The focus of this thesis has been four-fold. On one hand it has been to decipher, understand and manipulate the role of microtubule-trafficking in the cell. Secondly we have concentrated on the mechanism of action of agents that target the microtubules, and thirdly we have developed a model to explain acquired drug resistance to these microtubule-targeting agents. Lastly, we tested new microtubule-targeting agents that overcome acquired and intrinsic drug resistance to microtubule-targeting agents. Microtubules (microtubules) are major dynamic structural components in cells that are essential for the development and maintenance of cell shape, cell signaling, movement, and division. We sought to understand the role microtubules play within the cellular context. Microtubules act as "active highways" within the cells and are essential for the correct operation of the cell by controlling the delivery, location, and function of a plethora of proteins. We have focused on the p53 and the HIF1-α proteins. Both these proteins are crucial players in tumor progression and angiogenesis. p53 is a tumor suppressor gene commonly referred to as the guardian of the genome and HIF1-α is a transcriptional factor that plays a key role in adaptation to hypoxia. Upon DNA damage or hypoxia, p53 or HIF1-α respectively are induced and quickly localize to the cell nucleus; whereas upon DNA repair or normoxia they must quickly concentrate in the cytoplasm for degradation. Their fast movement rate is not random and is directed by a microtubule-driven motor. Furthermore, we have shown that HIF1-α mRNA also uses the microtubule network to travel from the nucleus to the site of translation.Drugs that bind to either tubulin or microtubules form one of the most effective classes of anticancer agents. The so-called anti-mitotic drugs usually arrest cells in mitosis leading to apoptosis. We analyzed the differential effects of taxol treatment on parental and taxol-resistant cells. Survivin is a protein that senses mitotic arrest and leading to apoptotic cell death. Despite the clinical success of microtubule-targeting agents, the emergence of acquired resistance to the drug is a limiting factor for curing cancer. Acquired drug resistance is the most common reason for the failure of drug treatment in cancer patients with initially sensitive tumors, and as such, is presently responsible for the majority of deaths from cancer. We sought to understand the timeline of events that takes place during the development of drug resistance to microtubule-targeting agents. While it has been widely published that a major mechanism of resistance to anti-mitotic drugs is due to acquired β-tubulin mutations, we have shown loss of heterozygosity of the wild type allele of β-tubulin must occur to confer higher levels of resistance. To overcome drug resistance to microtubule-targeting agents we have focused on alternate drug regimens that are active in anti-mitotic drug-resistant cells. The synergistic interaction of farnesyltransferase inhibitors (FTI) and taxol has recently been introduced in the clinic and surprisingly overcomes taxol resistance. We have shown that FTIs increase the binding of taxol to β-tubulin tubulin, even in taxol-resistant cells. In an effort to dissect the molecular mechanism underlying the synergistic interaction of FTIs with taxanes, we have recently discovered that FTIs affect microtubule acetylation and stability, partly due to inhibition of the tubulin deacetylase HDAC6. The inhibition of HDAC6 by the FTI lonafarnib leads to increased tubulin acetylation and that this is the molecular basis for the synergy of FTIs with Taxol. / La tesis titulada "Anti-microtubule drugs: Mechanisms of Action and Resistance. Agents anti-microtubulars: Mecanismes d'Acció i Resistència" tiene cuatro objetivos principales. El primer objetivo ha sido descifrar, entender y manipular el papel del tráfico microtubular. El segundo objetivo se ha centrado en el mecanismo de acción de los agentes que tienen como diana los microtúbulos. En el tercer objetivo se ha desarrollado un modelo para explicar la quimioresistencia adquirida a estos agentes anti-microtubulares. En el cuarto y ultimo objetivo se han probado nuevos agentes anti-microtubulares que son activos en casos de quimioresistencia adquirida o endógena a agentes anti-microtubulares.Los microtúbulos, componentes dinámicos y estructurales de las células, son esenciales para el desarrollo y mantenimiento de la forma celular, el movimiento y división celulares. Se ha intentado entender el papel que juegan los microtúbulos en el contexto celular. Los microtúbulos actúan como "autopistas activas" dentro de las células y son esenciales para la correcta operación celular ya que controlan la entrega, localización y función de una multitud de proteínas. El primer objetivo de la tesis se ha centrado en las proteínas p53 y HIF1-α. Estas dos proteínas son principales protagonistas en la progresión tumoral y la angiogenesis. La p53 es un gen supresor de tumor comúnmente llamado el guardián del genoma y el HIF1-α es un factor de trascripción que tiene un papel crucial en la adaptación celular a la hipoxia (la baja concentración de oxigeno). En los casos de el daño al ADN o hipoxia, la p53 o el HIF1-α, respectivamente, son inducidos y se translocan rápidamente al núcleo celular, mientras que cuando el ADN ha sido reparado o el regreso al estado de normoxia, las proteínas se deben concentrar en el citoplasma para su degradación por el proteosoma. El rápido movimiento de estas proteínas no es