Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O cancer de prostata e o segundo tipo de cancer mais frequente. Calicreinas teciduais e integrinas estao diretamente relacionadas com essa doenca, interferindo na adesao celular, diferenciacao e proliferacao. Neste trabalho utilizamos as linhagens estabelecidas DU145 e PC3 de cancer de prostata para o estudo do efeito do inibidor de calicreina recombinante, rBbKIm, o qual contem em sua sequencia primaria o motivo RGD, proveniente do inibidor BrTI isolado de Bauhnina rufa. O meio condicionado da cultura de DU145 e PC3 tratadas com rBbKIm por 48 horas inibiu cerca de 95% a atividade hidrolitica de HD-Pro-Phe-Arg- ƒÏNa por serino proteases da familia das calicreinas. rBbKIm inibiu a viabilidade celular da DU145 (56%, 100 ƒÊM, 48 horas) e da PC3 (28%, 100 ƒÊM, 48 horas) e interferiu somente em 5% da viabilidade da linhagem de fibroblastos de liquido amniotico (100 ƒÊM, 48 horas). rBbKIm nao inibiu a adesao das linhagens DU145 e PC3 sobre a fibronectina, laminina, colageno I e IV. Embora rBbKIm nao tenha interferido na migracao de DU145 o inibidor reduziu em 38% o processo migratorio da linhagem PC3 (100 ƒÊM) apos 23 horas de tratamento. Em relacao ao efeito do inibidor sobre a morte celular DU145 e PC3 tratadas com de rBbKIm (50 e 100 ƒÊM, 24 e 48 h) induziu a morte celular por apoptose. Alteracoes no ciclo celular foram observadas na linhagem PC3 com parada do ciclo nas fases G0/G1 e G2/M. Nao houve alteracao no ciclo celular na linhagem DU145. Ambas as celulas externalizaram o citocromo c para o citoplasma quando tratadas com rBbKIm (50 e 100 ƒÊM) por 24 horas. No caso da PC3 observou-se a ativacao de caspase-9 com 50 ƒÊM de rBbKIm apos 48 horas, nao havendo ativacao de caspase-3 enquanto que com a DU145 ocorreu ativacao da caspase-3 e nao houve ativacao da caspase-9. Os peptideos contendo a sequencia RGD e RGE nao inibiram a viabilidade celular de DU145 e PC3. Analises sobre o efeito de rBbKIm na viabilidade e migracao da linhagem endotelial humana (HUVEC), mostrou que rBbKIm (50 ƒÊM) inibiu 28% da viabilidade celular e 30% da motilidade celular da HUVEC. rBbKIm tambem apresentou atividade inibitoria na formacao de estruturas angiogenicas sobre Matrigel in vitro. Em resumo, o presente trabalho demonstrou a ação diferencial do inibidor de protease rBbKIm em linhagens de câncer de próstata independentes de andrógenos, PC3 e DU145, e em células normais de fibroblastos de líquido amniótico e em células endoteliais humanas, HUVEC. / Prostate cancer is the second more frequent type of cancer. In this work, using DU145 and PC3 prostate cancer cellular lines, we studied the effect of recombinant kallikrein inhibitor modified form (rBbKm), in which the sequence containing the signal motif sequence RGD of the inhibitor BrTI from Bauhnina rufa was inserted. When DU145 and PC3 were incubated with rBbKIm for 48h, and the conditioned medium the culture was incubated with the HD-Pro-Phe-Arg-ñNa, an kallikrein substrate, inhibited 95% of the degradation of this in both cells. rBbKIm inhibited cell viabillity of DU145 (56%, 100 ìM, 48 h) and PC3 (28%, 100 ìM, 48 h), but affect only 5% of the viabillity of fibroblast normal cell line (100 ìM, 48h). In cell adhesion, rBbKIm did not inhibit DU145 and PC3 cell line adhesion on fibronectin, laminin, collagen I and IV coat. In cell migration, rBbKIm did not inhibit DU145, but inhibited 38% of the PC3 (100 ìM) after 23 h. To evaluate the cytotoxicity, DU145 and PC3 were incubated with rBbKIm (50 and 100 ìM, 24 and 48h) inducing cell death by apoptosis. The presence of rBbKIm arrest PC3 cell cycle at the G0/G1 and G2/M phase, but did not affect DU145. Both cells released cytocrome c to the cytosol when treated with rBbKIm (50 and 100 ìM) for 24h. Moreover, DU145 when was treated with rBbKIm for 48h activated the caspase-3. However PC3 did not activated caspase-3, but activated caspase-9. The peptides containing the RGD and RGE sequence did not inhbit the cell viabillity of DU145 and PC3. Analyzing the effect of rBbKIm on HUVEC viabillity and migration, rBbKIm (50ìM) inhibited 28% and 30%, respectively. This protein inhibited 49% of the HUVEC angiogenesis in vitro on Matrigel. In summary, we have demonstrated the differential action of the protease inhibitor rBbKIm on androgen-independent prostate cancer PC3 and DU145, normal fibroblast and endothelial HUVEC cells. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-26 / Objetivo: avaliar a movimentacao de bexiga e reto, na radioterapia conformacionada em pacientes portadores de cancer de prostata e relacionar os histogramas dose-volume destes orgaos e dos mesmos acrescidos de margens, com as complicacoes decorrentes do tratamento. Metodos: cinquenta pacientes portadores de adenocarcinoma de prostata submetidos a radioterapia conformacionada realizaram tomografias seriadas durante o tratamento, sendo delineados os orgaos de risco, bexiga e reto, e comparados ao exame inicial. Foi obtido um valor de margem individual para cada parede da bexiga e reto, de forma a incluir 90% das variacoes observadas, medida esta que foi utilizada para definicao de margens ao redor destas estruturas e delimitacao do PRVbexiga e PRVreto no planejamento de 109 pacientes com diagnostico de cancer de prostata, tratados no periodo de 2004 a 2008. O histograma dose-volume para o PRVbexiga e PRVreto foi comparado ao histograma destes orgaos sem as margens. Os dados referentes aos pacientes e ao tratamento foram correlacionados as complicacoes agudas e tardias, segundo os criterios do CTC v2.0. Resultados: as maiores variacoes observadas foram para a parede superior e anterior da bexiga e para a porcao anterior do reto. Complicacoes urinarias e gastrointestinais tardias . 2 foram presenciadas em 1,8% e em 9,2% dos casos, respectivamente. Dentre os fatores analisados, a hormonioterapia influenciou o aparecimento de complicacoes urinarias agudas (p=0,011) e pacientes com complicacoes urinarias . grau 2 apresentaram uma maior probabilidade de evoluir com complicacoes tardias (p=0,001). A dose em 25% (p=0,011) e 40% (p=0,005) do reto e em 40% do PRVreto (p=0,012) influenciaram o aparecimento de reacoes gastrointestinais agudas, enquanto apenas a dose em 25% do reto (p=0,033) e a presenca de complicacoes agudas . grau 2 (p=0,018) constituiram fator prognostico para o desenvolvimento de complicacoes tardias. Conclusao: os orgaos de risco apresentam significativa movimentacao interfracao na radioterapia conformacionada para cancer de prostata. A dose no PRVreto se correlacionou as complicacoes gastrointestinais agudas e pode ser utilizada como mais uma ferramenta para predizer e minimizar o risco de aparecimento das mesmas. / Objective: To evaluate bladder and rectum motion during 3-Dimensional conformal radiation therapy (3D-CRT) in prostate cancer patients, to derive a planning volume at risk (PRV) and to correlate the PRV dose-volume histograms (DVH) with treatment complications. Material and Methods: Fifty prostate adenocarcinoma patients undergoing 3D-CRT were submitted to serial computerized tomography (CT) during the treatment, which was compared to pre-treatment data. Individual margins for each bladder and rectal wall were obtained as to include 90% of the variations, which was used to define the PRVbladder and the PRVrectum of 109 patients diagnosed with prostate cancer and treated from 2004 to 2008. These patients f data, including the PRV DVHs, were correlated to acute and late complications, according to Common Toxicity Criteria (CTC) v2.0. Results: The largest displacement occurred in superior and anterior axis of the bladder and in the anterior axis of the rectum. Long-term urinary and gastrointestinal (GI) complications grade . 2 were seen in 1.8% and 9.2% of the cases, respectively. Hormone therapy (p=0.011) and acute toxicity . grade 2 (p=0.001) influenced the development of late urinary complications. Factors that influenced acute GI reactions were: doses at 25% (p = 0.011) and 40% (p = 0.005) of the rectum volume and at 40% of PRVrectum (p = 0.012). The dose at 25% of the rectum volume (p = 0.033) and acute complications . grade 2 (p = 0.018) were prognostic factors for long-term complications. Conclusion: The organs at risk shows a significant inter-fraction motion during 3D-CRT for prostate cancer. PRVrectum dose correlated with acute gastrointestinal complications and may be a useful tool to predict and reduce their occurrence. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A assinatura digital é um histograma representativo de conjuntos de características de textura da cromatina do núcleo celular observado por microscopia óptica convencional. A assinatura digital é obtida através de análise de imagem computadorizada. Tal método permite o estudo do núcleo celular em material citológico e tecidos histológicos normais ou que apresentem alterações morfológicas relacionadas a processos patológicos. O objetivo principal deste trabalho foi caracterizar núcleos celulares de forma específica desenvolvendo um método de visualização de parâmetros de textura de cromatina (assinatura nuclear digital) que permitisse ainda avaliar alterações teciduais através do grau de desvio da normalidade apresentado por seus núcleos. Foram estudadas 93 características descritivas da distribuição espacial e estatísitca da textura de cromatina de imagens digitais de alta resolução de 5.045 núcleos celulares provenientes de 32 espécimes de tecido prostático. A próstata foi utilizada por ser o protótipo de desenvolvimento do laboratório de imagens biomédicas do Centro de Ciências Ópticas da Universidade do Arizona, nos Estados Unidos. Foram desenvolvidos e padronizados métodos para visualização de características de textura nuclear (assinaturas digitais) e de áreas de tecido (assinaturas de padrão histológico) e para quantificação do grau de desvio de células e áreas de tecido de interesse em relação à população notmal de