Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T17:59:24Z No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Camila_Barbosa_Analise_CPqRR_2016.pdf: 594407 bytes, checksum: 9810f750425fd643ea5aeebcee118c95 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T17:59:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Camila_Barbosa_Analise_CPqRR_2016.pdf: 594407 bytes, checksum: 9810f750425fd643ea5aeebcee118c95 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T17:59:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Camila_Barbosa_Analise_CPqRR_2016.pdf: 594407 bytes, checksum: 9810f750425fd643ea5aeebcee118c95 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 3 D_Mestrado_Camila_Barbosa_Analise_CPqRR_2016.pdf.txt: 99207 bytes, checksum: 7138ee2affbb1ed24e564e6839fee7fb (MD5) D_Mestrado_Camila_Barbosa_Analise_CPqRR_2016.pdf: 594407 bytes, checksum: 9810f750425fd643ea5aeebcee118c95 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A malária é uma doença parasitária prevalente principalmente em regiões tropicais e subtropicais do mundo. Indivíduos infectados com Plasmodium vivax, mais prevalente espécie do parasito no Brasil, apresentam dentre outras características, a anemia como uma das principais complicações. Além disso, essa espécie é capaz de desenvolver hipnozoítos que podem levar ao reaparecimento dos sintomas em episódios denominados recaídas. No entanto, os mecanismos responsáveis pela ativação desses hipnozoítos ainda são desconhecidos. O metabolismo do ferro tem sido associado com o desenvolvimento de diversos organismos, inclusive Plasmodium, além de estar envolvido em distúrbios hematológicos, como a anemia. Assim, a hipótese investigada neste trabalho é que as moléculas envolvidas na homeostase do ferro podem ser utilizadas como biomarcadores de recaída e/ou de anemia através da análise dos polimorfismos C282Y e H63D no gene da hemocromatose (HFE) e C326Y/S no gene da ferroportina (FPN). Os indivíduos analisados foram divididos segundo os dois grandes temas desse estudo: (1) indivíduos que tiveram uma ou múltiplas recaídas por P. vivax e (2) indivíduos anêmicos e não anêmicos infectados por P. vivax. A frequência do polimorfismo H63D identificada no grupo de múltiplas recaídas foi de 17%, enquanto que no grupo de uma recaída foi de apenas 2%. Não foi observada diferença significativa entre indivíduos anêmicos e não anêmicos para os polimorfismos HFE H63D e C282Y. Tanto no grupo de anemia quanto no grupo de recaída não foram encontrados os polimorfismos C326Y e C326S no gene da ferroportina. Os resultados obtidos nesse estudo evidenciam que o polimorfismo HFE H63D pode estar relacionado ao acúmulo de ferro nos indivíduos com múltiplas recaídas, sugerindo que esse polimorfismo pode ser considerado um biomarcador de múltiplas recaídas. Além disso, esses resultados abrem a perspectiva de realização de novos estudos que contribuam para a elucidação dos mecanismos que desencadeiam as múltiplas recaídas. Esses resultados podem inclusive contribuir para novas estratégias nos programas de eliminação da malária, como projetos de monitoramento de indivíduos que possuam predisposição ao acúmulo de ferro, e também resistência ao tratamento, principalmente nas áreas endêmicas. / Malaria is one of the most prevalent parasitic diseases in tropical and subtropical regions of the world. Plasmodium vivax, the major species of the parasite in Brazil, has among other characteristics: anemia as one of the main symptoms, and the ability to develop latent forms in the liver, called hypnozoites, responsible for the reappearance of symptoms months or even years after infection. However, the mechanisms accountable for activation of these hypnozoites are still unknown. The iron metabolism has been associated with the development of many organisms, including Plasmodium, as well as being involved in hematological disorders such as anemia. Therefore, the hypothesis of this study is that the molecules involved in iron homeostasis can be used as biomarkers of relapse and/or anemia by analysis of the polymorphisms C282Y and H63D in the hemochromatosis gene (HFE) and C326Y/S in the ferroportin gene (FPN). The individuals analyzed were divided according to the two areas of this study: Relapse and anemia. By PCR-RFLP were found 33% heterozygotes for the HFE H63D polymorphism and only 4% heterozygous (n=35). The frequency of the HFE H63D polymorphism in multiple relapses group was 17% of the mutated allele, while in the group of one relapse was 2%. There was no significant difference between anemic and non-anemic individuals for HFE H63D and C282Y polymorphism. In both groups of anemia and relapse the C326Y and C326S polymorphisms were not found in the ferroportin gene. The results of this study show that the HFE H63D polymorphism may be related to the accumulation of iron in individuals with multiple relapses, suggesting that this polymorphism can be considered a biomarker of multiple relapses. Moreover, these findings open up the prospect of new studies that contribute to the elucidation of the mechanisms that trigger multiple relapses. These results may contribute to new strategies for malaria elimination programs, such as monitoring projects of individuals who have predisposition to iron accumulation, especially in endemic areas

