Thesis (doctoral)--Umeå Universitet, 1985. / Added t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references (p. 35-41).

Genome sequencing is emerging as a powerful tool to identify the molecular mechanism of cancer progression. However, the software tools to define genomic and post-genomic mutations are just in its infancy. We have used a novel software algorithm to analyse the cancer genome by DNAseq and expressed cancer genome arising from transcription by RNAseq to define dominant sources of potentially expressed tumour-specific mutations and oncogenic targets. We focus primarily on the rare human pleomorphic sarcoma as a disease of high unmet clinical need but use a range of cancer models to accelerate the development of the pipeline. First, we applied next generation sequencing of whole exomes of tumour tissues and two matched normal tissues (blood and “normal” tumour adjacent tissue) from a small set of patients to define parameters for use of the new software. The approaches identified significant mutations in tumour relative to germline DNA, but also in normal adjacent tissue, relative to normal germline, consistent with known field cancerization. Thus, in setting up the larger sequencing screen in the subsequent set of twenty cancer pleomorphic sarcoma cancer patients, whole exome sequencing was performed on tumour tissue and their matched normal adjacent tissues, rather than germline blood derived DNA, to define truly tumour-specific mutations. This approach provided sets of recurrent non-synonymous mutations in tumour tissue such as a transmembrane protease and suggests potential therapeutic targets for future focus that are highly tumour specific in pleomorphic sarcoma. A major problem with using DNA genomics only to define drugable landscapes in cancer is that the tumour genome is static and the mutations do not reflect the expressed cancer landscape at the time of surgery. Thus, in a smaller subset of patients we also applied shotgun RNAseq to determine the number of expressed mutated genes. We defined within the parameters chosen, from 8-17% of the mutated genome is expressed as defined at the RNA level. However, to our surprise, there were an order of magnitude more RNA mutations that were not DNA encoded suggestive of RNA editing events. Each patient showed elevated RNA edits that were independent of each other suggesting a highly-patient, cancer-specific perturbation in the specificity of the RNA editing machinery. We thus developed a cancer cell model to validate the RNA-editing software and we found we could recapitulate some of the RNA edits observed in clinical tumour tissue, in particular the signalling kinase in the MAP kinase-kinase-kinase-kinase super-family. It was interesting that RNA edits can often cluster in exon-intron boundaries suggesting a link to splicing and allows us to begin to produce “rules” for RNA editing. These data provide future direction to understand the role of RNA editing, as well as DNA encoded mutations, as mutagenic events and possible drugable targets in cancer signalling. Lastly, novel or orphan mutant proteins observed in human cancers, whether from DNA encoded mutant proteins or from RNA-edited driven mutant protein synthesis require new tools and technologies to discover new oncogenic signalling mechanisms. We developed an SBP-tagged affinity purification method in combination with label-free SWATH mass spectrometry to identify a novel binding protein for the gain-of-function mutant protein in a key metastatic gene, ELMO1. This identified an elevated interaction with another oncogenic protein encoded by AGR2 gene and validates this proteomics discovery platform to further advance function of new mutated proteins. In conclusion, we have applied and validated newly emerging software to begin to interrogate cancer tissue from patients of unmet clinical need in order to define new mechanisms of cancer progression and to define possibly new or better drug targets for new therapies. The data identified highly recurrent genome encoded mutations in human pleomorphic sarcoma and a potentially novel, targetable landscape represented by RNA editing driven mutant protein production. This will provide a foundation for future work on making better choices to advance our ability to improve patient management in human pleomorphic sarcoma.

Thesis (doctoral)--Umeå Universitet, 1985. / Added t.p. with thesis statement inserted. Bibliography: p. 35-41.

Thesis (doctoral)--University of Göteborg, 1983. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes the author's five published papers. Includes bibliographical references.