referência (distância padronizada da população celular normal). Tal método, que pode ser utilizado sem restrições em qualquer material colhido e preparado por técnicas convencionais para estudo citológico ou histológico demonstrou sensibilidade para detectar alterações subvisuais na textura da cromatina de células aparentemente normais, próximas de lesões pré-neoplásicas e neoplasias malignas. Tais potencialidades podem aumentar a sensibilidade diagnóstica dos métodos de investigação baseados nesse tipo de material. / The digital signature is a histogram representing a set of nuclear chromatin texture features under conventional microscopy. It is obtained by computerized image analysis procedures and allows the study of cytologic and histologic material. The main goal of this project was to characterize nuclei in a specific manner by developing a chromatin texture signature and to characterize histologic tissue by means of their composition of nuclei with di verse degrees of deviation from normal. A set of 93 features descriptive of the spatial and statistical distribution of nuclear chromatin was computed for each of 5,045 nuclei from 32 specimens of prostatic tissue ranging from normal appeating tissue to intraepithelial lesions and adenocarcinoma. The prostate is the organ used as prototype to develop the digital signature technology at the Arizona Optical Sciences Center, USA. Standardized methods to visually inspect nuclear chromatin texture features (digital signatures) and tissue areas (histologic pattem signature) were developed. And a standardized distance from normal numerical profile was developed. The digital signature can be applied without any restriction to ali cytologic and histologic material sampled by biopsy, exfoliative and aspirative techniques. The digital signatures are also capable of detecting subtle changes of the chromatin pattern of normal appearing cells at the vicinity of precursor lesions and carcinomas. Such potentíal may have a positive impact on the sensitivity of methods based on citologic and histologic studies.

Made available in DSpace on 2016-08-30T10:50:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6151_Sergio Riguete Zacchi.pdf: 7184672 bytes, checksum: 48e60d899ca4f38a791b67b7ada5072b (MD5) Previous issue date: 2012-12-18 / Introdução: O câncer de próstata é a neoplasia maligna de maior incidência na população brasileira e a segunda causa de mortalidade oncológica entre os homens, com uma tendência de aumento temporal e 75% dos casos incidindo em homens acima de 65 anos. Objetivos: Avaliar a associação das variáveis sociodemográficas e clínicas com o estadiamento clínico inicial; analisar a mortalidade e a sobrevida e suas associações com variáveis sociodemográficas e clínicas nos pacientes com câncer de próstata. Metodologia: Analisouse, de forma retrospectiva, os dados dos homens com câncer de próstata registrados no Registro Hospitalar de Câncer do Hospital Santa Rita de Cássia (HSRC), Vitória-ES, durante o período de 01 de janeiro de 2000 a 31 de dezembro de 2006. Utilizaram-se os dados do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) para determinar o desfecho. Analisou-se através do Pacote Estatístico para Ciências Sociais (SPSS), versão 18.0. Para as variáveis do estudo que apresentaram significância estatística, calcularam-se os Odds ratio brutos e ajustados pelo modelo de regressão logística multivariada. Para se estimar a sobrevida, utilizou-se o método de Kaplan-Meier e para a comparação das curvas de sobrevida, empregou-se o teste de Log Rank. Calculou-se a influência das variáveis pela regressão múltipla de Cox. Resultados: Dos 1.290 homens com câncer de próstata, 758 (58,8%) encontraram-se vivos, 308 (23,9%) apresentaram óbito por câncer de próstata e em 224 (17,4%) o desfecho foi o óbito por outras causas. Encontrou-se um maior risco de serem diagnosticados em estadiamento tardio os homens com PSA > 20ng/dl e escore de Gleason ≥ 7. O risco foi reduzido naqueles que chegaram ao HSRC encaminhados com diagnóstico e sem tratamento prévio. Associou-se ao óbito por câncer de próstata o escore de Gleason > 9, o valor de PSA > 20 e a presença de metástase. Associou-se ao óbito por outras causas o estado civil viúvo, ingressar no HSRC sem diagnóstico e sem tratamento prévio e o valor do PSA >50 ng/dl. Encontrou-se Sobrevida Câncer de Próstata Específica (SCPE) em 5 e 8 anos de 81,9% e de 77,2% para todos os estadiamentos e Sobrevida Global (SG) em 5 e 8 anos de 70,1% e 69,8%, respectivamente. As variáveis Escore de Gleason ≥ 7, o PSA > 20 ng/dl e a presença de metástase associaram-se a um menor tempo de sobrevida. Conclusão: As variáveis que se associaram a um estadiamento clínico mais tardio, à mortalidade por câncer de próstata e à redução do tempo de sobrevida são passíveis de reconhecimento e diagnóstico precoce em consultas de rastreamento. É de extrema relevância a adoção de ações a partir de políticas de saúde mais efetivas voltadas para o homem com o objetivo de garantir um acesso equitativo a todos aqueles com diagnóstico de câncer de próstata, para que possam receber diagnóstico precoce e tratamento oportuno.