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T11:22:10Z No. of bitstreams: 1 Robortella_Diagnóstico molecular de infecção maláricas_2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T11:22:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Robortella_Diagnóstico molecular de infecção maláricas_2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T11:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robortella_Diagnóstico molecular de infecção maláricas_2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:59Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Robortella_Diagnostico molecular de infeccao malaricas_2016.pdf.txt: 147676 bytes, checksum: e74efc2c2c5793a2927f4ba6c4952b6f (MD5) Robortella_Diagnostico molecular de infeccao malaricas_2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Nos últimos anos, a incidência de malária no Brasil vem reduzido significativamente, particularmente, em virtude das medidas de controle. Neste novo cenário, faz-se necessário identificar e tratar a malária submicroscópica, uma vez que estes indivíduos constituem fonte de infecção para o mosquito vetor. Neste contexto, nosso grupo de pesquisa vem aprimorando o diagnóstico molecular de malária e, recentemente, padronizou uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), altamente sensível, para a detecção de alvos não ribossomais (Pvr47 e Pfr364) dos plasmódios. Baseado nestes achados, o objetivo do presente trabalho foi investigar a malária subpatente em tribos indígenas de povos Ianomâmis, onde as baixas parasitemias parecem ser frequentes. A população de estudo foi constituída de indivíduos pertencentes a cinco aldeias ianomâmis do Polo Base Marari, estado do Amazonas. O estudo envolveu dois cortes transversais, sendo realizados nos meses de setembro (primeiro corte transversal) e novembro (segundo corte trans versal) de 2014. Foram incluídos no estudo um total de 914 indígenas, com cerca de 1590 amostras de sangue coletadas em papel de filtro. Para o diagnóstico molecular de malária, quatro diferentes protocolos de PCR foram utilizados, sendo três baseados em alvos ribossomais (18S rRNA) e um em alvos não ribossomais (Pvr47/Pfr364) dos plasmódios. Os resultados aqui obtidos permitiram demonstrar que os alvos Pvr47/Pfr364 foram os mais sensíveis para o diagnóstico de malária submicroscópica, embora não se mostraram adequados para o diagnóstico de espécie. Dentre os protocolos baseados no gene 18S rRNA aqui utilizados (Nested-PCR, RT-Mangold e RT-Rougemont), a Nested-PCR (método molecular de referência) se mostrou mais apropriada para o diagnóstico específico das infecções maláricas submicroscópicas. Em conjunto, este estudo de infecção malárica em populações ianomâmis permitiu demonstrar que: (i) enquanto 0,9% das amostras foram positivas pela microscopia ótica (MO), diagnóstico de rotina, os protocolos moleculares identificaram 7,8% de postividade; (ii) P. vivax foi a espécie predominante, seguido do P. malariae e P. falciparum em proporções similares; (iii) a positividade por malária diminuiu com a idade (crianças>adolescentes>adultos) e foi influenciada pelas variações sazonais (setembro>novembro); (iv) a prevalência de malária variou significativamente nas diferentes aldeias, sugerindo que a doença não está homogeneamente distribuída na área de estudo. Espera-se que os resultados aqui obtidos possam contribuir para o direcionamento e monitoração de medidas de controle em reservas indígenas, bem como estimar a real incidência de malária nas áreas sob vigilância epidemiológica. / In the last few years, considerable success in reducing malaria incidence has been achieved in Brazil mainly as result of global efforts to control disease. In this new scenario, the need to detect and treat submicoscopic infections is becoming increasing important, as these individuals can be a source of infection for mosquito vectors. Aiming to improve molecular diagnosis of malaria, our research group has standardized a real-time PCR protocol (RT-PCR), highly sensible, for the detention of non-ribossomal plasmodium targets. Based on these findings, the goal of the present work was to investigate subpatent malaria infection in ianomâmis indigenous tribes, where low levels of parasitaemia seems to be common. The study population involved five Ianomâmis communities from the indigenous district of “Polo Base Marari”, Amazon state. Two cross-sectional studies were carried-out by the research team, in september (first survey) and november (second survey) of 2014. A total of 914 indigenous were involved in the study, and 1590 blood samples were collected in filter paper. For molecular diagnosis of malaria, four different PCR protocols were tested, three based on ribossomal (18S rRNA) target and one non-ribosomal (Pvr47/Pfr364). The result s obtained demonstrated that Pvr47/Pfr364 was the most sensitive protocol, however, these targets did not differentiate Plasmodium species. Among the protocols based on the 18S rRNA gene (Nested-PCR, RT-Mangold and RT-Rougemont), the Nested-PCR (reference molecular method) was more suitable for the specific diagnosis of submicroscopic infection. Taken together, this study of malaria infection in Yanomani population showed that: (i) while 0.9% of positivity was detected by the optical microscopy (MO), the conventional routine diagnosis, molecular diagnosis was able to detect 7,8%; (ii) P. vivax was the most prevalent specie in the area, followed by P. malariae and P. falciparum in similar proportions; (iii) malaria positivity decreased with age (children>teenagers>adults) and fluctuates according to seasonal variations (september>november); (iv) malaria prevalence varied accor ding to the Yanomani tribe, which suggest that malaria is not homogeneous transmitted in the study area. The results presented here may account for strategic plans to control malaria in indigenous populations, and to estimate the real malaria incidence in areas under epidemiological vigilance.