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Funcionalização combinatorial da polietilenoimina e caracterização cinético evolucionária como modelo de planejamento de enzinas artificiais

Ricardo, Juan January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:38:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 261341.pdf: 1409019 bytes, checksum: 0ea40893c8e203cb28df7f29a4af76f4 (MD5) / Numerosas tentativas têm sido feitas para preparar polímeros sintéticos mimetizando enzimas. As enzimas artificiais (synzymes) tem o potencial de superar as limitações, em laboratório das enzimas naturais. Algumas enzimas artificiais são propostas nesse trabalho. Elas foram produzidas a partir da derivatização de polietilenoimina (PEI) com diferentes combinações estequiométricas de agentes acetilantes e alquilantes. Três bibliotecas foram construídas: i) contendo PEI e agentes acilantes e dodecilantes (1), ii) acilantes e benzilantes (2) e iii) acilantes e metilantes (3). A efetividade catalítica dos polímeros foi analisada através de métodos cinéticos pela reação de clivagem de acetato de p-nitrofenila. Os polímeros de melhor performance catalítica foram: 1.A09 e 2.A11, derivatizados apenas por grupos aquílicos e 2.G09 e 3.E07, derivatizados por combinações de grupos acetilas e alquilas. Esses polímeros foram testados por parâmetros cinéticos segundo o modelo de Michaelis-Menten. Todos os polímeros obtiveram perfis de saturação pelo substrato e os pKas aparentes envolvidos nas catálises foram obtidos e indicaram ser de grupos amino dos polímeros derivatizados. Os resultados foram surpreendentes e mostraram grande eficiência das enzimas artificiais comparadas tanto a enzimas naturais quanto a outros modelos de enzimas artificiais.
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Associação entre xantana, polietilenoimina, dodecil sulfato de sódio e derivados anfifílicos dos polímeros em soluções aquosas diluídas

Guerra, João Paulo van Tol Amaral 25 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T17:43:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289303.pdf: 3167985 bytes, checksum: 2d3cfa242e38fde85d8fa09e4cf4a89d (MD5) / O foco deste trabalho consistiu na investigação das interações entre o poliânion xantana (XT), o policátion polietilenoimina (PEI) e o surfactante aniônico n-dodecil sulfato de sódio (SDS), além das interações envolvendo derivados anfifílicos de ambos os polímeros (XTm e PEIm). As interações de interesse entre as espécies se dão de duas formas: coacervação complexa e formação de complexos macromoleculares solúveis. A esterificação da XT foi realizada pela introdução de grupos dodecanoilas na cadeia do polissacarídeo. A massa molar aparente, Mw,app, dos polímeros foi determinada por medidas de espalhamento de luz estático (SLS) a vários ângulos e mostrou que os derivados possuem Mw,app maior que os polímeros originais. Medidas de fluorescência do pireno mostraram que a introdução de grupos hidrofóbicos na cadeia dos polímeros lhes confere caráter anfifílico. O diagrama de fases do tipo temperatura-composição para o sistema pseudobinário XT-PEI mostrou uma curva típica de sistemas com temperatura crítica inferior de solução, Tci. Os diagramas de fases para os sistemas pseudoternários mostraram uma região de separação de fases relacionada a dois possíveis tipos de coacervação. Um dos tipos de coacervação é relativo às interações poliânion-policátion, e o segundo tipo é característico das interações policátion-surfactante nos sistemas PEI-SDS e PEIm-SDS. Não foi observada associação do tipo XT-SDS ou XTm-SDS. Também foi evidenciado que a modificação dos polímeros inibe a separação de fases por coacervação numa faixa de concentrações, conforme diminuição das áreas percentuais da zona de coacervação dos diagramas triangulares. As medidas de potencial zeta de misturas homogêneas XT-PEI mostram que o processo de associação entre os polieletrólitos acontece com neutralização gradual de cargas conforme a razão de concentração dos dois polieletrólitos. Ao aproximar o potencial zeta das partículas à neutralidade a coacervação complexa é propiciada. Se, ao contrário, um dos polieletrólitos