP obtained with the treated animals were compared with the concentrations obtained with the controls showing a statistically significant increase of AVP levels in the animals treated with MDMA. Correlations between the MDMA, MDA, HMA and HMMA and the AVP plasmatic levels were also preformed. No significant correletions were obtained. In the studies preformed 24 hours after the administration of MDMA the urinary and plasmatic levels of AVP were evaluated. The concentration of MDMA, MDA, HMA and HMMA were determined in plasma and urine. It was also established the ratio between the volume of ingested water and the volume of excreted urine. The plasmatic and urinary AVP concentrations obtained in the treated animals were compared with the concentrations obtained from the controls. This compairison showed significant increases of the urinary AVP levels in the treated animals. The evaluation of the correlations between the urinary concentrations of AVP and the urinary concentrations of MDMA, MDA, HMA and HMMA showed significant correlations between AVP and MDMA, MDA, HMA and HMMA. The evaluation of the ratio between the volume of ingested water and the volume of excreted urine showed that the treated animals excreted less urine in comparison with the ingested water. The studies performed with urines collected 24 hours after MDMA administration have shown significant positive correlations between AVP and the concentrations of MDMA, MDA, HMA and HMMA. The strongest correlation was established between the concentrations of HMMA and AVP. With this study it was possible to confirm the in vivo changes in the AVP secretion profile and relate those changes with the levels of MDMA, MDA, HMA and HMMA. It was also shown for the first time the induction of the secretion of AVP in male and female rats, one hour after the administration of MDMA. The consequent antidiuretic effect can be related with the hiponatremic effect.

Mestrado em Controlo de Qualidade / MSc in Quality Control

Mestrado em Controlo de Qualidade / MSc in Quality Control / Aiming for new compounds with antitumor activity, the synthesis of prenylated xanthones and prenylated and geranylated flavones was recently achieved on CEQOFFUP. In this work the potential antitumor activity of these compounds in three tumor cell lines, namely MCF-7 (human breast cancer cells expressing estrogen receptors (ER+)), MDA-MB-231 (human breast cancer cells non expressing estrogen receptors (ER-)) and NCI-H460 (non-small cell lung cancer) was evaluated. Structure-activity relationships were established highlighting the influence of prenylation and geranylation. Concerning xanthones, prenylation of 3,4-dihydroxyxanthone (XXIX) furnished more potent and selective derivates for MCF-7 (ER+) cells than the original oxygenated xanthone. Xanthone derivate XP13 showed the strongest inhibitory effect on the growth of breast adenocarcinoma cell line ER+, MCF-7 (GI50 = 5,3 M). Thus, potential estrogenic/antiestrogenic properties were investigated for this compound. No proliferative effect at low concentrations was observed for XP13 in experiments performed in steroid-free medium (RPMI-SFM). However, when high concentrations of XP13 were used, this prenylated xanthone inhibit cancer cell growth in a dose-dependent manner, being more active on MCF-7 (ER+) cell line than on MDA-MB-231 (ER -) cell line. This antiproliferative effect was not influenced by the culture medium (steroid (RPMI) or steroid-free medium (RPMI-SFM)). From these results it can be inferred that XP13 does not directly act on the estrogen receptor, suggesting that it could interfere with other signaling pathways. Moreover, XP13 enhanced the growth inhibitory action of 4-hydroxytamoxifen (4-OHT, XIV), a partial antiestrogen in estrogen sensitive breast cancer cells. Concerning flavone derivates, none of the six flavones investigated, that were resulted from prenylation and geranylation of baicalein (BAIC, XIX), presented a higher cytotoxic effect on all tumor cellular lines (MCF-7 (ER+), MDA-MB-231 (ER -) and NCI-H460) when compared to the original oxygenated flavone BAIC (XIX). However, monoprenylation in C(7) conduced to a flavone (FP2) with a selective inhibitory effect on the growth of MCF-7 (ER+) cells. Possible estrogenic/antiestrogenic properties were investigated for this compound. It was verified that in steroid-free medium (RPMI-SFM) experiments, FP2 presented a biphasic effect in vitro growth on the ER-positive MCF-7 cell line. Although at low concentrations this flavone has stimulated cell growth, at high concentrations a cell growth inhibition was observed. Then, the effect of FP2 in combination with E2 was examinated. Results showed that FP2 suppressed at low concentrations, the mitogenic effect enhanced by estrogenic stimulation, suggesting a competition for ERs. Also, the FP2 cancer cell growth inhibitory effect on MCF-7 (ER+) cells was stronger when assed in steroid free medium, i.e., in the absence of estrogenic stimulation. These results suggest a direct involvement of estrogen receptor in the proliferative/antiproliferative effect of flavone FP2. Moreover, FP2 enhanced the growth inhibitory action of partial (4-OHT, XIV) and pure (ICI 182,780, XII) antiestrogens in estrogen sensitive breast cancer cells. These results were consistent with previous reports of prenylated flavones and disclose for prenylated xanthones effects compatible with antiestrogenic activity. Thus, the present work represents a promising contribution for the prevention and treatment of hormone-dependent breast cancer.

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