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T18:25:15Z No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Robortella_Diagnóstico_CPqRR-2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T18:25:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Robortella_Diagnóstico_CPqRR-2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T18:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 D_Mestrado_Robortella_Diagnóstico_CPqRR-2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 3 D_Mestrado_Robortella_Diagnostico_CPqRR-2016.pdf.txt: 147676 bytes, checksum: e74efc2c2c5793a2927f4ba6c4952b6f (MD5) D_Mestrado_Robortella_Diagnostico_CPqRR-2016.pdf: 1869875 bytes, checksum: f2ad512eae8aaa93188f43cda2c1a19a (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Nos últimos anos, a incidência de malária no Brasil vem reduzido significativamente, particularmente, em virtude das medidas de controle. Neste novo cenário, faz-se necessário identificar e tratar a malária submicroscópica, uma vez que estes indivíduos constituem fonte de infecção para o mosquito vetor. Neste contexto, nosso grupo de pesquisa vem aprimorando o diagnóstico molecular de malária e, recentemente, padronizou uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), altamente sensível, para a detecção de alvos não ribossomais (Pvr47 e Pfr364) dos plasmódios. Baseado nestes achados, o objetivo do presente trabalho foi investigar a malária subpatente em tribos indígenas de povos Ianomâmis, onde as baixas parasitemias parecem ser frequentes. A população de estudo foi constituída de indivíduos pertencentes a cinco aldeias ianomâmis do Polo Base Marari, estado do Amazonas. O estudo envolveu dois cortes transversais, sendo realizados nos meses de setembro (primeiro corte transversal) e novembro (segundo corte transversal) de 2014. Foram incluídos no estudo um total de 914 indígenas, com cerca de 1590 amostras de sangue coletadas em papel de filtro. Para o diagnóstico molecular de malária, quatro diferentes protocolos de PCR foram utilizados, sendo três baseados em alvos ribossomais (18S rRNA) e um em alvos não ribossomais (Pvr47/Pfr364) dos plasmódios. Os resultados aqui obtidos permitiram demonstrar que os alvos Pvr47/Pfr364 foram os mais sensíveis para o diagnóstico de malária submicroscópica, embora não se mostraram adequados para o diagnóstico de espécie. Dentre os protocolos baseados no gene 18S rRNA aqui utilizados (Nested-PCR, RT-Mangold e RT-Rougemont), a Nested-PCR (método molecular de referência) se mostrou mais apropriada para o diagnóstico específico das infecções maláricas submicroscópicas. Em conjunto, este estudo de infecção malárica em populações ianomâmis permitiu demonstrar que: (i) enquanto 0,9% das amostras foram positivas pela microscopia ótica (MO), diagnóstico de rotina, os protocolos moleculares identificaram 7,8% de postividade; (ii) P. vivax foi a espécie predominante, seguido do P. malariae e P. falciparum em proporções similares; (iii) a positividade por malária diminuiu com a idade (crianças>adolescentes>adultos) e foi influenciada pelas variações sazonais (setembro>novembro); (iv) a prevalência de malária variou significativamente nas diferentes aldeias, sugerindo que a doença não está homogeneamente distribuída na área de estudo. Espera-se que os resultados aqui obtidos possam contribuir para o direcionamento e monitoração de medidas de controle em reservas indígenas, bem como estimar a real incidência de malária nas áreas sob vigilância epidemiológica. / In the last few years, considerable success in reducing malaria incidence has been achieved in Brazil mainly as result of global efforts to control disease. In this new scenario, the need to detect and treat submicoscopic infections is becoming increasing important, as these individuals can be a source of infection for mosquito vectors. Aiming to improve molecular diagnosis of malaria, our research group has standardized a real-time PCR protocol (RTPCR), highly sensible, for the detention of non-ribossomal plasmodium targets. Based on these findings, the goal of the present work was to investigate subpatent malaria infection in ianomâmis indigenous tribes, where low levels of parasitaemia seems to be common. The study population involved five Ianomâmis communities from the indigenous district of “Polo Base Marari”, Amazon state. Two cross-sectional studies were carried-out by the research team, in september (first survey) and november (second survey) of 2014. A total of 914 indigenous were involved in the study, and 1590 blood samples were collected in filter paper. For molecular diagnosis of malaria, four different PCR protocols were tested, three based on ribossomal (18S rRNA) target and one non-ribosomal (Pvr47/Pfr364). The results obtained demonstrated that Pvr47/Pfr364 was the most sensitive protocol, however, these targets did not differentiate Plasmodium species. Among the protocols based on the 18S rRNA gene (Nested-PCR, RT-Mangold and RT-Rougemont), the Nested-PCR (reference molecular method) was more suitable for the specific diagnosis of submicroscopic infection. Taken together, this study of malaria infection in Yanomani population showed that: (i) while 0.9% of positivity was detected by the optical microscopy (MO), the conventional routine diagnosis, molecular diagnosis was able to detect 7,8%; (ii) P. vivax was the most prevalent specie in the area, followed by P. malariae and P. falciparum in similar proportions; (iii) malaria positivity decreased with age children>teenagers>adults) and fluctuates according to seasonal variations (september>november); (iv) malaria prevalence varied according to the Yanomani tribe, which suggest that malaria is not homogeneous transmitted in the study area. The results presented here may account for strategic plans to control malaria in indigenous populations, and to estimate the real malaria incidence in areas under epidemiological vigilance.