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia e Gestão do Conhecimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-16T03:05:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337363.pdf: 671913 bytes, checksum: be3fda3ac25ff0c3d35721a800c56936 (MD5) Previous issue date: 2015 / As estratégias de comunicação voltadas à saúde masculina devem ser desenvolvidas por profissionais com conhecimento na área da saúde masculina e com capacitação na área preventiva com ênfase comunicacional. A pesquisa caracteriza-se por um estudo de caso em uma empresa de prestação de serviço em saúde, com abordagem mista, quantitativa e qualitativa. Os instrumentos utilizados nesta pesquisa foram o telefone como mídia para disseminação de conhecimento aos beneficiários do plano de saúde sobre o câncer de próstata e as entrevistas presenciais com questões estruturadas e abertas sobre a clareza na comunicação em saúde e as estratégias comunicacionais. Os resultados demonstraram que dos 235 homens abordados via contato telefônico, 60,40% destes aderiram ao programa de prevenção contra o câncer de próstata. Quanto à intercomunicação, 24 entrevistados foram abordados após a adesão ao programa, todos estes entenderam as informações sobre o câncer de próstata, não ficaram com dúvidas na realização do exame de sangue e não se sentiram constrangidos com a ligação. Em relação às estratégias de comunicação abordadas, a maioria considerou o telefone como a mais acessível e a internet como a menos utilizada. Conclui-se que a estratégia de comunicação objeto deste estudo foi eficaz.<br> / Abstract : Communication strategies aimed at men's health must be developed by professionals with knowledge in male health and training in the preventive area with communication emphasis. The research is characterized by a case study in the provision of health service company, with mixed quantitative and qualitative approach. The instruments used in this research were the phone as media to disseminate knowledge to the beneficiaries of the health plan about prostate cancer and in-person interviews with structured and open questions about the clarity in health communication and communication strategies. The results showed that of the 235 men approached via telephone contact, 60.40% of those enrolled in the prevention of prostate cancer program. As for intercom, 24 respondents were approached after joining the program, all of these understood the information on prostate cancer, were not in doubt in the examination of blood and did not feel uncomfortable with the connection. Regarding addressed communication strategies, most considered the phone as the most accessible and the Internet as the least used. We conclude that the object communication strategy of this study was effective.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:29Z : No. of bitstreams: 1 000854483.pdf: 2110105 bytes, checksum: ae3b47c9a0f96887f435022d5e4dd526 (MD5) / O Carcinoma de Próstata é frequente causa de morbi-mortalidade nas populações ocidentais, tendo alta frequência no Brasil. É a neoplasia mais comum do homem, e a segunda causa de óbito, precedido pelo câncer de pulmão. Sua incidência vem aumentando continuamente nas últimas décadas devido ao aumento da perspectiva de vida e ao estilo de vida ocidental. A apoptose é mecanismo de morte celular que ocorre em diversos processos fisiológicos. Sabe-se que neoplasias tem progressiva resistência à apoptose. Esta é regulada pelas caspases, enzimas efetoras da apoptose, cuja ativação é rigorosamente controlada pelas proteínas inibidoras da apoptose, as IAPs, que por sua vez tem atividade modulada por moléculas inibidoras de IAPs, sendo a SMAC/Diablo a principal e a mais estudada. Neste trabalho estudamos a relação entre as IAPs e SMAC nos carcinomas prostáticos e sua correlação com o Índice Apoptótico (IA), proliferação celular, imuno-expressão da proteína p53 e taxa de sobrevida dos pacientes. Foram confeccionados blocos de parafina de TMA com tecido de câncer prostático de pacientes operados no Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu de 1980 a 2000. Estes foram submetidos à reação imuno-histoquímica para Survivina, XIAP, SMAC, p53, Caspase 3 Clivada (índice apoptótico) e Ki67 (índice de proliferação celular). As laminas foram lidas por dois patologistas, sendo obtidas graduações de intensidade de imuno-expressão e/ou percentuais de positividade celular. Esses resultados foram correlacionados com a graduação de Gleason, categorias prognósticas (ISUP) e dados de sobrevida dos pacientes. Houve correlação entre a diferenciação da neoplasia e o índice de proliferação celular. A intensidade da marcação para p53 também esteve associada ao grau de diferenciação neoplásica. A sobrevida dos pacientes foi maior nos casos com menor ki67 e menores Gleason