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Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T05:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_AndresaBorges_D.pdf: 9373793 bytes, checksum: c79095bbf9f926b5658e0a10dfc3f94c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é uma neoplasia geralmente de alto grau, com risco moderado para metástase cervical. O objetivo do trabalho foi analisar a vascularização tumoral sanguínea e linfática numa série de CXAP, que representam as diferentes fases da seqüência adenoma-carcinoma. Em oito CXAP precoces (intracapsulares ou minimamente invasores), oito avançados (francamente invasores) e 10 adenomas pleomórficos (AP) sem transformação maligna usamos os seguintes anticorpos: D2-40, Ki-67, CD34, CD105, a- SMA, CK7 e 14. A vascularização sanguínea foi estudada através da microdensidade vascular intratumoral (MDV) e área vascular total (AVT). A vascularização linfática, através da microdensidade vascular linfática (MVL) intratumoral e peritumoral. Em relação à vascularização sanguínea, a MDV pelo CD 105 mostrou forte correlação positiva com a progressão tumoral, enquanto que a MDV pelo CD 34 e a ATV não apresentaram nenhuma correlação. Carcinomas com diferenciação mioepitelial apresentavam MDV pelo CD 105 mais baixa, mas os mais altos valores de ATV. Quanto à vascularização linfática, em AP e CXAP precoces, foram encontrados raros, se algum, linfático intratumoral, enquanto que em CXAP avançados eles eram mais numerosos, porém Ki 67 negativos. Êmbolos peri e intratumorais foram vistos apenas nos CXAP sem diferenciação mioepitelial. Em conclusão, com o CD 105 demostrou-se forte correlação positiva entre angiogênese e progressão tumoral. A vascularização linfática é formada predominantemente por vasos pré-existentes, encontrados principalmente nos CXAP avançados. Tanto linfáticos intratumorais como peritumorais são condutores de êmbolos neoplásicos. CXAP com diferenciação mioepitelial mostram atividade angiogênica mais baixa associada a valores mais altos de área vascular e capacidade mais baixa para invadir vasos linfáticos / Abstract: Carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) usually is a high-grade carcinoma with a moderate risk for neck metastasis. In a series of CXPAs, which represent the different phases of the adenoma¿carcinoma sequence, we investigated lymphatic vascular density (LVD), lymph vessel endothelial proliferation and whether an angiogenic switch would take place during the malignant transformation of PA into carcinoma and during tumor progression. The CXPAs were classified into two main groups: early tumors - 8 cases (4 intracapsular and 4 minimally invasive carcinomas), and advanced tumors ¿ 8 cases (8 widely invasive carcinomas). In addition, 10 cases of pleomorphic adenoma (PA) without malignant transformation were also analyzed. The following antibodies were used: CD34, CD 105, D2-40, Ki-67, a-smooth-muscle actin, vimentin, cytokeratins 7 and 14. Microvascular density (MVD) for CD 105 increased significantly during tumor progression whereas this was not the case for CD 34 MVD. Comparing widely invasive CXPA with and without myoepithelial differentiation, CXPA with myoepithelial differentiation showed a significantly lower number of CD 105 positive vessels but revealed higher total vascular area (TVA) values. In terms of lymph vessels, PA without malignant transformation and early CXPA contained rare, if any, lymph vessels whereas in widely invasive carcinomas they were more numerous but Ki-67 negative. Carcinomatous emboli were found in peritumoral as well as in intratumoral lymphatics only in advanced CXPA without myoepithelial differentiation. In conclusion, the antibody CD 105 shows an angiogenic switch during the progression from adenoma to carcinoma in salivary glands. In terms of lymphatic vessels, in CXPA, the lymphatic network is mainly composed of pre-existing lymphatics which are mainly found in advanced CXPA. In the widely invasive CXPA, intratumoral as well as peritumoral lymphatics are a conduit for carcinoma cells. Carcinomas with myoepithelial differentiation show low angiogenesis associated with high TVA value and the neoplastic cells seem to have a lower vascular invasion capacity / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