Artemisinin-resistant Plasmodium falciparum parasites have been reported in the Greater Mekong Subregion since 2007. Artemisinin combination therapy (ACT) is the mainstay of antimalarial treatment and is responsible for decreases in malaria-related morbidity and mortality over the past fifteen years. The slowed parasite clearance rates following ACT indicates resistance to artemisinin derivatives. This resistance places increasing selective pressure for variants or traits that confer resistance to the partner drug used in combination and has led to the rapid failure of several partner drugs. While a single nucleotide polymorphism (SNP) in kelch13 has been shown to mediate some resistance phenotypes, the complete mechanism of artemisinin resistance is poorly understood. The known mechanisms of resistance hint at a connection to autophagy, an intracellular pathway that cells use to degrade waste molecules or organelles in response to stress and starvation, which is poorly characterized in Plasmodium. In this doctoral thesis project, I investigated the role of an autophagy-like mechanism in P. falciparum in the mechanism of artemisinin resistance. I found a SNP in autophagy-related gene 18 (atg18) that was associated with clinical delayed parasite clearance half-life following ACT. This gene encodes PfAtg18, a protein that I characterized as being similar to mammalian/yeast homologues in terms of structure, binding abilities, and ability to form puncta in response to stress. In order to investigate the contribution of the mutation in this protein, I edited the atg18 gene using CRISPR/Cas9 and screened the mutant and parent parasites against a drug library of over 6000 unique compounds. I discovered that while the SNP did not change the mutant parasite's susceptibility to any of the antimalarial compounds using a 72-hour drug pulse, it did alter the susceptibility to 227 other compounds. Further, I found that the SNP offers parasites a fitness advantage by allowing them to grow better in nutrient-limited settings. Finally, I determined that neither this atg18 SNP nor several polymorphisms in kelch13 modulate a dormancy phenotype that appears to be involved in the artemisinin-resistance mechanism.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:02Z : No. of bitstreams: 1 000848356.pdf: 1331001 bytes, checksum: d6e3659c184a0dc66b218b791f493b49 (MD5) / A malária é a endemia de maior impacto na Saúde Pública de países tropicais, devido à alta morbidade e mortalidade. Considerando a malária como uma zoonose, nos quais primatas podem funcionar como reservatórios de espécies de Plasmodium que podem infectar seres humanos nos levam a realizar estudos de malária em primatas com inquestionável relevância. Sabendo-se que geralmente a distribuição da malária humana e de primatas segue a mesma distribuição dos anofelinos, mosquitos vetores, neste trabalho investigaram-se a presença de Plasmodium spp. em primatas neotropicais e em anofelinos na Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Brasil. Colheram-se amostras de sangue de primatas neotropicais do CETAS-São Luís (n=141) e de vida livre (n=20) da Reserva Particular Sítio Aguahy, município de São José de Ribamar. Mosquitos anofelinos foram capturados nesta mesma reserva (n=380) e no Sítio Mangalho (n=36), localizado na Área de Proteção Ambiental do Maracanã, município de São Luís, totalizando em 54 ―pools‖. As amostras de sangue de primatas foram submetidas a testes morfológicos, sorológicos (RIFI e ELISA-teste) e moleculares (qPCR e PCR convencional) para identificação de Plasmodium. Os ―pools‖ de mosquitos foram ensaiados por testes moleculares para identificação de Plasmodium. Cinco primatas tiveram lâminas positivas (3,10%) com observação de formas trofozoíticas. Na RIFI quatro amostras de soro de primatas sororreagiram frente ao antígeno de P. malariae. Amplificaram para Plasmodium sp. na qPCR 34,16% (55/161) das amostras de primatas. Na PCR convencional 30,43% (49/161) foram positivas, sendo 47 (47/49) para P. brasilianum/P. malariae e 2 (2/49) para P. simium/P. vivax. Foram sequenciadas quatro amostras de DNA de primatas, que apresentaram identidade com P. malariae (n=2),com Plasmodium ZOOBH (n=1) e com P. falciparum (n=1). Três ―pools‖ de anofelinos foram positivos para Plasmodium na... / Malaria is a disease of greater impact on Public Health in tropical countries because of the high morbidity and mortality. Considering malaria as a zoonosis in which primates can act as reservoirs of