Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-11T17:03:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Aurenice PPGBAS UFPE.pdf: 4016432 bytes, checksum: bd06ba7277fb3d10f4a5c7495f4cfd65 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T17:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Aurenice PPGBAS UFPE.pdf: 4016432 bytes, checksum: bd06ba7277fb3d10f4a5c7495f4cfd65 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / CAPES / CNPQ / Heparina imobilizada em suportes sólidos tem sido utilizada como ligante de afinidade em processos de identificação e purificação de diversas proteínas. No presente estudo, foram sintetizados e caracterizados dois diferentes suportes magnéticos: Dacron (polietilenotereftalato) magnético (mDAC) e magnetita revestida com polianilina (MAG-PANI). Esses materiais foram utilizados como suporte para imobilização covalente de heparina e os compósitos magnéticos obtidos foram usados no fracionamento, depleção e purificação de proteínas do plasma humano. Para produzir o suporte mDAC, o Dacron foi tratado com hidrato de hidrazina, formando Dacron-hidrazida, e, em seguida, foi utilizado para formar um compósito com a magnetita, produzida por co-precipitação de sais de ferro II e III. O suporte MAG-PANI foi obtido a partir do revestimento da magnetita (obtida por coprecipitação) com polianilina através da oxidação da anilina pelo permanganato de potássio. Para imobilizar a heparina aos suportes foi necessária a ativação dos seus grupos carboxílicos com carbodiimida (EDAC) e N-hidroxissuccinimida (NHS). Análise por microscopia eletrônica mostrou que mDAC possui um tamanho de 1,5 ± 0,5 μm e 14,4 ± 0,9 nm para MAG-PANI. Difratograma de raio-X indicou a presença do Dacron nas partículas de mDAC e da polianilina em MAG-PANI e em ambos a formação do cristal de magnetita. Além disso, medidas de magnetização demonstraram um comportamento superparamagnético para as duas partículas e uma saturação magnética de 23 e 66 emu/g para mDAC e MAG-PANI, respectivamente, nas temperaturas de 293 K, 300 K e 313 K. A quantidade de heparina imobilizada foi de 51 ± 0,1 e 26,4 ± 0,09 μg de heparina por mg de mDAC e MAG-PANI, respectivamente. Plasma humano foi incubado nos compósitos com heparina imobilizada covalentemente (mDAC-HEP e MAG-PANI-HEP) e posteriormente foram lavados com tampão fosfato com concentrações crescentes de NaCl (0,25; 0,5; 1,0 M). Após esse processo, os eluatos obtidos foram submetidos à eletroforese SDS/PAGE de proteínas. Foram observadas muitas proteínas nas primeiras frações que foram depletadas do plasma (albumina, por exemplo) e as frações obtidas com NaCl 1,0 M demonstraram bandas com peso molecular de 58 kDa que correspondem à antitrombina. Além disso, ao realizar a incubação com a provável antitrombina purificada com o plasma normal, o valor do teste de tromboplastina parcial ativado (TTPa) se mostrou prolongado. Isso ocorreu devido à ação anticoagulante da antitrombina que inibiu a formação da trombina e assim o plasma não coagulou. Sendo assim, o método aqui proposto se mostrou útil como ferramenta de depleção de proteínas plasmáticas e purificação da antitrombina humana apresentando as seguintes vantagens: fácil síntese e separação por afinidade magnética. / Heparin immobilized on solid supports has been used as a ligand in affinity purification processes and identification of several proteins. In the present study, two different magnetic supports were synthesized and characterized: Dacron (polyethylene terephthalate) magnetic (mDAC) and magnetite coated with polyaniline (MAG-PANI). These materials were used as supports for covalent immobilization of heparin and these magnetic obtained composites were used for the fractionation, depletion and purification of human plasma protein. To produce the support mDAC, Dacron was treated with hydrazine hydrate forming Dacron hydrazide, and then was used to form a composite with magnetite produced by co-precipitation of salts iron II and III. MAG-PANI support was obtained from the coating magnetite (obtained by co-precipitation) with polyaniline by oxidation of aniline with potassium permanganate. To immobilize the heparin on the supports it was necessary to activate its carboxyl groups with carbodiimide (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS). Electron microscopy analysis showed that mDAC has a size of 1.5 ± 0.5 μm and 14.4 ± 0.9 nm for MAG-PANI. X-ray diffraction indicated the presence