O adenoma pleomórfico (AP) é a neoplasia mais frequente das glândulas salivares e a sua transformação maligna em um carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é um evento incomum que ocorre em menos de 10% dos casos. O CXAP é tipicamente uma neoplasia infiltrativa, de alto grau e associada com metástase linfonodal no momento do diagnóstico. Acredita-se que a patogênese do CXAP tenha como base o acúmulo de alterações genéticas em APs de longa duração. Evidências recentes têm demonstrado que neoplasias podem conter subpopulações de células raras, com capacidade de auto-renovação e potencial proliferativo indefinido, as chamadas células-tronco neoplásicas (CTN). As CTN parecem estar envolvidas nos processos de iniciação e progressão neoplásicas, assim como metástases e resistência terapêutica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão imuno-histoquímica, tanto nas áreas benignas quanto nas malignas, dos fatores de transcrição relacionados à pluripotência de células-tronco Bmi-1, SOX2 e Nanog em CXAPs em fases precoces (7 intracapsulares e 3 minimamente invasivos) e avançada (14 francamente invasivos) de progressão histológica. A análise dos resultados de imuno-histoquímica foi realizada de maneira semi-quantitativa de acordo com o escore 0 (ausência de células positivas), 1 (<30% de células positivas), 2 (30-60% de células positivas e 3 (>60% de células positivas). Correlacionou-se, ainda, esses resultados com parâmetros anatomopatológicos de agressividade neoplásica através do teste Exato de Fisher. A parótida foi a glândula mais acometida em ambos os grupos (62,5%), e homens e mulheres foram igualmente acometidos. A média de idade foi 61,1 anos. No grupo de CXAPs precoces, Bmi-1 foi expresso no componente carcinomatoso de todos os casos e em escassas células das áreas benignas de 1 caso. O fator SOX2 foi expresso pelas células carcinomatosas em 90% desses casos e em escassas células do AP residual de 1 caso. Já Nanog foi expresso apenas no componente maligno de 60% dos casos. Por outro lado, Bmi-1 foi expresso nas áreas malignas de 71,4% dos CXAPs avançados e em ocasionais células da área benigna de 1 caso. O AP residual de nenhum caso desse grupo foi positivo para SOX2 e Nanog, que foram expressos pelas áreas malignas em 92,8% e 35,7% dos casos, respectivamente. Assim, notou-se queda na expressão de Bmi-1 e Nanog na progressão do CXAP. Ainda, a expressão de SOX2 parece correlacionar-se com necrose neoplásica (p=0,06) e metástase linfonodal ao diagnóstico (p=0,08), entretanto a amostra estudada parece pequena para evidenciar esse dado estatístico. Concluiu-se que Bmi-1, SOX2 e Nanog são superexpressos na transformação maligna do AP. Entretanto, Bmi-1 e Nanog aparentemente não exercem função determinante no processo de progressão neoplásica, ao passo que SOX2 parece contribuir com o processo de metástase em CXAP. / Pleomorphic adenoma (PA) is the most common salivary gland tumor and its malignant transformation into a carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) is an unusual event occuring in less than 10% of the cases. The CXPA is typically an infiltrative and high-grade neoplasm at diagnosis associated with lymph node metastases. It is believed that the pathogenesis of CXPA is based on the accumulation of genetic changes in long-standing PAs. Recent evidences have shown that tumors may contain subpopulations of rare cells, capable of self-renewal, and with indefinite proliferative potential, the so-called neoplastic stem cells (NSC). The NSC appears to be involved in neoplastic initiation and progression, as well as metastasis and treatment resistance. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of stem cell-related pluripotency transcription factors Bmi-1, SOX2, and Nanog in benign and malignant areas of CXPA at early (7 intracapsular and 3 minimally invasive) and advanced (14 frankly invasive) stages of histological progression. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<30% positive cells), 2 (30-60% of cells positive, and 3 (>60% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s Exact test. The parotid gland was the most affected site in both groups (62.5%), and men and women were equally affected. The mean age was 61.1 years. In the early CXPA group, Bmi-1 was expressed in carcinomatous component of all cases and in occasional cells of benign areas of 1 case. The SOX2 factor was expressed by the carcinomatous cells in 90% of cases and scant cells in residual PA of 1 case. Nanog was expressed in 60% of cases, only in the malignant component. On the other hand, Bmi-1 was expressed in malignant areas of 71.4% of advanced CXPAs and in occasional cells of benign area of 1 case. The residual PA of none of the cases in this group was positive to SOX2 and Nanog, which were expressed by carcinomatous areas in 92.8% and 35.7% of cases, respectively. Thus, it was noted that Bmi-1 and Nanog expression decreases in CXPA progression. Yet, SOX2 expression seems to be correlated with neoplastic necrosis (p= 0.06) and lymph node metastasis at diagnosis (p=0.08), but the current sample seems to be small to evidence this statistic data. It was concluded that Bmi-1, Nanog, and SOX2 are overexpressed in malignant transformation of PA. However, Bmi-1 and Nanog apparently do not exert a decisive role in the process of neoplastic progression, while SOX2 seems to contribute to the process of metastasis in CXPA.