species of Plasmodium that can infect humans lead us to conduct malaria studies in primates with unquestionable relevance. It is generally know that the distribution of human and primate malaria following the same distribution of Anopheles mosquitoes vectors, in this study we investigated the presence of Plasmodium spp. in neotropical primates and Anopheles in São Luís Island, Maranhão State, Brazil. Samples were blood neotropical primates CETAS-São Luís (n = 141) and wild life (n = 20) Private Reserve Sítio Aguahy, São José de Ribamar. Anopheles mosquitoes were captured in the same reserve (n = 380) and Mangalho site (n = 36), located in the Environmental Protection Area of the Maracanã, São Luís, totaling 54 pools. The primate blood samples were subjected to morphological, serological (IFA and ELISA-test) and molecular (qPCR and conventional PCR) to identify Plasmodium. The pools of mosquitoes were assayed by testing for molecular identification of Plasmodium. Five primates had positive slides (3.10%) with observation trofozoíticas forms. In IFA four primate serum samples sororreagiram against the antigen of P. malariae. Amplified Plasmodium sp. qPCR at 34.16% (55/161) of samples of primates. In conventional PCR 30.43% (49/161) were positive, 47 (47/49) for P. brasilianum/P. malariae and 2 (2/49) to P.simium/P. vivax. Were sequenced DNA samples from four primates which showed identity with P. malariae (n = 2), Plasmodium ZOOBH (n = 1) and P. falciparum (n = 1). Three pools of Anopheles were positive for Plasmodium in qPCR (3/54) and conventional PCR. The sequencing samples showed identity to P. falciparum (n = 1), P. vivax (n = 1) and Plasmodium ZOOBH (EF090276). Due to the continued and increasing encroachment to forests by ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:29:26Z : No. of bitstreams: 1 capobianco_mp_me_sjrp.pdf: 879411 bytes, checksum: 7dc3528f12158026ba11087f62447e13 (MD5) / Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente de malária no Brasil. O processo co-evolutivo parasita-hospedeiro pode ser visto como uma ferramenta, na qual trocas genéticas adaptativas podem influenciar na diversidade da população. Objetivo: Investigar polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune humoral visando identificar possíveis associações com a malária. Material e Métodos: a amostra foi constiuída por 103 pacientes com malária vivax não complicada e como grupo controle 97 indíviduos não-maláricos. A identificação dos SNPs –726T>C no gene CD40L, -1 C>T no gene CD40 e -871C>T no gene BLYS foram efetuadas pelo método de PCR-RFLP. As frequências genotípicas, alélicas e de indivíduos portadores de cada alelo foram estimadas por contagem direta. Também foram comparadas as frequências genotípicas observadas com as esperadas segundo o teorema de Hardy e Weinberg. Resultados: As freqüências genotípicas e alélicas para esses SNPs não diferiram estatisticamente entre pacientes e indivíduos do grupo controle. A combinação dos genótipos entre os genes CD40 e BLYS e entre CD40L e BLYS não revelou interação gênica na população estudada. Não foi observada associação entre resposta imune humoral e parasitemia nos indivíduos maláricos com os polimorfismos dos genes investigados. Ambos os genes se encontram em equilíbrio de Hardy e Weinberg. Conclusões: Os resultados deste estudo sugerem que as variantes genéticas analisadas nos genes CD40, CD40L e BLYS não afetam a funcionalidade das moléculas de modo que possa interferir na susceptibilidade a doença, mas estas variantes podem influenciar o curso clínico em vez de simplesmente aumentar ou diminuir a susceptibilidade / Plasmodium vivax is the most prevalent malaria species in Brazil. The parasite-host coevolutionary process can be viewed as an ‘arms race’, in which adaptive genetic changes in one are eventually matched by alterations in the other. Objectives: following the candidate gene approach we analyzed the CD40, CD40L and BLYS genes that participate in B-cell co-stimulation, for associations with P. vivax malaria. Methods: the study sample included 97 patients and 103 controls. We extracted DNA using the extraction and purification commercial kit and identified the following SNPs: -1C>T in the CD40 gene, –726T>C in the CD40L gene and the -871C>T in the BLyS gene using PCR-RFLP. We analyzed the genotype and allele frequencies by direct counting. We also compared the observed with the expected genotype frequencies using the Hardy-Weinberg Equilibrium. Results: The allele and