of Dacron in mDAC particles and polyaniline in PANI-MAG and formation of magnetite crystal in both preparations. Furthermore, magnetization measurements demonstrated a superparamagnetic behavior for the two particles and a magnetic saturation of 23 and 66 emu/g to mDAC and MAG-PANI, respectively, at temperatures of 293 K, 300 K and 313 K. The amount of heparin immobilized was 51 ± 0.1 g and 26.4 ± 0.09 g heparin per mg of mDAC and MAG-PANI, respectively. Human plasma was incubated with the magnetic composites of heparin (mDAC-HEP and MAG-PANI-HEP) that were subsequently washed with phosphate buffer containing increasing concentrations of NaCl (0.25; 0.5; 1.0 M). After this process, the obtained eluates were subjected to electrophoresis SDS/PAGE of proteins. Many proteins were observed in the early fractions that were depleted of the plasma (albumin, for example) and the fractions obtained from 1.0 M NaCl showed bands with a molecular weight of 58 kDa corresponding to antithrombin. Furthermore, by performing incubation with this purified antithrombin from the plasma the value of the activated partial thromboplastin time test (APTT) showed prolonged. Therefore, the proposed method has proven useful as a tool depletion of plasma proteins and purification of human antithrombin having the following advantages: facile synthesis and magnetic affinity separation.

Determina la efectividad de la aplicación del plasma rico en plaquetas (PRP) sobre el movimiento dental ortodóncico. Utilizó 20 ratas macho de raza Hoffman de 12 semanas de edad aproximadamente de entre 200 - 300 gramos dividas en dos grupos de 10 integrantes cada uno: grupo experimental y control. Empleo pentobarbital para anestesiarlas, luego de ello se colocó el aparato de ortodoncia. Posteriormente se inoculo el plasma rico en plaquetas (PRP) de la sangre de rata de la misma especie el cual fue obtenido mediante centrifugación. Se dejó a la rata con el aparato durante 7 días y se fueron haciendo mediciones cada día con un calibrador vernier. Concluye que no hubo diferencia significativa en el grupo control con el grupo experimental, por lo que el plasma rico en plaquetas no aumenta la velocidad del movimiento dental. Debido a que es muy utilizado para regeneración ósea, podría ser utilizado para mejorar la contención luego de terminar los tratamientos de ortodoncia, pero para ello se necesitan hacerse más estudios.

Determina la efectividad de la aplicación del plasma rico en plaquetas (PRP) sobre el movimiento dental ortodóncico. Utilizó 20 ratas macho de raza Hoffman de 12 semanas de edad aproximadamente de entre 200 - 300 gramos dividas en dos grupos de 10 integrantes cada uno: grupo experimental y control. Empleo pentobarbital para anestesiarlas, luego de ello se colocó el aparato de ortodoncia. Posteriormente se inoculo el plasma rico en plaquetas (PRP) de la sangre de rata de la misma especie el cual fue obtenido mediante centrifugación. Se dejó a la rata con el aparato durante 7 días y se fueron haciendo mediciones cada día con un calibrador vernier. Concluye que no hubo diferencia significativa en el grupo control con el grupo experimental, por lo que el plasma rico en plaquetas no aumenta la velocidad del movimiento dental. Debido a que es muy utilizado para regeneración ósea, podría ser utilizado para mejorar la contención luego de terminar los tratamientos de ortodoncia, pero para ello se necesitan hacerse más estudios.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-01T04:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337297.pdf: 5463795 bytes, checksum: 5dbbd7aee7017ba6922aedc855149909 (MD5) Previous issue date: 2015 / Uma série de (E)-4-[(4-Nitrobenzilideno)amino]fenóis (1a-3a) e seus análogos sililados (5-7) foi sintetizada e completamente caracterizada. O composto (E)-4-[(4-Nitrobenzilideno)amino]fenol (1a) em acetonitrila (CH3CN) age como um quimiossensor cromogênico devido ao fato de que ânions básicos levam ao seu desprotonamento, resultando numa solução colorida. A detecção seletiva de CN- sobre F- foi obtida adicionando-se 1,4% (v/v) de água ao sistema: a água solvata preferencialmente o F-, enquanto o CN- fica relativamente livre para desprotonar 1a. Outra estratégia envolveu um ensaio de competição do fenolato e do analito pelo calix[4]pirrol (CP) em CH3CN. O fenolato e o CP formam um complexo por ligação de hidrogênio, com mudança na cor do meio. Dentre diversos ânions, somente o F- foi capaz de restaurar