O adenoma pleomórfico (AP) é a neoplasia mais frequente das glândulas salivares e a sua transformação maligna em um carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é um evento incomum que ocorre em menos de 10% dos casos. O CXAP é tipicamente uma neoplasia infiltrativa, de alto grau e associada com metástase linfonodal no momento do diagnóstico. Acredita-se que a patogênese do CXAP tenha como base o acúmulo de alterações genéticas em APs de longa duração. Evidências recentes têm demonstrado que neoplasias podem conter subpopulações de células raras, com capacidade de auto-renovação e potencial proliferativo indefinido, as chamadas células-tronco neoplásicas (CTN). As CTN parecem estar envolvidas nos processos de iniciação e progressão neoplásicas, assim como metástases e resistência terapêutica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão imuno-histoquímica, tanto nas áreas benignas quanto nas malignas, dos fatores de transcrição relacionados à pluripotência de células-tronco Bmi-1, SOX2 e Nanog em CXAPs em fases precoces (7 intracapsulares e 3 minimamente invasivos) e avançada (14 francamente invasivos) de progressão histológica. A análise dos resultados de imuno-histoquímica foi realizada de maneira semi-quantitativa de acordo com o escore 0 (ausência de células positivas), 1 (<30% de células positivas), 2 (30-60% de células positivas e 3 (>60% de células positivas). Correlacionou-se, ainda, esses resultados com parâmetros anatomopatológicos de agressividade neoplásica através do teste Exato de Fisher. A parótida foi a glândula mais acometida em ambos os grupos (62,5%), e homens e mulheres foram igualmente acometidos. A média de idade foi 61,1 anos. No grupo de CXAPs precoces, Bmi-1 foi expresso no componente carcinomatoso de todos os casos e em escassas células das áreas benignas de 1 caso. O fator SOX2 foi expresso pelas células carcinomatosas em 90% desses casos e em escassas células do AP residual de 1 caso. Já Nanog foi expresso apenas no componente maligno de 60% dos casos. Por outro lado, Bmi-1 foi expresso nas áreas malignas de 71,4% dos CXAPs avançados e em ocasionais células da área benigna de 1 caso. O AP residual de nenhum caso desse grupo foi positivo para SOX2 e Nanog, que foram expressos pelas áreas malignas em 92,8% e 35,7% dos casos, respectivamente. Assim, notou-se queda na expressão de Bmi-1 e Nanog na progressão do CXAP. Ainda, a expressão de SOX2 parece correlacionar-se com necrose neoplásica (p=0,06) e metástase linfonodal ao diagnóstico (p=0,08), entretanto a amostra estudada parece pequena para evidenciar esse dado estatístico. Concluiu-se que Bmi-1, SOX2 e Nanog são superexpressos na transformação maligna do AP. Entretanto, Bmi-1 e Nanog aparentemente não exercem função determinante no processo de progressão neoplásica, ao passo que SOX2 parece contribuir com o processo de metástase em CXAP. / Pleomorphic adenoma (PA) is the most common salivary gland tumor and its malignant transformation into a carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) is an unusual event occuring in less than 10% of the cases. The CXPA is typically an infiltrative and high-grade neoplasm at diagnosis associated with lymph node metastases. It is believed that the pathogenesis of CXPA is based on the accumulation of genetic changes in long-standing PAs. Recent evidences have shown that tumors may contain subpopulations of rare cells, capable of self-renewal, and with indefinite proliferative potential, the so-called neoplastic stem cells (NSC). The NSC appears to be involved in neoplastic initiation and progression, as well as metastasis and treatment resistance. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of stem cell-related pluripotency transcription factors Bmi-1, SOX2, and Nanog in benign and malignant areas of CXPA at early (7 intracapsular and 3 minimally invasive) and advanced (14 frankly invasive) stages of histological progression. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<30% positive cells), 2 (30-60% of cells positive, and 3 (>60% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s Exact test. The parotid gland was the most affected site in both groups (62.5%), and men and women were equally affected. The mean age was 61.1 years. In the early CXPA group, Bmi-1 was expressed in carcinomatous component of all cases and in occasional cells of benign areas of 1 case. The SOX2 factor was expressed by the carcinomatous cells in 90% of cases and scant cells in residual PA of 1 case. Nanog was expressed in 60% of cases, only in the malignant component. On the other hand, Bmi-1 was expressed in malignant areas of 71.4% of advanced CXPAs and in occasional cells of benign area of 1 case. The residual PA of none of the cases in this group was positive to SOX2 and Nanog, which were expressed by carcinomatous areas in 92.8% and 35.7% of cases, respectively. Thus, it was noted that Bmi-1 and Nanog expression decreases in CXPA progression. Yet, SOX2 expression seems to be correlated with neoplastic necrosis (p= 0.06) and lymph node metastasis at diagnosis (p=0.08), but the current sample seems to be small to evidence this statistic data. It was concluded that Bmi-1, Nanog, and SOX2 are overexpressed in malignant transformation of PA. However, Bmi-1 and Nanog apparently do not exert a decisive role in the process of neoplastic progression, while SOX2 seems to contribute to the process of metastasis in CXPA.

A proteína P53 pode estar virtualmente alterada em todos os cânceres humanos e portanto, na ausência de mutação, uma possibilidade para a inativação da p53 é a formação de complexo com outras proteínas, tal como a proteína Mdm2. Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram a superexpressão de Mdm2 na ausência de expressão da proteína P53 em adenomas pleomórficos. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão das proteínas Mdm2, P53, P21 e Akt em adenoma pleomórfico e o mioepitelioma através das técnicas de imunoistoquímica, western blotting e imunofluorescência. A superexpressão de Mdm2 e Akt foi encontrada na maioria das linhagens e lesões utilizadas neste estudo enquanto as proteínas P53 e P21 não demonstraram expressão nas neoplasias estudadas. As superexpressões das proteínas Mdm2 e Akt estão relacionadas à tumorigênese em neoplasias benignas de glândula salivar. / The P53 protein can be altered in virtually all human cancers and in the absence of mutations, P53 inactivation is possible via complex formation with others proteins, such as the Mdm2. Previous studies from our laboratory showed overexpression of mdm2 and lack of p53 expression in pleomorphic adenomas. The aim of this study was to analyze the expression of Mdm2, P53, P21 and Akt proteins in pleomorphic adenomas and myoepiteliomas by Western blotting, immunohistochemistry and immunofluorescence techniques. Overexpression of Mdm2 and Akt was present in the majority of cell lineages and tumors studied, while the expression of P53 and P21 proteins was considered absent. Overexpression of Mdm2 and Akt are related to the tumorigenesis of benign salivary gland neoplasms.