estiver em excesso há formação de um complexo macromolecular solúvel aniônico ou catiônico. As interações coulômbicas entre as espécies geram um aumento na condutividade elétrica da solução devido à liberação de contra-íons. / The focus of this study was the evaluation of interactions between the polyanion xanthan (XT), the polycation polyethyleneimine (PEI) and the anionic surfactant sodium n-dodecyl sulfate (SDS), as well as the interactions involving anfifilic derivatives of both polymers (XTm and PEIm. The interactions of interest between species are of two types: complex coacervation and formation of soluble macromolecular complexes. XT esterification was accomplished by introduction of dodecanoils groups on the polysaccharide chains. Apparent molar mass, Mw,app, of the polymers were determined by static light scattering (SLS) experiments at various angles. The derivatives had higher values of Mw,app than the original polymers. Measures of pyrene fluorescence showed that the introduction of hydrophobic groups in the polymeric chains gives them amphiphilic character. Temperature-composition phases diagram for pseudobinary system composed by XT-PEI showed a typical curve of systems with lower critical solution temperature. Phases diagrams for pseudoternary systems showed a region of phase separation associated to two possible types of coacervation. One of which is related to polyanion-polycation interactions, and the other refers to polycation-surfactant interactions in PEI-SDS and PEIm-SDS systems. It was not observed XT-SDS or XTm-SDS association. It was also noted that the polymers modification inhibits phase separation by coacervation in a concentration range, as verified by reduction of coacervation zones percentage areas of triangular diagrams. Zeta potential measures of homogeneous XT-PEI mixtures showed that the associative process between polyeletrolytes happens with gradual charge neutralization with the ratio of polyeletrolytes concentration. Approaching the particles zeta potential to neutrality propitiates complex coacervation. If, on the other hand, one of the polyelectrolytes is in excess, formation of anionic or cationic soluble macromolecular complex happens. The coulombic interactions between species originate an increase in the solution electrical conductivity due to counter-ions liberation.
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Complexos supramoleculares formados por um polieletrólito e surfactantes

Bellettini, Ismael Casagrande January 2009 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-graduação em Química / Made available in DSpace on 2013-12-05T21:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265154.pdf: 1500623 bytes, checksum: 6a5eda0e2061c850dc6fb4c1eb311a8f (MD5) Previous issue date: 2009 / As propriedades de misturas de poli(etilenoimina) (PEI) com os surfactantes aniônicos dodecil sulfato de sódio (SDS) e N-tetradecil-N,N-dimetil-3-amônio-1-propano sulfonato (SB3-14) foram investigadas em solução aquosa a 25,0 ± 0,1 oC. Primeiramente utilizou-se a técnica de viscosimetria para determinar a concentração de overlap do PEI. Em seguida foram determinadas por espalhamento de luz estático e dinâmico, a massa molar média (Mw), o raio de giro (Rg), o segundo coeficiente virial (A2), o incremento do índice de refração (dn/dc) e o raio hidrodinâmico (RH). A formação de micelas mistas do SDS com o SB3-14 foi investigada usando técnicas de tensão superficial e fluorescência do estado estacionário do pireno. Parâmetros de associação como concentração micelar crítica (cmc), concentração de agregação crítica (cac), ponto de saturação do polímero (psp) e o efeito da concentração do polímero nos parâmetros cac e psp foram obtidos por estas técnicas. A influência da associação de surfactantes no equilíbrio ácido-base do polieletrólito em água foi acompanhada através da medida do pH das misturas SDS-PEI e SB3-14-PEI. Foram realizadas medidas por espalhamento de luz para os sistemas SDS-PEI e SB3-14-PEI, que evidenciaram a existência da associação entre os surfactantes e o polímero e as mudanças conformacionais das cadeias poliméricas durante a associação.