aleatorio y esta dirigido por un motor microtubular. Además, se ha demostrado que el ARN mensajero del HIF1-α también usa la red de microtúbulos para llegar del núcleo al sitio de translación a proteína. Las drogas que se unen a la tubulina forman parte de una de las clases más efectivas de agentes anticáncer. Estas drogas comúnmente referidas como antimitóticas arrestan las células en mitosis conllevando a la apoptosis celular. Se han analizados los diferentes efectos del tratamiento del taxol en líneas celulares sensibles al taxol y en líneas celulares resistentes al taxol derivadas de las líneas sensibles. La survivina es una proteína clave en el pase del arresto mitótico en la célula a la muerte por apoptosis. A pesar del éxito clínico de las drogas antimicrotubulares, un factor que limita su aplicación universal es la apariencia de focos resistentes. La quimioresistencia adquirida es la razón más común del fracaso de la quimioterapia en pacientes con cáncer que inicialmente responden al tratamiento. En el tercer objetivo de la tesis se ha descrito un modelo temporal para explicar el desarrollo de la quimioresistencia en líneas celulares tratadas continuamente con drogas antimicrotubulares. Aunque se ha publicado extensamente que el principal mecanismo de quimioresistencia a los agentes antimicrotubulares es debido a la apariencia de mutaciones en el gen de la beta-tubulina, en este objetivo se ha demostrado que es necesario que también haya perdida de heterocigosidad en el alelo wt para que las células tengan unos altos niveles de resistencia. En el cuarto objetivo se han estudiado nuevos regimenes de quimioterapia que son activos en las células resistentes. La interacción sinergística entre los inhibidores de la farnesiltransferasa (FTI) y los taxanos se introdujo recientemente en la clínica y es muy activa contra la resistencia al taxol. Se ha demostrado que los FTIs intensifican la unión del taxol a la beta-tubulina, incluso en células resistentes al taxol. Los FTIs afectan la acetilación microtubular, a través de la inhibición de la HDAC6, la tubulina deacetilasa. La mayor acetilación de la tubulina, conlleva a una tubulina más estable y más propensa a la unión del taxol.

La Transició Epiteli-Mesènquima és el mecanisme pel qual les cèl·lules epitelials generades en regions particulars, poden dissociar-se de l'epiteli i migrar cap a nous destins, gràcies a uns canvis morfològics que transformen les cèl·lules epitelials en cèl·lules mesenquimals. Aquest procés fonamental durant el desenvolupament, també és rellevant en la progressió de tumors epitelials malignes i en tots dos casos les cèl·lules perden cohesió i adhesió i guanyen mobilitat. Aquests processos morfogènics impliquen una reorganització important del citoesquelet que serà incompatible amb un estat proliferatiu actiu, fins que les cèl·lules necessitin colonitzar un nou territori.Snail és un factor clau en la regulació dels processos EMT, tant en el desenvolupament com en la progressió tumoral gràcies a la seva capacitat de reprimir directament la transcripció de gens epitelials i promoure l'expressió de gens mesenquimals. Uns clons estables de dues línies cel·lulars epitelials, generats en el nostre grup proliferaven més lentament a l'expressar Snail de manera que ens vam proposar descriure el mecanisme utilitzat per Snail per fer disminuir la taxa de proliferació cel.lular al ser expressat ectòpicament en cèl.lules en cultiu que havien patit una EMT.Els resultats d'aquesta tesi indiquen que Snail bloqueja el cicle cel·lular al ser expressat en cèl·lules epitelials fent que disminueixin els nivells de proteïna CDC25A, fosfatasa que pot activar els complexes CDK-ciclina implicats en la progressió per diverses etapes del cicle. Els nostre estudi suggereix que Snail reté el mRNA de CDC25A al nucli, impedint que sigui exportat i traduit.

La present tesi avalua les diferències entre homes i dones quant a les característiques sociodemogràfiques i clínicopatològiques, procés diagnòstic, tractament i pronòstic en una sèrie de casos diagnosticats de novo de càncer de bufeta en 18 hospitals de 5 regions espanyoles (estudi EPICURO). També s'estudia l'associació entre tabac i risc de càncer de bufeta segons el sexe en un estudi agregat d'estudis cas-control europeus i nord-americans de càncer de bufeta.Es trobaren diferències entre sexes quant a la incidència de la malaltia, en algunes característiques anatomopatològiques dels tumors i quant a tractament. No es varen observar diferències entre sexes davant d'un mateix nivell d'exposició al tabac. També s'observaren diferències entre homes i dones quant al risc de recidivar i de progressar dels tumors vesicals superficials, però no en el risc de morir dels pacients amb tumors invasius. / The thesis evaluates differences related to sociodemographic and clinic-pathological characteristics, diagnostic tests, treatment and prognosis of bladder cancer patients newly diagnosed in 18 hospitals from 5 Spanish areas according to sex. The work also assess the association between tobacco and bladder cancer risk according to sex in a pooled analysis of case-control studies of bladder cancer from Europe and North America.Differences between sex concerning disease incidence, pathological characteristics and treatment were observed. The relative risk of bladder cancer associated with tobacco was similar in both sex. Differences between men and women were observed regarding risk of recurrence and progression of their superficial tumors but not regarding risk of death because of an invasive tumor.