a cor original correspondendo ao fenolato, pelo fato do ânion deslocá-lo do sítio de complexação. Em uma segunda parte do trabalho, os compostos (E)-N-(4-nitrobenzilideno)-4-[(triisopropilsilil)oxi]anilina (5) e (E)-3,5-Dimetil-N-(4-nitrobenzilideno)-4-[(triisopropilsilil)oxi]anilina (6) apresentaram-se como quimiodosímetros cromogênicos baseados na quebra da ligação silil éter seletivos em CH3CN para o ânion F- em relação a vários ânions testados. O (E)-3,5-Dibromo-N-(4-nitrobenzilideno)-4-[(triisopropilsilil)oxi]anilina (7) foi aplicado para a detecção seletiva de CN- ou F- em CH3CN com 2,0% (v/v) de água, utilizou-se o CP para interagir com F- e o iodeto cuproso para interagir com CN-, deixando CN- ou F- livres para reagir com o composto 7. Confirmou-se através das técnicas de RMN de 1H e HRMS que os compostos gerados na quebra da ligação silil éter são os fenolatos correspondentes coloridos em solução. Nos estudos cinéticos em CH3CN, verificou-se o maior valor de k2 e menor t1/2 das reações dos quimiodosímetros com F- foram obtidos para o quimiodosímetro 7. Entretanto, em CH3CN na presença de 4,0% (v/v) de água, 7 apresentou o maior valor de k2 e menor t1/2 com o ânion CN-. Na parte final do trabalho, foi desenvolvida uma estratégia simples e eficiente utilizando o quimiodosímetro 7 para a detecção altamente seletiva de CN- em sistema aquoso micelar de brometo de cetiltrimetilamônio e plasma sanguíneo humano, baseado na clivagem da ligação silil éter.<br> / Abstract : (E)-4-(4-Nitrobenzylideneamine)phenols (compounds 1a-3a) and their silylated (compounds 5-7) analogues were synthesized and fully characterized. (E)-4-[(4-Nitrobenzylidene)amine]phenol (1a) in acetonitrile (CH3CN) acts as a chromogenic chemosensor based on the idea that more basic anions cause its deprotonation, generating a colored solution. The discrimination of CN- over F- was obtained by addition 1.4% (v/v) of water to CH3CN: water preferentially solvates F-, leaving the CN- free to deprotonate 1a. Another strategy involved an assay in CH3CN comprised of the competition between phenolate dye and the analyte for calix[4]pyrrole (CP). The phenolate and CP form a hydrogen-bonded complex, which changes the color of the medium. On the addition of various anions, only F- was able to restore the original color corresponding to phenolate in solution due to the fact that the anion dislodges phenolate from the complexation site. In a second part of this thesis, (E)-N-(4-nitrobenzylidene)-4-[(triisopropylsilyl)oxy]aniline (5) and (E)-3,5-dimethyl-N-(4-nitrobenzylidene-4-[(triisopropylsilyl)oxy]aniline (6) were studied as chromogenic anionic chemodosimeters based on Si-O cleavage selective for F- over other anionic species in CH3CN. (E)-3,5-Dibromo-N-(4-nitrobenzylidene)-4-[(triisopropylsilyl)oxy]aniline (7) was applied to selective detection of CN- or F- in CH3CN with 2.0% (v/v) of water, using CP to interact with F- and cuprous iodide to interact with CN-, which makes CN- or F- free to react with 7. Experimental evidences were collected for the Si-O cleavage, which leads to the release of the corresponding phenolates colored in solution. Kinetic studies showed in CH3CN that the highest value of k2 and lowest t1/2 value of chemodosimeters reactions with F- were obtained for 7.Thus, in CH3CN with 4.0% (v/v) of water, 7 showed the highest valued of k2 and lowest t1/2 value to CN-. In the last part of the thesis, a simple and efficient strategy was developed based on the chemodosimeter approach, for the highly selective detection of CN- in an aqueous cetyltrimethylammonium bromide micellar system and human blood plasma, based on the Si-O bond cleavage.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T00:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 204203.pdf: 259703 bytes, checksum: b99946da0b60552661630267cbaa1f75 (MD5) / Este trabalho avalia a ação de diferentes concentrações de PRP aplicadas em cultura celular da linhagem de osteoblasto humanos hFOB1.19 (American Tissue Culture Collection). A metodologia envolveu o teste proliferativo do ensaio do brometo de 3-[4,4-dimetiltiazol-2-4l]-2,5-difeniltetrazolio (MTT). O plasma rico em plaquetas (PRP) obtido foi processado e diluído em meio de cultura a 50%, 25%, 12,5% e 6,125%. As concentrações de soro fetal bovino (SFB) foram de 0% e 10% em meio de cultura. A proliferação foi lida por densidade óptica após um intervalo de tempo de 96 h em leitor de Elisa. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que 50% de PRP adicionado ao meio de cultura para osteoblastos humanos da linhagem hFOB1.19, induziu a melhor resposta proliferativa. As concentrações de 12,5% e 6,125% de PRP não mostraram diferença estatisticamente significativa. Verificou-se que a proliferação celular obtida pelo PRP a 50% foi mais significativa, em cultura com e sem SFB, comparada com as outras diluições realizadas. Conclui-se que o PRP promove proliferação de osteoblastos e indica que não é necessário soro para indução da proliferação de osteoblastos mediada pelo PRP, sugerindo o seu uso clinicamente para otimizar procedimentos de enxertia óssea na implantodontia.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T02:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 188845.pdf: 1608971 bytes, checksum: 13b2314a8641601163a13b498b027ac1 (MD5) / Este trabalho avalia a ação de três tipos de Plasma rico em plaquetas (PRP): o puro que se encontra dentro da bolsa do concentrado plaquetário; o ativado que corresponde ao puro misturado com cloreto de cálcio a 10%; e o geleificado que corresponde a mistura ativada incorporada de osso particulado após a espera do tempo de geleificação. Estes tipos de PRP foram aplicados sobre a proliferação de células "in vitro" de linhagem fibroblástica NIH/3T3. Para o desenvolvimento desta metodologia foi realizado a partir de uma garrafa de cultura de células o plaqueamento, sobre estas subculturas foi realizado o teste de citotoxicidade que estabeleceu a concentração de 10 ng, e por fim o teste de proliferação, nesta concentração, comparado com SFB a 2% e 5% foi significativo para o grupo do PRP ativado.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-17T15:53:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 497087 bytes, checksum: 1f9ead9346b35a8730251c22a505e93c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T15:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 497087 bytes, checksum: 1f9ead9346b35a8730251c22a505e93c (MD5) Previous issue date: 2005-07-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foi realizado um experimento com o objetivo de se determinar níveis ótimos de inclusão de plasma sanguíneo em pó em dietas complexas pós-desmame sobre o desempenho dos leitões em três períodos distintos: 21 a 28 (Período I); 29 a 35 (Período II) e 36 a 42 (Período III) dias de idade. Foram utilizados 112 leitões, desmamados aos 21 dias de idade, com peso inicial de 5,90±0,40kg, distribuídos em delineamento em blocos ao acaso. Os animais ainda permaneceram no experimento dos 43 aos 56 dias de idade (Período IV) recebendo ração convencional de creche, à base de milho e farelo de soja, para se observar um possível ganho compensatório entre os tratamentos. Os tratamentos consistiram de níveis de inclusão de 0,0; 4,0; 6,0 e 8,0% para o Período I; 0,0; 2,8; 4,2 e 5,6% para o Período II e 0,0; 2,0; 3,0 e 4,0% para Período III, sendo que os níveis foram decrescendo de acordo com o provável aumento de consumo dos animais. As dietas experimentais fareladas, isoenergéticas e isoproteicas, foram formuladas para se garantir um consumo mínimo de 0,0; 10,0; 14,0 e 18,0 g/dia de plasma sangüíneo em pó por animal durante o período experimental. Foi mantida a relação aminoacídica entre lisina e os demais aminoácidos essenciais, baseada no conceito de proteína ideal para suínos na fase pré-inicial. O nível de lactose foi mantido constante nos diferentes tratamentos dentro de cada período. Utilizou-se plasma sanguíneo em pó misto (de origem bovina e suína) obtido a partir da separação das frações plasma e células do sangue via centrifugação e posterior secagem pelo processo de spray-dried. Não houve efeito (P>0,10) dos tratamentos sobre o consumo de ração diário médio dos leitões no Período I. Entretanto, o ganho de peso diário médio respondeu de forma quadrática (P<0,10) ao aumento dos níveis de inclusão de plasma. No Período II não houve efeito (P>0,10) dos tratamentos sobre o consumo de ração médio diário, entretanto o aumento dos níveis de plasma nas dietas influenciou de maneira quadrática o ganho de peso diário médio (P<0,05). No Período III o consumo de ração médio diário respondeu de forma linear (P<0,05) aos níveis de plasma, enquanto que o ganho de peso respondeu de forma quadrática (P<0,10). Não se observou diferença (P>0,10) entre nenhum dos dois parâmetros analisados no Período IV. Os níveis de inclusão de plasma sangüíneo em pó de 4,3% para