e Categorias Prognósticas / Prostate carcinoma is a frequent cause of morbidity and mortality in Western populations, with high frequency in Brazil. It is the most common cancer among men and the second leading cause of death, preceded by lung cancer. Its incidence has increased continuously in recent decades due to increased life expectancy and the western lifestyle. Apoptosis is a cell death mechanism that occurs in many physiological processes. It is known that tumors show progressive resistance to apoptosis. It is regulated by caspases, apoptosis effector enzymes, whose activation is strictly controlled by Innibitors of Apoptosis Proteins, IAPs, which in turn are modulated by IAP activity inhibitory molecules, with SMAC/Diablo being the main one and the most studied. We studied the relationship between IAPs (XIAP and Survivin) and SMAC in prostatic carcinomas and its correlation with the Apoptotic Index (AI), cellular proliferation, immunohistochemistry expression of protein p53 and patient survival rate. TMA paraffin blocks were made with prostate cancer tissue from patients operated at the Clinics Hospital, Botucatu School of Medicine, from 1980 to 2000. These were submitted to immunohistochemical reaction to Survivin, XIAP, SMAC, p53, cleaved Caspase 3 (apoptotic index) and Ki67 (cell proliferation index). The slides were read by two pathologists, wich graduated the intensity and percentage of positive cells according to immuno-expression of each marker. These results were correlated with the Gleason grade, prognostic categories (ISUP) and patient survival data. A correlation was verified between tumor differentiation and the cell proliferation rate. The intensity of p53 reaction was also associated with the degree of neoplastic differentiation. Patient survival was higher in cases with lower ki67 labelling and lower Gleason and Prognostic Categories grading

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-03Bitstream added on 2014-06-13T18:44:21Z : No. of bitstreams: 1 disantis_gw_dr_botfmvz_prot.pdf: 4486819 bytes, checksum: 22bfb6868fb6b4112ac603f50cd0b4e4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A neoplasia intra-epitelial prostática (HGPIN) e a atrofia inflamatória proliferativa (PIA) são lesões potencialmente pré-malignas encontradas na próstata humana (De Marzo et aI., 1999; Bostwick e Qian, 2004). HGPIN tem sido relatada na próstata canina com características semelhantes às observadas em humanos (Waters et aI., 1997), porém a PIA ainda não foi caracterizada nesta espécie. O presente trabalho objetivou a avaliação imunoistoquímica do índice proliferativo (PCNA e Ki67), da expressão de proteínas pró-apoptose (caspase-3), genes supressores de tumores (p-53), genes inibidores de apoptose (bcl-2) e de moléculas de adesão (E-caderina), além da avaliação histoquímica do estado proliferativo (AgNOR) e da determinação de mensurações nucleares por análise quantitativa computadorizada de imagens (AQCI) em focos HGPIN, PIA e em ácinos normais da próstata canina. Considerando os resultados de ácinos normais, constatou-se que as lesões estudadas apresentam alto índice proliferativo; capacidade proliferativa no compartimento epitelial secretor; ausência de expressão de p-53; perda de expressão de E-caderina; padrão de AgNOR semelhante ao de ácinos normais; e núcleos celulares maiores e com fator de circunferência maior. Focos de PIA exibem ainda índice apoptótico semelhante ao de ácinos normais e predomínio do linfócitos T, quando considerado o infiltrado Iinfocítico. Tais achados aproximam estas duas lesões entre si e sugerem que possam estar envolvidas no processo de transformação neoplásica da próstata canina. / Prostatic intraepithelial neoplasia (HGPIN) and proliferative inflammatory atrophy (PIA) are potentially premalignant lesions, found in human prostate (De Marzo et aI., 1999; Bostwick e Qian, 2004). HGPIN have been reported in canine prostate (Waters et aI., 1997), and share the same aspects with the humans, and PIA hadn't been described in the dogs. The aim of this work was to evaluate, by immunohistochemistry proliferative index (PCNA and KI-67), proapoptotic proteins expression (caspase 3), tumour suppressor gene (p-53), adhesion molecules (Ecadherin), histochemical proliferative status (AgNOR) and nuclear measurement by image computer quantitative analysis (AQCI) in HGPIN focus, PIA e normal acinus in canine prostate. Comparing the normal acinus results, the lesions showed higher proliferative index, secretory epithelial cells capable of proliferation, absence of p-53 expression, loss of E-cadherin expression, AgNOR patterns similar to normal acinus, cellular nucleus bigger and with higher nuclear round factor. PIA had the same apoptotic index as the normal acinus and mainly T Iymphocytes in the inflammatory infiltrate. Our findings allow us to consider these two lesions close to each other, and they may be involved in the process of neoplastic transformation of canine prostate.

Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 29/08/2016 / Inclui referências : f. 81-84 / Área de concentração: Patologia / Resumo: USP2a é uma importante enzima deubiquitinase (DUB) capaz de remover a ubiquitina de diferentes substratos, como da enzima FASN e do receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR). Em tumores de próstata observa-se uma correlação positiva entre a expressão de USP2a e a tumorigênese, caracterizando-a como uma proteína oncogênica. Essa característica da DUB está principalmente relacionada com sua função estabilizadora da enzima FASN, responsável pela síntese de ácidos graxos na célula. A USP2a também resgata o EGFR da degradação, mantendo seus níveis celulares elevados. Sabe-se que o direcionamento de proteínas da membrana plasmática para a via do corpo multivesicular requer a ação dos complexos proteicos ESCRTs. Um deles, o ESCRT-0, possui duas subunidades: Hrs, responsável por direcionar o complexo aos endossomos precoces, e a subunidade STAM, capaz de interagir com diferentes DUBs. Sabe-se que a USP2a co-localiza com EEA1, um marcador de endossomos precoces, então decidiu-se analisar se a USP2a interage também com STAM, e identificar o sítio dessa interação. Para isso, linhagens celulares normais e tumorais de próstata foram modificadas para expressar permanentemente a forma selvagem e o mutante cataliticamente inativo de USP2a, e também foram silenciadas para a expressão de STAM. As sequências de STAM, de sua região SH3 e do mutante STAM SH3 foram clonadas, com o intuito de se obter plasmídeos de superexpressão para esses construtos. A primeira evidência de interação entre USP2a e STAM foi observada em ensaio de co-imunoprecipitação com células tumorais de próstata superexpressando USP2a, mas esse resultado ainda não foi totalmente confirmado. A região de STAM que pode contribuir para essa interação não foi identificada devido a baixos níveis de expressão dos construtos. Uma relação indireta entre USP2a e STAM foi observada, com o aumento da ubiquitinação de STAM com a superexpressão da forma selvagem da enzima em células de próstata, sem alterar os níveis celulares da proteína. Observou-se também que STAM é capaz de modular a reciclagem de EGFR em linhagens celulares de próstata, uma vez que seu silenciamento aumenta a taxa de degradação de EGFR. Analisou-se também o efeito fenotípico da deleção do gene fasn em camundongos com tumores de próstata induzidos pela perda de Pten. Verificou-se que a inibição genética de FASN reduz a incidência de formas agressivas de tumores de próstata nos animais. Os resultados obtidos sugerem que FASN, assim como USP2a, pode ser um importante alvo farmacológico para o tratamento de tumores de próstata. Palavras-chave: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN. / Abstract: USP2a is an important deubiquitinating enzyme (DUB) capable of removing ubiquitin from different substrate proteins, like FASN and epidermal growth factor receptor (EGFR). In prostate tumors there is a positive correlation between USP2a expression level and tumorigenesis, which makes it an oncogenic protein. This characteristic is mainly related with its ability to stabilize FASN, the enzyme that synthesizes fatty acids in cells. USP2a also rescues EGFR from lysosomal degradation, keeping its cellular levels raised. orting of plasma membrane proteins into multivesicular body pathway requires the ESCRTs complexes. One of these, the ESCRT-0, has two subunits: the subunit Hrs, that is responsible for targeting the complex to early endosome, and the subunit STAM, which interacts with different DUBs. -localizes with EEA1, a marker of early endosomes, so we decided to analyze if USP2a also interacts with STAM, whether this interaction is needed to taking USP2a to early endosome and identify the protein site required for this interaction. For this, normal and tumoral prostate cell lines were modified to permanently overexpress USP2a wild type and its catalytically inactive mutant, these cell lines also had the STAM expression knocked down. Molecular cloning of STAM, its SH3 region and a mutant lacking SH3, all tagged with GFP, were performed in order to obtain plasmids for overexpression of this constructs. The first sign of interaction between USP2a and STAM was observed with a co-immunoprecipitation assay in prostate tumoral cells overexpressing USP2a, but it was not fully confirmed. The region of STAM constructs. Indirect relationship between USP2a and STAM was observed, since overexpression of wild type USP2a is related with enhanced ubiquitination of STAM in prostate cell lines, even though the protein level remains the same. STAM is also capable of affect EGFR recycling in prostate cell lines, since STAM knocked down cells shown enhanced degradation of EGFR. It was also analyzed the effect of fasn gene deletion on Pten loss driven prostate tumors. The genetic ablation of FASN reduced the incidence of aggressive prostate tumors in mice, suggesting that FASN, as