genotype frequencies for these SNPs did not differ statistically between patient and control groups. Gene-gene interactions were not observed between the CD40 and BLYS and between the CD40L and BLYS genes. Overall, the genes were in Hardy-Weinberg Equilibrium. Significant differences were not observed among the frequencies of antibody responses against P. vivax sporozoite and erythrocytic antigens and the CD40 and BLYS genotypes Conclusions: the results of this study show that, although the investigated CD40, CD40L and BLYS alleles differ functionally, this variation does not alter the functionality of the molecules in a way that would interfere in susceptibility to the disease. Significance: The variants of these genes may influence the clinical course rather than simply increase or decrease susceptibility

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:46Z : No. of bitstreams: 1 000842400.pdf: 1898096 bytes, checksum: 4596e4503c7566a0d2cc0451cdaa4524 (MD5) / A malária é uma doença parasitária, sendo causada por parasitas do gênero Plasmodium. Cerca de 400 espécies de Anopheles foram descritas, das quais 60 implicadas na transmissão da malária em diferentes partes do globo. O primeiro caso de malária autóctone no Brasil data do século XVI e surge como uma consequência natural da colonização europeia. A partir do início da exploração da borracha na Região Amazônica, a malária torna-se um grande problema de saúde pública, uma vez que muitos imigrantes provenientes do Nordeste foram dizimados por esta doença. Ao longo dos rios Acre e Purus, as populações ribeirinhas fazem uso de muitas espécies vegetais, nativas e exóticas, para tratar a malária e seus sintomas, conhecendo os modos de uso e os ambientes de ocorrência dessas espécies. Neste trabalho estudou-se o manejo das plantas silvestres e cultivadas para o tratamento da malária e de seus males associados por comunidades ribeirinhas dos municípios de Pauini e Xapuri, nos Estados do Amazonas e Acre, respectivamente. Durante o ano de 2013 foram entrevistadas 86 pessoas de nove comunidades rurais de Pauini e Xapuri, reconhecidas pelo uso de plantas medicinais. Foram indicadas 86 plantas para o tratamento da malária e para os sintomas associados reconhecidos pelos seringueiros e ribeirinhos. Foram indicadas 25 espécies para o tratamento da malária, sendo duas plantas não possuem nenhuma referência na literatura com esta indicação de uso. Também foram indicadas plantas para o tratamento do fígado, dores de cabeça; dores no corpo, inflamações no estômago e para o tratamento de anemias. Foram descritas cinco formas de preparo das partes utilizadas. 45% das plantas indicadas têm... / Malaria is a parasitic disease caused by organisms in the genus Plasmodium. Approximately 400 species of Anopheles have been described, of which 60 are implicated in the transmission of malaria in different parts of the globe. The first autochthonous case of malaria in Brazil dates to the 16th Century and arose as a natural consequence of European colonization. Beginning at the outset of Pará rubber exploration in the Amazon region, malaria became a serious public health problem, considering that many immigrants coming from Northeastern Brazil were decimated by this disease. Along the Acre and Purus rivers, ribeirinho (riverside) populations make use of numerous plant species, both native and exotic, to treat malaria and its symptoms; these populations are familiar with the plants' modes of use and habitats. The present study examined the management of wild and cultivated plants used to treat malaria and associated ailments by ribeirinho communities in the municipalities of Pauini and Xapuri in Amazonas and Acre states, respectively. During the year 2013 the present study interviewed 86 persons in nine rural communities in Pauini and Xapuri that were known for their use of medicinal plants. A total of 86 plant species were indicated by seringueiros and ribeirinhos for the treatment of malaria and for associated symptoms, while 25 species were indicated for the treatment of malaria, of which two had no previous indication of use for that purpose. Other species were indicated for the treatment of liver ailments (closely associated with malaria), headaches, body pains, inflammation of the stomach, and anemia. Collaborators described five distinct modes of preparation of the plant parts used: for 45% the leaves were used, for 30% te bark, for 10% the root, for 8% the entire plant, and for smaller percentages the bulb ...