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Desenvolvimento de uma nova metodologia para preparação de nanopartículas de prata estabilizadas pela polietilenoimina funcionalizada e aplicação em catálise

Signori, Aline Maria 25 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T11:19:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 277714.pdf: 2081825 bytes, checksum: 827a1ac83ae586f0fd7c6568adeac21d (MD5) / O presente trabalho relata a preparação de Nanopartículas de prata (Ag-NPs) catalíticas estabilizadas pela polietilenoimina (PEI) derivatizada. Para isto, realizou-se a derivatização sistemática do tipo "paralela" da PEI, em micropratos de 96 poços de 2 mL, permitindo assim, a obtenção de 96 polímeros diferentes em uma única etapa. Os grupos inseridos foram o etanólico, butil e octil. Posteriormente, as Ag-NPs foram preparadas in situ através da redução química do sal de prata (AgNO3), na presença dos polímeros, em microplacas de 300 L e a formação foi acompanhada por Espectofotômetria UV-Vis pelo aparecimento da banda correspondente a ressonância de plasmon de superfície (SPR) das Ag-NPs. As concentrações de polímero, sal e redutor foram variadas a fim de encontrar as melhores condições de estabilização das Ag-NPs e isto foi feito através da análise dos seguintes parâmetros: máx (comprimento de onda máximo), Amáx, (absorvância máxima) e FWHH (largura a meia altura) que estão relacionados ao tamanho, quantidade e polidispersidade, respectivamente. Dentre os 96 possíveis estabilizantes poliméricos, 3 foram escolhidas (A1-PEI sem derivatização, E5- 0,35 eq. de 2-cloroetanol e 0,4 eq. de 1-bromobutano e E11- 0,35 eq. de 2-cloroetanol e 0,4 eq. de 1-bromooctano) e sintetizadas em larga escala para a realização de um estudo mais completo quanto à cinética de formação das Ag-NPs. A1, E5 e E11 foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de transmissão, que revelou a preparação de NPs com diâmetros de 18,4 nm, 19,5 nm e 24,5 nm, respectivamente, e uma boa distribuição de tamanho. A atividade catalítica das 3 combinações foi avaliada na reação de redução do p-nitrofenol. As constantes catalíticas (k2SV) foram calculadas normalizadas para a área superficial e volume da reação, cujos valores demonstraram uma boa atividade catalítica, principalmente para E11, que apresentou uma atividade catalítica maior do que os reportados na literatura até o presente momento.
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Desenvolvimento e caracterização de microemulsões para veiculação de RNA interferente na pele

Jácome, Rosalina Coelho 19 March 2015 (has links)
Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-04-28T13:52:04Z No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:28:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / The gene therapy has emerged as a promising tool to handle, replace, remove or introduce genes into an organism for treatment of disease. Among the nucleic acids with therapeutic potential are the small interference molecules (siRNA) capable of causing the removal of messenger RNAs (mRNA) or to silence genes. The main challenge is the placement of these molecules for efficient transfection into target cells. The microemulsions have been widely used as carriers for topical drugs. They are colloidal systems with high solubilizing capacity and ability to control the rate of release of active molecules. Therefore, this study developed microemulsions containing siRNA for future topical application as a nanocosmetic. Two pseudoternary phase diagram were obtained using an aqueous phase of propylene glycol and water, Span 80 and Tween 80 as the mixture of surfactants and the canola oil as the oil phase. One received 5% polyethyleneimine (PEI) to aqueous phase to the synthesis of a polymeric system. The selected formulations were evaluated for conductivity, refractive index (RI), transmission electron microscopy (TEM), differential scanning calorimetry (DSC), droplet size, X-ray diffraction (XRD), polarized light microscopy (PLM) and stability, showing microemulsions of the type W/O. Furthermore, were performed studies of encapsulation efficiency and release of siRNA, which showed a great performance of the microemulsions as carriers of the interfering molecules. The presence of PEI provided strong electrostatic interaction with polynucleotides in order to not favor his release and reduced droplet size. The cytotoxicity assay demonstrated the cytoprotective effect of the formulations applied. The systems behaved as Newtonian fluids and low viscosity which facilitates topical application. Therefore, microemulsions are promising vehicles of siRNA for the purpose of skin therapy, with possible technological and socio-economic impact, given that this methodology has not been applied in the field of cosmetics. / A terapia gênica surgiu como uma ferramenta promissora a fim de manipular, substituir, suprimir