o Período I, 2,5% para o Período II e 1,3% para o Período III foram aqueles nos quais os animais apresentaram melhor desempenho. / An experiment was accomplished with the objective of determining great levels of inclusion in complex diets post-weaning on the performance of the pigs in three different periods: 21 a 28 (Period I); 29 a 35 (Period II) e 36 a 42 (Period III) days of age. 112 pigs were used, weaned with 21 days of age, with initial body weight of 5.9 ± 0.40 kg, distributed in a completely randomized experimental block design. The animals stayed in the experiment also from 43 to the 56 days of age (Period IV) receiving conventional growing diet, based on corn and soybean meal, to observe a possible compensatory weight gain among the treatments. The treatments consisted of levels of inclusion of 0; 4.0; 6.0 and 8.0% for the Period I; 0; 2.8; 4.2 and 5.6% for the Period II and 0; 2.0; 3.0 and 4.0% for Period III, and the levels decreased in agreement with the probable increase of feed intake of the animals. The experimental meal diets, isoenergetic and isoproteic, were formulated to guarantee a minimum feed intake of 0; 10; 14 and 18 g/day of spray dried plasma for each animal during the experimental period. The amino acidic relationship between lysine and the other essential amino acids was maintained, based on the concept of ideal protein for swine in pre-initial phase. The lactose level was maintained constant in the treatments during each period. Mixed spray dried plasma was used (bovine and swine origin) obtained from the separation of fractions from plasma and blood cells through centrifugation and subsequent drying threw spray-drying process. It was not observed effect (P>0,10) between the treatments on the average daily feed intake (ADF) and the feed conversion (FC) of the pigs in the period I. The average daily weight gain (ADWG) answered in a quadratic way (P<0,10) to the increase of the levels of plasma inclusion. In the Period II there was no effect (P>0,10) of the treatments on the average daily feed intake, however the increase of the plasma levels in the diet influenced in a quadratic way the average daily weight gain (P=0,05) and the feed conversion (P<0,10). The feed conversion and the average daily feed intake answered in a linear way (P<0,05) to the plasma levels, while the body weight gains answered in a quadratic way (P<0,10) during the Period III. Significant difference was not observed (P>0,10) among none of the three parameters analyzed in ixthe Period IV. The levels of 4,3% for the Period I, 2,5 for the Period II and 1,3% for the Period III were those which the animals demonstrated better performance.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2013-06-25T19:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 311324.pdf: 1922838 bytes, checksum: d61fe3294c5ed4d8db715894bb7fa6c8 (MD5) / As células-tronco mesenquimais (CTMs) são amplamente estudadas por apresentarem potencial de auto-renovação e multidiferenciação, além de possibilidade de isolamento a partir de diversos tecidos. A placenta humana representa uma fonte de CTMs abundante, acessível e livre de questionamentos éticos. O comportamento celular está intimamente ligado ao microambiente tridimensional que as cercam no tecido nativo. Em vista disso, biomateriais vêm sendo desenvolvidos na tentativa de mimetizar in vitro esta complexidade tecidual. O hidrogel de celulose bacteriana (HCB), em particular, tem atraído grande interesse devido a sua nanoestrutura, biocompatibilidade e propriedades mecânicas. Por outro lado, a hidroxiapatita (HAp), tem sido usada como um biomaterial promissor para engenharia de tecido ósseo, devido a sua biocompatibilidade e propriedades osteoindutoras. O plasma rico em plaquetas (PRP) mostra-se como uma interessante fonte de fatores de crescimento a ser aplicada com biomateriais. O presente trabalho teve como objetivo principal, avaliar a interação e viabilidade de células-tronco mesenquimais derivadas da placenta humana (CTMPs) em HCB e em um compósito HCB-HAp, bem como analisar a influência do PRP na viabilidade e proliferação das CTMPs. Para isto, isolamos uma população de CTMPs, com morfologia, imunofenótipos e capacidade de diferenciação características de CTMs. Os HCBs foram produzidos por bactérias Gluconacetobacter hansenii cultivadas em um meio de cultivo apropriado e sob circunstâncias estáticas. A interação célula-HCB foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal. Os