Orientador: Lin Chau Ming / Coorientador: Moacir Haverroth / Banca: Filipe Pereira Giardii Bonfim / Banca: Ari de Freitas Hidalgo / Banca: Vanilde Citadini Zanete / Banca: Sandra Maria Pereira da Silva / Resumo: A malária é uma doença parasitária, sendo causada por parasitas do gênero Plasmodium. Cerca de 400 espécies de Anopheles foram descritas, das quais 60 implicadas na transmissão da malária em diferentes partes do globo. O primeiro caso de malária autóctone no Brasil data do século XVI e surge como uma consequência natural da colonização europeia. A partir do início da exploração da borracha na Região Amazônica, a malária torna-se um grande problema de saúde pública, uma vez que muitos imigrantes provenientes do Nordeste foram dizimados por esta doença. Ao longo dos rios Acre e Purus, as populações ribeirinhas fazem uso de muitas espécies vegetais, nativas e exóticas, para tratar a malária e seus sintomas, conhecendo os modos de uso e os ambientes de ocorrência dessas espécies. Neste trabalho estudou-se o manejo das plantas silvestres e cultivadas para o tratamento da malária e de seus males associados por comunidades ribeirinhas dos municípios de Pauini e Xapuri, nos Estados do Amazonas e Acre, respectivamente. Durante o ano de 2013 foram entrevistadas 86 pessoas de nove comunidades rurais de Pauini e Xapuri, reconhecidas pelo uso de plantas medicinais. Foram indicadas 86 plantas para o tratamento da malária e para os sintomas associados reconhecidos pelos seringueiros e ribeirinhos. Foram indicadas 25 espécies para o tratamento da malária, sendo duas plantas não possuem nenhuma referência na literatura com esta indicação de uso. Também foram indicadas plantas para o tratamento do fígado, dores de cabeça; dores no corpo, inflamações no estômago e para o tratamento de anemias. Foram descritas cinco formas de preparo das partes utilizadas. 45% das plantas indicadas têm... / Abstract: Malaria is a parasitic disease caused by organisms in the genus Plasmodium. Approximately 400 species of Anopheles have been described, of which 60 are implicated in the transmission of malaria in different parts of the globe. The first autochthonous case of malaria in Brazil dates to the 16th Century and arose as a natural consequence of European colonization. Beginning at the outset of Pará rubber exploration in the Amazon region, malaria became a serious public health problem, considering that many immigrants coming from Northeastern Brazil were decimated by this disease. Along the Acre and Purus rivers, ribeirinho (riverside) populations make use of numerous plant species, both native and exotic, to treat malaria and its symptoms; these populations are familiar with the plants' modes of use and habitats. The present study examined the management of wild and cultivated plants used to treat malaria and associated ailments by ribeirinho communities in the municipalities of Pauini and Xapuri in Amazonas and Acre states, respectively. During the year 2013 the present study interviewed 86 persons in nine rural communities in Pauini and Xapuri that were known for their use of medicinal plants. A total of 86 plant species were indicated by seringueiros and ribeirinhos for the treatment of malaria and for associated symptoms, while 25 species were indicated for the treatment of malaria, of which two had no previous indication of use for that purpose. Other species were indicated for the treatment of liver ailments (closely associated with malaria), headaches, body pains, inflammation of the stomach, and anemia. Collaborators described five distinct modes of preparation of the plant parts used: for 45% the leaves were used, for 30% te bark, for 10% the root, for 8% the entire plant, and for smaller percentages the bulb ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-10Bitstream added on 2014-06-13T20:56:15Z : No. of bitstreams: 1 herter_drc_me_sjrp.pdf: 754038 bytes, checksum: 1546a0d9c3ae0583356f9052fe2fb9e8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo avaliou a relação entre a resposta de anticorpos contra AMA-1 das variantes de P. vivax (VK210, VK247 e P. vivax-like) e os polimorfismos do gene HLA-DRB1 em populações endêmicas da Amazônia brasileira, para melhor entendimento dos mecanismos que modulam a resposta imune contra a malária. A resposta sorológica foi analisada em indivíduos maláricos e não-maláricos por testes de ELISA para AMA-1. Um subgrupo de amostras foi utilizado para genotipagem do gene HLA-DRB1 por PCR-SSP. Foram detectados 13 alelos diferentes do gene HLA- DRB1, sendo o alelo HLA-DRB1*04 o prevalente na população estudada. Foi detectada uma alta freqüência de respondedores para o antígeno AMA-1, com níveis crescentes de acordo com exposição prévia a malária. Nenhuma associação significativa foi observada entre as variantes da CSP do P.vivax e a resposta a AMA- 1, bem como aos polimorfismos do HLA-DRB1. O HLA-DRB1 apresenta uma distribuição heterogênea na população estudada, evidenciando uma contribuição característica de descendência ameríndia. A resposta de anticorpos contra o antígeno AMA-1 parece não influenciar na epidemiologia das variantes da CSP de P. vivax. Os polimorfismos do gene HLA-DRB1 não influenciam no desenvolvimento de reposta de anticorpos contra o AMA-1 na malária vivax na Amazônia brasileira / To better understand the mechanisms of the immune response modulation against malaria, this study evaluated the relationship among the antibody response to AMA-1 and variants of the circumsporozoite protein (CSP) of the P. vivax (VK210, VK247 and P. vivax-like) and the polymorphisms of HLA-DRB1 gene in populations endemic from the Brazilian Amazon. The antibody response was analyzed in malarial and non-malarial individuals by AMA-1ELISA test. A subset of samples was genotyping of HLA-DRB1 by PCR-SSP. We detected 13 different alleles of HLA-DRB gene, where the HLA-DRB1*04 was the commonest allele. A high frequency of responders to the antigen AMA-1 was detected, with increasing levels according to previous malaria experience. No significant association was observed among the response to P. vivax AMA-1 and, the variants of the CSP and the polymorphisms of HLA-DRB gene. The HLA-DRB1 has a heterogeneous distribution in the population studied, showing an effective contribution of Amerindian groups. The antibody response against the antigen AMA-1 does not influence the epidemiology of variants of the CSP of P. vivax. The polymorphisms of HLA-DRB1 gene do not influence the development of antibody response against AMA-1 in vivax malaria around the Brazilian Amazon region