ou introduzir genes em um organismo para o tratamento de doenças. Dentre os ácidos nucleicos com potencial terapêutico estão as pequenas moléculas interferentes (siRNA), capazes de ocasionar a eliminação de RNAs mensageiros (RNAm) anômalos ou silenciar genes. O principal desafio é a veiculação dessas moléculas para eficiente transfecção em células-alvo. As microemulsões têm sido amplamente utilizadas como carreadores de fármacos de uso tópico. Elas são sistemas coloidais com alta capacidade de solubilização e controle de liberação de moléculas ativas. Dessa forma, o presente trabalho desenvolveu microemulsões contendo siRNA para futura aplicação tópica como um nanocosmético. Dois diagramas de fases pseudoternário foram obtidos utilizando uma fase aquosa de propilenoglicol e água, Span 80 e Tween 80 como a mistura de tensoativos e o óleo de canola como a fase oleosa. Um deles recebeu polietilenoimina (PEI) 5% à fase aquosa para síntese de um sistema polimérico. As formulações selecionadas foram avaliadas quanto à condutividade, índice de refração (IR), microscopia eletrônica de transmissão (MET), calorimetria exploratória diferencial (DSC), tamanho de gotículas, difração de raios-X (DRX), microscopia de luz polarizada (MLP) e estabilidade, evidenciando ser microemulsões do tipo A/O. Além disso, foram realizados estudos de eficiência de encapsulação e liberação de siRNA, que demonstraram um ótimo desempenho das microemulsões como carreadores das moléculas interferentes. A presença do PEI proporcionou forte interação eletrostática com os polinucleotídeos de forma a não favorecer sua liberação, além de reduzir o tamanho das gotículas. O ensaio de citotoxicidade comprovou o efeito citoprotetor das formulações aplicadas. Os sistemas se comportaram como fluidos Newtonianos e de baixa viscosidade, o que favorece a aplicação tópica. Sendo assim, as microemulsões são veículos promissores de siRNA para fins de terapia cutânea, com possível impacto tecnológico e sócio-econômico, uma vez que esta metodologia ainda não foi aplicada na área dos cosméticos.
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Síntese de polietilenoiminas ramificadas decoradas com grupos hidrofóbicos e nucleosídeos e estudos de sua interação com dodecilsulfato de sódio e DNA

Bellettini, Ismael Casagrande January 2012 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-25T21:07:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2015-03-18T20:43:15Z : No. of bitstreams: 1 313699.pdf: 3446379 bytes, checksum: 507f85a2970ba1b5fcd885a888bdf743 (MD5) / A poli(etilenoimina) (PEI) foi modificada por meio da alquilação com grupos n-alquila (n = 4, 6, 8 e 12 carbonos). O espalhamento de raios X a baixos ângulos (SAXS), tensão superficial, emissão de fluorescência do pireno, viscosidade e medidas de pH foram as técnicas usadas para investigar a conformação e agregação das PEIs hidrofobicamente modificadas em solução aquosa, na ausência e na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS). Medidas de SAXS mostraram que o raio de giro diminui com o aumento do comprimento da cadeia alquílica, enquanto que os dados de viscosidade indicaram uma diminuição na viscosidade intrínseca. A PEI não modificada não apresentou atividade na superfície, enquanto as PEIs modificadas mostraram atividade pronunciada na superfície e presença de domínios hidrofóbicos. Na presença de SDS, o início da formação do complexo polímero-surfactante foi determinado, indicando uma diminuição na concentração de agregação crítica (cac) com o aumento no comprimento da cadeia alquílica substituída na PEI. A PEI também foi decorada com o grupo uridina com dois graus de substituição (5% e 15%). A formação de complexos das PEIs, decoradas com uridina ou hidrofobicamente modificadas, com o DNA do timo de bezerro foi investigada através das técnicas de emissão de fluorescência do brometo de etídio, espectrofotometria de UV-Vis, dicroísmo circular (CD), potencial zeta, viscosidade, espalhamento de luz dinâmico (DLS) e SAXS, na ausência e na presença de SDS. Todas as PEIs apresentaram três etapas na formação de complexos com o DNA: a primeira, quando uma pequena quantidade de polieletrólito foi adicionada, as cadeias do DNA são parcialmente condensadas; a segunda, quando mais polieletrólito foi adicionado, apresenta complexos com densidade de carga nula, com tamanho micrométrico; a terceira, em concentrações mais altas da PEI, o DNA foi completamente condensado pelas cadeias das PEIs, formando complexos positivamente carregados com valores de RH,ap na faixa de 51 a 88 nm. Análises de viscosidade e SAXS sugerem que o a PEI não modificada teve a interação mais forte e que melhor condensa o DNA.