resultados revelaram que as CTMPs apresentam capacidade de aderir ao HCB, porém a interação foi superficial, apresentando pequena capacidade de migração para o interior do biomaterial. Compósitos HCB-HAp foram produzidos através da síntese biomimética de HAp, por imersão dos HCB já sintetizados em soluções de cálcio e fosfato, alternadamente. Foram testados compósitos com cinco concentrações de HAp. A microestrutura e a composição química dos compósitos foram verificadas por MEV e EDS e revelaram o aumento da deposição dos cristais de HAp ao longo dos ciclos. A interação célula-compósito foi verificada por MEV e microscopia confocal, assim como no HCB, a interação foi superficial. O aumento da concentração de HAp nos compósitos prejudicou a adesão e as células tenderam a formar agregados nos compósitos com maior concentração de HAp. Dentre os compósitos, o HCB-HAp1(com apenas um ciclo de deposição de HAp) foi considerado o ideal para estudos futuros. Os efeitos do PRP foram analisados sobre a viabilidade e proliferação celular e demonstrou ter efeito dependente da concentração utilizada, sendo 2% a concentração que mostrou aumento na proliferação celular. Desta forma, concluímos que, para ambos biomateriais, melhorias relacionadas à microestrutura e porosidade devem favorecer migração das CTMPs ao interior do hidrogel e, mediante a estas melhorias, a associação do compósito HCB-HAp1 com CTMPs e PRP, deve formar um sistema de cultivo tridimensional promissor para estudos em engenharia de tecido ósseo. / Mesenchymal stem cells (MSCs) are widely studied due to their self-renewal anddifferentiation potential, in addition to the possibility of isolation from several tissues.The human placenta represents an abundantsource of MSCs, readily accessible and free of ethical questions. The unique cell behavior is closely related to the specialized, three-dimensional microenvironment that immediately surrounds them in native tissue. Inthis way, biomaterials are being developed in an attempt to mimic thiscomplexity in vitro.In particular, bacterial cellulose hydrogel (BCH)has attracted great interest due toits unique nanostructure, biocompatibility and good mechanical properties. On the otherhand, the hydroxyapatite (HAp) has been used as a ubiquitous biomaterial in bone tissue engineering due to its biocompatibility and osteoinductive properties. The platelet rich plasma (PRP) appears as an interesting source of growth factors that may be used together with biomaterials. In this study we evaluated the interaction and viability of human placenta derived mesenchymal stem cells (PMSCs) cultured in BCH and BCH-HAp composite, and analyzed the influence of PRP on the viability and proliferation of PMSCs. We isolate a population of PMSCs with morphology, immunophenotypes and differentiation ability, characteristics of MSCs.The BCHs were producted by Gluconacetobacter hansenii bacteria grown in a suitable culture medium under static conditions. The cell-BCH interaction was analyzed by scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy. The results revealed that the PMSCs present the ability to adhere to BCH, but the interaction was superficial, presenting low ability to migrate into the biomaterial. BCH-HAp composites were producted by the HAp biomimetic synthesis, by immersing the synthesized BCH in calcium and phosphate solutions. Composites with five concentrations of HAp were tested. The microstructure and chemical composition of the composites were observed by SEM and EDS and revealed increased deposition of HAp crystals along the cycles. The cell-composite interaction was observed by SEM and confocal microscopy and, even as in HCB, the interaction was superficial. The increase of HAp concentration impaired the cell adhesion and the cells tended to form aggregates in the composites with higher HAp concentration. Among the composites, the BCH-HAp1 (with just one HAp deposition cycle) was considered ideal for future studies. The PRP effects were analyzed on cell viability and proliferation and demonstrate to have a concentration-dependent effect. The higher increase in cell proliferation was achieved with 2% PRP. Thus, we conclude that, for both biomaterials improvements related to the microstructure and porosity would be favorable to the PMSCs migration. By these improvements, the association of the composite HCB-HAp1 with CTMPs and PRP must form a promising three-dimensional culture system for studies in bone tissue engineering.