well as USP2a, could be an important pharmacological target for treatment of prostate cancer. Key words: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-26Bitstream added on 2014-06-13T18:45:03Z : No. of bitstreams: 1 alves_fcmc_dr_botfm.pdf: 1089125 bytes, checksum: 9611b9c1532f063a91add4577e898f7f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As alterações epigenéticas desempenham funções críticas na regulação de vários genes, funções celulares e conseqüentes mudanças no controle do ciclo celular. Estas modificações têm sido associadas ao desenvolvimento tumoral. Em câncer de próstata, muitos genes hipermetilados foram descritos e indicados como potenciais marcadores diagnósticos, incluindo RARB, RASSF1A, SFN e CDH1. O presente estudo tem como objetivo avaliar a freqüência da hipermetilação dos genes SFN, RARB, RASSF1A e CDH1 nos adenocarcinomas de próstata (CaP) e correlacionar essas alterações com a expressão gênica e proteica e com parâmetros clínicos e histopatológicos. O padrão de metilação dos genes SFN, RARB, RASSF1A e CDH1 foi determinado por PCR-metilação específica em 68 amostras de CaP e em 27 amostras de próstata não neoplásicas (PNN). Expressão dos transcritos RARB e RASSF1A foram avaliados por RT-PCR quantitativo em 73 amostras de CaP, 15 amostras de tecidos prostáticos adjacentes não neoplásicos (PAdj) e dois tecidos prostáticos normais (N). A expressão das proteínas foi avaliada por imunohistoquímica em 141 amostras de CaP, 40 PAdj e dois N. Os resultados foram correlacionados com parâmetros clinico-histopatológicos. A expressão proteica de E-caderina também foi investigada em uma série de 39 CaP e 27 PNN. Os genes RARB e RASSF1A apresentaram-se hipermetilados em CaP (P<0,0001 e P = 0,0017, respectivamente), mas nenhuma diferença foi detectada para SFN. Os níveis dos transcritos e proteínas RASSF1A foram semelhantes entre amostras de CaP e PAdj. Entre os tumores foi detectada a diminuição dos níveis de transcritos de RAR (P=0,001) e da proteína (P=0,0007). Níveis diminídos do mRNA foram associados com a hipermetilação de RARB. A expressão proteica de RAR era nuclear e citoplasmática nos tecidos tumorais. A análise multivaria... / Epigenetic alterations play critical roles in regulation of several genes and cellular functions and their deregulation may disrupt the cellular control leading to tumor development. In prostate cancer (PCa), many hypermethylated genes have been described and indicated as potential prostate cancer diagnostic markers, including RARB, RASSF1A, SFN and CDH1. The current study aimed to evaluate SFN, RARB, RASSF1A, and CDH1hypermethylation frequencies in prostate carcinoma (PCa) and to correlate these alterations with down-regulations at transcriptional and protein levels and with clinical outcome. Methylation pattern of SFN, RARB, RASSF1A and CDH1 were determined by methylationspecific PCR (MSP) in 68 PCa samples and 27 non-neoplastic prostate tissues (NNP). RARB and RASSF1A transcripts expression were evaluated by quantitative RT-PCR in 73 PCa, 15 adjacent nonneoplastic prostate tissues (AdjP) and two normal prostate (N). Methylation and mRNA analysis for RARB and RASSF1A were done in matched samples from 30 PCa and 10 AdjP. Protein expression assessed by immunohistochemistry was evaluated in an independent cohort of 141 PCa, 40 AdjP and two normal prostate tissues. Paired E-cadherin protein and methylation analysis was also investigated in 33 PCa and 20 NNP. The findings were correlated with clinicopathological parameters. RARB and RASSF1A genes were hypermethylated in PCa (P <0.0001 and P = 0.0017, respectively), but no difference was detected for SFN. RASSF1A mRNA and protein levels were similar in PCa and AdjP samples. Down-expression of RAR in transcript (P=0.001) and protein (P=0.0007) levels were detected in tumors. Lower mRNA levels were associated with RARB hypermethylation. Nuclear and cytoplasmic RAR protein expression was detected in tumor tissues. Multivariate analysis demonstrated that cytoplasmic RAR immunostaining was independently associated with decreased... (Complete abstract click electronic access below)

Objetivo: Investigação da presença de hiperplasia prostática benigna e/ou neoplasia maligna da próstata em homens com mais de 50 anos, residentes na Grande Porto Alegre, que se inscreveram em um programa de rastreamento voluntário de doenças prostáticas. Material e método Foram avaliados 1.227 homens, 1.212 com mais de 50 anos, que compareceram ao Ambulatório de Urologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (RS), durante dois eventos denominados «Quinzena da Próstata», convidados através dos meios de comunicação social habituais. A investigação foi realizada em duas consultas: na primeira, os pacientes responderam o questionário do IPSS, foi colhida sua história clínica e realizados toque retal, PSA e urofluxometria; na segunda consulta, foi indicado tratamento ou investigação complementar. A análise dos resultados foi feita utilizando-se o