RESUMO A similaridade entre o tecido da mama e o da glândula salivar está bem estabelecida. A porção das estruturas acinares e ductais destes órgãos são basicamente semelhantes. Estes aspectos, associados ao fato de que uma coexistência de carcinomas da mama e de glândula salivar, têm sido relatados em uma incidência maior do que a esperada. Guiaram estudos tentando determinar a importância dos receptores de estrógeno e progesterona em adenomas pleomórficos (AP). A neoplasia é mais freqüente nas glândulas salivares e exibe uma predileção para o sexo feminino. Recentemente a presença do receptor de estrógeno (RE) e do receptor de progesterona (RP) tem sido investigada no AP, entre outras neoplasias de glândula salivar, questionando-se a possibilidade da existência da dependência hormonal. A expressão dos receptores hormonais nos carcinomas de mama é importante para determinar o prognóstico e a probabilidade de responder à manipulação hormonal. Neoplasias que apresentam positividade para ambos os receptores, estrógeno e progesterona, exibem maior probabilidade de resposta à terapia anti-estrogênica do que as neoplasias que são negativas para estes receptores. Baseando-se na literatura científica pertinente, o presente trabalho se propõe a investigar a presença da proteína RE e da proteína RP em APs humanos, relacionando-os com a proliferação de linhagens celulares sob a influência destes hormônios. A técnica utilizada foi a imuno-histoquímica para a pesquisa dos RE e RP em 10 APs emblocados em parafina pertencentes ao arquivo do Serviço de Patologia Cirúrgica da FOUSP, e de duas linhagens de APs estabelecidas no mesmo serviço: uma derivada de um paciente do sexo masculino e a outra de um paciente do sexo feminino. No meio de cultivo onde subculturas destas células proliferavam foram diluídos 17-b-estradiol e progesterona. Através de contagens destas células em períodos pré-determinados (24 horas, 48 horas e 72 horas), pretendeu-se verificar a influência dos respectivos hormônios na multiplicação celular. Como controle positivo utilizou-se uma linhagem denominada T-47D, que foi largamente estudada na literatura. A T-47D é derivada de um carcinoma metastático de mama, reconhecidamente hormônio dependente. E como controle negativo, utilizou-se de uma linhagem de carcinoma epidermóide, denominada HN30. Encontrou-se positividade para o RE em 7 de 10 APs estudados (4 em homens e 3 em mulheres) e positividade para o RP em 8 Aps estudados (4 em mulheres e 4 em homens). Pela análise estatística, constatou-se que existe uma diferença significativa no índice proliferativo entre o controle e as células submetidas à ação do 17-b-estradiol e da progesterona. Para a linhagem derivada do paciente do sexo masculino houve diferença entre o controle e as células expostas ao 17-b-estradiol e a progesterona somente nas últimas 72 horas. Para a linhagem derivada do sexo feminino constatou-se uma diferença significativa entre o controle e as células sob a influência da progesterona, a partir de 48 horas de proliferação celular. A diferença significativa entre o controle e as células sob a ação do 17-b-estradiol ocorreu somente a partir das 72 horas, sugerindo que o AP poderia ser uma neoplasia influenciada pela ação hormonal. / SUMARY It is well established the similarity between mammary and salivary glands especially between the acinic and ductile structures. These aspects, associated to the fact of coexistence of breast carcinomas and of salivary gland tumors been described, leaded studies in attempt to determine the importance of the ERs and Pr in pleomorphic adenomas (PA), the most frequent salivary gland tumor and with predilection for the females. Lately, the presence of ERs and of the PRs has been investigated in PA and other salivary gland tumors pointing out their hormonal dependency. The expression of hormone receptors in breast carcinomas is crucial to determine a presence for both receptors. These tumors exhibit better response to anti-estrogenic therapy than the negative ones. Basing on the pertinent scientific literature, the present study proposes to investigate the presence of the RE and of the RP in humans PA and connecting them with cellular proliferation in vitro, under the influence of these hormones. Immunohistochemistry technique was used for the detection of RE and RP in paraffin embedded 10 PAs from the files of the Department of Oral Pathology, School of Dentistry, University of São Paulo, and two PA cell lines one from a male patient and other female. The culture midia was supplied with, 17-b-estradiol and progesterone. A growth curve was performed (24 hours, 48 hours and 72 hours) to verify the influence of the respective hormones in the cellular proliferation. As a positive control T-47-D cells derived from a hormone dependent metastatic breast carcinoma were used, and as negative control HN30 cells, derived from a tongue squamous cell carcinoma. 7 of 10 PAs were positive (4 in men and 3 in women) for RP and 8 of 8 PAs (4 in women and 4 in men) for RE. The statistical analysis verified a significant difference in the proliferative index between the control cells and the ones submitted to the action of the 17-b-estradiol and of the progesterone: for male derived lineage a difference was only observed in the last 72 hours. In the other hand, for the female derived lineage a significant difference was verified starting from 48 hours, suggesting that PA can be influenced by hormonal action.