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:01:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320695.pdf: 2457796 bytes, checksum: 647f86c6ebbb793a507f49003c0c1e43 (MD5) Previous issue date: 2013 / As células tronco mesenquimais (CTM) exibem ampla plasticidade e rápida expansão in vitro, podendo ser isoladas e manipuladas de modo reprodutível e com poucos problemas éticos. Dentre os diversos tipos de CTM encontram-se as CTM da derme (CTMd), as quais demonstram capacidade para agir na regeneração de tecidos lesionados. Atualmente, estudos visando o desenvolvimento de estratégias para o reparo de grandes lesões de pele vêm sendo realizados. Nesse sentido a Engenharia de Tecidos apresenta matrizes de regeneração dérmica (MRD), utilizadas na clínica cirúrgica, como a MRD Integra®. Além disto, estudos envolvendo fatores de crescimento (FC) vêm apresentando resultados satisfatórios na manutenção e diferenciação celular, neste contexto, o plasma rico em plaquetas (PRP) se mostra uma interessante fonte de FC a ser aplicada com biomateriais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o uso do PRP sobre as CTMd humana em ambientes de cultivo bidimensional e tridimensional, associados à MRD Integra®. Para isto, as CTMd foram cultivadas sob dois modelos: (1) bidimensional: CTMd associado ao PRP sobre o plástico; (2) CTMd associado ao PRP sobre o Integra®. Em cultivo bidimensional, os resultados mostraram que o PRP promove diminuição da viabilidade e número de células. Este resultado é coerente com o estímulo do PRP na diferenciação celular, aumentando a proporção de células com o fenótipo muscular liso/miofibroblástico (positiva para a-SMA). Concomitantemente a estes resultados, observou-se que as culturas tratadas com PRP apresentaram células grandes com morfologia alongada, diferentemente das culturas controle, que apresentavam células menores com morfologia arredondada. Além disso, as CTMd tratadas com PRP apresentaram maior depósito de colágeno tipo I. Em modelo tridimensional, o PRP promoveu diminuição da viabilidade celular, assim como estimulou a diferenciação para células positivas para a-SMA. As análises de MEV demonstraram que as células cultivadas com PRP apresentam maior adesão e adquiriram características fenotípicas semelhantes ao muscular liso/miofibroblástico. Em conclusão, estes resultados demonstram que a associação da MRD Integra® com as CTMd e o PRP constituem um microambiente efetivo para o crescimento, a viabilidade, a migração, a adesão e a diferenciação das CTMd, apresentando grande potencial para a Engenharia de Tecidos. <br> / Abstract : Mesenchymal stem cells (MSC) exhibit broad differentiation potential and high expansion capacity in vitro. They can be isolated and manipulated in a reproducible fashion and their use raises no ethical issues. The dermis is a remarkable source of MSCs (namely dermis derived MSC or dMSC), which are able to act in the regeneration of injured tissues. Currently, several efforts to develop strategies for the repair of large skin lesions have been made. In this scenario, the Tissue Engineering area aims to develop biomaterials that can be used in surgical procedures as dermal regeneration templates (DRT), such as Integra ®. Furthermore, studies involving growth factors (GF) have shown satisfactory results in cell differentiation and maintenance. The platelet-rich plasma (PRP) comprises an interesting source of GF to be applied in association with biomaterials. This study aimed to evaluate the use of PRP on human dMSC cultured on dimensional and three-dimensional environments. Human dMSC were grown under two models: (1) two-dimensional: cells grown on plastic in association with PRP and (2) associated with PRP on the DRT Integra ®. Under the two-dimensional culture system, there was PRP promoted a decrease in cell viability and the total cell number. This result is consistent with the stimulation of PRP on cell differentiation, increasing the proportion of cells with the phenotype smooth muscle / myofibroblastic (a-SMA-positive). Concurrently to these results, cells treated with PRP showed elongated morphology with large size. Contrariwise, cells in the control condition were smaller and with rounded morphology. Moreover, dMSC treated with PRP showed greater deposition of collagen type I. In the three-dimensional model, PRP caused a decrease in cell viability, and also stimulated the differentiation of dMSC into a-SMA positive. Scanning electronic microscopy analyzes demonstrated that cells cultured with PRP acquired greater adhesion and phenotypic characteristics similar to smooth muscle / myofibroblastic. In conclusion, these results demonstrate that the association of DRT Integra® with dMSC and PRP provides an effective microenvironment that supports growth, viability, migration, adhesion and differentiation of dMSC. This shows, therefore, show great potential for fure application in Tissue Engineering.