teste de associação linear de Mantel-Haenszel. Resultados: O maior número de pacientes situou-se entre 50 e 64 anos, média de 61,7 anos. Em relação ao I PSS, 40,1% dos pacientes apresentaram escore de 8- 19 e 24,9% de 20 - 35. Quanto à qualidade de vida, 59,9% dos pacientes enquadraram-se no grupo de Ql intermediária. Somente 22,4% dos pacientes apresentaram próstatas com peso considerado normal « 20g); em 47,3% do total de pacientes foram constatados nódulos prostáticos. A dosagem do PSA mostrouse alterada em 19,4% dos pacientes, quando foram considerados os valores do PSA não ajustado para a idade; e em 14,7% dos pacientes quando os valores do PSA foram ajustados para idade. A urofluxometria mostrou que 62,3% dos pacientes têm alterações do fluxo urinário máximo. Todas essas variáveis apresentaram associação linear significativa com a idade. Foram indicadas 230 biópsias e realizadas 149 (12,2% do total de pacientes). O exame anatomopatológico mostrou adenocarcinoma em 23 pacientes (1,9% do total), todos com PSA elevado; desses, 19 tinham toque retal alterado. Conclusão Na população estudada, a idade dos pacientes apresentou associação linear significativa com escores de IPSS e Ql, peso e nódulos prostáticos, PSA e Qmáx, mostrando que ocorre piora de todas as variáveis com o aumento da idade. O IPSS mostrou 65% dos pacientes com sintomas urinários de moderados a graves, com associação linear significativa com o escore de QL. Houve também associação linear significativa entre o peso prostático e escores de IPSS e QL. Ao toque retal, 47,3% dos pacientes apresentaram nódulosprostáticos. O valor do PSA se mostrou alterado em 19,4% dos pacientes; quando se considerou o valor não ajustado para a idade, e em 14,7% dos pacientes quando se considerou o valor ajustado para idade. O resultado do Qmáx na urofluxometria revelou-se alterado em 62,3% dos pacientes e houve associação linear significativa entre a diminuição do valor do Qmáx e os escores de IPSS, QL e peso prostático. Na população estudada, 23 pacientes (1,9% do total) apresentaram adenocarcinoma de próstata e 65%, sintomas de prostatismo. / Objective: To investigate the presence of benign prostatic hyperplasia and/or malignant neoplasm of the prostate in men over 50 years of age, living in the Metropolitan Area of Porto Alegre, who enrolled in a voluntary screening program for prostatic diseases. Material and Method 1,227 men were assessed, 1,212 over 50, who came to the Urology Outpatient Unit at Hospital de Clínicas de Porto Alegre (RS/Brazil), during two events called "Prostate Fortnight", at the invitation of the usual social communications media. The assessment was performed in two visits: at the first visit, the patients answered the I PSS questionnaire, their history was taken, digital rectal examination, PSA, and urofluxommetry was performed; at the second visit treatment or complementary investigation as indicated was performed. The results were analyzed using the linear association test of Mantel-Haenszel. Results Most patients were aged 50 to 64, mean age 61.7. As to IPSS, 40.1 % of the patients presented a score of 8-19, and 24.9%, 20-35. Regarding quality of life,59.9% of the patients were elassified as having intermediate QL. Only 22.4% of the patients had prostates with a weight eonsidered normal «20g); in 47.3% of the total number of patients, prostatie nodules were found. The PSA dosage was altered in 19,4% of the patients when the PSA values were not adjusted for age, and only 14.7% of them presented an abnormal PSA when the values were adjusted for age. Urofluxommetry showed that 62.3% of the patients have alteration of the maximun flow rate. Ali these variables presented a linear assoeiation significant for age. 230 biopsies were indicated and 149 performed (12.2% of the total number of patients). The anatomopathological exam showed adenocareinoma in 23 patients (1.9% of the total), ali of them with a high PSA; 19 of these had presented ehanges at digital reetal examination. Conclusion In the population studied, the age of the patients presented a significant linear assoeiation with the IPSS and QL seores, weight and prostatie nodules, PSA and Qmax, showing that ali variables beeome worse with age. The IPSS showed 65% of the patients with moderate to severe urinary symptoms, and a significant linear assoeiation with the QL seore. A signifieant linear assoeiation was also found between prostatie weight and IPSS and QL seores. At digital rectal examination, 47.3% of the patients presented with prostatie nodules. The PSA value was altered in 19.4% when it was not adjusted for age and in 14,7% when the values were adjusted for age. The results of Qmax in urofluxommetry showed ehanges in 62.3% of the patients and there was a significant linear association between the diminished value of Qmax and the IPSS, QL and prostatie weightscores. In the population studied, 23 patients (1.9% of the total) had adenoeareinoma of the prostate and 65% had symptoms of prostatism.