Submitted by MARCELA PETROLINI CAPOBIANCO (mpcapobianco@yahoo.com.br) on 2017-04-24T11:43:11Z No. of bitstreams: 1 TESE MARCELA PETROLINI CAPOBIANCO.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T20:25:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 capobianco_mp_dr_sjrp.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T20:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 capobianco_mp_dr_sjrp.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) Previous issue date: 2017-04-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No Brasil o Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente, responsável por aproximadamente 85% dos casos de malária. Ademais as variantes da proteína circumesporozoíta (CSP - VK210, VK247 e P. vivax-like) já foram identificadas em várias áreas endêmicas no país. Diversos estudos analisando a influência da variabilidade genética de receptores celulares e moléculas envolvidas na resposta imune, com diferentes peptídeos do Plasmodium, têm obtido resultados variáveis de acordo com o antígeno utilizado e a população analisada. Este trabalho apresenta resultados sobre o estudo de polimorfismos genéticos no TCR (T cell Receptor) e nas Interleucinas 1 e 2 em pacientes infectados por P. vivax provenientes do município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. Avaliou-se estes polimorfismos com a parasitemia do indivíduo, com os genótipos da CSP e com a resposta sorológica contra os peptídeos da CSP. Foram relacionados também estes polimorfismos com os níveis de citocinas. Os polimorfismos foram analisados por técnicas de PCR-RFLP e PCR alelo específico. As análises sorológicas da CSP foram realizadas por ELISA. Foram comparadas as frequências genotípicas observadas segundo o teorema de Hardy-Weinberg (HW). Os níveis de IL1 e IL2 foram avaliados por citometria de fluxo, seguindo protocolo descrito pelo fabricante. Associação dos polimorfismos com os níveis de interleucinas foi avaliada por Análise de variância. As frequências genotípicas e alélicas foram obtidas no programa R v 2.11.1. A parasitemia variou de 15 a 70.000, com mediana de 1.500 parasitos/mm3. Os SNPS investigados mostraram frequências variadas na amostra estudada. Todo o polimorfismo avaliado encontra-se em Equilíbrio de Hard Wenberg. Não houve diferença significativa da parasitemia em relação aos SNPs investigados. Infecções contendo apenas a variante VK247 foram as mais comuns e também não foi observado diferença significativa na resposta de anticorpos de acordo com a variante da CSP presente no momento da infecção. Correlações significativas entre os níveis destas interleucinas com a parasitemia e os níveis de anticorpos contra as variantes da CSP não foram observadas. Além disso, as variantes da CSP não influenciaram os níveis plasmáticos das citocinas e não houve associações positivas entre os SNPs das IL1 e IL2 e seus níveis plasmáticos. Os resultados poderão contribuir na identificação e participação efetiva de genes humanos na modulação da resposta imune, essenciais no estabelecimento de estratégias de imunização contra a doença, em área de transmissão ativa no Estado do Pará. / In Brazil, Plasmodium vivax is the most prevalent species responsible for approximately 85% of malaria cases. In addition, variants of the circosporozoite protein (CSP - VK210, VK247 and P. vivax - like) have already been identified in several endemic areas in the country. Several studies analyzing the influence of the genetic variability of cellular receptors and molecules involved in the immune response with different Plasmodium peptides have obtained variable results according to the antigen used and the analyzed population. This work presents results on the study of genetic polymorphisms in TCR (T cell Receptor) and in Interleukins 1 and 2 in patients infected by P. vivax from the city of Goianésia do Pará, in the State of Pará. These polymorphisms were evaluated with Parasitemia, CSP genotypes and serological response to CSP peptides. These polymorphisms were also related to cytokine levels. Polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and allele-specific PCR techniques. Serological tests of CSP were performed by ELISA. The genotypic frequencies observed according to the Hardy-Weinberg (HW) theorem were compared. Levels of IL1 and IL2 were evaluated by flow cytometry following the protocol described by the manufacturer. Association of polymorphisms with interleukin levels was evaluated by analysis of variance. The genotypic and allelic frequencies were obtained in program R v 2.11.1. The parasitemia ranged from 15 to 70,000, with a median of 1,500 parasites / mm3. The SNPS investigated showed varied frequencies in the sample studied. All polymorphism evaluated is in Hard Wenberg Equilibrium. There was no significant difference in parasitemia in relation to the investigated SNPs. Infections containing only the VK247 variant were the most common and also no significant difference in antibody response was observed according to the CSP variant present at the time of infection. Significant correlations between the levels of these interleukins with parasitemia and levels of antibodies against variants of CSP were not observed. In addition, the CSP variants did not influence plasma cytokine levels and there were no positive associations between IL1 and IL2 SNPs and their plasma levels. The results may contribute to the identification and effective participation of human genes in the modulation of the immune response, essential in the establishment of immunization strategies against the disease, in an active transmission area in the State of Pará.