<br> / Abstract : The polyethylene imine (PEI) was modified by means of the alkylation with n-alkyl groups (n = 4, 6, 8 and 12 carbons). Small-angle X-ray scattering (SAXS), viscosity, surface tension, and pyrene fluorescence emission were then used as techniques to examine the conformation and aggregation of the hydrophobically modified PEIs in aqueous solution, in the absence and presence of sodium dodecylsulfate (SDS). Analysis of the SAXS data showed that the radius of gyration decreases with an increase in the alkyl chain length of the polymer, while the viscosity data indicated a decrease in the intrinsic viscosity under the same conditions. The nonmodified PEI was not surface active, while the hydrophobically modified samples showed pronounced surface activity and the presence of hydrophobic domains. On addition of SDS, the onset of the formation of polymer#surfactant complexes was determined, indicating a decrease in the critical aggregate concentration (cac) with an increase in the alkyl chain length of the polymer backbone. The PEI also was decorated with uridine groups with two substitution degrees (5% and 15%). The complex formation of the decorated or hydrophobically modified PEI with calf thymus DNA was investigated through of the ethidium bromide fluorescence emission, UV-Vis spectrophotometry, circular dichroism (CD), potential zeta, viscosity, dynamic light scattering (DLS) and SAXS techniques, in the absence and presence of SDS. All versions of PEI showed three steps in complexes formation with DNA: first, when a small amount of polyelectrolyte was added, DNA chains were partially condensed; second, when more polyelectrolyte was added, the complexes had a null charge density and micrometric size; third, at higher concentration of PEI, the DNA was fully condensed by PEI chains, leading to positively charged complexes with RH,ap values in the range of 51-88 nm. Viscosity and SAXS analyses suggested that the unmodified PEI had the stronger interaction and promoted the best DNA condensation.
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Estudos cenéticos da reação de heck intramolecular catalisada por nanopartículas bimetálicas estabilizadas por polietilenoimina linear funcionalizada

Faggion Junior, Deonildo January 2013 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-graduação em Química, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:52:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318944.pdf: 2320395 bytes, checksum: 3f337773fa23a11b8691f7fdec0e0f79 (MD5) Previous issue date: 2013 / Reações de acoplamento C-C tem grande destaque na síntese de novos compostos orgânicos, em especial a reação de Heck. Porém, o desenvolvimento de novos sistemas catalíticos, com metodologias livres de ligantes fosfina, ausência de atmosfera inerte e realizadas em meio aquoso, tem sido um grande desafio nos últimos anos. Ainda, dos poucos trabalhos relatados nesta área, raros são os que se dedicam ao estudo sistemático dos mecanismos de reação. Neste sentido, este trabalho pretende contribuir no desenvolvimento de novos catalisadores para reações de acoplamento C-C, nas condições anteriormente citadas, baseando-se no preparo e caracterização de nanopartículas bimetálicas de prata e paládio, estabilizadas por polietilenoimina linear, e sua aplicação em uma reação do tipo Heck intramolecular. Análise Cinética do Progresso da Reação foi utilizada para a determinação da ordem da reação em relação aos reagentes e obtenção de evidências mecanísticas. Também foi verificada a influência da base utilizada (trietilamina) na reação e sobre a morfologia do catalisador. Por fim, experimentos de inibição do catalisador e análise por microscopia eletrônica de transmissão das nanopartículas, após a reação, sugerem a participação da superfície das nanopartículas na catálise de Heck sob as condições estudadas. <br> / Abstract: Carbon-carbon coupling is a prominent reaction in the synthesis of new organic compounds, specially the Heck reaction. However, the development of new catalytic systems, with methods free of phosphine ligands, without inert atmosphere and held in an aqueous medium, has been of great challenge in the last years. Moreover, from the few studies reported in this area, very little are dedicated to the systematic study of reaction mechanisms. Thus, this work aims to contribute in the development of new catalysts for C-C coupling reactions, under the conditions previously mentioned, based on the preparation and characterization of bimetallic nanoparticles of silver and palladium, stabilized by linear polyethyleneimine, and its application in an intramolecular Heck type reaction. Reaction Progress Kinetic Analysis was used to determine the reaction order with respect to reactants and obtention of mechanistic evidences. It was also verified the influence of the base (triethylamine) on the reaction and on the catalyst morphology. Finally, catalyst inhibi-tion experiments and analysis by transmission electron microscopy of the nanoparticles, after the reaction, suggest the involvement of the nanoparticles surface on catalysis under the studied conditions.