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:42Z : No. of bitstreams: 1 000853080.pdf: 1598088 bytes, checksum: 57bd94ebc22d8cc7dfc71cf04598ee04 (MD5) / Este estudo avaliou a inclusão de plasma sanguíneo desidratado (PD) na dieta da tilápia-do-Nilo por meio de uma pesquisa dividida em duas fases: na Fase I, com duração de 60 dias, avaliou-se o desempenho produtivo e parâmetros histológicos dos peixes alimentados com cinco dietas: PD0 (controle); PD 1,66; PD 3,32; PD 4,97; PD 6,63% de inclusão de PD. Para isto distribuiu-se 440 peixes em 40 aquários de 250 L dotados de filtro físico e biológico com controle de temperatura (26 ±1°C). Na Fase II avaliou-se os parâmetros hematológicos de juvenis de tilápia-do- Nilo, antes e após o estresse por baixa temperatura (16°C) durante sete dias, utilizandose de 60 peixes distribuídos aleatoriamente em 30 aquários de 40 L, dotados de biofiltros e aeração individuais. A inclusão de PD determinou maior ganho de peso e peso final e melhora da integridade intestinal. Manutenção e/ou estímulo à eritropoiese foi observado com a inclusão de PD inferindo melhor higidez e resistência orgânica aos peixes expostos ao estresse por baixa temperatura. Aumento na produção de neutrófilos e manutenção de monócitos demonstrou o efeito estimulatório do PD sobre o sistema imune inato. Os dados foram submetidos à análise de variância (P<0,05), complementado pelo teste de comparações múltiplas de Tukey. Foram realizadas análises de regressão nos casos em que o modelo foi significativo (R2 >0,70). Para dados fora da curva de normalidade, aplicou-se o teste não paramétrico de Kruskal- Wallis (P<0,05), complementados com o teste de comparações de Mann-Whitney. A inclusão de PD à dieta de Oreochromis niloticus melhora o desempenho produtivo, a saúde intestinal, perfil hematológico e resistência orgânica ao estresse por baixa temperatura. Com base nos resultados de desempenho e histologia, recomenda-se o nível de inclusão de 4,97% à dieta, pois traz mais benefícios quando comparado ao ... / This study evaluated the inclusion of dehydrated blood plasma (PD) on Nile tilapia diet by a research divided in two stages: 1° Stage, after 60 days, was measured the productive performance and histological parameters of fish, whose received five diets: PD0 (control); PD 1,66; PD 3,32; PD 4,97; PD 6,63% of dehydrated blood plasma inclusion. 440 fish was randomized into 40 aquariums (250 L) with physic-biological filter and automatic system water control (26 ±1°C) on the 1°st. On the second stage, was evaluated hematological parameters of Nile tilapia juveniles, before and after the cold stress (16°C). During seven days, 60 fish were allocated in 30 aquariums (40 L), with individual aeration and filters, provided by a division in each, that assure individuals spaces. PD inclusion results presented greater weight gain, final weight and improves the intestinal integrity. Maintenance and/or stimulation of erythropoiesis was observed with the addition of PD, inferring better health and fish organic resistance exposed to stress by low temperature. Increased production of neutrophils and monocytes maintenance, demonstrated the stimulatory effect of PD on the innate immune system . The data was submitted to the analysis technique variance (P<0.05), complemented by the multiple comparison Tukey test. Regression analyzes were performed when the model was significant (R2>0.70). For outresults of the normal curve, was applied the nonparametric Kruskal-Wallis analysis (P<0,05), complemented by Mann-Whitney test comparisons. The inclusion of PD for Oreochromis niloticus on diet, improves growth performance, gut health, blood profile and organic resistance to stress by low temperature. Based on the results of growth performance and histology, is recommended the PD inclusion of 4.97 % on the diet, because it brings more benefits when compared to PD treatment without inclusion