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Construção, caracterização e aplicação analítica de microdispositivos enzimáticos

Cerqueira, Marcos Rodrigues Facchini 09 September 2016 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-21T18:21:21Z No. of bitstreams: 1 marcosrodriguesfacchinicerqueira.pdf: 6161892 bytes, checksum: a58d0d5ce0d0b333fd8a3b50155105e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-22T12:39:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marcosrodriguesfacchinicerqueira.pdf: 6161892 bytes, checksum: a58d0d5ce0d0b333fd8a3b50155105e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T12:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcosrodriguesfacchinicerqueira.pdf: 6161892 bytes, checksum: a58d0d5ce0d0b333fd8a3b50155105e4 (MD5) Previous issue date: 2016-09-09 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O foco deste trabalho foi o desenvolvimento e aplicação de microreatores enzimáticos, visando sua aplicação em sistemas de análise por injeção em fluxo. Em cima disso, dois substratos poliméricos foram utilizados para a avaliação de imobilização enzimática: um à base de poli (metil metacrilato) (PMMA) e outro em uma resina do éter diglicídico do bisfenol-A (BADGE). Uma impressora à laser de CO2 foi utilizada para confeccionar os dispositivos nas dimensões desejadas. Para o sucesso da imobilização, os sistemas foram previamente tratados com polietilenoimina (PEI) visando a introdução de grupamentos funcionais reativos na superfície dos materiais de partida. Num primeiro estudo, baseado na modificação de PMMA, a ativação do material foi conseguida após tratamento dos microcanais com PEI em meio de dimetilsulfóxido (DMSO). Já no segundo caso o tratamento com PEI envolveu a simples mistura mecânica dos materiais, objetivando a cura da resina empregada. Após a ativação dos materiais com PEI, as enzimas foram imobilizadas após passagem de uma mistura de glutaraldeído (um agente espaçador) e as enzimas. Dentre as enzimas estudadas estão a glicose oxidase (GOx), a ascorbato-oxidase (AAO), a catalase (CAT), a glutamato dehidrogenase (GDH), além de um sistema híbrido baseado na imobilização simultânea das enzimas glicose oxidase (GOx) e horseradish peroxidase (HPR). A caracterização dos sistemas desenvolvidos foi feita primordialmente por meio da espectroscopia Raman. Além disso, a aplicação de alguns dos sistemas frente a amostras reais e o cálculo de parâmetros cinéticos e operacionais dos microreatores confeccionados foram reralizados. Essas avaliações foram feitas baseadas em sistemas de detecção desenvolvidos no laboratório por técnicas eletroquímicas e por espectroscopia no visível. Como grande benefício dos sistemas desenvolvidos, podem ser destacados a velocidade e a simplicidade de implementação do processo de imobilização e operação. / The focus of this work is the development and application of enzymatic microreactors aiming their application through flow injection analysis systems. On top of that, two polymeric substrates were used for the evaluation of enzyme immobilization: one based on poly (methyl methacrylate) (PMMA) and another baed on a bisphenol-A diglycidyl ether resin (BADGE). A CO2 laser printer was used to fabricate the devices at the desired dimensions. For the success of the immobilization systems have been pretreated with polyethyleneimine (PEI) in order to introduce reactive functional groups on the surface of the starting materials. In a first study, based on PMMA modification, the activation of the material was achieved after treating microchannels with PEI in dimethylsulfoxide (DMSO). In the second case, treatment with PEI involved simply a mechanical mixture of the two materials, in order to cure the resin. After activation of materials with PEI, the enzymes were immobilized after passage of a mixture of glutaraldehyde (a spacer agent) and enzymes. Among the enzymes studied are glucose oxidase (GOx), ascorbate oxidase (AAO), catalase (CAT), dehydrogenase glutamate (GDH), and a hybrid system based on the simultaneous immobilization of the enzymes glucose oxidase (GOx) and horseradish peroxidase (HPR). The characterization of the developed systems was primarily done by Raman spectroscopy. Moreover, application of some of the proposed systems to real samples and calculation of kinetic and operational parameters are presented during the study. These evaluations were made with detection systems based on electrochemical and visible spectroscopy techniques, all developed at the laboratory. One great benefit of the developed systems, are the speed and simplicity of implementation the immobilization process and operation of the devices.

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